JPH04187664A - 新規なコナゲニン誘導体 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明はＴ細胞増殖作用と抗腫瘍作用を有し且つ後記の
一般式（Ｉ）で表される新規なコナゲニン誘導体および
その造塩可能なものの塩に関し、またそれらの製造方法
に関する。更に本発明は後記の（ＩＩ）で表されるコナ
ゲニンおよび一般式（Ｉ）で示されるコナゲニンの誘導
体又はそれらの塩を有効成分とするＴ細胞増殖促進剤、
並びに−船蔵（Ｉ）で表されるコナゲニン誘導体又はそ
の塩を有効成分とする制癌剤に関するものである。

〔従来の技術と発明が解決しようとする課題〕従来臨床
に用いられている制癌剤抗生物質は本質的には細胞毒物
質であるため、一般に毒性が強く、癌細胞の増殖を抑制
するが正常細胞にも障害を与えるため、副作用が強いと
いう欠点を有している。このため、従来とは異なる作用
機序で制癌活性を示し、かつ毒性が低くて副作用が少な
いが有効な抗癌活性を示して人癌治療に有効である制癌
性の新規な物質が望まれている。

本発明者らは、先にそのような望ましい性質を持つ新規
な抗生物質としてコナゲニンを得ることに成功した。

コナゲニンは新菌株であるストレプトミセス・ロゼオス
ポルスＭＩ６９６−ＡＦ３株の培養によって産生されて
次式（Ｕ） で表わされる新規な抗生物質である（本呂願人の出願に
係る特願平１−１２７８４６号明細書参照）。

これまで、コナゲニンの上記の化学構造と類似する構造
をもち且つＴ細胞の増殖を促進する活性、および（また
は）制癌活性を示す物質は知られていない。本発明者ら
は、新規で有用な制癌性化合物を創製する目的でコナゲ
ニンから種々の新しい誘導体を合成する研究を重ねたが
、後記の一般式（Ｉ）で表わし得るコナゲニン誘導体を
合成することに成功し、またこれら新規コナゲニン誘導
体が哺乳動物のＴ細胞の増殖を促進する活性を有するこ
と及び抗腫瘍作用を有することを見出した。また、コナ
ゲニンそれ自体も同様なＴ細胞増殖促進活性を有するこ
とを見出した。これらの知見に基づいて本発明は完成さ
れた。

〔課題を解決するための手段〕

すなわち、本発明の第一の発明は新規物質として下記の
一般式（Ｉ）のコナゲニン誘導体とその塩に関する。こ
のコナゲニン誘導体は、下記の一般式（Ｉ）で表される
化合物である。

〔式中、Ｒ１は水素、メチル基、エチル基または式−Ｃ
ＯＲ’　（Ｒ’は水素、メチル基、またはエチル基を示
す）で表わされるアシル基を表わし、Ｒ２は水素、ｃ、
〜Ｃ９のアルキル基、式−（ｃＨ２）ｎ−■（ｎは１〜
３の整数を示す）で表わされるアラルキル基または式−
ＣＯＲ’　（Ｒ７は水素、メチル基またはエチル基を示
す）で表わされるアシル基を表わし；Ｒ３は水素、メチ
ル基またはエチル基を表わし；Ｒ４は水素、ｃｌ−ｃ、
のアルキル基、式−（ＣＨ２）ｎ−Ｏ（７１は１〜３の
整数を示す）で表わされるアラルキル基、または式−Ｃ
ＯＲ”　（Ｒ”は水素、メチル基またはエチル基を示す
）で表わされるアシル基を表わし；Ｒ５は式−ＯＲ’　
（Ｒ’は水素、Ｃ□〜Ｃ５のアルキル基または式−（Ｃ
）１２）ｎ−○（ｎは１〜３の整数を示す）で示される
アラルキル基を示す）で表わされる基、または式−ＮＨ
Ｒ”　（Ｒ”　ハ水素、　Ｃ２〜Ｃ，（７Ｊ７１Ｌｉキ
ル基＊りは式−（Ｃ）１２　）−■（ｎは１〜３の整数
を示す）で示されるアラルキル基を示す）で表わされる
アミノ基又は置換アミノ基を表わすが但し、Ｒ１、Ｒ２
、Ｒ３、Ｒ４およびＲ６のすべてが同時に水素原子であ
ることはない〕。

なお、一般式（Ｉ）の化合物において、式−ＣＯＲ’の
アシル基、式−ＣＯＲ７のアシル基、式−ＣＯＲ’のア
シル基は、アセチル基、プロピオニル基、ブチリル基、
バレリル基の如きＣ７〜ＣＧのアルカノイル基であるこ
とが好ましい。またＲ２、Ｒ４、Ｒ’及びＲ１０がアラ
ルキル基である場合の好ましい例はベンジル基、フェネ
チル基、等である。０１〜Ｃ５のアルキル基の好ましい
例は、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、１ｓｏ−
プロピル基、ｎ−ブチル基、１ｓｏ−ブチル基、ｔ−ブ
チル基、ペンチル基、等である。例えば、一般式（Ｉ）
のコナゲニン誘導体の塩としては、そのカルボキシル基
における金属塩、特にナトリウム又はカリウムのごとき
アルカリ金属との塩、あるいはカルシウムのごときアル
カリ土類金属またアンモニウム基との薬学的に許容され
る塩あるいはカルボキシル基における塩基、例えばアル
キルアミンとの付加塩が挙げられる。これらの塩をＴ細
胞増殖剤あるいは制癌剤として使用する場合には、生理
的に許容される塩を選ぶべきである。

