JPH04207200A - グリチルレチン酸誘導体、薬用人参を用いたその生産方法および甘味剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ［産業上の利用分野１ 本発明は、薬用人参の毛状根のもつ植物変換能を利用し
て、グリチルレチン酸からその誘導体を生産する方法に
関する。　本発明はまた、上記グリチルレチン酸の誘導
体でおる新規な化合物と、そのうちの一種を甘味剤とし
て使用することに関する。

［従来の技術］ 発明者らは、薬用人参の根にアゲロバクチ１ノウム・リ
ゾゲネス（△ｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ　ｒｈｉｚｏｇ
ｅｎｅｓ）のＲ１プラスミドを導入して分離した毛状根
かすぐれた植甥変換能をもつことを報告しく重合ら：Ｐ
ｌａｎｔ　　Ｃｅ１ｌ　Ｒｅｐｏｒｔｓ　　６　４４９
−４５３（１９８７））、この毛状根が高いサポニンの
生産性を有し、フェニルカルボン酸やシギトキシゲニン
など多くの化合物に対し高い変換活性を有することを明
らかにして来た。

ざらに研究を進めてグリチルレチン酸に対する変換能力
を検討したところ、新規化合物を含め、有用な変換物か
得られることを見出して、その−部についてはすでに発
表した（重合ら１日本薬学会１１０年会講演要旨、（札
・滉）ｐ、１９１　（１９９０）〕。

ひき続き、残りの変換物についてしらへ、やはり新規化
合物が存在することをつきとめ、かつ−部の化合物が甘
味を呈することを見出した。

［発明か解決しようとする課題１ 本発明の目的は、上記した新しい研究結果にもとづき、
新規化合物とその生産方法を提供し、あわせて新規な甘
味剤を提供することにある。

［課題を解決するための手段１ 本発明のグリチルレチン酸誘導体の生産方法は、薬用人
参の毛状根を、１８β−グリチルレチン酸を加えた培地
中で培養し、収穫物から、一般式で示される化合物ＧＡ
−４〜６を溶媒抽出により取得することからなる。

本発明の新規なグリチルレチン酸誘導体は、上記の一般
式中、ＧＡ−５の構造をもつものでおる。

本発明の甘味剤は、上記ＧＡ−５の構造をもつグリチル
レチン誘導体を有効成分とする。

［作　用１ グリチルレチン１（ＧＡ）は、甘草から得られる天然甘
味物質グリチルリチン（ＧＬ）のアグリコンとして知ら
れる。　グリチルリチン誘導体の合成は多数報告されて
いるが、植物の変換能力を利用した例は少ない。　本発
明は、薬用人参毛状根のもつ特殊な代謝能力を利用した
、グリチルリチン誘導体の新規な生産方法でおる。

上記３種の化合物中、構造式ＧＡ−４で示されるものは
すでに合成され、甘味を有することが報告されている〔
江崎ら：Ａｇｒｉｃ、　Ｂｉｏｌ、　　Ｃｈｅｍ、。

４２．１５９９〜１６００　（１９７８））。　ＧＡ−
５はこれと同等以上の、従ってグリチルリチン（ショ糖
の３００倍）と同等に甘味を有する。

構造式ＧＡ−６で示される化合物は、合成された報告が
ある［連用ら：　Ｃｈｅｍ、ｐｈａｒｍ、　１３ｕ１１
．。

３６．３７１０−３７１３　（１９８８）Ｅ。

［実施例］ オタネニンジン　ｐａｎａｘ　　ｇｉｎｓｅｎＱ　　（
Ｃ，Ａ。

Ｍｅｙｅｒ）の２年目の根から分離したＰｇ−４カルス
に、１９８７年にアグロバクテリウム・リゾゲネスＡ−
４株を共存培養法により感染させて分離した毛状根を使
用した。

この毛状根を、Ｆ　ＢＡ　：　２ｍ’ｊ／ｆＪ　、カイ
ネチン０．１１Ｒｇ、／Ｆ’２含むＭＳ（〜Ｉｕｒａｓ
ｉｇｅ　−３ｋｏｏｇ＞基本液体培地（以下、：＝　８
２　Ｋ　Ｊ′培地という）に入れ、ロータリーシェーカ
ーにより１４５　ｒｌ）ｍで撹拌しながら、２５℃にお
いて暗所に培養し、４週間ごとに継代培養した。

