JPH04211369A - 好塩性アルカリアミラーゼおよびその製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、新規な好塩性アルカリ
アミラーゼおよびその製造方法に関するものである。詳
しく述べると、ナトロノコッカス（Ｎａｔｒｏｎｏｃｏ
ｃｃｕｓ）　属に属するアミラーゼ生産菌を培養し、該
培養物より作用至適ｐＨがアルカリ側にある好塩性アミ
ラーゼを分離、採取する方法に関するものである。

【０００２】

【従来の技術および発明が解決すべき課題】従来、中性
または酸性に作用最適ｐＨを有するアミラーゼ産生微生
物には、様々なものが知られている。またアルカリ側に
最適ｐＨを有するアルカリアミラーゼを生産する微生物
については、バチルス属（例えば特公昭４８−４５３３
号公報、特公昭５０−５２７２号公報参照）、シュード
モナス属（例えば特公昭５０−５２７４号公報参照）な
どが報告されている。また食塩の存在しないときは活性
がほとんど発現しないが、食塩が数％以上存在する場合
には活性を発現する、いわゆる好塩性アミラーゼを生産
する微生物についてもミクロコッカス属（例えば特公昭
５０−５２７３号公報参照）やアシネトバクター属（例
えば特開昭５４−４９３９１号公報参照）などが報告さ
れている。しかしながら、好塩性でかつ至適ｐＨがアル
カリ側に存在するアミラーゼを生産する微生物について
は現在のところ報告は全く無かった。

【０００３】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、微生物に
よる好塩性アミラーゼの製造方法について鋭意努力した
結果、本発明者らが今回土壌より分離した新菌種ナトロ
ノコッカス属を培養することにより好塩性アルカリアミ
ラーゼが菌体外に著量生産されることを見いだした。そ
して、この酵素は従来の一般アミラーゼとは性格を異と
しており、作用至適ｐＨがアルカリ側にあること、また
水にて透析する時は速やかに失活し、塩化ナトリウム、
酢酸ナトリウムまたは塩化カリウムなどの塩濃度が１モ
ル以上の時に著しい活性を発現することなどの特徴を有
しており、従来のアミラーゼとは異なる新しい酵素であ
ることの知見を得、この知見において本発明を完成した
。本発明の好塩性アルカリアミラーゼ（以下、アミラー
ゼＡと称する）は、つぎの理化学的性質を有している。

【０００４】１）作用および基質特異性アミラーゼＡは
１モル以上の塩化ナトリウム、酢酸ナトリウム、塩化カ
リウムの存在下で著しい酵素活性を示し、塩非存在下で
は活性を発現しない、好塩性の著しい酵素であることを
特徴とし、デンプン、アミロース、アミロペクチン、デ
キストリンまたはその部分分解物に特異的に作用し、マ
ルトトリオースを主成分とする糖分解物を生成する。

【０００５】 ２）作用ｐＨおよび最適ｐＨ範囲（図１参照）作用ｐＨ
はｐＨ５〜１２にあり、最適作用ｐＨは８〜１０にある
。

【０００６】３）安定ｐＨ範囲（図１参照）２．５モル
の塩化ナトリウムを含む含む２０ｍＭ緩衝液下、４℃、
２０時間放置においてｐＨ６〜１２の範囲で失活が認め
られない。

【０００７】４）力価の測定法 基質として２．５モルの塩化ナトリウムを含む７５ｍＭ
のトリス緩衝液（ｐＨ９．０）に溶解させた１．５％の
可溶性デンプン溶液２００μｌに本酵素を含む試料１０
０μｌを加え５０℃で１５分間反応させ、生成した還元
糖を３，５−ジニトロサリチル酸試薬法により定量し、
１分間に１μｍｏｌ　のグルコースに相当する還元力を
生成する酵素量を１単位（１Ｕ）とする。