本発明による一般式（Ｉ）のコナゲニン誘導体の代表例
を次の第１表にあげる。なお、第１表にあげた化合物番
号は後記の試験例及び実施例でも参照される。

なお、第１表でｔ−Ｂｕは第３級ブチル基、　ｎ−Ｂｕ
はｎ−ブチル基、ｐｈはフェニル基の略号を表わす。

また、本発明の第２の発明によると、−船蔵（Ｉ）で示
すコナゲニン誘導体の製造法が提供される。

この第２の本発明の方法は、次式（ＩＩ）で表わされる
コナゲニンの官能基である水酸基、カルボキシル基又は
活性の水素原子を保護し又は保護せずに、コナゲニンの
アルコール性水酸基の１個又はそ九以上をエーテル化又
はエステル化するか、もしくはコナゲニンのカルボキシ
ル基をエステル化又はアミド化するか、もしくはコナゲ
ニンのイミノ基をアルキル化するか、もしくはそれらの
エーテル化、エステル化、アミド化及びアルキル化の何
れか二つ又はそれ以上の反応を組合わせて行うことを特
徴とする。−船蔵（夏）のコナゲニン誘導体の製造法に
関する９ 水沫で原料として用いられるコナゲニンは、放線菌に属
するコナゲニン生産菌、具体的にはストレプトミセス・
ロゼオスポルスＭＩ６９６−ＡＦ　３　株１工研菌寄第
１０５９８号）の培養によって生産される（特願平１−
１２７８４６号明細書参照）。

ＭＩ６９６〜ＡＦＢ株の菌学的性状は次のとおりである
。

１、形態 ＭＩ６９６−　ＡＦ３株は顕微鏡下で分枝した基中菌糸
より、比較的長いまっすぐな気菌糸を形成し、らせん形
成および輪生枝は認められない。気菌糸の先端には５０
個以上の胞子の連鎖を認め、その大きさは０．６　Ｘ　
１．０〜１．２ミクロン位を示す。胞子の表面は平滑で
ある。

２、各種培地における生育状態 色の記載について〔〕内に示す標準はコンテイナー・コ
ーポレーション・オブ・アメリカのカラー・ハーモニー
・マニュアル（ＣｏｎｔａｉｎｅｒＣｏｒｐｏｒａｔｉ
ｏｎ　　ｏｆ　　ＡｍｅｒｉｃａのＣ’ｏｌｏｒ　　Ｈ
ａｒｍｏｎｙ　　Ｍａｎｕａｌ、）を用いた。

（Ｉ）シュクロース・硝酸塩寒天培地（２７℃培養）無
色の発育上に、白〜ピンク白の気菌糸をうつすらと着生
し、溶解性色素は認められない。

（２）グルコース・アスパラギン寒天培地（２７℃培養
） 発育はうす黄（２ｅａ、　Ｌｔ　Ｉｖｏｒｙ〜２ｅａ、
　Ｌｔ　Ｗｈｅａｔ）、気菌糸は白〜ピンク白（３ｃａ
、　Ｐｅａｒｌ　Ｐｉｎｋ）、溶解性色素は認められな
い。

（３）グリセリン・アスパラギン寒天培地（ＩＳＰ培地
５．２７℃培養） うす黄茶［３ｉｅ、　Ｇａｍｅｌ］　〜黄茶（３１ｅ、
　Ｃｉｎｎａｍｏｎ）の発育上に、ピンク白〜うすピン
ク（４ｃａ、　ＦｌｅｓｈＰｉｎｋ　）の気菌糸を着生
し、溶解性色素は黄茶を呈する。

（４）スターチ・無機塩寒天培地（ＩＳＰ培地４．２７
℃培養） うす黄（２ｅａ、　Ｌｔ　Ｗｈｅａｔ）　〜うす黄茶［
：２ｉｃ。

Ｈｏｎｅｙ　Ｇｏｌｄ］の発育上に、うすピンク［４ｃ
ａ、　ＦｌｅｓｈＰｉｎｋ　］の気菌糸を着生し、溶解
性色素は認められない。

（５）チロシン寒天培地（ＩＳＰ培地７．２７℃培養）
発育はうす黄［２ｅａ、　Ｌｔ　Ｗｈｅａｔ］　〜うす
黄茶［２ｉｃ、　Ｈｏｎｅｙ　Ｇｏｌｄ］、気菌糸は茶
白（３ｃａ、　ＰｅａｒｌＰｉｎｋ）　、溶解性色素は
認められない。

（６）栄養寒天培地（２７℃培養） 発育は無色、気菌糸を着生せず、溶解性色素も認められ
ない。

（７）イースト・麦芽寒天培地（ＩＳＰ培地２．２７℃
培養） うす黄茶（２ｉｃ、　Ｈｏｎｅｙ　Ｇｏｌｄ〜３１ｅ、
　Ｃ１ｎｎａ＋ｍｏｎ）の発育上に、うすピンク　（４
ｃａ、　Ｆｌｅｓｈ　Ｐｉｎｋ　−５ｃａ、　Ｆｌｅｓ
ｈ　Ｐｉｎｋ）　　の気菌糸を着生し、溶解性色素は認
められない。

（８）オートミール寒天培地（ＩＳＰ培地３．２７℃培
養） 発育は無色、気菌糸はピンク白〜うすピンク［４ｃａ、
　Ｆｌｅｓｈ　Ｐｉｎｋ〜５ｃａ、　Ｆｌｅｓｈ　Ｐｉ
ｎｋ）−溶解性色素は認められない。

（９）グリセリン・硝酸塩寒天培地（２７℃培養）うす
黄［ｉｅａ、　Ｌｔ　Ｙｅｌｌｏｗ］−黄茶［３ｎｇｙ
Ｙｅｌｌｏｗ　Ｍａｐｌｅ）　　の発育上に、茶白　［
３ｃａ、　ＰｅａｒｌＰｉｎｋ　）の気菌糸を着生し、
黄茶の溶解性色素がわずかに認められる。

（Ｉ０）スターチ寒天培地（２７℃培養）発育はうす黄
〜うす黄茶（２ｇｃ、　Ｂａｍｂｏｏ）、気菌糸はうす
ピンク（４ｃａ、　Ｆｌｅｓｈ　Ｐｉｎｋ）、溶解性色
素は認められない。

（Ｉ１）リンゴ酸石灰寒天培地（２７℃培養）無色の発
育上に白の気菌糸を着生し、溶解性色素は認められない
。

（Ｉ２）セルロース（濾紙片添加合成液、２７℃培養）
無色の発育上に、白の気菌糸をうつすらと着生し、溶解
性色素は認められない。

（Ｉ３）ゼラチン穿刺培養 １５％単純ゼラチン培地（２０℃培養）、グルコース・
ペプトン・ゼラチン培地（２７℃培養）ともに、発育は
無色、気菌糸は着生せず、溶解性色素も認められない。

