JPS6345680B2 - - Google Patents
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Landscapes
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Description
本発明は、ヒト副甲状腺ホルモン測定用ペプチ
ドに関する。さらに詳しくは、本発明は、式 （式中、ＲはＨまたはＨ−R1基、R1はCysまたは
Tyr基を示す）で表わされるペプチドまたはその
塩に関する。 ヒト副甲状腺ホルモン（ｈ−PTH）は84個の
アミノ酸よりなるペプチドホルモンであるが、そ
の生物活性はＮ末端側34残基にあることが判明し
ている。G.W.Tregear et al；Hoppe−Seyler's
N.Physiol.Chem.、355、415（1974）〕。このため
PTH関連症患の診断は、生物活性のあるＮ末端
側ペプチドの血中濃度を測定することが重要であ
ると考えられて来た〔太田喜一郎等；医学のあゆ
み、109(7)、375（1979）〕。しかしながら、1978年
F.P.DiBella等は生物活性の存在しないPTH−Ｃ
末端側の血中濃度を測定することがPTH関連疾
患を診断するのに重要であることを発見した〔F.
P.DiBela et al；J.Clin.Endocrinol.Metab.；46
(4)、604（1978）〕。 そこで、本発明者は、ｈ−PTHのＣ末端側39
残基ｈ−PTH（46−84）を合成し、これらのペプ
チドを抗原としてウサギに感作することによりＣ
末端に特異な抗体を得ることに成功した。一方ｈ
−PTH（46−84）には、容易にI125で標識される
アミノ酸であるチロシンを含んでいないが、
〔Try45〕−ｈ−PTH（46−84）は感度のよいトレー
サーを提供することが分つた。またｈ−PTH（46
−84）には、SH基と結合する酵素で標識される
アミノ酸であるシステインを含んでいないが、
〔Cys45〕−ｈ−PTH（46−84）は感度のよいトレー
サーとして提供することが分つた。 上述の如く、本ペプチド〔〕はｈ−PTHの
抗体調製用ペプチドとして、またｈ−PTHの定
量のための標識試薬として有用である。 本発明の目的化合物〔〕は、式〔〕で示さ
れるアミノ酸順序に個々のアミノ酸又は低級ペブ
チドを縮合して構成せしめ、縮合反応の最終段階
で側鎖の官能基の保護基を脱離することにより得
られる。縮合反応自体はペプチド合成の公知の常
法手段に従つて、保護基の着脱、縮合反応を繰り
返すことにより行なわれる。即ち、本目的化合物
の原料ならびにすべての中間体の製造において使
用される各種保護基はペプチド合成で既知なも
の、従つて加水分解、酸水解、還元、アミノリシ
スまたはヒドラジノリシスのような既知手段によ
つて容易に脱離することのできる保護基が用いら
れる。このような保護基はペプチド合成化学の分
野の文献ならびに参考書に記載されている。 例えばアミノ基に使用する保護基としては、ホ
ルミル基、トリフルオロアセチル基、フタロイル
基、Ｐ−トルエンスルホニル基、Ｏ−ニトロフエ
ニルスルフエニル基などのアシル基、ベンジルオ
キシカルボニル基、ｏ（またはｐ）−ブロモベンジ
ルオキシカルボニル基、ｏ（またはｐ）−クロロベ
ンジルオキシカルボニル基、ｐ−ニトロベンジル
オキシカルボニル基、ｐ−メトキシベンジルオキ
シカルボニル基などのベンジルオキシカルボニル
基、トリクロロエチルオキシカルボニル基、ｔ−
ブチルオキシカルボニル基、ｔ−アミルオキシカ
ルボニル基、ジイソプロピルメチルオキシカルボ
ニル基などの脂肪族オキシカルボニル基、２−フ
エニル−イソプロボキシカルボニル基、２−トリ
ル−イソプロポキシカルボニル基、２−ｐ−ジフ
エニル−イソプロポキシカルボニル基などのアラ
ルキルオキシカルボニル基などがある。またこれ
らアミノ基をベンゾイルアセトン、アセチルアセ
トンなどの１，３−ジケトンと反応させることに
よつて得られるエナミンの形成により保護するこ
とができる。 カルボキシル基は、アミド形成、ヒドラチド形
成またはエステル化によつて保護される。即ちア
ミド基は３，４−ジメトキシベンジル基、ビス−
（ｐ−メトキシフエニル）メチル基などによつて
置換される。ヒドラチド基はベンジルオキシカル
ボニル基、トリクロロエチルオキシカルボニル
基、トリフルオロアセチル基、ｔ−ブチルオキシ
カルボニル基、トリチル基、２−ｐ−ジフエニル
−イソプロポキシカルボニル基などによつて置換
される。エステル基はメタノール、エタノール、
ｔ−ブタノール、シアノメチルアルコールなどの
アルカノール、ベンジルアルコール、ｐ−ブロモ
ベンジルアルコール、ｐ−クロロベンジルアルコ
ール、２，６−ジクロロベンジルアルコール、ｐ
−メトキシベンジルアルコール、ｐ−ニトロベン
ジルアルコール、ベンズヒドリルアルコール、ベ
ンゾイルメチルアルコール、ｐ−ブロモベンゾイ
ルメチルアルコール、ｐ−クロロベンゾイルメチ
ルアルコールなどのアラルカノール、２，４，６
−トリクロロフエノール、２，４，５−トリクロ
ロフエノール、ペンタクロロフエノール、ｐ−ニ
トロフエノール、２，４−ジニトロフエノールな
どのフエノール、チオフエノール、ｐ−ニトロチ
オフエノールなどのチオフエノールなどによつて
置換される。 前記セリンスレオニンおよびチロシンの水酸基
は、例えばエステル化またはエーテル化によつて
保護することができる。このエステル化に適する
基としては、例えばアセチル基、ベンゾイル基、
ベンジルオキシカルボニル基、エチルオキシカル
ボニル基などである。またエーテル化に適する基
としては例えばベンジル基、テトラヒドロピラニ
ル基、ｔ−ブチル基である。これらの水酸基の保
護には２，２，２−トリフルオロ−１−ｔ−ブチ
ルオキシカルボニルアミノエチル基、２，２，２
−トリフルオロ−１−ベンジルオキシカルボニル
アミノ基も適する。しかしながら、これらの水酸
基を必らすしも保護する必要はない。 前記アルギニンのグアニジノ基中のアミノ基を
保護するのに使用する基としては、例えばニトロ
基、トシル基、ベンジルオキシカルボニル基、メ
シチレン−２−スルホニル基などであるが、この
グアニジノ基を必ずしも保護する必要はない。 前記ヒスチジンのイミノ基を保護するのに使用
する基としては、例えばベンジル基、トリチル
基、ベンジルオキシカルボニル基、トシル基、
２，２，２−トリフルオロ−１−ｔ−ブチルオキ
シカルボニルアミノエチル基、２，２，２−トリ
フルオロ−１−ベンジルオキシカルボニルアミノ
エチル基などであるが、このイミノ基を必ずしも
保護する必要はない。 システインメルカプト基を保護するのに使用す
る基としては、ベンジル基、ｐ−メトキシベンジ
ル基、ｐ−ニトロベンジル基、トリチル基、ベン
ジルチオメチル基、エチルカルバモイル基、アセ
トアミドメチル基などである。 本目的化合物〔〕の合成においては、個々の
アミノ酸もしくは低級ペプチドの縮合は、例えば
保護されたα−アミノ基および活性化末端カルボ
キシル基をもつアミノ酸またはペプチドと遊離α
−アミノ基および保護された末端カルボキシル基
をもつアミノ酸またはペプチドとを反応させる
か、あるいは活性化α−アミノ基および保護され
た末端カルボキシル基をもつアミノ酸またはペプ
チドと遊離の末端カルボキシル基および保護され
たα−アミノ基をもつアミノ酸またはペピチドを
反応させることにより実施することができる。 この場合カルボキシル基は、アジド、酸無水
物、酸イミダゾリドまたは活性エステル、例えば
シアノメチルエステル、チオフエニルエステル、
ｐ−ニトロチオフエニルエステル、ｐ−メタンス
ルホニルフエニルエステル、チオジルエステル、
ｐ−ニトロフエニルエステル、２，４−ジニトロ
フエニルエステル、２，４，５−トリクロロフエ
ニルエステル、２，４，６−トリクロロフエニル
エステル、ペンタクロロフエニルエステル、Ｎ−
ヒドロキシコハク酸イミドエステル、Ｎ−ヒドロ
キサフタル酸イミドエステル、８−ヒドロキシキ
ノリンエステルまたはＮ−ヒドロキシピペリジン
エステルなどに変換することによつて、あるいは
カルボジイミド、Ｎ，N′−カルボニル−ジイミ
ダゾールまたはイソオキゾリウム塩、例えばウツ
ドワード反応剤などを使用して反応させることに
よつて活性化することができる。 本発明において好ましい縮合方法は、カルボジ
イミド法、アジド法、活性エステル法および無水
物法である。縮合の各段階では、ラセミ化が起ら
ない方法またはラセミ化が最小になる方法を用い
るのが望ましく、好ましくはアジド法、活性エス
テル法、Wu¨nseh法〔Z.Naturforsch.、21b、426
（1966）〕またはGeige法〔Chem.Ber.、103、788
（1970）〕とりわけ縮合剤としてＮ−エチル−
N′−３−ジメチルアミノプロピル−カルボジイ
ミド（WSCI）を用いる変法などを用いる。 縮合順序は式〔〕で示されるアミノ酸順序で
あれば、如何なる順序からも合成し得るが、Ｃ−
末端側から合成するのが有利である。 例えば、保護されたｈ−PTH（46−84）は、Ｃ
−末端フラグメント55−84とＮ−末端フラグメン
ト46−54をWSCIを用いるGeiger変法により縮合
するのがよい。Ｎ−末端フラグメント46−54は、
フラグメント51−54とフラグメント46−50をアジ
ド法により縮合するのがよい。Ｃ末端フラグメン
ト55−84は、フラグメント61−84とフラグメント
57−60をWSCIを用いるGeiger変法による方法で
縮合し、次いで56番目のアミノ酸、55番目のアミ
ノ酸を順次活性エステル法により縮合するのがよ
い。フラグメント61−84は、フラグメント61−84
は、フラグメント72−84に順序71番目のアミノ
酸、70番目のアミノ酸、69番目のアミノ酸、フラ
グメント62−68および61番目のアミノ酸を活性エ
ステル法またはWSCIを用いるGeiger変法により
縮合すればよい。フラグメント62−68はフラグメ
ント64−68とフラグメント62−63をアジド法によ
り縮合するのが好ましい。フラグメント72−84
は、フラグメント77−84に順次76番目のアミノ
酸、75番目のアミノ酸、74番目のアミノ酸および
フラグメント72−73を活性エステル法または
WSCIを用いるGeiger変法により縮合するのがよ
い。フラグメント77−84はフラグメント82−84と
フラグメント77−81をWSCIを用いるGeiger変法
により縮合するのがよい。 保護された〔Tyr45〕−ｈ−PTH（46−84）およ
び保護された〔Cys45〕−ｈ−PTH（46−84）は、
前述の保護されたｈ−PTH（46−84）と相当する
45番目のアミノ酸をWSCIを用いるGeiger変法に
より縮合するのがよい。 上記のペプチドの合成に際して、その末端カル
ボキシル基は、これを必らずしも保護しなければ
ならないわけではない。例えばアジド法、活性エ
ステル法によつて縮合させる場合には、保護しな
くてもよい。 しかしながら、これらの基を前記で述べたよう
なエステル化によつて、例えばメチルエステル、
エチルエステル、ベンジルエステルなどで保護す
ることもできる。また、これらのエステル基は、
例えばメチルエステル基はこれを希薄な水酸化ナ
トリウム水溶液で分裂し、またはヒドラチドに変
え、またベンジルエステル基は無水弗化水素また
は水素添加分解によつて分裂することができる。
これらペプチドのα−アミノ基は、これらを通常
の保護基、例えばベンジルオキシカルボニル基、
ｔ−ブトキシカルボニル基、ｔ−アミルオキシカ
ルボニル基で保護されるが、ベンジルオキシカル
ボニル基は水素添加分解によつて脱離され、ｔ−
ブトキシカルボニル基、ｔ−アミルオキシカルボ
ニル基はトリフルオロ酢酸で脱離される。 セリンおよびスレオリンの水酸基はベンジル基
で、チロシンの水酸基は２，６−ジクロロベンジ
ル基で、リジンのε−アミノ基はｏ−クロロベン
ジルオキシカルボニル基で、アルギニンのグアニ
ジノ基中のアミノ基はトシル基で、システインの
メルカプト基はｐ−メトキシベンジル基で保護す
るのが適する。これらの保護基に無水弗化水素で
脱離される。システインのメルカプト基の保護基
としてアセトアミドメチル基を使用することがで
きる。この基は無水弗化水素に対して安定である
ため、他の全ての保護基が脱離された時点でPH４
において酢酸水銀で脱離される。 こうして保護されたｈ−PTH（46−84）、保護
された〔Tyr45〕−ｈ−PTH（46−84）および保護
された〔Cys45〕−ｈ−PTH（46−84）が得られる。
これらの保護基は、好ましくは、酸分解、領えば
無水弗化水素の処理によつて一段階で脱離され、
式〔〕の目的化合物が得られる。45番目のシス
テインのメルカプト基の保護基としてアセトアミ
ドメチル基を使用した場合、無水弗化水素処理に
より他の全ての保護基を脱離した後に、PH４にお
いて酢酸第二水銀により脱離することができる。 上記の目的化合物〔〕は、公知のペプチドを
精製する手段により精製することができる。例え
ばセフアデツクスLH−20（商品名．フアルマシ
ア社製、ゲル過剤、ヒドロキシプロピル化デキ
ストランゲル）、セフアデツクスＧ−50（商品名．
フアルマシア社製、ゲル過剤、デキストランゲ
ル）、Dowex1（商品名．ダウケミカル社製、強塩
基性陰イオン交換樹脂）、カルボキシメチルセル
ロース等の担体を用いるカラムクロマトグラフイ
ーにより行うことができる。 本発明のペプチド〔〕は、その方法の条件に
より塩基またはその塩の形で得られる。通常は酢
酸の如き有機酸との塩の形で保存され得る。 本発明のペプチド〔〕を抗原として得られる
抗体または本ペプチド〔〕を抗原とする全ての
免疫反応により、エンザイムイムノアツセイ、ラ
ジオイムノアツセイを利用してｈ−PTHを測定
できる。 次に、ｈ−PTH（53−84）、ｈ−PTH（51−84）
およびｈ−PTH（46−84）の抗体形成について述
べる。 ＜抗体の作成＞ ｈ−PTH（53−84）、ｈ−PTH（51−84）およ
びｈ−PTH（46−84）を各々300μｇを0.1N酢酸
250μに溶かし、等量のFreunds Complate
Adjuvantと混合エマルジヨンを調製する。これ
を体重280〜340ｇの雄モルモツト５匹づつに免疫
する。１回目は四跂の足しようおよび臀部に、２
回目からは側腹部に３週間毎に皮下注射を繰り返
し、５回目投与後、１週間後に心臓穿刺により採
血する。 ＜標識抗原＞ 反応管にI125／mCiを取り、これに0.5Mリン酸
緩衝液（PH7.4）0.5mlを加え、〔Tyr45〕−ｈ−PTH
（46−84）5μｇおよびクロラミンT50μｇを加えて
30秒間撹拌した後、ピロ亜硫酸ソーダ120μｇを
加える。これに少量のヨウ化カリおよびBSA5mg
を加えた後、セフアデツクスＧ−50のカラム
（1.0×20cm）によるカラムクロマトグラフイーを
行う。７〜10mlの分画を集める。希釈液としてベ
ロナール緩衝液（PH8.6、0.05M、0.5％BSAを含
む）を用い１分析当り約0.01μCi使用する。 ＜分析方法＞ 試料液100μに抗体100μを加え、これに標
識ペプチド100μを加え、４℃で３日間反応さ
せる。次いでモルモツト正常血清100μ、抗モ
ルモツトgG家ウサギ血清100μを加え、25℃
で30分間反応した後、3000r.p.m.で30分間遠心分
離し、上清を吸引去した後、沈澱物のカウント
計測する。 抗体を500〜8000倍希釈して上記分析を行い、
結合率が30〜40％になる希釈倍率を測定する。 ＜測定結果＞ ｈ−PTH（53−84） 3000倍 ｈ−PTH（51−84） 500倍 ｈ−PTH（46−84） 8000倍 尚、本明細書中に記載の略記号は次の意味を有
する。 Gln；Ｌ−グルタミン Ser；Ｌ−セリン Lys；Ｌ−リジン Ala；Ｌ−アラニン Thr；Ｌ−スレオニン Leu；Ｌ−ロイシン Val；Ｌ−バリン Asp；Ｌ−アスパラギン酸 Glu；Ｌ−グルタミン酸 Gly；グリシン His；Ｌ−ヒスチジン Asn；Ｌ−アスパラギン Arg；Ｌ−アルギニン Pro；Ｌ−プロリン Tyr；Ｌ−チロシン Cys；Ｌ−システイン BOC；ｔ−ブチルオキシカルボニル AOC；ｔ−アミルオキシカルボニル Ｚ−Cl；ｏ−クロロベンジルオキシカルボニル Bzl；ベンジル Tos；トシル OMe；メチルエステル OEt；エチルエステル OBzl；ベンジルエステル OSU；Ｎ−ヒドロキシコハク酸イミドエステ
ル ONP；ｐ−ニトロフエニルエステル PAC；フエナシルエステル Acm；アセトアミドメチル TosoH；ｐ−トルエンスルホン酸 TFA；トリフルオロ酢酸 Et3N；トリエチルアミン TBA；トリベンジルアミン NMM；Ｎ−メチルモルホリン HOBT；１−ヒドロキシベンゾトリアゾール DMF；ジメチルホルムアミド THF；テトラヒドロフラン NMP；Ｎ−メチル−２−ピロリドン MeOH；メタノール EtOH；エタノール BuOH；ブタノール エーテル；ジエチルエーテル WSCI；Ｎ−エチル、N′−３−ジメチルアミ
ノプロピル−カルボジイミド HOBT；１−ヒドロキシベンゾトリアゾール 次に実施例を挙げて本発明の製造例を具体的に
説明する。 尚、実施例中で使用した薄層クロマトグラフイ
ー（TLC）の担体および展開溶媒ならびにアミ
ノ酸分析用の加水分解の条件は特記しない限り、
次の通りである。 担体；メルク社製シリカゲルＧ 展開溶媒； １；CHCl3−MeOH−酢酸（95：５：３） ２； 〃 （85：15：
５） ３； 〃 （85：10：
５） ４； 〃 （80：25：
２） ５；ベンゼン−酢酸エチル（１：１） ６； 〃 （２：１） ７；CHCl3−EtOH−酢酸エチル（５；２：５） ８； 〃 （10：
１：５） 担体；メルク社製セルロース 展開溶媒； ９；BuOH−ピリジン−酢酸−水（２：２：２：
３） 10；BuOH−ピリジン−酢酸−水（１：１：１：
２） アミノ酸分析用の加水分解条件 試料0.5μMを6N塩酸１ml、アニソール0.1mlで
110℃、48時間加水分解した。 実施例 １ ｈ−PTH（46−84）；Ｈ−Ala−Gly−Ser−Gln
−Arg−Pro−Arg−Lys−Lys−Glu−Asp−
Asn−Val−Leu−Val−Glu−Ser−His−Glu
−Lys−Ser−Leu−Gly−Glu−Ala−Asp−
Lys−Ala−Asp−Val−Asp−Val−Leu−Thr
−Lys−Ala−Lys−Ser−Gln−OH (1) Ｐ（83−84）；BOC−Ser（Bzl）−Gln−OBzl
〔１〕 BOC−Gln−OBzl81.4ｇ（0.242M）を
TFA270mlに溶かし、室温で45分間撹拌した
後、TFAを減圧留去した。残渣にエーテルを
加え、生じた沈澱を集めた。これをDMF270ml
に溶かし、これにHOBT32.67ｇ（0.242M）、
BOC−Ser（Bzl）−OH67.35ｇ（0.242M）およ
びWSCI44.29ml（0.242M）を加え、一夜撹拌
した。反応後、DMFを減圧下留去した。残渣
を酢酸エチル440mlに溶かし、1N塩酸、５％重
曹水、水の順に洗浄した後、無水芒硝で乾燥
し、減圧乾固した。酢酸エチル−ヘキサンより
再結して〔１〕101.43ｇ（収率81.6％）を得
た。 融点121〜123℃ TLC；Rf7＝0.75 〔α〕27 D−14.12（Ｃ＝0.1、DMF） 元素分析〔C27H35O7N3として〕 Ｃ％ Ｈ％ Ｎ％ 測定値 62.98 7.03 8.01 計算値 63.14 6.87 8.18 (2) Ｐ（82−84）；BOC−Lys（Ｚ−Cl）−Ser
（Bzl）−Gln−OBzl〔２〕 〔１〕98.87ｇ（192.5ｍＭ）をTFA440mlに
加え、室温で30分間撹拌した後、TFAを減圧
留去した。残渣をDMF330mlに溶かし、
HOBT28.6ｇ、BOC−Lys（Ｚ−Cl）−OHの
DMF溶液（BOC−Lys（Ｚ−Cl）−OH.