【０００８】 ５）作用温度および最適作用温度範囲（図２参照）ｐＨ
９において約８０℃まで作用し、最適作用温度は５５〜
６５℃にある。 ６）熱安定性（図２参照） ２．５モルの塩化ナトリウムを含む５０ｍＭトリス緩衝
液（ｐＨ９．０）中、各温度下２０分間加熱後、活性測
定を行ない、５５℃の加熱までは失活が認められない。

【０００９】７）阻害、活性化 アミラーゼＡはＨｇ＋　、Ｎｉ２＋により強い阻害を受
ける。アミラーゼＡはＣａ２＋により活性化されない。

【００１０】８）精製方法および分子量アミラーゼＡの
精製方法の１例は、液体培養物の遠心上清液にその２．
５〜３倍量の冷却飽和硫酸アンモニウム溶液を加え、沈
澱したタンパク質を２．５モルの塩化ナトリウムを含む
２０ｍＭトリス緩衝液（ｐＨ８．０）に溶解し、セファ
クリル（商標）Ｓ−２００カラムによるゲル濾過、さら
にシンクロパック（商標）ＧＰＣ１００カラムによる高
速液体クロマトグラフにより行うことができる。かくし
て得られた精製酵素の分子量はＳＤＳ−アクリルアミド
ゲル電気泳動法より算出して、７０，０００〜８０，０
００であった。

【００１１】また、本発明は、ナトロノコッカス　（Ｎ
ａｔｒｏｎｏｃｏｃｃｕｓ）属に属するアミラーゼ生産
菌を５重量％以上の食塩を含有するアルカリ性培地で培
養し、該培養物より好塩性アルカリアミラーゼを分離、
回収することを特徴とする好塩性アルカリアミラーゼの
製造方法である。

【００１２】本発明は、ナトロノコッカス（Ｎａｔｒｏ
ｎｏｃｏｃｃｕｓ）　属に属するアミラーゼ生産菌を培
養し、その培養物より好塩性アルカリアミラーゼを分離
、採取することを特徴とするものある。

【００１３】以下、本発明について詳細に説明する。

【００１４】まず、本発明において用いる微生物はナト
ロノコッカス属に属するアミラーゼ生産菌であり、この
微生物の具体例としては、本発明者らがケニヤ、マガデ
ィ（Ｍａｇａｄｉ）湖畔の土壌より分離し、同定したナ
トロノコッカス属Ａｈ−３６菌およびＡｈ−４７１菌が
挙げられる。本菌は食塩を含む細菌増殖培地中で生育す
るが、特に表１に示す組成の培地において良好に生育し
、かつ、本発明の好塩性アルカリアミラーゼを効率よく
生産するナトロノコッカス属に属する微生物である。

【００１５】

【表１】

【００１６】以下に本発明の実施例において使用した前
記菌株の菌学的性質を示す。なお、以下記載の菌学的試
験は、バージイズ・マニュアル・オブ・ディターミネイ
ティブ・バクテリオロジー（　Ｂｅｒｇｅｙ´ｓ　Ｍａ
ｎｕａｌ　ｏｆ　Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｖｅ　Ｂａｃ
ｔｒｅｒｉｏｌｏｇｙ）第８版（１９７４　年）、駒形
　　和男編著「微生物の化学分類実験法」（１９８２年
）およびジャーナル・オブ・ジェネティク・マイクロバ
イオロジー、１２３巻、７５ページに記載されているロ
ス（Ｒｏｓｓ）らの方法（Ｒｏｓｓ　ｅｔ　　ａｌ．，
　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｇｅｎｅｔｉｃ　Ｍｉｃｒｏ
ｂｉｏｌｏｇｙ，　１２３，　ｐ７５（１９８１　年）
に記載の方法に基づいて行なったものであり、特に記載
しない限り、すべて炭酸ナトリウム１．５％を添加して
ｐＨを約９．５に調製した１５重量％の塩化ナトリウム
を含む培地を使用した。

