JPH04262787A - コリネバクテリウム・オキシダンスを用いる実質的に水性媒体中でのジオール及びポリオールのアセテートエステルの製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、実質的に水性系におい
て生物触媒を用いてポリオール及びジオールをアセテー
トエステルに転化する方法に関する。特に、関連する生
物触媒はコリネバクテリウム・オキシダンス（Ｃｏｒｙ
ｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ　ｏｘｙｄａｎｓ）由来のもの
である。

【０００２】

【従来の技術】リパーゼ及びプロテアーゼが、水中でキ
ラルエステルの不斉加水分解の触媒として作用できるこ
とは知られている。しかしながら、これらの既知方法に
は、最初にラセミターゲット分子をエステルに転化させ
る必要性、このようなエステルのほとんどが水に不溶で
あることそして多くの化合物の水に対する感受性をはじ
めとする固有の問題がある。したがって、水中でのキラ
ルエステルの不斉加水分解の触媒のために、反応媒体に
有機溶媒を用いることが標準的に実施されてきた。さら
に、上記反応におけるアシル−酵素中間体は水中で加水
分解され、それにより遊離酵素を再生成しそして酸を生
成する。理論的には、他の求核体が、共有結合アシル−
酵素中間体に対して水と競争するかもしれないが、しか
し水溶液中では加水分解が圧倒的である。一方、有機溶
媒を反応媒体として用いると、その時はアシル−酵素は
水との競争なしに、任意の求核体に露らすことができ、
したがって加水分解は多くの代りの反応、例えば、エス
テル交換反応と取り代ることがある。

【０００３】また、アルコール、ジオール及びポリオー
ルのアセテートを有機溶媒中で各種の酵素から製造する
ことは標準的なことである。普通は、このことは、エス
テル生成に有利となるような平衡をつくり出すために、
水を排除してそしてさらに水を除去して行う。化学的合
成と酵素による合成の両者についてこのことは真実であ
る。

【０００４】水中の酵素触媒反応において、水が過剰の
場合、水が主な求核体として作用することは普通のこと
である。本発明においては、水が過剰であっても、有機
ジオール又はポリオールが主な求核体である。

【０００５】ヨーロッパ特許第　０　２８０　２３２号
には、コリネバクテリウム・オキシダンス由来の生物触
媒を使用して、ジオールをアセテートエステルと反応さ
せることによりモノアセテートを生成することが述べら
れており、かつ特許請求されている。しかしながら、そ
こには、ジオール、アセテートエステル及び生物触媒の
混合物を実質的にすべてが有機の反応媒体中で行う方法
が簡単に記載されているだけである。

【０００６】

【発明が解決しようとする課題】ヨーロッパ特許第　０
　２８０　２３２号では、ジオールをアセテートエステ
ルと反応させることによるモノアセテートの製造方法に
おいて、コリネバクテリウム・オキシダンスにより生成
される酵素の触媒活性について検討している。このよう
なエステルの製造においてはかなりの非確実性があるの
で、不飽和エステルからの不飽和重合性モノマーを製造
するための同様の操作又はジオールからのモノアセテー
トを製造するための同様の操作を、実質的に水性の媒体
中でのジオール又はポリオールからのアセテートエステ
ル製造に用いることができるという確実性はない。

【０００７】したがって、実質的に水性の環境中で、触
媒量の、コリネバクテリウム・オキシダンス由来の生物
触媒の存在下で、ジオール又はポリオールをアセテート
エステルと反応させることにより、ジオール及びポリオ
ールからアセテートエステルを製造するための経済的か
つ簡易な方法が引き続き必要とされている。例えば、ア
ルコール基質、例えば、糖及びペンタエリトリトールの
ような親水性化合物は有機溶媒に特に溶解性ではないと
いう状況がある。したがって、酵素反応を行うのに親水
性媒体、すなわち、水性媒体を用いることができること
が望ましい。また、親水性化合物、例えば、ジオール及
びポリオール、例えば、糖の酵素エステル化を、実質的
に水性の媒体中で行うことができ、酵素の化学選択性及
び立体選択性を利用することができれば望ましい。

【０００８】

【課題を解決するための手段】実質的に水性環境中、コ
リネバクテリウム・オキシダンス由来の生物触媒の存在
下でジオール又はポリオールをアセテートエステルと反
応させることを含んでなる方法により、上記課題は解決
されそして生物触媒の技術分野に大きな進歩がもたらさ
れた。