TBA103.33ｇ（1.1倍Ｍ）を酢酸エチル−1N塩
酸で処理し、酢酸エチル層を無水芒硝で乾燥
後、減圧乾固した。残渣をDMF110mlに溶か
す）およびWSCI38.72ml（1.1倍モル）を加え、
室温で２日間撹拌した。反応後、DMFを減圧
留去し、残渣に氷水を加え、生じた沈澱を集め
た。エタノール−ヘキサンで３回再結して
〔２〕111.06ｇ（収率71.2％）を得た。 TLC；Rf1＝0.32、Rf7＝0.76 融点；145〜147℃ 〔α〕27 D−13.1（Ｃ＝1.0、DMF） 元素分析〔C41H52O10N5Clとして〕 Ｃ％ Ｈ％ Ｎ％ 測定値 61.02 6.65 8.74 計算値 60.77 6.47 8.65 (3) Ｐ（80−81）；BOC−Lys（Ｚ−Cl）−Ala−
OMe〔３〕 BOC−Lys（Ｚ−Cl）−OH・TBA234.24ｇを
酢酸エチルに懸濁し、1N塩酸、水の順に洗浄
した。無水芒硝で乾燥し、減圧乾固した後、
DMF400mlに溶かした。これにＨ−Ala−
OMe・HCl67.0ｇ、HOBT64.8ｇ、WSCI87.84
mlを加え、室温で一夜撹拌した。反応後、
DMFを減圧留去し、残渣を酢酸エチル２に
溶かし、５％重曹水、1N塩酸、水の順に洗浄
した。無水芒硝で乾燥後、減圧乾固した。酢酸
エチル−ヘキサンより再結して〔３〕231.8ｇ
（収率96.6％）を得た。 融点；58〜60℃ TLC；Rf1＝0.77 〔α〕27 D−17.16（Ｃ＝1.0、DMF） 元素分析〔C23H34O7N3Clとして〕 Ｃ％ Ｈ％ Ｎ％ 測定値 54.96 6.78 8.56 計算書 55.25 6.85 8.40 (4) Ｐ（79−81）；BOC−Thr（Bzl）−Lys（Ｚ−
Cl）−Ala−OMe〔４〕 〔３〕174.99ｇ（0.35M）をTFA500mlに加
え、室温で50分間撹拌した。反応後、TFAを
減圧留去し、残渣を酢酸エチルに溶かした後、
５％重曹水、水の順に洗浄した。無水芒硝で乾
燥後、減圧乾固した。残渣をDMF400mlに溶か
し、これにHOBT49.95ｇ（1.05倍Ｍ）、BOC−
Thr（Bzl）−OH114.33ｇ（1.05倍Ｍ）および
WSCI67.7ml（1.05倍Ｍ）を加え、室温で一夜
撹拌した。反応後、DMFを減圧留去し、残渣
に氷水を加えた。生じた沈澱を集め熱エタノー
ルで４回再沈澱して〔４〕99.31ｇを得た。 母液は減圧濃縮し、残渣をクロロホルムに溶
かし、５％重曹水（４回）、1N塩酸（２回）、
水（２回）の順に洗浄した。無水芒硝で乾燥
後、減圧乾固した。残渣をシリカゲルカラムク
ロマトグラフイー〔溶出溶媒クロロホルム−エ
タノール−酢酸（５：１：５）〕により精製し
て〔４〕35.09ｇを得た。不純物を含む区分は、
次の追加合成の際のカラムクロマトグラフイー
の精製の際に合わせて用いる。 次に〔３〕22.5ｇ（45ｍＭ）をTFA70mlに
加え、室温で45分間撹拌した。反応後、TFA
を減圧留去し、残渣をDMF50mlに溶かした後、
NMMでPH７に調節した。次いで、HOBT6.68
ｇ（1.1倍Ｍ）、BOC−Thr（Bzl）−OH15.31ｇ
（1.1倍Ｍ）、WSCI9.06ml（1.1倍Ｍ）を加え、一
夜撹拌した。反応後、DMFを減圧留去し、残
渣をクロロホルム200mlに溶かした後、５％重
曹水、1N塩酸、水の順に洗浄した。無水芒硝
で乾燥後、減圧乾固した。残渣を前の不純物を
含む区分と合せてシリカゲルカラムクロマトグ
ラフイーにより精製した。相当する区分を減圧
乾固し、クロロホルム−ヘキサンで２回再沈澱
を行い、〔４〕48.80ｇを得た。 全量183.2ｇ 融点；132〜134℃ TLC；Rf7＝0.85 元素分析〔C34H47O9N4Clとして〕 Ｃ％ Ｈ％ Ｎ％ 測定値 59.06 7.05 7.41 計算値 59.08 6.85 8.11 (5) Ｐ（77−78）；BOC−Val−Leu−OEt〔５〕 BOC−Val−OH101.99ｇ（0.47M）、Ｈ−
Leu−OEt・HCl91.98ｇ（0.47M）、
HOBT63.45ｇ、WSCI86.01ml（0.47M）を
THF400mlに溶かし、一夜撹拌した。 反応後、THFを減圧留去し、残渣を酢酸エ
チル400mlに溶かした後、５％重曹水、1N塩
酸、水の順に洗浄した。無水芒硝で乾燥後、減
圧乾固した。酢酸エチル−ヘキサンより再結し
て〔５〕153.7ｇ（収率91.2％）を得た。 融点；108〜110℃ TLC；Rf1＝0.63 〔α〕27 D−25.78（Ｃ＝1.0、DMF） 元素分析〔C18H34O5N2として〕 Ｃ％ Ｈ％ Ｎ％ 測定値 60.35 9.42 8.39 計算値 60.31 9.56 7.82 (6) Ｐ（77−78）；BOC−Val−Leu−OH〔６〕 〔５〕134.43ｇ（0.375M）をエタノール400
mlに溶かし、氷冷下1N−NaOH412.5ml（1.1倍
Ｍ）を加え、撹拌した。１時間半後、1N−
NaOH37.5（0.1倍Ｍ）を追加し、１時間撹拌し
た。反応液に1N塩酸75mlを加え、さらに少量
の塩酸でPH５とした。エーテルで洗浄し、水層
に1N塩酸400mlを加えて、酢酸エチルで抽出し
た。酢酸エチル層を乾燥後、減圧乾固し、酢酸
エチル−ヘキサンより再結して〔６〕119.66ｇ
（収率96.6％）を得た。 TLC；Rf1＝0.35、Rf7＝0.58 元素分析〔C16H30O5N2として〕 Ｃ％ Ｈ％ Ｎ％ 測定値 57.83 9.40 8.78 計算値 58.16 9.15 8.48 (7) Ｐ（77−81）；BOC−Val−Leu−Thr（Bzl）
−Lys（Ｚ−Cl）−Ala−OMe〔７〕 〔４〕182ｇ（0.263M）をTFA500mlに加
え、室温で50分間撹拌した。反応後、TFAを
減圧留去し、残渣にヘキサンを加えた。生じた
油状物をデカンテーシヨンにより溶媒と分離
し、DMF350mlに溶かした。これを冷却下
NMMでPH6.5に調節し、HOBT42.61ｇ（1.2倍
Ｍ）、〔６〕104.28ｇ（1.2倍Ｍ）および
WSCI57.8ml（1.2倍Ｍ）を加え、室温で１時間
半撹拌すると固化し、DMF200ml追加しても撹
拌不能のため、一夜室温で放置し、次いで30℃
で４時間放置した。反応物に氷水を加え、沈澱
物を集めた。これをクロロホルム2.5に溶か
し、５％重曹水、1N塩酸、水の順に洗浄した。
クロロホルムを減圧留去し、残渣をクロロホル
ム−エーテル−ヘキサンより再結して〔７〕
224.68ｇ（収率94.9％）を得た。 融点；119〜221℃ TLC；Rf1＝0.15、Rf8＝0.68 〔α〕27 D−11.72（Ｃ＝1.0、DMF） 元素分析〔C45H67O11N6Clとして〕 Ｃ％ Ｈ％ Ｎ％ 測定値 59.80 7.56 9.83 計算値 59.82 7.48 9.30 (8) Ｐ（77−81）；BOC−Val−Leu−Thr（Bzl）
−Lys（Ｚ−Cl）−Ala−OH〔８〕 〔７〕72.3ｇ（80ｍＭ）をクロロホルム720
mlに溶かし、氷冷下1N−KOHの90％エタノー
ル溶液800mlを加え、０〜５℃で40分間撹拌し
た。次いで、氷冷下1N塩酸800mlを加え、クロ
ロホルム500mlを追加して抽出した。クロロホ
ルム層を水洗し、無水芒硝で乾燥後、減圧乾固
した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフ
イー〔溶出溶媒クロロホルム−エタノール−酢
酸エチル（５：１：５）〕により精製した。相
当する区分を減圧乾固してクロロホルム−メタ
ノール−エーテル−ヘキサンより３回再結して
〔８〕を得た。 上記の操作を３回繰り返し、〔７〕計216.9ｇ
を加水分解して、〔８〕156.07ｇ（収率73.1％）
を得た。 融点；180〜183℃ TLC；Rf3＝0.69 〔α〕27 D−7.54（Ｃ＝1.0、DMF） 元素分析〔C44H65O11N6Cl・1/2H2Oとして〕 Ｃ％ Ｈ％ Ｎ％ 測定値 58.94 7.67 9.64 計算値 58.82 7.40 9.35 アミノ酸分析〔試料3.1mg／１ml6N塩酸＋0.1
mlアニソール、45時間、110℃加水分解）；
Thr0.96(1)、Ala1、Val0.93(1)、Leu0.94(1)、
Lys1.01(1) (9) Ｐ（77−84）；BOC−Val−Leu−Thr（Bzl）
−Lys（Ｚ−Cl）−Ala−Lys（Ｚ−Cl）−Ser
（Bzl）−Gln−OBzl
ドに関する。さらに詳しくは、本発明は、式 （式中、ＲはＨまたはＨ−R1基、R1はCysまたは
Tyr基を示す）で表わされるペプチドまたはその
塩に関する。 ヒト副甲状腺ホルモン（ｈ−PTH）は84個の
アミノ酸よりなるペプチドホルモンであるが、そ
の生物活性はＮ末端側34残基にあることが判明し
ている。G.W.Tregear et al；Hoppe−Seyler's
N.Physiol.Chem.、355、415（1974）〕。このため
PTH関連症患の診断は、生物活性のあるＮ末端
側ペプチドの血中濃度を測定することが重要であ
ると考えられて来た〔太田喜一郎等；医学のあゆ
み、109(7)、375（1979）〕。しかしながら、1978年
F.P.DiBella等は生物活性の存在しないPTH−Ｃ
末端側の血中濃度を測定することがPTH関連疾
患を診断するのに重要であることを発見した〔F.
P.DiBela et al；J.Clin.Endocrinol.Metab.；46
(4)、604（1978）〕。 そこで、本発明者は、ｈ−PTHのＣ末端側39
残基ｈ−PTH（46−84）を合成し、これらのペプ
チドを抗原としてウサギに感作することによりＣ
末端に特異な抗体を得ることに成功した。一方ｈ
−PTH（46−84）には、容易にI125で標識される
アミノ酸であるチロシンを含んでいないが、
〔Try45〕−ｈ−PTH（46−84）は感度のよいトレー
サーを提供することが分つた。またｈ−PTH（46
−84）には、SH基と結合する酵素で標識される
アミノ酸であるシステインを含んでいないが、
〔Cys45〕−ｈ−PTH（46−84）は感度のよいトレー
サーとして提供することが分つた。 上述の如く、本ペプチド〔〕はｈ−PTHの
抗体調製用ペプチドとして、またｈ−PTHの定
量のための標識試薬として有用である。 本発明の目的化合物〔〕は、式〔〕で示さ
れるアミノ酸順序に個々のアミノ酸又は低級ペブ
チドを縮合して構成せしめ、縮合反応の最終段階
で側鎖の官能基の保護基を脱離することにより得
られる。縮合反応自体はペプチド合成の公知の常
法手段に従つて、保護基の着脱、縮合反応を繰り
返すことにより行なわれる。即ち、本目的化合物
の原料ならびにすべての中間体の製造において使
用される各種保護基はペプチド合成で既知なも
の、従つて加水分解、酸水解、還元、アミノリシ
スまたはヒドラジノリシスのような既知手段によ
つて容易に脱離することのできる保護基が用いら
れる。このような保護基はペプチド合成化学の分
野の文献ならびに参考書に記載されている。 例えばアミノ基に使用する保護基としては、ホ
ルミル基、トリフルオロアセチル基、フタロイル
基、Ｐ−トルエンスルホニル基、Ｏ−ニトロフエ
ニルスルフエニル基などのアシル基、ベンジルオ
キシカルボニル基、ｏ（またはｐ）−ブロモベンジ
ルオキシカルボニル基、ｏ（またはｐ）−クロロベ
ンジルオキシカルボニル基、ｐ−ニトロベンジル
オキシカルボニル基、ｐ−メトキシベンジルオキ
シカルボニル基などのベンジルオキシカルボニル
基、トリクロロエチルオキシカルボニル基、ｔ−
ブチルオキシカルボニル基、ｔ−アミルオキシカ
ルボニル基、ジイソプロピルメチルオキシカルボ
ニル基などの脂肪族オキシカルボニル基、２−フ
エニル−イソプロボキシカルボニル基、２−トリ
ル−イソプロポキシカルボニル基、２−ｐ−ジフ
エニル−イソプロポキシカルボニル基などのアラ
ルキルオキシカルボニル基などがある。またこれ
らアミノ基をベンゾイルアセトン、アセチルアセ
トンなどの１，３−ジケトンと反応させることに
よつて得られるエナミンの形成により保護するこ
とができる。 カルボキシル基は、アミド形成、ヒドラチド形
成またはエステル化によつて保護される。即ちア
ミド基は３，４−ジメトキシベンジル基、ビス−
（ｐ−メトキシフエニル）メチル基などによつて
置換される。ヒドラチド基はベンジルオキシカル
ボニル基、トリクロロエチルオキシカルボニル
基、トリフルオロアセチル基、ｔ−ブチルオキシ
カルボニル基、トリチル基、２−ｐ−ジフエニル
−イソプロポキシカルボニル基などによつて置換
される。エステル基はメタノール、エタノール、
ｔ−ブタノール、シアノメチルアルコールなどの
アルカノール、ベンジルアルコール、ｐ−ブロモ
ベンジルアルコール、ｐ−クロロベンジルアルコ
ール、２，６−ジクロロベンジルアルコール、ｐ
−メトキシベンジルアルコール、ｐ−ニトロベン
ジルアルコール、ベンズヒドリルアルコール、ベ
ンゾイルメチルアルコール、ｐ−ブロモベンゾイ
ルメチルアルコール、ｐ−クロロベンゾイルメチ
ルアルコールなどのアラルカノール、２，４，６
−トリクロロフエノール、２，４，５−トリクロ
ロフエノール、ペンタクロロフエノール、ｐ−ニ
トロフエノール、２，４−ジニトロフエノールな
どのフエノール、チオフエノール、ｐ−ニトロチ
オフエノールなどのチオフエノールなどによつて
置換される。 前記セリンスレオニンおよびチロシンの水酸基
は、例えばエステル化またはエーテル化によつて
保護することができる。このエステル化に適する
基としては、例えばアセチル基、ベンゾイル基、
ベンジルオキシカルボニル基、エチルオキシカル
ボニル基などである。またエーテル化に適する基
としては例えばベンジル基、テトラヒドロピラニ
ル基、ｔ−ブチル基である。これらの水酸基の保
護には２，２，２−トリフルオロ−１−ｔ−ブチ
ルオキシカルボニルアミノエチル基、２，２，２
−トリフルオロ−１−ベンジルオキシカルボニル
アミノ基も適する。しかしながら、これらの水酸
基を必らすしも保護する必要はない。 前記アルギニンのグアニジノ基中のアミノ基を
保護するのに使用する基としては、例えばニトロ
基、トシル基、ベンジルオキシカルボニル基、メ
シチレン−２−スルホニル基などであるが、この
グアニジノ基を必ずしも保護する必要はない。 前記ヒスチジンのイミノ基を保護するのに使用
する基としては、例えばベンジル基、トリチル
基、ベンジルオキシカルボニル基、トシル基、
２，２，２−トリフルオロ−１−ｔ−ブチルオキ
シカルボニルアミノエチル基、２，２，２−トリ
フルオロ−１−ベンジルオキシカルボニルアミノ
エチル基などであるが、このイミノ基を必ずしも
保護する必要はない。 システインメルカプト基を保護するのに使用す
る基としては、ベンジル基、ｐ−メトキシベンジ
ル基、ｐ−ニトロベンジル基、トリチル基、ベン
ジルチオメチル基、エチルカルバモイル基、アセ
トアミドメチル基などである。 本目的化合物〔〕の合成においては、個々の
アミノ酸もしくは低級ペプチドの縮合は、例えば
保護されたα−アミノ基および活性化末端カルボ
キシル基をもつアミノ酸またはペプチドと遊離α
−アミノ基および保護された末端カルボキシル基
をもつアミノ酸またはペプチドとを反応させる
か、あるいは活性化α−アミノ基および保護され
た末端カルボキシル基をもつアミノ酸またはペプ
チドと遊離の末端カルボキシル基および保護され
たα−アミノ基をもつアミノ酸またはペピチドを
反応させることにより実施することができる。 この場合カルボキシル基は、アジド、酸無水
物、酸イミダゾリドまたは活性エステル、例えば
シアノメチルエステル、チオフエニルエステル、
ｐ−ニトロチオフエニルエステル、ｐ−メタンス
ルホニルフエニルエステル、チオジルエステル、
ｐ−ニトロフエニルエステル、２，４−ジニトロ
フエニルエステル、２，４，５−トリクロロフエ
ニルエステル、２，４，６−トリクロロフエニル
エステル、ペンタクロロフエニルエステル、Ｎ−
ヒドロキシコハク酸イミドエステル、Ｎ−ヒドロ
キサフタル酸イミドエステル、８−ヒドロキシキ
ノリンエステルまたはＮ−ヒドロキシピペリジン
エステルなどに変換することによつて、あるいは
カルボジイミド、Ｎ，N′−カルボニル−ジイミ
ダゾールまたはイソオキゾリウム塩、例えばウツ
ドワード反応剤などを使用して反応させることに
よつて活性化することができる。 本発明において好ましい縮合方法は、カルボジ
イミド法、アジド法、活性エステル法および無水
物法である。縮合の各段階では、ラセミ化が起ら
ない方法またはラセミ化が最小になる方法を用い
るのが望ましく、好ましくはアジド法、活性エス
テル法、Wu¨nseh法〔Z.Naturforsch.、21b、426
（1966）〕またはGeige法〔Chem.Ber.、103、788
（1970）〕とりわけ縮合剤としてＮ−エチル−
N′−３−ジメチルアミノプロピル−カルボジイ
ミド（WSCI）を用いる変法などを用いる。 縮合順序は式〔〕で示されるアミノ酸順序で
あれば、如何なる順序からも合成し得るが、Ｃ−
末端側から合成するのが有利である。 例えば、保護されたｈ−PTH（46−84）は、Ｃ
−末端フラグメント55−84とＮ−末端フラグメン
ト46−54をWSCIを用いるGeiger変法により縮合
するのがよい。Ｎ−末端フラグメント46−54は、
フラグメント51−54とフラグメント46−50をアジ
ド法により縮合するのがよい。Ｃ末端フラグメン
ト55−84は、フラグメント61−84とフラグメント
57−60をWSCIを用いるGeiger変法による方法で
縮合し、次いで56番目のアミノ酸、55番目のアミ
ノ酸を順次活性エステル法により縮合するのがよ
い。フラグメント61−84は、フラグメント61−84
は、フラグメント72−84に順序71番目のアミノ
酸、70番目のアミノ酸、69番目のアミノ酸、フラ
グメント62−68および61番目のアミノ酸を活性エ
ステル法またはWSCIを用いるGeiger変法により
縮合すればよい。フラグメント62−68はフラグメ
ント64−68とフラグメント62−63をアジド法によ
り縮合するのが好ましい。フラグメント72−84
は、フラグメント77−84に順次76番目のアミノ
酸、75番目のアミノ酸、74番目のアミノ酸および
フラグメント72−73を活性エステル法または
WSCIを用いるGeiger変法により縮合するのがよ
い。フラグメント77−84はフラグメント82−84と
フラグメント77−81をWSCIを用いるGeiger変法
により縮合するのがよい。 保護された〔Tyr45〕−ｈ−PTH（46−84）およ
び保護された〔Cys45〕−ｈ−PTH（46−84）は、
前述の保護されたｈ−PTH（46−84）と相当する
45番目のアミノ酸をWSCIを用いるGeiger変法に
より縮合するのがよい。 上記のペプチドの合成に際して、その末端カル
ボキシル基は、これを必らずしも保護しなければ
ならないわけではない。例えばアジド法、活性エ
ステル法によつて縮合させる場合には、保護しな
くてもよい。 しかしながら、これらの基を前記で述べたよう
なエステル化によつて、例えばメチルエステル、
エチルエステル、ベンジルエステルなどで保護す
ることもできる。また、これらのエステル基は、
例えばメチルエステル基はこれを希薄な水酸化ナ
トリウム水溶液で分裂し、またはヒドラチドに変
え、またベンジルエステル基は無水弗化水素また
は水素添加分解によつて分裂することができる。
これらペプチドのα−アミノ基は、これらを通常
の保護基、例えばベンジルオキシカルボニル基、
ｔ−ブトキシカルボニル基、ｔ−アミルオキシカ
ルボニル基で保護されるが、ベンジルオキシカル
ボニル基は水素添加分解によつて脱離され、ｔ−
ブトキシカルボニル基、ｔ−アミルオキシカルボ
ニル基はトリフルオロ酢酸で脱離される。 セリンおよびスレオリンの水酸基はベンジル基
で、チロシンの水酸基は２，６−ジクロロベンジ
ル基で、リジンのε−アミノ基はｏ−クロロベン
ジルオキシカルボニル基で、アルギニンのグアニ
ジノ基中のアミノ基はトシル基で、システインの
メルカプト基はｐ−メトキシベンジル基で保護す
るのが適する。これらの保護基に無水弗化水素で
脱離される。システインのメルカプト基の保護基
としてアセトアミドメチル基を使用することがで
きる。この基は無水弗化水素に対して安定である
ため、他の全ての保護基が脱離された時点でPH４
において酢酸水銀で脱離される。 こうして保護されたｈ−PTH（46−84）、保護
された〔Tyr45〕−ｈ−PTH（46−84）および保護
された〔Cys45〕−ｈ−PTH（46−84）が得られる。
これらの保護基は、好ましくは、酸分解、領えば
無水弗化水素の処理によつて一段階で脱離され、
式〔〕の目的化合物が得られる。45番目のシス
テインのメルカプト基の保護基としてアセトアミ
ドメチル基を使用した場合、無水弗化水素処理に
より他の全ての保護基を脱離した後に、PH４にお
いて酢酸第二水銀により脱離することができる。 上記の目的化合物〔〕は、公知のペプチドを
精製する手段により精製することができる。例え
ばセフアデツクスLH−20（商品名．フアルマシ
ア社製、ゲル過剤、ヒドロキシプロピル化デキ
ストランゲル）、セフアデツクスＧ−50（商品名．
フアルマシア社製、ゲル過剤、デキストランゲ
ル）、Dowex1（商品名．ダウケミカル社製、強塩
基性陰イオン交換樹脂）、カルボキシメチルセル
ロース等の担体を用いるカラムクロマトグラフイ
ーにより行うことができる。 本発明のペプチド〔〕は、その方法の条件に
より塩基またはその塩の形で得られる。通常は酢
酸の如き有機酸との塩の形で保存され得る。 本発明のペプチド〔〕を抗原として得られる
抗体または本ペプチド〔〕を抗原とする全ての
免疫反応により、エンザイムイムノアツセイ、ラ
ジオイムノアツセイを利用してｈ−PTHを測定
できる。 次に、ｈ−PTH（53−84）、ｈ−PTH（51−84）
およびｈ−PTH（46−84）の抗体形成について述
べる。 ＜抗体の作成＞ ｈ−PTH（53−84）、ｈ−PTH（51−84）およ
びｈ−PTH（46−84）を各々300μｇを0.1N酢酸
250μに溶かし、等量のFreunds Complate
Adjuvantと混合エマルジヨンを調製する。これ
を体重280〜340ｇの雄モルモツト５匹づつに免疫
する。１回目は四跂の足しようおよび臀部に、２
回目からは側腹部に３週間毎に皮下注射を繰り返
し、５回目投与後、１週間後に心臓穿刺により採
血する。 ＜標識抗原＞ 反応管にI125／mCiを取り、これに0.5Mリン酸
緩衝液（PH7.4）0.5mlを加え、〔Tyr45〕−ｈ−PTH
（46−84）5μｇおよびクロラミンT50μｇを加えて
30秒間撹拌した後、ピロ亜硫酸ソーダ120μｇを
加える。これに少量のヨウ化カリおよびBSA5mg
を加えた後、セフアデツクスＧ−50のカラム
（1.0×20cm）によるカラムクロマトグラフイーを
行う。７〜10mlの分画を集める。希釈液としてベ
ロナール緩衝液（PH8.6、0.05M、0.5％BSAを含
む）を用い１分析当り約0.01μCi使用する。 ＜分析方法＞ 試料液100μに抗体100μを加え、これに標
識ペプチド100μを加え、４℃で３日間反応さ
せる。次いでモルモツト正常血清100μ、抗モ
ルモツトgG家ウサギ血清100μを加え、25℃
で30分間反応した後、3000r.p.m.で30分間遠心分
離し、上清を吸引去した後、沈澱物のカウント
計測する。 抗体を500〜8000倍希釈して上記分析を行い、
結合率が30〜40％になる希釈倍率を測定する。 ＜測定結果＞ ｈ−PTH（53−84） 3000倍 ｈ−PTH（51−84） 500倍 ｈ−PTH（46−84） 8000倍 尚、本明細書中に記載の略記号は次の意味を有
する。 Gln；Ｌ−グルタミン Ser；Ｌ−セリン Lys；Ｌ−リジン Ala；Ｌ−アラニン Thr；Ｌ−スレオニン Leu；Ｌ−ロイシン Val；Ｌ−バリン Asp；Ｌ−アスパラギン酸 Glu；Ｌ−グルタミン酸 Gly；グリシン His；Ｌ−ヒスチジン Asn；Ｌ−アスパラギン Arg；Ｌ−アルギニン Pro；Ｌ−プロリン Tyr；Ｌ−チロシン Cys；Ｌ−システイン BOC；ｔ−ブチルオキシカルボニル AOC；ｔ−アミルオキシカルボニル Ｚ−Cl；ｏ−クロロベンジルオキシカルボニル Bzl；ベンジル Tos；トシル OMe；メチルエステル OEt；エチルエステル OBzl；ベンジルエステル OSU；Ｎ−ヒドロキシコハク酸イミドエステ
ル ONP；ｐ−ニトロフエニルエステル PAC；フエナシルエステル Acm；アセトアミドメチル TosoH；ｐ−トルエンスルホン酸 TFA；トリフルオロ酢酸 Et3N；トリエチルアミン TBA；トリベンジルアミン NMM；Ｎ−メチルモルホリン HOBT；１−ヒドロキシベンゾトリアゾール DMF；ジメチルホルムアミド THF；テトラヒドロフラン NMP；Ｎ−メチル−２−ピロリドン MeOH；メタノール EtOH；エタノール BuOH；ブタノール エーテル；ジエチルエーテル WSCI；Ｎ−エチル、N′−３−ジメチルアミ
ノプロピル−カルボジイミド HOBT；１−ヒドロキシベンゾトリアゾール 次に実施例を挙げて本発明の製造例を具体的に
説明する。 尚、実施例中で使用した薄層クロマトグラフイ
ー（TLC）の担体および展開溶媒ならびにアミ
ノ酸分析用の加水分解の条件は特記しない限り、
次の通りである。 担体；メルク社製シリカゲルＧ 展開溶媒； １；CHCl3−MeOH−酢酸（95：５：３） ２； 〃 （85：15：
５） ３； 〃 （85：10：
５） ４； 〃 （80：25：
２） ５；ベンゼン−酢酸エチル（１：１） ６； 〃 （２：１） ７；CHCl3−EtOH−酢酸エチル（５；２：５） ８； 〃 （10：
１：５） 担体；メルク社製セルロース 展開溶媒； ９；BuOH−ピリジン−酢酸−水（２：２：２：
３） 10；BuOH−ピリジン−酢酸−水（１：１：１：
２） アミノ酸分析用の加水分解条件 試料0.5μMを6N塩酸１ml、アニソール0.1mlで
110℃、48時間加水分解した。 実施例 １ ｈ−PTH（46−84）；Ｈ−Ala−Gly−Ser−Gln
−Arg−Pro−Arg−Lys−Lys−Glu−Asp−
Asn−Val−Leu−Val−Glu−Ser−His−Glu
−Lys−Ser−Leu−Gly−Glu−Ala−Asp−
Lys−Ala−Asp−Val−Asp−Val−Leu−Thr
−Lys−Ala−Lys−Ser−Gln−OH (1) Ｐ（83−84）；BOC−Ser（Bzl）−Gln−OBzl
〔１〕 BOC−Gln−OBzl81.4ｇ（0.242M）を
TFA270mlに溶かし、室温で45分間撹拌した
後、TFAを減圧留去した。残渣にエーテルを
加え、生じた沈澱を集めた。これをDMF270ml
に溶かし、これにHOBT32.67ｇ（0.242M）、
BOC−Ser（Bzl）−OH67.35ｇ（0.242M）およ
びWSCI44.29ml（0.242M）を加え、一夜撹拌
した。反応後、DMFを減圧下留去した。残渣
を酢酸エチル440mlに溶かし、1N塩酸、５％重
曹水、水の順に洗浄した後、無水芒硝で乾燥
し、減圧乾固した。酢酸エチル−ヘキサンより
再結して〔１〕101.43ｇ（収率81.6％）を得
た。 融点121〜123℃ TLC；Rf7＝0.75 〔α〕27 D−14.12（Ｃ＝0.1、DMF） 元素分析〔C27H35O7N3として〕 Ｃ％ Ｈ％ Ｎ％ 測定値 62.98 7.03 8.01 計算値 63.14 6.87 8.18 (2) Ｐ（82−84）；BOC−Lys（Ｚ−Cl）−Ser
（Bzl）−Gln−OBzl〔２〕 〔１〕98.87ｇ（192.5ｍＭ）をTFA440mlに
加え、室温で30分間撹拌した後、TFAを減圧
留去した。残渣をDMF330mlに溶かし、
HOBT28.6ｇ、BOC−Lys（Ｚ−Cl）−OHの
DMF溶液（BOC−Lys（Ｚ−Cl）−OH.