（Ｉ４）脱脂牛乳（３７℃培養） 発育は無色、気菌糸は着生せず、溶解性色素はわずかに
茶色味をおびる。

３、生理的性質 （Ｉ）生育温度範囲 スターチ・イースト寒天培地（可溶性澱粉１．０％、イ
ーストエキス〔日本製薬■製〕０．２％、ひも寒天３．
０％、ｐＨ７，０〜７．２）を用い、２０℃、２４℃、
２７℃、３０℃、３７℃、５０℃の各温度で試験の結果
、５０’Ｃを除いて、そのいずれの温度でも発育したが
、最適生育温度は３０℃〜３７℃付近と思われる。

（２）ゼラチンの液化（Ｉ５％単純ゼラチン、２０℃培
養ニゲルコース・ペプトン・ゼラチン、２７℃培養） 単純ゼラチン培地では、培養後７日目頃より液化が認め
られ、その作用は中等度〜強い方である。

グルコース・ペプトン・ゼラチン培地では、培養後１１
１日目頃り液化が認められ、その速度はゆっくりと進み
、中等度である。

（３）スターチの加水分解（スターチ・無機塩寒天培地
及びスターチ寒天培地、いずれも２７℃培養） スターチ・無機塩寒天培地、スターチ寒天培地ともに培
養後３日目頃より氷解性が認められ、その作用は強い方
である。

（４）脱脂牛乳の凝固・ペプトン化（脱脂牛乳、３７℃
培養） 凝固を詔めることなく、培養後８日目頃よりペプトン化
が始まり、その速度はゆっくりと進み、３週間目に完了
する。

（５）メラニン様色素の生成（トリプトン・イースト・
ブロス、■ＳＰ培地１：ペプトン・イースト・軟寒天培
地、ＩＳＰ培地６：　チロシン寒天培地、ＩＳＰ培地７
、いずれも２７℃培養）トリプトン・イースト・ブロス
、ペプトン・イースト・軟寒天培地およびチロシン寒天
培地で陰性である。

（６）炭素源の利用性（プリドハム・ゴトリーブ寒天培
地、ＩＳＰ培地９．２７℃培養）Ｄ−グルコース、Ｌ−
アラビノース、Ｄ−キシロース、ラムノース、ラクトー
スを利用してよく発育し、イノシトール、Ｄ−フラクト
ース、シュクロース、Ｄ−マンニトール、ラフィノース
は利用しない。

（７）リンゴ酸石灰の溶解（リンゴ酸石灰寒天培地、２
７℃培養） 陽性である。

（８）硝酸塩の還元反応（０，１％硝酸カリウム含有ペ
プトン水、ＩＳＰ培地８，２７℃培養）陽性である。

（９）セルロースの分解（濾紙片添加合成液、２７℃培
養） 陰性である６ 以上の性状を要約すると、ＭＩ６９６−ＡＦ　３株の気
菌糸は直線状で、らせん形成および輪生枝は認められず
、胞子の表面は平滑である。種々の培地で、無色あるい
はうす黄〜うす黄茶の発育上にピンク白〜うすピンクの
気菌糸を着生し、溶解性色素は認められないか、あるい
はわずかに茶色味をおびる。メラニン様色素の生成は、
トリプトン・イースト・ブロス、ペプトン・イースト・
軟寒天培地、チロシン寒天培地のいずれの場合も陰性で
ある。

蛋白分解力は中等度〜強い方であり、スターチの氷解性
も強い。なお、細胞壁に含まれる２、６−ジアミノピメ
リン酸はＬＬ−型であった。

これらの性状より、ＭＩ６９６−ＡＦａ株はストレプト
ミセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃａｓ）属に属するものと
考えられる。更に、近縁の既知菌種を検索すると、スト
レプトミセス・ロゼオスルス（江聾吐憇匹肛■憇ｏｆｕ
ｌｖｕｓ；文献１）　ｒＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ　
Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆＳｙｓｔｅｍａｔｉｃ　Ｂａｃｔ
ｅｒｉｏｌｏｇｙＪ　１８巻、１６５頁、１９６８：文
献２）　ｒＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ　Ｊｏｕｒｎａ
ｌ　ｏｆ　５ｙｓｔｅ＋＋＋ａｔｉｃＢａｃｔｅｒｉｏ
ｌｏｇｙＪ　３０巻、３９９頁、１９８０）およびスト
レプトミセス・ロゼオスポルス（針匹匹■２ｒｏｓｅｏ
ｓ　ｏｒｕｓ；文献ｒＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ　Ｊ
ｏｕｒｎａｌ　ｏｉＳｙｓｔｅｍａｔｉｃ　Ｂａｃｔｅ
ｒｉｏｌｏｇｙＪ　１８巻、３７０頁、１９６ｇ）があ
げられた。

そこで、ＭＩ６９６−ＡＦ３株とこれらの菌種について
実地に比較検討した。その結果をまとめると、第２表の
ようになる。

第２表から明らかなように、ＭＩ６９６−ＡＦ３株はス
トレプトミセス・ロゼオスポルスおよびストレプトミセ
ス・ロゼオスルスのいずれにも類似している。しかし、
後者とはＤ−フラクトース、シュクロース、ラフィノー
スの利用性で大きく異なり、しかも後者が有するｐＨイ
ンデイケータ−（酸化還元指示薬）の溶解性色素をＭＩ
６９６−ＡＦＢ株は示さない。一方、ストレプトミセス
・ロゼオスポルスとＭＩ６９６−　ＡＦ３株は、すべて
の点で酷似した成績を示した。