【０００９】

【実施態様】本発明方法で生成される化合物は、他の化
合物の合成における中間体として有用である。ジオール
のアセテートエステルは慣用の反応を用いてさらに他の
光学活性中間体に転化することができる。例えば、残り
の水酸基をクロロ、ブロモ、ヨードのようなハロ、アジ
ド、フタルイミド、シアノ及びカルボキシルに転化する
ことができる。

【００１０】本発明の実施に用いる生物触媒はコリネバ
クテリウム・オキシダンス由来のものである。“由来の
”という用語により、本明細書中に定義する反応の触媒
となるこの微生物種から作られる任意の組成物を使用で
きることを意味する。有用な組成物としては、細胞を含
む培養媒体、回収細胞そのもの又は必要な触媒活性を含
む細胞の抽出物（例えば、少くとも部分的に精製された
酵素）が挙げられる。この方法は、醗酵のように生きた
細胞の存在下で行う必要はない。この組成物は反応の触
媒として用いる。

【００１１】典型的なコリネバクテリウム・オキシダン
スの単離、保存及び特性指摘は当該技術分野において知
られている。コリネバクテリウム・オキシダンスは当該
技術分野においてフラボバクテリウム（Ｆｌａｖｏｂａ
ｃｔｅｒｉｕｍ）・オキシダンスとして知られているこ
ともある。この微生物のいくつかの菌株、すなわちＡＴ
ＣＣ　Ｎｏ．５３５８６　，ＡＴＣＣ　Ｎｏ．２１２４
５　及びＡＴＣＣ　Ｎｏ．５３５８７　（Ａｍｅｒｉｃ
ａｎ　ＴｙｐｅＣｕｌｔｕｒｅ　Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ
，　１２３０１　Ｐａｒｋｌａｗｎ　Ｄｒｉｖｅ，　Ｒ
ｏｃｋｖｉｌｌｅ，　Ｍａｒｙｌａｎｄ　２０８５２）
　は本発明の実施に有用である。ＡＴＣＣＮｏ．５３５
８６の菌株が好ましい。全細胞の有用な組成物の調製に
ついては以下に述べる。

【００１２】好ましい実施態様において、生物触媒は、
コリネバクテリウム・オキシダンスの菌株由来の、例え
ば、上記の菌株由来の少くとも部分的に精製されたトラ
ンスアシラーゼである。この酵素抽出物は本発明の製造
方法、特に、本明細書に記載されているエステルと、２
，２−ジメチル−１，３−プロパンジオール、エチレン
グリコール、グリセロール、１，６−ヘキサンジオール
、シス−もしくはトランス−シクロヘキサンジメタノー
ル、２，２′−オキシジエタノール、２−アリル−１，
３−プロパンジオール、Ｄ−グルカール及びＤ−ガラク
タールをはじめとする（しかしこれらに限定されないが
）、好ましいジオールもしくはポリオールとの生物転化
反応において有用である。特定の菌株の増殖並びにトラ
ンスアシラーゼの単離法及び精製法のアウトラインを以
下にさらに詳細に述べる。

【００１３】本明細書に特に示さないが、この種の菌株
の他のものも同様に有用であると信じられている。ジオ
ールもしくはポリオールを本明細書において定義されて
いるようなアセテートエステルに転化するであろう任意
の菌株が本発明において有用である。当業者が、特定の
菌株が有用であるかどうかを決定するには、単に簡単な
実験を必要とするに過ぎないであろう。このような実験
には、以下にアウトラインを述べる簡単な操作を行いそ
して生成物を分析してそれらを同定することが含まれる
であろう。もしアセテートエステルが生成されれば、反
応に用いられた菌株は本発明において意図されている生
物触媒である。

【００１４】本発明方法は、ジオール中の２個の当価の
水酸基のうちのただ１個の水酸基が優先的にエステル化
されるという点で；又はポリオール中の第一水酸基が第
二もしくは第三水酸基よりはるかに迅速にエステル化さ
れるという点で立体選択性である。第一、第二及び第三
水酸基とは当該技術分野において周知のこととして定義
されている。

