JPH0427996B2 - - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】

本発明は、新規なペプチドに関する。さらに詳
しくは、本発明の式 Ｈ−Lys⁵³−Lys−Glu⁵⁵−Asp−Asn−Vsl−Leu
−Val⁶⁰−Glu−Ser−His−Glu−Lys⁶⁵−Ser−
Leu−Gly−Glu−Ala⁷⁰−Asp−Lys−Ala−Asp
−Val⁷⁵−Asn−Val−Leu−Thr−Lys⁸⁰−Ala−
Lys−Ser−Gln⁸⁴−OH ［１］ で表わされるペプチドまたはその塩に関する。 本発明の新規な式［］で表わされるペプチド
（以下単にペプチドという）またはその塩は、式
［］で示されるアミノ酸順序に個々のアミノ酸
又は低級ペプチドを縮合して構成せしめ、縮合反
応の最終段階で側鎖の官能基の保護基を脱離する
ことにより得られる。縮合反応自体はペプチド合
成のための常法手段に従つて、保護基の着脱、縮
合反応を繰り返すことにより行なわれる。即ち、
本目的化合物の原料ならびにすべての中間体の製
造において使用される各種保護基はペプチド合成
で既知なもの、従つて加水分解、酸分解、還元、
アミノリシスまたはヒドラジノリシスのような既
知手段によつて容易に脱離することのできる保護
基が用いられる。このような保護基はペプチド合
成化学の分野の文献ならびに参考書に記載されて
いる。 例えばアミノ基に使用する保護基としては、ホ
ルミル基、トリフルオロアセチル基、フタロイル
基、ｐ−トルエンスルホニル基、ｏ−ニトロフエ
ニルスルフエニル基などのアシル基、ベンジルオ
キシカルボニル基、ｏ（またはｐ）−ブロモベンジ
ルオキシカルボニル基、ｏ（またはｐ）−クロロベ
ンジルオキシカルボニル基、ｐ−ニトロベンジル
オキシカルボニル基、ｐ−メトキシベンジルオキ
シカルボニル基などのベンジルオキシカルボニル
基、トリクロロエチルオキシカルボニル基、ｔ−
ブチルオキシカルボニル基、ｔ−アミルオキシカ
ルボニル基などの脂肪族オキシカルボニル基、２
−フエニル−イソプロポキシカルボニル基、２−
トリル−イソプロポキシカルボニル基、２−ｐ−
ジフエニル−イソプロポキシカルボニル基などの
アラルキルオキシカルボニル基などがある。また
これらアミノ基をベンゾイルアセトン、アセチル
アセトンなどの１，３−ジケトンと反応させるこ
とによつて得られるエナミンの形成により保護す
ることができる。 カルボキシル基は、アミド形成、ヒドラチド形
成またはエステル化によつて保護される。即ちア
ミド基は３，４−ジメトキシベンジル基、ビス−
（ｐ−メトキシフエニル）メチル基などによつて
置換される。ヒドラチド基はベンジルオキシカル
ボニル基、トリクロロエチルオキシカルボニル
基、トリフルオロアセチル基、ｔ−ブチルオキシ
カルボニル基、トリチル基、２−ｐ−ジフエニル
−イソプロポキシカルボニル基などによつて置換
される。エステル基はメタノール、エタノール、
ｔ−ブタノール、シアノメチルアルコールなどの
アルカノール、ベンジルアルコール、ｐ−ブロモ
ベンジルアルコール、ｐ−クロロベンジルアルコ
ール、２，６−ジクロロベンジルアルコール、ｐ
−メトキシベンジルアルコール、ｐ−ニトロベン
ジルアルコール、ベンズヒドリルアルコール、ベ
ンゾイルメチルアルコール、ｐ−ブロモベンゾイ
ルメチルアルコール、ｐ−クロロベンゾイルメチ
ルアルコールなどのアラルカノール、２，４，６
−トリクロロフエノール、２，４，５−トリクロ
ロフエノール、３，４，５−トリクロロフエノー
ル、ペンタクロロフエノール、ｐ−ニトロフエノ
ール、２，４−ジニトロフエノールなどのフエノ
ール、チオフエノール、ｐ−ニトロチオフエノー
ルなどのチオフエノールなどによつて置換され
る。 前記セリンおよびスレオニンの水酸基は、例え
ばエステル化またはエーテル化によつて保護する
ことができる。このエステル化に適する基として
は、例えばアセチル基、ベンゾイル基、ベンジル
オキシカルボニル基、エチルオキシカルボニル基
などである。またエーテル化に適する基としては
例えばベンジル基、テトラヒドロピラニル基、ｔ
−ブチル基である。これらの水酸基の保護には、
２，２，２−トリフルオロ−１−ｔ−ブチルオキ
シカルボニルアミノエチル基、２，２，２−トリ
フルオロ−１−ベンジルオキシカルボニルアミノ
基も適する。しかしながら、これらの水酸基を必
ずしも保護する必要はない。 前記ヒスチジンのイミノ基を保護するのに使用
する基としては、例えばベンジル基、トリチル
基、ベンジルオキシカルボニル基、トシル基、
２，２，２−トリフルオロ−１−ｔ−ブチルオキ
シカルボニルアミノエチル基、２，２，２−トリ
フルオロ−１−ベンジルオキシカルボニルアミノ
エチル基などであるが、このイミノ基を必ずしも
保護する必要はない。 本発明の式［］で表わされるペプチドの合成
においては、個々のアミノ酸もしくは低級ペプチ
ドの縮合は、例えば保護されたα−アミノ基およ
び活性化末端カルボキシル基をもつアミノ酸また
はペプチドと遊離α−アミノ基および保護された
末端カルボキシル基をもつアミノ酸またはペプチ
ドとを反応させるか、あるいは活性化α−アミノ
基および保護された末端カルボキシル基をもつア
ミノ酸またはペプチドと遊離の末端カルボキシル
基および保護されたα−アミノ基をもつアミノ酸
またはペプチドを反応させることにより実施する
ことができる。 この場合カルボキシル基は、アジド、酸無水
物、酸イミダゾリドまたは活性エステル、例えば
シアノメチルエステル、チオフエニルエステル、
ｐ−ニトロチオフエニルエステル、ｐ−メタンス
ルホニルフエニルエステル、チオジルエステル、
ｐ−ニトロフエニルエステル、２，４−ジニトロ
フエニルエステル、２，４，５−トリクロロフエ
ニルエステル、２，４，６−トリクロロフエニル
エステル、ペンタクロロフエニルエステル、Ｎ−
ヒドロキシコハク酸イミドエステル、Ｎ−ヒドロ
キシフタル酸イミドエステル、８−ヒドロキシキ
ノリンエステルまたはＮ−ヒドロキシピペリジン
エステルなどに変換することによつて、あるいは
カルボジイミド、Ｎ，N′−カルボニル−ジイミ
ダゾールまたはイソオキゾリウム塩、例えばウツ
ドワード反応剤などを使用して反応させることに
よつて活性化することができる。 本発明において好ましい縮合方法は、カルボジ
イミド法、アジド法、活性エステル法および無水
物法である。縮合の各段階では、ラセミ化が起ら
ない方法またはラセミ化が最小になる方法を用い
るのが望ましく、好ましくはアジド法、活性エス
テル法、Wunsch法［Z.Naturforsch.，21b，426
（1966）］またはGeiger法［Chem.Ber.，103788
（1970）］とりわけ縮合剤としてＮ−エチル−
N′−３−ジメチルアミノプロピル−カルボジイ
ミド（WSCI）を用いる変法などを用いる。 縮合順序は式［］で示されるアミノ酸順序で
あれば、如何なる順序からも合成し得るが、Ｃ−
末端側から合成するのが有利である。 例えば保護されたペプチド（65−84）は、Ｃ未
端フラグメント69−84とＮ未端フラグメント65−
68をWSCIを用いるGeiger変法による方法で縮合
するのがよい。Ｎ末端フラグメント65−68は、フ
ラグメント66−68と65番目のアミノ酸を活性エス
テル法又はWSCIを用いるGeiger変法により縮合
するのがよい。 またＣ末端フラグメント69−84は、フラグメン
ト72−84に順次71番目のアミノ酸、70番目のアミ
ノ酸、69番目のアミノ酸を活性エステル法または
WSCIを用いるGeiger変法により縮合するのがよ
い。フラグメント72−84は、フラグメント77−84
に順次76番目のアミノ酸、75番目のアミノ酸、74
番目のアミノ酸およびフラグメント72−73を活性
エステル法またはWSCIを用いるGeiger変法によ
り縮合するのがよい。フラグメント77−84は、フ
ラグメント82−84とフラグメント77−81をWSCI
を用いるGeiger変法により縮合するのがよい。 保護されたペプチド（62−84）は、前述のＣ末
端フラグメント69−84とＮ末端フラグメント62−
68をWSCIを用いるGeiger変法により縮合するの
がよい。フラグメント62−68は、フラグメント65
−68に64番目のアミノ酸、フラグメント62−63を
活性エステルまたはWSCIを用いるGeiger変法及
びアジド法により縮合せしめるのがよい。 また保護されたペプチド（53−84）は、Ｃ末端
フラグメント55−84とＮ末端フラグメント53−54
をWSCIを用いるGeiger変法による方法で縮合す
るのがよい。Ｃ未端フラグメント55−84は、前述
の保護されたペプチド（62−84）に61番目のアミ
ノ酸を縮合させて得られたフラグメント61−84と
フラグメント59−60に58番目のアミノ酸、57番目
のアミノ酸を縮合して得られたフラグメント57−
60をWSCIを用いるGeiger変法による方法で縮合
し、56番目のアミノ酸、55番目のアミノ酸を順次
活性エステル法により縮合するのがよい。 上記のペプチドの合成に際して、その末端カル
ボキシル基は、これを必ずしも保護しなければな
らないわけではない。例えばアジド法、活性エス
テル法によつて縮合させる場合には、保護しなく
てもよい。 しかしながら、これらの基を前記で述べたよう
なエステル化によつて、例えばメチルエステル、
エチルエステル、ベンジルエステルなどで保護す
ることもできる。また、これらのエステル基は、
例えばメチルエステル基はこれを希薄な水酸化ナ
トリウム水溶液で分裂し、またヒドラジドに変
え、またベンジルエステル基は無水弗化水素また
は水素添加分解によつて分裂することができる。
これらのペプチドのα−アミノ基は、これらを通
常の保護基、例えばベンジルオキシカルボニル
基、ｔ−ブトキシカルボニル基、ｔ−アミノオキ
シカルボニル基で保護されるが、ベンジルオキシ
カルボニル基は水素添加分解によつて脱離され、
ｔ−ブトキシカルボニル基、ｔ−アミルオキシカ
ルボニル基はトリフルオロ酢酸で脱離される。 セリンおよびスレオニンの水酸基はベンジル基
で、リジンのε−アミノ基はｏ−クロロベンジル
オキシカルボニル基で、保護するのが適する。こ
れらの保護基は無水弗化水素で脱離される。 こうして保護されたペプチド（53−84）が得ら
れる。これらの保護基は、好ましくは、酸分解、
例えは無水弗化水素の処理によつて一段階で脱離
され、式［］の目的化合物が得られる。 上記の目的化合物［］は、公知のペプチドを
精製する手段により精製することができる。例え
ばセフアデツクスLH−20、セフアデツクスＧ−
50、Dowexl、カルボキシメチルセルロース等の
担体を用いるカラムクロマトグラフイーにより行
うことができる。 本発明のペプチド［］は、その方法の条件に
より塩基またはその塩の形で得られる。通常は酢
酸の如き有機酸との塩の形で保存され得る。 本発明のペプチド［］を抗原として得られる
抗体または本ペプチド［］を抗原とする免疫反
応により、エンザイムイムノアツセイ（EIA）、
ラジオイムノアツセイ（RIA）を利用して、ヒト
副甲状腺ホルモン（ｈ−PTH）の濃度を測定し
得るものである。 まず本発明の式［］にて表わされるペプチド
の免疫反応における有用性を述べる。 (1) 抗体産生用ペプチドおよび抗体の作成 〔BSA−［Cys⁴⁵］−ペプチド（45−84）結合物
の調製法〕 BSA（牛血清アルブミン）71.5mgを1mMEDTA
含有100mMリン酸緩衝液（PH8.0）25mlに溶解
し、これに５，5′−ジチオビス（２−ニトロ安息
香酸）436μｇを加え、37℃で15分間反応させ、
遊離の−SH基を保護した。反応液に３−（2′−ベ
ンゾチアゾリル−ジチオ）プロピオン酸スクシン
イミドエステル7.59mg含有するジメチルホルムア
ミド溶液３mlを加え、５℃で１時間反応させた。
酢酸でPH5.0に調整後、反応液をセフアデツクス
Ｇ−25（45×70cm）のカラムに添加し、50mM酢
酸緩衝液（PH5.0）でゲルろ過を行つた。その素
通り画分を回収し、BSAのアミノ基に３−（2′−
ベンゾチアゾリル−ジチオ）・プロピオニル基を
導入した誘導体（BSAIモルに対し、5.67モル結
合）を得た。 次いで、この誘導体含有液のPHを7.0に調整後、
［Cys⁴⁵］−ペプチド（45−84）10.85mgを加え、室
温下24時間撹拌反応した。反応液を蒸留水に対し
透析を行ない、透析内液を凍結乾燥し、BSA−
［Cys⁴⁵］−ペプチド（45−84）結合物（結合モル
比１：5.17）を得た。 〔抗体の作成法］ ペプチド（46−84）、ペプチド（51−84）、ペプ
チド（53−84）の各抗原は500μｇを、BSA−
［Cys⁴⁵］−ペプチド（45−84）は１mg（［Cys⁴⁵］−
ペプチド（45−84）として約250μｇ）をそれぞ
れ、0.15MNaCl含有10mMリン酸緩衝液（PH7.4）
0.5mlに溶解し、これにフロイント・コンプリー
トアジユバンド（Freunds Complete Adjuvant）
0.5mlを加えて充分混和して乳剤を得た。モルモ
ツト一匹に得られた乳剤１mlを四肢沓の皮中、お
よび背中の皮下数カ所に注射した。10日おきに同
量の乳剤を５回皮下注射し、最終免疫より10日目
に心臓穿刺によりその全血を採取し、室温に１時
間放置し、凝固せしめた後、3000rpmで５分間遠
心してペプチド（４−84）、ペプチド（51−84）、
ペプチド（53−84）、およびBSA−［Cys⁴⁵］−ペ
プチド−（45−84）に対する各抗血清を得た。 (2) 標識用ペプチド 〔β−ガラトシダーゼ−［Cys⁴⁵］−ペプチド
（45−84）の調製法〕 ［Cys⁴⁵］−ペプチド（45−84）１mgを
lmMEDTA含有50mMリン酸緩衝液（PH7.0）１
mlに溶解し、これにＮ−〔２−（2′−ピリジル−ジ
チオ）エチル〕−３−（2′−ベンゾチアゾリル−ジ
チオ）プロピオンアミド165.3μｇを含有するジメ
チルホルムアミド溶液165.3μを加えて、５℃で
２時間反応せしめた。反応液を酢酸でPH5.0に調
整した後、セフアデツクスＧ−15（15×40cm）の
カラムに添加し、50mM酢酸緩衝液（PH5.0）で
ゲルろ過を行つた。その素通り画分を回収し、
〔Cys（2′−ピリジル−Ｓ−Ｓ−（CH₂）₂−NH−CO
−（CH₂）₂−Ｓ）⁴⁵〕ペプチド（45−84）誘導体を
得た。 次いでこの誘導体38.9μｇを含有する100mMリ
ン酸緩衝液（PH80.）２mlに、β−ガラクトシダ
ーゼ２mgを加え、室温で３時間反応せしめた。反
応液をセフアデツクスＧ−150（1.5×90cm）のカ
ラムに添加し、0.15MNaCl含有10mMリン酸緩
衝液（PH7.4）でゲルろ過を行ないその素通り画
