JPH04217700A - Ｃｍ−キチン誘導体およびその用途 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓ
ｐ　のトリペプチドを必須単位として有するＣＭ−キチ
ン誘導体およびその塩、並びにそれを有効成分とする動
物細胞の接着阻害剤及び血小板の凝集・粘着抑制剤に関
するものである。

【０００２】

【従来の技術】フィブロネクチンは細胞−細胞外基質の
接着に関与するタンパク質であり、血小板凝集やガン転
移にも関与していると考えられている。これらの相互作
用は一連の細胞表面のレセプターにより仲介され、フィ
ブロネクチンは分子量約２５万の巨大分子であるにもか
かわらず、これらのレセプターがそのＡｒｇ−Ｇｌｙ−
Ａｓｐ　配列を特異的に認識することが明らかにされ、
レセプターとの相互作用に重要なものであることが報告
されている（ネイチャー（Ｎａｔｕｒｅ）　、第３０９
巻、３０頁、１９８４年）。以来、Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａ
ｓｐ　配列を有するオリゴあるいはポリペプチドを用い
る研究が進められている。

【０００３】例えば、Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ　配列を
有する種々の鎖状および環状のオリゴペプチドを用いて
血小板凝集を阻害する方法（高分子学会予稿集（Ｐｏｌ
ｙｍｅｒ　Ｐｒｅｐｒｉｎｔｓ，　Ｊａｐａｎ）、第３
８巻、３１４９頁、１９８９年、特開平２−１７４７９
７号）、　Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ配列を有するペプチ
ドを細胞移動抑制剤として用いる方法　（特開平２−４
７１６号）　、Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ　を固定化した
ＰＭＭＡ膜を細胞接着膜として用いる方法（高分子学会
予稿集（Ｐｏｌｙｍｅｒ　Ｐｒｅｐｒｉｎｔｓ，Ｊａｐ
ａｎ）、第３７巻、７０５頁、１９８８年）　が報告さ
れている。さらに、ポリマーにＡｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ
　を必須構成単位とするペプチドを共有結合させ動物細
胞培養基体、生体複合人工臓器用基体として用いる方法
（特開平１−３０９６８２号、特開平１−３０５９６０
号）、Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ　配列を有する
ポリペプチドを体外血液用血小板保護剤として用いる方
法が開示されている（特開昭６４−６２１７号）。また
、Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ　配列を有するオリゴペプチ
ドあるいはその繰り返し構造を有するポリペプチドを用
いて、ガン転移を抑制する方法が知られている（（Ｉｎ
ｔ．　Ｊ．　Ｂｉｏｌ．　Ｍａｃｒｏｍｏｌ．）　、第
１１巻、２３頁、１９８９年、同誌、第１１巻、２２６
頁、１９８９年、（Ｊｐｎ．　Ｊ．　ＣａｎｃｅｒＲｅ
ｓ．）第６０巻、７２２頁、１９８９年）。

【０００４】キチンはＮ−アセチル−Ｄ−グルコサミン
がβ−（１→４）結合した多糖で、甲穀類や昆虫類の外
骨格の主成分である。下等動物や無脊椎動物に広く分布
して生体の支持や防護の役割をになっており、植物界の
セルロースに相当する。キチンは最後のバイオマスとも
呼ばれ近年その誘導体の研究が盛んに行なわれ、特に溶
媒に可溶なキチン誘導体に関する研究が多く報告されて
いる。Ｃ−６位の水酸基にカルボキシルメチル基が結合
したＣＭ−キチンは水溶性であり、各種キチン誘導体の
出発物質としても重要な化合物である。キチンおよびそ
の誘導体については、キチン・キトサン研究会編“キチ
ン・キトサンの応用”（技報堂）、キチン・キトサン研
究会編“最後のバイオマス　　キチン・キトサン”（技
報堂）に詳しく記載されている。

【０００５】ＣＭ−キチンはカルボキシル化の際に脱ア
セチル化が起こるため、カルボキシル基に加えてアミノ
基も存在している。ＣＭ−キチンのアミノ基は容易に二
塩基酸およびその誘導体好ましくは多塩基酸無水物によ
ってカルボキシル化することが出来る。また、ＣＭ−キ
チンのＮ，Ｏ−硫酸化も容易に行なうことが出来る。し
かし、ＣＭ−キチンの誘導体としてＡｒｇ−Ｇｌｙ−Ａ
ｓｐ　を必須単位とするオリゴペプチドあるいはその繰
り返し構造を有するポリペプチドを導入した化合物は知
られておらず、導入した場合にはレセプターとの結合能
の増強および血液中での安定化が期待できる。

【０００６】

【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、新規
なＣＭ−キチン誘導体およびそれを有効成分とする動物
細胞の接着阻害剤並びに血小板凝集・粘着抑制剤を提供
することである。

【０００７】

【課題を解決するための手段】本発明は、ＣＭ−キチン
の側鎖にアミド結合、エステル結合、エーテル結合、ウ
レタン結合のいずれかを介し、下記一般式［Ｉ］で表さ
れる接着性ペプチドを必須単位として有するキチン誘導
体およびその塩を提供するものである。 一般式〔Ｉ〕 −〔Ｒ１〕−〔ＣＯ〕−（〔Ｘ〕−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａ
ｓｐ−〔Ｙ〕）ｎ−〔Ｚ〕−〔Ｒ２〕− 〔　　〕は存在するかあるいは存在しなくともよく、存
在する場合はＸ，　ＹはＳｅｒ，Ｇｌｙ，Ｖａｌ，Ａｓ
ｎ，Ｐｒｏ　から選択されるアミノ酸残基又はペプチド
残基を示し、Ｚは−Ｏ−または−ＮＨ−を示す。Ｒ１　
、Ｒ２　のいずれか一方は、水素又は炭素数が１−９の
直鎖または分岐のアルキル基、または炭素数が６−９の
アリール基であり、置換基を有していてもよい。他方は
、水素又は炭素数が１−９の直鎖または分岐のアルキレ
ン基、または炭素数が６−９のアリーレン基であり、置
換基を有していてもよい。ｎは１−５の整数を示す。

【０００８】Ｒ１　及びＲ２　の置換基としては、カル
ボニル基、カルボキシル基、アミノ基、ヒドロキシル基
、スルホ基、ハロゲン原子、アリール基、ニトロ基、シ
アノ基、不飽和基の２重結合、３重結合等があげられ、
同一鎖に２つ以上有していてもよい。本発明はさらに上
記ＣＭ−キチン誘導体またはその塩を有効成分とする動
物細胞の接着阻害剤並びに血小板凝集・粘着抑制剤を提
供するものである。

【０００９】本発明は、硫酸化ＣＭ−キチン、カルボキ
シル化ＣＭ−キチンまたはＣＭ−キチンに、Ａｒｇ−Ｇ
ｌｙ−Ａｓｐ　を必須単位として有する接着性ペプチド
を共有結合してなるＣＭ−キチン誘導体である。ＣＭ−
キチン誘導体の分子量は好ましくは２０万以下、特に３
０００−１０万の範囲で、室温で水溶性であることが好
ましい。カルボキシル化剤として、無水コハク酸、無水
マレイン酸、無水フタル酸、無水イタコン酸、無水シト
ラコン酸、ピロメリット酸無水物、トリメリット酸無水
物、等が挙げられる。本発明に係わる接着性ペプチドに
用いられるアミノ酸はＬ体、Ｄ体どちらでもよいが、好
ましくはＬ体である。

