JPH042231B2 - - Google Patents
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- Publication number
- JPH042231B2 JPH042231B2 JP55158929A JP15892980A JPH042231B2 JP H042231 B2 JPH042231 B2 JP H042231B2 JP 55158929 A JP55158929 A JP 55158929A JP 15892980 A JP15892980 A JP 15892980A JP H042231 B2 JPH042231 B2 JP H042231B2
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- JP
- Japan
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- type
- pneumonia
- cell culture
- pneumonia virus
- substance
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Lifetime
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-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
- A61K39/29—Hepatitis virus
- A61K39/292—Serum hepatitis virus, hepatitis B virus, e.g. Australia antigen
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2730/00—Reverse transcribing DNA viruses
- C12N2730/00011—Details
- C12N2730/10011—Hepadnaviridae
- C12N2730/10111—Orthohepadnavirus, e.g. hepatitis B virus
- C12N2730/10134—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
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- Veterinary Medicine (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Description
【発明の詳細な説明】
現在までＢ型肺炎表面抗原（HBsAg）の唯一
の根源はＢ型肺炎疾病のヒト保有者からの血液又
は腫瘍細胞培養物であつた。このようなヒト保有
者はあまり存在せず必要な血液はまれで高価であ
る。ヘパテイテイス・Ｂ・ウイルス（以下「Ｂ型
肺炎ウイルス」という）をインビトロ（試験管
内）で培養する方法はなかつた。
の根源はＢ型肺炎疾病のヒト保有者からの血液又
は腫瘍細胞培養物であつた。このようなヒト保有
者はあまり存在せず必要な血液はまれで高価であ
る。ヘパテイテイス・Ｂ・ウイルス（以下「Ｂ型
肺炎ウイルス」という）をインビトロ（試験管
内）で培養する方法はなかつた。
ヒト保有者からの血液を必要としないＢ型肺炎
ウイルスを得る方法を供給することが本発明の目
的の一つである。他の目的はＢ型肺炎ウイルスの
インヒドロ細胞培養法を示すことである。本発明
のこれら及びその他の目的は以下の記述から明ら
かになるであろう。
ウイルスを得る方法を供給することが本発明の目
的の一つである。他の目的はＢ型肺炎ウイルスの
インヒドロ細胞培養法を示すことである。本発明
のこれら及びその他の目的は以下の記述から明ら
かになるであろう。
Ｂ型肺炎が感染した霊長類の肝臓由来のインビ
トロ細胞培養物は長期にわたつてＢ型肺炎表面及
びコア抗原を生産する。
トロ細胞培養物は長期にわたつてＢ型肺炎表面及
びコア抗原を生産する。
本発明はＢ型肺炎ウイルスのインビトロ細胞培
養物による増殖特に、Ｂ型肺炎感染霊長動物の肝
臓由来の細胞培養物におけるＢ型肺炎ウイルスの
インビトロ細胞培養物による増殖に関連するもの
である。
養物による増殖特に、Ｂ型肺炎感染霊長動物の肝
臓由来の細胞培養物におけるＢ型肺炎ウイルスの
インビトロ細胞培養物による増殖に関連するもの
である。
本発明によればＢ型肺炎に感染した、人、又は
非人間由来の血液、単離されたウイルス、肝臓、
細胞質、唾液、又は血清と接種物として用いる。
非人間霊長動物は例えばヒヒ、チンパンジー、ゴ
リラ、オランウータン、赤毛ザルのようなＢ型肺
炎に感受性のいかなる種であつてもよい。臨床的
被検体は霊長動物に接種するときに使用する。接
種は好ましくは静脈注射で行う。接種後合42日か
ら約90日、典型的には約70日後に感染された動物
からの肝臓片をインビトロ細胞培養物を達成する
のに用いる。一方Ｂ型肺炎を感染したヒト患者か
らの肝臓方も用いられるのであろう。
非人間由来の血液、単離されたウイルス、肝臓、
細胞質、唾液、又は血清と接種物として用いる。
非人間霊長動物は例えばヒヒ、チンパンジー、ゴ
リラ、オランウータン、赤毛ザルのようなＢ型肺
炎に感受性のいかなる種であつてもよい。臨床的
被検体は霊長動物に接種するときに使用する。接
種は好ましくは静脈注射で行う。接種後合42日か
ら約90日、典型的には約70日後に感染された動物
からの肝臓片をインビトロ細胞培養物を達成する
のに用いる。一方Ｂ型肺炎を感染したヒト患者か
らの肝臓方も用いられるのであろう。
感染した肝臓細胞培養物は適切な栄養培地の存
在下で培養される。栄養培養はインビトロの細胞
の増殖を細胞培養地を意味する。いくつかの特殊
な栄養培地を例えばチンパンジー血清又は牛胎児
血清のような血清存在下の以下のようなものであ
る；Medium199、Morgan他、Proc.Soc.Exp.