【００１５】本発明の実施において有用なエステルとし
ては任意のエステル、例えば、エチル、メチル、ブチル
及びビニルアセテート並びに当業者に容易に明らかなも
のであろう他のものが挙げられる。これらエステルはカ
ルボニルに隣接するオキシ結合を含むカルボニル基の他
端に離脱基を有する。“離脱基”という用語は、ジオー
ル／ポリオール求核体によるアタックを受けると供与体
エステルから開裂する基を意味する。

【００１６】本発明の実施において有用なジオール及び
ポリオールは、少くとも１個の第一もしくは第二（そし
て好ましくは第一の）水酸基を有するもので、求核体と
して作用して、上記定義のエステルとの求核性アシル置
換を受ける任意の化合物であってよい。第一及び第二水
酸基は当該技術分野において周知のこととして定義され
ている。

【００１７】さらに具体的には、本発明の実施に有用な
ジオールは構造； ＨＯ−ＣＨ２−Ｑ−ＣＨ２−ＯＨ　 前記式中、Ｑは分子量が０〜２００　の二価の脂肪族部
分、脂環式部分もしくは芳香族部分である、を有する。

【００１８】用語“脂肪族”は、主鎖中の任意の数の炭
素、水素、窒素、酸素、リン又は硫黄原子からなり、か
つ炭素原子０〜１０個のアルキル基、ハロ（例えば、ク
ロロもしくはブロモ）、炭素原子数０〜１０個のアルコ
キシ又はアミノから選ばれる置換基を任意の数有する飽
和又は不飽和の直鎖成分として定義される。一般に、脂
肪族基は、ヘテロ原子（例えば、酸素、硫黄、窒素もし
くはリン）により遮断される、１個以上の置換もしくは
非置換のアルキレン基を含んでなる。用語“脂環式”は
３〜８個の炭素原子及びヘテロ原子を有する非芳香族の
置換もしくは非置換環状基を指し、炭環式成分（例えば
、シクロペンチルジメチレン、シクロヘキシルジメチレ
ン及び当業者に容易に明らかな他のもの）及び脂環式成
分（例えば、テトラヒドロフルフリル、テトラヒドロピ
ランジメチレン及びテトラヒドロチオフェンジメチレン
）が含まれる。二価の芳香族成分としては６〜１４個の
炭素原子及びヘテロ原子を有するもので、この用語が当
該技術分野において理解されているように芳香性を有す
るものが挙げられる。有用な芳香族成分としてはフェニ
ルジメチレン、ピリジルジメチレン、クロロピリジルジ
メチレン、ピリドキシニル及びチオフェンジメチレンが
挙げられる。

【００１９】さらに好ましくは、Ｑは０〜４炭素の直鎖
アルカン又はそれらの分枝誘導体（ここでアルカンは非
置換であっても置換されていてもよい）である。

【００２０】ある場合には、上記ジオールはプロキラル
もしくはキラル又はそれらのラセミ混合物（例えば、２
−フェニル−１，３−プロパンジオール及び２−イソプ
ロピル−１，３−プロパンジオール）である。

【００２１】本発明において有用な代表的なジオールと
しては次のものが挙げられるがそれらに限定されるもの
ではない：２，２−ジメチル−１，３−プロパンジオー
ル、２−メチル−１，３−プロパンジオール、１−フェ
ニル−１，３−プロパンジオール、１，４−ブタンジオ
ール、１，５−ペンタンジオール、１，３−プロパンジ
オール、１，６−ヘキサンジオール、エチレングリコー
ル、シス、トランス−シクロヘキサンジメタノール、２
，２′−オキシジエタノール、２−アルキル−１，３−
プロパンジオール及び２−プロピル−１，３−プロパン
ジオール。特に有用なジオールとしては２，２−ジメチ
ル−１，３−プロパンジオール、エチレングリコール、
１−フェニル−１，３−プロパンジオール、１，３−プ
ロパンジオール及び２−アルキル−１，３−プロパンジ
オールが挙げられる。

【００２２】代表的なポリオールとしてはトリヒドロキ
シメチルメタン、ペンタエリトリトール、ポリエチレン
グリコール及びモノサッカライド、例えば、マンノース
、ガラクトース、Ｄ−グルカール、Ｄ−ガラクタール等
が挙げられる。好ましいポリオールはＤ−グルカール及
びＤ−ガラクタールである。