分を回収し、β−ガラクトシダーゼ［Cys⁴⁵］−ペ
プチド（45−84）の結合物（純度94％）を得た。 〔¹²⁵I−標識物の調製法〕 反応用試験管に、2mCiの放射活性を有する¹²⁵I
−NaIを含有する500mMリン酸緩衝液（PH7.5）
50μ、［Tyr⁴⁵］−ペプチド（45−84）、［Tyr⁵⁰］
−ペプチド（50−84）、［Tyr⁵²］−ペプチド（52
−84）、［Tyr⁶⁴］−ペプチド（64−84）の各々を
2μｇを含有する50mMリン酸緩衝液（PH7.5）10μ
、およびクロラミンT20μｇを含有する50mM
リン酸緩衝液（PH7.5）20μを加えて、30秒間撹
拌反応せしめた。次いで、１％ヨウ化カリウム水
溶液10μ、および５％人血清アルブミン含有
0.1N酢酸0.5mlを加えた後、セフアデツクスＧ−
25（1.0×50cm）のカラムに反応液を添加し、
0.15MNaClを含有する10mMリン酸緩衝液（PH
7.4）でゲルろ過を行ない末反応の¹²⁵I−NaIを除
去して、¹²⁵I−［Tyr⁴⁵］−ペプチド（45−84）、¹²⁵I
−［Tyr⁵⁰］−ペプチド（50−84）、¹²⁵I−［Tyr⁵²］−
ペプチド（52−84）、および¹²⁵I−［Tyr⁶⁴］−ペプ
チド（64−84）の各々標識化合物を得た。 得られた¹²⁵I−［Tyr⁴⁵］−ペプチド（45−84）
標識化合物の比活性は、540μCi／μｇ、反応収
率は76.5％であり、¹²⁵I−［Tyr⁵⁰］−ペプチド（50
−84）標識化合物の比活性は535μCi／μｇ、反
応収率75.5％であり、¹²⁵I−［Tyr⁵²］−ペプチド
（52−84）標識化合物の比活性は560μCi／μｇ、
反応収率74.8％であり、¹²⁵I−［Tyr⁶⁴］−ペプチド
（64−84）標識化合物の比活性は555μCi／μｇ、
反応収率は77.3％であつた。また同様にｈ−
PTH（１−34）やウシ−PTH（１−84）（抽出物）
を用いて標識した結果に比べて比活性で２〜３
倍、反応収率で３〜４倍良好であつた。 (3) 免疫反応 〔抗血清の免疫反応性〕 EIAによる抗体力価の測定 前述の各抗血清を免疫反応用媒体（0.25％
BSA、3mMEDTA、0.1％NaN₃、0.15MNaClを
含有する10mMリン酸緩衝液（PH7.4）を用いて、
200、400、800、1600、3200、6400、12800、
25600倍に希釈した溶液100μ、β−ガラクトシ
ダーゼ［Cys⁴⁵］−ペプチド（45−84）液
（［Cys⁴⁵］−ペプチド（45−84）として約20pg含
有）100μ、および免疫反応用媒体100μを小
試験管に加え、５℃にて24時間反応させ、次いで
モルモツト正常血清の100倍希釈液、100μ抗モ
ルモツトγ−グロブリン血清（ウサギ）の10倍希
釈液100μを加えてさらに５℃で24時間反応さ
せた。反応液に0.5MNaCl3mlを加えた後、
3000rpmで15分間遠心分離して、その沈澱物を回
収した。次いでこの沈澱物にβ−ガラクトシダー
ゼ活性測定液〔ｏ−ニトロフエニール−β−Ｄ−
ガラクトピラノシド５mg／mlを有する0.1％BSA、
1mMMgCI₂、0.1％NaN₃、0.15MNaClを含有す
る10mMリン酸緩衝液（PH6.7）85部、および
200mMメルカプトエタノール含有メタノール液
15部よりなる溶液〕200μを加えて、37℃で60
分間反応させた。反応終了後、反応停止液
［100mMグリシン−NaOH緩衝液（PH11.0）〕を
2.3mlを加え、反応を停止させ、反応液の420nm
における吸光度を測定し、抗血清の各希釈濃度に
おけるβ−ガラクトシダーゼ［Cys⁴⁵］−ペプチド
（45−84）との免疫反応による結合率を求めた。
3200倍希釈液における結果を第１表に示すが、他
の希釈倍数の濃度においても同様の傾向を示すも
のであつた。

【表】 その結果、いずれの抗原も、特異的な抗体を産
生しうる有用な免疫抗原であることが判明した。 また後述の各種ｈ−PTH関連物質との免疫反
応性から判断した結果、ｈ−PTHのＣ末端に特
異的な抗体を産生し得る抗原であることが明らか
である。 ¹²⁵I−標識物との免疫反応性 EIA系での測定の高力価を示した３種の抗血清
〔抗ペプチド（46−84）；No.１−(A)、抗ペプチド
（53−84）；No.３−(B)、および抗BSA−［Cys⁴⁵］−
ペプチド（45−84）；No.１−(C)〕を用い、各¹²⁵I
−標識物との免疫反応性を調べた。 前記３種血清を免疫反応用媒体〔0.5％BSA含
有50mMベロナール緩衝液（PH8.0）〕で、200、
400、800、1600、3200、6400、12800、25600倍で
希釈した溶液100μ：各々¹²⁵I−標識物（0.01μci
の放射活性を有する各標識体含有）100μ、お
よび免疫反応用媒体100μを小試験管に加え、
５℃にて45時間反応させ、次いでモルモツト正常
血清の100倍希釈液100μ、および抗モルモツト
γ−グロブリン血清ウサギの10倍希釈液100μ
加えて、さらに５℃で24時間反応を行なつた。反
応液を3000rpmで15分間遠心分離して、沈澱物を
回収し、その沈澱物の放射活性をγ−カウンター
を用いて測定し、各希釈濃度における抗血清との
各標識物との免疫反応による結合率を求めた。
6400倍希釈液における結果を第２表に示すが、他
の希釈倍数の濃度においても同様の傾向を示すも
のであつた。

【表】 その結果、いずれの標識抗原もｈ−PTHのＣ
末端特異抗体と良好な反応性を示すものであり、
RIAの標識抗原として有用なものであることが認
められた。 (4) 各種ｈ−PTH関連物質との免疫反応性 〔ｈ−PTH（１−84）の抽出・精製〕 ｈ−PTH（１−84）は、副甲状線機能充進症の
患者より、その副甲状を摘出し、Keutmann等の
方法（A.C.S.，17，26，1978）に従い、抽出・精
製をした。 〔天然ｈ−PTH（53−84）の調製法〕 上記した精製ｈ−PTH（１−84）をトリプシン
消化し、Keutmann等の方法（A.C.S.，17，26，
1978）に従い調製した。 〔合成［Asp⁷⁶］−ｈ−PTH（53−84）〕 合成［Asp⁷⁶］−ｈ−PTH（53−84）は、特願昭
53−187686号明細書に従い合成した。 〔免疫交叉性の測定〕 各種ｈ−PTH関連物質（天然ｈ−PTH（１−
84）、天然ｈ−PTH（53−84）、合成［Asp⁷⁶］−ｈ
−PTH（53−84）、本発明のペプチド（53−84）
をそれぞれ0.2〜2000fmole含有）溶液100μ、β
−ガラクトシダーゼ−［Cys⁴⁵］ペプチド（45−
84）（［Cys⁴⁵］ペプチド（45−84）として約10pg
含有）液100μ、および抗血清希釈液（Ａは、
15000倍希釈、Ｂは5000倍希釈、Ｃは9000倍希釈
したものを用いた）100μを反応用試験管に加
え、５℃にて24時間反応させ、次いでモルモツト
正常血清の100倍希釈液100μ、抗モルモツトγ
−グロブリン血清（ウサギ）の10倍希釈液100μ
を加えて、さらに５℃で24時間反応させた。反
応液に0.5MNaCl3mmlを加えた後、3000rpmで15
分間遠心分離して、その沈澱物を回収した。次い
でその沈澱物にβ−ガラクトシダーゼ活性測定液
（前記）200μを加え37℃で120分間反応させた。
反応終了後、反応停止液（前記）を2.3ml加え、
反応液を停止させ、反応液の420nmにおける吸光
度を測定した。 その結果第１図（抗血清−Ａ）、第２図（抗血
清−Ｂ）、第３図（抗血清Ｃ）に示す通りであり、
各図中、〇−〇は本発明のペプチド（53−84）の
場合を示し、●−●は天然ｈ−PTH（53−84）の
場合を示し、△−△は合成［Asp⁷⁶］−ｈ−PTH
（53−84）の場合を示し、□−□は、天然ｈ−
PTH（１−84）の場合を示す。 以上の免疫反応などの結果から、本発明の式
［］で表わされる各種のペプチドは、84個のア
ミノ酸からなるペプチドホルモンであるｈ−
PTHのＣ末端側の血中濃度測定におけるPTH関
連疾患を診断するのに有用な試薬となるものであ
つた。 従つてまたこれらの各種ペプチドは、公知の
EIAやRIAにおける種々の定量手段、例えば競争
法やサンドイツチ法やこれらとの固相法や＝抗体
法との組合せを用いる手段にて適宜使用すればよ
い。さらにEIAにおいては、前記の標識化合物質
であるβ−ガラクトシダーゼの他の公知の種々の
酵素、例えばペルオキシターゼやアルカリホスフ
アターゼなどを標識として適宜選択使用して酵素
標識したペプチドを得ればよい。 次いで、本発明の実施例を挙げて具体的に述べ
るが本発明はこれによつて何んら限定されるもの
ではない。 尚、本明細書中に記載の略記号は次の意味を有
する。 Gln；Ｌ−グルタミン Ser；Ｌ−セリン Lys；Ｌ−リジン Ala；Ｌ−アラニン Thr；Ｌ−スレオニン Leu；Ｌ−ロイシン Val；Ｌ−バリン Asp；Ｌ−アスパラギン酸 Glu；Ｌ−グルタミン酸 Gly；グリシン His；Ｌ−ヒスチジン Asn；Ｌ−アスパラギン Arg；Ｌ−アルギニン Pro：Ｌ−プロリン Tyr；Ｌ−チロシン Cys；Ｌ−システイン BOC；ｔ−ブチルオキシカルボニル AOC；ｔ−アミルオキシカルボニル Ｚ−CI；Ｏ−クロロベンジルオキシカルボニ
ル Bzl；ベンジル Tos；トシル OMe；メチルエステル OEt；エチルエステル OBzl；ベンジルエステル OSU；Ｎ−ヒドロキシコハク酸イミドエステ
ル ONP；Ｐ−ニトロフエニルエステル PAC；フエナシルエステル Acm；アセトアミドメチル TosOH；Ｐ−トルエンスルホン酸 TFA；トリフルオロ酢酸 Et₃N；トリエチルアミン TBA；トリベンジルアミン NMM；Ｎ−メチルモルホリン HOBT；１−ヒドロキシベンゾトリアゾール DMF；ジメチルホルムアミド THF；テトラヒドロフラン NMP；Ｎ−メチル−２−ピロリドン MeOH；メタノール EtOH；エタノール BuCH；ブタノール エーテル；ジエチルエーテル WSCI；Ｎ−エチル、N′−３−ジメチルアミノ
プロピル−カルボジイミド HOBT；１−ヒドロキシベンゾトリアゾール 次に実施例および参考例をあげて本発明の製造
例を具体的に説明する。 尚、実施例中で使用した薄層クロマトグラフイ
ー（TLC）の担体および展開溶媒は次の通りで
ある。 担体；メルク社製シリカゲルＧ 展開溶媒； １；CHCI₃−MeOH−酢酸 （95：５：３） ２； 〃 （85：15：５） ３； 〃 （85：10：５） ４； 〃 （80：25：２） ５；ベンゼン−酢酸エチル （１：１） ６； 〃 （２：１） ７；CHCl₃−EtOH−酢酸エチル （５：２：５） ８；CHCl₃−EtOH−酢酸エチル （10：１：５） 担体；メルク社製セルロース 展開溶媒； ９；BuOH−ピリジン−酢酸−水
（２：２：２：３） 10；BuOH−ピリジン−酢酸−水
（１：１：１：２） 11；BuOH−ピリジン−酢酸−水
（15：10：３：12） また、アミノ酸分析の条件は次の通りである。 被検体を6N塩酸（保護ペプチドのときは、必
要によりアニソール10％添加）で110℃24〜45時
間封管中で加水分解し、これを減圧乾燥してアミ
ノ酸分析に供した。 参考例 １ ［Tyr⁶⁴］−ペプチド（65−84）；Ｈ−Tyr−
Lys−Ser−Leu−Gly−Glu−Ala−Asp−Lys
−Ala−Asp−Val−Asn−Val−Leu−Thr−
Lys−Ala−Lys−Ser−Gln−OH (1) Ｐ（83−84）；BOC−Ser（Bzl）−Gln−OBzl
[] BOC−Gln−OBzl81.4ｇ（0.242M）を
TFA270mlに溶かし、室温で45分間撹拌した後
TFAを減圧留去した。残渣にエーテルを加え、
生じた沈澱を集めた。これをDMF270mlに溶か
し、これにHOBT32.67ｇ（0.242M）、BOC−Ser
（Bzl）−OH67.35ｇ（0.242M）およびWSCI44.29
ml（0.242M）を加え、一夜撹拌した。反応後、
DMFを減圧下留去した。残渣を酢酸エチル440ml
に溶かし、1N塩酸、５％重曹水、水の順に洗洗
した。無水芒硝で乾燥し、減圧乾固した。酢酸エ
チル−ヘキサンより再結して ［］101.43ｇ（収率81.6％）を得た。 融点121〜123℃ TLC；Rf₇＝0.75 ［α］²⁷D−14.12（Ｃ＝1.0、DMF） 元素分析［C₂₇H₃₅O₇N₃として］ Ｃ％ Ｈ％ Ｎ％ 測定値 62.98 7.03 8.01 計算値 63.14 6.87 8.18 (2) Ｐ（82−84）；BOC−Lys（Ｚ−Cl）−Ser
（Bzl）−Gln−OBzl [2] ［１］98.87ｇ（192.5mM）をTFA440mlに加
え、室温で30分間撹拌した後、TFAを減圧留去
した。残渣をDMF330mlに溶かし、HOBT28.6
ｇ、BOC−Lys（Ｚ−Cl）−OHのDMF溶液
（BOC−Lys（Ｚ−Cl）−OH・TBA103.33ｇ（1.1
倍Ｍ）を酢酸エチル−1N塩酸で処理し、酢酸エ
チル層を無水芒硝で乾燥後、減圧乾固した。残渣
をDMF110mlに溶かす）およびWSCI83.72ml
（1.1倍モル）を加え、室温で２日間撹拌した。反
応後、DMFを減圧留去し、残渣に氷水を加え、
生じた沈澱を集めた。エタノールヘキサンで３回
再結して［２］111.06ｇ（収率71.2％）を得た。 TLC；Rf₁＝0.32、Rf₇＝0.76 融点；145〜147℃ ［α］²⁷D−13.1（Ｃ＝1.0、DMF） 元素分析［C₄₁H₅₂O₁₀N₅Clとして］ Ｃ％ Ｈ％ Ｎ％ 測定値 61.02 6.65 8.74 計算値 60.77 6.47 8.65 (3) Ｐ（80−81）；BOC−Lys（Ｚ−Cl）−Ala−
OMe ［３］ BOC−Lys（Ｚ−Cl）−OH・TBA234.24ｇを酢
酸エチルに懸濁し、1N塩酸、水の順に洗浄した。
無水芒硝で乾燥し、減圧乾固した後、DMF400ml
に溶かした。これにＨ−Ala−OMe・HCl67.0
ｇ、HOBT64.8ｇ、WSCI87.84mlを加え、室温で
一夜撹拌した。反応後、DMFを減圧留去し、残
渣を酢酸エチル２に溶かし、５％重曹水、1N
塩酸、水の順に洗浄した。無水芒硝で乾燥し、減
圧乾固した後、DMF400mlに溶かした。これにＨ
−Ala−OMe・HCl67.0ｇ、HOBT64.8ｇ、
WSCI87.84mlを加え、室温で一夜撹拌した。反応
後、DMFを減圧留去し、残渣を酢酸エチル２
に溶かし、５％重曹水、1N塩酸、水の順に洗浄
した。 無水芒硝で乾燥後、減圧乾固した。酢酸エチル
−ヘキサンより再結して［３］231.8ｇ（収率
