JPH04158793A - ウラシル系化合物の製造方法 - Google Patents
ウラシル系化合物の製造方法Info
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- JPH04158793A JPH04158793A JP28507890A JP28507890A JPH04158793A JP H04158793 A JPH04158793 A JP H04158793A JP 28507890 A JP28507890 A JP 28507890A JP 28507890 A JP28507890 A JP 28507890A JP H04158793 A JPH04158793 A JP H04158793A
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
［産業上の利用分野］
本発明は、医薬品原料、生化学試薬などとして有用なウ
ラシル、ウリジンまたは５°−ウリジル酸（以下、こら
れの化合物を総称して「ウラシル系化合物」と略称する
）の発酵法による製造法および該製造法に使用するバチ
ルス属に属する微生物に関するものである。
ラシル、ウリジンまたは５°−ウリジル酸（以下、こら
れの化合物を総称して「ウラシル系化合物」と略称する
）の発酵法による製造法および該製造法に使用するバチ
ルス属に属する微生物に関するものである。
［従来の技術］
従来、バチルス属に属する微生物を用いて発酵法により
ウラシル系化合物を製造する方法としては、ピリミジン
アナログ剛性を有し、ウリジンヌクレオシドホヌホリラ
ーゼ欠損の微生物を用いてウリジンを製造する方法が唯
一報告されている（特開昭Ｅ３１−１０４７９５号公報
参照）。
ウラシル系化合物を製造する方法としては、ピリミジン
アナログ剛性を有し、ウリジンヌクレオシドホヌホリラ
ーゼ欠損の微生物を用いてウリジンを製造する方法が唯
一報告されている（特開昭Ｅ３１−１０４７９５号公報
参照）。
［発明が解決しようとするｉ１Ｍ］
本発明者は、従来法とは異なる方法によるウラシル系化
合物の製造法の提供を目的とする。
合物の製造法の提供を目的とする。
［Ｉ！題を解決するための手段］
本発明者らは、ウラシル系化合物を発酵法により製造す
る方法に関し、種々研究を重ねた結果、バチルス属に属
し、プリンアナログ耐性を有し、かつウラシル系化合物
を生成蓄積する能力を有する微生物群を育種することに
成功し、本発明を完成させた。
る方法に関し、種々研究を重ねた結果、バチルス属に属
し、プリンアナログ耐性を有し、かつウラシル系化合物
を生成蓄積する能力を有する微生物群を育種することに
成功し、本発明を完成させた。
すなわち、本発明は、バチルス属に属し、プリンアナロ
グ耐性を有し、かつウラシル系化合物を生成蓄積する能
力を有する微生物を培養してウラシル系化合物を生成蓄
積せしめ、生成蓄積したウラシル系化合物を採取するこ
とな特徴とするウラシル系化合物の製造法に関するもの
である。
グ耐性を有し、かつウラシル系化合物を生成蓄積する能
力を有する微生物を培養してウラシル系化合物を生成蓄
積せしめ、生成蓄積したウラシル系化合物を採取するこ
とな特徴とするウラシル系化合物の製造法に関するもの
である。
また、本発明は、上記ウラシル系化合物の製造に使用す
るバチルス属に属し、プリンアナログ耐性を有し、かつ
ウラシル系化合物を生成蓄積する能力を有する微生物に
関するものである。
るバチルス属に属し、プリンアナログ耐性を有し、かつ
ウラシル系化合物を生成蓄積する能力を有する微生物に
関するものである。
以下、本発明を詳述する。
本明細書において、 「ウラシル系化合物」とは前述の
ようにウラシル、ウリジンまたは５° −ウリジル酸を
総称するものであり、本発明ではこれら例示の化合物の
少なくとも一種以上が培養液中に蓄積されれば、ウラシ
ル系化合物が蓄積されたものとする。
ようにウラシル、ウリジンまたは５° −ウリジル酸を