【００２３】本発明方法は、上記の生物触媒の存在下で
、１個以上のアセテートエステル、１個以上のジオール
もしくはポリオールの混合物を用いて行う。反応混合物
の環境は実質的に水性であり、反応混合物が供与体エス
テルで飽和した水を含むことを意味する。水に溶解する
ことができる供与体エステルの量はエステルの構造並び
に反応混合物の温度及び圧力に左右される。水に対する
アセテートエステルの比は、一般に９０〜９９容量％の
水に対して一般に１〜１０容量％のアセテートエステル
である。水に対するアセテートエステルの好ましい比は
一般に９２〜９７容量％の水に対して一般に３〜８容量
％のアセテートエステルである。

【００２４】反応混合物中の反応体の比は大幅に変動す
ることがあり、当業者は所定の反応体についての比を最
適化して、ルーチンな実験により最適の収率を得ること
ができる。一般に、ジオールもしくはポリオールに対す
るアセテートエステルの容量比は約１：１〜約　１００
：１である。約２：１〜約４：１の比が好ましい。

【００２５】生物触媒の量もまた、最少の実験により容
易に見つけ出すことができる最適量で大幅に変動するこ
とができる。したがって、触媒量は反応体の量、反応条
件、トランスアシラーゼの純度又は全細胞の濃度次第で
変動するであろう。一般には、生物触媒は反応溶液中に
、乾燥全細胞については約０．５〜約５％（重量）存在
し、約１〜約２％（重量）が好ましい。少くとも部分的
に精製されたトランスアシラーゼを用いる場合には、許
容可能な生物転化を行うためには実質的により少ない量
が必要とされる。

【００２６】反応混合物は場合により少量の他の物質を
含有することができる。例えば、必要ならば、少量の酸
又は塩基を添加してｐＨを調整することができる。

【００２７】反応条件は限定的ではない。温度は一般に
約５℃〜約６５℃の範囲であり、約２５〜約３５℃が好
ましい。混合物のｐＨは（もし水が存在するならば）一
般に約５〜約１１である。反応時間は反応体及び所望の
収率次第で変動してよく、約１５分と約７２時間の時間
が典型的である。

【００２８】アセテート飽和水溶液の調製当容量の適当
なアセテートエステルと水を混合し、次いでその混合物
を２０〜２５℃で約３０分間激しく攪拌することにより
、アセテート飽和水溶液を調製した。この混合物を分別
ロートに移し、次いで有機層と水層を分離させた。底部
の水層を取り出して使用した。エステルとしてビニルア
セテートを用いる場合には、溶液は約３〜３．５％（容
量）のビニルアセテートを含有した。

【００２９】生物触媒組成物の調製： 本発明の実施において有用な、全細胞を含有する生物触
媒組成物は次のようにして調製することができる。Ｃ．
ｏｘｙｄａｎｓ　の細胞（ＡＴＣＣ　５３５８６）　は
、イースト抽出物（０．０５％，Ｄｉｆｃｏ　Ｌａｂｏ
ｒａｔｏｒｉｅｓからのもの）及びコハク酸（１％）を
含む普通の無機塩媒体（例えば、Ｓｔａｎｉｅｒ　等、
Ｊ．　Ｃｅｌｌ　Ｃｏｍｐ．　Ｐｈｙｓ．　４９，　ｐ
２５．　１９５７　を参照されたい）中で増殖させた。 ２４〜７２時間後、細胞を収集し、水洗し、凍結乾燥し
次いで４℃で粉末として保存した。

【００３０】コリネバクテリウム・オキシダンス由来の
トランスアシラーゼの単離及び精製 本例はコリネバクテリウム・オキシダンス由来のトラン
スアシラーゼを単離しそして少くとも部分的に精製する
ための操作を具体的に説明するものである。このトラン
スアシラーゼは本発明方法の実施における生物触媒であ
ることが判明している（以下の例を参照されたい）。

【００３１】材料及び方法： コリネバクテリウム・オキシダンス細胞（ＡＴＣＣ　５
３５８６）をイースト抽出物（０．０５％）及びスクシ
ネート（１％）を含む無機塩媒体中で増殖させた。細胞
をレート・ログ・フェーズ（ｌａｔｅ　ｌｏｇ　ｐｈａ
ｓｅ）で収集し、洗浄し、凍結乾燥し次いで４℃で保存
した。