【００１０】本発明のＣＭ−キチン誘導体の塩としては
、例えば、塩酸塩、硫酸塩、硝酸塩、リン酸塩、ホウ酸
塩等の無機酸との塩や、酢酸塩、トリフルオロ酢酸塩、
トリフルオロメタンスルホン酸塩、乳酸塩、酒石酸塩等
の有機酸との塩等が挙げられる。ペプチド合成法として
は特に限定されないが、液相法、固相法、および自動合
成装置による合成方法が挙げられる。これらの合成方法
の詳細については、生化学実験講座“タンパク質の化学
ＩＶ”ｐ２０７−４９５（日本生化学会編、東京化学同
人）、“続生化学実験講座タンパク質の化学（下）”（
日本生化学会編、東京化学同人）、泉屋ら編“ペプチド
合成の基礎と実験”（丸善）に記載されている。また、
市販されている合成ペプチドを利用することも可能であ
る。

【００１１】ＣＭ−キチンおよびカルボキシル化ＣＭ−
キチンと接着性ペプチドの結合には、臭化シアン、酸ア
ジド、水溶性カルボジイミド等を利用したアミド結合合
成方法が挙げられる。本発明のＣＭ−キチン誘導体は、
細胞接着性蛋白質のコア配列Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ　
を有し、該コア配列を介して細胞接着性蛋白質と同様の
機序で細胞に接着する。そのため、細胞接着性蛋白質の
アゴニストまたはアンタゴニストとして種々の生物活性
を示し、免疫調整作用、創傷治癒作用、毛細血管中で起
こる癌細胞による血小板凝集抑制作用、神経疾患治癒作
用などの広範な生物活性が認められている。

【００１２】従って、本発明のＣＭ−キチン誘導体は、
その少なくとも一種を、場合により慣用の担体または医
薬用助剤とともに、癌転移抑制剤、創傷治癒剤、免疫調
整剤、血小板凝集・粘着抑制剤として患者に投与するこ
とが可能である。特に、動物細胞接着阻害剤または血小
板凝集・粘着抑制剤としての使用が好ましい。その投与
量は、０．２μｇ／ｋｇ〜４００ｍｇ／ｋｇの範囲で、
症状、年齢、体重等に基づいて決定される。

【００１３】本発明のＣＭ−キチン誘導体は、ペプチド
系医薬に一般に使用されている投与方法、即ち非経口投
与方法、例えば静脈内投与、筋肉内投与、皮下投与等に
よって投与するのが好ましい。そのような注射用製剤を
製造する場合、本発明のキチン誘導体を例えば、後記実
施例で示すようにＰＢＳまたは生理食塩水に溶解して、
注射用製剤としてもよく、あるいは０．１Ｎ程度の酢酸
水等に溶解した後、凍結乾燥製剤としてもよい。この様
な製剤には、グリシンやアルブミン等の慣用の安定剤を
添加してもよい。さらに、本発明のキチン誘導体は、例
えばリポソーム中に包容したマイクロカプセル剤とすれ
ば、経口投与することも可能であり、座剤、舌下錠、点
鼻スプレー剤等の形にすれば、消化管以外の粘膜からも
吸収させることが可能である。

【００１４】

【実施例】以下実施例により本発明を更に説明するが本
発明はこれらに限定されるものではない。 製造例１　　接着性ペプチドの固相法による合成Ｍｅｒ
ｒｉｆｉｅｌｄ方式によるペプチド合成装置を用いて合
成を行なった。αアミノ基の保護にはＢｏｃ　基を用い
、樹脂から切出した後、分取用ＨＰＬＣ（高速液体クロ
マトグラフィー）で精製し、単一ピークを示す接着性合
成ペプチドを得た。 　　　　　　　　　　　　　　接着性合成ペプチド　　
　　　　　　名　　称　　　　　　　　構造式　　　　
　　　　　　　　略号　　　　配列番号　　　　収率　
　　　　　ペプチド−１　　Ｈ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓ
ｐ−ＯＨ　　　　　　ＲＧＤ　　　　　　　１　　　　
　　　　３７％　　　　　　ペプチド−２　　Ｈ−（Ａ
ｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ）２−ＯＨ　　（ＲＧＤ）２　　
　　　２　　　　　　　　２８％　　　　　　ペプチド
−３　　Ｈ−（Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ）３−ＯＨ　　
（ＲＧＤ）３　　　　　３　　　　　　　　１９％　　
　　　　ペプチド−４　　Ｈ−（Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓ
ｐ）５−ＯＨ　　（ＲＧＤ）５　　　　　４　　　　　
　　　１１％

【００１５】製造例２ ペプチド−５　Ｈ−（Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ
−Ｇｌｙ）−ＮＨ２（配列番号５）ペプチド−５を逐次
延長法により液相法で合成した。 （１）Ｂｏｃ　Ｓｅｒ（Ｂｚｌ）ＧｌｙＮＨ２　の合成
ＢｏｃＳｅｒ（Ｂｚｌ）５９ｇ　（０．２ｍｏｌ）をＣ
Ｈ２Ｃｌ２４００ｍｌ　に溶解しＤＣＣ４１．２ｇ（０
．２ｍｏｌ）を氷冷下に加えた。この溶液に、ＧｌｙＮ
Ｈ２・ＨＣｌ２２．１ｇをＣＨ２Ｃｌ２　４００ｍｌに
溶かしてから、Ｎ−メチルモルホリン２０．２ｇで氷冷
下中和した溶液を添加した。氷冷下３時間攪拌してから
、さらに室温で終夜攪拌した。沈澱物をろ別してから減
圧濃縮し酢酸エチルに溶解した。ＮａＨＣＯ３水溶液、
１Ｍクエン酸水溶液、ＮａＣｌ水溶液の順に洗浄し、Ｎ
ａ２ＳＯ４で乾燥してから減圧乾固して白色粉末５８．
３ｇ（収率８３％）を得た。

【００１６】（２）ＢｏｃＡｓｐ（ＯＢｚｌ）Ｓｅｒ（
Ｂｚｌ）ＧｌｙＮＨ２　の合成Ｂｏｃ　Ｓｅｒ（Ｂｚｌ
）ＧｌｙＮＨ２　５６．２ｇ（０．１６ｍｏｌ）にＴＦ
Ａ／ＣＨ２Ｃｌ２＝１／１　４００ｍｌを加え室温で１
時間攪拌した後、ＴＦＡ　とＣＨ２Ｃｌ２を減圧濃縮し
た。これを酢酸エチルに溶解しＮａＨＣＯ３水溶液で中
和した後ＮａＣｌ水溶液で洗浄した。Ｎａ２ＳＯ４で乾
燥してから酢酸エチルを減圧留去した。

【００１７】この化合物と、ＢｏｃＡｓｐ（ＯＢｚｌ）
５１．７ｇ　（０．１６ｍｏｌ）をＣＨ２Ｃｌ２　８０
０ｍｌに溶解し、ＤＣＣ３３ｇ（０．１６ｍｏｌ）を氷
冷下加え３時間攪拌してから、さらに室温で終夜攪拌し
た。減圧下ＣＨ２Ｃｌ２を留去してから酢酸エチルに溶
解した。ＮａＨＣＯ３水溶液、１Ｍクエン酸水溶液、Ｎ
ａＣｌ水溶液の順に洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥してか
ら減圧乾固して白色粉末７１．２ｇ（収率８０％）を得
た。