【００１７】Ａｈ−３６菌株 （１）形態 ａ）細胞の形と大きさ　　　　球菌（径１〜２μｍ）で
不規則状に群を成す。 ｂ）運動性　　　　　　　　　　　　　　無しｃ）胞子
　　　　　　　　　　　　　　　　無し（２）培地にお
ける生育状態 ａ）肉汁寒天平板培地　　　　集落の形状は円形、集落
の表面は円状に隆起。色調は赤味をおびた桃色。 ｂ）肉汁液体培地　　　　　　　　菌の生育に伴い赤味
を帯びる。粘ちょう性は無い。 ｃ）肉汁ゼラチン培地　　　　ゼラチンを液化しない。 （３）生理学的性質 ａ）硝酸塩の還元　　　　　　　　陽性ｂ）インドール
の産出　　　　陽性 ｃ）色素の産出　　　　　　　　　　陽性ｄ）デンプン
の加水分解　　陽性 ｅ）無機窒素の利用　　　　　　陰性 ｆ）オキシダーゼ　　　　　　　　陽性ｇ）カタラーゼ
　　　　　　　　　　陽性ｈ）酸素に対する態度　　　
　好気性 ｉ）クエン酸の利用　　　　　　陰性 ｊ）耐塩性　　　　　　　　　　　　　　８重量％以上
の食塩存在下においてよく生育し、特に１５〜２０重量
％において良好に生育し、また飽和食塩下においても生
育する。 ｋ）生育範囲　　　　　　　　　　　　ｐＨ８〜１０；
最適ｐＨ９〜９．５ 温度２０〜５０℃；最適温度３５〜４５℃ｌ）炭素源の
利用　　　　　　　　グルコース、マルトース、シュウ
クロース、ラクトース、フラクトース、デンプンを利用
、ガスの生成なし。 ｍ）核酸（ＤＮＡ）　塩基配列　　ＤＮＡ　のＧＣ含有
量（ｍｏｌ％）は６３．５％ ｎ）細胞膜脂質　　　　　　　　　　グリセリルジエー
テル骨格Ｃ２０，Ｃ２０ジエーテルコア脂質 ｏ）坑生物質感受性試験 アニソマイシン、バシトラシン、エリスロマイシン、リ
ファンピシン、テトラサイクリンに感受性あり。アンピ
シリン、クロラムフェニコール、ポリミキシンＢ、スト
レプトマイシンに感受性なし。

【００１８】Ａｈ−４７１菌株 （１）形態 ａ）細胞の形と大きさ　　　　球菌（径３〜６μｍ）で
不規則状に群を成す。 ｂ）運動性　　　　　　　　　　　　　　無しｃ）胞子
　　　　　　　　　　　　　　　　無し（２）培地にお
ける生育状態 ａ）肉汁寒天平板培地　　　　集落の形状は円形、集落
の表面は円状に隆起。 色調桃色。 ｂ）肉汁液体培地　　　　　　　　菌の生育に伴い赤味
を帯びる。粘ちょう性は無い。 ｃ）肉汁ゼラチン培地　　　　ゼラチンを液化しない。 （３）生理学的性質 ａ）硝酸塩の還元　　　　　　　　陽性ｂ）インドール
の産出　　　　陽性 ｃ）色素の産出　　　　　　　　　　陽性ｄ）デンプン
の加水分解　　陽性 ｅ）無機窒素の利用　　　　　　陰性 ｆ）オキシダーゼ　　　　　　　　陽性ｇ）カタラーゼ
　　　　　　　　　　陽性ｈ）酸素に対する態度　　　
　好気性 ｉ）クエン酸の利用　　　　　　陰性 ｊ）耐塩性　　　　　　　　　　　　　　５重量％以上
の食塩存在下においてよく生育し、特に１０〜１５重量
％において良好に生育し、また飽和食塩下においても生
育する。 ｋ）生育範囲　　　　　　　　　　　　ｐＨ７．５〜１
１；最適ｐＨ９〜９．５ 温度２０〜５０℃；最適温度３５〜４５℃ｌ）炭素源の
利用　　　　　　　　グルコース、マルトース、シュウ
クロース、ラクトース、フラクトース、デンプンを利用
、ガスの生成なし。 ｍ）核酸（ＤＮＡ）　塩基配列　　ＤＮＡ　のＧＣ含有
量（ｍｏｌ％）は６３．９％ ｎ）細胞膜脂質　　　　　　　　　　グリセリルジエー
テル骨格Ｃ２０，Ｃ２０ジエーテルコア脂質 ｏ）坑生物質感受性試験 アニソマイシン、エリスロマイシン、リファンピシン、
テトラサイクリンに感受性あり。 アンピシリン、バシトラシン、クロラムフェニコール、
ポリミキシンＢ、ストレプトマイシンに感受性なし。