96.6％）を得た。 融点；58〜60℃ TLC；Rf₁＝0.77 ［α］²⁷D−17.16（Ｃ＝1.0、DMF） 元素分析［C₂₃H₃₄O₇N₃Clとして］ Ｃ％ Ｈ％ Ｎ％ 測定値 54.96 6.78 8.56 計算値 55.25 6.85 8.40 (4) Ｐ（79−81）；BOC−Thr（Bzl）−Lys（Ｚ−
Cl）−Ala−OMe [4] ［３］174.99ｇ（0.35M）をTFA500mlに加え、
室温で50分間撹拌した。反応後、TFAを減圧留
去し、残渣を酢酸エチルに溶かした後、５％重曹
水、水の順に洗浄した。無水芒硝で乾燥後、減圧
乾固した。残渣をDMF400mlに溶かし、これに
HOBT49.95ｇ（1.05倍Ｍ）、BOC−Thr（Bzl）−
OH114.33ｇ（1.05倍Ｍ）およびWSCI67.7ml
（1.05倍Ｍ）を加え、室温で一夜撹拌した。反応
後、DMFを減圧留去し、残渣に氷水を加えた。
生じた沈澱を集め熱エタノールで４回再沈澱して
［４］99.31ｇを得た。 母液か減圧濃縮し、残渣をクロロホルムに溶か
し、５％重曹水（４回）、1N塩酸（２回）、水
（２回）の順に洗浄した。無水芒硝で乾燥後、減
圧乾固した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグ
ラフイー〔溶出溶媒クロロホルム−エタノール−
酢酸（５：１：５）〕により精製して［４］35.09
ｇ得た。不純物を含む区分は、次の追加合成の際
のカラムクロマトグラフイーの精製の際に合わせ
て用いた。次に［３］22.5ｇ（45mM）をTFA70
mlに加え、室温で45分間撹拌した。反応後、
TFAを減圧留去し、残渣をDMF50mlに溶かした
後、NMMでPH７に調節した。次いで、
HOBT6.68ｇ（1.1倍Ｍ）、BOC−Thr（Bzl）−
OH15.31ｇ（1.1倍Ｍ）、WSCI9.06ml（1.1倍Ｍ）
を加え、一夜撹拌した。反応後、DMFを減圧留
去し、残渣をクロロホルム200mlに溶かした後、
５％重曹水、1N塩酸、水の順に洗浄した。無水
芒硝で乾燥後、減圧乾固した。残渣を前の不純物
を含む区分と合わせてシリカゲルカラムクロマト
グラフイーにより精製した。相当する区分を減圧
乾固し、クロロホルム−ヘキサンで２回再沈澱を
行い、［４］48.80ｇを得た。 全量183.2ｇ 融点；132〜134℃ TLC；Rf₇＝0.85 元素分析［C₃₄H₄₇O₉N₄Clとして］ Ｃ％ Ｈ％ Ｎ％ 測定値 59.06 7.05 7.41 計算値 59.08 6.85 8.11 (5) Ｐ（77−78）；BOC−Val−Leu−OEt [5] BOC−Val−OH101.99ｇ（0.47M）、Ｈ−Leu
−OEt・HCl91.98ｇ（0.47M）、HOBT63.45ｇ、
WSCI86.01ml（0.47M）をTHF400mlに溶かし、
一夜撹拌した。反応後、THFを減圧留去し、残
渣を酢酸エチル400mlに溶かした後、５％重曹水、
1N塩酸、水の順に洗浄した。無水芒硝で乾燥後、
減圧乾固した。酢酸エチル−ヘキサンより再結し
て［５］153.7ｇ（収率91.2％）を得た。 融点；108〜110℃ TLC；Rf₁＝0.63 ［α］²⁷D−25.78（Ｃ＝1.0、DMF） 元素分析［C₁₈H₃₄O₅N₂として］ Ｃ％ Ｈ％ Ｎ％ 測定値 60.35 9.42 8.39 計算値 60.31 9.56 7.82 (6) Ｐ（77−78）；BOC−Val−Leu−OH [6] ［５］34.43ｇ（0.375M）をエタノール400ml
に溶かし、氷冷下1N−NaOH412.5ml（1.1倍Ｍ）
を加え、撹拌した。１時間半後、1N−
NaOH37.5（0.1倍Ｍ）を追加し、１時間撹拌し
た。反応液に1N塩酸75mlを加え、さらに少量の
塩酸でPH５とした。エーテルで洗浄し、水層に
1N塩酸400mlを加えて、酢酸エチルで抽出した。
酢酸エチル層を乾燥後、減圧乾固し、酢酸エチル
−ヘキサンより再結して［６］119.66ｇ（収率
96.6％）を得た。 TLC；Rf₁＝0.35、Rf₇＝0.58 元素分析［C₁₆H₃₀O₅N₂として］ Ｃ％ Ｈ％ Ｎ％ 測定値 57.83 9.40 8.78 計算値 58.16 9.15 8.48 (7) Ｐ（77−81）；BOC−Val−Leu−Thr（Bzl）
−Lys（Ｚ−Cl）−Ala−OMe [7] ［４］182ｇ（0.263M）をTFA500mlに加え室
温で50分間撹拌した。反応後、TFAを減圧留去
し、残渣にヘキサンを加えた。生じた油状物をデ
カンテ−シヨンにより溶媒と分離し、DMF350ml
に溶かした。これを冷却下NMMでPH6.5に調節
し、HOBT42.61ｇ（1.2倍Ｍ）、［６］104.28ｇ
（1.2倍Ｍ）およびWSCI57.8ml（1.2倍Ｍ）を加え、
室温で１時間半撹拌すると固化し、DMF200ml追
加しても撹拌不能のため、一夜室温で放置し、次
いで30℃で４時間放置した。反応物に氷水を加
え、沈澱物を集めた。これをクロロホルム2.5
に溶かし、５％重曹水、1N塩酸、水の順に洗浄
した。クロロホルムを減圧留去し、残渣をクロロ
ホルム−エーテルヘキサンより再結して［７］
224.68ｇ（収率94.9％）を得た。 融点；219〜221℃ TLC；Rf₁＝0.15、Rf₈＝0.68 ［α］²⁷D−11.72（Ｃ＝1.0、DMF） 元素分析［C₄₅H₆₇O₁₁N₆Clとして］ Ｃ％ Ｈ％ Ｎ％ 測定値 59.80 7.56 9.83 計算値 59.82 7.48 9.30 (8) Ｐ（77−81）；BOC−Val−Leu−Thr（Bzl）
−Lys（Ｚ−Cl）−Ala−OH [8] ［７］72.3ｇ（80mM）をクロロホルム720ml
に溶かし、冷却下1N−KCHの90％エタノール溶
液800mlを加え、０〜５℃で40分間撹拌した。次
いで、冷却下1N塩酸800mlを加え、クロロホルム
500mlを追加して抽出した。クロロホルム層を水
洗し、無水芒硝で乾燥後、減圧乾固した。残渣を
シリカゲルカラムクロマトグラフイー〔溶出溶媒
クロロホルム−エタノール−酢酸エチル（５：
１：５）〕により精製した。相当する区分を減圧
乾固してクロロホルム−メタノール−エーテル−
ヘキサンより３回再結して［８］を得た。 上記の操作を３回繰り返し、［７］計216.9ｇを
加水分解して、［８］156.07ｇ（収率73.1％）を
得た。 融点180〜183℃ TLC；Rf₃＝0.69 ［α］²⁷D−7.54（Ｃ＝1.0、DMF） 元素分析［C₄₄H₆₅O₁₁N₆Cl・１／2H₂Oとして］ Ｃ％ Ｈ％ Ｎ％ 測定値 58.94 7.67 9.64 計算値 58.82 7.40 9.35 アミノ酸分析〔試料3.1mg／１ml6N塩酸＋0.1ml
アニソール、45時間、110℃加水分解〕； Thr0.96(1)、Alal、Val0.93(1)、Leu0.94(1)、
Lys1.01(1) (9) （77−84）；BOC−Val−Leu−Thr（Bzl）−
Lys（Ｚ−Cl）−Ala−Lys（Ｚ−Cl）−Ser（Bzl）
−Gln−OBzl [9] ［２］104.5ｇ（129mM）をTFA400mlに加え、
室温で40分間撹拌した。反応後、TFAを減圧留
去し、残渣にエーテルを加えた。生じた沈澱物を
集め、DMF500mlに溶かした。これにHOBT20.9
ｇ（1.2倍Ｍ）、［８］137.7ｇ（1.2倍Ｍ）、
WSCI28.3ml（1.2倍Ｍ）を加え、NMMでPHに調
節し、一夜撹拌した。反応液がゲル状となつたた
め、さらにDMF150mlおよびWSCI12.8mlを追加
し、一夜撹拌した。反応液に氷水を加え、析出し
た沈澱物を集め、熱メタノールで５回洗浄処理し
て［９］185.36ｇ（収率90.68％）を得た。 TLC；Rf₂＝0.85 ［α］²⁷D−12.84（Ｃ＝1.0、DMF） 元素分析［C₈₀H₁₀₇O₁₈N₁₁Cl₂として］ Ｃ％ Ｈ％ Ｎ％ 測定値 60.61 7.04 10.38 計算値 60.75 6.82 9.74 アミノ酸分析〔試料3.1mg／１ml6N塩酸＋0.1ml
アニソール、110℃、45時間加水分解〕； Thr0.93(1)、Ser0.91(1)、Glu1.01(1)、Alal、
Val0.74(1)、Leu0.75(1)、Lys2.01(2) (10) Ｐ（76−84）；BOC−Asn−Val−Leu−Thr
（Bzl）−Lys（Ｚ−C1）−Ala−Lys（Ｚ−Cl）−
Ser（Bzl）−Gln−OBzl [10] ［９］174.0ｇ（110mM）をTFA550mlに加え、
室温で60分撹拌した後、TFAを減圧留去した。
残渣にエーテルを加え、生じた沈澱物を集め、
DMF950mlに溶かした。これに、BOC−Asn−
ONP77.7ｇ（2.0倍Ｍ）を加え、NMMでPH7.5に
調整しながら48時間、室温で撹拌した。反応後
DMFを減圧留去し、残渣に氷水を加えた。生じ
た沈澱を集め、熱メタノールで、洗浄処理した。
冷却後、不溶物を集めた。さらに２回、同様の処
理を行い、［10］179.6ｇ（収率96.3％）を得た。 融点；248〜251℃ TLC；Rf₂＝0.65 Rf₃＝0.40 元素分析［C₈₄H₁₁₃O₂₀N₁₃Cl₂として］ Ｃ％ Ｈ％ Ｎ％ 測定値 59.23 6.89 10.88 計算値 59.50 6.72 10.74 (11) Ｐ（75−84）；BOC−Val−Asn−Val−Leu
−Thr（Bzl）−Lys（Ｚ−Cl）−Ala−Lys（Ｚ−
Cl）−Ser（Bzl）−Gln−OBzl [11] ［10］169.58ｇ（0.1M）をTFA500mlに加え、
室温で60分間撹拌した後、TFAを減圧留去する。
残渣にエーテルを加え、生じた沈澱物を集め、
DMF1.3に溶かした。これに撹拌しながら
HOBT17.6ｇ（1.3倍Ｍ）、BOC−Val−OH28.2
ｇ（1.3倍Ｍ）2.4−ジニトロフエノール23.9ｇ
（1.3倍Ｍ）、およびWSCI23.8ml（1.3倍Ｍ）を加
え、NMMでPH７に調節した後、室温で撹拌し
た。１時間後に反応液がゲル状となつたため一夜
放置した。次いで、NMP400ml、WSCI23.8ml
（1.3倍Ｍ）を加えた。約10分間で再度ゲル状とな
り、室温で一夜放置した。反応後、氷と５％重曹
水を加え、生じた沈澱物を集め、水で３回洗浄し
た後、熱メタノールで４回洗浄処理して［11］
171.06ｇ（収率95.3％）を得た。 融点；256〜269℃ TLC；Rf₃＝0.36 元素分析［C₈₉H₁₂₂O₂₁N₁₄Cl₂・H₂Oとして］ Ｃ％ Ｈ％ Ｎ％ 測定値 59.14 6.71 10.86 計算値 58.96 6.89 10.82 アミノ酸分析〔試料3.1mg／１ml6N塩酸＋0.1ml
アニソール、48時間、110℃加水分解〕； Asp1.01(1)、Thr0.82(1)、Ser0.76(1)、Glu1.05(1)、
Ala1.03(1)、Leu1、Val1.85(2)、Lys2.15(2) (12) Ｐ（74−84）；BOC−Asp（OBzl）−Val−Asn
−Val−Leu−Thr（Bzl）−Lys（Ｚ−Cl）−Ala
−Lys（Ｚ−Cl）−Ser（Bzl）−Gln−OBzl [12] ［11］143.60ｇ（0.08M）に塩化メチレン100
ml、TFA450mlを加え、室温で40分間撹拌した
後、TFAを減圧留去した。残渣にエーテルを加
え、生じた沈澱物にDMF500mlとNMP1を加え
て溶かした。これに氷、５％重曹水を加え、生じ
た沈澱物を集め、充分水洗した後、乾燥した。こ
れにDMF500mlとNMP1の混液に溶かし、
BOC−Asp（OBzl）−OSU43.7ｇ（1.3倍Ｍ）、
HOBT1.14ｇ（0.13倍Ｍ）、NMM11.4ml（1.3倍
Ｍ）を加え、室温で一夜撹拌した。反応液を氷水
に加え、生じた沈澱物を集め、メタノールを加え
て加熱処理した。この処理を２回繰り返して
［12］149.5ｇ（収率93.4％）を得た。 TLC；Rf₃＝0.35 元素分析［C₁₀₀H₁₃₃O₂₄N₁₅Cl₂として］ Ｃ％ Ｈ％ Ｎ％ 測定値 60.01 6.79 10.91 計算値 60.05 6.70 10.50 アミノ酸分析〔6N塩酸／アニリール、110℃、
48時間〕；Asp1.90(2)、Thr0.88(1)、Ser0.75(1)、
Glu1.03(1)、Ala1.01(1)、Val1.95(2)、Leu1、
Lys2.09(2) (13) Ｐ（72−73）；BOC−Lys（Ｚ−Cl）−Ala−
OH [13] ［３］48.0ｇ（96mM）をエタノール100mlに
溶かし、これに０℃に冷却下1N−NaOH115.2ml
（1.2倍Ｍ）を加え、50分間撹拌した。反応後、
1N塩酸19mlを加えPH６に調節した後、35℃でエ
タノールを減圧留去した。残渣に酢酸エチル、氷
水、1N塩酸96mlを加えて抽出した。酢酸エチル
層を水洗し、無水芒硝で乾燥後、減圧乾固した。
残渣を酢酸エチル−ヘキサンより再結して［13］
45.90ｇ（収率98.4％）を得た。 融点；116〜119℃ TLC；Rf₇＝0.44 元素分析［C₂₂H₃₂O₇N₃Clとして］ Ｃ％ Ｈ％ Ｎ％ 測定値 54.57 6.91 8.95 計算値 54.37 6.64 8.65 (14) Ｐ（72−84）；BOC−Lys（Ｚ−Cl）−Ala−
Asp（OBzl）−Val−Asn−Val−Leu−Thr
（Bzl）−Lys（Ｚ−Cl）−Ala−Lys（Ｚ−Cl）−
Ser（Bzl）−Gln−OBzl [14] ［12］120.01（60mM）に塩化メチレン60ml、
TFA360ml加え、室温で55分間撹拌した後、
TFAを減圧留去した。残渣にエーテルを加え、
生じた沈澱物を集めた。これにDMF600mlと
NMP600mlを加えて溶かした。これを氷＋５％
重曹水に加えた。生じた沈澱物を濾取し、３回水
洗した後、メタノール、エーテルで洗浄後、乾燥
した。これにNMP1200mlとDMF600mlを加えて
溶かし、HOBT10.54ｇ（1.3倍Ｍ）、［13］37.92ｇ
（1.3倍Ｍ）、WSCI14.28ml（1.3倍Ｍ）を加え、室
温で３日間撹拌した。反応液を氷水に加え、生じ
た沈澱物を集め、水で３回洗浄後、熱メタノール
で２回洗浄した。次いでエーテルで洗浄した後、
乾燥して［14］135.83ｇ（収率95.6％）を得た。 元素分析［C₁₁₇H₁₅₅O₂₈N₁₈Cl₃として］ Ｃ％ Ｈ％ Ｎ％ 測定値 59.12 6.73 10.87 計算値 59.35 6.60 10.65 アミノ酸分析〔6N塩酸／アニソール、110℃、
48時間〕；Asp1.09(2)、Thr0.85(1)、Ser0.72(1)、
Glu1.02(1)、Ala1.95(2)、Val1.94(2)、Leu1、
Lys2.99(3) (15) Ｐ（71−84）；BOC−Asp（OBzl）−Lys（Ｚ
−Cl）Ala−Asp（OBzl）−Val−Asn−Val−