【００１８】（３）ＢｏｃＧｌｙＡｓｐ（ＯＢｚｌ）Ｓ
ｅｒ（Ｂｚｌ）ＧｌｙＮＨ２　の合成 ＢｏｃＡｓｐ（ＯＢｚｌ）Ｓｅｒ（Ｂｚｌ）Ｇｌｙ　Ｎ
Ｈ２　６６．７ｇ（０．１２ｍｏｌ）にＴＦＡ：ＣＨ２
Ｃｌ２＝１：１　４００ｍｌを加えて室温で１時間攪拌
した後、ＴＦＡを減圧濃縮した。これを酢酸エチルに溶
解しＮａＨＣＯ３水溶液で中和した後ＮａＣｌ水溶液で
洗浄した。Ｎａ２ＳＯ４で乾燥してから酢酸エチルを減
圧留去した。

【００１９】この化合物とＢｏｃＧｌｙ５１．７ｇ（０
．１２ｍｏｌ）をＣＨ２Ｃｌ２　７００ｍｌに溶解し、
ＤＣＣ２４．７ｇ　（０．１２ｍｏｌ）を氷冷下加え３
時間攪拌してから、さらに室温で終夜攪拌した。ＤＣｕ
ｒｅａをろ別してから減圧濃縮し酢酸エチルに溶解した
。ＮａＨＣＯ３水溶液、１Ｍクエン酸水溶液、ＮａＣｌ
水溶液の順に洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥してから減圧
乾固して白色粉末６１．８ｇ（収率８４％）を得た。

【００２０】（４）ＢｏｃＡｒｇ（Ｍｔｓ）ＧｌｙＡｓ
ｐ（ＯＢｚｌ）Ｓｅｒ（Ｂｚｌ）ＧｌｙＮＨ２の合成 ＢｏｃＧｌｙＡｓｐ（ＯＢｚｌ）Ｓｅｒ（Ｂｚｌ）Ｇｌ
ｙ　ＮＨ２　６１．３ｇ（０．１ｍｏｌ）にＴＦＡ：Ｃ
Ｈ２Ｃｌ２＝１：１　４００ｍｌを加えて室温で１　時
間攪拌した後、ＴＦＡ　とＣＨ２Ｃｌ２を減圧濃縮した
。これを酢酸エチルに溶解しＮａＨＣＯ３水溶液で中和
した後ＮａＣｌ水溶液で洗浄した。Ｎａ２ＳＯ４で乾燥
してから酢酸エチルを減圧留去した。

【００２１】この化合物とＢｏｃＡｒｇ（Ｍｔｓ）（Ｍ
ｔｓ　はメシチレン−２−スルホニル基を示す）４５．
６ｇ（０．１ｍｏｌ）をＤＭＦ　８００ｍｌ　に溶解し
、ＤＣＣ２２．５ｇ（０．１ｍｏｌ　）、ＨＯＢｔ１４
ｇ（０．１ｍｏｌ）を氷冷下加え３時間攪拌してから、
さらに室温で終夜攪拌した。ＤＣｕｒｅａをろ別してか
ら減圧濃縮し酢酸エチルに溶解した。ＮａＨＣＯ３水溶
液、１Ｍクエン酸水溶液、ＮａＣｌ水溶液の順に洗浄し
、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥してから減圧乾固して白色粉末４
２．８ｇ（収率４５％）を得た。

【００２２】（５）　ペプチド−５　　保護体の脱保護
ＢｏｃＡｒｇ（Ｍｔｓ）ＧｌｙＡｓｐ（ＯＢｚｌ）Ｓｅ
ｒ（Ｂｚｌ）ＧｌｙＮＨ２　５ｇ（５．３ｍｍｏｌ）　
のＴＦＡ　溶液に、１Ｍトリフルオロメタンスルホン酸
−　チオアニソール−ｍ−クレゾールのＴＦＡ　溶液を
氷冷下加えて１時間反応させ、ペプチド側鎖および末端
の保護基の脱保護を行った。反応液をエーテル中に投入
しオイル状の沈殿物を蒸留水に溶解し酢酸エチルで洗浄
した後、陰イオン交換樹脂カラム（アンバーライトＩＲ
Ａ−４００Ｃｌ　型）に通して塩酸塩とし凍結乾燥した
。白色固体２．１７ｇ（収率８６％）が得られた。 アミノ酸分析　（ｎｍｏｌ／５０　μｌ）Ａｒｇ　　　
　　４．９８７７，　 Ｇｌｙ　　　　１０．３９１６，　 Ａｓｐ　　　　　５．０１９９，　 Ｓｅｒ　　　　　４．８８９１，　 マススペクトル　　Ｍ＋　　　４０４

【００２３】製造例３ ペプチド−６　　Ｈ−（Ｇｌｙ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓ
ｐ−Ｓｅｒ−Ｐｒｏ）−ＯＨ（配列番号６）Ｍｅｒｒｉ
ｆｉｅｌｄ方式によるペプチド合成装置を用いて合成を
行なった。αアミノ基の保護にはＢｏｃ　基を用い、樹
脂から切出した後分取用ＨＰＬＣ（高速液体クロマトグ
ラフィー）で精製し、単一ピークを示す接着性合成ペプ
チドを得た。 収率　　２５％

【００２４】合成例１　　ＣＭ−キチン−ＲＧＤＳ（配
列番号７）の合成 粘度９ｃｐｓ（１％溶液、２０℃）、エーテル化度０．
７８、脱アセチル化度０．５のＣＭ−キチン（焼津水産
化学工業製）０．３０ｇをｐＨ７．４のリン酸バッファ
ーに溶解し、０℃に保ちながら水溶性ＤＣＣ〔１−エチ
ル−３，３−（ジメチルアミノプロピル）−カルボジイ
ミド〕１２８ｍｇの２．６ｍｌリン酸バッファー溶液を
加えて、１．５時間反応させた。ついで、８ｍｌのリン
酸バッファーに溶解した接着性ペプチド　　Ａｒｇ−Ｇ
ｌｙ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ　（ＲＧＤＳ）（国産化学工業製
）４００ｍｇを添加し４℃で一晩反応させた。反応溶液
を、Ｖｉｓｋｉｎｇ　ｔｕｂｅに入れ、イオン交換水、
ついで純水に対して透析し低分子量成分を除いて精製、
凍結乾燥した。収量０．２４ｇ　　構造の確認は、ＩＲ
およびアミノ酸分析により行なった。 ＣＭ−キチンＲＧＤＳ アミノ酸分析　　　　（　ｎｍｏｌ／５０μｌ　）グル
コサミン　　　　　　２０．５５５８Ａｒｇ　　　　　
　　　　　　　　　２．０５５６Ｇｌｙ　　　　　　　
　　　　　　　２．１３５２Ａｓｐ　　　　　　　　　
　　　　　１．９８５４Ｓｅｒ　　　　　　　　　　　
　　　１．８７９２以下の計算式に従いアルギニン残基
濃度とグルコサミン濃度の比よりＲＧＤＳフラグメント
の導入率を計算し約１０％の値を得た。