従って、ＭＩ６９６−ＡＦ３株をストレプトミセス・ロ
ゼオスホ／ｌ／Ｘ（Ｓｔ匹蛙憇籾ｕ皿朋μ猥江■）　Ｍ
Ｉ６９６−ＡＦ３と同定する。

なお、ＭＩ６９６−ＡＦａ株を工業技術院微生物工業技
術研究所に寄託申請し、平成元年３月２日、微工研菌寄
第１０５９８号として受託された。

式（ＩＩ）のコナゲニンの理化学的性状を以下に示す。

■形　　状：無色板状晶 ■元素分析：炭素４７．９６％、水素７．６７％、窒素
５．６４％、酸素３８．１９％ ■質量分析：　２５０．１２９１　（Ｍａｌ（）”、（
高分解機能マススペクトルによる） ■分子式：Ｃ工。Ｈｌ、　Ｎ　ＯＧ ■融　　点：１５９〜１６１℃ ■比旋光度：〔α〕♂７＋５５．４’（ｃ　１．０．メ
タノール）■紫外部吸収スペクトル：末端吸収あり（メ
タノール中） ■プロトン核磁気共鳴スペクトル：　（重メチルスルホ
キシド中、内部標準テトラメチルシラン）：０．８１（
ｄ、　３Ｈ，Ｊ＝６．０Ｈｚ）　；　１．１１（ｄ、　
３Ｈ，Ｊ＝６．０Ｈｚ）　；１．３８（Ｓ、　３Ｈ）；
　１．７７（ｇｄｄ、　ＩＨ，Ｊ＝６．０Ｈｚ）；３．
５７，３．７９（ＡＢ　ｐａｔｅｒｎ、　２Ｈ，Ｊ＝１
１．０Ｈｚ）；３．６６（ｇｄ、　ＬＨ，Ｊ：６．０）
Ｉｚ、　６．０Ｈｚ）；３．９９（ｄ、　ＩＨ，Ｊ＝２
．０Ｈｚ）７．７２（Ｓ、　ＩＨ）■１３Ｃ−磁気共鳴
スベクトル（重メタノール中、内部基準テトラチルシラ
ン）： １７６．７（ｓ）　　１７５．８（ｓ）　　７５．３（
ｄ）　　７．１２（ｄ）６６．２（ｔ）　　６２．７（
ｓ）　　４３．７（ｄ）　　２１．２（ｇ）　　２０．
０（ｇ）８．３（ｇ） コナゲニンの製造例を後記の参考例で具体的に記載する
。

本発明の方法において一般式（Ｉ）の化合物を合成する
には次の様な実施方法が挙げられる。

例えば、上記一般式（Ｉ）で表わされる本発明化合物の
うち、Ｒ１がメチル基もしくはエチル基で表わされる化
合物は式（ＩＩ）のコナゲニンを式Ｒ１１Ｘ（Ｒ１１は
メチル基もしくはエチル基を示しＸはハロゲン原子を示
す）で表わされるアルキルハライドと塩基の存在下に反
応させることにより合成できる。

また、Ｒ２が０１〜Ｃ５のアルキル基またはアラルキル
基で表わされる式（Ｉ）の化合物並びにＲ４がＣユ〜Ｃ
５のアルキル基またはアラルキル基で表わされる式（Ｉ
）の化合物は、それぞれ式（ＩＩ）のコナゲニンと式Ｒ
”Ｘ（Ｒ”は０１〜ＣＳのアルキル基または式−（ω２
＞、−０（ｎ＝１〜３）のアラルキル基を示しＸはハロ
ゲン原子を示す）で表わされるアルキルハライド又はア
ラルキルハライドを塩基の存在下に反応させることに合
成することができる。以・上の合成法はコナゲニンのア
ルコール性水酸基を常法でエーテル化反応することによ
って、目的とする型の式（Ｉ）の化合物を合成するもの
であり、このように目的とするエーテル型の式（Ｉ）の
化合物を得る方法は上記の特定な方法に限定する必要は
なく、エーテル化反応を行う他の試剤（例えば硫酸エス
テル、スルホン酸エステルやジアゾアルカン等）も同様
に用いることができる。なおここで用いる塩基としては
、ナトリウムメチラート等のアルカリ金属アルコラード
、水素化ナトリウム等のアルカリ金属水素化物、水酸化
カリウム等のアルカリ金属水酸化物、リチウムジイソプ
ロピルアミド等のアルカリ金属アミド、ピリジン類、ト
リエチルアミン等のアミン類等が挙げられる。

次に、一般式（Ｉ）で表わされる本発明化合物のうち、
Ｒ３がメチル基もしくはエチル基で表わされる式（Ｉ）
の化合物は式（ＩＩ）のコナゲニンを式Ｒ”Ｘ（Ｒ１３
はメチル基もしくはエチル基を示す）で表わされるアル
キルハライドと塩基の存在下に反応させる事により合成
することができる。以上の方法は、フナゲニン中のイミ
ノ基のチッ素原子のアルキル化修飾によって、目的とす
る式（Ｉ）の化合物を合成するものであり、目的とする
化合物を得る方法は上記の特定な方法に限定する必要は
なく、イミノ基のチッ素原子をアルキル化する他の試剤
も同様に用いることができる。

ここで用いる塩基としては、ナトリウムメチラート等の
アルカリ金属アルコラード、水素化ナトリウム等のアル
カリ金属水素化物、リチウムジイソプロピルアミド等の
アルカリ金属アミド等が挙げられる。

更に、一般式（Ｉ）で表わされる本発明化合物のうち、
Ｒ１がアシル基−ＣＯＲ’　（Ｒ’は前記に同じ）で表
わされる化合物、あるいはＲ２がアシル基−ＣＯＲ’　
（Ｒ７は前記に同じ）で表わされる化合物、あるいはＲ
４がアシル基−ＣＯＲ’　（Ｒ＠は前記に同じ）で表わ
される化合物は、式（ＩＩ）のコナゲニンを式（Ｒ１４
ＣＯ）２０（Ｒ１４は水素、メチル基もしくはエチル基
を示す）で表わされる有機酸無水物と硫酸、ｐ−トルエ
ンスルホン酸等の酸、またはピリジン、ルチジン等の塩
基の存在下にエステル化反応させることにより合成する
ことができ、若しくはコナゲニンと式Ｒ”　５ＣＯＸ　
（Ｒ”　’は水素、メチル基、もしくはエチル基を示し
Ｘはハロゲン原子を示す）で表わされる酸ハライドとを
水酸化ナトリウム等のアルカリ金属水酸化物等の無機塩
基、またはピリジン、トリエチルアミン等の有機塩基の
存在下にエステル化反応させることによって合成できる
。