TBA103.33ｇ（1.1倍Ｍ）を酢酸エチル−1N塩
酸で処理し、酢酸エチル層を無水芒硝で乾燥
後、減圧乾固した。残渣をDMF110mlに溶か
す）およびWSCI38.72ml（1.1倍モル）を加え、
室温で２日間撹拌した。反応後、DMFを減圧
留去し、残渣に氷水を加え、生じた沈澱を集め
た。エタノール−ヘキサンで３回再結して
〔２〕111.06ｇ（収率71.2％）を得た。 TLC；Rf1＝0.32、Rf7＝0.76 融点；145〜147℃ 〔α〕27 D−13.1（Ｃ＝1.0、DMF） 元素分析〔C41H52O10N5Clとして〕 Ｃ％ Ｈ％ Ｎ％ 測定値 61.02 6.65 8.74 計算値 60.77 6.47 8.65 (3) Ｐ（80−81）；BOC−Lys（Ｚ−Cl）−Ala−
OMe〔３〕 BOC−Lys（Ｚ−Cl）−OH・TBA234.24ｇを
酢酸エチルに懸濁し、1N塩酸、水の順に洗浄
した。無水芒硝で乾燥し、減圧乾固した後、
DMF400mlに溶かした。これにＨ−Ala−
OMe・HCl67.0ｇ、HOBT64.8ｇ、WSCI87.84
mlを加え、室温で一夜撹拌した。反応後、
DMFを減圧留去し、残渣を酢酸エチル２に
溶かし、５％重曹水、1N塩酸、水の順に洗浄
した。無水芒硝で乾燥後、減圧乾固した。酢酸
エチル−ヘキサンより再結して〔３〕231.8ｇ
（収率96.6％）を得た。 融点；58〜60℃ TLC；Rf1＝0.77 〔α〕27 D−17.16（Ｃ＝1.0、DMF） 元素分析〔C23H34O7N3Clとして〕 Ｃ％ Ｈ％ Ｎ％ 測定値 54.96 6.78 8.56 計算書 55.25 6.85 8.40 (4) Ｐ（79−81）；BOC−Thr（Bzl）−Lys（Ｚ−
Cl）−Ala−OMe〔４〕 〔３〕174.99ｇ（0.35M）をTFA500mlに加
え、室温で50分間撹拌した。反応後、TFAを
減圧留去し、残渣を酢酸エチルに溶かした後、
５％重曹水、水の順に洗浄した。無水芒硝で乾
燥後、減圧乾固した。残渣をDMF400mlに溶か
し、これにHOBT49.95ｇ（1.05倍Ｍ）、BOC−
Thr（Bzl）−OH114.33ｇ（1.05倍Ｍ）および
WSCI67.7ml（1.05倍Ｍ）を加え、室温で一夜
撹拌した。反応後、DMFを減圧留去し、残渣
に氷水を加えた。生じた沈澱を集め熱エタノー
ルで４回再沈澱して〔４〕99.31ｇを得た。 母液は減圧濃縮し、残渣をクロロホルムに溶
かし、５％重曹水（４回）、1N塩酸（２回）、
水（２回）の順に洗浄した。無水芒硝で乾燥
後、減圧乾固した。残渣をシリカゲルカラムク
ロマトグラフイー〔溶出溶媒クロロホルム−エ
タノール−酢酸（５：１：５）〕により精製し
て〔４〕35.09ｇを得た。不純物を含む区分は、
次の追加合成の際のカラムクロマトグラフイー
の精製の際に合わせて用いる。 次に〔３〕22.5ｇ（45ｍＭ）をTFA70mlに
加え、室温で45分間撹拌した。反応後、TFA
を減圧留去し、残渣をDMF50mlに溶かした後、
NMMでPH７に調節した。次いで、HOBT6.68
ｇ（1.1倍Ｍ）、BOC−Thr（Bzl）−OH15.31ｇ
（1.1倍Ｍ）、WSCI9.06ml（1.1倍Ｍ）を加え、一
夜撹拌した。反応後、DMFを減圧留去し、残
渣をクロロホルム200mlに溶かした後、５％重
曹水、1N塩酸、水の順に洗浄した。無水芒硝
で乾燥後、減圧乾固した。残渣を前の不純物を
含む区分と合せてシリカゲルカラムクロマトグ
ラフイーにより精製した。相当する区分を減圧
乾固し、クロロホルム−ヘキサンで２回再沈澱
を行い、〔４〕48.80ｇを得た。 全量183.2ｇ 融点；132〜134℃ TLC；Rf7＝0.85 元素分析〔C34H47O9N4Clとして〕 Ｃ％ Ｈ％ Ｎ％ 測定値 59.06 7.05 7.41 計算値 59.08 6.85 8.11 (5) Ｐ（77−78）；BOC−Val−Leu−OEt〔５〕 BOC−Val−OH101.99ｇ（0.47M）、Ｈ−
Leu−OEt・HCl91.98ｇ（0.47M）、
HOBT63.45ｇ、WSCI86.01ml（0.47M）を
THF400mlに溶かし、一夜撹拌した。 反応後、THFを減圧留去し、残渣を酢酸エ
チル400mlに溶かした後、５％重曹水、1N塩
酸、水の順に洗浄した。無水芒硝で乾燥後、減
圧乾固した。酢酸エチル−ヘキサンより再結し
て〔５〕153.7ｇ（収率91.2％）を得た。 融点；108〜110℃ TLC；Rf1＝0.63 〔α〕27 D−25.78（Ｃ＝1.0、DMF） 元素分析〔C18H34O5N2として〕 Ｃ％ Ｈ％ Ｎ％ 測定値 60.35 9.42 8.39 計算値 60.31 9.56 7.82 (6) Ｐ（77−78）；BOC−Val−Leu−OH〔６〕 〔５〕134.43ｇ（0.375M）をエタノール400
mlに溶かし、氷冷下1N−NaOH412.5ml（1.1倍
Ｍ）を加え、撹拌した。１時間半後、1N−
NaOH37.5（0.1倍Ｍ）を追加し、１時間撹拌し
た。反応液に1N塩酸75mlを加え、さらに少量
の塩酸でPH５とした。エーテルで洗浄し、水層
に1N塩酸400mlを加えて、酢酸エチルで抽出し
た。酢酸エチル層を乾燥後、減圧乾固し、酢酸
エチル−ヘキサンより再結して〔６〕119.66ｇ
（収率96.6％）を得た。 TLC；Rf1＝0.35、Rf7＝0.58 元素分析〔C16H30O5N2として〕 Ｃ％ Ｈ％ Ｎ％ 測定値 57.83 9.40 8.78 計算値 58.16 9.15 8.48 (7) Ｐ（77−81）；BOC−Val−Leu−Thr（Bzl）
−Lys（Ｚ−Cl）−Ala−OMe〔７〕 〔４〕182ｇ（0.263M）をTFA500mlに加
え、室温で50分間撹拌した。反応後、TFAを
減圧留去し、残渣にヘキサンを加えた。生じた
油状物をデカンテーシヨンにより溶媒と分離
し、DMF350mlに溶かした。これを冷却下
NMMでPH6.5に調節し、HOBT42.61ｇ（1.2倍
Ｍ）、〔６〕104.28ｇ（1.2倍Ｍ）および
WSCI57.8ml（1.2倍Ｍ）を加え、室温で１時間
半撹拌すると固化し、DMF200ml追加しても撹
拌不能のため、一夜室温で放置し、次いで30℃
で４時間放置した。反応物に氷水を加え、沈澱
物を集めた。これをクロロホルム2.5に溶か
し、５％重曹水、1N塩酸、水の順に洗浄した。
クロロホルムを減圧留去し、残渣をクロロホル
ム−エーテル−ヘキサンより再結して〔７〕
224.68ｇ（収率94.9％）を得た。 融点；119〜221℃ TLC；Rf1＝0.15、Rf8＝0.68 〔α〕27 D−11.72（Ｃ＝1.0、DMF） 元素分析〔C45H67O11N6Clとして〕 Ｃ％ Ｈ％ Ｎ％ 測定値 59.80 7.56 9.83 計算値 59.82 7.48 9.30 (8) Ｐ（77−81）；BOC−Val−Leu−Thr（Bzl）
−Lys（Ｚ−Cl）−Ala−OH〔８〕 〔７〕72.3ｇ（80ｍＭ）をクロロホルム720
mlに溶かし、氷冷下1N−KOHの90％エタノー
ル溶液800mlを加え、０〜５℃で40分間撹拌し
た。次いで、氷冷下1N塩酸800mlを加え、クロ
ロホルム500mlを追加して抽出した。クロロホ
ルム層を水洗し、無水芒硝で乾燥後、減圧乾固
した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフ
イー〔溶出溶媒クロロホルム−エタノール−酢
酸エチル（５：１：５）〕により精製した。相
当する区分を減圧乾固してクロロホルム−メタ
ノール−エーテル−ヘキサンより３回再結して
〔８〕を得た。 上記の操作を３回繰り返し、〔７〕計216.9ｇ
を加水分解して、〔８〕156.07ｇ（収率73.1％）
を得た。 融点；180〜183℃ TLC；Rf3＝0.69 〔α〕27 D−7.54（Ｃ＝1.0、DMF） 元素分析〔C44H65O11N6Cl・1/2H2Oとして〕 Ｃ％ Ｈ％ Ｎ％ 測定値 58.94 7.67 9.64 計算値 58.82 7.40 9.35 アミノ酸分析〔試料3.1mg／１ml6N塩酸＋0.1
mlアニソール、45時間、110℃加水分解）；
Thr0.96(1)、Ala1、Val0.93(1)、Leu0.94(1)、
Lys1.01(1) (9) Ｐ（77−84）；BOC−Val−Leu−Thr（Bzl）
−Lys（Ｚ−Cl）−Ala−Lys（Ｚ−Cl）−Ser
（Bzl）−Gln−OBzl
〔９〕
〔２〕104.5ｇ（129ｍＭ）をTFA400mlに加
え、室温で40分間撹拌した。反応後、TFAを
減圧留去し、残渣にエーテルを加えた。生じた
沈澱物を集め、DMF500mlに溶かした。これに
HOBT20.9ｇ（1.2倍Ｍ）、〔８〕137.7ｇ（1.2倍
Ｍ）、WSCI28.3ml（1.2倍Ｍ）を加え、NMM
でPH７に調節し、一夜撹拌した。反応液がゲル
状となつたため、さらにDMF150mlおび
WSCI12.8mlを追加し、一夜撹拌した。反応液
に氷水を加え、析出した沈澱物を集め、熱メタ
ノールで５回洗浄処理して
え、室温で40分間撹拌した。反応後、TFAを
減圧留去し、残渣にエーテルを加えた。生じた
沈澱物を集め、DMF500mlに溶かした。これに
HOBT20.9ｇ（1.2倍Ｍ）、〔８〕137.7ｇ（1.2倍
Ｍ）、WSCI28.3ml（1.2倍Ｍ）を加え、NMM
でPH７に調節し、一夜撹拌した。反応液がゲル
状となつたため、さらにDMF150mlおび
WSCI12.8mlを追加し、一夜撹拌した。反応液
に氷水を加え、析出した沈澱物を集め、熱メタ
ノールで５回洗浄処理して
〔９〕185.36ｇ（収
率90.68％）を得た。 TLC；Rf2＝0.85 〔α〕27 D−12.84（Ｃ＝1.0、DMF） 元素分析〔C80H107O18N11Cl2として〕 Ｃ％ Ｈ％ Ｎ％ 測定値 60.61 7.04 10.38 計算値 60.74 6.82 99.74 アミノ酸分析〔試料3.1mg／１ml6N塩酸＋0.1
mlアニソール、110℃、45時間加水分解）；
Thr0.93(1)、Ser0.91(1)、Glu1.01(1)、Alal、
Val0.74(1)、Leu0.75(1)、Lys2.01(2) (10) Ｐ（76−84）；BOC−Asp（OBzl）−Val−Leu
−Thr（Bzl）−Lys（Ｚ−Cl）−Ala−Lys（Ｚ−
Cl）−Ser（Bzl）−Gln−OBzl〔10〕
率90.68％）を得た。 TLC；Rf2＝0.85 〔α〕27 D−12.84（Ｃ＝1.0、DMF） 元素分析〔C80H107O18N11Cl2として〕 Ｃ％ Ｈ％ Ｎ％ 測定値 60.61 7.04 10.38 計算値 60.74 6.82 99.74 アミノ酸分析〔試料3.1mg／１ml6N塩酸＋0.1
mlアニソール、110℃、45時間加水分解）；
Thr0.93(1)、Ser0.91(1)、Glu1.01(1)、Alal、
Val0.74(1)、Leu0.75(1)、Lys2.01(2) (10) Ｐ（76−84）；BOC−Asp（OBzl）−Val−Leu
−Thr（Bzl）−Lys（Ｚ−Cl）−Ala−Lys（Ｚ−
Cl）−Ser（Bzl）−Gln−OBzl〔10〕
〔９〕183.5ｇ（116ｍＭ）をTFA500mlに加
え、室温で65分間撹拌した後、TFAを減圧留
去した。残渣にエーテルを加え、生じた沈澱物
を集め、DMF900mlに溶かした。これに
HOBT18.8ｇ（1.2倍Ｍ）、BOC−Asp（OBzl）
−OH45.0ｇ（1.2倍Ｍ）、BOC−Asp（OBzl）−
OH45.0ｇ（1.2倍Ｍ）およびWSCI25.5ml（1.2
倍Ｍ）を加え、NMMでPH７に調節した後、室
温で一夜撹拌した。反応液、DMFを減圧留去
し、残渣に氷水を加えた。生じた沈澱物を集
め、熱メタノールで２回洗浄処理した。不溶物
を熱DMFに溶かし、エタノールを加えた。生
じた沈澱物を集め、メタノールに懸濁した後、
過して〔10〕205.5ｇ（収率99.14％）を得
た。 融点；259〜262℃ TLC；Rf2＝0.81 〔α〕27 D−13.7（Ｃ＝1.0、DMF） 元素分析〔C91H118O21N12Cl2として〕 Ｃ％ Ｈ％ Ｎ％ 測定値 61.01 6.84 9.54 計算値 61.16 6.66 9.41 (11) Ｐ（75−84）；BOC−Val−Asp（OBzl）−Val
−Leu−Thr（Bzl）−Lys（Ｚ−Cl）−Ala−Lys
（Ｚ−Cl）−Ser（Bzl）−Gln−OBzl〔11〕 〔10〕196.55ｇ（0.11M）をTFA500mlに加
え、室温で60分間撹拌した後、TFAを減圧留
去した。残渣にエーテルを加え、生じた沈澱物
を集め、DMF1.3に溶かした。これに撹拌し
ながらHORT19.3ｇ（1.3倍Ｍ）、BOC−Val−
OH31.1ｇ（1.3倍Ｍ）およびWSCl26.2ml（1.3
倍Ｍ）を加え、NMMでPH７に調節した後、室
温で撹拌した。１時間後に反応液がゲル状とな
つたため一夜放置した。次いで、NMP400ml、
２，４−ジニトロフエノール20.2ｇ、
WSCI26.2ml（1.3倍Ｍ）を加えた。約10分間で
再度ゲル状となり、室温で一夜放置した。反応
後、氷と５％重曹水を加え、生じた沈澱物を集
め、水で３回洗浄した後、熱メタノールで４回
洗浄処理して〔11〕203.74ｇ（収率98.2％）を
得た。 融点；267〜270℃ TLC；Rf3＝0.56 元素分析〔C96H127O22N13Cl2・H2Oとして〕 Ｃ％ Ｈ％ Ｎ％ 測定値 60.25 6.78 9.82 計算値 60.55 6.83 9.56 アミノ酸分析〔試料3.1mg／１ml6N塩酸＋0.1
mlアニソール、48時間、110℃加水分解〕；
Asp1.04(1)、Thr0.83(1)、Ser0.78(1)、Glu1.03
(1)、Ala1.08(1)、Leu1、Val1.87(2)、Lys2.19(2) (12) Ｐ（74−84）；BOC−Asp（OBzl）−Val−Asp
（OBzl）−Val−Leu−Thr（Bzl）−Lys（Ｚ−Cl）
−Ala−Lys（Ｚ−Cl）−Ser（Bzl）−Gln−OBzl
〔12〕 〔11〕151.2ｇ（0.08M）に塩化メチレン100
ml、TFA450mlを加え、室温で40分間撹拌した
後、TFAを減圧留去した。残渣にエーテルを
加え、生じた沈澱物にDMF500mlとNMP1を
加えて溶かした。これに氷、５％重曹水を加
え、生じた沈澱物を集め、充分水洗した後、乾
燥した。これをDMF500mlとNMP1の混液に
溶かし、BOC−Asp（OBzl）−OSU44.0ｇ（1.3
倍モル）、HOBT1.4ｇ（0.13倍Ｍ）、NMM11.4
ml（1.3倍Ｍ）を加え、室温で一夜撹拌した。
反応液を氷水に加え、生じた沈澱物を集め、メ
タノールを加えて加熱処理した。この処理を２
回繰り返して〔12〕157.6ｇ（収率94.2％）を
得た。 TLC；Rf3＝0.56 元素分析〔C107H135O25N14Cl2として〕 Ｃ％ Ｈ％ Ｎ％ 測定値 61.35 6.66 9.90 計算値 61.45 6.65 9.38 アミノ酸分析〔6N塩酸／アニソール、110
℃、48時間〕；Asp1.86(2)、Thr0.87(1)、Ser0.71
(1)、Glu1.01(1)、Ala1.00(1)、Val1.91(2)、
Leu1、Lys2.01(2) (13) Ｐ（72−73）；BOC−Lys（Ｚ−Cl）−Ala−
OH〔13〕 〔３〕48.0ｇ（96ｍＭ）をエタノール100ml
に溶かし、これに０℃に冷却下1N−
NaOH115.2ml（1.2倍Ｍ）を加え、50分間撹拌
した。反応後、1N塩酸19mlを加えPH６に調節
した後、35℃でエタノールを減圧留去した。残
渣に酢酸エチル、氷水、1N塩酸96mlを加えて
抽出した。酢酸エチル曹を水洗し、無水芒硝で
乾燥後、減圧乾固した。残渣を酢酸エチル−ヘ
キサンより再結して〔13〕45.90ｇ（収率98.4
％）を得た。 融点；116〜119℃ TLC；Rf7＝0.44 元素分析〔C22H32O7N3Clとして〕 Ｃ％ Ｈ％ Ｎ％ 測定値 54.57 6.91 8.95 計算値 54.37 6.64 8.65 (14) Ｐ（72−84）；BOC−Lys（Ｚ−Cl）−Ala−
Asp（OBzl）−Val−Asp（OBzl）−Val−Leu−
Thr（Bzl）−Lys（Ｚ−Cl）−Ala−Lys（Ｚ−Cl）
−Ser（Bzl）−Gln−OBzl〔14〕 〔12〕125.46（60ｍＭ）に塩化メチレンン60
ml、TFA360mlを加え、室温で55分間撹拌した
後、TFAを減圧留去した。残渣にエーテルを
加え、生じた沈澱物を集めた。これにDMF600
mlとNMP600mlを加えて溶かした。これを氷
＋５％重曹水に加えた。生じた沈澱物を取
し、３回水洗した後、メタノール、エーテルで
洗浄後、乾燥した。これにNMP1200mlと
DMF600mlを加えて溶かし、HOBT10.56ｇ
（1.3倍Ｍ）、〔13〕37.92ｇ（1.3倍Ｍ）、
WSCI14.28ml（1.3倍Ｍ）を加え、室温で３日
間撹拌した。反応液を氷水に加え、生じた沈澱
物を集め、水で３回洗浄後、熱メタノールで２
回洗浄した。次いでエーテルで洗浄した後、乾
燥して〔14〕142.74ｇ（収率96.7％）を得た。 元素分析〔C124H161D29N27Cl3として〕 Ｃ％ Ｈ％ Ｎ％ 測定値 60.30 6.79 9.70 計算値 60.54 6.60 9.68 アミノ酸分析〔6N塩酸／アニソール、110
℃、48時間〕；Asp1.86(2)、Thr0.85(1)、Ser0.67
(1)、Glu1.02(1)、Ala1.90(2)、Val1.93(2)、
Leu1、Lys2.93(3) (15) Ｐ（71−84）；BOC−Asp（OBzl）−Lys（Ｚ
−Cl）−Ala−Asp（OBzl）−Val−Asp（OBzl）
−Val−Leu−Thr（Bzl）−Lys（Ｚ−Cl）−Ala
−Lys（Ｚ−Cl）−Ser（Bzl）−Gln−OBzl〔15〕 〔14〕132.84ｇ（54ｍＭ）をTFA420mlに加
え、室温で55分間撹拌した後、TFAを減圧留
去した。残渣にエーテルを加え、生じた沈澱物
を集め、NMP720mlとDMF720mlを加えて溶か
した。これを氷＋５％重曹水に加え、生じた沈
澱物を取し、水で３回、メタノールおよびエ
ーテルで各１回洗浄した。この沈澱物に
NMP840mlとDMF840mlを加えて溶かし、これ
に２，４−ジヒドロフエノール11.93ｇ（1.2倍
Ｍ）、HOBT0.732ｇ（0.14倍Ｍ）、BOC−Asp
（OZzl）−OSU3.18ｇ（1.2倍Ｍ）、NMM5.94ml
（1.4倍Ｍ）を加え、室温で２日間撹拌した。反
応液にNMP120ml、DMF60mlを追加して溶か
し、BOC−Asp（OBzl）−OSU4.56ｇ（0.2倍
Ｍ）、NMM1.19ml（0.2倍Ｍ）を加え、さらに
２日間室温にて撹拌した。反応液を氷水に加
え、生じた沈澱物を集め、水洗した。次いで、
熱メタノールに懸濁し、冷却した後、取し
た。この操作を３回繰り返して〔15〕136.72ｇ
（収率95.0％）を得た。 元素分析〔C135H172O32N18Cl3として〕 Ｃ％ Ｈ％ Ｎ％ 測定値 60.33 6.55 9.76 計算値 60.83 6.51 9.46 アミノ分分析〔6N塩酸／アニソール、110
℃、48時間〕Asp2.60(3)、Thr0.83(1)、Ser0.65
(1)、Glu1.00(1)、Ala1.81(2)、Val1.92(2)、
Leu1、Lys2.85(3) (16) Ｐ（70−84）；BOC−Ala−Asp（OBzl）−
Lys（Ｚ−Cl）−Ala−Asp（OBzl）−Val−Asp
（OBzl）−Val−Leu−Thr（Bzl）−Lys（Ｚ−Cl）
−Ala−Lys（Ｚ−Cl）−Ser（Bzl）−Gln−OBzl
〔16〕 〔15〕108.74ｇ（40.8ｍＭ）をTFA325mlに
加え、室温で70分間撹拌した後、TFAを減圧
留去した。残渣にエーテルを加え、生じた沈澱
物を集め、NMP600mlとDMF600mlを加えて溶
かした後、５％重曹水に加えた。生じた沈澱物
を集め、水で３回、メタノールで１回洗浄し
た。次いで、この沈澱物にNMP720mlと
DMF720mlを加えて溶かし、これに２，４−ジ