【００２５】 導入率＝　［Ａｒｇ］　／　［グルコサミン］　×１０
０　ＩＲ：アミドカルボニル（Ｃ＝Ｏ）の伸縮振動　　
　　　　　　　　　　　　　　１６５２ｃｍ−１ 合成例２　　　　スクシニル化ＣＭ−キチン−ＲＧＤＳ
の合成 合成例１のＣＭ−キチン２０．０ｇを１％トリエチルア
ミン溶液１００ｍｌに溶解、これに無水コハク酸３４．
０ｇ、４−ジメチルアミノピリジン２．００ｇを加え室
温で一昼夜かくはんした。反応終了後溶液を大過剰のア
セトンに投入して、スクシニル化ＣＭ−キチンを再沈殿
させた。沈殿を集め更に大量のメタノールで洗浄した後
エーテルで洗浄し真空乾燥させた。収量２２．４０ｇス
クシニル化ＣＭ−キチン０．３０ｇをｐＨ７．４のリン
酸バッファーに溶解し、０℃に保ちながら水溶性ＤＣＣ
（１−エチル−３，３−（ジメチルアミノプロピル）−
カルボジイミド）１２８ｍｇの２．６ｍｌリン酸バッフ
ァー溶液を加えて、１．５時間反応させた。ついで、８
ｍｌのリン酸バッファーに溶解したＲＧＤＳ４００ｍｇ
を添加し４℃で一晩反応させた。 反応溶液を、Ｖｉｓｋｉｎｇ　ｔｕｂｅに入れイオン交
換水、ついで純水に対して透析し、低分子量成分を除い
て精製、凍結乾燥した。収量０．２６ｇ構造の確認は、
ＩＲおよびアミノ酸分析により行なった。アミノ酸分析
の結果ＲＧＤＳフラグメントの導入率は約１０％であっ
た。

【００２６】スクシニル化ＣＭ−キチン−ＲＧＤＳの構
造式を以下に示す。

【００２７】

【化１】

【００２８】 スクシニル化ＣＭ−キチンＲＧＤＳ アミノ酸分析　　　　　　（ｎｍｏｌ／５０μｌ）グル
コサミン　　　　　　２３．６２１８Ａｒｇ　　　　　
　　　　　　　　　２．３６２２Ｇｌｙ　　　　　　　
　　　　　　　２．１２５３Ａｓｐ　　　　　　　　　
　　　　　２．２３９１Ｓｅｒ　　　　　　　　　　　
　　　２．００３１ＩＲ：アミドカルボニル（Ｃ＝Ｏ）
の伸縮振動　　　　１６５２ｃｍ−１

【００２９】合成例３　　　　マレイル化ＣＭ−キチン
ＲＧＤＳ 合成例１のＣＭ−キチン２０．００ｇと３６．６ｇの無
水マレイン酸を合成例２と同様に反応させマレイル化Ｃ
Ｍ−キチン２１．６０ｇを得た。マレイル化ＣＭ−キチ
ン０．３０ｇをｐＨ７．４のリン酸バッファーに溶解し
、合成例２と同様にしてＲＧＤＳフラグメントを共有結
合させた。収量０．３３ｇ　　構造の確認は、ＩＲおよ
びアミノ酸分析により行なった。アミノ酸分析の結果Ｒ
ＧＤＳフラグメントの導入率は約１１％であった。 マレイル化ＣＭ−キチンＲＧＤＳ アミノ酸分析　　　　　（ｎｍｏｌ／５０　μｌ）グル
コサミン　　　　　　２８．４９５６Ａｒｇ　　　　　
　　　　　　　　　３．１３４５Ｇｌｙ　　　　　　　
　　　　　　　２．７７５１Ａｓｐ　　　　　　　　　
　　　　　２．７２１３Ｓｅｒ　　　　　　　　　　　
　　　２．５６９４ＩＲ：アミドカルボニル（Ｃ＝Ｏ）
の伸縮振動１６４８ｃｍ−１

【００３０】合成例４　　　　フタロイル化ＣＭ−キチ
ン−ＲＧＤＳ 合成例１のＣＭ−キチン２０．００ｇと５０．０ｇの無
水フタル酸を合成例２と同様に反応させ、フタロイル化
ＣＭ−キチン２２．３１ｇを得た。

【００３１】フタロイル化ＣＭ−キチン０．３０ｇをｐ
Ｈ７．４のリン酸バッファーに溶解し、合成例２と同様
にしてＲＧＤＳフラグメントを共有結合させた。収量０
．４４ｇ　　構造の確認は、ＩＲおよびアミノ酸分析に
より行なった。アミノ酸分析の結果ＲＧＤＳフラグメン
トの導入率は約１２％であった。 フタロイル化ＣＭ−キチンＲＧＤＳ アミノ酸分析　　　　　　（ｎｍｏｌ／５０μｌ）グル
コサミン　　　　　　１９．１８５６Ａｒｇ　　　　　
　　　　　　　　　２．３０２３Ｇｌｙ　　　　　　　
　　　　　　　２．２２３１Ａｓｐ　　　　　　　　　
　　　　　１．８９３７Ｓｅｒ　　　　　　　　　　　
　　　１．７６３２ＩＲ：アミドカルボニル（Ｃ＝Ｏ）
の伸縮振動１６５２ｃｍ−１

【００３２】合成例５　　　　イタコニル化ＣＭ−キチ
ン−ＲＧＤＳ 合成例１のＣＭ−キチン２０．００ｇと３８．０ｇの無
水イタコン酸を合成例２と同様に反応させイタコニル化
ＣＭ−キチン２１．４５ｇを得た。イタコニル化ＣＭ−
キチン０．３０ｇをｐＨ７．４のリン酸バッファーに溶
解し、合成例２と同様にしてＲＧＤＳフラグメントを共
有結合させた。収量０．３６ｇ　　構造の確認は、ＩＲ
およびアミノ酸分析により行なった。アミノ酸分析の結
果ＲＧＤＳフラグメントの導入率は約９％であった。 イタコニル化ＣＭ−キチンＲＧＤＳ アミノ酸分析　　　　　　（ｎｍｏｌ／５０μｌ）グル
コサミン　　　　　　３５．２３１６Ａｒｇ　　　　　
　　　　　　　　　３．１７０８Ｇｌｙ　　　　　　　
　　　　　　　３．２５１１Ａｓｐ　　　　　　　　　
　　　　　３．１００５Ｓｅｒ　　　　　　　　　　　
　　　２．８８６２ＩＲ：アミドカルボニル（Ｃ＝Ｏ）
の伸縮振動１６５０ｃｍ−１

【００３３】合成例６　　　　トリメリチル化ＣＭ−キ
チン−ＲＧＤＳ 合成例１のＣＭ−キチン２０．００ｇと６４．９ｇのト
リメリト酸無水物を合成例２と同様に反応させトリメリ
チル化ＣＭ−キチン２３．７５ｇを得た。トリメリチル
化ＣＭ−キチン０．３０ｇをｐＨ７．４のリン酸バッフ
ァーに溶解し、合成例２と同様にしてＲＧＤＳフラグメ
ントを共有結合させた。収量０．３７ｇ構造の確認は、
ＩＲおよびアミノ酸分析により行なった。アミノ酸分析
の結果　ＲＧＤＳ　フラグメントの導入率は約１４％で
あった。 トリメリチル化ＣＭ−キチンＲＧＤＳ アミノ酸分析　　　　　　（ｎｍｏｌ／５０μｌ）グル
コサミン　　　　　　１８．７６１２Ａｒｇ　　　　　
　　　　　　　　　２．６２６６Ｇｌｙ　　　　　　　
　　　　　　　２．７８９９Ａｓｐ　　　　　　　　　
　　　　　２．５５３２Ｓｅｒ　　　　　　　　　　　
　　　２．２６８９ＩＲ：アミドカルボニル（Ｃ＝Ｏ）
の伸縮振動１６５６ｃｍ−１