【００１９】以上の菌学的性質を基に、前記文献中に本
菌株を検索したところ、生育に際して高濃度の塩化ナト
リウムを必要とする球菌として、高度好塩性細菌である
ハロコッカス属に属する微生物が挙げられるが、本菌株
は上記に示した種々の特徴的な性質、特に生育ｐＨがア
ルカリ側に存在する点でハロコッカス属と異なっている
。

【００２０】近年、チンダル（Ｔｉｎｄａｌｌ）　らは
高度高塩性でしかもアルカリ側のｐＨで生育する細菌群
について検討を行い、検討の結果、高度高塩性でしかも
アルカリ側のｐＨで生育する球菌群を明らかにハロコッ
カス属と異なる細菌群として、これらの菌を新たにナト
ロノコッカス属と命名している［システマティック・ア
プライド・マイクロバイオロジー（Ｔｉｎｄａｌｌ　ｅ
ｔ　ａｌ．，　Ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ　Ａｐｐｌｉｅｄ
　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ）第　５巻第４１頁（１９
８４　年）参照］。 本菌株は好塩性好アルカリ性細菌であることからチンダ
ルらが命名したナトロノコッカス属に属する微生物と同
定されるが、デンプンの加水分解能力を有する点、細胞
膜脂質の構成がＣ２０、Ｃ２０コアジエーテル脂質であ
る点などから判断して明らかに公知の菌種と区別される
ため、これを新菌種として設定することが妥当であると
の結論に達し、本菌株をナトロノコッカス・エスピー・
Ａｈ−３６（Ｎａｔｒｏｎｏｃｏｃｃｕｓ　　ｓｐ．　
Ａｈ−３６）（以下Ａｈ−３６株という）およびナトロ
ノコッカス・エスピー・Ａｈ−４７１（Ｎａｔｒｏｎｏ
ｃｏｃｃｕｓ　　ｓｐ．　Ａｈ−４７１）　（以下Ａｈ
−４７１株という）と命名した。Ａｈ−３６株およびＡ
ｈ−４７１株は平成元年９月２５日付にて工業技術院微
生物工業技術研究所に寄託され、その受託番号はそれぞ
れ微工研菌寄第１１０２４号および微工研菌寄第１１０
２５号である。

【００２１】なお本発明においては、上記菌体あるいは
その変種、変異種に限ることなく、ナトロノコッカス属
に属し、当該好塩性アルカリアミラーゼを生産する能力
を有する菌であれば全てに有効に使用することが可能で
ある。

【００２２】次に本発明による酵素生産について述べる
。酵素生産のための上記微生物の培養は固体または液体
培地のいずれでもよい。炭素源としてはデンプン、アミ
ロペクチン、デキストラン、デキストリン、グルコース
などの糖質原料を、窒素源としては酵母エキス、カサミ
ノ酸、ペプトンなどの有機物を利用することが望ましい
。その他、カリウム塩、マグネシウム塩、鉄塩、カルシ
ウム塩などの無機塩類を添加するとよい。そして、本菌
株の生育および目的物のアミラーゼの生産のためには上
記の栄養源を含む培地に１０％以上の塩化ナトリウムを
加え、さらに炭酸ナトリウム、炭酸水素ナトリウムなど
の炭酸塩を添加してｐＨを９〜１０にする事が必要であ
り、特に塩化ナトリウムを１０〜２０％加えることが望
ましい。