Leu−Thr（Bzl）−Lys（Ｚ−Cl）−Ala−Lys（Ｚ
−Cl）−Ser（Bzl）−Gln−OBzl [15] ［14］118.40ｇ（50mM）をTFA500mlに加え、
室温で55分間撹拌した後、TFAを減圧留去した。
残渣にエーテルを加え、生じた沈澱物を集め、
NMP700mlとDMF700mlを加えて溶かした。これ
を氷＋５％重曹水に加え、生じた沈澱物をろ取
し、水で３回、メタノールおよびエーテルで各１
回洗浄した。この沈澱物にNMP800mlとDMF800
mlを加えて溶かし、これに２，４−ジニトロフエ
ノール11.05ｇ（1.2倍Ｍ）、HOBT0.81ｇ（0.12倍
Ｍ）、BOC−Asp（OBzl）−OSU25.22ｇ（1.2倍
Ｍ）、NMM6.60ml（1.4倍Ｍ）を加え、室温で２
日間撹拌した。反応液にNMP120ml、DMF60ml
を追加して溶かし、BOC−Asp（OBzl）−
OSU4.20ｇ（0.2倍Ｍ）、NMM1.09ml（0.2倍Ｍ）
を加え、さらに２日間室温にて撹拌した。反応液
を氷水に加え、生じた沈澱物を集め、水洗した。
次いで、熱メタノールに懸濁し、冷却した後、ろ
取した。この操作を３回繰り返して［15］117.47
ｇ（収率91.3％）を得た。 元素分析［C₁₂₈H₁₆₆O₃₁N₁₉Cl₃として］ Ｃ％ Ｈ％ Ｎ％ 測定値 59.52 6.32 10.60 計算値 59.75 6.50 10.34 アミノ酸分析〔6N塩酸／アニソール、110℃、
48時間〕；Asp2.71(3)、Thr0.85(1)、Ser0.70(1)、
Glu1.01(1)、Ala1.95(2)、Val1.92(2)、Leu1、
Lys2.92(3) (16) Ｐ（70−84）；BOC−Ala−Asp（OBzl）−
Lys（Ｚ−C1）−Ala−Asp（OBzl）−Val−Asn
−Val−Leu−Thr（Bzl）−Lys（Ｚ−Cl）−Ala
−Lys（Ｚ−Cl）−Ser（Bzl）−Gln−OBzl [16] ［15］102.9ｇ（40mM）をTFA400mlに加え、
室温で70分間撹拌した後、TFAを減圧留去した。
残渣にエーテルを加え、生じた沈澱物を集め、
NMP600mlとDMF600mlを加えて溶かした後、５
％重曹水に加えた。生じた沈澱物を集め、水で３
回、メタノールで１回洗浄した。次いで、この沈
澱物にNMP720mlとDMF720mlを加えて溶かし、
これに２，４−ジニトロフエノール11.0ｇ（1.5
倍Ｍ）、HOBT0.54ｇ（0.1倍Ｍ）、BOC−Ala−
OSU17.18ｇ（1.5倍Ｍ）、NMM6.60ml（1.5倍Ｍ）
を加え、室温で一夜撹拌した。次いで、BOC−
Ala−OSU2.29ｇ（0.2倍Ｍ）、NMM0.88ml（0.2
倍Ｍ）を追加し、５日間室温で撹拌した。反応液
を氷水に加え、生じた沈澱物を集め、水で３回、
メタノールで２回洗浄して［16］98.90ｇ（収率
93.5％）を得た。 融点；280℃以上（分解） アミノ酸分析〔6N塩酸／アニソール、110℃、
48時間〕；Asp2.75(3)、Thr0.84(1)、Ser0.72(1)、
Glu1.01(1)、Ala2.80(3)、Val1.92(2)、Leu1、
Lys2.92(3) (17) Ｐ（69−84）；BOC−Glu（OBzl）−Ala−
Asp（OBzl）−Lys（Ｚ−Cl）−Ala−Asp（OBzl）
−Val−Asn−Val−Leu−Thr（Bzl）−Lys（Ｚ
−Cl）−Ala−Lys（Ｚ−Cl）−Ser（Bzl）−Gln−
OBzl [17] ［16］92.55ｇ（35mM）をTFA350mlに加え、
室温で60分間撹拌した後、TFAを減圧留去した。
残渣にエーテルを加え、生じた沈澱物を集め、
DMF600mlとNMP600mlを加えて溶かし、これを
５％重曹水＋氷に加えた。生じた沈澱物を集め、
水で３回、メタノールで１回洗浄した。これに
DMF600mlと800mlを加えて溶かし、これに２，
４−ジニトロフエノール7.73ｇ（1.2倍Ｍ）、
HOBT0.59ｇ（0.14倍Ｍ）、BOC−Glu（OBzl）−
OSU21.29ｇ（1.4倍Ｍ）、NMM5.4ml（1.4倍Ｍ）
を加え、室温で３日間撹拌した。次いでBOC−
Glu（OBzl）−OSU3.04ｇ（0.2倍Ｍ）にDMF60ml
＋NMP60mlを加えて溶かした溶液および
NMM0.77ml（0.2倍Ｍ）を加え、さらに室温で３
日間撹拌した。次いで先と同量のBOC−Glu
（OBzl）−OSUとNMMを加え、室温で一夜撹拌
した。反応後、反応液を氷水に加えて、生じた沈
澱物を集め、水で３回洗浄した、この沈澱物を熱
メタノールに懸濁し、冷却した後、ろ取した。こ
の操作を３回繰り返して［17］92.71ｇ（収率
92.5％）を得た。 アミノ酸分析〔6N塩酸／アニソール、110℃、
24時間〕；Asp2.72(3)、Thr0.85(1)、Ser0.76(1)、
Glu1.85(2)、Ala2.80(3)、Val1.93(2)、Leu1、
Lys2.95(3) (18) Ｐ（66−68）；BOC−Ser（Bzl）−Leu−Gly
−OBzl [18] BOC−Leu−OH・H₂O45.64ｇ、Ｈ−Gly−
OBzl・TosOH61.87ｇおよびHOBT24.87ｇを
THR200mlに溶かし、これに冷却下WSCI33.69ml
を滴下した後、室温で一夜撹拌した。反応液を減
圧濃縮して油状物を得た。これを酢酸エチル600
mlに溶かし、５％重曹水、1N塩酸、水で各々３
回洗浄する。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥
し、減圧乾固して油状物69.0ｇ（収率99％）を得
た。これを塩化メチレン10mlに溶かし、５℃に冷
却下TFA250mlを加えた後、撹拌しながら室温で
20分間反応させた。TFAを減圧下留去し、残渣
にDMF200mlを加え、０℃に冷却下NMMを加え
て中和した。これにHOBT20.7ｇ（0.19M）、
BOC−Ser（Bzl）−OH56ｇ（0.19M）および
WSCI34.8ml（0.19M）を加えた後、室温で一夜
撹拌した。DMFを減圧下留去し、残渣に酢酸エ
チルを加え、５％重曹水、1N塩酸、水の順に洗
浄した。無水硫酸マグネシウムで燥後、減圧濃縮
した。残渣にヘキサンを加え、生じた沈澱物を濾
取した。酢酸エチル−ヘキサンで再結晶した後、
酢酸エチル−エーテル−ヘキサンで再結晶して
［18］72.47ｇ（収率72.0％）を得た。 融点；112〜113℃ TLC；Rf₅＝0.55 元素分析［C₃₀H₄₁O₇N₃として］ Ｃ％ Ｈ％ Ｎ％ 測定値 65.06 7.75 7.36 計算値 64.84 7.44 7.56 (19) Ｐ（65−68）；BOC−Lys（Ｚ−Cl）−Ser
（Bzl）−Leu−Gly−OBzl [19] ［18］72.47ｇ（0.13M）に塩化メチレン20ml
を加え、５℃に冷却下TFA250mlを加えた後、室
温で20分間撹拌した。反応後TFAを減圧下留去
し、残渣にエーテルを加えた。生じた沈澱物を集
め、DMF100mlを加えた。これに５℃に冷却下
NMMを加えて中和した。 一方、BOC−Lys（Ｚ−Cl）−OH・TBA70ｇ
（0.143M）に酢酸エチル200mlを加え、1N塩酸、
水で２回洗浄した。酢酸エチル層を無水硫酸マグ
ネシウムで乾燥後、減圧濃縮した。得られた油状
物にDMF100mlを加え、BOC−Lys（Ｚ−Cl）−
OHのDMF溶液とした。 上記の中和したDMF溶液にHOBT19.3ｇ前記
で得たBOC−Lys（Ｚ−Cl）−OHのDMF溶液およ
びWSCI26.2ml（0.143M）を加え、室温で一夜撹
拌した。反応後、DMFを減圧下留去し、残渣に
酢酸エチル400mlを加え、５％重曹水で３回、1N
塩酸で２回、水で２回洗浄した。有機層を無水硫
酸マグネシウムで乾燥後、減圧濃縮した。残渣に
エーテルおよびヘキサンを加え、生じた沈澱物を
集め、酢酸エチル−メタノール−ヘキサンから再
結晶して［19］104ｇ（収率94.6％）を得た。 融点；128〜130℃ TLC；Rf₁＝0.51、Rf₂＝0.88 元素分析［C₄₄H₅₈O₁₀N₅Clとして］ Ｃ％ Ｈ％ Ｎ％ 測定値 61.96 7.02 7.91 計算値 62.00 6.86 8.22 アミノ酸分析〔1μM／6N塩酸／アニソール、
105℃、48時間〕；Ser0.92(1)、Gly0.98(1)、Leu1、
Lys0.99(1) (20) Ｐ（65−68）；BOC−Lys（Ｚ−C1）−Ser
（Bzl）−Leu−Gly−OH [20] ［19］85.3ｇにメタノール600mlを加え、５℃
で冷却下撹拌しながら、1N−NaOH120mlを加え
た後、室温で３時間撹拌した。反応後、５℃に冷
却下1N塩酸20mlを加えた後、メタノールを減圧
下留去した。残渣の水溶液に５℃に冷却下1N塩
酸100mlを加え、クロロホルム500mlで抽出した。
クロロホルム層を水洗し、無水芒硝で乾燥後、減
圧濃縮した。残渣にヘキサンを加え、生じた沈澱
物を集め、酢酸エチルから再結晶して［20］
66.21ｇ（収率87％）を得た。 融点；156〜158℃ TLC；Rf₂＝0.63 元素分析［C₃₇H₅₂O₁₀N₅Clとして］ Ｃ％ Ｈ％ Ｎ％ 測定値 58.49 6.95 9.09 計算値 58.30 6.88 9.19 アミノ酸分析〔0.5μM／6N塩酸／アニソール、
105℃、48時間〕；Ser0.92(1)、Gly0.97(1)、Leu1、
Lys0.99(1) (21) Ｐ（65−84）；BOC−Lys（Ｚ−Cl）−Ser
（Bzl）−Leu−Gly−Glu（OBzl）−Ala−Asp
（OBzl）−Lys（Ｚ−Cl）−Ala−Asp（OBzl）−
Val−Asn−Val−Leu−Thr（Bzl）−Lys（Ｚ−
Cl）−Ala−Lys（Ｚ−Cl）−Ser（Bzl）Gln−
OBzl [21] ［17］14.32ｇ（5mM）にTFA100mlを加え、
室温で60分間撹拌した。反応後、TFAを減圧留
去し、残渣にエーテルを加え、生じた沈澱物を集
め、NMP100mlを加えて溶解した。これを氷−
５％重曹水に加え、生じた沈澱をろ取し、水、メ
タノールの順に洗浄した。この沈澱物に
NMP200mlを加えて溶かし、これに２，４−ジ
ニトロフエノール1.10ｇ、HOBT0.81ｇ［20］
4.66ｇを加え、溶解後、−10℃でWSCI1.10mlを加
え、室温で３日間撹拌した。反応後、反応液を氷
−５％重曹水に注ぎ、生じた沈澱をろ取し、水、
メタノール（４回）の順に洗浄し、［21］15.00ｇ
（収率85.5％）を得た。 アミノ酸分析 ；Asp2.72(3)、Thr0.93(1)、Ser1.65(2)、Glu1.82
(2)、Gly0.99(1)、Ala2.82(3)、Val1.98(2)、Leu2、
Lys3.92(4)、 (22) ［Tyr⁶⁴］Ｐ（64−84）；BOC−Tyr（Bzl−
Cl₂）−Lys（Ｚ−Cl）−Ser（Bnl）−Leu−Gly−
Glu（OBzl）−＊；Asp2.74(3)、Thr0.91(1)、
Ser1.67(2)、Glu1.86(2)、Gly0.98(1)、Ala2.86
(3)、Val1.99(2)、Leu2、Lys3.95(4)、Tyr0.95(1) (2) ［Tyr⁶⁴］−ペプチド（64−84）； ［22］3.06ｇ（0.8mM）にアニソール５mlを加
え、これに無水HF50mlを導入し、０℃で１時間
撹拌した。次いでHFを減圧留去し、残渣にエー
テルを加え、析出した沈澱物を集め、0.1N酢酸
50mlに溶解し、ダウエツクス１×２のカラム
（3.0×40cm、酢酸型）に通し、流出液を凍結乾燥
し、2.41ｇを得た。これを8M尿素水溶液70mlに
溶解し、アンモニア水でPH9.5に調整した後、０
℃で１時間放置した。次いでこの溶液をCM−セ
ルロースのカラム（３×30cm）にチヤージし、
0.01M酢酸アンモニウム緩衝液（PH4.5）800ml〜
0.2M酢酸アンモニウム緩衝液（PH4.5）800mlの
値線型濃度勾配による溶出を行い、溶出液は10ml
ずつ分画し、79〜99本目を集め、凍結乾燥後セフ
アデツクスLH−20のカラム（3.0×120cm、0.1N
酢酸）に通し、9.8mlずつ分画し、42〜49本目を
集め、凍結乾燥を行つて［Tyr⁶⁴］−ペプチド
（64−84）483mgを得た。 TLC；Rf₁₁＝0.15 アミノ酸分析（6N−塩酸、105℃、24時間）；
Asp2.96(3)、Thr0.95(1)、Ser1.79(2)、Glu2.03(2)、
Gly0.97(1)、Ala2.94(3)、Val1.97(2)、Leu2、
Lys4.06(4)、Tyr0.96(1) 実施例 １ ペプチド（53−84）；Ｈ−Lys−Lys−Glu−
Asp−Asn−Val−Leu−Val−Glu−Ser−His
−Glu−Lys−Ser−Leu−Cly−Glu−Ala−
Asp−Lys−Ala−Asp−Val−Asn−Val−Leu
−Thr−Lys−Ala−Lys−Ser−Gln−OH (1) Ｐ（64−68）；BOC−Glu（OBzl）−Lys（Ｚ−
Cl）−Ser（Bzl）−Leu−Gly−OH [23] 参考例１に記載の［20］66.2ｇ（87mM）に塩
化メチレン30mlを加え、５℃に冷却下TFA250ml
を加えた後、室温で45分間撹拌した。反応後、
TFAを減圧下留去し、残渣にエーテルを加えた。
生じた沈澱物を集め、DMF100mlに溶かした。こ
れに５℃に冷却下NMMで中和した。沈澱物が析
出したのでさらにDMF500mlを追加した。この溶
液にBOC−Glu（OBzl）−OSU50ｇ（113mM）、
HOBT1.53ｇ（11.3mM）を加え、NMMで中和
した後、室温で一夜撹拌した。反応後、DMFを
減圧下留去し、残渣を水に入れた。得られた沈澱
物を水洗し、乾燥した。アセトン−メタノールで
２回再結晶して［23］63.85ｇ（収率73.5％）を
得た。 融点；165〜167℃（分解） TLC；Rf₄＝0.72 元素分析［C₄₉H₆₅O₁₄N₆Clとして］ Ｃ％ Ｈ％ Ｎ％ 測定値 59.61 6.76 8.31 計算値 59.00 6.57 8.42 アミノ酸分解〔0.927mg／0.3ml6N塩酸／アニソ
ール、105℃48時間〕；Ser0.92(1)、Glu0.99(1)、
Gly0.97(1)、Leu1、Lys0.99(1) (2) Ｐ（62−63）；BOC−Ser（Bzl）−His−
NHNH₂ [24] BOC−Ser（Bzl）−OH37ｇ（0.125M）に
THF150ml、Ｈ−His−OMe・2HCl31.5ｇ
（0.13M）およびHOBT17.6ｇ（0.13M）を加え
て、これに５℃に冷却下WSCI23.8ml（0.13M）