【００３２】酵素のガスクロマトグラフィアッセイにお
いて、細胞抽出物（１５ｍｌ）を、２，２−ジメチル−
１，３−プロパンジオール（１０８ミリモル濃度）を含
有するエチルアセテート（２００ｍｌ）に添加し、次い
で得られた混合物を適当な時間振とうさせながら３０〜
３７℃でインキュベートした。反応を、シリル化試薬：
ピリジン（１：１）を添加し、次いで６０℃で２０分間
加熱することにより停止した。生成物形成をキヤピラリ
ガスクロマトグラフィにより測定した。

【００３３】カラムクロマトグラフィを　１５０℃で、
Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ　Ｇｌａｓｓ　Ｅｎｇｉｎｅｅｒ
ｉｎｇ，　Ｉｎｃ．からのカラムを用いて恒温で行った
。標準フレームイオン化検出操作を用いて検出を行った
。反応中、基質も生成物も全く物質代謝されなかったの
で、基質ピークと生成物ピークの比を用いて、検量器又
は内部基準なしに、生成した生成物を算出することがで
きた。カラム画分のアッセイは、適切な場合には、別々
の時間そして別々の温度で行った。酵素活性は単位／ｍ
ｇプロテインで表わす。１単位は、３０℃１分間で１μ
モルの基質を生成物に転化するのに必要な酵素量である
。

【００３４】細胞抽出物の単離： 特に断らない限り、すべての操作は室温で行った。細胞
を含まない抽出物を、ＤＮアーゼ（０．００２％）を含
むリン酸カリウム緩衝液（４００ｍｌ、　１００ミリモ
ル濃度、ｐＨ７）中に細胞（２０ｇ）を懸濁させること
により調製した。得られた混合物を、５ａｍｐ　で１５
分間攪拌しながら氷上で超音波にかけた（すなわち、デ
ューティ・サイクル（ｄｕｔｙ　ｃｙｃｌｅ）の５０％
で３０分振動した）。超音波をかけた懸濁液を２５，０
００×ｇで２０分間遠心分離にかけた。得られた上澄液
は、細胞を含まない、コリネバクテリウム・オキシダン
スの抽出物であった。

【００３５】タランスアシラーゼの精製上記のようにし
て得た、細胞を含まない抽出物を　１００，０００×ｇ
で１時間遠心分離にかけ、次いで上澄液を用いて更に精
製した。硫酸アンモニウムを３０分間かけて徐々に添加
して、最終濃度を　４３５ミリモル濃度とし、次いで２
５，０００×ｇで２０分間遠心分離にかけて、生成した
沈澱を除去した。

【００３６】この抽出物をフェニル・セファロースを用
いて次のようにクロマトグラフにかけた：フェニル・セ
ファロース・カラム（直径が　５００ｍｍで高さが７０
ｍｍ）　を、硫酸アンモニウム（４２５ミリモル濃度）
　を含有するリン酸カリウム緩衝液（１００ミリモル濃
度、ｐＨ７．５）中で平衡化した。このカラムを３ｍｌ
／分でポンプをかけ、１２ｍｌの画分を収集し、次いで
吸光度を　２８０ｎｍでモニターした。硫酸アンモニウ
ムを含有する、　１００，０００×ｇで遠心分離してお
いた、細胞を含まない抽出物（３５０ｍｌ）　からの上
澄液を上記カラムに添加し、未結合のプロテインを上記
の平衡緩衝液（２４０ｍｌ）　で洗い流した。平衡緩衝
液からリン酸カリウム緩衝液への勾配液　３６０ｍｌ（
１０ミリモル濃度、ｐＨ６．５）を流し、続いてエタノ
ール（５％）を含有する同一の緩衝液への勾配液　３６
０ｍｌを流した。最終条件を　３６０ｍｌに維持した。 ガスクロマトグラフィを用いて各種画分をトランスアシ
ラーゼの活性についてアッセイした。