【００２３】培養は好気的条件下で行なわれ、培養に適
当な温度は３５〜４５℃であるが、多くの場合３７℃付
近で培養する。本発明のアミラーゼは菌体外に分泌され
る。

【００２４】上記培養液から本発明酵素を採取、精製す
るには既知の精製法が単独もしくは併用して用いられる
。例えば、培養終了後、培養液を濾過または遠心分離に
かけて菌体を除去した後、硫安塩析法、溶剤沈澱法、透
析法など公知の方法を適宜組み合わせて適用する。さら
にゲル濾過法を用いたカラムクロマトグラフィー、ハイ
ドロキシアパタイトクロマトグラフィー、イオン交換樹
脂を用いたカラムクロマトグラフィーなどを適宜組み合
わせて行なうことができる。

【００２５】本発明により得られる好塩性アルカリアミ
ラーゼ（以下アミラーゼＡと称する）の性質については
、前記のとおりである。

【００２６】本発明方法の具体例である好塩性アルカリ
アミラーゼＡは、作用至適ｐＨがアルカリ側にあり、か
つ高濃度の塩濃度下において活性を発現する特徴以外に
、デンプン、アミロース、アミロペクチン、デキストリ
ンまたはその分解物に作用してマルトトリオースを主成
分とする糖分解物を生成する特徴を有していた。

【００２７】例えば、その１例を示すに、２．５％の可
溶性デンプン、２．５Ｍの塩化ナトリウムを含む５０ｍ
Ｍのトリス緩衝液（ｐＨ９．０）１０ｍｌに精製アミラ
ーゼＡ２単位を加え、６０℃で５時間酵素反応を行ない
、この反応液を１００℃、１０分間保ち、酵素を失活さ
せ、イオン交換樹脂を用いて脱塩の後、ペーパークロマ
トグラフィー（展開溶媒：ｎ−ブタノール／ピリジン／
水＝６：４：３（ｖ／ｖ））および高速液体クロマトグ
ラフィー（カラム：シンパック　　ＣＬＣ　　ＮＨ２、
溶出液アセトニトリル／水＝６５：３５、検出示差屈折
計）を用いて分析した。その結果、図３に示すようにマ
ルトトリオースを主成分とする糖分解物を得た。デンプ
ン分解物を液体クロマトグラフィー法によって確認した
ところ、マルトトリオースの含量は約７０％であった。

【００２８】従来デンプン型基質をマルトトリオースに
加水分解する酵素としては、ストレプトマイセス　　グ
リシウス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　　ｇｒｉｓｅｕ
ｓ）Ｎ−Ａ４６８株が生産するアミラーゼ（特公昭５７
−６９１５公報）、バチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）ＹＴ
−１００４株が生産するアミラーゼ（特公昭６０−１５
３１５号公報）、バチルスＫＰ１０７１株が生産するア
ミラーゼ（特公平１−１６１５７号公報）が知られてい
る。しかしながら、本酵素Ａは報告されている既知の酵
素のいずれとも種々の点において明らかに性質を異にし
ている。例えば、本酵素Ａはアルカリ性側で安定であり
、作用ｐＨ範囲もｐＨ５〜１２、至適作用ｐＨが８〜１
０とアルカリ側にある点で他の酵素と大きく異なってい
る。また本酵素Ａは好塩性アミラーゼである点でも他の
酵素と全く性質を異にしている。即ち、本酵素Ａは水に
て透析する時は速やかに失活し、塩化ナトリウム、酢酸
ナトリウムまたは塩化カリウムなど塩の濃度が１モル以
上の時に著しい活性を発現する。

【００２９】一方、好塩性アミラーゼとしては例えば特
公報昭５０−５２７３号公報（好塩性αアミラーゼの製
造方法）、特公昭５４−４９３９１号公報（好塩性α−
アミラーゼ１および／または２の製造法）などに報告例
はあるが、マルトトリオースを特異的に生成するアミラ
ーゼは従来知られていない。