【００３４】合成例７　　　　ＣＭ−キチン−ＧＲＧＤ
Ｓ（配列番号８） 接着性ペプチドフラグメントとしてＧｌｙ−Ａｒｇ−Ｇ
ｌｙ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ（ＧＲＧＤＳ）（国産化学工業製
）４６０ｍｇを用い、合成例１と同様にしてＣＭ−キチ
ン−ＧＲＧＤＳを合成した。収量０．３６ｇ　　構造の
確認は、ＩＲおよびアミノ酸分析により行なった。アミ
ノ酸分析の結果ＧＲＧＤＳフラグメントの導入率は約１
０％であった。 ＣＭ−キチン−ＧＲＧＤＳ アミノ酸分析　　　　　　（ｎｍｏｌ／５０μｌ）グル
コサミン　　　　　　１５．３３１９Ａｒｇ　　　　　
　　　　　　　　　１．５３３２Ｇｌｙ　　　　　　　
　　　　　　　３．２１３２Ａｓｐ　　　　　　　　　
　　　　　１．３４６８Ｓｅｒ　　　　　　　　　　　
　　　１．１１３２ＩＲ：アミドカルボニル（Ｃ＝Ｏ）
の伸縮振動１６５４ｃｍ−１

【００３５】合成例８　　　　スクシニル化ＣＭ−キチ
ン−ＧＲＧＤＳ　 接着性ペプチドフラグメントとしてＧＲＧＤＳ４６０ｍ
ｇを用い、合成例２と同様にしてスクシニル化ＣＭ−キ
チン−ＧＲＧＤＳを合成した。収量０．３９ｇ　　構造
の確認は、ＩＲおよびアミノ酸分析により行なった。ア
ミノ酸分析の結果ＧＲＧＤＳフラグメントの導入率は約
１２％であった。 スクシニル化ＣＭ−キチン−ＧＲＧＤＳアミノ酸分析　
　　　　　（ｎｍｏｌ／５０μｌ）グルコサミン　　　
　　　３０．３２６８Ａｒｇ　　　　　　　　　　　　
　　３．６３９２Ｇｌｙ　　　　　　　　　　　　　　
７．０６２４Ａｓｐ　　　　　　　　　　　　　　３．
５６９１Ｓｅｒ　　　　　　　　　　　　　　３．３０
０６ＩＲ：アミドカルボニル（Ｃ＝Ｏ）の伸縮振動１６
４８ｃｍ−１

【００３６】合成例９　　　　スクシニル化ＣＭ−キチ
ン−ＲＧＤ（配列番号９） 接着性ペプチドフラグメントとしてＲＧＤ　４６０ｍｇ
を用い、合成例２と同様にしてスクシニル化ＣＭ−キチ
ン−ＲＧＤを合成した。収量０．３４ｇ構造の確認は、
ＩＲおよびアミノ酸分析により行なった。アミノ酸分析
の結果ＲＧＤフラグメントの導入率は約１６％であった
。 スクシニル化ＣＭ−キチン−ＲＧＤ アミノ酸分析　　　　　　（ｎｍｏｌ／５０μｌ）グル
コサミン　　　　　　２７．８８６７Ａｒｇ　　　　　
　　　　　　　　　４．４６１９Ｇｌｙ　　　　　　　
　　　　　　　４．５５１８Ａｓｐ　　　　　　　　　
　　　　　４．４９１１ＩＲ：アミドカルボニル（Ｃ＝
Ｏ）の伸縮振動１６５０ｃｍ−１

【００３７】合成例１０　　スクシニル化ＣＭ−キチン
−（ＲＧＤ）２（配列番号１０） 接着性ペプチドフラグメントとして（ＲＧＤ）２４６０
ｍｇを用い、合成例２と同様にしてスクシニル化ＣＭ−
キチン−（ＲＧＤ）２を合成した。収量０．３１ｇ　　
構造の確認は、ＩＲおよびアミノ酸分析により行なった
。アミノ酸分析の結果（ＲＧＤ）２フラグメントの導入
率は約１２％であった。 スクシニル化ＣＭ−キチン（ＲＧＤ）２　　アミノ酸分
析　　　　　　（ｎｍｏｌ／５０μｌ）グルコサミン　
　　　　　２５．１９１３Ａｒｇ　　　　　　　　　　
　　　　６．０４５９Ｇｌｙ　　　　　　　　　　　　
　　５．９８８３Ａｓｐ　　　　　　　　　　　　　　
５．８９９６ＩＲ：アミドカルボニル（Ｃ＝Ｏ）の伸縮
振動１６５４ｃｍ−１

【００３８】合成例１１　　スクシニル化ＣＭ−キチン
−（ＲＧＤ）３（配列番号１１） 接着性ペプチドフラグメントとして（ＲＧＤ）３４６０
ｍｇを用い、合成例２と同様にしてスクシニル化ＣＭ−
キチン−（ＲＧＤ）３を合成した。収量０．３３ｇ　　
構造の確認は、ＩＲおよびアミノ酸分析により行なった
。アミノ酸分析の結果（ＲＧＤ）３フラグメントの導入
率は約１０％であった。 スクシニル化ＣＭ−キチン（ＲＧＤ）３　　アミノ酸分
析　　　　　　（ｎｍｏｌ／５０μｌ）グルコサミン　
　　　　　２２．３１６１Ａｒｇ　　　　　　　　　　
　　　　６．６９４９Ｇｌｙ　　　　　　　　　　　　
　　６．５１３２Ａｓｐ　　　　　　　　　　　　　　
６．２３２３ＩＲ：アミドカルボニル（Ｃ＝Ｏ）の伸縮
振動１６４８ｃｍ−１

【００３９】合成例１２　　スクシニル化ＣＭ−キチン
−（ＲＧＤ）５（配列番号１２） 接着性ペプチドフラグメントとして（ＲＧＤ）５４６０
ｍｇを用い、合成例２と同様にしてスクシニル化ＣＭ−
キチン−（ＲＧＤ）５を合成した。収量０．２８ｇ　　
構造の確認は、ＩＲおよびアミノ酸分析により行なった
。アミノ酸分析の結果（ＲＧＤ）５フラグメントの導入
率は約１５％であった。 スクシニル化ＣＭ−キチン−（ＲＧＤ）５　　アミノ酸
分析　　　　　　（ｎｍｏｌ／５０μｌ）グルコサミン
　　　　　　２３．６８１１Ａｒｇ　　　　　　　　　
　　　２３．０１０８Ｇｌｙ　　　　　　　　　　　　
２１．０９９３Ａｓｐ　　　　　　　　　　　　２０．
３３３２ＩＲ：アミドカルボニル（Ｃ＝Ｏ）の伸縮振動
１６５６ｃｍ−１

【００４０】合成例１３　　硫酸化ＣＭ−キチン−ＲＧ
ＤＳ（配列番号７） エーテル化度０．５０、脱アセチル化度０．０５のＣＭ
−キチンを戸倉らの方法（Ｊｐｎ．　Ｊ．　Ｃａｎｃｅ
ｒ　Ｒｅｓ．，　８０，　８６６−８７２（１９８９）
，Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓ．，　５０，　３６３１−３６
３７（１９９０））　に従い硫酸化し、合成例１と同様
にしてＲＧＤＳフラグメントを共有結合させた。収量０
．３６ｇ　　構造の確認は、ＩＲおよびアミノ酸分析に
より行なった。アミノ酸分析の結果ＲＧＤＳフラグメン
トの導入率は約１２％であった。

【００４１】 硫酸化ＣＭ−キチン−ＲＧＤＳ アミノ酸分析　　　　　　（ｎｍｏｌ／５０μｌ）グル
コサミン　　　　　　３３．１５６９Ａｒｇ　　　　　
　　　　　　　　　３．９７８０Ｇｌｙ　　　　　　　
　　　　　　　３．９２５１Ａｓｐ　　　　　　　　　
　　　　　３．６０５３Ｓｅｒ　　　　　　　　　　　
　　　３．４９２１ＩＲ：アミドカルボニル（Ｃ＝Ｏ）
の伸縮振動１６５０ｃｍ−１