Biol.＆Med.、73：１−８、1950；Basal
Medium Eagle、Eagle、Science、122、501−
504、1955；In Vitro、Vol.6、No.1970；
Dulbeccos Modified Eagle′s Medium、
Dulbecco他、Virology、８、396、1959；Smith
他、J.Viol.、12、185−196、1960；In Vitro、
vol.6、No.２、1970；Minimum Essential
Medilm（Eagle）．Science、130、432（1959）、
RPMI Media、Moore他、199、519−524、
1967；In Vitro、Vol.6、No.２、1970；Williams
MediumE、Exp.Cell Res.、Vol.69、106−112、
1971；そしてHam′s F12、1965PNAS、Vol.53、
288。培養は好ましくは線維芽細胞の増殖を阻害
する一つ又はそれ以上のホルモンに影響される。
このようなホルモンは例えばインシユリン、グル
カゴン、及び９−フルオロー11β，17，21−トリ
ヒドロキシ−16α−メチルプレグナ−１，４−ジ
エン−３，20−ジオンである。これらの物質は一
般に約10-5から約10-7Mの濃度で使用される。培
養は容量比で約５％のCo2を含む大気好ましくは
約32℃から約39℃、更に好ましくは約35℃で行
う。肺細胞様上皮細胞の激しい増殖が一般に７日
以内で始まる。接種後９日でＢ型肺炎コア抗原
（HBcAg）が螢光抗体法又はラジオイムノアツ
セイ（RIA）により検出され、一方HBsAgは
RIAによつて検出される。この培養物は少なくと
も150日の間Ｂ型肺炎コア及び表面抗原を生産し
続ける。
在下で培養される。栄養培養はインビトロの細胞
の増殖を細胞培養地を意味する。いくつかの特殊
な栄養培地を例えばチンパンジー血清又は牛胎児
血清のような血清存在下の以下のようなものであ
る；Medium199、Morgan他、Proc.Soc.Exp.
Biol.＆Med.、73：１−８、1950；Basal
Medium Eagle、Eagle、Science、122、501−
504、1955；In Vitro、Vol.6、No.1970；
Dulbeccos Modified Eagle′s Medium、
Dulbecco他、Virology、８、396、1959；Smith
他、J.Viol.、12、185−196、1960；In Vitro、
vol.6、No.２、1970；Minimum Essential
Medilm（Eagle）．Science、130、432（1959）、
RPMI Media、Moore他、199、519−524、
1967；In Vitro、Vol.6、No.２、1970；Williams
MediumE、Exp.Cell Res.、Vol.69、106−112、
1971；そしてHam′s F12、1965PNAS、Vol.53、
288。培養は好ましくは線維芽細胞の増殖を阻害
する一つ又はそれ以上のホルモンに影響される。
このようなホルモンは例えばインシユリン、グル
カゴン、及び９−フルオロー11β，17，21−トリ
ヒドロキシ−16α−メチルプレグナ−１，４−ジ
エン−３，20−ジオンである。これらの物質は一
般に約10-5から約10-7Mの濃度で使用される。培
養は容量比で約５％のCo2を含む大気好ましくは
約32℃から約39℃、更に好ましくは約35℃で行
う。肺細胞様上皮細胞の激しい増殖が一般に７日
以内で始まる。接種後９日でＢ型肺炎コア抗原
（HBcAg）が螢光抗体法又はラジオイムノアツ
セイ（RIA）により検出され、一方HBsAgは
RIAによつて検出される。この培養物は少なくと
も150日の間Ｂ型肺炎コア及び表面抗原を生産し
続ける。
随意に、しかし好ましくはＢ型肺炎ウイルスは
インビトロ細胞培養物の肝臓片の摘出に先だつて
少くとも１つの感受性の霊長類に順次伝達された
ほうが良い。
インビトロ細胞培養物の肝臓片の摘出に先だつて
少くとも１つの感受性の霊長類に順次伝達された
ほうが良い。
以下の実施例は本発明を示したものであるがそ
れを限定するものではない。
れを限定するものではない。
実施例
チンパンジーにヒトＢ型肺炎キヤリアの細胞質
の１：1000希釈物の１mlを静注で接種する。肝臓
組織を接種後43日、又はそれ以上で摘出し細かく
切りきざみ、この切りきざんだものを洗浄し、細
胞培養培地（０から20の動物血清、10-6Mインシ
ユリン、デキサメタゾン及びグルコカゴを含んだ
Williams Medium Ｅ）に接種する。25cm2フラス
コ中の培養物は週に２、３回２から３mlの培養培
地で補足される。培養は５％CO2を含む大気下で
35℃で行う。７日間以内に肺細胞様の上皮細胞の
激しい増殖が始まる。このチンパンジー肝臓細胞