ニトロフエノール9.0ｇ、HOBT0.55ｇ（0.1倍
Ｍ）、BOC−Ala−OSU17.52ｇ（1.5倍Ｍ）、
NMM6.72ml（1.5倍Ｍ）を加え、室温で一夜撹
拌した。次いで、BOC−Ala−OSU2.34ｇ、
NMM0.9mlを追加し、５日間室温で撹拌した。
反応液を氷水に加え、生じた沈澱物を集め、水
で３回、メタノールで２回洗浄して〔16〕
109.78ｇ（収率98.3％）を得た。 融点；280℃以上（分解） アミノ酸分析〔6N塩酸／アニソール、110℃ 、48時間〕；Asp2.57(3)、Thr0.84(1)、Ser0.67
(1)、Glu1.00(1)、Ala2.53(3)、Val1.98(2)、
Leu1、Lys2.79(3) (17) Ｐ（69−84）；BOC−Glu（OBzl）−Ala−
Asp（OBzl）−Lys（Ｚ−Cl）−Ala−Asp（OBzl）
−Val−Asp（OBzl）−Val−Leu−Thr（Bzl）−
Lys（Ｚ−Cl）−Ala−Lys（Ｚ−Cl）−Ser（Bzl）
−Gln−OBzl〔17〕 〔16〕85.38ｇ（31.2ｍＭ）をTFA280mlに加
え、室温で60分間撹拌した後、TFAを減圧留
去した。残渣にエーテルを加え、生じた沈澱物
を集め、DMF540mlとNMP540mlを加えて溶か
し、これを５％重曹水＋氷に加えた。生じた沈
澱物を集め、水で３回、メタノールで１回洗浄
した。これにDMF600mlとNMP780mlを加えて
溶かし、これに２，４−ジニトロフエノール
6.89ｇ（1.2倍Ｍ）、HOBT0.59ｇ（0.14倍Ｍ）、
BOC−Glu（OBzl）−OSU18.97ｇ（1.4倍Ｍ）、
NMM4.8ml（1.4倍Ｍ）を加え、室温で３日間
撹拌した。次いでBOC−Glu（OBzl）−
OSU2.71ｇ（0.2倍Ｍ）にDMF60ml＋NMP50
mlを加えて溶かした溶液およびNMM0.64ml
（1.4倍Ｍ）を加え、さらに室温で３日間撹拌し
た。次いで先と同量のBOC−Glu（OBzl）−
OSUとNMMを加え、室温で一夜撹拌した。
反応後、反応液を氷水に加えて、生じた沈澱物
を集め、水で３回洗浄した。この沈澱物を熱メ
タノールに懸濁し、冷却した後取した。この
操作を３回繰り返して〔17〕88.97ｇ（収率
96.5％）を得た。 アミノ酸分析〔6N塩酸／アニソール、110℃ 、24時間〕；Asp2.66(3)、Thr0.91(1)、Ser0.78
(1)、Glu1.76(2)、Ala2.65(3)、Val1.97(2)、
Leu1、Lys2.88(3) (18) Ｐ（66−68）；BOC−Ser（Bzl）−Leu−Gly
−OBzl〔18〕 BOC−Leu−OH・H2O45.64ｇ、Ｈ−Gly−
OBzl・TosOH61.87ｇおよびHOBT24.87ｇを
THF200mlに溶かし、これに冷却下WSCI33.69
mlを滴下した後、室温で一夜撹拌した。反応液
を減圧濃縮して油状物を得た。これを酢酸エチ
ル600mlに溶かし、５％重曹水、1N塩酸、水で
各々３回洗浄した。有機層を無水硫酸ナトリウ
ムで乾燥し、減圧乾固して油状物69.0ｇ（収率
99％）を得た。これを塩化メチレン10mlに溶か
し、５℃に冷却下TFA250mlを加えた後、撹拌
しながら室温で20分間反応させた。TFAを減
圧下留去し、残渣にDMF200mlを加え、０℃に
冷却下NMMを加えて中和した。これに
HOBT20.7ｇ（0.19M）、BOC−Ser（Bzl）−
OH56ｇ（0.19M）およびWSCI34.8ml
（0.19M）を加えた後、室温で一夜撹拌した。
DMFを減圧下留去し、残渣に酢酸エチルを加
え、５％重曹水、1N塩酸、水の順に洗浄した。
無水硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧濃縮し
た。残渣にヘキサンを加え、生じた沈澱物を
取した。酢酸エチル−ヘキサンで再結晶した
後、酢酸エチル−エーテル−ヘキサンで再結晶
して〔18〕72.47ｇ（収率72.0％）を得た。 融点；112〜113℃ TLC；Rf5＝0.55 元素分析〔C30H41O7N3として〕 Ｃ％ Ｈ％ Ｎ％ 測定値 65.06 7.75 7.36 計算値 64.84 7.44 7.56 (19) Ｐ（65−68）；BOC−Lys（Ｚ−Cl）−Ser
（Bzl）−Leu−Gly−OBzl〔19〕 〔18〕72.47ｇ（0.13M）を塩化メチレン20
mlに溶かし、５℃に冷却下TFA250mlを加えた
後、室温で20分間撹拌した。反応後TFAを減
圧下留去し、残渣にエーテルを加えた。生じた
沈澱物を集め、DMF100mlを加える。これに５
℃に冷却下NMMを加えて中和した。 一方、BOC−Lys（Ｚ−Cl）−OH・TBA70ｇ
（0.143M）に酢酸エチル200mlを加え、1N塩
酸、水で２回洗浄した。酢酸エチル層を無水硫
酸マグネシウムで乾燥後、減圧濃縮した。得ら
れた油状物にDMF100mlを加え、BOC−Lys
（Ｚ−Cl）−OHのDMF溶液とした。 上記の中和したDMF溶液にHOBT19.3ｇ前
記で得たBOC−Lys（Ｚ−Cl）−OHのDMF溶液
およびWSCI26.2ml（0.143M）を加え、室温で
一夜撹拌した。反応後、DMFを減圧下留去し、
残渣に酢酸エチル400mlを加え、５％重曹水で
３回、1N塩酸で２回、水で２回洗浄した。有
機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧濃
縮した。残渣にエーテルおよびヘキサンを加
え、生じた沈澱物を集め、酢酸エチル−メタノ
ール−ヘキサンから再結晶して〔19〕104ｇ
（収率94.6％）を得た。 融点；128〜130℃ TLC；Rf1＝0.51、Rf2＝0.88 元素分析〔C44H58O10N5Clとして〕 Ｃ％ Ｈ％ Ｎ％ 測定値 61.96 7.02 7.91 計算値 62.00 6.86 8.22 アミノ酸分析〔1μM／6N塩酸0.3ml、105℃ 、20時間〕；Ser0.92(1)、Gly0.98(1)、Leu1、
Lys0.99(1) (20) Ｐ（65−68）；BOC−Lys（Ｚ−Cl）−Ser
（Bzl）−Leu−Gly−OH〔20〕 〔19〕85.3ｇにメタノール600mlを加え、５
℃で冷却下撹拌しながら、1N−NaOH120mlを
加えた後、室温で３時間撹拌した。反応後、５
℃に冷却下1N塩酸20mlを加えた後、メタノー
ルを減圧下留去した。残渣の水溶液に５℃に冷
却下1N塩酸100mlを加え、クロロホルム500ml
で抽出した。クロロホルム層を水洗し、無水芒
硝で乾燥後、減圧濃縮した。残渣にヘキサンを
加え、生じた沈澱物を集め、酢酸エチルから再
結晶して〔20〕66.21ｇ（収率87％）を得た。 融点；156〜158℃ TLC；Rf2＝0.63 元素分析〔C37H52O10N5Clとして〕 Ｃ％ Ｈ％ Ｎ％ 測定値 58.49 6.95 9.09 計算値 58.30 6.88 9.19 アミノ酸分析〔1μM／0.3ml6N塩酸、105 ℃、20時間〕；Ser0.92(1)、Gly0.97(1)、Leu1、
Lys0.99(1) (21) Ｐ（64−68）；BOC−Glu（OBzl）−Lys（Ｚ−
Cl）−Leu−Gly−OH〔21〕 〔20〕66.2ｇ（87ｍＭ）に塩化メチレン30ml
を加え、５℃に冷却下TFA250mlを加えた後、
室温で45分間撹拌した。反応後、TFAを減圧
下留去し、残渣にエーテルを加えた。生じた沈
澱物を集め、DMF100mlに溶かした。これを５
℃に冷却下NMMで中和した。沈澱物が析出し
たので、さらにDMF500mlを追加した。この溶
液にBOC−Glu（OBzl）−OSU50ｇ（113ｍＭ）、
HOBT1.53ｇ（11.3ｍＭ）を加え、NMMで中
和した後、室温で一夜撹拌した。反応後、
DMFを減圧下留去し、残渣を水に注いだ。得
られた沈澱物を水洗し、乾燥する。アセトン−
メタノールで２回再結晶して〔21〕63.85ｇ
（収率73.5％）を得た。 融点；165〜167℃（分解） TLC；Rf4＝0.72 元素分析〔C49H65O14N6Clとして〕 Ｃ％ Ｈ％ Ｎ％ 測定値 59.61 6.76 8.31 計算値 59.00 6.57 8.42 アミノ酸分解〔0.927mg／0.3ml6N塩酸、105 ℃24時間〕；Ser0.92(1)、Glu0.99(1)、Gly0.97
(1)、Leu1、Lys0.99(1) (22) Ｐ（62−63）；BOC−Ser（Bzl）−His−
NHNH2〔22〕 BOC−Ser（Bzl）−OH37ｇ（0.125M）に
THF150ml、Ｈ−His−OMe・2HCl31.5ｇ
（0.13M）およびHOBT17.6ｇ（0.13M）を加え
て、これに５℃に冷却下WSCI23.8ml（0.13M）
を加えた後、DMF150mlを加え、室温で一夜撹
拌した。さらににHOBT4.4ｇおよびWSCI6ml
を追加し、室温で一夜撹拌した。反応後、溶媒
を減圧下留去し、残渣の油状物を酢酸エチルに
溶かした後、５％重曹水で３回、水で３回洗浄
した。無水硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧濃
縮した。残渣にヘキサンを加え、生じた沈澱物
を集め、酢酸エチル−エーテル−ヘキサンから
再結晶して粗製のBOC−Ser（Bzl）−His−
OMe（TLC；Rf3＝0.56）46.1ｇを得た。 上記の生成物44.6ｇ（0.1M）をDMF300mlに
溶かし、これにヒドラジン水化物（100％）100
mlを加え、室温で一夜撹拌した。反応後、
DMFを減圧下留去した。残渣を酢酸エチルで
８回抽出を繰り返し、抽出液を少量の水で洗浄
した後無水硫酸マグネシウムで乾燥した。減圧
濃縮し、残渣にヘキサンを加え、生じた沈澱物
を集めた。これをシリカゲルカラムクロマトグ
ラフイー〔溶出溶媒；クロロホルム−メタノー
ル−酢酸エチル（５：０〜１：５）〕により精
製した。相当する区分を減圧乾固し、残渣をベ
ンゼン−ヘキサン（非常に少量）から結晶させ
た。氷室に収置した後、析出した結晶を酢酸エ
チル−メタノール−ヘキサンで２回再結晶して
〔22〕を得た。 融点；125〜129℃ TLC；Rf4＝0.70、Rf7＝0.14 元素分析〔C21H30O5N6として〕 Ｃ％ Ｈ％ Ｎ％ 測定値 56.30 6.98 18.54 計算値 56.49 6.77 18.82 (23) Ｐ（62−68）；BOC−Ser（Bzl）−His−Glu
（OBzl）−Lys（Ｚ−Cl）−Ser（Bzl）−Leu−Gly
−OH〔23〕 〔22〕33.5ｇをDMF200mlに溶かし、これに
−50℃に冷却下4.32N塩化水素のジオキサン溶
液52mlとイソアミルニトリル20mlを加えた後、
−20℃で10分間撹拌した。次いで−50℃に冷却
し、Et3N31.6mlを加えた。 一方、〔21〕63.85ｇ（64ｍＭ）に塩化メチレ
ン20mlを加え、これに５℃に冷却下TFA200ml
を加えた後、室温で50分間撹拌した。反応後、
TFAを減圧下留去し、残渣の油状物にエーテ
ルを加えた後、生じた沈澱物を集めた。これを
DMF200mlに溶かし、５℃に冷却下NMMで中
和した。 中和したDMF溶液を０℃に冷却した前記の
トリエチルアミンで処理した溶液に加え、氷室
で一夜、室温で一夜撹拌した。反応後、DMF
を減圧下留去し、残渣をメタノールに溶かし
た。これを水に注ぎ、得られた沈澱物を取、
水洗、乾燥した。DMF−エーテルで再結し、
メタノールで２回洗浄して〔23〕59.16ｇ（収
率60.1％）を得た。 融点；209〜213℃（分解） TLC；Rf4＝0.66 元素分析〔C65H83O17N10Clとして〕 Ｃ％ Ｈ％ Ｎ％ 測定値 59.43 6.58 10.67 計算値 59.51 6.38 10.68 アミノ酸分析〔1.549mg／0.5ml6N塩酸、105℃ 、21時間〕；Ser1.82(2)、Glu1.01(1)、Gly0.98
(1)、Leu1、Lys1.01(1)、His0.94(1) (24) Ｐ（62−84）；BOC−Ser（Bzl）−His−Glu
（OBzl）−Lys（Ｚ−Cl）−Ser（Bzl）−Leu−Gly
−Glu（OBzl）−Ala−Asp（OBzl）−Lys（Ｚ−
Cl）−Ala−Asp（OBzl）−Val−Asp（OBzl）−
Val−Leu−Thr（Bzl）−Lys（Ｚ−Cl）−Ala−
Lys（Ｎ−Cl）−Ser（Bzl）−Gln−OBzl〔24〕 〔17〕75.35ｇ（25.5ｍＭ）にTFA250mlを加
え、室温で60分間撹拌した。反応後、TFAを
減圧下留去し、残渣にエーテルを加えた。生じ
た沈澱物を集め、NMP500mlとDMF500mlを加
えて溶かした。これを氷−５％重曹水に加え、
生じた沈澱物を取し、水、メタノールの順に
洗浄した。この沈澱物にNMP1とDMF1に
加えて溶かし、これに２，４−ジニトロフエノ
ール5.61ｇ（1.2倍Ｍ）、HOBT4.08ｇ（1.2倍
Ｍ）、〔23〕40.16ｇ（1.2倍Ｍ）およびWSCI5.6
ml（1.2倍Ｍ）を加え、室温で４日間撹拌した。
反応後、反応液を５℃重曹水−氷に注ぎ、生じ
た沈澱物を取した。水、熱メタノール、メタ
ノール（２回）の順に洗浄して〔24〕93.53ｇ
（収率88.4％）を得た。 アミノ酸分析；Asp2.67(3)、Thr0.81(1)、
Ser1.37(3)、Glu2.59(3)、Gly0.76(1)、Ala2.68
(3)、Val2、Leu1.74(2)、Lys3.66(4)、His0.66
(1) (25) Ｐ（61−84）；BOC−Glu（OBzl）−Ser（Bzl）
−His−Glu（OBzl）−Lys（Ｚ−Cl）−Ser（Bzl）
−Leu−Gly−Glu（OBzl）−Ala−Asp（OBzl）
−Lys（Ｚ−Cl）−Ala−Asp（OBzl）−Val−
Asp（OBzl）−Val−Leu−Thr（Bzl）−Lys（Ｚ
−Cl）−Ala−Lys（Ｚ−Cl）−Ser（Bzl）−Gln−
OBzl〔25〕 〔24〕41.5ｇ（10ｍＭ）にTFA150mlを加
え、室温で60分間撹拌した後、TFAを減圧下
留去した。残渣にエーテルを加え、生じた沈澱
物を集め、DMF300mlとNMP500mlを加えて溶
かした。これを５％重曹水−氷に注ぎ、生じた
沈澱物を取し、水洗後、メタノールで洗浄し
た。この沈澱物にDMF700mlとNMP600mlを加
えて溶かし、これに２，４−ジニトロフエノー
ル22ｇ（1.2倍Ｍ）、BOC−Glu（OBzl）−
OSU6.08ｇ（1.4倍Ｍ）、HOBT0.23ｇ（0.14倍
Ｍ）およびNMM1.52ml（1.4倍Ｍ）を加え、室
温で一夜撹拌した。次いで、この反応液に
BOC−Glu（OBzl）−OSU0.87ｇ（0.2倍Ｍ）お
よびNMM0.22ml（0.2倍Ｍ）を追加し、さらに
一夜撹拌した。反応液を氷−５％重曹に注ぎ、
生じた沈澱物を取し、充分に水洗した後、熱
メタノールで３回洗浄して〔25〕40.7ｇ（収率
93.2％）を得た。 アミノ酸分析〔／6N塩酸、アニソール、110 ℃、48時間〕；Asp2.66(3)、Thr0.85(1)、Ser1.56
(3)、Glu3.14(4)、Gly0.71(1)、Ala2.65(3)、
Val2、Leu1.73(2)、Lys3.67(4)、His0.63(1) (26) Ｐ（59−60）；BOC−Leu−Val−OBzl〔26〕 Ｈ−Val−OBzl・TOSOH17.8ｇ（47ｍＭ）
に酢酸エチル100mlを加え、５％重曹水、水の
順に洗浄し、酢酸エチル層を無水芒硝で乾燥
後、酢酸エチルを減圧下留去した。残渣を
DMF100mlに溶かし、これにBOC−Leu−
OH・H2O11.7ｇ（56.4ｍＭ）、HOBT9.3ｇ
（1.2倍Ｍ）およびWSCI10.3ml（1.3倍Ｍ）を加
え、室温で一夜撹拌した。反応後、DMFを減
圧下留去し、残渣を酢酸エチル300mlに溶かし、
５％重曹水、1N塩酸、水の順に洗浄した。無
水芒硝で乾燥後、減圧乾固した。残渣を酢酸エ
チル−ヘキサンより結晶化して〔26〕17.55ｇ
（収率88.8％）を得た。 TLC；Rf6＝0.85 (27) Ｐ（58−60）；BOC−Val−Leu−Val−
OBzl〔27〕 〔26〕17.2ｇ（41ｍＭ）にTFA50mlを加え、
室温で30分間撹拌した後、TFAを減圧下留去
した。残渣にエーテルを加え、生じた結晶を
取した後、DMF60mlに溶かした。これに
HOBT7.7ｇ（1.2倍Ｍ）、BOC−Val−OH10.7
ｇ（1.2倍Ｍ）およびWSCI9.0ml（1.2倍Ｍ）を
加え、NMMでPH７に調節した後、室温で一夜
撹拌した。反応後、DMFを減圧下留去し、残
渣を酢酸エチル300mlに溶かした後、５％重曹
水、1N塩酸、水の順に洗浄した。無水芒硝で
乾燥し、減圧乾固した。残渣を酢酸エチル−ヘ
キサンより２回再結晶して〔27〕17.38ｇ（収
率81.6％）を得た。 融点；149〜152℃ TLC；Rf5＝0.82 〔α〕22 D−32.36（Ｃ＝1.0、DMF） 元素分析〔C28H45O6N3として〕 Ｃ％ Ｈ％ Ｎ％ 測定値 64.80 8.81 8.20 計算値 64.71 8.73 8.09 (28) Ｐ（57−60）；BOC−Asn−Val−Leu−Val
−OBzl〔28〕 〔27〕17.15ｇ（33ｍＭ）にTA50mlを加え、
室温で25分間撹拌した後、TFAを減圧下留去
した。残渣にエーテルを加え、生じた沈澱物を
集め、DMF100mlに溶かした。これに
HOBT0.62ｇ（0.14倍Ｍ）、BOC−Asn−
ONP16.32ｇ（1.4倍Ｍ）を加え、NMMでPH７
に調節した後、室温で２日間撹拌した。反応
後、DMFを減圧下留去し、残渣を５％重曹水
−氷に注いだ。生じた沈澱物をクロロホルムに
溶かし、５％重曹水、水の順に洗浄した。無水
芒硝で乾燥し、減圧乾固した。残渣をエタノー
ル−エーテルから２回再結晶して〔28〕13.82
ｇ（収率79.5％）を得た。 TLC；Rf2＝0.70 元素分析〔C32H51O8N5として〕 Ｃ％ Ｈ％ Ｎ％ 測定値 60.83 8.19 11.09 計算値 60.64 8.11 11.05 (29) Ｐ（57−60）；BOC−Asn−Val−Leu−Val
−OH〔29〕 〔28〕13.2ｇ（25ｍＭ）をエタノール50mlと
DMF60mlの混液に溶かし、これに５％Pd／C1
ｇを加え、３時間水素添加した。触媒を別
し、液を減圧濃縮した。残渣をエタノール−
エーテルより２回再結晶して〔29〕9.70ｇ（収
率71.4％）を得た。 TLC；Rf2＝0.56 アミノ酸分析；Asp1.02(1)、Val1.95(2)、Leu1
(1) 元素分析〔C25H45O8N5として〕 Ｃ％ Ｈ％ Ｎ％ 測定値 55.02 8.13 13.06 計算値 55.23 8.34 12.88 (30) Ｐ（57−84）；BOC−Asn−Val−Leu−Val
−Glu（OBzl）−Ser（Bzl）−His−Glu（OBzl）−
Lys（Ｚ−Cl）−Ser（Bzl）−Leu−Gly−Glu
（OBzl）−Ala−Asp（OBzl）−Lys（Ｚ−Cl）−
Ala−Asp（OBzl）−Val−Asp（OBzl）−Val−
Leu−Thr（Bzl）−Lys（Ｚ−Cl）−Ala−Lys
（ZCl）−Ser（Bzl）−Gln−OBzl〔30〕 〔25〕39.75ｇ（9.1ｍＭ）にTFA150mlを加
え、室温で60分間撹拌した。反応後、TFAを
減圧下留去し、残渣にエーテルを加え、生じた
沈澱を集め、DMF600mlとNMP600mlを加えて
溶かした。これを氷−５％重曹水に加え、生じ
た沈澱物を取した後、水で３回、メタノール
で１回洗浄した。この沈澱物にNMP1.2と
DMF1.2を加えて溶かし、これにHOBT1.60
ｇ（1.3倍Ｍ）、２，４−ジニトロフエノール
2.18ｇ（1.3倍Ｍ）、〔29〕6.43ｇ（1.3倍Ｍ）お
よびWSCI4.32ml（2.6倍Ｍ）を加え、室温で２
日間撹拌した。さらに〔29〕0.99ｇ（0.2倍Ｍ）
をDMF100mlに溶解した溶液を加え、室温で一
夜撹拌した。反応液を５％重曹水−氷に加え、
生じた沈澱物を集め、DMF100mlに懸濁し、加
熱処理した。冷却後、不溶物を取した。さら
にメタノールおよびエタノールの順に各々上記