総称するものであり、本発明ではこれら例示の化合物の
少なくとも一種以上が培養液中に蓄積されれば、ウラシ
ル系化合物が蓄積されたものとする。
「プリンアナログ」とは、アデニン、グアニンなどのプ
リン塩基と類似の構造を有する物質、たとえば８−アザ
グアニン、２−フルオロアデニン、６−メルカプトグア
ニン、６−メチルプリンなど、あるいはこられのリボサ
イドおよびリボタイドを意味する。
リン塩基と類似の構造を有する物質、たとえば８−アザ
グアニン、２−フルオロアデニン、６−メルカプトグア
ニン、６−メチルプリンなど、あるいはこられのリボサ
イドおよびリボタイドを意味する。
「プリンアナログ耐性」とは、親株が生育できないよう
な濃度のプリンアナログを少なくとも一種以上含有する
培地でも生育できる特徴を有する変異株の性質を意味す
る。
な濃度のプリンアナログを少なくとも一種以上含有する
培地でも生育できる特徴を有する変異株の性質を意味す
る。
本発明で使用する微生物は、下記のＡ−Ｃの特徴を有す
るものであれば特に制限されない。
るものであれば特に制限されない。
Ａ： バチルス属に属する
Ｂ プリンアナログ耐性を有する
Ｃ： ウラシル系化合物を蓄積する能力を有するこのよ
うな特徴を充足する具体的な微生物としてはバチルス・
ズブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ５ｕｂｔｉｌｉｓ）Ａ
Ｇ−３４、同ＡＧ−４１などを例示することができる。
うな特徴を充足する具体的な微生物としてはバチルス・
ズブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ５ｕｂｔｉｌｉｓ）Ａ
Ｇ−３４、同ＡＧ−４１などを例示することができる。
上記微生物は、たとえばバチルス・ズブチリヌＹ１２５
株（東京大学応用微生物研究所から入手）を親株とし、
該親株に通常の変異処理（たとえば、紫外線照射処理、
Ｎ−メチル−Ｎ′ −二トローＮ−二トロソグアニジン
（ＮＴＧ）処理など）を施すことにより得られる変異株
中からプリンアナログ耐性を有し、かつウラシル系化合
物を蓄積する能力を有する菌株をスクリーニングする方
法にて取得することができる。上記微生物の具体的な取
得方法については後述の実施例１に示す。
株（東京大学応用微生物研究所から入手）を親株とし、
該親株に通常の変異処理（たとえば、紫外線照射処理、
Ｎ−メチル−Ｎ′ −二トローＮ−二トロソグアニジン
（ＮＴＧ）処理など）を施すことにより得られる変異株
中からプリンアナログ耐性を有し、かつウラシル系化合
物を蓄積する能力を有する菌株をスクリーニングする方
法にて取得することができる。上記微生物の具体的な取
得方法については後述の実施例１に示す。
このようにして得られるウラノル系化合物生産能を有す
る微生物を、それ自体公知の方法にて培養し、培ｌｌ後
の培養物中からウラシル系化合物を採取すればよい。
る微生物を、それ自体公知の方法にて培養し、培ｌｌ後
の培養物中からウラシル系化合物を採取すればよい。
培養に使用する培地としては、炭素源、窒素源、各種金
属イオンなどを含有し、さらに必要に応じて各種アミノ
酸類、核酸類、ビタミン類などの微量栄ＩＩ！累を含有
させたものを使用できる。具体的には、炭素源としては
、 グルコース、マルトース、ガラクトース、廃糖蜜、
澱粉加水分解物など、窒素源としてはアンモニ乙 塩化
アンモニウム、硫酸アンモニウム、炭酸アンモニウムな
どの各種無機アンモニウム化合物、もしくは尿素、コー
ンステイープリカー、酵母エキスなどの各種有機態窒素
なども使用することができる。
属イオンなどを含有し、さらに必要に応じて各種アミノ
酸類、核酸類、ビタミン類などの微量栄ＩＩ！累を含有
させたものを使用できる。具体的には、炭素源としては
、 グルコース、マルトース、ガラクトース、廃糖蜜、
澱粉加水分解物など、窒素源としてはアンモニ乙 塩化
アンモニウム、硫酸アンモニウム、炭酸アンモニウムな
どの各種無機アンモニウム化合物、もしくは尿素、コー