以上の合成法はコナゲニンのアルコール性水酸基を常法
でエステル化反応することによって、目的とするエステ
ル型の式（Ｉ）の化合物を合成するものであり、目的と
する型の式（Ｉ）の化合物を得る方法は上記の特定な方
法に限定する必要はなく、エステル化反応を行う他の試
剤も同様に用いることができる。

更に一般式（Ｉ）で表わされる本発明化合物のうち、Ｒ
５が式−ＯＲ”（Ｒ”４１Ｃ，〜Ｃ，（７）７＃キ／Ｌ
基、もしくは式−（ＣＨ２）、、−〇（ｎ＝１〜３）の
アラルキル基を示す）で表わされる式（Ｉ）の化合物は
式（ｎ）のコラゲニンを式Ｒ”Ｘ（Ｒ”はＣユ〜Ｃ５の
アルキル基、もしくは式−（ＣＨ２）ｒ、−■（ｎ＝１
〜３）のアラルキル基を示しＸはハロゲン原子を示す）
で表わされるアルキルハライド又はアラルキルハライド
化合物とナトリウムメチラート等のアルカリ金属アルコ
ラード、水素化ナトリウム等のアルカリ金属水素化物、
水酸化カリウム等のアルカリ金属水酸化物、リチウムジ
イソプロピルアミド等のアルカル金属アミド、ピリジン
類、トリエチルアミン等のアミン類、テトラメチルアン
モニウムヒドロキシド等の四級アンモニウム等の塩基の
存在下にコナゲニンのカルボキシル基の所で反応させる
ことにより、あるいはコナゲニンと式Ｒ”０Ｈ（Ｒ”は
Ｃ工〜Ｃ５のアルキル基もしくは式−（Ｑ（ｚ）ｎ−Ｏ
（ｎ　＝　１〜３）のアラルキル基を示す）で表わされ
るアルカノール又はアラルキルアルコール類とを塩酸、
硫酸等の鉱酸、トリフッ化ホウ素等のルイス酸、ｐ−ル
トルエンスルホン酸等の有機酸の存在下、もしくは、ジ
シクロへキシルカルボジイミド等の通常用いられる脱水
縮合剤の存在下にコナゲニンのカルボキシル基の所でエ
ステル化反応させることにより合成できる。更には、塩
化チオニル、五塩化リン等のハロゲン化試剤によりコナ
ゲニンをカルボン酸塩化物に変換した後、式Ｒ”０Ｈ（
Ｒ”は前記に同じ）のアルコールを反応させることによ
り合成する事ができる。以上の合成法はコナゲニンのカ
ルボキシル基のエステル化反応によって、目的とするエ
ステル型の式（Ｉ）の化合物を合成するものであり、目
的とする化合物を得る方法は、上記の特定な方法に限定
する必要はなく、エステル化反応を行う他の試剤（例え
ばジアゾアルカン、硫酸エステル等）も同様に用いるこ
とができる。

また、一般式（Ｉ）で表わされる本発明化合物のうち、
Ｒ５が式−Ｎｏｒ＋１６　（Ｒ１Ｏは前記に同じ）で表
わされる化合物は遊離酸の形の式（ＩＩ）のコナゲニン
、もしくは一般式（Ｉ）で表わされる本発明化合物のう
ちＲ５が式ｏＲ１ｇ（ＲｌＳは前記に同じ）で表わされ
るエステル型の式（Ｉ）の化合物を式Ｎ）ＩＲ”　（Ｒ
”″は水素、Ｃ□〜Ｃ５のアルキル基、もしくは式（Ｃ
Ｈ２）ｎ＠　（ｎ　＝　１〜３　）のアラルキル基を示
す）で表わされるアミン化合物に対して触媒の不存在下
に、あるいはジシクロへキシルカルボジイミド、１−エ
チル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイ
ミド等の通常用いられる脱水縮合剤、または／および、
ナトリウムメトキシド等の金属アルコラード、ブチルリ
チウム等のアルキル金属ナトリウムハイドライド等の金
属水素化物等の塩基の存在下に、更には塩化チオニル、
五塩化リン等のハロゲン化試剤との反応により酸塩化物
に変換した後、反応させることにより合成できる。

当然の事ながら、上記の反応により一般式（Ｉ）のコナ
ゲニン誘導体を合成する場合、条件によってＲ１、Ｒ２
、Ｒ３、Ｒ４、およびＲ５の水素以外に該当する官能基
を、それぞれ種々の組み合わせで同時に導入することが
できる。さらに、同時に導入した後に、Ｒ５が基−ＯＲ
”（Ｒｌｓは前記に同じ）で表わされる化合物を水酸化
ナトリウム等の塩基または硫酸等の酸で加水分解により
、Ｒ５がＯＨである遊離カルボン酸の形の式（りの化合
物を得る事も出来る。

また、先にコナゲニンに保護基を導入した後、上記反応
を行い、その後に通常の脱保護法による脱保護により、
選択的に目的とする式（Ｉ）の化合物を得ることもでき
る。ここで言う保護基とは、トリメチルシリル基、ジメ
チル−ターシャリ−ブチルシリル基、テトラヒドロピラ
ニル基またはアセトニド基等が挙げられるが、これに限
定する必要はなく、水酸基、アミド基、カルボキシル基
の保護基として働き得る他の保護基を用いることもでき
る。

更に第３の本発明によると、次式 で表されるコナゲニン又はその塩および一般式（Ｊ）で
表されるコナゲニン誘導体またはその塩の少なくとも一
つを有効成分として含有することを特徴とするＴ細胞増
殖促進剤が提供される。