を加えた後、DMF150mlを加え、室温で一夜撹拌
した。さらにHOBT4.4ｇおよびWSCI6mlを追加
し、室温で一夜撹拌した。反応後、溶媒を減圧下
留去し、残渣の油状物を酢酸エチルに溶かした
後、５％重曹水で３回、水で３回洗浄した。無水
硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧濃縮した。残渣
にヘキサンを加え、生じた沈澱物を集め、酢酸エ
チル−エーテル−ヘキサンから再結晶して粗製の
BOC−Ser（Bzl）−His−OMe（TlC；Rf₃＝0.56）
46.1ｇを得た。 上記の生成物44.6ｇ（0.1M）をDMF300mlに溶
かし、これにヒドラジン水化物（100％）100mlを
加え、室温で一夜撹拌した。反応後、DMFを減
圧下留去した。残渣を酢酸エチルで８回抽出を繰
り返し、抽出液を少量の水で洗浄した後、無水硫
酸マグネシウムで乾燥した。減圧濃縮し、残渣に
ヘキサンを加え、生じた沈澱物を集めた。これを
シリカゲルカラムクロマトグラフイー〔溶出溶
媒；クロロホルム−酢酸エチル（１：１）からク
ロロホルム−メタノール−酢酸エチル（５：１：
５）〕を用いて精製した。相当する区分を減圧乾
固し、残渣をベンゼン−ヘキサン（非常に少量）
から結晶させた。氷室に収置した後、析出した結
晶を酢酸エチル−メタノール−ヘキサンで２回再
結晶して［24］を得た。 融点；125〜129℃ TLC；Rf₄＝0.70、Rf₇＝0.14 元素分析［C₂₁H₃₀O₅N₆として］ Ｃ％ Ｈ％ Ｎ％ 測定値 56.30 6.98 18.54 計算値 56.49 6.77 18.82 (3) Ｐ（62−68）；BOC−Ser（Bzl）−His−Glu
（OBzl）−Lys−（Ｚ−C1）−Ser（Bzl）−Leu−
Gly−OH [25] ［24］33.5ｇをDMRF200mlに溶かし、これに
−50℃に冷却下4.32N塩化水素のジオキサン溶液
52mlとイソアミルニトリト20mlを加えた後、−20
℃で10分間撹拌した。次いで−50℃に冷却し、
Et₃N31.6mlを加えた。 一方、［23］63.85ｇ（64mM）に塩化メチレン
20mlを加え、これに５℃に冷却下TFA200を加え
た後、室温で50分間撹拌した。反応後、TFAを
減圧下留去し、残渣の油状物にエーテルを加えた
後、生じた沈澱物を集めた。これをDMF200mlに
溶かし、５℃に冷却下NMMで中和した。 中和したDMF溶液を０℃に冷却した前記のト
リエチルアミンで処理した溶液に加え、氷室で一
夜、室温で一夜撹拌した。反応後、DMFを減圧
下留去し、残渣をメタノールに溶かした。これを
水に入れ、得られた沈澱物をろ取、水洗、乾燥し
た。DMF−エーテルで再結し、メタノールで２
回洗浄して［25］59.16ｇ（収率60.1％）を得た。 融点；209〜213℃（分解） TLC；Rf₄＝0.66 元素分析［C₆₅H₈₃O₁₇N₁₀Clとして］ Ｃ％ Ｈ％ Ｎ％ 測定値 59.43 6.58 10.67 計算値 59.51 6.38 10.68 アミノ酸分析〔1.549mg／0.5ml6N塩酸／アニソ
ール、105℃、45時間〕；Ser1.82(2)、Glu1.01(1)、
Gly0.98(1)、Leu1、Lys1.01(1)、His0.94(1) (4) Ｐ（62−84）；BOC−Ser（Bzl）−His−Glu
（OBzl）−Lys（Ｚ−Cl）−Ser（Bzl）−Leu−Gly
−Glu（OBzl）−Ala−Asp（OBzl）−Lys（Ｚ−
Cl）−Ala−Asp（OBzl）−Val−Asn−Val−
Leu−Thr（Bzl）−Lys（Ｚ−Cl）−Ala−Lys（Ｚ
−Cl）−Ser（Bzl）−Gln−OBzl [26] ［17］71.59ｇ（25.0mM）にTFA250mlを加
え、室温で60分間撹拌した。反応後、TFAを減
圧下留去し、残渣にエーテルを加えた。生じた沈
澱物を集め、NMP500mlとDMF500mlを加えて溶
かした。これを氷−５％重曹水に加え、生じた沈
澱物をろ取し、水、メタノールの順に洗浄した。
この沈澱物にNMPlとDMF1を加えて溶か
し、これに２，４−ジニトロフエノール5.52ｇ
（1.2倍Ｍ）、HOBT4.05ｇ（12倍Ｍ）、［25］38.84
ｇ（1.2倍Ｍ）およびWSCI5.5ml（1.2倍Ｍ）を加
え、室温で４日間撹拌した。反応後、反応液を５
％重曹水−氷に注ぎ、生じた沈澱物をろ取した。
水、熱メタノール、メタノール（２回）の順に洗
浄して［26］89.21ｇ（収率88.3％）を得た。 アミノ酸分析［0.5μM／6N塩酸−アニソール
110℃48時間］；Asp2.90(3)、Thr0.91(1)、Ser1.92
(3)、Glu2.89(3)、Gly0.89(1)、Ala2.95(3)、
Val2.20、Leu2、Lys4.02(4)、His0.88(1) (5) Ｐ（61−84）；BOC−Glu（OBzl）−Ser（Bzl）
−His−Glu（OBzl）−Lys（Ｚ−Cl）−Ser（Bzl）
−Leu−Gly−Glu（OBzl）−Ala−Asp（OBzl）
−Lys−（Ｚ−Cl）−Ala−Asp（OBzl）−Val−
Asn−Val−Leu−Thr（Bzl）Lys（Ｚ−Cl）−
Ala−Lys（Ｚ−Cl）−Ser（Bzl）−Gln−OBzl
[27] ［26］48.49ｇ（12mM）にTFA250mlを加え、
室温で60分間撹拌した後、TFAを減圧下留去し
た。残渣にエーテルを加え、生じた沈澱物を集
め、DMF350mlとNMP550mlを加えて溶かした。
これを５％重曹水−氷に注ぎ、生じた沈澱物をろ
取し、水洗後、メタノールで洗浄した。この沈澱
物にDMF800mlとNMP700mlを加えて溶かし、こ
れに２，４−ジニトロフエノール2.7ｇ（1.2倍
Ｍ）、BOC−Glu（OBzl）−OSU7.30ｇ（1.4倍Ｍ）、
HOBT0.23ｇ（0.14倍Ｍ）およびNMM1.85ml
（1.4倍Ｍ）を加え、室温で一夜撹拌した。次い
で、この反応液にBOC−Glu（OBzl）−OSU1.04
ｇ（0.2倍Ｍ）およびNMM0.26ml（0.2倍Ｍ）を
追加し、さらに一夜撹拌した。反応液を氷−５％
重曹に注ぎ、生じた沈澱物をろ取し、充分に水洗
した後、熱メタノールで３回洗浄して［27］45.3
ｇ（収率88.6％）を得た。 アミノ酸分析〔／6N塩酸、アニソール、110
℃、48時間〕；Asp2.98(3)、Thr0.93(1)、Ser1.83
(1)、Glu3.62(4)、Gly0.89(1)、Ala2.97(3)、
Val2.23、Leu2、Lys4.06(4)、His0.85(1) (6) Ｐ（59−60）；BOC−Leu−Val−OBzl [28] Ｈ−Val−OBzl・TOSOH17.8ｇ（47mM）に
酢酸エチル100mlを加え、５％重曹水、水の順に
洗浄し、酢酸エチル層を無水芒硝で乾燥後、酢酸
エチルを減圧下留去した。残渣をDMF100mlに溶
かし、これにBOC−Leu−OH・H₂O11.7ｇ
（56.4mM）、HOBT9.3ｇ（1.2倍Ｍ）および
WSCI10.3ml（1.3倍Ｍ）を加え、室温で一夜撹拌
した。反応後、DMFを減圧下留去し、残渣を酢
酸エチル300mlに溶かし、５％重曹水、1N塩酸、
水の順に洗浄した。無水芒硝で乾燥後、減圧乾固
した。残渣を酢酸エチル−ヘキサンより結晶化し
て［28］17.55ｇ（収率88.8％）を得た。 TLC；Rf₆＝0.85 (7) Ｐ（58−60）；BOC−Val−Leu−Val−OBzl
[29] ［28］17.2ｇ（41mM）TFA50mlを加え、室温
で30分間撹拌した後、TFAを減圧下留去した。
残渣にエーテルを加え、生じた結果をろ取した
後、DMF60mlに溶かした。これにHOBT7.7ｇ
（1.2倍Ｍ）、BOC−Val−OH10.7ｇ（1.2倍Ｍ）お
よびWSCI9.0ml（1.2倍Ｍ）を加え、NMMでPH
７に調節した後、室温で一夜撹拌した。反応後、
DMFを減圧下留去し、残渣を酢酸エチル300mlに
溶かした後、５％重曹水、IN塩酸、水の順に洗
浄した。無水芒硝で乾燥し、減圧乾固した。残渣
を酢酸エチル−ヘキサンより２回再結晶して
［29］17.38ｇ（収率81.6％）を得た。 融点；149〜152℃ TLC；Rf₅＝0.82 ［α］D²²；−32.36（Ｃ＝1.0DMF） 元素分析［C₂₈H₄₅O₆N₃として］ Ｃ％ Ｈ％ Ｎ％ 測定値 64.80 8.81 8.20 計算値 64.71 8.73 8.09 (8) Ｐ（57−60）；BOC−Asn−Val−Leu−Val
−OBzl [30] ［29］17.15ｇ（33mM）にTFA50mlを加え、
室温で25分間撹拌した後、TFAを減圧下留去し
た。残渣にエーテルを加え、生じた沈澱物を集
め、DMF100mlに溶かした。これにHOBT0.62ｇ
（0.14倍Ｍ）BOC−Asn−ONP16.32ｇ（1.4倍Ｍ）
を加え、NMMでPH７に調節した後、室温で２日
間撹拌した。反応後、DMFを減圧下留去し、残
渣を５％重曹水−氷に注く。生じた沈澱物をクロ
ロホルムに溶かし、５％重曹水、水の順に洗浄し
た。無水芒硝で乾燥し、減圧乾固した。残渣をメ
タノール−エーテルから２回再結晶して［30］
13.82ｇ（収率79.5％）を得た。 TLC；Rf₂＝0.70 元素分析［C₃₂H₅₁O₈N₅として］ Ｃ％ Ｈ％ Ｎ％ 測定値 60.83 8.19 11.09 計算値 60.64 8.11 11.05 (9) Ｐ（57−60）；BOC−Asn−Val−Leu−Val
−OH [31] ［30］13.2ｇ（25mM）をエタノール50mlと
DMF60mlの混液に溶かし、これに５％pd／clgを
加え、３時間水素添加した。触媒をろ別し、ろ液
を減圧濃縮した。残渣をエタノール−エーテルよ
り２回再結晶して［31］9.70ｇ（収率71.4％）を
得た。 TLC；Rf₂＝0.56 アミノ酸分析〔0.5μM／6N塩酸−アニソール、
110℃48時間〕；Asp1.02(1)、Val1.95(2)、Leu1(1) 元素分析［C₂₅H₄₅O₈N₅として］ Ｃ％ Ｈ％ Ｎ％ 測定値 55.02 8.13 13.06 計算値 55.23 8.34 12.88 (10) Ｐ（57−84）；BOC−Asn−Val−Leu−Val
−Glu（0Bzl）−Ser（Bzl）−His−Glu（OBzl）−
Lys（Ｚ−Cl）−Ser（Bzl）−Leu−Gly−Glu
（OBzl）−Ala−Asp（OBzl）−Lys（Ｚ−Cl）−
Ala−Asp（OBzl）−Val−Asn−Val−Leu−
Thr（Bzl）−Lys（Ｚ−Cl）−Ala−Lys（Ｚ−Cl）
−Ser（Bzl）−Gln−OBzl [32] ［27］42.60ｇ（10mM）にTFA220mlを加え、
室温で60分間撹拌した。反応後、TFAを減圧下
留去し、残渣にエーテルを加え、生じた沈澱を集
め、DMF600mlとNMP600mlを加えて溶かした。
これを氷−５％重曹水に加え、生じた沈澱物をろ
取した後、水で３回、メタノールで１回洗浄し
た。この沈澱物にNMP1.2とDMF1.2を加え
て溶かし、これにHOBT1.76ｇ（0.3倍Ｍ）、２，
４−ジニトロフエノール2.39ｇ（1.3倍Ｍ）、［31］
7.05（1.3倍Ｍ）およびWSCI4.76ml（2.6倍Ｍ）を
加え、室温で２日間撹拌した。さらに［31］1.09
ｇ（0.2倍Ｍ）をDMF100mlに溶解した溶液を加
え、室温で一夜撹拌した。反応液を５％重曹水−
氷に加え、生じた沈澱物を集め、DMF100mlに懸
濁し、加熱処理した。冷却後、不溶物をろ取し
た。さらにメタノールおよびエタノールの順に
各々上記と同様に加熱処理して［32］43.30ｇ
（収率92.4％）を得た。 アミノ酸分析〔0.5μM／6N塩酸−アニソール、
110℃48時間〕；Asp3.81(4)、Thr0.90(1)、Ser1.82
(3)、Glu3.62(4)、Gly0.88(1)、Ala3、Val3.65(4)、
Leu2.58(3)、Lys4.21(4)、His0.86(1) (11) Ｐ（56−84）；BOC−Asp（OBzl）−Asn−Val
−Leu−ValGlu（OBzl）−Ser（Bzl）−His−Glu
（OBzl）−Lys（Ｚ−Cl）−Ser（Bzl）−Leu−Gly
−Glu（OBzl）−Ala−Asp（OBzl）−Lys（Ｚ−
Cl）−Ala−Asp（OBzl）−Val−Asn−Val−
Leu−Thr（Bzl）−Lys（Ｚ−Cl）Ala−Lys（Ｚ
−Cl）−Ser（Bzl）−Gln−OBzl [33] ［32］42.2ｇ（9mM）にTFA220mlを加え、室
温で50分間撹拌した。反応後、TFAを減圧下留
去し、残渣にエーテルを加え、生じた沈澱物を集
めた後、一夜NaOHデシケーター中で乾燥した。
この沈澱物にDMF400mlとNMP600mlを加えて溶
かし、これにHOBT0.24ｇ（0.2倍Ｍ）、BOC−
Asp（OBzl）−OSU8.00ｇ（２倍Ｍ）を加え、
NMMでPH7.0に調節した後、室温で一夜撹拌し
た。さらにBOC−Asp（OBzl）−OSU4.00ｇ（１
倍Ｍ）を追加し、一夜撹拌した。反応液を氷水に
注ぎ、生じた沈澱物を集め、水洗後、メタノール
に加え、加熱処理した。冷却後、不溶物をろ取し
た。上記の加熱処理を３回行い［33］39.97ｇ
（収率90.8％を得た。 アミノ酸分析〔0.5μM／6N塩酸−アニソール、
110℃48時間〕；Asp4.82(5)、Thr0.95(1)、Ser1.90
(3)、Glu3.72(4)、Gly0.92(1)、Ala3、Val3.67(4)、
Leu2.73(3)、Lys4.10(4)、His0.78(1) (12) Ｐ（55−84）；BOC−Glu（OBzl）−Asp
（OBzl）−Asn−Val−Leu−Val−Glu（OBzl）
−Ser（Bzl）−His−Glu（OBzl）−Lys（Ｚ−Cl）
−Ser（Bzl）−Leu−Gly−Glu（OBzl）−Ala−
Asp（OBzl）−Lys（Ｚ−Cl）−Ala−Asp（OBzl）
−Val−Asn−Val−Leu−Thr（Bzl）−Lys（Ｚ
−Cl）−Ala−Lys（Ｚ−Cl）−Ser（Bzl）Gln−
OBzl [34] ［33］39.13ｇ（8.0mM）にTFA220mlを加え、
室温で60分間撹拌した。反応後、TFAを減圧下
留去し、残渣にエーテルを加え、生じた沈澱物を
集めた後、NaOHデシケータ中で２日間乾燥し
た。この沈澱物にDMF500mlとNMP600mlを加え
て溶かし、これに２，４−ジニトロフエノール
1.47ｇ（１倍Ｍ）、HOBT0.11ｇ（0.10倍Ｍ）およ
びBOC−Glu（OBzl）−OSU4.52ｇ（1.3倍Ｍ）を