と同様に加熱処理して〔30〕42.25ｇ（収率
97.2％）を得た。 アミノ酸分析；Asp3.34(4)、Thr0.93(1)、
Ser1.60(3)、Glu3.24(4)、Gly0.85(1)、Ala3、
Val3.39(4)、Leu2.58(3)、Lys4.24(4)、His0.79
(1) (31) Ｐ（56−84）；BOC−Asp（OBzl）−Asn−
Val−Leu−Val−Glu（OBzl）−Ser（Bzl）−His
−Glu（OBzl）−Lys（Ｚ−Cl）−Ser（Bzl）−Leu
−Gly−Glu（OBzl）−Ala−Asp（OBzl）−Lys
（Ｚ−Cl）−Ala−Asp（OBzl）−Val−Asp
（OBzl）−Val−Leu−Thr（Bzl）−Lys（Ｚ−Cl）
−Ala−Lys（Ｚ−Cl）−Ser（Bzl）Gln−OBzl
〔31〕 〔30〕28.7ｇ（６ｍＭ）にTFA150mlを加
え、室温で50分間撹拌した。反応後、TFAを
減圧下留去し、残渣にエーテルを加え、生じた
沈澱物を集めた後、一夜NaOHデシケータ中
で乾燥した。この沈澱物にDMF300mlと
NMP500mlを加えて溶かし、これに
HOBT0.16ｇ（0.2倍Ｍ）、BOC−Asp（OBzl）
−OSu5.04ｇ（２倍Ｍ）を加え、NMMでPH7.0
に調節した後、室温で一夜撹拌した。さらに
BOC−Asp（OBzl）−OSU2.50ｇ（１倍Ｍ））を
追加し、一夜撹拌した。反応液を氷水に注ぎ、
生じた沈澱物を集め、水洗後、メタノールに加
え、加熱処理した。冷却後、不溶物を取し
た。上記の加熱処理を３回行い〔31〕27.75ｇ
（収率92.5％）を得た。 アミノ酸分析；Asp4.00(5)、Thr0.92(1)、
Ser1.69(3)、Glu3.57(4)、Gly0.81(1)、Ala3、
Val3.22(4)、Leu2.62(3)、Lys4.12(4)、His0.62
(1) (32) Ｐ（55−84）；BOC−Glu（OBzl）−Asp
（OBzl）−Asn−Val−Leu−Val−Glu（OBzl）
−Ser（Bzl）−His−Glu（OBzl）−Lys（Ｚ−Cl）
−Ser（Bzl）−Leu−Gly−Glu（OBzl）−Ala−
Asp（OBzl）−Lys（Ｚ−Cl）−Ala−Asp（OBzl）
−Val−Asp（OBzl）−Val−Leu−Thr（Bzl）−
Lys（Ｚ−Cl）−Ala−Lys（Ｚ−Cl）−Ser（Bzl）
−Gln−OBzl〔32〕 〔31〕27.50ｇ（5.5ｍＭ）にTFA150mlを加
え、室温で55分間撹拌した。反応後、TFAを
減圧下留去し、残渣にエーテルを加え、生じた
沈澱物を集めた後、NaOHデシケータ中で２
日間乾燥した。この沈澱物にDMF300mlを
NMP500mlを加えて溶かし、これに２，４−
ジニトロフエノール1.01ｇ（１倍Ｍ）、
HOBT0.11ｇ（0.15倍Ｍ）およびBOC−Glu
（OBzl）−OSU3.10ｇ（1.3倍Ｍ）を加え、室温
で一夜撹拌した。さらにBOC−Glu（OBzl）−
OSU3.10ｇ（1.3倍Ｍ）を追加し、２日間撹拌
した。反応液を氷＋５％重曹水に注ぎ、生じた
沈澱物を５％重曹水で２回、水で３回洗浄し
た。次いでメタノールを加え加熱処理し、冷却
後不溶物を取した。上記の加熱処理を３回行
い〔32〕26.77ｇ（収率93.3％）を得た。 アミノ酸分析；Asp4.11(5)、Thr0.92(1)、
Ser1.59(3)、Glu3.99(5)、Gly0.83(1)、Ala3、
Val3.28(4)、Leu2.49(3)、Lys4.08(4)、His0.71
(1) (33) Ｐ（53−54）；BOC−Lys（Ｎ−Cl）−Lys（Ｚ
−Cl）−PAC〔33〕 BOC−Lys（Ｚ−Cl）−OH・TBA36.6ｇ（75
ｍＭ）を酢酸エチル300mlに懸濁し、氷＋1N塩
酸で洗浄後、水洗した。酢酸エチル層を無水芒
硝で乾燥し、減圧乾固した後、残渣をDMF50
mlに溶かした。これに０℃に冷却下フエナシル
ブロマイド19.40ｇおよびEt3N13.60ml（1.3倍
Ｍ）を加えた後、室温で４時間撹拌した。反応
液に酢酸ナトリウム3.68ｇ（0.5倍Ｍ）を酢酸
エチル500mlに溶かした溶液を加えた後、５％
重曹水、1N塩酸、水の順に各３回づつ洗浄し
た。酢酸エチル層を無水芒硝で乾燥後、減圧乾
固した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラ
フイー〔溶出溶媒ベンゼン−酢酸エチル（２：
１）〕により精製し、TLC上Rf1＝0.77付近の区
分を集めて減圧乾固した。残渣をエーテル−ヘ
キサンより再結晶してBOC−Lys（Ｚ−Cl）−
PAC23.46ｇ（収率60.5％）を得た。 融点；52〜54℃ TLC；Rf1＝0.86 上記の生成物20.68ｇ（40ｍＭ）にTFA60ml
を加え、室温で20分間撹拌した。反応後、
TFAを減圧下留去し、残渣にエーテルを加え、
生じた沈澱物を集めた後、DMF50mlに溶かし
てDMF溶液Ａとした。 一方、BOC−Lys（Ｚ−Cl）−OH・
TBA23.42ｇ（1.2倍Ｍ）を酢酸エチル200mlに
懸濁し、氷＋1N塩酸200ml、水100mlで洗浄し
た。酢酸エチル層を無水芒硝で乾燥後、減圧乾
固した。得られた油状物をDMF50mlに溶かし
てDMF溶液Ｂとした。 前記DMF溶液Ａに調製したDMF溶液Ｂ、
HOBT6.48ｇ（1.2倍Ｍ）、WSCI8.78ml（1.2倍
Ｍ）を加え、NMMでPH７に調節した後、室温
で一夜撹拌した。反応後、DMFを減圧下留去
し、残渣をエーテル500mlに溶かした後、５％
重曹水で３回洗浄した。エーテル層に酢酸エチ
ル300mlを追加し、1N塩酸で２回、水で３回洗
浄した。有機層を無水芒硝で乾燥し、減圧濃縮
した。残渣をエーテルから３回再結晶して
〔33〕18.73ｇ（収率57.5％）を得た。 融点；72〜75℃ 元素分析〔C41H50O10N4Cl2として〕 Ｃ％ Ｈ％ Ｎ％ 測定値 59.22 5.98 6.81 計算値 59.35 6.07 6.75 (34) Ｐ（53−54）；BOC−Lys（Ｚ−Cl）−Lys（Ｚ
−Cl）−OH〔34〕 〔34〕4.07ｇ（５ｍＭ）を酢酸30mlに溶か
し、これを亜鉛末20ｇ／酢酸30mlに加え、室温
で１時間半撹拌した。反応後、亜鉛末を別
し、液は減圧下酢酸を留去した。残渣をエー
テル100mlに溶かし、これを５％重曹水70mlで
３回抽出した。水層を氷冷下1N塩酸でPH２に
調節し、酢酸エチルで抽出した。酢酸エチル層
を水洗し、無水芒硝で乾燥後、減圧乾固した。
残渣をエーテル−ヘキサンより再結晶して
〔34〕3.08ｇ（収率85.8％）を得た。 融点；59〜62℃ TLC；Rf2＝0.45 元素分析〔C33H44O9N4Cl2として〕 Ｃ％ Ｈ％ Ｎ％ 測定値 55.58 6.40 7.58 計算値 55.69 6.23 7.87 (35) Ｐ（53−84）；BOC−Lys（Ｚ−Cl）−Lys（Ｚ
−Cl）−Glu（OBzl）−Asp（OBzl）−Asn−Val
−Leu−Val−Glu（OBzl）−Ser（Bzl）−His−
Glu（OBzl）−Lys（Ｚ−Cl）−Ser（Bzl）−Leu−
Gly−Glu（OBzl）−Ala−Asp（OBzl）−Lys（Ｚ
−Cl）−Ala−Asp（OBzl）−Val−Asp（OBzl）
−Val−Leu−Thr（Bzl）−Lys（Ｚ−Cl）−Ala
−Lys（Ｚ−Cl）−Ser（Bzl）−Gln−OBzl〔35〕 〔32〕7.83ｇ（1.5ｍＭ）にTFA50mlを加え、
室温で55分間撹拌した。反応後、TFAを減圧
下留去し、残渣にエーテルを加え、生じた沈澱
物を集めた後、DMF150mlとNMP150mlを加え
て溶かした。これに氷冷下HOBT0.41ｇ（2.0
倍Ｍ）、〔34〕2.13ｇ（2.0倍Ｍ）および
WSCI0.55ml（2.0倍Ｍ）を加え、５〜10℃で３
日間撹拌した。反応液を氷水に注ぎ、生じた沈
澱物を集め、水洗した後、メタノールで加熱処
理した。冷却後、不溶物を取した。この加熱
処理を３回行い〔35〕8.31ｇ（収率95.3％）を
得た。 アミノ酸分析；Asp4.22(5)、Thr0.92(1)、
Ser1.60(3)、Glu4.06(5)、Gly0.85(1)、Ala3.00
(3)、Val3.33(4)、Leu2.48(3)、Lys5.41(6)、
His0.70(1) (36) Ｐ（52−54）；AOC−Arg（Tos）−Lys（Ｚ−
Cl）−Lys（Ｚ−Cl）−PAC〔36〕 〔33〕14.65ｇ（18ｍＭ）にTFA50mlを加
え、室温で30分間撹拌した。反応後、TFAを
減圧下留去し、残渣にエーテルを加えた。生じ
た沈澱物を集め、DMF10mlに溶かした。これ
にAOC−Arg（Tos）−OH9.19ｇ（1.2倍Ｍ）−
HOBT2.92ｇ（1.2倍Ｍ）およびWSCI3.95ml
（1.2倍Ｍ）を加え、室温で一夜撹拌した。反応
後、DMFを減圧下留去し、残渣を酢酸エチル
300mlに溶かした後、５％重曹水、1N塩酸、水
の順に各々３回づつ洗浄した。酢酸エチル層を
無水芒硝で乾燥後、減圧乾固した。酢酸エチル
−エーテルより再結晶して〔36〕14.46ｇ（収
率69.6％）を得た。 融点；79〜82℃ TLC；Rf7＝0.76 元素分析〔C55H70O13N8SClとして〕 Ｃ％ Ｈ％ Ｎ％ 測定値 57.06 6.26 9.82 計算値 57.23 6.11 9.71 (37) Ｐ（51−54）；BOC−Pro−Arg（Tos）−Lys
（Ｚ−Cl）−Lys（Ｚ−Cl）−PAC〔37〕 〔36〕14.43ｇ（12.5ｍＭ）にTFA40mlを加
え、室温で20分間撹拌した。反応後、TFAを
減圧下留去し、残渣にエーテルを加えた。生じ
た沈澱物を集め、DMF80mlに溶かした。これ
にHOBT2.03ｇ（1.2倍Ｍ）、BOC−Pro−
OH3.23ｇ（1.2倍Ｍ）およびWSCI2.75ml（1.2
倍Ｍ）を加え、室温で一夜撹拌した。反応液、
DMFを減圧下留去し、残渣を酢酸エチル300ml
に溶かした後、５％重曹水、1N塩酸水の順に
洗浄した。酢酸エチル層を無水芒硝で乾燥後、
減圧乾固した。残渣を酢酸エチル−エーテルよ
り２回再結晶して〔37〕14.71ｇ（収率95.1％）
を得た。 融点；90〜93℃ TLC；Rf7＝0.64 元素分析〔C59H75O14N9SCl2として〕 Ｃ％ Ｈ％ Ｎ％ 測定値 57.33 6.20 9.79 計算値 57.27 6.11 10.19 (38) Ｐ（51−54）；BOC−Pro−Arg（Tos）−Lys
（Ｚ−Cl）−Lys（Ｚ−Cl）−OH〔38〕 亜鉛末20ｇ／酢酸30mlに〔37〕6.19ｇ（５ｍ
Ｍ）を酢酸40mlに溶かした溶液を加え、室温で
２時間撹拌した。反応後、亜鉛末を別し、
液を減圧濃縮した。残渣に５％重曹水とエーテ
ルを加えて抽出し、分離した水層を1N塩酸で
PH２に調節した後、酢酸エチルで抽出した。酢
酸エチル層を水で３回洗浄し、無水芒硝で乾燥
後、減圧乾固した。残渣を酢酸エチル−エーテ
ルより再結晶して〔38〕5.40ｇ（収率96.5％）
を得た。 融点；110〜113℃ TLC；Rf4＝0.43 元素分析〔C51H69O13N9SCl2として〕 Ｃ％ Ｈ％ Ｎ％ 測定値 54.56 6.46 11.22 計算値 54.73 6.21 11.27 (39) Ｐ（51−84）；BOC−Pro−Arg（Tos）−Lys
（Ｚ−Cl）−Lys（Ｚ−Cl）−Glu（OBzl）−Asp
（OBzl）−Asn−Val−Leu−Val−Glu（OBzl）
−Ser（Bzl）−His−Glu（OBzl）−Lys（Ｚ−Cl）
−Ser（Bzl）−Leu−Gly−Glu（OBzl）−Ala−
Asp（OBzl）−Lys（Ｚ−Cl）−Ala−Asp（OBzl）
−Val−Asp（OBzl）−Val−Leu−Thr（Bzl）−
Lys（Ｚ−Cl）−Ala−Lys（Ｚ−Cl）−Ser（Bzl）
−Gln−OBzl〔39〕 〔32〕7.83ｇ（1.5ｍＭ）にTFA50mlを加え、
室温で60分間撹拌した。反応後、TFAを減圧
下留去し、残渣にエーテルを加えた。生じた沈
澱物を集め、DMF120mlとNMP120mlを加えて
溶かした。これにHOBT0.30ｇ（1.5倍Ｍ）、
〔38〕2.52ｇ（1.5倍Ｍ）およびWSCI0.41ml
（1.5倍Ｍ）を加え、室温で２日間撹拌した。反
応液を氷水に加え、生じた沈澱物を水洗後、メ
タノールを加えて加熱処理した。冷却後不溶物
を集めた。上記の加熱処理を２回繰り返した
後、エーテルで洗浄して〔39〕8.20ｇ（収率
87.9％）を得た。 アミノ酸分析；Asp4.09(5)、Thr1.05(1)、
Ser2.30(3)、Glu4.08(5)、Pro0.52(1)、Gly0.83
(1)、Ala3、Val3.42(4)、Leu2.53(3)、Lys5.11
(6)、His0.69(1)、Arg0.51(1) (40) Ｐ（49−50）；BOC−Gln−Arg（Tos）−
OMe〔40〕 Ｈ−Arg（Tos）−OMe・HCl11.37ｇ（30ｍ
Ｍ）とBOC−Gln−ONP13.21ｇ（1.2倍Ｍ）を
DMF200mlに溶かし、０℃に冷却下NMMでPH
７に調節した後、一夜撹拌した。反応後、
DMFを減圧下留去し、残渣をクロロホルムに
溶かした後、５％重曹水で３回、1N塩酸で２
回、水で３回洗浄した。クロロホルム層を無水
芒硝で乾燥し、クロロホルムで充填したシリカ
ゲルのカラムでクロマトグラフイーを行つた。
クロロホルム−エタノール−酢酸エチルで流
し、目的物が溶出し始めるとクロロホルム−エ
タノール−酢酸エチル（１：１：１）で溶出し
た。相当する区分を集めて減圧濃縮した。残渣
を酢酸エチルに溶かし、０℃に冷却下ヘキサン
を加えて結晶化させて〔40〕を得た。収量
11.86ｇ 融点；103〜107℃ (41) Ｐ（48−50）；BOC−Ser（Bzl）−Gln−Arg
（Tos）−OMe〔41〕 〔40〕9.39ｇ（16.5ｍＭ）にTFA50mlを加え
室温で20分間撹拌した後、TFAを減圧下留去
した。残渣にエーテルを加え、生じた沈澱物を
取し、DMF50mlに溶かした。この溶液に
HOBT3.24ｇ（1.45倍Ｍ）、BOC−Ser（Bzl）−
OH7.07ｇ（1.45倍Ｍ）およびWSCI4.39ml
（1.45倍Ｍ）を加え、室温で一夜撹拌した。反
応後、DMFを減圧下留去し、残渣を酢酸エチ
ル300mlに溶かした後、５％重曹、1N塩酸、水
の順に洗浄した。酢酸エチル層を無水芒硝で乾
燥後、減圧濃縮した。残渣を酢酸エチル−エー
テルから結晶化を２回行い、〔41〕10.0ｇ（収
率81.0％）を得た。 融点；97〜102℃ 元素分析〔C34H49O10N7S・1/2H2Oとして〕 Ｃ％ Ｈ％ Ｎ％ 測定値 54.07 6.90 13.29 計算値 53.95 6.66 13.00 (42) Ｐ（46−50）；BOC−Ala−Gly−Ser（Bzl）
−Gln−Arg（Tos）−OMe〔42〕 〔41〕9.72ｇ（13ｍＭ）にTFA50mlを加え、
室温で30分間撹拌した。反応後、TFAを減圧
下で留去し、残渣にエーテルを加えた。生じた
沈澱物を取し、DMF100mlに溶かした。この
溶液にBOC−Ala−Gly−OH3.84ｇ（1.2倍
Ｍ）、HOBT2.11ｇ（1.2倍Ｍ）および
WSCI2.85ml（1.2倍Ｍ）を加え、室温で２日間
撹拌した。反応後、DMFを減圧下留去し、残
渣を酢酸エチル200mlに溶かした後、水洗した。
無水芒硝で乾燥し、減圧濃縮した後、残渣をエ
タノール−エーテルで２回結晶化して〔42〕
10.46ｇ（収率91.9％）を得た。 融点；154〜157℃ 元素分析〔C39H57O12N9Sとして〕 Ｃ％ Ｈ％ Ｎ％ 測定値 53.21 6.90 14.38 計算値 53.47 6.56 14.39 (43) Ｐ（46−50）；BOC−Ala−Gly−Ser（Bzl）
−Gln−Arg（Tos）−NHNH2〔43〕 〔42〕9.64ｇ（11ｍＭ）をエタノール50mlに
溶かし、これに50％NH2NH26.4mlを加え室温
で一夜撹拌した。反応液にエタノール100mlを
加え、不溶物を取した。これをエタノール
100mlに懸濁し、加熱した。冷却後、過して
〔43〕9.02ｇ（収率93.6％）を得た。 融点；178〜180℃ 元素分析〔C38H57O11N11Sとして〕 Ｃ％ Ｈ％ Ｎ％ 測定値 52.13 6.86 16.65 計算値 52.10 6.56 17.59 (44) Ｐ（46−54）；BOC−Ala−Gly−Ser（Bzl）
−Gln−Arg（Tos）−Pro−Arg（Tos）−Lys（Ｚ
−Cl）−Lys（Ｚ−Cl）−PAC〔44〕 〔37〕8.04ｇ（6.6ｍＭ）にTFA40mlを加え、
室温で20分間撹拌した後、TFAを減圧下留去
した。残渣にエーテルを加え、生じた沈澱物を
取して粗製のＨ−Pro−Arg（Tos）−Lys（Ｚ
−Cl）−PAC・TFAを得た。 一方、〔43〕6.83ｇ（7.8ｍＭ）をDMF30mlに
溶かし、これに−50℃に冷却下4.32N塩化水素
のジオキサン溶液5.42ml（23.4ｍＭ）とイソア
ミルニトリル1.10ml（8.09ｍＭ）を加えた後、
−20℃で20分間撹拌した。次いで上記Ｈ−Pro
−Arg（Tos）−Lys（Ｚ−Cl）−PAC・TFAを加
え、−35℃でEt3N5.46ml（39ｍＭ）を加えた
後、０〜５℃で２日間撹拌した。反応後、
DMFを減圧下留去し、残渣をクロロホルム300
mlに溶かした後、５％重曹水、1N塩酸、水の
順で洗浄した。クロロホルム層を無水芒硝で乾
燥し、減圧濃縮した。エタノール−エーテルお
よびクロロホルム−エーテルにより精製して
〔44〕13.42ｇを得た。 TLC；Rf＝0.64〔クロロホルム−メタノール酢
酸（83：18：3.5）〕 元素分析〔C92H120O22N18Cl2S・3H2Oとして〕 Ｃ％ Ｈ％ Ｎ％ 測定値 54.68 6.21 12.72 計算値 54.72 6.29 12.49 アミノ酸分析；Ser0.65(1)、Glu1.10(1)、Pro1
(1)、Gly1.02(1)、Ala1.00(1)、Lys1.89(2)、
Arg2.02(2) (45) Ｐ（46−54）；BOC−Ala−Gly−Ser（Bzl）
−Gln−Arg（Tos）−Pro−Arg（Tos）−Lys（Ｚ
−Cl）−Lys（Ｚ−Cl）−OH〔45〕 亜鉛末15ｇ／酢酸30mlに〔44〕5.31ｇの酢酸
40ml溶液を加え、室温で２時間撹拌した。反応
後、亜鉛末を別し、液を減圧濃縮した。残
渣にエーテルを加え、生じた沈澱物をエタノー
ル−エーテルで１回、エタノール−酢酸エチル
で２回精製して〔45〕4.41ｇ（収率87.7％）を
得た。 TLC；Rf4＝0.22 元素分析〔C84H114O22N18S3Cl2・2H2Oとし
て〕 Ｃ％ Ｈ％ Ｎ％ 測定値 52.89 6.16 13.22 計算値 53.12 6.26 13.28 アミノ酸分析；Ser0.88(1)、Glu1.11(1)、
Pro1.02(1)、Gly1.02(1)、Ala1(1)、Lys2.00(2)、
Arg2.09(2) (46) Ｐ（46−84）；BOC−Ala−Gly−Ser（Bzl）
−Gln−Arg（Tos）−Pro−Arg（Tos）−Lys（Ｚ
−Cl）−Lys（Ｚ−Cl）−Glu（OBzl）−Asp
（OBzl）−Asn−Val−Leu−Val−Glu（OBzl）
−Ser（Bzl）−His−Glu（OBzl）−Lys（Ｚ−Cl）
−Ser（Bzl）−Leu−Gly−Glu（OBzl）−Ala−
Asp（OBzl）−Lys（Ｚ−Cl）−Ala−Asp（OBzl）
−Val−Asp（OBzl）−Val−Leu−Thr（Bzl）−
Lys（Ｚ−Cl）−Ala−Lys（Ｚ−Cl）−Ser（Bzl）
−Gln−OBzl〔46〕 〔32〕10.44ｇ（２ｍＭ）にTFA80mlを加
え、室温で60分間撹拌した後、TFAを減圧下
留去した。残渣にエーテルを加え、生じた沈澱
物をDMF160mlとNMP160mlの混液に溶かし
た。これに０℃に冷却下〔45〕4.28ｇ（1.15倍
Ｍ）、HOBT0.32ｇ（1.2倍Ｍ）および