【００３７】酵素活性（６５〜８５）を含むカラムクロ
マトグラフィからの画分をプールしそして得られた抽出
物のｐＨを８に調整した。

【００３８】この抽出物を次にＤＥＡＥセファロースを
用いて次のようにしてクロマトグラフにかけた：ＤＥＡ
Ｅセファロースカラム（直径５０ｍｍで高さが７０ｍｍ
）をトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン緩衝液（
２０ミリモル濃度、ｐＨ８）中で平衡化した。このカラ
ムを４ｍｌ／分でポンプにかけ、１２ｍｌの画分を収集
し次いで吸光度を　２８０ｎｍでモニターした。フェニ
ルセファロースカラムからプールした画分（２４０ｍｌ
）　でｐＨ８に調整したものを添加して、未結合プロテ
インを平衡緩衝液（１２０ｍｌ）で洗い流した。塩化カ
リウムを含む、平衡緩衝液への勾配液　６００ｍＬ（５
００ミリモル濃度）　を流し、続けて最終条件を　４８
０ｍＬに維持した。各種画分をガスクロマトグラフを用
いてトランスアシラーゼ活性についてアッセイした。

【００３９】トランスアシラーゼ活性（８８〜９２）を
含む画分をプールしそしてプロテインを硫酸アンモニウ
ム（７０％飽和）を用いて沈澱により濃縮した。沈澱プ
ロテインを遠心分離により収集しついでリン酸カリウム
緩衝液（２ｍｌ、　１００ミリモル濃度、７ｐＨ）中に
再懸濁させた。

【００４０】この抽出物をサイズ排除クロマトグラフィ
により次のようにして分離した：Ｓ−３００　セフアク
リルカラム（直径２６ｍｍで高さ　９００ｍｍ）をリン
酸カリウム緩衝液（１００ミリモル濃度、ｐＨ７）中で
平衡化した。カラムを１８ｍｌ／時間でポンプにかけ、
４．５ｍＬの画分を収集しそして吸光度を　２８０ｎｍ
でモニターした。クロマトグラフィから濃縮された活性
画分（２．０ｍｌ）をカラムに添加し次いでプロテイン
を平衡緩衝液で溶離した。ガスクロマトグラフィを用い
て、ある画分をトランスアシラーゼについてアッセイし
た。

【００４１】前記のクロマトグラフィからのトランスア
シラーゼ活性（６２〜６６）を含む画分をプールした。 次表は精製操作及び各種抽出物のトランスアシラーゼ活
性の要約を含む。

【００４２】

【表１】

【００４３】次例は、具体的説明の目的のために示す。 他の反応体及び微生物菌株を用いることができることが
理解される。所定の反応体について、操作に対する必要
な修正は、教示を考慮すれば当業者に容易に明らかとな
るであろう。特に断らない限り、本願の物質のパーセン
トのすべては重量で表されている。

【００４４】例１：全細胞を用いる、２，２−ジメチル
−１，３−プロパンジオールのモノアセテートの製造本
例は、コリネバクテリウム・オキシダンスを含有する全
細胞を用いる、ジオールのモノアセテートの製造につい
ての本発明による実施を具体的に示すものである。

【００４５】ビニルアセテート飽和水（１０ｍｌ．上記
のようにして調製）中の２，２−ジメチル−１，３−プ
ロパンジオール（０．１０４ｇ、１ミリモル濃度）及び
コリネバクテリウム・オキシダンスを含む全細胞（０．
１ｇ）の混合物を、ストッパー付フラスコ中、３０℃、
３００ＲＰＭで４８時間振とうした。この反応をガスク
ロマトグラフィによりモニターした。

【００４６】２，２−ジメチル−１，３−プロパンジオ
ールのモノアセテートが６６．１％収率で生成した。生
成物の同定は、ガスクロマトグラフィにより既知化合物
との比較して行った。

【００４７】例２：部分的に精製した酵素を用い、ビニ
ルアセテートを用いる２，２−ジメチル−１，３−プロ
パンジオールモノアセテートの製造 本例は、部分的に精製されたトランスアシラーゼ酵素を
用いる、ジオールのモノアセテートの製造についての本
発明による実施を具体的に説明するものである。

【００４８】２，２−ジメチル−１，３−プロパンジオ
ール（４．５８ｍｇ）、ビニルアセテート飽和水（４５
８μｌ）及び酵素溶液（３２μｌ、リン酸カリウム緩衝
液１ｍｌ当り約７単位の酵素を含み、　１００ミリモル
濃度、ｐＨ７．５）の混合物を密封したバイアル中に入
れ、次いで３０℃、３００ＲＰＭで１８．５時間振とう
した。反応をガスクロマトグラフィによりモニターした
。

【００４９】２，２−ジメチル−１，３−プロパンジオ
ールのモノアセテートが８４．２％の収率で生成した。 生成物の同定をガスクロマトグラフィにより、既知化合
物と比較して行った。