培養に関する描写は肝臓が正常な動物から得たも
のであつてもＢ型肺炎感染動物から得たものであ
つても適切なものである。
の１：1000希釈物の１mlを静注で接種する。肝臓
組織を接種後43日、又はそれ以上で摘出し細かく
切りきざみ、この切りきざんだものを洗浄し、細
胞培養培地（０から20の動物血清、10-6Mインシ
ユリン、デキサメタゾン及びグルコカゴを含んだ
Williams Medium Ｅ）に接種する。25cm2フラス
コ中の培養物は週に２、３回２から３mlの培養培
地で補足される。培養は５％CO2を含む大気下で
35℃で行う。７日間以内に肺細胞様の上皮細胞の
激しい増殖が始まる。このチンパンジー肝臓細胞
培養に関する描写は肝臓が正常な動物から得たも
のであつてもＢ型肺炎感染動物から得たものであ
つても適切なものである。
HBcAgは接種後、８日でひき肉から増殖した
肝臓胆嚢（hepatocyte）様の細胞の核に螢光抗
体法により検出される。この螢光を特異的にブロ
ツクすることは回復期のヒトＢ型肺炎血清により
可能であるが、同じ患者からの病気になる前の血
清では可能ではなく、又、免疫性を与えたモルモ
ツト血清によつて可能であるが免疫性を与えない
ものでは可能でない。
肝臓胆嚢（hepatocyte）様の細胞の核に螢光抗
体法により検出される。この螢光を特異的にブロ
ツクすることは回復期のヒトＢ型肺炎血清により
可能であるが、同じ患者からの病気になる前の血
清では可能ではなく、又、免疫性を与えたモルモ
ツト血清によつて可能であるが免疫性を与えない
ものでは可能でない。
又HBsAgはまた、陰性から陽性になるか又は
再フイードによる繰り返し行う希釈ののち陽性を
保つことで、培養液中に検出される。非感染チン
パージ肝臓はこの結果を示さなかつた。HBsAg
及びHBcAgは少くとも150日間生産され続ける。
再フイードによる繰り返し行う希釈ののち陽性を
保つことで、培養液中に検出される。非感染チン
パージ肝臓はこの結果を示さなかつた。HBsAg
及びHBcAgは少くとも150日間生産され続ける。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １ 約32から約39℃の温度で栄養培地の存在下Ｂ
型肺炎に感染した非人間霊長類から除去した肝臓
組織の細胞培養物を培養し、Ｂ型肺炎ウイルス抗
原の存在が細胞培養物中に検出されるまで培養を
継続し、且つ該培養は線維芽細胞の生育を阻止す
る物質の存在下で行なわれることを特徴とするＢ
型肺炎ウイルスのインビトロ細胞培養の方法。 ２ Ｂ型肺炎ウイルス抗原を細胞培養物より採取
する特許請求の範囲第１項記載の方法。 ３ 物質がインシユリン、グルカゴン、又は９−
フルオロー11β，17，21−トリヒドロキシ−16α
−メチル−プレグナ−１，４−ジエン−３，20−
ジオンである特許請求の範囲第１項記載の方法。 ４ 物質が約10-5から約10-7モルの濃度で存在す
る特許請求の範囲第３項記載の方法。 ５ 培養が約35℃に於いて行われる特許請求の範
囲第１項記載の方法。 ６ Ｂ型肺炎ウイルスが細胞培養物のための肝臓
組織の摘出に先だつて、１つ又はそれ以上の感受
性の霊長類に順次伝達される特許請求の範囲第１
項記載の方法。 ７ Ｂ型肺炎ウイルス抗原が細胞培養物から採取
される特許請求の範囲第６項記載の方法。
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US9365879A | 1979-11-13 | 1979-11-13 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS5682089A JPS5682089A (en) | 1981-07-04 |
| JPH042231B2 true JPH042231B2 (ja) | 1992-01-16 |
Family
ID=22240085
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP15892980A Granted JPS5682089A (en) | 1979-11-13 | 1980-11-13 | In vitro cell culture of hepatitis b vierus |
Country Status (9)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0028987B1 (ja) |
| JP (1) | JPS5682089A (ja) |
| AT (1) | ATE8108T1 (ja) |
| DE (1) | DE3068373D1 (ja) |
| DK (1) | DK481480A (ja) |
| ES (1) | ES8200398A1 (ja) |
| GR (1) | GR71857B (ja) |