【００３０】またアルカリアミラーゼとしては例えば特
公昭５０−５２７２号公報（アミラーゼの製造法）、特
公昭５０−５２７４号公報（微生物によるアルカリアミ
ラーゼ製造法）などに報告例はあるが、高濃度の食塩中
において活性発現されない。

【００３１】この様に本発明の好塩性アルカリアミラー
ゼはその諸性質から判断して、従来にはない新しいアミ
ラーゼであることが判明した。

【００３２】本発明の具体例である、ナトロノコッカス
属に属する細菌Ａｈ−３６菌およびＡｈ−４７１菌を用
いることにより新規の好塩性アルカリアミラーゼが得ら
れ、この酵素を用いることにより各種デンプン系基質か
ら効果的に、マルトトリオースが製造しうる。マルトト
リオースは低甘味食品成分、食品改質剤、低う蝕性食品
基材、輸液成分、静脈栄養補給製粉など各方面での利用
があり、本酵素の有効利用が望まれている有用なオリゴ
糖である。

【００３３】

【実施例】以下、本発明を実施例を示しながらさらに詳
細にかつ具体的に説明するが、本発明はこれらの例に限
定されるものではない。

【００３４】実施例１ 可溶性デンプン１％、カサミノ酸０．７５％、酵母エキ
ス１％、塩化カリウム０．２％、硫酸マグネシウム０．
２％、硫酸第１鉄０．００５％および炭酸ナトリウム１
．５％を含むｐＨ９．５の培地に別滅菌した塩化ナトリ
ウム溶液を最終濃度０〜２５％（ｗ／ｖ）になるように
無菌的に添加した。上記培地５０ｍｌを予め殺菌してお
いた３００ｍｌ容エルレンマイヤ‐フラスコにいれ、ナ
トロノコッカス属Ａｈ−３６菌株（微工研菌寄第１１０
２４号）あるいはＡｈ−４７１菌株（微工研菌寄第１１
０２５号）の前培養液２．５ｍｌを接種し、３７℃で４
日間回転振とう培養した。培養後、培養液を遠心分離し
て除菌し、上清を回収してこれを粗酵素液としてアミラ
ーゼの活性を測定した。その結果を表２に示す。

【００３５】

【表２】

【００３６】実施例２ 馬鈴薯デンプン１％、カサミノ酸０．７５％、酵母エキ
ス１％、塩化カリウム０．２％、硫酸マグネシウム０．
２％、硫酸第１鉄０．００５％、炭酸ナトリウム１．５
％および塩化ナトリウム１５％を含む培地４リットルに
アミラーゼＡ生産菌（微工研菌寄第１１０２４号）を接
種し、３７℃で好気的に７２時間培養後、培養液を遠心
分離し菌体を除去し、得られた上澄み約４リットルに冷
飽和硫安溶液（ｐＨ８）約１２リットルを加えてタンパ
ク質を沈澱させた。得られた沈澱物を２．５Ｍの塩化ナ
トリウムを含む２０ｍＭトリス緩衝液（ｐＨ８）に溶か
し、上記緩衝液中で４℃下２４時間にわたり透析し粗酵
素液約３５０ｍｌを得た。得られた酵素量は１８００単
位であった（回収率７０％）。粗酵素液はポリエチレン
グリコール６０００で濃縮後、セファクリルＳ−２００
カラム（２．６×８３ｃｍ）を用いてゲル濾過を行い、
得られた活性区分をシンクロパックＧＰＣ１００（７．
８×３００ｍｍ）を用いて高速液体クロマトグラフを行
い、活性区分を分取することにより、電気泳動的に単一
なバンドを示す精製標品１３６単位（粗酵素液からの収
量約８％）を得た。