WSCI0.44ml（1.2倍Ｍ）を加えた後、室温で２
日間撹拌した。反応後DMFを減圧下留去し、
残渣に氷水を加えた後、生じた沈澱物を取し
た。これにメタノール200mlを加えて加熱し、
冷却後不溶物を取する操作を２回繰り返して
〔46〕12.17ｇ（収率87.4％）を得た。 (47) ｈ−PTH（46−84） 無水HF60ml120℃に冷却下〔46〕4.18ｇ
（0.6ｍＭ）とアニソール10mlを加え、60分間撹
拌した。反応後、HFを減圧下留去し、残渣に
エーテルを加えた。生じた沈澱物を集め、10％
酢酸50mlに溶かし、ダウエツクス×１のカラム
（アセテート型、2.5×24cm）に通した。流出液
を凍結乾燥して粗生成物2.82ｇを得た。 これを8M尿素水溶液（PH9.0）50mlに溶か
し、60分間室温で放置した。次いでこの溶液を
8M尿素水溶液で充填したCM−セルロースの
カラム（2.0×33cm）にチヤージし、0.01M酢
酸アンモニウム水溶液（PH4.5）500ml〜0.3M
酢酸アンモニウム水溶液（PH4.5）500mlの直線
型濃度勾配による溶出を行つた。溶出液は7.5
mlづつ分画し、各分画はFolin−Lowry法
（500nｍ）により測定して１〜22本目の区分
C1、23〜45本目のC2、46〜80本目の区分C3お
よび81〜120本目の区分C4の溶出液を得た。各
区分をセフアデツクスLH−20のカラムに通し
て脱塩した。区分C1は3.0×120cmのカラムに通
し、流出液を7.5mlづつ分画し、28〜42本目の
区分C1Lを得た。区分C2は3.4×120cmに適し、
流出液を7.6mlづつ分画し、33〜40本目の区分
C2L1および41〜62本目の区分C2L2を得た。区
分C3は3.0×120cmのカラムに通し、流出液を
6.0mlづつ分画し、31〜40本目の区分C3L1およ
び41〜51本目の区分C3L2を得た。区分C4は、
3.4×120cmのカラムに通し、流出液を7.5mlづ
つ分画し、35〜48本目の区分C4Lを得た。各区
分を凍結乾燥してC1L区分312mg、C2L1区分
142.3mg、C2L2区分1380mg、C3L1区分104mg、
C3L2区分510mgおよびC4L区分130mgを得た。 前記のC2L2区分1380mgを0.1N酢酸13mlに溶
かし、CM−セルロースのカラム（4.3×6.0cm）
にチヤージし、0.01M酢酸アンモニウム水溶液
（PH4.5）500ml〜0.3M酢酸アンモニウム水溶液
（PH4.5）500mlの直線型濃度勾配による溶出を
行つた。溶出液は7.6mlづつ分画し、40〜50本
目の区分C2L2−C1および53〜77本目の区分
C2L2−C2を得た。各区分をセフアデツクスLH
−20のカラムに通して脱塩した。区分C2L2−
C1は2.9×120cmのカラムに通し、流出液を8.0
mlづつ分画し、26〜30本目の区分C2L2−C1L1
および31〜39本目の区分C2L2−C1L2を得た。
区分C2L2−C2は3.4×120cmのカラムに通し、流
出液を8.0mlづつ分画し、34〜44本目の区分
C2L2−C2L1および45〜53本目の区分C2L2−
C2L2を得た。各区分を凍結乾燥してC2L2−
C1L1区分79.0mg、C2L2−C1L2区分455mg、C2L2
−C2L1区分157.3mgおよびC2L2−C2L2区分551.7
mgを得た。 C2L2−C2L2区分のアミノ酸分析；Asp4.65(5)、
Thr0.97(1)、Ser3.47(4)、Glu5.99(6)、Pro0.93
(1)、Gly1.96(2)、Ala4(4)、Val3.97(4)、
Leu3.01(3)、Lys6.13(6)、His0.93(1)、Arg1.96
(2) 前記のC2L2−C2L2区分を0.1N酢酸５mlに溶
かし、CM−セルロースのカラム（4.2×7.0cm）
にチヤージし、0.01M酢酸アンモニウム水溶液
（PH4.5）300ml〜0.3M酢酸アンモニウム水溶液
（PH4.5）の直線型濃度勾配による溶出を行つ
た。溶出液は8.0mlづつ分画し、39〜45本目の
区分C2L2−C2L2−Ｃを得た。この区分をセフ
アデツクスLH−20のカラム（2.9×120cm）の
カラムに通して脱塩する。流出液を8.0mlづつ
分画し、24〜30本目の区分C2L2−C2L2−CL1、
31〜35本目の区分C2L2−C2L2−CL2および36〜
39本目の区分C2L2−C2L2−CL3を得た。各区分
を凍結乾燥してC2L2−C2L2−CL2区分200mgお
よびC2L2−C2L2−CL1区分〔ｈ−PTH（46−
84）〕94.9mgを得た。 TLC；Rf9＝0.76 アミノ酸分析；Asp4.86(5)、Thr0.99(1)、
Ser3.58(4)、Glu6.17(6)、Pro0.96(1)、Gly1.97
(2)、Ala4(4)、Val4.02(4)、Leu2.93(3)、
Lys6.05(6)、His0.90(1)、Arg1.87(2) 実施例 ２ 〔Tyr45〕ｈ−PTH（46−84）；Ｈ−Tyr−Ala−
Gly−Ser−Gln−Arg−Pro−Arg−Lys−Lys
−Glu−Asp−Asn−Val−Leu−Val−Glu−
Ser−His−Glu−Lys−Ser−Leu−Gly−Glu
−Ala−Asp−Lys−Ala−Asp−Val−Asp−
Val−Leu−Thr−Lys−Ala−Lys−Ser−Gln
−OH (1) Ｐ（45−84）；BOC−Tyr（Bzl−Cl2）−Ala−
Gly−Ser（Bzl）−Gln−Arg（Tos）−Pro−Arg
（Tos）−Lys（Ｚ−Cl）−Lys（Ｚ−Cl）−Glu
（OBzl）−Asp（OBzl）−Asn−Val−Leu−Val
−Glu（OBzl）−Ser（Bzl）−His−Glu（OBzl）−
Lys（Ｚ−Cl）−Ser（Bzl）−Leu−Gly−Glu
（OBzl）−Ala−Asp（OBzl）−Lys（Ｚ−Cl）−
Ala−Asp（OBzl）−Val−Asp（OBzl）−Val−
Leu−Thr（Bzl）−Lys（Ｚ−Cl）−Ala−Lys（Ｚ
−Cl）−Ser（Bzl）−Gln−OBzl〔47〕 実施例１に記載の〔46〕6.27ｇ（0.9ｍＭ）
TFA60mlを加え、室温で60分間撹拌した。反
応後、TFAを減圧下留去し、残渣にエーテル
を加えた。生じた沈澱物を取して脱BOC化
物6.30ｇを得た。 上記脱BOC化物2.10ｇ（0.3ｍＭ）をDMF35
mlとNMP35mlの混液に溶かし、これに０℃に
冷却下BOC−Tyr（Bzl−Cl2）−OH0.16ｇ（1.2
倍Ｍ）、HOBT0.05ｇ（1.2倍Ｍ）および
WSCI0.07ml（1.2倍Ｍ）を加えた後、室温で一
夜撹拌した。反応後、DMFを減圧下留去し、
残渣に氷水を加えた。生じた沈澱物を取して
〔47〕2.00ｇを得た。 (2) 〔Try45〕−ｈ−PTH（46−84） 無水HF20mlに０℃に冷却下〔47〕2.00ｇ
（0.27ｍＭ）およびアニソール1.0mlを加え、60
分間撹拌した。反応後、HFを減圧下留去し、
残渣にエーテルを加えた。生じた沈澱物を集
め、0.1N酢酸20mlに溶かし、ダウエツクス×
１のカラム（アセテート型、2.5×15cm）に通
した。流出液を凍結乾燥して粗生成物1.37ｇを
得た。 これを8M尿素水溶液（PH9.5）50mlに溶か
し、室温で60分間放置する。次いでこの溶液を
8M尿素水溶液で充填したCM−セルロースの
カラム（4.3×8.0cm）にチヤージし、0.01M酢
酸アンモニウム水溶液（PH4.5）400ml〜0.3M
酢酸アンモニウム水溶液（PH4.5）400mlの直線
型濃度勾配による溶出を行つた。溶出液は6.5
mlづつ分画し、各分画はFolin−Lowry法
（500nｍ）により測定して30〜43本目の区分
C1、51〜68本目の区分C2、69〜83本目の区分
C3および84〜100本目の区分C4を得た。各区分
をセフアデツクスLH−20のカラムに通して脱
塩した。分C1は3.4×120cmのカラムに通し、流
出液を7.5mlづつ分画し、25〜41本目の区分C1L
を得た。区分C2は3.0×120cmのカラムに通し、
流出液を7.5mlづつ分画し、25〜36本目の区分
C2Lを得た。区分C3は2.9×120cmのカラムに通
し、流出液を8.0mlづつ分画し、24〜27本目の
区分C3L1および28〜38本目の区分C3L2を得た。
区分C4は2.9×95cmのカラムに通し、流出液を
7.6mlづつ分画し、20〜25本目の区分C4L1およ
び26〜30本目の区分C4L2を得た。各区分を凍
結乾燥してC1L区分521.6mg、C2L区分230.2mg、
C3L1区分41.8mg、C3L2区分222.4mg、C4L1区分
74.3mgおよびC4L2区分48.9mgを得た。 前記のC2L区分を0.1N酢酸３mlに溶かし、
CM−セルロースのカラム（2.1×25cm）にチヤ
ージし、0.01M酢酸アンモニウム水溶液（PH
4.5）300ml〜0.3M酢酸アンモニウム水溶液
（PH4.5）300mlの直線型濃度勾配による溶出を
行つた。溶出液は8.0mlづつ分画し、30〜36本
目の区分C2L−Ｃを得た。この区分をセフアデ
ツクスLH−20のカラム（2.9×90cm）のカラム
に通して脱塩した。流出液を8.0mlづつ分画し、
20〜29本目の区分を凍結乾燥して〔Tyr45〕−ｈ
−PTH（46−84）163.3mgを得た。 TLC；Rf9＝0.75 アミノ酸分析；Asp4.86(5)、Thr1.02(1)、
Ser3.51(4)、Glu6.05(6)、Pro0.93(1)、Gly1.90
(2)、Ala4(4)、Val4.00(4)、Leu2.93(3)、
Tyr0.88(1)、Lys6.02(6)、His0.86(1)、Arg1.81
(2) 実施例 ３ 〔Cys（Acm）45〕−ｈ−PTH（46−84）〕；Ｈ−
Cys（Acm）−Ala−Gly−Ser−Gln−Arg−Pro
−Arg−Lys−Lys−Glu−Asp−Asn−Val−
Leu−Val−Gln−Ser−His−Glu−Lys−Ser
−Leu−Gly−Glu−Ala−Asp−Lys−Ala−
Asp−Val−Asp−Val−Leu−Thr−Lys−Ala
−Lys−Ser−Gln−OH (1) Ｐ（45−84）；BOC−Cys（Acm）−Ala−Gly
−Ser（Bzl）−Glu−Arg（Tos）−Pro−Arg
（Tos）−Lys（Ｚ−Cl）−Lys（Ｚ−Cl）−Glu
（OBzl）−Asp（OBzl）−Asn−Val−Leu−Val
−Glu（OBzl）−Ser（Bzl）−His−Glu（OBzl）−
Lys（Ｚ−Cl）−Ser（Bzl）−Leu−Gly−Glu
（OBzl）−Ala−Asp（OBzl）−Lys（Ｚ−Cl）−
AlaAsp（OBzl）−Val−Asp（OBzl）−Val−
Leu−Thr（Bzl）−Lys（Ｚ−Cl）−Ala−Lys（Ｚ
−Cl）−Ser（Bzl）−Gln−OBzl〔48〕 実施例２で得た残りの脱BOC化物4.20mg
（0.6ｍＭ）をDMF70mlとNMP70mlの混液に溶
かし、これに０℃に冷却下HOBT0.10ｇ（1.2
倍Ｍ）、BOC−Cys（Acm）−OH0.20ｇ（1.2倍
Ｍ）およびWSCI0.13ml（1.2倍Ｍ）を加えた
後、室温で一夜撹拌した。反応後、DMFを減
圧下留去し、残渣に氷水を加え、生じた沈澱物
を集めた。これをエタノールに懸濁して加熱
し、冷却した後、不溶物を取した。この操作
を２回繰り返して〔48〕4.07ｇ（収率95.0％）
を得た。 (2) 〔Cys（Acm）45〕−ｈ−PTH（46−84） 無水HF60mlに０℃に冷却下〔48〕4.00ｇ
（0.57ｍＭ）およびアニソール10mlを加え、60
分間撹拌した。反応後、HFを減圧下留去し、
残渣にエーテルを加えた。生じた沈澱物を集
め、20％酢酸40mlに溶かし、ダウエツクス×１
のカラム（アセテート型、2.8×35cm）通した。
流出液を凍結乾燥した。これを8M尿素水溶液
50mlに溶かし、アンモニア水でPH9.0に調節し
た後、30分間放置した。次いでこの溶液を8M
尿素水溶液で充填したCM−セルロース（3.4×
35cm）にチヤージし、0.01M酢酸アンモニウム
水溶液（PH4.5）700ml〜0.3M酢酸アンモニウ
ム水溶液（PH4.5）700mlの濃度勾配による溶出
を行つた。溶出液は8.0mlづつ分画し、各分画
はFolin−Lowry法（500nｍ）により測定して
25〜35本目の区分C1、36〜45本目の区分C2お
よび46〜84本目の区分C3を得た。各区分をセ
フアデツクスLH−20のカラムに通して脱塩し
た。区分C2は3.0×120cmのカラムに通し、流出
液を8.0mlづつ分画し、27〜33本目の区分C2L1
および34〜40本目の区分C2L2を得た。区分C3
は3.4×120cmのカラムに通し、流出液を8.0ml
づつ分画し、35〜47本目の区分C3L1および48
〜53本目の区分C3L2を得た。各区分を凍結乾
燥してC2L1区分148mg、C2L2区分620mg、C3L1
区分212mgおよびC3L2区分605mgを得た。 前記のC2L2区分を0.1N酢酸６mlに溶かし、
これをCM−モルロースのカラム（5.0×12cm）
にチヤージし、0.01M酢酸アンモニウム水溶液
（PH4.5）400ml〜0.3M酢酸アンモニウム水溶液
（PH4.5）400mlの直線型濃度勾配による溶出を
行つた。溶出液は6.0mlづつ分画し、110〜126
本目の区分C2L2−Ｃを得た。これをセフアデ
ツクスLH−20のカラム（4.0×120cm）に通し
て脱塩した。流出液は8.0mlづつ分画し、38〜
54本目の区分C2L2−CLを得た。この区分を凍
結乾燥して〔Cys（Acm）45〕−ｈ−PTH（46−
84）246.8mgを得た。 TCL；Rf9＝0.74 アミノ酸分析；Asp4.91(5)、Thr0.98(1)、
Ser3.50(1)、Glu6.11(6)、Pro0.98(1)、Gly1.98
(2)、Ala4(4)、Val4.04(4)、Cys0.42（0.5）、
Leu2.90(3)、Lys5.99(6)、His0.87(1)、Arg1.87
(2) 実施例 ４ 〔Cys45〕−ｈ−PTH（46−84）；Ｈ−Cys−Ala−
Gly−Ser−Gln−Arg−Pro−Arg−Lys−Lys
−Glu−Asp−Asn−Val−Leu−Val−Glu−
Ser−His−Glu−Lys−Ser−Leu−Gly−Glu
−Ala−Asp−Lys−Ala−Asp−Val−Asp−
Val−Leu−Thr−Lys−Ala−Lys−Ser−Gln
−OH 実施例３で得た〔Cys（Acm）45〕−ｈ−PTH
（46−84）88mg（0.02ｍＭ）を50％酢酸２mlに溶
かし、これに酢酸第二水銀57.24mg（0.18ｍＭ）
を加えた後、室温で70分間撹拌した。次いで、β
−メルカプトエタノール3.4mlを加え、室温で24
時間撹拌した。反応液を遠心分離し、上澄液をセ
フアデツクスLH−20のカラム（3.2×42cm）にチ
ヤージし、0.1M酢酸で溶出した。溶出液は５ml
づつ分画し、ニンヒドリン反応陽性の９〜14本目
の区分を集めた。これを凍結乾燥して〔Cys45〕−
ｈ−PTH（46−84）76.1mgを得た。 TLC；Rf9＝0.73 参考例 １ ｈ−PTH（53−84）；Ｈ−Lys−Lys−Glu−
Asp−Asn−Val−Leu−Val−Glu−Ser−His
−Glu−Lys−Ser−Leu−Gly−Glu−Ala−
Asp−Lys−Ala−Asp−Val−Asp−Val−Leu
−Thr−Lys−Ala−Lys−Ser−Gln−OH (a) 無水弗化水素（HF）25mlに０℃に冷却下実
施例１に記載の〔35〕3.49ｇ（0.6ｍＭ）およ
びアニソール３mlを加え、75分間撹拌した。反
応後、HFを減圧下留去し、残渣にエーテルを
加えた。生じた沈澱物を集め、0.1N酢酸50ml
に溶かし、ダウエツクス×１のカラム（2.7×
35cm）に通した。流出液を凍結乾燥して粗生成
物2.18ｇを得た。これを8M尿素水溶液50mlに
溶かし、アンモニア水でPH9.5に調節した後、
50分間放置した。次いでこの溶液を8M尿素水
溶液で充填したCM−セルロースのカラム（4.4
×12cm）にチヤージし、0.01M酢酸アンモニウ
ム水溶液（PH4.5）約100mlで流出した後、
0.01M酢酸アンモニウム水溶液（PH4.5）700ml
〜0.1M酢酸アンモニウム水溶液（PH4.5）700
mlの直線型濃度勾配による溶出を行い、次いで
0.2M酢酸アンモニウム水溶液（PH4.5）300ml
で溶出した。溶出液は、13.5mlづつ分画し、各
分画はFolin−Lowry法（500nｍ）により測定
して30〜50本目の区分C1、56〜119本目の区分
C2および120〜150本目の区分C3の溶出液を得
た。 各区分をセフアデツクスLH−20のカラムに
通して脱塩した。流出液は8.5mlづつ分画し、
各分画は上記と同じ方法で測定した。区分C1
は3.4×113cmのカラムに通し、31〜40本目の区
分L1、41〜44本目の区分L2および45〜54本目
の区分L3を得た。区分C2は3.4×120cmのカラム
に通し、35〜45本目の区分L1、46〜52本目の
区分L2および53〜60本目の区分L3を得た。区
分C3は3.4×120cmのカラムに通し、31〜44本目
の区分L1および45〜52本目の区分L2を得た。
各区分を凍結乾燥して、次の各成分を得た。
え、室温で65分間撹拌した後、TFAを減圧留
去した。残渣にエーテルを加え、生じた沈澱物
を集め、DMF900mlに溶かした。これに
HOBT18.8ｇ（1.2倍Ｍ）、BOC−Asp（OBzl）
−OH45.0ｇ（1.2倍Ｍ）、BOC−Asp（OBzl）−
OH45.0ｇ（1.2倍Ｍ）およびWSCI25.5ml（1.2
倍Ｍ）を加え、NMMでPH７に調節した後、室
温で一夜撹拌した。反応液、DMFを減圧留去
し、残渣に氷水を加えた。生じた沈澱物を集
め、熱メタノールで２回洗浄処理した。不溶物
を熱DMFに溶かし、エタノールを加えた。生
じた沈澱物を集め、メタノールに懸濁した後、
過して〔10〕205.5ｇ（収率99.14％）を得
た。 融点；259〜262℃ TLC；Rf2＝0.81 〔α〕27 D−13.7（Ｃ＝1.0、DMF） 元素分析〔C91H118O21N12Cl2として〕 Ｃ％ Ｈ％ Ｎ％ 測定値 61.01 6.84 9.54 計算値 61.16 6.66 9.41 (11) Ｐ（75−84）；BOC−Val−Asp（OBzl）−Val
−Leu−Thr（Bzl）−Lys（Ｚ−Cl）−Ala−Lys
（Ｚ−Cl）−Ser（Bzl）−Gln−OBzl〔11〕 〔10〕196.55ｇ（0.11M）をTFA500mlに加
え、室温で60分間撹拌した後、TFAを減圧留
去した。残渣にエーテルを加え、生じた沈澱物
を集め、DMF1.3に溶かした。これに撹拌し
ながらHORT19.3ｇ（1.3倍Ｍ）、BOC−Val−
OH31.1ｇ（1.3倍Ｍ）およびWSCl26.2ml（1.3
倍Ｍ）を加え、NMMでPH７に調節した後、室
温で撹拌した。１時間後に反応液がゲル状とな
つたため一夜放置した。次いで、NMP400ml、
２，４−ジニトロフエノール20.2ｇ、
WSCI26.2ml（1.3倍Ｍ）を加えた。約10分間で
再度ゲル状となり、室温で一夜放置した。反応
後、氷と５％重曹水を加え、生じた沈澱物を集
め、水で３回洗浄した後、熱メタノールで４回
洗浄処理して〔11〕203.74ｇ（収率98.2％）を
得た。 融点；267〜270℃ TLC；Rf3＝0.56 元素分析〔C96H127O22N13Cl2・H2Oとして〕 Ｃ％ Ｈ％ Ｎ％ 測定値 60.25 6.78 9.82 計算値 60.55 6.83 9.56 アミノ酸分析〔試料3.1mg／１ml6N塩酸＋0.1
mlアニソール、48時間、110℃加水分解〕；
Asp1.04(1)、Thr0.83(1)、Ser0.78(1)、Glu1.03
(1)、Ala1.08(1)、Leu1、Val1.87(2)、Lys2.19(2) (12) Ｐ（74−84）；BOC−Asp（OBzl）−Val−Asp