容量１Ｆの三角フラスコに５００ｄの８２に培地を入れ
、３週間前に培養した毛状根に、エタノールに溶解した
１８β−グリチルレチン酸を５０Ｉｒｔｇ（濃度１０１
００ｐｐ投与し、同時にグルコースを濃度３％となるよ
うに添加し、１週間培養した。

収穫物をナイロンクロスで濾過して培養液と毛状根とに
分けた。　培養液は濾紙で濾過したのら、ダイヤイオン
ＨＰ−２０カラムに通し吸着させた。

水洗後メタノールで溶出し、メタノールを減圧下に留去
してメタノール溶出分画工を得た。

毛状根はメタノールを加えてウエアリングブレンダーに
入れ１０．ＯＯＯｒｐｍで３分間ホモジナイズし、メタ
ノールで２回冷浸した。　メタノール液を減圧濃縮後、
得られたメタノールエキスを水に溶解した。　酢酸エチ
ルで３回抽出し、酢酸ニチル層を減圧濃縮し、酢酸エチ
ル分画Ｓ：得た。

水層は、培養液と同様にダイヤイオンＨＰ−２０カラム
に通し吸着させた。　水洗後メタノール溶出し、メタノ
ール液を減圧下に留去してメタノール溶出分画■を得た
。

以上の操作法を系統図にすれば、図に示すとおりでおる
。

上記のようにして得たメタノール分画工および■、なら
びに酢酸エチル分画を一定量のメタノールに溶解し、シ
リカゲル薄層板（Ｍｅｒｃｋ　　Ｆ　２５４）にスポッ
トした。

展開溶媒としてクロロホルム：メタノール：水＝６：４
：１の混合溶媒を用いて展開し、紫外光（２５４ｎｍ）
照射下に、各分画をコントロールとの比較により、変換
物の有無をしらべた。

薄層クロマトグラフィーの結果、変換物がメタノール溶
出分画工および■、ならびに酢酸エチル分画に認められ
たので、それらを合わせてシリカゲルカラムクロマトグ
ラフィーを行なった。　ざらに、各分画をＨＰＬＣによ
り分離して、ＧＡ−４〜ＧＡ−６を単離した。

ＧＡ−４、ＧＡ−５およびＧＡ−６の待ヰを、それぞれ
第１表、第２表および第３表に示す。

ＧＡ−４ないしＧＡ−５について、１３ｃｍ＼：ＭＲ（
Ｃ５Ｄ５Ｎ）のデータを、ＧＡのそれと比較して第４表
に示す。　ＧＡ−４〜ＧＡ−６のアゲ第５表に、また糖
部分の１３ＣＮＭＲ（Ｃ５Ｄ５Ｎ中）を第６表に示す。

ＧＡ−４は、Ｆ　Ａ　Ｂ　−ｆｖｌ　Ｓにより、さきに
報告したＧＡ−２と同じ分子量を有することがわかった
。　　Ｈ−および１３Ｃ−ＮＭＲにより、糖部分はンホ
ロースと考えられる。　　Ｃ−ＮＭＲスペクトルをＧＡ
のそれと比較すると、３位の炭素原子が’ｔｏ、ｓｐｐ
ｍ低磁場シフトして観察されることから、ソロホースの
結合位置は３位と決定した。

ＧＡ−５は、ＦＡＢ−ＭＳにおいてＧＡ−４よりもマロ
ニル基１個分大きい質量数を示したことと、１Ｈ−およ
び１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルのデータから、ＧＡ−４の
マロニル体と考えられる。

マロニル基の結合位置は、ＨＨ−ＣＯ３Ｙ、２Ｄ−ＨＯ
ＨＡＨＡおよびＮＯＥの測定により、末端グルコースの
６位と決定した。

ＧＡ−６は、Ｆ　Ａ　Ｂ　−；’ＶＩ　ＳにおいてＧＡ
−４よりもヘキソース１分子だけ大きい質量数を示し、
１３Ｃ−Ｎ　Ｍ　Ｒ”−ＧＡのそれと比較することによ
り、Ｃ−３位とＣ−３０位に糖鎖を有するｂ　ｉ　ｓｄ
ｅｓｍｏｓ　ｉ　ｄｅと考えた。　ざらに、さきに報告
したＧＡ−１およびＧＡ−４と１３Ｃ−Ｎ〜ＩＲを比較
することにより、Ｃ−３位にソロホース、Ｃ−３０位に
グルコースか結合しているものと決定した。