【００４２】合成例１４　　硫酸化ＣＭ−キチン−ＧＲ
ＧＤＳ（配列番号８） 接着性ペプチドフラグメントＧＲＧＤＳ４６０ｍｇと合
成例１３の硫酸化ＣＭ−キチンとを合成例１と同様にし
て共有結合させ、硫酸化ＣＭ−キチン−ＧＲＧＤＳを合
成した。収量０．３５ｇ　　構造の確認は、ＩＲおよび
アミノ酸分析により行なった。アミノ酸分析の結果ＧＲ
ＧＤＳフラグメントの導入率は約１０％であった。 硫酸化ＣＭ−キチン−ＧＲＧＤＳ アミノ酸分析　　　　　　（ｎｍｏｌ／５０μｌ）グル
コサミン　　　　　　２５．１５１５Ａｒｇ　　　　　
　　　　　　　　　２．５１Ｇｌｙ　　　　　　　　　
　　　　　５．２１３４Ａｓｐ　　　　　　　　　　　
　　　２．４２５１Ｓｅｒ　　　　　　　　　　　　　
　２．１１１１ＩＲ：アミドカルボニル（Ｃ＝Ｏ）の伸
縮振動１６５５ｃｍ−１

【００４３】合成例１５　　硫酸化スクシニル化ＣＭ−
キチン−ＲＧＤＳ（配列番号７） 合成例２のスクシニル化ＣＭ−キチンを合成例１３と同
じ方法で硫酸化し、合成例２と同様にしてＲＧＤＳフラ
グメントを共有結合させた。収量０．３７ｇ構造の確認
は、ＩＲおよびアミノ酸分析により行なった。アミノ酸
分析の結果ＲＧＤＳフラグメントの導入率は約１４％で
あった。 硫酸化スクシニル化ＣＭ−キチン−ＲＧＤＳアミノ酸分
析　　　　　　（ｎｍｏｌ／５０μｌ）グルコサミン　
　　　　　１８．６９３２Ａｒｇ　　　　　　　　　　
　　　　２．６１７０Ｇｌｙ　　　　　　　　　　　　
　　２．７７３９Ａｓｐ　　　　　　　　　　　　　　
２．５９３１Ｓｅｒ　　　　　　　　　　　　　　２．
２１６８ＩＲ：アミドカルボニル（Ｃ＝Ｏ）の伸縮振動
１６５４ｃｍ−１

【００４４】合成例１６　　硫酸化スクシニル化ＣＭ−
キチン−ＧＲＧＤＳ（配列番号８） 合成例２のスクシニル化ＣＭ−キチンを合成例１３と同
じ方法で硫酸化し、合成例７と同様にしてＧＲＧＤＳフ
ラグメントを共有結合させた。収量０．３１ｇ構造の確
認は、ＩＲおよびアミノ酸分析により行なった。アミノ
酸分析の結果ＲＧＤＳフラグメントの導入率は約１７％
であった。 硫酸化スクシニル化ＣＭ−キチン−ＧＲＧＤＳアミノ酸
分析　　　　　　（ｎｍｏｌ／５０μｌ）グルコサミン
　　　　　　２２．５６６１Ａｒｇ　　　　　　　　　
　　　　　３．８３６２Ｇｌｙ　　　　　　　　　　　
　　　７．４９６３Ａｓｐ　　　　　　　　　　　　　
　３．６８１１Ｓｅｒ　　　　　　　　　　　　　　３
．２５９３ＩＲ：アミドカルボニル（Ｃ＝Ｏ）の伸縮振
動１６５２ｃｍ−１

【００４５】合成例１７ ＣＭ−キチン−ＲＧＤＳＧ−ＮＨ２　（配列番号１３）
接着性ペプチドフラグメントとしてペプチド　　−５（
ＲＧＤＳＧ−ＮＨ２）４６０ｍｇを用い、合成例１と同
様にしてＣＭ−キチン−ＲＧＤＳＧ−ＮＨ２　を合成し
た。 収量０．３６ｇ 構造の確認は、ＩＲおよびアミノ酸分析により行った。 アミノ酸分析の結果ＲＧＤＳＧ−ＮＨ２　フラグメント
の導入率は約１０％であった。 ＣＭ−キチンＲＧＤＳＧ−ＮＨ２　 アミノ酸分析　　　　　　（ｎｍｏｌ／５０μｌ）グル
コサミン　　　　　　１７．６３６８Ａｒｇ　　　　　
　　　　　　　　　１．８１６６Ｇｌｙ　　　　　　　
　　　　　　　３．８２４３Ａｓｐ　　　　　　　　　
　　　　　１．８４６８Ｓｅｒ　　　　　　　　　　　
　　　１．６１１２ＩＲ：アミドカルボニル（Ｃ＝Ｏ）
の伸縮振動１６５８ｃｍ−１

【００４６】合成例１８ ＣＭ−キチン−ＲＧＤＳ（配列番号７）接着性ペプチド
フラグメントとしてＲＧＤＳ１．５ｇを用い、合成例１
と同様にしてＣＭ−キチン−ＲＧＤＳを合成した。 収量０．３２ｇ 構造の確認は、ＩＲおよびアミノ酸分析により行なった
。アミノ酸分析の結果ＲＧＤＳの導入率は約２０％であ
った。

【００４７】 ＣＭ−キチンＲＧＤＳ アミノ酸分析　　　　　　（ｎｍｏｌ／５０μｌ）グル
コサミン　　　　　　２０．４５９８Ａｒｇ　　　　　
　　　　　　　　　４．１０５２Ｇｌｙ　　　　　　　
　　　　　　　４．２６８８Ａｓｐ　　　　　　　　　
　　　　　３．９８０８Ｓｅｒ　　　　　　　　　　　
　　　３．７７８４ＩＲ：アミドカルボニル（Ｃ＝Ｏ）
の伸縮振動１６５５ｃｍ−１

【００４８】合成例１９ ＣＭ−キチン−ＧＲＧＤＳＰ（配列番号１４）接着性ペ
プチドフラグメント−６（製造例３）、Ｇｌｙ−Ａｒｇ
−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ−Ｐｒｏ（ＧＲＧＤＳＰ）４
８０ｍｇを用い、合成例１と同様にしてＣＭ−キチン−
ＧＲＧＤＳＰを合成した。 収量０．３５ｇ 構造の確認は、ＩＲおよびアミノ酸分析により行なった
。アミノ酸分析の結果ＧＲＧＤＳＰフラグメントの導入
率は約１０％であった。

【００４９】 ＣＭ−キチンＧＲＧＤＳＰ アミノ酸分析　　　　　　（ｎｍｏｌ／５０μｌ）グル
コサミン　　　　　　１５．３３１９Ａｒｇ　　　　　
　　　　　　　　　１．５３３２Ｇｌｙ　　　　　　　
　　　　　　　３．２１３２Ａｓｐ　　　　　　　　　
　　　　　１．３４６８Ｓｅｒ　　　　　　　　　　　
　　　１．１１３２Ｐｒｏ　　　　　　　　　　　　　
　１．３３２６ＩＲ：アミドカルボニル（Ｃ＝Ｏ）の伸
縮振動１６５７ｃｍ−１

【００５０】試験例１ 『細胞接着阻害活性の測定』 本発明のＣＭ−キチン誘導体が細胞のフィブロネクチン
やビトロネクチンに対する接着を阻害する活性測定方法
を以下に示す。ここで用いられた競争法は基本的に生化
学分野では広く用いられているものであり、例えば『Ｍ
ｅｔｈｏｄｓ　ｉｎ　Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ　』８２　
　８０３〜８３１頁（１９８１）、特開平１−３０９６
８２、同２−１７４７９７に開示されている。