（OBzl）−Val−Leu−Thr（Bzl）−Lys（Ｚ−Cl）
−Ala−Lys（Ｚ−Cl）−Ser（Bzl）−Gln−OBzl
〔12〕 〔11〕151.2ｇ（0.08M）に塩化メチレン100
ml、TFA450mlを加え、室温で40分間撹拌した
後、TFAを減圧留去した。残渣にエーテルを
加え、生じた沈澱物にDMF500mlとNMP1を
加えて溶かした。これに氷、５％重曹水を加
え、生じた沈澱物を集め、充分水洗した後、乾
燥した。これをDMF500mlとNMP1の混液に
溶かし、BOC−Asp（OBzl）−OSU44.0ｇ（1.3
倍モル）、HOBT1.4ｇ（0.13倍Ｍ）、NMM11.4
ml（1.3倍Ｍ）を加え、室温で一夜撹拌した。
反応液を氷水に加え、生じた沈澱物を集め、メ
タノールを加えて加熱処理した。この処理を２
回繰り返して〔12〕157.6ｇ（収率94.2％）を
得た。 TLC；Rf3＝0.56 元素分析〔C107H135O25N14Cl2として〕 Ｃ％ Ｈ％ Ｎ％ 測定値 61.35 6.66 9.90 計算値 61.45 6.65 9.38 アミノ酸分析〔6N塩酸／アニソール、110
℃、48時間〕；Asp1.86(2)、Thr0.87(1)、Ser0.71
(1)、Glu1.01(1)、Ala1.00(1)、Val1.91(2)、
Leu1、Lys2.01(2) (13) Ｐ（72−73）；BOC−Lys（Ｚ−Cl）−Ala−
OH〔13〕 〔３〕48.0ｇ（96ｍＭ）をエタノール100ml
に溶かし、これに０℃に冷却下1N−
NaOH115.2ml（1.2倍Ｍ）を加え、50分間撹拌
した。反応後、1N塩酸19mlを加えPH６に調節
した後、35℃でエタノールを減圧留去した。残
渣に酢酸エチル、氷水、1N塩酸96mlを加えて
抽出した。酢酸エチル曹を水洗し、無水芒硝で
乾燥後、減圧乾固した。残渣を酢酸エチル−ヘ
キサンより再結して〔13〕45.90ｇ（収率98.4
％）を得た。 融点；116〜119℃ TLC；Rf7＝0.44 元素分析〔C22H32O7N3Clとして〕 Ｃ％ Ｈ％ Ｎ％ 測定値 54.57 6.91 8.95 計算値 54.37 6.64 8.65 (14) Ｐ（72−84）；BOC−Lys（Ｚ−Cl）−Ala−
Asp（OBzl）−Val−Asp（OBzl）−Val−Leu−
Thr（Bzl）−Lys（Ｚ−Cl）−Ala−Lys（Ｚ−Cl）
−Ser（Bzl）−Gln−OBzl〔14〕 〔12〕125.46（60ｍＭ）に塩化メチレンン60
ml、TFA360mlを加え、室温で55分間撹拌した
後、TFAを減圧留去した。残渣にエーテルを
加え、生じた沈澱物を集めた。これにDMF600
mlとNMP600mlを加えて溶かした。これを氷
＋５％重曹水に加えた。生じた沈澱物を取
し、３回水洗した後、メタノール、エーテルで
洗浄後、乾燥した。これにNMP1200mlと
DMF600mlを加えて溶かし、HOBT10.56ｇ
（1.3倍Ｍ）、〔13〕37.92ｇ（1.3倍Ｍ）、
WSCI14.28ml（1.3倍Ｍ）を加え、室温で３日
間撹拌した。反応液を氷水に加え、生じた沈澱
物を集め、水で３回洗浄後、熱メタノールで２
回洗浄した。次いでエーテルで洗浄した後、乾
燥して〔14〕142.74ｇ（収率96.7％）を得た。 元素分析〔C124H161D29N27Cl3として〕 Ｃ％ Ｈ％ Ｎ％ 測定値 60.30 6.79 9.70 計算値 60.54 6.60 9.68 アミノ酸分析〔6N塩酸／アニソール、110
℃、48時間〕；Asp1.86(2)、Thr0.85(1)、Ser0.67
(1)、Glu1.02(1)、Ala1.90(2)、Val1.93(2)、
Leu1、Lys2.93(3) (15) Ｐ（71−84）；BOC−Asp（OBzl）−Lys（Ｚ
−Cl）−Ala−Asp（OBzl）−Val−Asp（OBzl）
−Val−Leu−Thr（Bzl）−Lys（Ｚ−Cl）−Ala
−Lys（Ｚ−Cl）−Ser（Bzl）−Gln−OBzl〔15〕 〔14〕132.84ｇ（54ｍＭ）をTFA420mlに加
え、室温で55分間撹拌した後、TFAを減圧留
去した。残渣にエーテルを加え、生じた沈澱物
を集め、NMP720mlとDMF720mlを加えて溶か
した。これを氷＋５％重曹水に加え、生じた沈
澱物を取し、水で３回、メタノールおよびエ
ーテルで各１回洗浄した。この沈澱物に
NMP840mlとDMF840mlを加えて溶かし、これ
に２，４−ジヒドロフエノール11.93ｇ（1.2倍
Ｍ）、HOBT0.732ｇ（0.14倍Ｍ）、BOC−Asp
（OZzl）−OSU3.18ｇ（1.2倍Ｍ）、NMM5.94ml
（1.4倍Ｍ）を加え、室温で２日間撹拌した。反
応液にNMP120ml、DMF60mlを追加して溶か
し、BOC−Asp（OBzl）−OSU4.56ｇ（0.2倍
Ｍ）、NMM1.19ml（0.2倍Ｍ）を加え、さらに
２日間室温にて撹拌した。反応液を氷水に加
え、生じた沈澱物を集め、水洗した。次いで、
熱メタノールに懸濁し、冷却した後、取し
た。この操作を３回繰り返して〔15〕136.72ｇ
（収率95.0％）を得た。 元素分析〔C135H172O32N18Cl3として〕 Ｃ％ Ｈ％ Ｎ％ 測定値 60.33 6.55 9.76 計算値 60.83 6.51 9.46 アミノ分分析〔6N塩酸／アニソール、110
℃、48時間〕Asp2.60(3)、Thr0.83(1)、Ser0.65
(1)、Glu1.00(1)、Ala1.81(2)、Val1.92(2)、
Leu1、Lys2.85(3) (16) Ｐ（70−84）；BOC−Ala−Asp（OBzl）−
Lys（Ｚ−Cl）−Ala−Asp（OBzl）−Val−Asp
（OBzl）−Val−Leu−Thr（Bzl）−Lys（Ｚ−Cl）
−Ala−Lys（Ｚ−Cl）−Ser（Bzl）−Gln−OBzl
〔16〕 〔15〕108.74ｇ（40.8ｍＭ）をTFA325mlに
加え、室温で70分間撹拌した後、TFAを減圧
留去した。残渣にエーテルを加え、生じた沈澱
物を集め、NMP600mlとDMF600mlを加えて溶
かした後、５％重曹水に加えた。生じた沈澱物
を集め、水で３回、メタノールで１回洗浄し
た。次いで、この沈澱物にNMP720mlと
DMF720mlを加えて溶かし、これに２，４−ジ
ニトロフエノール9.0ｇ、HOBT0.55ｇ（0.1倍
Ｍ）、BOC−Ala−OSU17.52ｇ（1.5倍Ｍ）、
NMM6.72ml（1.5倍Ｍ）を加え、室温で一夜撹
拌した。次いで、BOC−Ala−OSU2.34ｇ、
NMM0.9mlを追加し、５日間室温で撹拌した。
反応液を氷水に加え、生じた沈澱物を集め、水
で３回、メタノールで２回洗浄して〔16〕
109.78ｇ（収率98.3％）を得た。 融点；280℃以上（分解） アミノ酸分析〔6N塩酸／アニソール、110℃ 、48時間〕；Asp2.57(3)、Thr0.84(1)、Ser0.67
(1)、Glu1.00(1)、Ala2.53(3)、Val1.98(2)、
Leu1、Lys2.79(3) (17) Ｐ（69−84）；BOC−Glu（OBzl）−Ala−
Asp（OBzl）−Lys（Ｚ−Cl）−Ala−Asp（OBzl）
−Val−Asp（OBzl）−Val−Leu−Thr（Bzl）−
Lys（Ｚ−Cl）−Ala−Lys（Ｚ−Cl）−Ser（Bzl）
−Gln−OBzl〔17〕 〔16〕85.38ｇ（31.2ｍＭ）をTFA280mlに加
え、室温で60分間撹拌した後、TFAを減圧留
去した。残渣にエーテルを加え、生じた沈澱物
を集め、DMF540mlとNMP540mlを加えて溶か
し、これを５％重曹水＋氷に加えた。生じた沈
澱物を集め、水で３回、メタノールで１回洗浄
した。これにDMF600mlとNMP780mlを加えて
溶かし、これに２，４−ジニトロフエノール
6.89ｇ（1.2倍Ｍ）、HOBT0.59ｇ（0.14倍Ｍ）、
BOC−Glu（OBzl）−OSU18.97ｇ（1.4倍Ｍ）、
NMM4.8ml（1.4倍Ｍ）を加え、室温で３日間
撹拌した。次いでBOC−Glu（OBzl）−
OSU2.71ｇ（0.2倍Ｍ）にDMF60ml＋NMP50
mlを加えて溶かした溶液およびNMM0.64ml
（1.4倍Ｍ）を加え、さらに室温で３日間撹拌し
た。次いで先と同量のBOC−Glu（OBzl）−
OSUとNMMを加え、室温で一夜撹拌した。
反応後、反応液を氷水に加えて、生じた沈澱物
を集め、水で３回洗浄した。この沈澱物を熱メ
タノールに懸濁し、冷却した後取した。この
操作を３回繰り返して〔17〕88.97ｇ（収率
96.5％）を得た。 アミノ酸分析〔6N塩酸／アニソール、110℃ 、24時間〕；Asp2.66(3)、Thr0.91(1)、Ser0.78
(1)、Glu1.76(2)、Ala2.65(3)、Val1.97(2)、
Leu1、Lys2.88(3) (18) Ｐ（66−68）；BOC−Ser（Bzl）−Leu−Gly
−OBzl〔18〕 BOC−Leu−OH・H2O45.64ｇ、Ｈ−Gly−
OBzl・TosOH61.87ｇおよびHOBT24.87ｇを
THF200mlに溶かし、これに冷却下WSCI33.69
mlを滴下した後、室温で一夜撹拌した。反応液
を減圧濃縮して油状物を得た。これを酢酸エチ
ル600mlに溶かし、５％重曹水、1N塩酸、水で
各々３回洗浄した。有機層を無水硫酸ナトリウ
ムで乾燥し、減圧乾固して油状物69.0ｇ（収率
99％）を得た。これを塩化メチレン10mlに溶か
し、５℃に冷却下TFA250mlを加えた後、撹拌
しながら室温で20分間反応させた。TFAを減
圧下留去し、残渣にDMF200mlを加え、０℃に
冷却下NMMを加えて中和した。これに
HOBT20.7ｇ（0.19M）、BOC−Ser（Bzl）−
OH56ｇ（0.19M）およびWSCI34.8ml
（0.19M）を加えた後、室温で一夜撹拌した。
DMFを減圧下留去し、残渣に酢酸エチルを加
え、５％重曹水、1N塩酸、水の順に洗浄した。
無水硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧濃縮し
た。残渣にヘキサンを加え、生じた沈澱物を
取した。酢酸エチル−ヘキサンで再結晶した
後、酢酸エチル−エーテル−ヘキサンで再結晶
して〔18〕72.47ｇ（収率72.0％）を得た。 融点；112〜113℃ TLC；Rf5＝0.55 元素分析〔C30H41O7N3として〕 Ｃ％ Ｈ％ Ｎ％ 測定値 65.06 7.75 7.36 計算値 64.84 7.44 7.56 (19) Ｐ（65−68）；BOC−Lys（Ｚ−Cl）−Ser
（Bzl）−Leu−Gly−OBzl〔19〕 〔18〕72.47ｇ（0.13M）を塩化メチレン20
mlに溶かし、５℃に冷却下TFA250mlを加えた
後、室温で20分間撹拌した。反応後TFAを減
圧下留去し、残渣にエーテルを加えた。生じた
沈澱物を集め、DMF100mlを加える。これに５
℃に冷却下NMMを加えて中和した。 一方、BOC−Lys（Ｚ−Cl）−OH・TBA70ｇ
（0.143M）に酢酸エチル200mlを加え、1N塩
酸、水で２回洗浄した。酢酸エチル層を無水硫
酸マグネシウムで乾燥後、減圧濃縮した。得ら
れた油状物にDMF100mlを加え、BOC−Lys
（Ｚ−Cl）−OHのDMF溶液とした。 上記の中和したDMF溶液にHOBT19.3ｇ前
記で得たBOC−Lys（Ｚ−Cl）−OHのDMF溶液
およびWSCI26.2ml（0.143M）を加え、室温で
一夜撹拌した。反応後、DMFを減圧下留去し、
残渣に酢酸エチル400mlを加え、５％重曹水で
３回、1N塩酸で２回、水で２回洗浄した。有
機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧濃
縮した。残渣にエーテルおよびヘキサンを加
え、生じた沈澱物を集め、酢酸エチル−メタノ
ール−ヘキサンから再結晶して〔19〕104ｇ
（収率94.6％）を得た。 融点；128〜130℃ TLC；Rf1＝0.51、Rf2＝0.88 元素分析〔C44H58O10N5Clとして〕 Ｃ％ Ｈ％ Ｎ％ 測定値 61.96 7.02 7.91 計算値 62.00 6.86 8.22 アミノ酸分析〔1μM／6N塩酸0.3ml、105℃ 、20時間〕；Ser0.92(1)、Gly0.98(1)、Leu1、
Lys0.99(1) (20) Ｐ（65−68）；BOC−Lys（Ｚ−Cl）−Ser
（Bzl）−Leu−Gly−OH〔20〕 〔19〕85.3ｇにメタノール600mlを加え、５
℃で冷却下撹拌しながら、1N−NaOH120mlを
加えた後、室温で３時間撹拌した。反応後、５
℃に冷却下1N塩酸20mlを加えた後、メタノー
ルを減圧下留去した。残渣の水溶液に５℃に冷
却下1N塩酸100mlを加え、クロロホルム500ml
で抽出した。クロロホルム層を水洗し、無水芒
硝で乾燥後、減圧濃縮した。残渣にヘキサンを
加え、生じた沈澱物を集め、酢酸エチルから再
結晶して〔20〕66.21ｇ（収率87％）を得た。 融点；156〜158℃ TLC；Rf2＝0.63 元素分析〔C37H52O10N5Clとして〕 Ｃ％ Ｈ％ Ｎ％ 測定値 58.49 6.95 9.09 計算値 58.30 6.88 9.19 アミノ酸分析〔1μM／0.3ml6N塩酸、105 ℃、20時間〕；Ser0.92(1)、Gly0.97(1)、Leu1、
Lys0.99(1) (21) Ｐ（64−68）；BOC−Glu（OBzl）−Lys（Ｚ−
Cl）−Leu−Gly−OH〔21〕 〔20〕66.2ｇ（87ｍＭ）に塩化メチレン30ml
を加え、５℃に冷却下TFA250mlを加えた後、
室温で45分間撹拌した。反応後、TFAを減圧
下留去し、残渣にエーテルを加えた。生じた沈
澱物を集め、DMF100mlに溶かした。これを５
℃に冷却下NMMで中和した。沈澱物が析出し
たので、さらにDMF500mlを追加した。この溶
液にBOC−Glu（OBzl）−OSU50ｇ（113ｍＭ）、
HOBT1.53ｇ（11.3ｍＭ）を加え、NMMで中
和した後、室温で一夜撹拌した。反応後、
DMFを減圧下留去し、残渣を水に注いだ。得
られた沈澱物を水洗し、乾燥する。アセトン−
メタノールで２回再結晶して〔21〕63.85ｇ
（収率73.5％）を得た。 融点；165〜167℃（分解） TLC；Rf4＝0.72 元素分析〔C49H65O14N6Clとして〕 Ｃ％ Ｈ％ Ｎ％ 測定値 59.61 6.76 8.31 計算値 59.00 6.57 8.42 アミノ酸分解〔0.927mg／0.3ml6N塩酸、105 ℃24時間〕；Ser0.92(1)、Glu0.99(1)、Gly0.97
(1)、Leu1、Lys0.99(1) (22) Ｐ（62−63）；BOC−Ser（Bzl）−His−
NHNH2〔22〕 BOC−Ser（Bzl）−OH37ｇ（0.125M）に
THF150ml、Ｈ−His−OMe・2HCl31.5ｇ
（0.13M）およびHOBT17.6ｇ（0.13M）を加え
て、これに５℃に冷却下WSCI23.8ml（0.13M）
を加えた後、DMF150mlを加え、室温で一夜撹
拌した。さらににHOBT4.4ｇおよびWSCI6ml
を追加し、室温で一夜撹拌した。反応後、溶媒
を減圧下留去し、残渣の油状物を酢酸エチルに
溶かした後、５％重曹水で３回、水で３回洗浄
した。無水硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧濃
縮した。残渣にヘキサンを加え、生じた沈澱物
を集め、酢酸エチル−エーテル−ヘキサンから
再結晶して粗製のBOC−Ser（Bzl）−His−
OMe（TLC；Rf3＝0.56）46.1ｇを得た。 上記の生成物44.6ｇ（0.1M）をDMF300mlに
溶かし、これにヒドラジン水化物（100％）100
mlを加え、室温で一夜撹拌した。反応後、
DMFを減圧下留去した。残渣を酢酸エチルで
８回抽出を繰り返し、抽出液を少量の水で洗浄
した後無水硫酸マグネシウムで乾燥した。減圧
濃縮し、残渣にヘキサンを加え、生じた沈澱物
を集めた。これをシリカゲルカラムクロマトグ
ラフイー〔溶出溶媒；クロロホルム−メタノー
ル−酢酸エチル（５：０〜１：５）〕により精
製した。相当する区分を減圧乾固し、残渣をベ
ンゼン−ヘキサン（非常に少量）から結晶させ
た。氷室に収置した後、析出した結晶を酢酸エ
チル−メタノール−ヘキサンで２回再結晶して
〔22〕を得た。 融点；125〜129℃ TLC；Rf4＝0.70、Rf7＝0.14 元素分析〔C21H30O5N6として〕 Ｃ％ Ｈ％ Ｎ％ 測定値 56.30 6.98 18.54 計算値 56.49 6.77 18.82 (23) Ｐ（62−68）；BOC−Ser（Bzl）−His−Glu
（OBzl）−Lys（Ｚ−Cl）−Ser（Bzl）−Leu−Gly
−OH〔23〕 〔22〕33.5ｇをDMF200mlに溶かし、これに
−50℃に冷却下4.32N塩化水素のジオキサン溶
液52mlとイソアミルニトリル20mlを加えた後、
−20℃で10分間撹拌した。次いで−50℃に冷却
し、Et3N31.6mlを加えた。 一方、〔21〕63.85ｇ（64ｍＭ）に塩化メチレ
ン20mlを加え、これに５℃に冷却下TFA200ml
を加えた後、室温で50分間撹拌した。反応後、
TFAを減圧下留去し、残渣の油状物にエーテ
ルを加えた後、生じた沈澱物を集めた。これを
DMF200mlに溶かし、５℃に冷却下NMMで中
和した。 中和したDMF溶液を０℃に冷却した前記の
トリエチルアミンで処理した溶液に加え、氷室
で一夜、室温で一夜撹拌した。反応後、DMF
を減圧下留去し、残渣をメタノールに溶かし
た。これを水に注ぎ、得られた沈澱物を取、
水洗、乾燥した。DMF−エーテルで再結し、
メタノールで２回洗浄して〔23〕59.16ｇ（収
率60.1％）を得た。 融点；209〜213℃（分解） TLC；Rf4＝0.66 元素分析〔C65H83O17N10Clとして〕 Ｃ％ Ｈ％ Ｎ％ 測定値 59.43 6.58 10.67 計算値 59.51 6.38 10.68 アミノ酸分析〔1.549mg／0.5ml6N塩酸、105℃ 、21時間〕；Ser1.82(2)、Glu1.01(1)、Gly0.98
(1)、Leu1、Lys1.01(1)、His0.94(1) (24) Ｐ（62−84）；BOC−Ser（Bzl）−His−Glu
（OBzl）−Lys（Ｚ−Cl）−Ser（Bzl）−Leu−Gly
−Glu（OBzl）−Ala−Asp（OBzl）−Lys（Ｚ−
Cl）−Ala−Asp（OBzl）−Val−Asp（OBzl）−
Val−Leu−Thr（Bzl）−Lys（Ｚ−Cl）−Ala−
Lys（Ｎ−Cl）−Ser（Bzl）−Gln−OBzl〔24〕 〔17〕75.35ｇ（25.5ｍＭ）にTFA250mlを加
え、室温で60分間撹拌した。反応後、TFAを
減圧下留去し、残渣にエーテルを加えた。生じ
た沈澱物を集め、NMP500mlとDMF500mlを加
えて溶かした。これを氷−５％重曹水に加え、
生じた沈澱物を取し、水、メタノールの順に
洗浄した。この沈澱物にNMP1とDMF1に
加えて溶かし、これに２，４−ジニトロフエノ
ール5.61ｇ（1.2倍Ｍ）、HOBT4.08ｇ（1.2倍
Ｍ）、〔23〕40.16ｇ（1.2倍Ｍ）およびWSCI5.6
ml（1.2倍Ｍ）を加え、室温で４日間撹拌した。
反応後、反応液を５℃重曹水−氷に注ぎ、生じ
た沈澱物を取した。水、熱メタノール、メタ
ノール（２回）の順に洗浄して〔24〕93.53ｇ
（収率88.4％）を得た。 アミノ酸分析；Asp2.67(3)、Thr0.81(1)、
Ser1.37(3)、Glu2.59(3)、Gly0.76(1)、Ala2.68
(3)、Val2、Leu1.74(2)、Lys3.66(4)、His0.66
(1) (25) Ｐ（61−84）；BOC−Glu（OBzl）−Ser（Bzl）
−His−Glu（OBzl）−Lys（Ｚ−Cl）−Ser（Bzl）
−Leu−Gly−Glu（OBzl）−Ala−Asp（OBzl）
−Lys（Ｚ−Cl）−Ala−Asp（OBzl）−Val−
Asp（OBzl）−Val−Leu−Thr（Bzl）−Lys（Ｚ
−Cl）−Ala−Lys（Ｚ−Cl）−Ser（Bzl）−Gln−