前記コナゲニンは、それの作用の特徴として、マウス牌
細胞から得たＴ細胞の増殖を特異的に促進するが、休止
期のＴ細胞には作用しない。例えば、コンカナバリンＡ
で処理したＴ細胞あるいはマクロファージと共存してい
るＴ細胞に作用する。

このことから、ヘルパーＴ細胞あるいはエフェクターＴ
細胞のクローンを増やして活性化することが期待され、
癌あるいは自己免疫病への薬剤としての可能性がある。

一般式（Ｉ）で表されるコナゲニン誘導体のＴ細胞増殖
促進作用は以下に試験例によって例証する。

賦敢孤よ コナゲニン、並びに一般式（Ｉ）のコナゲニン誘導体の
Ｔ細胞増殖に対する効果は、次のように調べた。

雌性フィッシャー３４４ラツト（Ｉ２〜１６週齢、日本
チャールス・リバー社より購入）から無菌的に摘出した
牌臓をホモジナイズした後、ナイロン・ウール・ファイ
バー・カラムを通過させ、Ｔ細胞の豊富な細胞液を得た
。この細胞液を、牛胎児血清１０％を添加したＲＰＨＩ
　１６４０培地〔田水製薬（株）製〕中に２ＸＩＯ’個
／ｍｆｌになるように懸濁し、９６穴マイクロ・プレー
トに１００越ずつ分注した。細胞液には５ｉｔｇ／ｎ＋
ＱのコンカナバリンＡ（ファルマシア社製）と。

各濃度の供試化合物を加え、炭酸ガスふ卵器（ＣＯ□濃
度５％）中で３７℃、３日間培養した。培養終了１６時
間前に、１０ｄ／ｎ＋Ｑの放射能ラベルしたチミジン液
（Ｔｈｙｍｉｄｉｎｅ　、　［６−３ＨコＮＥＮ社製）
を１０ｄ添加した。

培養細胞をセルハーベスタ−によって濾紙上に固定し、
液体シンチレーション・カウンターで放射能値を測定し
、検体無添加群の値を１００とした時の値を、ラットＴ
細胞増殖に対するコナゲニン誘導体の増強値として示し
た。その結果を第３表に示す。

第３表に示された結果から、本発明による一般式（Ｉ）
の化合物は優れたＴ細胞増殖促進活性を有することが明
らかである。

第３表 本発明の第４の発明によると、一般式（Ｉ）で表される
コナゲニン誘導体又はその塩の少なくとも一つを有効成
分とする制癌剤が提供される。

一般式（Ｉ）のコナゲニン誘暮体の抗腫瘍活性は。

以下の試験例により例証する。

臥脹叉１ 本発明化合物（Ｉ）の抗腫瘍作用は、以下の様に試験し
た。

すなわち、ＩＣＲマウスにエールリッヒ腹水癌細胞の懸
濁液を細胞数２Ｘ１０’個／マウスになる様に鼠踵部皮
下に移植し、移植後７日目より供試化合物を、５０．１
２．５．３．１２５．０．７８．０．１９■／ｋｇの投
与量で腹腔内に７回注射した（Ｉ群４匹、対照群８匹）
。１５日目に固型癌を取り出し、固型癌の重量を測定し
、対照群に比較しての処理群のマウスの固型癌の重量の
減少を抑制率として第４表に示した。第４表に示すよう
に、本発明の各化合物は、マウスエールリッヒ固型癌に
対して、顕著な抑制活性を示した。

第４表 イ 牟 月 本発明による第４表に示された代表例の新規コ　　　。

ナゲニン誘導体を５００■／ｋｇの投与量でマウスに経
　　９０投与したが、何らの毒性を示さず、本発明によ
る新規コナゲニン誘導体（Ｉ）は低毒性であること　　
　。

が分った。

本発明によるコナゲニン誘導体（Ｉ）を有効成分として
含有する制癌剤の製剤としては、経口、経　　１腸また
は非経口的投与による製剤のいずれをも選　　　ンぶこ
とか出来る。具体的製剤としては、注射剤、　　　。

錠剤、カプセル剤、細粒剤、シロップ剤、生薬、　　　
■軟膏剤などをあげることが出来る。本発明による　　
　。

制癌剤の製剤の担体としては、経口、経腸、その　　　
イ也非経ロ的に投与するために適した有機または無幾の
固体または液体の、通常は不活性な薬学的担本材料が用
いられる。具体的には、例えば結晶性レルロース、ゼラ
チン、乳糖、澱粉、ステアリン浚マグネシウム、タルク
、植物性および動物性脂方および油、ガム、ポリアルキ
レングリコールらる。製剤中の担体に対する本発明の制
癌剤化合勿（Ｉ）の割合は０．２〜１００％の間で変化
させることり１出来る。また、本発明による制癌剤は、
これと向立性の他の制癌剤又はその他の医薬を含むこと
が出来る。この場合、本発明による制癌剤が、そ）製剤
中の主成分でなくても良いことはいうまでもない。

本発明による一般式（Ｉ）の化合物は、一般に所攬の作
用が副作用を伴うことなく達成される投与量で投与され
る。その具体的な値は医師の判断で央定されるべきであ
るが、制癌の目的には一般に成人１人当り１０■〜１０
ｇ、好ましくは２０■〜５ｇ璧度で投与されるのが普通
であろう。なお、第４り本発明の制癌剤は有効成分とし
て１■〜５ｇ、仔ましくは３■〜１ｇの単位の薬学的製
剤とじて投与できる。

（実施例） 次にコナゲニンの製造の参考例、並びに本発明の化合物
の製造例をあげて本発明を具体的に説明するが、これら
実施例は本発明を制限するものではない。

寒天斜面培地で培養したストレプトミセス・ロゼオスポ
ルス（Ｓｔｒｅ　ｔｏｍ　ｃｅｓ　ｒｏｓｅｏｓｐｏｒ
ｕｓ）ＭＩ６９６−ＡＦ３株（微工研菌寄第１０５９８
号）より、ガラクトース２．０％、デキストリン２．０
％、ソイペプトン（デイフコ社製バクトソイトン）１．
０％、コーン・ステイープ・リカー〔日本食品化工■製
〕０．５％、硫酸アンモニウム０．２％、炭酸カルシウ
ム０．２％、消泡用シリコーンオイル〔信越化学工業■
製シリコンＫＭ７０）　０，０３％からなる液体培地（
ｐＨ７，４）を１１０ｍｇずつ分注したワツフル付三角
フラスコ２本に１白金耳ずつ接種し、２７°Ｃで３日間
振どう培養した。