【００３７】

【発明の効果】以上述べたように、本発明によれば、ナ
トロノコッカス・エスピーＡｈ−３６株、ナトロノコッ
カス・エスピーＡｈ−４７１株等のナトロノコッカス属
に属するアミラーゼ生産菌から新規な好塩性アルカリア
ミラーゼが得られる。この酵素は、各種デンプン系基質
から効果的に、マルトトリオースを製造し得る。このマ
ルトトリオースは、低甘味食品成分、食品改質剤、低う
蝕性食品基材、輸液成分、静脈栄養補給成分等として有
用である。

【図面の簡単な説明】

図１は本酵素アミラーゼＡの最適作用ｐＨおよび安定ｐ
Ｈを示すグラフであり、図２は本酵素の作用適温および
熱安定性を示すグラフであり、また図３は本酵素をデン
プンに作用させた場合の糖分解物を示すペーパークロマ
トグラフィーおよび液体クロマトグラフィーである。

Claims (4)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】　　以下の理化学的性質を有する好塩性ア
   ルカリアミラーゼ。 １）作用および基質特異性 １モル以上の塩化ナトリウム、酢酸ナトリウムまたは塩
   化カリウムの存在下で著しい酵素活性を示し、塩非存在
   下では活性を発現しない好塩性の著しい酵素であること
   を特徴とし、デンプン、アミロース、アミロペクチン、
   デキストリンまたはその部分分解物に特異的に作用し、
   マルトトリオースを主成分とする糖分解物を生成する。 ２）作用ｐＨおよび最適ｐＨ範囲 作用ｐＨはｐＨ５〜１２にあり、最適作用ｐＨは８〜１
   ０にある。 ３）安定ｐＨ範囲 ２．５モルの塩化ナトリウムを含む２０ｍＭ緩衝液下、
   ４℃、２０時間放置において、ｐＨ６〜１２の範囲で失
   活が認められない。 ４）作用温度および最適作用温度範囲 ｐＨ９において約８０℃まで作用し、最適作用温度は５
   ５〜６５℃にある。 ５）熱安定性 ２．５モルの塩化ナトリウムを含む５０ｍＭトリス緩衝
   液（ｐＨ９．０）中、各温度下２０分間加熱後、活性測
   定を行ない、６０℃の加熱まではほとんど失活が認めら
   れない。 ６）阻害、活性化 Ｈｇ＋　、Ｎｉ２＋により強い阻害を受け、Ｃａ２＋に
   より活性化されない。 ７）分子量 飽和硫酸アンモニウム溶液を加えて沈澱したタンパク質
   を２．５モルの塩化ナトリウム含有２０ｍＭトリス緩衝
   液に溶解し、ゲル透過し、さらに高速液体クロマトグラ
   フにより精製したものの分子量がＳＤＳ−アクリルアミ
   ドゲル電気泳動法により算出して７０，０００〜８０，
   ０００である。
2. 【請求項２】　　ナトロノコッカス（Ｎａｔｒｏｎｏｃ
   ｏｃｃｕｓ）　属に属するアミラーゼ生産菌を５重量％
   以上の食塩を含有するアルカリ性培地で培養し、該培養
   物より好塩性アルカリアミラーゼを分離、回収すること
   を特徴とする好塩性アルカリアミラーゼの製造方法。
3. 【請求項３】　　好塩性アルカリアミラーゼ生産菌がナ
   トロノコッカス・エスピー・Ａｈ−３６（Ｎａｔｒｏｎ
   ｏｃｏｃｃｕｓ　　　ｓｐ．Ａｈ−３６）　株である請
   求項２に記載の好塩性アルカリアミラーゼの製造方法。
4. 【請求項４】　　好塩性アルカリアミラーゼ生産菌がナ
   トロノコッカス・エスピー・Ａｈ−４７１（Ｎａｔｒｏ
   ｎｏｃｏｃｃｕｓ　　ｓｐ．　Ａｈ−４７１）　株であ
   る請求項２に記載の好塩性アルカリアミラーゼの製造方
   法。