【００５１】実験方法 １．　　吸着プレートの作製 市販のフィブロネクチン（ヒト由来：生化学工業（株）
より購入）あるいはビトロネクチン（ヒト由来：フナコ
シ（株）より購入）をＰＢＳ（ＮａＨ２ＰＯ４　０．０
０５　Ｍ　＋　ＮａＣｌ０．０７Ｍ）で各々１．０μｌ
　／ｍｌ、２．０μｌ　／ｍｌに希釈しその希釈液０．
５ｍｌを２４ウエルのプラスチックプレートにいれ、３
７℃で一晩保温しコーテイングした。次に非特異吸着を
防ぐ目的で牛血清アルブミン（ＢＳＡ　　１％）を加え
３７℃で１時間保温し、その後通常の洗浄操作（ＰＢＳ
）を行い充分に水きりして吸着プレートを作製した。

【００５２】２．　　接着阻害実験 凍結乾燥により得たＣＭキチン誘導体をＤｕｌｂｅｃｃ
ｏ　，ｓ　Ｍｏｄｉｆｉｅｄ　Ｅａｇｌｅｓ　Ｍｅｄｉ
ｕｍ（以下ＤＭＥＭと略記する）で希釈して、０、０．
２５、０．５、１．０及び１．５ｍｇ／ｍｌの各濃度の
ＣＭ−キチン誘導体溶液とした。この溶液０．２５ｍｌ
を上記方法で作成したプレートにいれ、そこへ血管内皮
細胞（４×１０６　　ｃｅｌｌｓ／ｍｌ）懸濁液を０．
２５ｍｌ加え、３７℃で一時間保温し細胞を接着させた
。ＤＭＥＭ培地で３回洗浄し、未接着の細胞を除いた後
、０．０２５％　ＥＤＴＡ　トリプシン溶液で接着した
細胞を剥離し、　２％トリパンブルーで染色して細胞数
を計測した。　結果を下記表１及び表２に示す。

【００５３】 　　表−１フィブロネクチンに対する細胞接着阻害（細
胞／ウェル）━━━━━━━━━━━━━━━━━━━
━━━━━━━━━━━━━　　　　　　　　　　濃度 　　添加　　　　　　（ｍｇ／ｍｌ）　　　　　　０　
　　　　０．２５　　　　０．５　　　　　１．０　　
　　　１．５　　化合物 ━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━
━━━━━━━　　ＣＭ−キチン　　　　　　　　　　
　１６０　　　　　１７１　　　　　１５７　　　　　
１６５　　　　　１５２　　ＣＭ−キチン誘導体−１　
　　１６０　　　　　１３１　　　　　１０６　　　　
　　７９　　　　　　６９　　　　　　　　　　〃　　
　　　　　　２　　　１６０　　　　　１３５　　　　
　　９９　　　　　　８２　　　　　　７５　　　　　
　　　　　〃　　　　　　　　３　　　１６０　　　　
　１２３　　　　　１００　　　　　　７７　　　　　
　５５　　　　　　　　　　〃　　　　　　　　４　　
　１６０　　　　　１４１　　　　　１２１　　　　　
　８０　　　　　　６７　　　　　　　　　　〃　　　
　　　　　５　　　１６０　　　　　１３６　　　　　
１０５　　　　　　８６　　　　　　７２　　　　　　
　　　　〃　　　　　　　　６　　　１６０　　　　　
１２７　　　　　１０７　　　　　　９３　　　　　　
６６　　　　　　　　　　〃　　　　　　　　７　　　
１６０　　　　　１１９　　　　　　９８　　　　　　
８４　　　　　　７１　　　　　　　　　　〃　　　　
　　　　８　　　１６０　　　　　１３０　　　　　１
１３　　　　　　８０　　　　　　５９　　　　　　　
　　　〃　　　　　　　　９　　　１６０　　　　　１
２１　　　　　　９７　　　　　　８５　　　　　　６
５　　　　　　　　　　〃　　　　　　　　１０　　　
１６０　　　　　１２２　　　　　１１０　　　　　　
８７　　　　　　７３　　　　　　　　　　〃　　　　
　　　　１１　　　１６０　　　　　１４３　　　　　
１２５　　　　　　７８　　　　　　７０　　　　　　
　　　　〃　　　　　　　　１２　　　１６０　　　　
　１２５　　　　　１０１　　　　　　８９　　　　　
　７７　　硫酸化　　ＣＭ−キチン　　　　　１６０　
　　　　１５０　　　　　１５５　　　　　１４７　　
　　　１４１　　ＣＭ−キチン誘導体　−１３　　　１
６０　　　　　　９７　　　　　　７７　　　　　　５
７　　　　　　３３　　　　　　　　　　〃　　　　　
　　　１４　　　１６０　　　　　１１１　　　　　　
９３　　　　　　６８　　　　　　４１　　　　　　　
　　　〃　　　　　　　　１５　　　１６０　　　　　
１０５　　　　　　８９　　　　　　６５　　　　　　
３７　　　　　　　　　　〃　　　　　　　　１６　　
　１６０　　　　　１０３　　　　　　８１　　　　　
　７５　　　　　　５０　　　　　　　　　　〃　　　
　　　　　１７　　　１６０　　　　　　９９　　　　
　　８４　　　　　　６１　　　　　　３５　　　　　
　　　　　〃　　　　　　　　１８　　　１６０　　　
　　１３３　　　　　１０１　　　　　　７５　　　　
　　５２　　　　　　　　　　〃　　　　　　　　１９
　　　１６０　　　　　１２７　　　　　１０６　　　
　　　７９　　　　　　５６　　　　　　ＲＧＤ　　　
　　　　　　　　　　１６０　　　　　１５７　　　　
　１６２　　　　　１４１　　　　　　８３　　　　　
　ＧＲＧＤＳ　　　　　　　　　１６０　　　　　１５
４　　　　　１４０　　　　　　９５　　　　　　８０
━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━
━━━━━━━