それを種培養液として用い、マルトース（ＨＡＹＡＳＨ
ＩＢＡＲＡ　ＢＩＯＣＨＥＭＩＣＡＬ社製）２，０％、
細菌用肉エキス〔極東製薬工業■製〕０．５％ペプトン
〔日本製薬味製ポリペプトン〕０．５％、粉末酵母エキ
スＳ〔日本製薬味製〕０．３％、塩化ナトリウム０．３
％、硫酸マグネシウム（７水和物）０．１％、以上の培
地成分に無機塩として、硫酸銅（５水和物）２．８ｇ、
硫酸鉄（７水和物）　０．４ｇ、塩化マンガン（４水和
物）　３．２ｇ、硫酸亜鉛（７水和物）　０．８ｇを５
００１１Ｉρの蒸留水に溶解したものを１　、２５ｍ＋
Ｑ／ｆｆとなるように加えた液体培地を、　　１１０ｍ
Ｑずつ分注したワツフル付三角フラスコ９１本に３ｍＲ
ずつ接種し、２７℃で４日間振どう培養した。培養液の
濾過により濾過液を菌体から分離し、その濾過液８１０
０ｍＱに２００ｇの活性炭素を加え、濾別した。活性炭
素に吸着した有効成分は４Ωの５０％アセトン水で抽呂
し、減圧濃縮した。これを２Ｑの蒸留水に溶解しｐＨ３
にて等量のブタノールで抽出、ｐＨを８に戻した後、減
圧濃縮して、７．５ｇの褐色油状物質を得た。

これを酢酸ブチル−ブタノール−酢酸−水（６：　４　
：１：１）で充填した１５０＋ｎＱのシリカゲルカラム
にかけ、同溶液で溶出クロマトグラフィーを行った。

メルク社製Ａｒｔ、　５７１５シリカゲルプレートを用
いた薄層クロマトグラフィーでＲｆ値０．５０〜０．５
５［展開液ブタノール−酢酸−水（４：１：１））を示
すニンヒドリン発色分画を集め、減圧濃縮して１．２ｇ
のコナゲニン粗物質を得た。

この粗物質を高速液体クロマトグラフィー（センシュー
科学■製、センシューパックヌクレオジル（Ｎｕｃｌｅ
ｏｓｉｌ）５Ｃ１，、２０φＸ　３００ｍｍ）にかけ、
　５ｍｎＩ分の流速において、移動相を２０分間で１０
％メタノールから１００％メタノールへとグラジェント
をかけながら溶出し、その後２０分間メタノールで溶出
を行った。滞留時間２１分のピークを分取し、減圧濃縮
したところ無色結晶として３４．８ｍｇのコナゲニンが
得られた。この結晶のメタノール溶液は、メルク社＾ｒ
ｔ、　５７１５シリ力ゲル薄層クロマトグラフィー〔ブ
タノール−酢酸−水（４：１：１）で展開〕で単一スポ
ットを与え、純粋なコナゲニンを得たことがわかった。

失施Ｍ上　化合物Ｎｏ、１の合成 水素化ナトリウム（油性、含有量６０％）３．２　ｇを
乾燥ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）１６０＋ｎΩに懸
濁し。

この懸濁液にコナゲニン４．０ｇを室温にて撹拌しなが
らゆっくり加え、ガスの発生が終了するまで約３０分間
反応させた。

この懸濁液にヨウ化メチル１２．５ｍｇを加え、室温に
て２時間反応させた。このエーテル化の反応終了後、得
られた反応溶液を減圧下濃縮し、続いて、飽和食塩水を
加え、ブタノール５０＋ｎＱで３回抽出した。抽出液を
飽和食塩水で洗浄後、溶媒を減圧留去した。残渣をシリ
カゲルを担体とするカラムクロマトグラフィーにかけ、
１％から５％のメタノールを含むクロロホルムにて溶出
を行ない目的物質を含む両分を集め溶媒を留去し、目的
とする化合物Ｎｏ、１（第１表参照）を４．１ｇ得た（
収率８４．８％）。

実施例２　化合物Ｎｏ、４の合成 コナゲニン１．０ｇをＤＭＦ３０ｍＱに溶解し、この溶
液にテトラメチルアンモニウムヒドロキシド・５水和物
０．７３　ｇの３０ｍＱ水溶液を室温にて加え、１０分
間反応させた。

この反応溶液を減圧乾固し、残渣にＤＭＦ３０＋ｏＱを
加え、続いてヨウ化メチル２．５＠Ｑを加え、激しく撹
拌しながら２４時間反応させた。

反応終了後、溶媒を減圧留去し、残渣に飽和食塩水を加
え、ブタノール３０社で３回抽出した。抽出液を飽和食
塩水で洗浄後、溶媒を減圧留去した。

残渣をシリカゲルを担体とするカラムクロマトグラフィ
ーにかけ３％から５％のメタノールを含むクロロホルム
にて溶出を行ない。目的とする化合物Ｎｏ、４（第１表
参照）を０．９　ｇ得た（収率９０．０％）。

失胤敗王　化合物Ｎｏ、７の合成 コナゲニン１．５ｇ、テトラメチルアンモニウムヒドロ
キシド・５水和物１．１ｇ、臭化ベンジル１．４＠Ｑを
用い、実施例２と同様の操作で反応し且つ後処理すると
、目的とする化合物Ｎｏ、７（第１表参照）を１．８ｇ
得た（収率８９．６％）。

叉１鮭士　化合物Ｎｏ、９の合成 水素化ナトリウム０．２２ｇ（油性、含有量６０％）、
コナゲニン０．５　ｇ、臭化ベンジル１．０＠Ｑを用い
、実施例１と同様の操作を行ない、目的とする化合物Ｎ
ｏ、９（第１表参照）を０．５ｇ得た（収率６０．０％
）。