【００５０】例３：部分的に精製した酵素を用い、エチ
ルアセテートを用いる２，２−ジメチル−１，３−プロ
パンジオールのモノアセテートの製造 ２，２−ジメチル−１，３−プロパンジオール（４．５
８ｍｇ）、エチルアセテート飽和水（４５８μｌ）及び
酵素溶液（３２μ１　、リン酸カリウム緩衝液１ｍｌ当
り約７単位の酵素を含有し、　１００ミリモル濃度、ｐ
Ｈ７．５）の混合物を密封バイアルに入れ、次いで３０
℃、３００ＲＰＭで１８．５時間振とうした。反応をガ
スクロマトグラフィによりモニターした。

【００５１】２，２−ジメチル−１，３−プロパンジオ
ールのモノアセテートが２１．３％の収率で生成した。 生成物の同定は、ガスクロマトグラフィにより、既知化
合物との比較により行った。

【００５２】例４：プロキラルジオールからの光学活性
モノアセテートの製造 本例は、コリネバクテリウム・オキシダンスを含有する
全細胞を用いる、プロキラルジオールからの光学活性モ
ノアセテートの製造を具体的に説明するものである。

【００５３】２−アリル−１，３−プロパンジオール（
０．１１６ｇ、１ミリモル）、コリネバクテリウム・オ
キシダンスを含有する全細胞（０．１ｇ）及びビニルア
セテート飽和水（２０ｍｌ）の混合物を３０℃、　３０
０ＲＰＭ　で４８時間振とうした。２−アリル−１，３
−プロパンジオールの光学活性モノアセテートを８５％
の収率で得た。構造決定を核磁気共鳴により行った。

【００５４】例５：部分精製酵素を用いるポリオールの
モノアセテートの製造 本例は、第一及び第二水酸基の両者を含むポリオール中
の第一アルコールの化学選択的エステル化を具体的に説
明するものである。用いた基質はＤ−グルカールであり
、次の構造式を有する：

【００５５】

【化１】

【００５６】反応は、ビニルアセテート飽和水中のＤ−
グルカール溶液（１００ミリモル濃度）４５８μｌ及び
酵素溶液３２μｌを用いて上記したように行った。４８
時間後、Ｄ−グルカールのモノアセテートの収率は１３
．４％であった。構造及び質量決定はガスクロマトグラ
フィ及び質量分析法により行った。

【００５７】例６：部分精製酵素を用いるポリオールの
モノアセテートの製造 本例は、第一及び第二水酸基の両者を含むポリオール中
の第一アルコールの化学選択的エステル化を具体的に説
明するものである。用いた基質はＤ−ガラクタールであ
り、次の構造を有する：

【００５８】

【化２】

【００５９】反応は、ビニルアセテート飽和水中のＤ−
ガラクタール溶液（１００ミリモル濃度）４５８μｌ及
び酵素溶液３２μ１　を用いて上記したようにして行っ
た。４８時間後、Ｄ−グルカールのモノアセテートの収
率は３２％であった。構造及び質量決定はガスクロマト
グラフィ、質量分析法及び核磁気共鳴により行い、第一
水酸基のみがアシル化されたことを示していた。

【００６０】

【発明の効果】本発明方法は、実質的に水性媒体を用い
ることによる、ジオール及びポリオールからのアセテー
トエステルの製造のための非有機溶媒系を提供する。本
発明によれば、アルコール基質が有機溶媒に特に溶解性
でない状況において親水性媒体を用いることが可能とな
る。

Claims (2)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】　　実質的に水性環境中、コリネバクテリ
   ウム・オキシダンス（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ
   　ｏｘｙｄａｎｓ）由来の生物触媒の存在下でジオール
   又はポリオールをアセテートエステルと反応させること
   を含んでなる方法。
2. 【請求項２】　　実質的に水性環境中、コリネバクテリ
   ウム・オキシダンス由来の生物触媒の存在下でジオール
   をアセテートエステルと反応させる工程を含んでなる方
   法であって、前記ジオールが構造： ＨＯ−ＣＨ２−Ｑ−ＣＨ２−ＯＨ　 前記式中、Ｑは分子量が０〜２００　の、二価の脂肪族
   部分、脂環式部分又は芳香族部分である、を有するもの
   である方法。