ンステイープリカー、酵母エキスなどの各種有機態窒素
なども使用することができる。
微生物の培養は、通常振盪培養もしくは通気撹拌培養な
どの好気条件下での液体培養法を採用すればよい。
どの好気条件下での液体培養法を採用すればよい。
培養条件はｐ Ｈ５，０〜８．５で２３〜４０℃の温度
範囲から適宜選定すればよい。
範囲から適宜選定すればよい。
培養時間は上記培養条件下で通常３〜７日程度であるが
、最終的にはウラシル系化合物の蓄積量をもって判断す
ればよい。
、最終的にはウラシル系化合物の蓄積量をもって判断す
ればよい。
培養絆了（麦、培養物からのウラシル系化合物の採取法
は、ウラノル系化合物の単１１＄１１製法として常用さ
れている方法（たとえば、沈澱法、膜濾過法、イオン交
換クロマトグラフィー、吸着クロマトグラフィーなど）
を適宜組み合わせて行えばよい。
は、ウラノル系化合物の単１１＄１１製法として常用さ
れている方法（たとえば、沈澱法、膜濾過法、イオン交
換クロマトグラフィー、吸着クロマトグラフィーなど）
を適宜組み合わせて行えばよい。
以下、実施例を示し、本発明を具体的に説明する。
実施例 ｌ
バチスル・ズブチリスＹ１２５株を下記のコンプリート
スラントで３２℃、２４時間培養し、得られた菌体を上
記のコンプリートスラントの成分から寒天を除いて作製
した液体培地を含む１０ｍ１容試験管に一白金耳植菌し
て２８℃、２４時間振盪培養した。
スラントで３２℃、２４時間培養し、得られた菌体を上
記のコンプリートスラントの成分から寒天を除いて作製
した液体培地を含む１０ｍ１容試験管に一白金耳植菌し
て２８℃、２４時間振盪培養した。
培養後、菌体を０．８５％の生理食塩水で３回ｒ９ｃ浄
後、菌体を集菌し、集菌した菌体を生理食塩水中に約１
０９個／ｍｌになるように懸濁させた。
後、菌体を集菌し、集菌した菌体を生理食塩水中に約１
０９個／ｍｌになるように懸濁させた。
この懸濁液５ｍｌを直径９ｃｍのシャーレに添加し、１
５ｗ殺菌燈下４ニｃｍのところに置いて紫外線を照射し
た。
５ｗ殺菌燈下４ニｃｍのところに置いて紫外線を照射し
た。
次にこの照射された菌体懸濁液０．２ｍｌを１００μｇ
／ ｍ ｌの８−アザグアニンを含む下記最小培地に
塗布し、３２℃で４〜５日間培養する。
／ ｍ ｌの８−アザグアニンを含む下記最小培地に
塗布し、３２℃で４〜５日間培養する。
出現してきたコロニーを分離し、下記の生産培地１０ｉ
１を分注した試験管に接種し、２８℃で６日間振盪培養
を行った。培養終了後、培ＩＩ液の遠心上清液の分析を
行い、ウラシル系化合物生産能の高い微生物としてバチ
ルス・ズブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ５ｕｂｔｉｌｉ
ｓ） Ａ Ｃ−３４、同ＡＧ−４１を選択した。これら
の微生物の微生物学的特徴はプリンアナログ耐性を有し
、かつウラシル系化合物を生成蓄積する点を除いては親
株と同じであった。
１を分注した試験管に接種し、２８℃で６日間振盪培養
を行った。培養終了後、培ＩＩ液の遠心上清液の分析を
行い、ウラシル系化合物生産能の高い微生物としてバチ
ルス・ズブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ５ｕｂｔｉｌｉ
ｓ） Ａ Ｃ−３４、同ＡＧ−４１を選択した。これら
の微生物の微生物学的特徴はプリンアナログ耐性を有し
、かつウラシル系化合物を生成蓄積する点を除いては親
株と同じであった。
８−アザグアニンに対する耐性を表Ｉに示した。
表■
※ ＋：生育あり、−：生育なし
コンプリートスラント
粉末ブイヨン ２０ｇ／ｌ酵母エキ
ス ５ｇ／ｌアデノシン
１００ ｍ ｇ ／ １グアノシン
１００ ｍ ｇ ／ １寒天
２０ｇ／ｌ殺菌前ｐ）（７，０ 辰」ジＥ坦 グルコース １０ ｇ ／ １
硫酔アンモニウム ２ ｇ ／ ＩＫ
２ＨＰＯｔ ｌ ｇ／ ｌＭ
ｇ５Ｏ孟・７Ｈ２００，２ｇ／ｌ Ｆｅ５Ｏｉ・７Ｈ７Ｈ２Ｏ１／Ｉ Ｍｎ ＳＯｔ・４ Ｈ２Ｏ１ｍｇ／ ＩＤ−パントテン