甘味試験は、検体の０．０３％（Ｗ／Ｖ　）水溶液の甘
さに相当するショ糖水溶液の濃度Ｂ％（Ｗ／Ｖ）を求め
、ショ糖との相対甘味度（Ｂ１０．０３＞を算出した。

　ＧＡ−４５よびＧＡ−５は、ショ糖の約３００倍の甘
味を示した。

第　　　１　　　表 ’　ＧＡ−４：白色、扮末、　　　　　　　　　　　　
Ｉ’　（α〕２６＝７４．３°（ｃｍ０．８０．ＨｅＯ
Ｈ）　　　。

□ ｌ　ＩＲ’　Ｂ３３　ｃｍ−”　：３４００，１７１０
．１６６０　　　　。

ｌ　　ＦＡＢ−〜１３　　ｍ、’ｚ：　　７９５［Ｈ＋
Ｈ］”　　、　　８１７［Ｈ＋Ｎａｌ　　”　　　［１
１ＨＮ　Ｍ　Ｒ（Ｃ５Ｄ　５　Ｎ　）　５　、”’　０
．６２（ＩＨ，ｄ、Ｊ＝１２．０Ｈｚ、５−Ｈ）　　　
’□ １　　０．６８（３Ｈ，ｓ） □ １０．９７（３Ｈ，Ｓ） １　　　　　　： ｊｌ、０４（３Ｈ，Ｓ） ｊ　　　１．１４Ｆ３Ｈ，Ｓ）　　　　　　　　　　　
　１１．２１（３Ｈ，Ｓ）　　　　　　　　　　　１□ ｌ８３（１）１．ｄｄ、Ｊ＝１３．５，１３．０）１ｚ
、１９−１ａｘ）１２．３５（ＩＨ，ｓ、９−Ｈ）　　
　　　　　　　　　１１　　２．４３（ＩＨ，ｄｄ、Ｊ
＝１３．５，４．ＯＨｚ、１８−Ｈ）　　　　ｌ１３．
２１（ＩＨ，ｄｄ、Ｊ＝１１．５，４．５Ｈｚ、３＝旧
　　　　　１３．８０（１Ｎ、ｄｄｄ、Ｊ＝９．０，５
．０，２．０Ｈｚ、Ｇｌｃ−５−Ｈ）　　１ｊ　　　　
３．８３（ＩＨ，ｄｄｄ、　Ｊ−９，０，３，０，３，
ＯＨ２，Ｇｌｃ’−５−Ｈ）１４．０４［１Ｈ，ｄｄ、
Ｊ＝９．０，７．８Ｈ７，ＧＩＣ−２−Ｈ）　　三４．
２４（１）ｔ、ｄｄ、Ｊ＝１２．０，５．０）１ｚ、Ｇ
ｌｃ−６−）１ａ）　　　’第　　　２　　　表 第　　　３　　　表 □ １３．７９（ＩＨ，ｄｄｄ、Ｊ＝９．０，５．０，２．
０Ｈｚ、Ｇｌｃ−５−旧　。