大１１匹」−化合物Ｎｏ、１２の合成 実施例１で得られた化合物Ｎ００１の２５０■をメタノ
ール１０ｍＱに溶解し、この溶液に５Ｎ水酸化ナトリウ
ム０．２ｍ１２を加え８０℃で８時間反応させた。

反応液を冷却後、水を加え、　２Ｎ塩酸で酸性にし。

ブタノール３０ｍＱで３回抽出を行なった。抽出液を水
洗後に溶媒を減圧留去し、得られた残渣をシリカゲルを
担体とするカラムクロマトグラフィーに付し、５％のメ
タノールを含むクロロホルムにて溶出を行ない、目的と
する化合物Ｎｏ、１２（第１表参照）を１３０．得た（
収率５４．２％）。

実施例６　化合物Ｎｏ、１４の合成 コナゲニン０．５　ｇをピリジン２０ｍ１２に溶解し、
この溶液に無水酢酸１０社を加え、室温にて２４時間反
応させた。このアセチル化の反応終了後、減圧上濃縮し
、得られた残渣に酢酸エチル５０ｍｆｌを加え、希塩酸
２０Ｉ！ｌＦで洗浄し、乾燥後（硫酸ナトリウムによる
）に溶媒を減圧留去した。残渣をシリカゲルを担体とす
るカラムクロマトグラフィーに付し、酢酸エチル：ヘキ
サン（３：　７）の混合溶媒にて溶出し、目的とする化
合物Ｎｏ、　１４　（第１表参照）を０．１６ｇ得た（
収率２１％）。

失胤桝ユ　化合物Ｎｏ、１７の合成 実施例２で得られた化合物Ｎ０１４の３００■を濃アン
モニア水１−に溶解し、この溶液に塩化アンモニウム０
．１ｇを加え、室温にて１６時間反応させた。

反応終了後、反応液を減圧上濃縮し、得られた残渣を、
シリカゲルを担体とするカラムクロマトグラフィーに付
し、５％から２０％のメタノールを含むクロロホルムに
て溶出した。目的物を含む両分を集め、溶媒を減圧留去
し、目的とする化合物Ｎｏ、１７（第１表参照）を４２
■得た（収率、１５．４％）。

失に孤旦　化合物Ｎｏ、１９の合成 実施例２で得られた化合物Ｎｏ、４の３０■をメタノー
ルＩＩＩＱに溶解し、この溶液にｎ−ブチルアミン０．
１ｍｆｌを加え、続いてナトリウムメトキシドを触媒量
加え、８０℃にて８時間反応させた。

反応終了後、溶媒を留去し、得られた残渣をシリカゲル
を担体とするカラムクロマトグラフィーに付し、酢酸エ
チルにて溶出を行ない、目的とする化合物Ｎ０．１９（
第１表参照）を２５■得た（収率７３．５％）。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、下記の一般式（ I ） ▲数式、化学式、表等があります▼（ I ） 〔式中、Ｒ＾１は水素、メチル基、エチル基または式−
   ＣＯＲ＾６（Ｒ＾６は水素、メチル基、またはエチル基
   を示す）で表わされるアシル基を表わし；Ｒ＾２は水素
   、Ｃ＿１〜Ｃ＿５のアルキル基、式▲数式、化学式、表
   等があります▼（ｎは１〜３の整数を示す）で表わされ
   るアラルキル基または式−ＣＯＲ＾７（Ｒ＾７は水素、
   メチル基またはエチル基を示す）で表わされるアシル基
   を表わし；Ｒ＾３は水素、メチル基またはエチル基を表
   わし；Ｒ＾４は水素、Ｃ＿１〜Ｃ＿５のアルキル基、式
   ▲数式、化学式、表等があります▼（ｎは１〜３の整数
   を示す）で表わされるアラルキル基、または式−ＣＯＲ
   ＾８（Ｒ＾８は水素、メチル基またはエチル基を示す）
   で表わされるアシル基を表わし；Ｒ＾５は式−ＯＲ＾９
   （Ｒ＾９は水素、Ｃ＿１〜Ｃ＿５のアルキル基または式
   ▲数式、化学式、表等があります▼（ｎは１〜３の整数
   を示す）で示さ れるアラルキル基を示す）で表わされる基、または式−
   ＮＨＲ＾１＾０（Ｒ＾１＾０は水素、Ｃ＿１〜Ｃ＿５の
   アルキル基または式▲数式、化学式、表等があります▼
   （ｎは１〜３の整数を示す）で示されるアラルキル基を
   示す）で表わされるアミノ基又は置換アミノ基を表わす
   が但し、Ｒ＾１、Ｒ＾２、Ｒ＾３、Ｒ＾４およびＲ＾５
   のすべてが同時に水素原子であることはない〕で表わさ
   れるコナゲニン誘導体、またはその塩。 ２、次式（II） ▲数式、化学式、表等があります▼（II） で表わされるコナゲニンの官能基である水酸基、カルボ
   キシル基又は活性の水素原子を保護し又は保護せずに、
   コナゲニンのアルコール性水酸基の１個又はそれ以上を
   エーテル化又はエステル化するか、もしくはコナゲニン
   のカルボキシル基をエステル化又はアミド化するか、も
   しくはコナゲニンのイミノ基をアルキル化するか、もし
   くはそれらのエーテル化、エステル化、アミド化及びア
   ルキル化の何れか二つ又はそれ以上の反応を組合わせて
   行うことを特徴とする、請求項１に記載の一般式（ I
   ）のコナゲニン誘導体の製造法。 ３、次式（II） ▲数式、化学式、表等があります▼（II） で表されるコナゲニン又はその塩および請求項１に記載
   の一般式（ I ）で表わされるコナゲニン誘導体または
   その塩の少なくとも一つを有効成分として含有すること
   を特徴とするＴ細胞増殖促進剤。 ４、請求項１に記載の一般式（ I ）で表わされるコナ
   ゲニン誘導体またはその塩を有効成分として含有するこ
   とを特徴とする制癌剤。