酸カルシウム １０ｍｇ／ｌビタミンＢ１１１！！！
！塩 ５ｍｇ／ １ビオチン
５０ｇｇ／ｌアルギニン
３０ ｍ ｇ ／ １０イシン
３０ｍｇ／ｌ寒天 ２
０ｇ／］殺薗前ｐ）（７，０ １Ｌ亙１ グルコース（別殺菌） １５０ｇ／ｌコー
ンスチーブリ力− ５０ｇ／ｌ尿 素
１ ０
ｇ ／ １１Ｍリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ７） ５０ｍｌ／１ 殺菌前ｐＨ７，０ 実施例 ２ 実施例１と同様にしてバチルス・ズブチリスＡＧ−３４
株のコンプリートスラント培賓菌体を得、この菌体を実
施例１に示した生産培地１０ｍ１を添加した試験管に一
白金耳植菌し、２８℃、７日間振盪培養した結果、培Ｉ
Ｉ液中に１９．５５■／−１ウリジンが生成した。
ス ５ｇ／ｌアデノシン
１００ ｍ ｇ ／ １グアノシン
１００ ｍ ｇ ／ １寒天
２０ｇ／ｌ殺菌前ｐ）（７，０ 辰」ジＥ坦 グルコース １０ ｇ ／ １
硫酔アンモニウム ２ ｇ ／ ＩＫ
２ＨＰＯｔ ｌ ｇ／ ｌＭ
ｇ５Ｏ孟・７Ｈ２００，２ｇ／ｌ Ｆｅ５Ｏｉ・７Ｈ７Ｈ２Ｏ１／Ｉ Ｍｎ ＳＯｔ・４ Ｈ２Ｏ１ｍｇ／ ＩＤ−パントテン
酸カルシウム １０ｍｇ／ｌビタミンＢ１１１！！！
！塩 ５ｍｇ／ １ビオチン
５０ｇｇ／ｌアルギニン
３０ ｍ ｇ ／ １０イシン
３０ｍｇ／ｌ寒天 ２
０ｇ／］殺薗前ｐ）（７，０ １Ｌ亙１ グルコース（別殺菌） １５０ｇ／ｌコー
ンスチーブリ力− ５０ｇ／ｌ尿 素
１ ０
ｇ ／ １１Ｍリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ７） ５０ｍｌ／１ 殺菌前ｐＨ７，０ 実施例 ２ 実施例１と同様にしてバチルス・ズブチリスＡＧ−３４
株のコンプリートスラント培賓菌体を得、この菌体を実
施例１に示した生産培地１０ｍ１を添加した試験管に一
白金耳植菌し、２８℃、７日間振盪培養した結果、培Ｉ
Ｉ液中に１９．５５■／−１ウリジンが生成した。
菌体を除去した培１１１リットルを水酸化ナトリウムで
ｐＨ１１，０とし、強塩基性陰イオン交換樹脂ダイヤイ
オン５ＡＩＩＡ（ＯＨ型： 三菱化成（株）社製）を充
填したカラムに通液し、水洗後、０．２Ｎ塩酸溶液を通
液してウリノン画分を得た。得られたウリジン画分は活
性炭処理後、濃縮し、エタノールを用いて結晶化させる
ことにより、ウリジン１５．９３ｇを得た。
ｐＨ１１，０とし、強塩基性陰イオン交換樹脂ダイヤイ
オン５ＡＩＩＡ（ＯＨ型： 三菱化成（株）社製）を充
填したカラムに通液し、水洗後、０．２Ｎ塩酸溶液を通
液してウリノン画分を得た。得られたウリジン画分は活
性炭処理後、濃縮し、エタノールを用いて結晶化させる
ことにより、ウリジン１５．９３ｇを得た。
実施例 ３
バチルス・ズブチリスＹ１２５株（親株）およびバチル
ス・ズブチリスＡＧ−４１を用いて実施例２と同様に培
養した結果、親株は全（ウラシル系化合物な生産せず、
バチルス・ズブチリスＡＧ−４１はウラシルを１．８３
ｇ／ｌおよびウリジンを８．３０ｇ／ｌ生産していた。
ス・ズブチリスＡＧ−４１を用いて実施例２と同様に培
養した結果、親株は全（ウラシル系化合物な生産せず、
バチルス・ズブチリスＡＧ−４１はウラシルを１．８３
ｇ／ｌおよびウリジンを８．３０ｇ／ｌ生産していた。
［発明の効果コ
本発明の微生物は、ウラシル系化合物を著量生成蓄積し
このような微生物を使用する本発明方法はウラシル系化
合物の製造法として実用的に十分満足できるものである
。
このような微生物を使用する本発明方法はウラシル系化
合物の製造法として実用的に十分満足できるものである
。
［微生物の寄託］
実施例１で得られたバチルス・ズブチリスＡＧ−３４、
同Ａ Ｃ−４，］は平成２年１０月１１日に工業技術院
微生物工業技術研究所に受託され、受託番号としてそれ
ぞれ黴工研菌寄第１１７５■号および同第１１７５−号
が与えられている。
同Ａ Ｃ−４，］は平成２年１０月１１日に工業技術院