’　　　　３．８２（１Ｍ、ｄｄｄ、Ｊ＝９．０，３．
０．３．Ｏ，Ｇｌｃ−５−旧　：□　　　３．９３（Ｉ
Ｈ，（ｌｊｄ、　Ｊ＝９．０．４．８．２．０．Ｇｉｃ
’“−５−Ｈ）　　：４．０３（ＩＨ，ｄｄ、Ｊ＝８．
０．７．８ｔ−１２，ＧＩＣ’−１−旧：　　　４．０
６（ＩＨ，ｄｄ、　Ｊ・９．０．８．０１−１２．　Ｇ
ｌｃ−４−Ｈ）　　　　□！ 、　　　４．０６（ＩＩ−１，ｄｄ、Ｊ二９．０，８．
０ｌｌｚ、Ｇｌｃ”−２−Ｈ）　　　１′１４．１３（
ＩＨ，ｄｄ、Ｊ＝８．０，７．８Ｈｚ、Ｇｌｃ−２−Ｈ
）　　　　□ｉ　　　　ｎ、１５（ｎ＋、ｄｄ、Ｊ・９
．０，８．０Ｈｚ、Ｇｌｃ’−３−Ｈ）　　　　′□電 （４，ｔｙ（ｔｏ、ｄｄ、Ｊ＝ｃ＋。０，８．０ｔ（ｚ
、Ｇｌｃ”−３−１−１）　　　’：　　　４．２３（
１ｈ、ｄｄ、Ｊ＝１２．０，４．５Ｈ２，ＧＩＣ−６−
Ｈａ）　　１□　　　６゜２７（ＩＨ，ｄ、Ｊ＝８．０
Ｈｚ、Ｇｌｃ”−１−Ｈ）　　　　　　：第　　　４　
　　表 ｌ４’　　　　　　　　７１．２　１ 、　　　５′ｌ　　　　７８．４　７５°６　□１５Ｎ
　　　　６２．９　６５．６　１第　　　５　　　表 １　　２１　２８．３　２６．８　２Ｂ、９　２０．８
　１：　　　５１　５．１＋、５　５５．６　　：）５
．７　５５．６１ｌ 第　　　６　　　表 ’　　　　５　ｊ　　　　　　　　７９．６　’！グル
コース５’：　　　６２，９　　　６５．６　　　６２
．９’。

’、ｃｏｏ’　　　　　　　　　　　１１６８、　Ｌ３ □　ＣＨ，’　　　　　　　４２．８ ［発明の効果］ 本発明の生産方法により、既知の化合物０Ａ−４および
ＧＡ−６、ならびに新規化合物ＧＡ〜５か、植物変換の
方法により生産できる。

ＧＡ−４＃よびＧＡ−５は、ショ糖の３００倍の甘味を
有し、ロー力ロ１ノーの甘味剤として、食品や医薬品の
甘味物質として好適である。　ＧＡ−６は、その化学構
造からみて、生理活性を有すると予想されるので、医薬
またはその中間体として有用であると期待される。

【図面の簡単な説明】

図面は、本発明の実施例における、毛状根培養　　。 物から）容剤抽出により生産物をとり出す操作法６示し
た系統図である。 特許出願人　　　　　古　谷　　　力 代理人　　弁理士　　須　賀　総　大 特許庁長官　　植　松　　敏　　殿 １、事件の表示 平成２年特許願第３３６６５３号 ２、発明必名称 グリチルレチン酸誘導体、薬用人参を用いたその生産方
法および甘味剤 ３、補正をする者 事件との関係　　特許出願人 住　所　　東京都練馬区南大泉４−２０−３３氏名　重
合　力 ４、代理人〒ｉｏ４ 住　所　　東京都中央区築地二丁目１５番１４号明細書
の発明の詳細な説明の欄 −ｔ 頁−行　　　　誤　　　　　正 ３−１１　　　　Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ　ｒｈｉ
ｚｏｇｅｎｅｓＡｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ　ｒｈｉｚ
ｏｇｅｎｅｓ７−２０／８−１　　　メタノール液　　
メタノール抽出液８−６　　　　　メタノール液　　メ
タノール１０−１　　　　　１　Ｈ１１−１ ３Ｃ１３Ｃ １４−２−００Ｃ−ＣＨ２−００Ｃ−ＣＨコ１６−４　
　　　　　Ｇｌｃ’−１−ＨＧｌｃ’−２−Ｈ６４，０
６４，０７ １０と１１の間　　脱落　　４．２７（ＩＨ，ｄｄ、Ｊ
＝１２．０゜４．８Ｈ，Ｇｌｃ”−６−Ｈａ）

Claims (3)

【特許請求の範囲】
1. （１）薬用人参の毛状根を、１８β−グリチルレチン酸
   を加えた培地中で培養し、収穫物から、一般式 ▲数式、化学式、表等があります▼ で示される化合物ＧＡ−４〜ＧＡ−６を溶媒抽出により
   取得することからなる、グリチルレチン酸誘導体の生産
   方法。
2. （２）前記の一般式において、ＧＡ−５であられされる
   グリチルレチン酸誘導体。
3. （３）請求項２のグリチルレチン誘導体を有効成分とす
   る甘味剤。