加え、室温で一夜撹拌した。さらにBOC−Glu
（OBzl）−OSU4.52ｇ（1.3倍Ｍ）を追加し、２日
撹拌した。反応液を氷＋５％重曹水に注ぎ、生じ
た沈澱物を５％重曹水で２回、水で３回洗浄し
た。次いでメタノールを加え、加熱処理し、冷却
後不溶物をろ取した。上記の加熱処理を３回行い
［34］37.25ｇ（収率91.1％）を得た。 アミノ酸分析〔0.5μM／6M塩酸−アニソール、
110℃48時間〕；Asp4.78(5)、Thr0.96(1)、Ser1.95
(3)、Glu4.79(5)、Gly0.89(1)、Ala3、Val3.70(4)、
Leu2.71(3)、Lys4.09(4)、His0.77(1) (13) Ｐ（53−54）；BOC−Lys（Ｚ−Cl）−Lys（Ｚ
−Cl）PAC [35] BOC−Lys（Ｚ−Cl）−OH・TBA36.6ｇ
（75mM）を酢酸エチル300mlに懸濁し、氷＋1N
塩酸で洗浄後、水洗した。酢酸エチル層を無水芒
硝で乾燥し、減圧乾固した後、残渣をDMF50ml
に溶かした。これに０℃に冷却下フエナシルブロ
マイド19.40ｇおよびEt₃N13.60ml（1.3倍Ｍ）を
加えた後、室温で４時間撹拌した。反応液に酢酸
ナトリウム3.68ｇ（0.5倍Ｍ）を酢酸エチル500ml
に溶かした溶液を加えた後、５％重曹水、1N塩
酸、水の順に各３回ずつ洗浄した。酢酸エチル層
を無水芒硝で乾燥後、減圧乾固した。残渣をシリ
カゲルカラムクロマトグラフイー〔溶出溶媒ベン
ゼン−酢酸エチル（２：１）〕により精製し、
TLC上Rf₁＝0.77付近の区分を集めて減圧乾固し
た。残渣をエーテル−ヘキサンより再結晶して
BOC−Lys（Ｚ−Cl）−PAC23.46ｇ（収率60.5％）
を得た。 融点；52〜54℃ TLC；Rf₁＝0.86 上記の生成物20.68ｇ（40mM）にTFA60mlを
加え、室温で20分間撹拌した。反応後、TFAを
減圧下留去し、残渣にエーテルを加え、生じた沈
澱物を集めた後、DMF50mlに溶かしてDMF溶液
Ａとした。 一方、BOC−Lys（Ｚ−Cl）−OH・TBA23.42
ｇ（1.2倍Ｍ）を酢酸エチル200mlに懸濁し、氷＋
1N塩酸200ml、水100mlで洗浄した。酢酸エチル
層を無水芒硝で乾燥後、減圧乾固した。得られた
油状物をDMF50mlに溶かしてDMF溶液Ｂとし
た。 前記DMF溶液Ａに調整した溶液Ｂ、
HOBT6.48ｇ（1.2倍Ｍ）、WSCI8.78ml（1.2倍Ｍ）
を加え、NMMでPH７に調節した後、室温で一夜
撹拌した。反応後、DMFを減圧下留去し、残渣
をエーテル500mlに溶かした後、５％重曹水で３
回洗浄した。エーテル層に酢酸エチル300mlを追
加し、1N塩酸で２回、水で３回洗浄した。有機
層を無水芒硝で乾燥し、減圧濃縮した。残渣をエ
ーテルから３回再結晶して［35］18.73ｇ（収率
57.5％）を得た。 融点；72〜75℃ 元素分析［C₄₁H₅₀O₁₀N₄Cl₂として］ Ｃ％ Ｈ％ Ｎ％ 測定値 59.22 5.98 6.81 計算値 59.35 6.07 6.75 (14) Ｐ（53−54）；BOC−Lys（Ｚ−Cl）−Lys（Ｚ
−Cl）−OH [36] ［33］4.07ｇ（5mM）を酢酸30mlに溶かし、
これを亜鉛末20ｇ／酢酸30mlに加え、室温で１時
間半撹拌した。反応後、亜鉛末をろ別し、ろ液は
減圧下酢酸を留去した。残渣をエーテル100mlに
溶かし、これを５％重曹水70mlで３回抽出した。
水層を氷冷下1N塩酸でPH２に調節し、酢酸エチ
ルで抽出した。酢酸エチル層を水洗し、無水芒硝
で乾燥後、減圧乾固した。残渣をエーテル−ヘキ
サンより再結晶して［36］3.08ｇ（収率85.8％）
を得た。 融点；59〜62℃ TLC；Rf₂＝0.45 元素分析［C₃₃H₄₄O₉N₄Cl₂として］ Ｃ％ Ｈ％ Ｎ％ 測定値 55.58 6.40 7.58 計算値 55.69 6.23 7.87 (15) Ｐ（53−84）；BOC−Lys（Ｚ−Cl）−Lys（Ｚ
−Cl）−Glu（OBzl）−Asp（OBzl）−Asn−Val
−Leu−Val−Glu（OBzl）−Ser（Bzl）−His−
Glu（OBzl）−Lys（Ｚ−Cl）−Ser（Bzl）−Leu−
Gly−Glu（OBzl）−Ala−Asp（OBzl）−Lys（Ｚ
−Cl）−Ala−Asp（OBzl）−Val−Asn−Val−
Leu−Thr（Bzl）−Lys（Ｚ−Cl）−Ala−Lys（Ｚ
−Cl）−Ser（Bzl）−Gln−OBzl [37] ［34］10.22ｇ（2mM）にTFA80mlを加え、室
温55分間撹拌した。反応後、TFAを減圧下留去
し、残渣にエーテルを加え、生じた沈澱物を集め
た後、DMF200mlとNMP200mlを加えて溶かし
た。これに氷冷下HOBT0.41ｇ（1.5倍Ｍ）、［36］
2.13ｇ（1.5倍Ｍ）およびWSCI0.55ml（1.5倍Ｍ）
を加え、５〜10℃で３日間撹拌した。反応液を氷
水に注ぎ、生じた沈澱物を集め、水洗した後、メ
タノールを加熱処理した。冷却後、不溶物をろ取
した。この加熱処理を３回行い［37］10.41ｇ
（収率91.25％）を得た。 アミノ酸分析〔0.5μM／6N塩酸−アニソール、
110℃48時間〕；Asp4.82(5)、Thr0.92(1)、Ser1.89
(3)、Glu4.77(5)、Gly0.91(1)、Ala3.00、Val3.79
(4)、Leu2.62(3)、Lys5.83(6)、His0.75(1) (16) ペプチド（53−84） ［37］3.4ｇ（0.6mM）にアニソール５mlを加
え、これに無水弗化水素（HF）50mlを導入し、
０℃で60分間撹拌した。反応後、HFを減圧下留
去し、残渣にエーテルを加える。析出した沈澱を
集め、0.1N酢酸50mlに溶かし、ダウエツクス１
×２のカラム（2.7×36cm酢酸型）に通す。流出
液を凍結乾燥して粗生成物2.1ｇを得た。これを
8M尿素水溶液50mlに溶かし、アンモニア水でPH
9.5に調整した後、０℃で１時間放置した。次い
でこの溶液を、CM−セルロースのカラム（4.4×
12cm）にチヤージし、0.01M酢酸アンモニウム緩
衝液（PH4.5）200mlで洗浄後、0.01M酢酸アンモ
ニウム緩衝液（PH4.5）700ml〜0.1M酢酸アンモ
ニウム緩衝液（PH4.5）700mlの直線型濃度勾配に
よる溶出を行い、次いで0.2M酢酸アンモニウム
緩衝液（PH4.5）300mlで溶出する。溶出液は13.5
mlずつ分画し、各分画はFolin−Lowry法
（750nm）により測定し、76〜110本目を集め、凍
結乾燥を行い、600mgを得た。これをセフアデツ
クスLH−20のカラム（3.4×120cm、0.1N酢酸）
に通し脱塩する。8.5mlずつ分画し、47〜53本目
の溶出液を集め、凍結乾燥を行い、415mgを得た。
さらにCM−セルロースのカラム（4.4×15cm）に
チヤージし、0.01M酢酸アンモニウム緩衝液（PH
4.5）700ml〜0.1M酢酸アンモニウム緩衝液（PH
4.5）700mlの直線型濃度勾配による溶出を行い、
13.5mlずつ分画し、80〜96本目を集め、凍結乾燥
後、セフアデツクスLH−20カラム（3.4×12cm）
にチヤージし、0.1N酢酸で溶出し、５mlずつ分
画し、76〜85本目を集め、凍結乾燥をしてペプチ
ド（53−84）220mgを得た。 TLC；Rf₉＝0.76 アミノ酸分析；Asp4.80(5)、Thr0.95(1)、
Ser2.34(3)、Glu4.99(5)、Gly0.95(1)、Ala3、
Val3.95(4)、Leu2.96(3)、Lys6.28(6)、His0.97(1) 参考例 ２ ［Tyr⁵²］−ペプチド（52−84）；Ｈ−Tyr−
Lys−Lys−Glu−Asp−Asn−Val−Leu−Val
−Glu−Ser−His−Glu−Lys−Ser−Leu−
Gly−Glu−Ala−Asp−Lys−Ala−Asp−Val
−Asn−Val−Leu−Thr−Lys−Ala−Lys−
Ser−Gln−OH (1) ［Tyr⁵²］Ｐ（52−84）；BOC−Tyr（Bzl−
Cl₂）−Lys（Ｚ−Cl）−Lys（Ｚ−Cl）−Glu
（OBzl）−Asp（OBzl）−Asn−Val−Leu−Val
−Glu（OBzl）−Ser（Bzl）−His−Glu（OBzl）−
Lys（Ｚ−Cl）−Ser（Bzl）−Leu−Gly−Glu
（OBzl）−Ala−Asp（OBzl）−Lys（Ｚ−Cl）−
Ala−Asp（OBzl）−Val−Asn−Val−Leu−
Thr（Bzl）−Lys（Ｚ−Cl）−Ala−Lys（Ｚ−Cl）
−Ser（Bzl）−Gln−OBzl [38]。 実施例１に記載の［37］5.82ｇ（1.0mM）に
TFA50mlを加え、室温で50分間撹拌した。減圧
下で、TFAを留去し、残渣にエーテルを加え、
生じた沈澱を集めた後、DMF150mlとMNP150ml
を加え、溶解した。HOBT0.27ｇ（２倍Ｍ）と
BOC−Tyr（Bzl−Cl₂）−OH0.88ｇ（２倍Ｍ）を
加え溶解した後、−20℃で冷却して、WSCI0.37ｇ
（２倍Ｍ）を加え、室温で、２日間かきまぜた。
反応液を氷水に注ぎ、生じた沈澱を集め、水洗し
た後、メタノールに懸濁し、加熱後、冷却し、不
溶物をろ取した。この沈澱をさらにメタノール加
熱懸濁後、冷却して沈澱を集めて、［38］5.15ｇ
（収率88.4％）を得た。 TLC；R9＝0.75 アミノ酸分析 Asp4.43(5)、Thr0.88(1)、Ser1.86(3)、Glu4.63
(5)、Gly0.92(1)、Ala3(3)、Val3.59(4)、Leu2.62
(3)、Tyr0.88(1)、Lys5.58(6)、His0.76(1)、 (2) ［Tyr⁵²］−ペプチド（52−84） 無水弗化水素（HF）50mlに０℃に冷却下(1)
3.68ｇ（0.6mM）とアニソール10mlを加え、０℃
で60分間かきまぜた。反応後HFを減圧留去し、
残渣にエーテルを加え、生じた沈澱物を集め、
0.1N酢城50mlに溶解し、ダウエツクス１のカラ
ム（アセテート型、３×48cm）に通す。0.1N酢
酸で流出させ、流出液を凍結乾燥して粗生成物
2.43ｇを得た。これを8M尿素水溶液50mlに溶解
し、アンモニア水でPH9.5に調節した後、０℃で
60分放置した。さらに、この溶液を8M尿素水溶
液で充填したCM−セルロースのカラム（３×30
cm）にチヤージし、0.01M酢酸アンモニウム水溶
液（PH4.5）約100mlで流出した後、0.01M酢酸ア
ンモニウム水溶液（PH4.5）700ml〜0.1M酢酸ア
ンモニウム水溶液（PH4.5）700mlの直線型濃度勾
配による溶出を行い、次いで0.2M酢酸アンモニ
ウム水溶液300mlで溶出した。溶出液は、13.5ml
ずつ分画し、各分画はUV280nmで測定し、75〜
121本目の溶出液を集め、凍結乾燥した。この凍
結乾燥物を0.1N−酢酸５mlに溶解し、セフアデ
ツクスLH−20（3.4×120cm）のカラムに通し、流
出液を8.5mlずつ分画し、46〜53本目の溶出液を
集め、凍結乾燥して532mgを得た。これを0.1N酢
酸40mlに溶解し、CM−セルロースのカラム（4.5
×11cm）にチヤージし、0.01M酢酸アンモニウム
水溶液（PH4.5）500ml−0.1M酢酸アンモニウム
水溶液（PH4.5）500mlの直線型濃度勾配による溶
出を行う。溶出液は、6.0mlずつ分画し、各分画
はUV280nmで測定して、121〜133本目の溶出液
を集め、凍結乾燥を行つた。この凍結乾燥物を
0.1N−酢酸５mlで溶解し、セフアデツクスLH−
20のカラム（3.4×120cm）に通し、8.4mlずつ分
画し、47〜52本目の区分を集集め、凍結乾燥し
て、［Tyr⁵²］−ペプチド（52−84）129mgを得た。 TLC，RF₉＝0.75 １スポツト アミノ酸分析 Asp4.78(5)、Thr0.95(1)、Ser2.48(3)、Glu5.01
(5)、Gly0.96(1)、Ala3、Val3.97(4)、Leu2.95(3)、
Tyr0.91(1)、Lys6.03(6)、His0.98(1)、 参考例 ３ ペプチド（51−84）；Ｈ−Pro−Arg−Lys−
Lys−Glu−AspAsn−Val−Leu−Val−Glu−
Ser−His−Glu−Lys−Ser−Leu−Gly−Glu
−Ala−Asp−Lys−Ala−Asp−Val−Asn−
Val−Leu−Thr−Lys−Ala−Lys−Ser−Gln
−OH (1) Ｐ（52−54）；AOC−Arg（Tos）−Lys（Ｚ−
Cl）−Lys（Ｚ−Cl）−PAC [39] 実施例１に記載の［35］14.65ｇ（18mM）に
TFA50mlを加え、室温で30分間撹拌した。反応
後、TFAを減圧下留去し、残渣にエーテルを加
えた。生じた沈澱物を集め、DMF10mlに溶かし
た。これにAOC−Arg（Tos）−OH9.19ｇ（1.2倍
Ｍ）−HOBT2.92ｇ（1.2倍Ｍ）およびWSCI3.95
ml（1.2倍Ｍ）を加え、室温で一夜撹拌した。反
応後、DMFを減圧下留去し、残渣を酢酸エチル
300mlに溶かした後、５％重曹水、1N塩酸、水の
順に各々３回ずつ洗浄した。酢酸エチル層を無水
芒硝で乾燥後、減圧乾固した。酢酸エチル−エー
テルより再結晶して［39］14.46ｇ（収率69.6％）
を得た。 融点；79〜82℃ TLC；Rf₇＝0.76 元素分析［C₅₅H₇₀O₁₃N₈SCIとして］ Ｃ％ Ｈ％ Ｎ％ 測定値 57.06 6.26 9.82 計算値 57.23 6.11 9.71 (2) Ｐ（51−54）；BOC−Pro−Arg（Tos）−Lys
（Ｚ−Cl）−Lys（Ｚ−Cl）−PAC [40] ［39］14.43ｇ（12.5mM）にTFA40mlを加え、
室温で20分間撹拌した。反応後、TFAを減圧下
留去し、残渣にエーテルを加えた。生じた沈澱物
を集め、DMF80mlに溶かした。これに
HOBT2.03ｇ（1.2倍Ｍ）、BOC−Pro−OH3.23
ｇ（1.2倍Ｍ）およびWSCI2.75ml（1.2倍Ｍ）を加
え、室温で一夜撹拌した。反応後、DMFを減圧
下留去し、残渣を酢酸エチル300mlに溶かした後、
５％重曹水、1N塩酸水の順に洗浄した。酢酸エ
チル層を無水芒硝で乾燥後、減圧乾固した。残渣
を酢酸エチル−エーテルより２回再結晶して
［40］14.71ｇ（収率95.1％）を得た。 融点；90〜93℃ TLC；Rf₇＝0.64 元素分析［C₅₉H₇₅O₁₄N₉SCI₂として］ Ｃ％ Ｈ％ Ｎ％ 測定値 57.33 6.20 9.79 計算値 57.27 6.11 10.19 (3) Ｐ（51−54）；BOC−Pro−Arg（Tos）−Lys