微生物工業技術研究所に受託され、受託番号としてそれ
ぞれ黴工研菌寄第１１７５■号および同第１１７５−号
が与えられている。
特許出願人（６７７）ヤマサ醤油株式会社手続補正書（
自発） 平成２年 １１月２？日 １、事件の表示 平成２年特許願第２８５０７８号 ２、発明の名称 住所 千葉県銚子市新生町２丁目１０番地の１電話 ０
４７９−２２−００９５ （代表）名称 （６７７）ヤ
マサ醤油株式会社 ４、補正の対象 願書の発明者の欄の「白木」及び「線用」の住所、及び
明細書の特許請求の範囲の欄 ５、補正の内容 ■）願書を別紙のとおり訂正する。
自発） 平成２年 １１月２？日 １、事件の表示 平成２年特許願第２８５０７８号 ２、発明の名称 住所 千葉県銚子市新生町２丁目１０番地の１電話 ０
４７９−２２−００９５ （代表）名称 （６７７）ヤ
マサ醤油株式会社 ４、補正の対象 願書の発明者の欄の「白木」及び「線用」の住所、及び
明細書の特許請求の範囲の欄 ５、補正の内容 ■）願書を別紙のとおり訂正する。
２、特許請求の範囲を別紙のとおり訂正する。
別紙
、？工特許請求の範囲
１）バチルス属に属し、プリンアナログ耐性を有し、か
つウラシル系化合物を生成蓄積する能力を有する微生物
を培養してウラシル系化合物を生成蓄積せしめ、生成蓄
積したウラシル系化合物を採取することを特徴とするウ
ラシル系化合物の製造法。
つウラシル系化合物を生成蓄積する能力を有する微生物
を培養してウラシル系化合物を生成蓄積せしめ、生成蓄
積したウラシル系化合物を採取することを特徴とするウ
ラシル系化合物の製造法。
２）：ｌｌ求項１記載のウラシル系化合物の製造に使用
するバチルス属に属し、プリンアナログ耐性を有し、か
つウラシル系化合物を生成蓄積する能力を有する微生物
。
するバチルス属に属し、プリンアナログ耐性を有し、か
つウラシル系化合物を生成蓄積する能力を有する微生物
。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １）バチルス属に属し、プリンアナログ耐性を有し、か
つウラシル系化合物を生成蓄積する能力を有する微生物
を培養してウラシル系化合物を生成蓄積せしめ、生成蓄
積したウラシル系化合物を採取することを特徴とするウ
ラシル系化合物の製造法。 ２）請求項１記載のウラシル系化合物の製造に使用する
バチルス属に属し、プリンアナログ耐性を有し、かつウ
ラシル系化合物を生成蓄積する能力を有する微生物。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP28507890A JPH04158793A (ja) | 1990-10-22 | 1990-10-22 | ウラシル系化合物の製造方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP28507890A JPH04158793A (ja) | 1990-10-22 | 1990-10-22 | ウラシル系化合物の製造方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH04158793A true JPH04158793A (ja) | 1992-06-01 |
Family
ID=17686862
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP28507890A Pending JPH04158793A (ja) | 1990-10-22 | 1990-10-22 | ウラシル系化合物の製造方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH04158793A (ja) |
-
1990
- 1990-10-22 JP JP28507890A patent/JPH04158793A/ja active Pending
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