【００５４】 　　表−２　　ビトロネクチンに対する細胞接着阻害（
細胞／ウェル）━━━━━━━━━━━━━━━━━━
━━━━━━━━━━━━━━　　　　　　　　　　濃
度 　　添加　　　　　　（ｍｇ／ｍｌ）　　　　　　０　
　　　　　１０　　　　　　５０　　　　　１００　　
　　　３００　　化合物 ━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━
━━━━━━━　　ＣＭ−キチン　　　　　　　　　　
　２４９　　　　　２６０　　　　　２４３　　　　　
２４０　　　　　２５５　　ＣＭ−キチン誘導体−１　
　　２４９　　　　　１４８　　　　　　８９　　　　
　　７２　　　　　　４１　　　　　　　　　　〃　　
　　　　　　２　　　２４９　　　　　１３７　　　　
　　９６　　　　　　７８　　　　　　５９　　　　　
　　　　　〃　　　　　　　　３　　　２４９　　　　
　１４１　　　　　　８７　　　　　　６９　　　　　
　４９　　　　　　　　　　〃　　　　　　　　４　　
　２４９　　　　　１４５　　　　　　９０　　　　　
　６７　　　　　　４５　　　　　　　　　　〃　　　
　　　　　５　　　２４９　　　　　１２９　　　　　
　９１　　　　　　８０　　　　　　４８　　　　　　
　　　　〃　　　　　　　　６　　　２４９　　　　　
１３３　　　　　　９８　　　　　　７１　　　　　　
５６　　　　　　　　　　〃　　　　　　　　７　　　
２４９　　　　　１４３　　　　　　８５　　　　　　
７９　　　　　　５５　　　　　　　　　　〃　　　　
　　　　８　　　２４９　　　　　１３０　　　　　　
９５　　　　　　６９　　　　　　４７　　　　　　　
　　　〃　　　　　　　　９　　　２４９　　　　　１
３９　　　　　　８８　　　　　　７７　　　　　　５
８　　　　　　　　　　〃　　　　　　　　１０　　　
２４９　　　　　１３６　　　　　　８６　　　　　　
７１　　　　　　４３　　　　　　　　　　〃　　　　
　　　　１１　　　２４９　　　　　１４７　　　　　
１００　　　　　　７３　　　　　　４５　　　　　　
　　　　〃　　　　　　　　１２　　　２４９　　　　
　１５０　　　　　１０１　　　　　　８０　　　　　
　５９　　硫酸化　　ＣＭ−キチン　　　　　２４９　
　　　　２３１　　　　　２３５　　　　　２２２　　
　　　２００　　ＣＭ−キチン誘導体　−１３　　　２
４９　　　　　１０３　　　　　　７０　　　　　　４
７　　　　　　３１　　　　　　　　　　〃　　　　　
　　　１４　　　２４９　　　　　１０７　　　　　　
７８　　　　　　４３　　　　　　３４　　　　　　　
　　　〃　　　　　　　　１５　　　２４９　　　　　
１１５　　　　　　６９　　　　　　５４　　　　　　
３８　　　　　　　　　　〃　　　　　　　　１６　　
　２４９　　　　　１２２　　　　　　８１　　　　　
　６３　　　　　　４０　　　　　　　　　　〃　　　
　　　　　１７　　　２４９　　　　　１１４　　　　
　　７６　　　　　　４８　　　　　　３３　　　　　
　　　　　〃　　　　　　　　１８　　　２４９　　　
　　１２５　　　　　　８３　　　　　　５６　　　　
　　４４　　　　　　　　　　〃　　　　　　　　１９
　　　２４９　　　　　１３０　　　　　　９２　　　
　　　６３　　　　　　３９　　　　　　ＲＧＤ　　　
　　　　　　　　　　２４９　　　　　１７１　　　　
　１３２　　　　　１０４　　　　　　７３　　　　　
　ＧＲＧＤＳ　　　　　　　　　２４９　　　　　１５
７　　　　　１１６　　　　　　８７　　　　　　６１
━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━
━━━━━━━

【００５５】試験例２ 『血小板凝集阻害活性試験』 本発明のＣＭ−キチン誘導体の　ＩＮ　ＶＩＴＲＯ　系
での血小板凝集阻害作用をヒト多血小板血漿を用いて検
定した。以下にその実験方法を示す。

【００５６】実験方法 新鮮なヒト血液に１／９量の３．８％クエン酸ナトリウ
ムを加え遠心（１０００ｒｐｍ　、１０分）し、上層を
多血小板血漿として分取した。凍結乾燥により得たＣＭ
−キチン誘導体を生理食塩水に０−１．５ｍｇ／ｍｌの
種々の濃度になるように溶解した。ＣＭ−キチン誘導体
溶液２５μｌを血漿２００μｌ　に加え、３７℃で３分
間インキュベートしたのち、５０μＭ　ＡＤＰ（アデノ
シン二リン酸）溶液あるいは２００μｇ　／ｍｌのコラ
ーゲン溶液を２５μｌ　加えて凝集の程度をアグリゴメ
ーターを用いて透過度を測定することにより検定した。 結果を表−３に示す。 凝集阻害率（１−Ｔ／Ｔ０　）　×１００％Ｔ０　＝Ｃ
Ｍ−キチン誘導体の塩非添加時の透過度Ｔ　　＝ＣＭ−
キチン誘導体の塩添加時の透過度

【００５７】

【００５８】

【配列表】

【００５９】 配列番号：１ 配列の長さ：３ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列

【００６０】 配列番号：２ 配列の長さ：６ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列

【００６１】 配列番号：３ 配列の長さ：９ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列

【００６２】 配列番号：４ 配列の長さ：１５ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列 Ａｒｇ　Ｇｌｙ　Ａｓｐ　Ａｒｇ　Ｇｌｙ　Ａｓｐ　Ａ
ｒｇ　Ｇｌｙ　Ａｓｐ　Ａｒｇ　Ｇｌｙ　Ａｓｐ　Ａｒ
ｇ　Ｇｌｙ　Ａｓｐ　　　１　　　　　　　　　　　　
　　５　　　　　　　　　　　　　　　　１０　　　　
　　　　　　　　　　　　１５

【００６３】 配列番号：５ 配列の長さ：５ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列

【００６４】 配列番号：６ 配列の長さ：６ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列

【００６５】 配列番号：７ 配列の長さ：４ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド フラグメント型：Ｃ末端フラグメント 配列

【００６６】 配列番号：８ 配列の長さ：５ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド フラグメント型：Ｃ末端フラグメント 配列

【００６７】 配列番号：９ 配列の長さ：３ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド フラグメント型：Ｃ末端フラグメント 配列

【００６８】 配列番号：１０ 配列の長さ：６ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド フラグメント型：Ｃ末端フラグメント 配列

【００６９】 配列番号：１１ 配列の長さ：９ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド フラグメント型：Ｃ末端フラグメント 配列

【００７０】 配列番号：１２ 配列の長さ：１５ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド フラグメント型：Ｃ末端フラグメント 配列

【００７１】 配列番号：１３ 配列の長さ：５ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド フラグメント型：Ｃ末端フラグメント 配列

【００７２】 配列番号：１４ 配列の長さ：６ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド フラグメント型：Ｃ末端フラグメント 配列

Claims (4)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】　　ＣＭ−キチンの側鎖にアミド結合、エ
   ステル結合、エーテル結合、ウレタン結合のいずれかを
   介し、下記一般式〔Ｉ〕で表される接着性ペプチドを必
   須単位として有するキチン誘導体またはその塩。 一般式〔Ｉ〕 −〔Ｒ１〕−〔ＣＯ〕−（〔Ｘ〕−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａ
   ｓｐ−〔Ｙ〕）ｎ−〔Ｚ〕−〔Ｒ２〕− 〔　　〕は存在するかあるいは存在しなくともよく、存
   在する場合はＸ，　ＹはＳｅｒ，Ｇｌｙ，　Ｖａｌ，Ａ
   ｓｎ，Ｐｒｏ　から選択されるアミノ酸残基又はペプチ
   ド残基を示し、Ｚは−Ｏ−または−ＮＨ−を示す。Ｒ１
   　、Ｒ２　のいずれか一方は、水素又は炭素数が１−９
   の直鎖または分岐のアルキル基、または炭素数が６−９
   のアリール基であり、置換基を有していてもよい。他方
   は、水素又は炭素数が１−９の直鎖または分岐のアルキ
   レン基、または炭素数が６−９のアリーレン基であり、
   置換基を有していてもよい。ｎは１−５の整数を示す。
2. 【請求項２】　　分子量が約３，０００−１００，００
   ０の範囲である請求項１記載のＣＭ−キチン誘導体また
   はその塩。
3. 【請求項３】　　請求項１または２記載のＣＭ−キチン
   誘導体またはその塩を有効成分とする動物細胞の接着阻
   害剤。
4. 【請求項４】　　請求項１または２記載のＣＭ−キチン
   誘導体またはその塩を有効成分とする血小板凝集・粘着
   抑制剤。