（Ｚ−Cl）−Lys（Ｚ−Cl）−OH [41] 亜鉛末20ｇ／酢酸30mlに［40］6.19ｇ（5mM）
を酢酸40mlに溶かした溶液を加え、室温で２時間
撹拌した。反応後、亜鉛末をろ別し、ろ液を減圧
濃縮した。残渣に５％重曹水とエーテルを加えて
抽出し、分離した水層を1N塩酸でH₂に調節した
後、酢酸エチルで抽出した。酢酸エチル層を水で
３回洗浄し、無水芒硝で乾燥後、減圧乾固した。
残渣を酢酸エチル−エーテルより再結晶して
［41］5.40ｇ（収率96.5％）を得た。 融点；110〜113℃ TLC；Rf₄＝0.43 元素分析［C₅₁H₆₉O₁₃N₉SCI₂として］ Ｃ％ Ｈ％ Ｎ％ 測定値 54.56 6.46 11.22 計算値 54.73 6.21 11.27 (4) Ｐ（51−84）；BOC−Pro−Arg（Tos）−Lys
（Ｚ−Cl）−Lys（Ｚ−Cl）−Glu（OBzl）−Asp
（OBzl）−Asn−Val−Leu−Val−Glu（OBzl）
−Ser（Bzl）−His−Glu（OBzl）−Lys（Ｚ−Cl）
−Ser（Bzl）−Leu−Gly−Glu（OBzl）−Ala−
Asp（OBzl）−Lys（Ｚ−Cl）−Ala−Asp（OBzl）
−Val−Asn−Val−Leu−Thr（Bzl）−Lys（Ｚ
−Cl）−Ala−Lys（Ｚ−Cl）−Ser（Bzl）−Gln−
OBzl [42] 実施例１に記載の［34］10.22（2.0mM）に
TFA80mlを加え、室温で60分間撹拌した。反応
後、TFAを減圧下留去し、残渣にエーテルを加
えた。生じた沈澱物を集め、DMF180mlと
NMP′180mlを加えて溶かした。これに
HOBT0.41ｇ（1.5倍Ｍ）、［41］3.35ｇ（1.5倍Ｍ）
およびWSCI0.55ml（1.5倍Ｍ）を加え、室温で２
日間撹拌した。反応液を氷水に加え、生じた沈澱
物を水洗後、メタノールを加えて加熱処理した。
冷却後不溶物を集めた。上記の加熱処理を２回繰
り返した後、エーテルで洗浄して［42］10.65ｇ
（収率87.1％）を得た。 アミノ酸分析（0.5μM／6N塩酸−アニソール、
110℃48時間）；Asp4.62(5)、Thr0.98(1)、Ser2.32
(3)、Glu4.52(5)、Pro0.83(1)、Gly0.94(1)、Ala3、
Val3.82(4)、Leu2.68(3)、Lys5.81(6)、His0.78(1)、
Arg0.86(1) (5) ペプチド（51−84） ［42］3.7ｇ（0.6mM）にアニソール５mlを加
え、これに無水弗化水素（HF）60mlを導入し、
０℃で60分撹拌した。反応後、HFを減圧下留去
し、残渣にエーテルを加え、析出した沈澱を集
め、0.1N酢酸50mlに溶かし、ダウエツクス１×
２のカラム（2.7×40cm酢酸型）に通し、流出液
を凍結乾燥して、粗生成物2.2ｇを得た。これを
8M尿素水溶液50mlに溶解し、アンモニウア水で
PH9.5に調整した後、０℃で１時間放置した。次
いでこの溶液を、CM−セルロースのカラム（4.2
×13cm）にチヤージし、0.01M酢酸アンモニウム
緩衝液（PH4.5）200mlで洗浄後、0.01M酢酸アン
モニウム緩衝液（PH4.5）700ml〜0.1M酢酸アン
モニウム緩衝液（PH4.5）700mlの直線型濃度勾配
による溶出を行い、次いで0.2M酢酸アンモニウ
ム緩衝液（PH4.5）300mlで溶出した。溶出液は、
8.5mlずつ分画し、120本〜160本目を集め、凍結
乾燥を行た後、セフアデツクスLH−20のカラム
（3.4×110cm0.1N酢酸）に通し、5.2mlずつ分画
し、51〜62本目を集め凍結乾燥を行い、392mgを
得た。さらに同様にCM−セルロースのカラム
（2.0×36cm）にチヤージし、0.01M酢酸アンモニ
ウム緩衝液（PH4.5）500ml〜0.2M酢酸アンモニ
ウム緩衝液（PH4.5）500mlの直線型濃度勾配によ
る溶出を行う。溶出液は、7.5mlずつ分画し、92
〜110本目の区分を集め、凍結乾燥後、セフアデ
ツクスLH−20のカラム（3.0×123cm0.1N酢酸）
に通し、溶出液は６mlずつ分画し、37〜47本目を
集め、凍結乾燥して、ペプチド（51−84）213mg
を得た。 TLC；R₁₀＝0.89 アミノ酸分析；Asp4.98(5)、Thr0.92(1)、
Ser2.45(3)、Glu5.13(5)、Gly1.00(1)、Ala3、
Val3.98(4)、Leu2.99(3)、Lys6.08(6)、His0.97(1)、
Arg0.99(1)、Pro1.02(1) 参考例 ４ ［Tyr⁵⁰］ペプチド（50−84）；Ｈ−Tyr−Pro
−Arg−Lys−Glu−Asp−Asn−Val−Leu−
Val−Glu−Ser−His−Glu−Lys−Ser−Leu
−Gly−Glu−Ala−Asp−Lys−Ala−Asp−
Val−Asn−Val−Leu−Thr−Lys−Ala−Lys
−Ser−Gln−OH (1) ［Tyr⁵⁰］Ｐ（50−84）；BOC−Tyr（Bzl−
Cl₂）−Pro−Arg（Tos）−Lys（Ｚ−Cl）−Lys
（Ｚ−Cl）−Glu（OBzl）−Asp（OBzl）−Asn−
Val−Leu−Val−Glu（OBzl）−Ser（Bzl）−His
−Glu（OBzl）−Lys（Ｚ−Cl）−Ser（Bzl）−Leu
−Gly−Glu（OBzl）−Ala−Asp（OBzl）−Lys
（Ｚ−Cl）−Ala−Asp（OBzl）−Val−Asn−
Val−Leu−Thr（Bzl）−Lys（Ｚ−Cl）−Ala−
Lys（Ｚ−Cl）−Ser（Bzl）−Gln−OBzl [43] 参考例３に記載の［42］6.31ｇ（1.0mM）に
TFA50mlを加え、室温で55分間かきまぜた。減
圧下で、TFAを留去し、残渣にエーテルを加え、
生じた沈澱を集めた後、DMF160mlとNMP160ml
を加え、溶解した。HOBT0.27ｇ（２倍Ｍ）と
BOC−Tyr（Bzl−Cl₂）−OH0.88ｇ（２倍Ｍ）を
加え溶解した後、−20℃に冷却して、WSCI0.37ｇ
（２倍Ｍ）を加え、室温で３日間かきまぜた。反
応液を氷中に注ぎ、生じた沈澱を集め、水洗した
後、メタノールに懸濁し、加熱後、冷却し、不溶
物をろ取した。この沈澱をさらにメタノール加熱
懸濁後、冷却して沈澱を集めた。さらにこの操作
を１回おこなつた後、エーテルで洗浄して［43］
5.97ｇ（収率90％）を得た。 アミノ酸分析 Asp4.45(5)、Thr0.94(1)、Ser2.25(3)、Glu4.67
(5)、Pro0.89(1)、Gly0.92(1)、Ala3、Val3.66(4)、
Leu2.81(3)、Tyr0.81(1)、Lys5.53(6)、His0.77(1)、
Arg0.79(1) (2) ［Tyr⁵⁰］ｈ−PTH（50−84） 無水HF60mlに０℃冷却下［43］3.98ｇ
（0.6mM）およびアニソール10mlを加え、０℃60
分間かきまぜた。反応後、HFを減圧留去し、残
渣にエーテルを加え、生じた沈澱を集めた。この
沈澱を0.1N−酢酸50mlに溶解し、ダウエツクス
１×２のカラム（アセテート型、３×45cm）に通
した。流出液を凍結乾燥して粗生成物2.41ｇを得
た。これを8M尿素水溶液60mlに溶解し、アンモ
ニア水でPH9.5に調節した後、０℃で60分間放置
した。次いでこの溶液を8M尿素水溶液で充填し
たCM−セルロースのカラム（３×30cm）にチヤ
ージし、0.01M酢酸アンモニウム水溶液（PH4.5）
で尿素を流出した後、0.01M酢酸アンモニウム水
溶液（PH4.5）700ml〜0.1M酢酸アンモニウム水
溶液（PH4.5）700mlの直線型濃度勾配による溶出
を行い、次いで0.2M酢酸アンモニウム水溶液
（PH4.5）250mlで溶出した。溶出液は、8.5mlずつ
分画し、各分画はUV280nmで測定して142本〜
171本目の流出液を集め、凍結乾燥した。 この凍結乾燥物を0.1M酢酸６mlに溶解し、セ
フアデツクスLH−20のカラム（3.4×120cm）に
通し、8.5mlずつ分画し、46〜52本目の流出液を
集め凍結乾燥して、410mgを得た。これを0.1N酢
酸30mlに溶解し、CM−セルロースのカラム（2.0
×35cm）にチヤージし、0.01M酢酸アンモニウム
水溶液（PH4.5）500ml〜0.2M酢酸アンモニウム
水溶液（PH4.5）500mlの直線型濃度勾配による溶
出を行う。溶出液は7.5mlずつ分画し、112本〜
136本目の流出液を集め、凍結乾燥した後、0.1N
酢酸６mlで溶解し、セフアデツクスLH−20カラ
ム（3.0×120cm）に通して、流出液を６mlずつ分
画し、35本〜43本目の区分を集め、凍結乾燥し
て、［Tyr⁵⁰］ペプチド（50−84）134mgを得た。 TLC；Rf₁₀＝0.88 １スポツト アミノ酸分析 Asp4.98(5)、Thr0.94(1)、Ser2.43(3)、Glu5.11
(5)、Pro0.97(1)、Gly0.97(1)、Ala3、Val3.98(4)、
Leu2.96(3)、Tyr0.91(1)、LyS6.05(6)、His0.93(1)、
Arg0.98(1) 参考例 ５ ペプチド（46−84）；Ｈ−Ala−Gly−Ser−
Gln−Arg−Pro−Arg−Lys−Lys−Glu−Asp
−Asn−Val−Leu−Val−Glu−Ser−His−
Glu−Lys−Ser−Leu−Gly−Glu−Ala−Asp
−Lys−Ala−Asp−Val−Asn−Val−Leu−
Thr−Lys−Ala−Lys−Ser−Gln−OH (1) Ｐ（49−50）；BOC−Gln−Arg（Tos）−OMe
[44] Ｈ−Arg（Tos）−OMe・HCl11.37ｇ（30mM）
とBOC−Gln−ONP13.21ｇ（1.2倍Ｍ）を
DMF200mlに溶かし、０℃に冷却下NMMでPH７
に調節した後、一夜撹拌した。反応後、DMFを
減圧下留去し、残渣をクロロホルムに溶かした
後、５％重曹水で３回、1M塩酸で２回、水で３
回洗浄した。クロロホルム層を無水芒硝で乾燥
し、クロロホルムで充填したシリカゲルのカラム
でクロマトグラフイーを行つた。クロロホルム−
メタノール−酢酸メチルで流し、目的物が溶出し
始めるとクロロホルム−エタノール−酢酸エチル
（１：１：１）で溶出した。相当する区分を集め
て減圧濃縮した。残渣を酢酸エチルに溶かし、０
℃に冷却下ヘキサンを加えて結晶化させて［44］
を得る。 収量11.86ｇ 融点；103〜107℃ (2) Ｐ（48−50）；BOC−Ser（Bzl）−Gln−Arg
（Tos）−OMe [45] ［44］9.39ｇ（16.5mM）にTFA50mlを加え室
温で20分間撹拌した後、TFAを減圧下留去した。
残渣にエーテルを加え、生じた沈澱物をろ取し、
DMF50mlに溶かした。この溶液にHOBT3.24ｇ
（1.45倍Ｍ）、BOC−Ser（Bzl）−OH7.07ｇ（1.45
倍Ｍ）およびWSCI4.39ml（1.45倍Ｍ）を加え、
室温で一夜撹拌した。反応後、DMFを減圧下留
去し、残渣を酢酸エチル300mlに溶かした後、５
％重曹、1N塩酸、水の順に洗浄した。酢酸エチ
ル層を無水芒硝で乾燥後、減圧濃縮した。残渣を
酢酸エチル−エーテルから結晶化を２回行い、
［45］10.0ｇ（収率81.0％）を得た。 融点；97〜102℃ 元素分析［C₃₄H₄₉O₁₀N₇S・1/2H₂Oとして］ Ｃ％ Ｈ％ Ｎ％ 測定値 54.07 6.90 13.29 計算値 53.95 6.66 13.00 (3) Ｐ（46−47）；BOC−Ala−Gly−OH [46] BOC−Ala−OH7.57ｇ、HOBT5.4ｇを
THF60mlに溶解し、Ｈ−Gly−OET・HCl5.58ｇ
を加えた後、−20℃で冷却下、WSCI8.05mlを５分
間で滴下し、そのまま一時間撹拌後、室温で24時
間撹拌した。反応液を減圧留去後、酢酸エチル
100mlを加え、５％重曹水（３回）、水、Ｎ−塩酸
水（３回）、飽和食塩水（３回）、水で順次洗浄
後、酢酸エチル層を分離し、無水Na₂SO₄で乾燥
した。乾燥剤を除き、濃縮乾固して、淡黄色油状
のBOC−Ala−Gly−OET（Rf₁＝0.77）を得た。
これをそのままエタノール20mlに溶解し、０℃で
Ｎ−NaOH44mlを10分間で加え、室温で１時間
30分撹拌した。４mlのＮ−塩酸水を０℃で加え、
エタノールを減圧留去した後、０℃でＮ−塩酸水
42mlを加え、酢酸エチル200mlで油出した。酢酸
エチル層を洗浄後、濃縮し、析出した結晶を、
ETOH−エーテル−ｎ−ヘキサンで再結晶を行
つて無色結晶の［46］6.12ｇ（収率5.08％）を得
た。 TLC；Rf₁＝0.14 融点；85〜89℃（分解） ［α］²⁶D−9.28（Ｃ＝1.0、DMF） 元素分析［C₁₀H₁₈O₅N₂・H₂Oとして］ Ｃ％ Ｈ％ Ｎ％ 測定値 45.49 7.71 10.78 計算値 45.45 7.63 10.60 (4) Ｐ（46−50）；BOC−Ala−Gly−Ser（Bzl）−
Gln−Arg（Tos）−OMe [47] ［45］9.72ｇ（13mM）にTFA50mlを加え、室
温で30分間撹拌した。反応後、TFAを減圧下で
留去し、残渣にエーテルを加えた。生じた沈澱物
をろ取し、DMF100mlに溶かした。この溶液に
BOC−Ala−Gly−OH［46］3.84ｇ（1.2倍Ｍ）、
HOBT2.11ｇ（1.2倍Ｍ）およびWSCI2.85ml（1.2
倍Ｍ）を加え、室温で２日間撹拌した。反応後、
DMFを減圧下留去し、残渣を酢酸エチル200mlに
溶かした後、水洗した。無水芒硝で乾燥し、減圧
濃縮した後、残渣をエタノール−エーテルで２回
結晶化して［47］10.46ｇ（収率91.9％）を得た。 融点；154−157℃ 元素分析［C₃₉H₅₇O₁₂N₉Sとして］ Ｃ％ Ｈ％ Ｎ％ 測定値 53.21 6.90 14.38 計算値 53.47 6.56 14.39 (5) Ｐ（46−50）；BOC−Ala−Gly−Ser（Bzl）−
Gln−Arg（Tos）−NH・NH₂ [48] ［47］9.64ｇ（11mM）をエタノール50mlに溶
かし、これに50％NH₂MH₂6.4mlを加え室温で一
夜撹拌した。反応液にエタノール100mlを加え、
不溶物をろ取した。これをエタノール100mlに懸
濁し、加熱した。冷却後、ろ過して［48］9.02ｇ
（収率93.6％）を得た。 融点；178−180℃ 元素分析［C₃₈H₅₇O₁₁N₁₁Sとして］ Ｃ％ Ｈ％ Ｎ％ 測定値 52.13 6.86 16.65 計算値 52.10 6.56 17.59 (6) Ｐ（46−50）；BOC−Ala−Gly−Ser（Bzl）−
Gln−Arg（Tos）−Pro−Arg（Tos）−Lys（Ｚ−