| IE (1) | IE50339B1 (ja) |
| PT (1) | PT72015B (ja) |
Families Citing this family (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4393133A (en) * | 1980-06-12 | 1983-07-12 | The Wistar Institute Of Anatomy And Biology | Human hepatoma derived cell line, process for preparation thereof, and uses therefor |
| US4416986A (en) * | 1981-01-16 | 1983-11-22 | Merck & Co., Inc. | Methods of producing HBsAg |
| JP2000504227A (ja) * | 1996-01-29 | 2000-04-11 | パイク、キー―ユング | ミトコンドリアの翻訳系を用いるタンパク質製造法 |
| GB9815939D0 (en) * | 1998-07-23 | 1998-09-23 | Univ Leicester | Hepatitis B culture system |
| US6562562B2 (en) * | 2000-03-10 | 2003-05-13 | Pharmacia & Upjohn S.P.A. | Procedure for partial liver resection in nonhuman primates |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS48103722A (ja) * | 1972-04-15 | 1973-12-26 | ||
| US4164566A (en) * | 1978-08-17 | 1979-08-14 | Merck & Co., Inc. | Hepatitis a virus cell culture in vitro |
-
1980
- 1980-11-04 PT PT7201580A patent/PT72015B/pt unknown
- 1980-11-11 GR GR63326A patent/GR71857B/el unknown
- 1980-11-11 IE IE2329/80A patent/IE50339B1/en not_active IP Right Cessation
- 1980-11-12 DE DE8080401613T patent/DE3068373D1/de not_active Expired
- 1980-11-12 EP EP19800401613 patent/EP0028987B1/en not_active Expired
- 1980-11-12 AT AT80401613T patent/ATE8108T1/de not_active IP Right Cessation
- 1980-11-12 ES ES496780A patent/ES8200398A1/es not_active Expired
- 1980-11-13 JP JP15892980A patent/JPS5682089A/ja active Granted
- 1980-12-12 DK DK481480A patent/DK481480A/da not_active Application Discontinuation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| IE50339B1 (en) | 1986-04-02 |
| PT72015A (en) | 1980-12-01 |
| ES496780A0 (es) | 1981-11-01 |
| JPS5682089A (en) | 1981-07-04 |
| IE802329L (en) | 1981-05-13 |
| PT72015B (en) | 1982-06-20 |
| DE3068373D1 (en) | 1984-08-02 |
| EP0028987A2 (en) | 1981-05-20 |
| ES8200398A1 (es) | 1981-11-01 |
| GR71857B (ja) | 1983-07-05 |
| EP0028987A3 (en) | 1982-05-19 |
| EP0028987B1 (en) | 1984-06-27 |
| ATE8108T1 (de) | 1984-07-15 |
| DK481480A (da) | 1981-05-14 |
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