Cl）−Lys（Ｚ−Cl）−PAC [49] 参考例３に記載の［40］8.04ｇ（6.6mM）に
TFA40mlを加え、室温で20分間撹拌した後、
TFAを減圧下留去した。残渣にエーテルを加え、
生じた沈澱物をろ取して粗製のＨ−Pro−Arg
（Tos）−Lys（Ｚ−Cl）−Lys（Ｚ−Cl）−PAC・
TFAを得た。 一方、［49］6.83ｇ（7.8mM）をDMF30mlに溶
かし、これに−50℃に冷却下4.32N塩化水素のジ
オキサン溶液5.42ml（23.4mM）とイソアミルニ
トリル1.10ml（8.09mM）を加えた後、−20℃で20
分間撹拌した。次いで上記Ｈ−Pro−Arg（Tos）
−Lys（Ｚ−Cl）−PAC・TFAを加え、−35℃で
Et₃N5.46ml（39mM）を加えた後、０〜５℃で２
日間撹拌した。反応後、DMFを減圧下留去し、
残渣をクロロホルム300mlに溶かした後、５％重
曹水、1N塩酸、水の順に洗浄した。クロロホル
ム層を無水芒硝で乾燥し、減圧濃縮した。エタノ
ール−エーテルおよびクロロホルム−エーテルに
より精製して［50］13.42ｇを得た。 TLC；Rf＝0.64［クロロホルム−メタノール−
酢酸（83：18：3.5）］ 元素分析［C₉₂H₁₂₀O₂₂N₁₈Cl₂S・3H₂Oとして］ Ｃ％ Ｈ％ Ｎ％ 測定値 54.68 6.21 12.72 計算値 54.72 6.29 12.49 アミノ酸分析（0.5μM／塩酸、アニソール、
110℃48時間）；Ser0.65(1)、Glu1.10(1)、Pro1(1)、
Gly1.02(1)、Ala1.00(1)、Lys1.89(2)、Arg2.02(2) (7) Ｐ（46−54）；BOC−Ala−Gly−Ser（Bzl）−
Gln−Arg（Tos）−Pro−Arg（Tos）−Lys（Ｚ−
Cl）−Lys（Ｚ−Cl）−OH [50] 亜鉛末30ｇ／酢酸60mlに［49］10.62ｇの酢酸
40ml溶液を加え、室温で２時間撹拌した。反応
後、亜鉛末をろ別し、ろ液を減圧濃縮した。残渣
にエーテルを加え、生じた沈澱物をエタノール−
エーテルで１回、エタノール−酢酸エチルで２回
精製して［50］9.60ｇ（収率91.4％）を得た。 TLC；Rf₄＝0.22 元素分析［C₈₄H₁₁₄O₂₂N₁₈S₂Cl₂・2H₂Oとして］ Ｃ％ Ｈ％ Ｎ％ 測定値 52.89 6.16 13.22 計算値 53.12 6.26 13.28 アミノ酸分析（0.5μM／6N−塩酸−アニソー
ル、110℃48時間）；Ser0.88(1)、Glu1.11(1)、
Pro1.02(1)、Gly1.02(1)、Ala1(1)、Lys2.00(2)、
Arg2.09(2) (8) Ｐ（46−84）；BOC−Ala−Gly−Ser（Bzl）−
Gln−Arg（Tos）−Pro−Arg（Tos）−Lys（Ｚ−
Cl）−Lys（Ｚ−Cl）−Glu（OBzl）−Asp（OBzl）
−Asn−Val−Leu−Val−Glu（OBzl）−Ser
（Bzl）−His−Glu（OBzl）−Lys（Ｚ−Cl）−Ser
（Bzl）−Leu−Gly−Glu（OBzl）−Ala−Asp
（OBzl）−Lys（Ｚ−Cl）−Ala−Asp（OBzl）−
Val−Ash−Val−Leu−Thr（Bzl）−Lys（Ｚ−
Cl）−Ala−Lys（Ｚ−Cl）−Ser（Bzl）−Gln−
OBzl [51] 実施例１に記載の［34］15.33ｇ（3mM）に
TFA130mlを加え、室温で60分間撹拌した後、
TFAを減圧下留去した。残渣にエーテルを加え、
生じた沈澱物をDMF200mlとNMP200mlの混液に
溶かした。これに０℃に冷却下［50］6.70（1.2倍
Ｍ）、HOBT0.49ｇ（1.2倍Ｍ）およびWSCI0.66
ml（1.2倍Ｍ）を加えた後、室温で２日間撹拌し
た。反応後、DMFを減圧下留去し、残渣に氷水
を加えた後、生じた沈澱物をろ取した。これにメ
タノール300mlを加えて加熱し、冷却後不溶物を
ろ取する操作を２回繰り返して［51］18.30ｇ
（収率89.0％）を得た。 (7) ペプチド（46−84） ［51］4.11ｇ（0.6mM）にアニソール３mlを加
え、これに無水弗化水素（HF）60mlを導入し、
０℃にて60分撹拌した。反応後HFを減圧下留去
し、残渣にエーテルを加え、生じた沈澱を集め、
1M酢酸50mlに溶解し、ダウエツクス１×２のカ
ラム（3.0×45cm酢酸型）に通す。流出液を凍結
乾燥して粗生成物2.8ｇを得た。次いでこれを8M
尿素水溶液50mlに溶解し、アンモニア水にてPH
9.5に調整した後、０℃で60分放置した。次いで
この溶液をCM−セルロースのカラム（2.0×36
cm）にチヤージし、0.01M酢酸アンモニウム緩衝
液（PH4.5）200mlにて洗浄後、同じ緩衝液500ml
〜0.3M酢酸アンモニウム緩衝液（PH4.5）500ml
の直線型濃度勾配による溶出を行う。溶出液は
7.5mlずつ分画し、56〜84本目を集め、凍結乾燥
後、セフアデツクスLH−20のカラム（3.0×120
cm）に通し、0.1N酢酸で溶出し、６mlずつ分画
し、41〜52本目を集め、凍結乾燥して、620mlを
得た。さらにこれをCM−セルロースの再カラム
（2.0×38cm）にチヤージし、同様に0.01N酢酸ア
ンモニウム緩衝液（PH4.5）500ml〜0.3M酢酸ア
ンモニウム緩衝液（PH4.5）500mlの直線型濃度勾
配による溶出を行つた。各7.5mlずつ分画し、59
〜80本目を集め、凍結乾燥後、セフアデツクス
LH−20のカラム（3.0×120cm0.1N酢酸）に通し、
８mlずつ分画し、31〜36本目を集め、凍結乾燥し
て、ペプチド（46−84）235mgを得た。 TLC；Rf＝0.77 アミノ酸分析；Asp4.98(5)、Thr0.95(1)、
Ser3.62(4)、Glu6.14(6)、Pro0.99(1)、Gly1.96(2)、
Ala4、Val4.01(4)、Leu2.98(3)、Lys6.12(6)、
His0.93(1)、Arg1.92(2) 参考例 ６ ［Tyr⁴⁵］−ペプチド（45−84）；Ｈ−Tyr−
Ala−Gly−SerGln−Arg−Pro−Arg−Lys−
Lys−Glu−Asp−Asn−Val−Leu−Val−Glu
−Ser−His−Glu−LysSer−Leu−Gly−Glu
−Ala−Asp−Lys−Ala−Asp−Val−Asn−
Val−Leu−Thr−Lys−Ala−Lys−Ser−Gln
−OH (1) Ｐ（45−84）；BOC−Tyr（Bzl−Cl₂）−Ala−
Gly−Ser（Bzl）−Gln−Arg（Tos）−Pro−Arg
（Tos）−Lys（Ｚ−Cl）−Lys（Ｚ−Cl）−Glu
（OBzl）−Asp（OBzl）−Asn−Val−Leu−Val
−Glu（OBzl）−Ser（Bzl）−His−Glu（OBzl）−
Lys（Ｚ−Cl）−Ser（Bzl）−Leu−Gly−Glu
（OBzl）−Ala−Asp（OBzl）−Lys（Ｚ−Cl）−
Ala−Asp（OBzl）−Val−Asn−Val−Leu−
Thr（Bzl）−Lys（Ｚ−C1）−Ala−Lys（Ｚ−Cl）
−Ser（Bzl）−Gln−OBzl [52] 参考例５に記載の［51］13.71ｇ（2.0mM）に
TFA180mlを加え、室温で60分間撹拌した。反応
後、TFAを減圧下留去し、残渣にエーテルを加
えた。生じた沈澱物をろ取して脱BOC化物13.80
ｇを得た。 上記脱BOC化物6.90ｇ（1mM）をDMF135ml
とNMP135mlの混液に溶かし、これに０℃に冷
却下BOC−Tyr（Bzl−Cl₂）−OH0.53ｇ（1.2倍
Ｍ）、HOBT0.16ｇ（1.2倍Ｍ）およびWSCI0.22
ml（1.2倍Ｍ）を加えた後、室温で一夜撹拌した。
反応後、DMFを減圧下留去し、残渣に氷水を加
えた。生じた沈澱物をろ取し、DMF−メタノー
ル−エーテルで洗浄して［52］6.12ｇ（収率85.3
％）を得た。 (2) ［Tyr⁴⁵］−ペプチド（45−84） ［52］4.31ｇ（0.60mM）にアニソール1.5mlを
加え、無水HFを導入し、０℃で１時間かきまぜ
た。次いでHFを減圧下留去し、残渣にエーテル
を加え、析出した沈澱を集め、0.1N酢酸25mlに
溶かし、ダウエツクス１×２カラム（酢酸型、
2.5×30cm）に通す。流出液を凍結乾燥して、粗
生成物3.21ｇを得た。これに8M尿素水溶液（PH
9.5）50mlに溶かし、０℃で１時間放置する。次
いでこの溶液をCMセルロースのカラム（4.3×16
cm）にチヤージし、0.01M酢酸アンモニウム緩衝
液（PH4.5）800ml−0.3M酢酸アンモニウム緩衝
液（PH4.5）800mlの直線型濃度勾配による溶出を
行う。溶出液は6.5mlずつ分画し、118〜151本目
を集め、凍結乾燥後、セフアデツクスLH−20の
カラム（3.0×120cm、0.1N酢酸）にチヤージし、
流出液を7.5mlずつ分画し、26〜37本目を集め、
凍結乾燥して、521mgを得た。これをさらにCM
−セルロースのカラム（2.1×48cm）にチヤージ
し、0.01N酢酸アンモニウム緩衝液（PH4.5）500
ml〜0.3M酢酸アンモニウム緩衝液（PH4.5）500
mlの直線型濃度勾配による溶出を行い、800mlず
つ分画し、59〜70本目を集め、凍結乾燥後、セフ
アデツクスLH−20のカラム（3.0×92cm、0.1N酢
酸）にチヤージし、流出液を8.0mlずつ分画し、
21−30本目を集め、凍結乾燥して、［Tyr⁴⁵］−ペ
プチド（45−84）281mgを得た。 TLC；Rf₉＝0.75 アミノ酸分析；Asp4.97(5)、Thr0.97(1)、
Ser3.62(4)、Glu6.11(6)、Pro0.96(1)、Gly1.93(2)、
Ala4、Val3.98(4)、Leu2.95(3)、Thr0.91(1)、
Lys6.04(6)、His0.92(1)、Arg1.91(2)、 参考例 ７ ［Cys⁴⁵］−ペプチド（46−84）； Ｈ−Cys−Ala−Gly−Ser−Gln−Arg−Pro−
Arg−Lys−Lys−Glu−Asp−Asn−Val−Leu
−Val−Glu−Ser−His−Glu−Lys−Ser−
Leu−Gly−Glu−Ala−Asp−Lys−Ala−Asp
−Val−Asn−Val−Leu−Thr−Lys−Ala−
Lys−Ser−Glu−OH (1) Ｐ（45−84）；BOC−Cys（Acm）−Ala−Gly
−Ser（Bzl）−Gln−Arg（Tos）−Pro−Arg
（Tos）−Lys（Ｚ−Cl）−Glu（OBzl）−Asp
（OBzl）−Asn−Val−Leu−Val−Glu（OBzl）
−Ser（Bzl）−His−Glu（OBzl）−Lys（Ｚ−Cl）
−Ser（Bzl）−Leu−Gly−Glu（OBzl）−Ala−
Asp（OBzl）−Lys（Ｚ−Cl）−Ala−Asp（OBzl）
−Val−Asn−Val−Leu−Thr（Bzl）−Lys（Ｚ
−Cl）−Ala−Lys（Ｚ−Cl）−Ser（Bzl）−Gln−
OBzl [53] 参考例６で得た残りの脱BOC化物6.90ｇ
（1.0mM）をDMF130mlとNMP130mlの混液に溶
かし、これに０℃に冷却下HOBT0.16ｇ（1.2倍
Ｍ）、BOC−Cys（Acm）−OH0.35ｇ（1.2倍Ｍ）
およびWSCI0.22ml（1.2倍Ｍ）を加えた後、室温
で一夜撹拌した。反応後、DMFを減圧下留去し、
残渣に氷水を加え、生じた沈澱物を集めた。これ
をエタノールに懸濁して加熱し、冷却した後、不
溶物をろ取した。この操作を２回繰り返して
［53］5.93ｇ（収率84.4％）を得た。 (2) ［Cys（Acm）⁴⁵］−ペプチド（45−84） ［53］4.22ｇ（0.6mM）にアニソール15mlを加
え、これに無水HF80mlを導入し、０℃で１時間
撹拌した。次いでHFを減圧留去し、残渣にエー
テルを加え、生じた沈澱を集め、20％酢酸50mlに
溶解し、ダウエツクス１×２のカラム（2.8×45
cm、酢酸型）に通す。流出液を凍結乾燥し、これ
を8M尿素水溶液60mlに溶解し、アンモニウア水
でPH9.5に調節後、CM−セルロース（３×45cm）
にチヤージし、0.01M酢酸アンモニウム緩衝液
（PH4.5）700ml〜0.3M酢酸アンモニウム緩衝液
（PH4.5）700mlの直線型濃度勾配による溶出を行
い、溶出液を8.0mlずつ分画し、45〜55本目を集
め、凍結乾燥後、セフアデツクスLH−20のカラ
ム（3.0×120cm、0.1N酢酸）に通し、35〜41本目
を集め、凍結乾燥を行い、580mgを得た。 これをさらにCM−セルロースのカラム（５×
13cm）にチヤージし、0.01M酢酸アンモニウム緩
衝液（PH4.5）400ml〜0.3M酢酸アンモニウム緩
衝液（PH4.5）400mlの直線型濃度勾配による溶出
を行つた。溶出液を6.0mlずつ分画し、120〜131
本目を集め、凍結乾燥後、セフアデツクスLH−
20のカラム（4.0×120cm、0.1N酢酸）に通し、
8.0mlずつ流出液を分画し、38−53本目を集め、
凍結乾燥して、［Cys（Acm）⁴⁵］−ペプチド（46−
84）233mgを得た。 TLC；Rf₉＝0.74 アミノ酸分析；Asp4.97(5)、Thr1.00(1)、
Ser3.67(4)、Glu6.07、Pro1.01(1)、Gly1.96(2)、
Ala4、Val3.99(4)、Cys0.43（0.5）、Leu2.94(3)、
Lys6.03(6)、His0.91(1)、Arg1.92(2)、 (3) ［CysAcm）⁴⁵］−ペプチド（45−84）mg
（0.02mM）に58mgの酢酸第二水銀を溶解した
50％酢酸２mlを加えて溶かし、室温で90分撹拌
後、β−メルカプトエタノール４mlを加え、室
温で24時間撹拌した。反応液を遠心分離し、上
澄液をセフアデツクスＧ−25（3.0×90cm、0.1N
酢酸）にチヤージし、溶出液を10.5mlずつ分画
し、24〜29本目を集め、凍結乾燥を行つて、
［Cys⁴⁵］−ペプチド（45−84）64.1mgを得た。 TLC；Rf₉＝0.73

【図面の簡単な説明】

第１〜３図は、各種ｈ−PTH関連物質との交
叉性の測定曲線を示す。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ 式 Ｈ−Lys−Lys−Glu−Asp−Asn−Val−Leu−
   Val−Glu−Ser−His−Glu−Lys−Ser−Leu−
   Gly−Glu−Ala−Asp−Lys−Ala−Asp−Val−
   Asn−Val−Leu−Thr−Lys−Ala−Lys−Ser−
   Gln−OH で表わされるペプチドまたはその塩。