OBzl〔25〕 〔24〕41.5ｇ（10ｍＭ）にTFA150mlを加
え、室温で60分間撹拌した後、TFAを減圧下
留去した。残渣にエーテルを加え、生じた沈澱
物を集め、DMF300mlとNMP500mlを加えて溶
かした。これを５％重曹水−氷に注ぎ、生じた
沈澱物を取し、水洗後、メタノールで洗浄し
た。この沈澱物にDMF700mlとNMP600mlを加
えて溶かし、これに２，４−ジニトロフエノー
ル22ｇ（1.2倍Ｍ）、BOC−Glu（OBzl）−
OSU6.08ｇ（1.4倍Ｍ）、HOBT0.23ｇ（0.14倍
Ｍ）およびNMM1.52ml（1.4倍Ｍ）を加え、室
温で一夜撹拌した。次いで、この反応液に
BOC−Glu（OBzl）−OSU0.87ｇ（0.2倍Ｍ）お
よびNMM0.22ml（0.2倍Ｍ）を追加し、さらに
一夜撹拌した。反応液を氷−５％重曹に注ぎ、
生じた沈澱物を取し、充分に水洗した後、熱
メタノールで３回洗浄して〔25〕40.7ｇ（収率
93.2％）を得た。 アミノ酸分析〔／6N塩酸、アニソール、110 ℃、48時間〕；Asp2.66(3)、Thr0.85(1)、Ser1.56
(3)、Glu3.14(4)、Gly0.71(1)、Ala2.65(3)、
Val2、Leu1.73(2)、Lys3.67(4)、His0.63(1) (26) Ｐ（59−60）；BOC−Leu−Val−OBzl〔26〕 Ｈ−Val−OBzl・TOSOH17.8ｇ（47ｍＭ）
に酢酸エチル100mlを加え、５％重曹水、水の
順に洗浄し、酢酸エチル層を無水芒硝で乾燥
後、酢酸エチルを減圧下留去した。残渣を
DMF100mlに溶かし、これにBOC−Leu−
OH・H2O11.7ｇ（56.4ｍＭ）、HOBT9.3ｇ
（1.2倍Ｍ）およびWSCI10.3ml（1.3倍Ｍ）を加
え、室温で一夜撹拌した。反応後、DMFを減
圧下留去し、残渣を酢酸エチル300mlに溶かし、
５％重曹水、1N塩酸、水の順に洗浄した。無
水芒硝で乾燥後、減圧乾固した。残渣を酢酸エ
チル−ヘキサンより結晶化して〔26〕17.55ｇ
（収率88.8％）を得た。 TLC；Rf6＝0.85 (27) Ｐ（58−60）；BOC−Val−Leu−Val−
OBzl〔27〕 〔26〕17.2ｇ（41ｍＭ）にTFA50mlを加え、
室温で30分間撹拌した後、TFAを減圧下留去
した。残渣にエーテルを加え、生じた結晶を
取した後、DMF60mlに溶かした。これに
HOBT7.7ｇ（1.2倍Ｍ）、BOC−Val−OH10.7
ｇ（1.2倍Ｍ）およびWSCI9.0ml（1.2倍Ｍ）を
加え、NMMでPH７に調節した後、室温で一夜
撹拌した。反応後、DMFを減圧下留去し、残
渣を酢酸エチル300mlに溶かした後、５％重曹
水、1N塩酸、水の順に洗浄した。無水芒硝で
乾燥し、減圧乾固した。残渣を酢酸エチル−ヘ
キサンより２回再結晶して〔27〕17.38ｇ（収
率81.6％）を得た。 融点；149〜152℃ TLC；Rf5＝0.82 〔α〕22 D−32.36（Ｃ＝1.0、DMF） 元素分析〔C28H45O6N3として〕 Ｃ％ Ｈ％ Ｎ％ 測定値 64.80 8.81 8.20 計算値 64.71 8.73 8.09 (28) Ｐ（57−60）；BOC−Asn−Val−Leu−Val
−OBzl〔28〕 〔27〕17.15ｇ（33ｍＭ）にTA50mlを加え、
室温で25分間撹拌した後、TFAを減圧下留去
した。残渣にエーテルを加え、生じた沈澱物を
集め、DMF100mlに溶かした。これに
HOBT0.62ｇ（0.14倍Ｍ）、BOC−Asn−
ONP16.32ｇ（1.4倍Ｍ）を加え、NMMでPH７
に調節した後、室温で２日間撹拌した。反応
後、DMFを減圧下留去し、残渣を５％重曹水
−氷に注いだ。生じた沈澱物をクロロホルムに
溶かし、５％重曹水、水の順に洗浄した。無水
芒硝で乾燥し、減圧乾固した。残渣をエタノー
ル−エーテルから２回再結晶して〔28〕13.82
ｇ（収率79.5％）を得た。 TLC；Rf2＝0.70 元素分析〔C32H51O8N5として〕 Ｃ％ Ｈ％ Ｎ％ 測定値 60.83 8.19 11.09 計算値 60.64 8.11 11.05 (29) Ｐ（57−60）；BOC−Asn−Val−Leu−Val
−OH〔29〕 〔28〕13.2ｇ（25ｍＭ）をエタノール50mlと
DMF60mlの混液に溶かし、これに５％Pd／C1
ｇを加え、３時間水素添加した。触媒を別
し、液を減圧濃縮した。残渣をエタノール−
エーテルより２回再結晶して〔29〕9.70ｇ（収
率71.4％）を得た。 TLC；Rf2＝0.56 アミノ酸分析；Asp1.02(1)、Val1.95(2)、Leu1
(1) 元素分析〔C25H45O8N5として〕 Ｃ％ Ｈ％ Ｎ％ 測定値 55.02 8.13 13.06 計算値 55.23 8.34 12.88 (30) Ｐ（57−84）；BOC−Asn−Val−Leu−Val
−Glu（OBzl）−Ser（Bzl）−His−Glu（OBzl）−
Lys（Ｚ−Cl）−Ser（Bzl）−Leu−Gly−Glu
（OBzl）−Ala−Asp（OBzl）−Lys（Ｚ−Cl）−
Ala−Asp（OBzl）−Val−Asp（OBzl）−Val−
Leu−Thr（Bzl）−Lys（Ｚ−Cl）−Ala−Lys
（ZCl）−Ser（Bzl）−Gln−OBzl〔30〕 〔25〕39.75ｇ（9.1ｍＭ）にTFA150mlを加
え、室温で60分間撹拌した。反応後、TFAを
減圧下留去し、残渣にエーテルを加え、生じた
沈澱を集め、DMF600mlとNMP600mlを加えて
溶かした。これを氷−５％重曹水に加え、生じ
た沈澱物を取した後、水で３回、メタノール
で１回洗浄した。この沈澱物にNMP1.2と
DMF1.2を加えて溶かし、これにHOBT1.60
ｇ（1.3倍Ｍ）、２，４−ジニトロフエノール
2.18ｇ（1.3倍Ｍ）、〔29〕6.43ｇ（1.3倍Ｍ）お
よびWSCI4.32ml（2.6倍Ｍ）を加え、室温で２
日間撹拌した。さらに〔29〕0.99ｇ（0.2倍Ｍ）
をDMF100mlに溶解した溶液を加え、室温で一
夜撹拌した。反応液を５％重曹水−氷に加え、
生じた沈澱物を集め、DMF100mlに懸濁し、加
熱処理した。冷却後、不溶物を取した。さら
にメタノールおよびエタノールの順に各々上記
と同様に加熱処理して〔30〕42.25ｇ（収率
97.2％）を得た。 アミノ酸分析；Asp3.34(4)、Thr0.93(1)、
Ser1.60(3)、Glu3.24(4)、Gly0.85(1)、Ala3、
Val3.39(4)、Leu2.58(3)、Lys4.24(4)、His0.79
(1) (31) Ｐ（56−84）；BOC−Asp（OBzl）−Asn−
Val−Leu−Val−Glu（OBzl）−Ser（Bzl）−His
−Glu（OBzl）−Lys（Ｚ−Cl）−Ser（Bzl）−Leu
−Gly−Glu（OBzl）−Ala−Asp（OBzl）−Lys
（Ｚ−Cl）−Ala−Asp（OBzl）−Val−Asp
（OBzl）−Val−Leu−Thr（Bzl）−Lys（Ｚ−Cl）
−Ala−Lys（Ｚ−Cl）−Ser（Bzl）Gln−OBzl
〔31〕 〔30〕28.7ｇ（６ｍＭ）にTFA150mlを加
え、室温で50分間撹拌した。反応後、TFAを
減圧下留去し、残渣にエーテルを加え、生じた
沈澱物を集めた後、一夜NaOHデシケータ中
で乾燥した。この沈澱物にDMF300mlと
NMP500mlを加えて溶かし、これに
HOBT0.16ｇ（0.2倍Ｍ）、BOC−Asp（OBzl）
−OSu5.04ｇ（２倍Ｍ）を加え、NMMでPH7.0
に調節した後、室温で一夜撹拌した。さらに
BOC−Asp（OBzl）−OSU2.50ｇ（１倍Ｍ））を
追加し、一夜撹拌した。反応液を氷水に注ぎ、
生じた沈澱物を集め、水洗後、メタノールに加
え、加熱処理した。冷却後、不溶物を取し
た。上記の加熱処理を３回行い〔31〕27.75ｇ
（収率92.5％）を得た。 アミノ酸分析；Asp4.00(5)、Thr0.92(1)、
Ser1.69(3)、Glu3.57(4)、Gly0.81(1)、Ala3、
Val3.22(4)、Leu2.62(3)、Lys4.12(4)、His0.62
(1) (32) Ｐ（55−84）；BOC−Glu（OBzl）−Asp
（OBzl）−Asn−Val−Leu−Val−Glu（OBzl）
−Ser（Bzl）−His−Glu（OBzl）−Lys（Ｚ−Cl）
−Ser（Bzl）−Leu−Gly−Glu（OBzl）−Ala−
Asp（OBzl）−Lys（Ｚ−Cl）−Ala−Asp（OBzl）
−Val−Asp（OBzl）−Val−Leu−Thr（Bzl）−
Lys（Ｚ−Cl）−Ala−Lys（Ｚ−Cl）−Ser（Bzl）
−Gln−OBzl〔32〕 〔31〕27.50ｇ（5.5ｍＭ）にTFA150mlを加
え、室温で55分間撹拌した。反応後、TFAを
減圧下留去し、残渣にエーテルを加え、生じた
沈澱物を集めた後、NaOHデシケータ中で２
日間乾燥した。この沈澱物にDMF300mlを
NMP500mlを加えて溶かし、これに２，４−
ジニトロフエノール1.01ｇ（１倍Ｍ）、
HOBT0.11ｇ（0.15倍Ｍ）およびBOC−Glu
（OBzl）−OSU3.10ｇ（1.3倍Ｍ）を加え、室温
で一夜撹拌した。さらにBOC−Glu（OBzl）−
OSU3.10ｇ（1.3倍Ｍ）を追加し、２日間撹拌
した。反応液を氷＋５％重曹水に注ぎ、生じた
沈澱物を５％重曹水で２回、水で３回洗浄し
た。次いでメタノールを加え加熱処理し、冷却
後不溶物を取した。上記の加熱処理を３回行
い〔32〕26.77ｇ（収率93.3％）を得た。 アミノ酸分析；Asp4.11(5)、Thr0.92(1)、
Ser1.59(3)、Glu3.99(5)、Gly0.83(1)、Ala3、
Val3.28(4)、Leu2.49(3)、Lys4.08(4)、His0.71
(1) (33) Ｐ（53−54）；BOC−Lys（Ｎ−Cl）−Lys（Ｚ
−Cl）−PAC〔33〕 BOC−Lys（Ｚ−Cl）−OH・TBA36.6ｇ（75
ｍＭ）を酢酸エチル300mlに懸濁し、氷＋1N塩
酸で洗浄後、水洗した。酢酸エチル層を無水芒
硝で乾燥し、減圧乾固した後、残渣をDMF50
mlに溶かした。これに０℃に冷却下フエナシル
ブロマイド19.40ｇおよびEt3N13.60ml（1.3倍
Ｍ）を加えた後、室温で４時間撹拌した。反応
液に酢酸ナトリウム3.68ｇ（0.5倍Ｍ）を酢酸
エチル500mlに溶かした溶液を加えた後、５％
重曹水、1N塩酸、水の順に各３回づつ洗浄し
た。酢酸エチル層を無水芒硝で乾燥後、減圧乾
固した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラ
フイー〔溶出溶媒ベンゼン−酢酸エチル（２：
１）〕により精製し、TLC上Rf1＝0.77付近の区
分を集めて減圧乾固した。残渣をエーテル−ヘ
キサンより再結晶してBOC−Lys（Ｚ−Cl）−
PAC23.46ｇ（収率60.5％）を得た。 融点；52〜54℃ TLC；Rf1＝0.86 上記の生成物20.68ｇ（40ｍＭ）にTFA60ml
を加え、室温で20分間撹拌した。反応後、
TFAを減圧下留去し、残渣にエーテルを加え、
生じた沈澱物を集めた後、DMF50mlに溶かし
てDMF溶液Ａとした。 一方、BOC−Lys（Ｚ−Cl）−OH・
TBA23.42ｇ（1.2倍Ｍ）を酢酸エチル200mlに
懸濁し、氷＋1N塩酸200ml、水100mlで洗浄し
た。酢酸エチル層を無水芒硝で乾燥後、減圧乾
固した。得られた油状物をDMF50mlに溶かし
てDMF溶液Ｂとした。 前記DMF溶液Ａに調製したDMF溶液Ｂ、
HOBT6.48ｇ（1.2倍Ｍ）、WSCI8.78ml（1.2倍
Ｍ）を加え、NMMでPH７に調節した後、室温
で一夜撹拌した。反応後、DMFを減圧下留去
し、残渣をエーテル500mlに溶かした後、５％
重曹水で３回洗浄した。エーテル層に酢酸エチ
ル300mlを追加し、1N塩酸で２回、水で３回洗
浄した。有機層を無水芒硝で乾燥し、減圧濃縮
した。残渣をエーテルから３回再結晶して
〔33〕18.73ｇ（収率57.5％）を得た。 融点；72〜75℃ 元素分析〔C41H50O10N4Cl2として〕 Ｃ％ Ｈ％ Ｎ％ 測定値 59.22 5.98 6.81 計算値 59.35 6.07 6.75 (34) Ｐ（53−54）；BOC−Lys（Ｚ−Cl）−Lys（Ｚ
−Cl）−OH〔34〕 〔34〕4.07ｇ（５ｍＭ）を酢酸30mlに溶か
し、これを亜鉛末20ｇ／酢酸30mlに加え、室温
で１時間半撹拌した。反応後、亜鉛末を別
し、液は減圧下酢酸を留去した。残渣をエー
テル100mlに溶かし、これを５％重曹水70mlで
３回抽出した。水層を氷冷下1N塩酸でPH２に
調節し、酢酸エチルで抽出した。酢酸エチル層
を水洗し、無水芒硝で乾燥後、減圧乾固した。
残渣をエーテル−ヘキサンより再結晶して
〔34〕3.08ｇ（収率85.8％）を得た。 融点；59〜62℃ TLC；Rf2＝0.45 元素分析〔C33H44O9N4Cl2として〕 Ｃ％ Ｈ％ Ｎ％ 測定値 55.58 6.40 7.58 計算値 55.69 6.23 7.87 (35) Ｐ（53−84）；BOC−Lys（Ｚ−Cl）−Lys（Ｚ
−Cl）−Glu（OBzl）−Asp（OBzl）−Asn−Val
−Leu−Val−Glu（OBzl）−Ser（Bzl）−His−
Glu（OBzl）−Lys（Ｚ−Cl）−Ser（Bzl）−Leu−
Gly−Glu（OBzl）−Ala−Asp（OBzl）−Lys（Ｚ
−Cl）−Ala−Asp（OBzl）−Val−Asp（OBzl）
−Val−Leu−Thr（Bzl）−Lys（Ｚ−Cl）−Ala
−Lys（Ｚ−Cl）−Ser（Bzl）−Gln−OBzl〔35〕 〔32〕7.83ｇ（1.5ｍＭ）にTFA50mlを加え、
室温で55分間撹拌した。反応後、TFAを減圧
下留去し、残渣にエーテルを加え、生じた沈澱
物を集めた後、DMF150mlとNMP150mlを加え
て溶かした。これに氷冷下HOBT0.41ｇ（2.0
倍Ｍ）、〔34〕2.13ｇ（2.0倍Ｍ）および
WSCI0.55ml（2.0倍Ｍ）を加え、５〜10℃で３
日間撹拌した。反応液を氷水に注ぎ、生じた沈
澱物を集め、水洗した後、メタノールで加熱処
理した。冷却後、不溶物を取した。この加熱
処理を３回行い〔35〕8.31ｇ（収率95.3％）を
得た。 アミノ酸分析；Asp4.22(5)、Thr0.92(1)、
Ser1.60(3)、Glu4.06(5)、Gly0.85(1)、Ala3.00
(3)、Val3.33(4)、Leu2.48(3)、Lys5.41(6)、
His0.70(1) (36) Ｐ（52−54）；AOC−Arg（Tos）−Lys（Ｚ−
Cl）−Lys（Ｚ−Cl）−PAC〔36〕 〔33〕14.65ｇ（18ｍＭ）にTFA50mlを加
え、室温で30分間撹拌した。反応後、TFAを
減圧下留去し、残渣にエーテルを加えた。生じ
た沈澱物を集め、DMF10mlに溶かした。これ
にAOC−Arg（Tos）−OH9.19ｇ（1.2倍Ｍ）−
HOBT2.92ｇ（1.2倍Ｍ）およびWSCI3.95ml
（1.2倍Ｍ）を加え、室温で一夜撹拌した。反応
後、DMFを減圧下留去し、残渣を酢酸エチル
300mlに溶かした後、５％重曹水、1N塩酸、水
の順に各々３回づつ洗浄した。酢酸エチル層を
無水芒硝で乾燥後、減圧乾固した。酢酸エチル
−エーテルより再結晶して〔36〕14.46ｇ（収
率69.6％）を得た。 融点；79〜82℃ TLC；Rf7＝0.76 元素分析〔C55H70O13N8SClとして〕 Ｃ％ Ｈ％ Ｎ％ 測定値 57.06 6.26 9.82 計算値 57.23 6.11 9.71 (37) Ｐ（51−54）；BOC−Pro−Arg（Tos）−Lys
（Ｚ−Cl）−Lys（Ｚ−Cl）−PAC〔37〕 〔36〕14.43ｇ（12.5ｍＭ）にTFA40mlを加
え、室温で20分間撹拌した。反応後、TFAを
減圧下留去し、残渣にエーテルを加えた。生じ
た沈澱物を集め、DMF80mlに溶かした。これ
にHOBT2.03ｇ（1.2倍Ｍ）、BOC−Pro−
OH3.23ｇ（1.2倍Ｍ）およびWSCI2.75ml（1.2
倍Ｍ）を加え、室温で一夜撹拌した。反応液、
DMFを減圧下留去し、残渣を酢酸エチル300ml
に溶かした後、５％重曹水、1N塩酸水の順に
洗浄した。酢酸エチル層を無水芒硝で乾燥後、
減圧乾固した。残渣を酢酸エチル−エーテルよ
り２回再結晶して〔37〕14.71ｇ（収率95.1％）
を得た。 融点；90〜93℃ TLC；Rf7＝0.64 元素分析〔C59H75O14N9SCl2として〕 Ｃ％ Ｈ％ Ｎ％ 測定値 57.33 6.20 9.79 計算値 57.27 6.11 10.19 (38) Ｐ（51−54）；BOC−Pro−Arg（Tos）−Lys
（Ｚ−Cl）−Lys（Ｚ−Cl）−OH〔38〕 亜鉛末20ｇ／酢酸30mlに〔37〕6.19ｇ（５ｍ
Ｍ）を酢酸40mlに溶かした溶液を加え、室温で
２時間撹拌した。反応後、亜鉛末を別し、
液を減圧濃縮した。残渣に５％重曹水とエーテ
ルを加えて抽出し、分離した水層を1N塩酸で
PH２に調節した後、酢酸エチルで抽出した。酢
酸エチル層を水で３回洗浄し、無水芒硝で乾燥
後、減圧乾固した。残渣を酢酸エチル−エーテ
ルより再結晶して〔38〕5.40ｇ（収率96.5％）
を得た。 融点；110〜113℃ TLC；Rf4＝0.43 元素分析〔C51H69O13N9SCl2として〕 Ｃ％ Ｈ％ Ｎ％ 測定値 54.56 6.46 11.22 計算値 54.73 6.21 11.27 (39) Ｐ（51−84）；BOC−Pro−Arg（Tos）−Lys
（Ｚ−Cl）−Lys（Ｚ−Cl）−Glu（OBzl）−Asp
（OBzl）−Asn−Val−Leu−Val−Glu（OBzl）
−Ser（Bzl）−His−Glu（OBzl）−Lys（Ｚ−Cl）
−Ser（Bzl）−Leu−Gly−Glu（OBzl）−Ala−
Asp（OBzl）−Lys（Ｚ−Cl）−Ala−Asp（OBzl）
−Val−Asp（OBzl）−Val−Leu−Thr（Bzl）−
Lys（Ｚ−Cl）−Ala−Lys（Ｚ−Cl）−Ser（Bzl）
−Gln−OBzl〔39〕 〔32〕7.83ｇ（1.5ｍＭ）にTFA50mlを加え、
室温で60分間撹拌した。反応後、TFAを減圧
下留去し、残渣にエーテルを加えた。生じた沈
澱物を集め、DMF120mlとNMP120mlを加えて
溶かした。これにHOBT0.30ｇ（1.5倍Ｍ）、
〔38〕2.52ｇ（1.5倍Ｍ）およびWSCI0.41ml
（1.5倍Ｍ）を加え、室温で２日間撹拌した。反
応液を氷水に加え、生じた沈澱物を水洗後、メ
タノールを加えて加熱処理した。冷却後不溶物
を集めた。上記の加熱処理を２回繰り返した
後、エーテルで洗浄して〔39〕8.20ｇ（収率
87.9％）を得た。 アミノ酸分析；Asp4.09(5)、Thr1.05(1)、
Ser2.30(3)、Glu4.08(5)、Pro0.52(1)、Gly0.83
(1)、Ala3、Val3.42(4)、Leu2.53(3)、Lys5.11
(6)、His0.69(1)、Arg0.51(1) (40) Ｐ（49−50）；BOC−Gln−Arg（Tos）−
OMe〔40〕 Ｈ−Arg（Tos）−OMe・HCl11.37ｇ（30ｍ
Ｍ）とBOC−Gln−ONP13.21ｇ（1.2倍Ｍ）を
DMF200mlに溶かし、０℃に冷却下NMMでPH
７に調節した後、一夜撹拌した。反応後、
DMFを減圧下留去し、残渣をクロロホルムに
溶かした後、５％重曹水で３回、1N塩酸で２
回、水で３回洗浄した。クロロホルム層を無水
芒硝で乾燥し、クロロホルムで充填したシリカ
ゲルのカラムでクロマトグラフイーを行つた。
クロロホルム−エタノール−酢酸エチルで流
し、目的物が溶出し始めるとクロロホルム−エ
タノール−酢酸エチル（１：１：１）で溶出し
た。相当する区分を集めて減圧濃縮した。残渣
を酢酸エチルに溶かし、０℃に冷却下ヘキサン
を加えて結晶化させて〔40〕を得た。収量
11.86ｇ 融点；103〜107℃ (41) Ｐ（48−50）；BOC−Ser（Bzl）−Gln−Arg
（Tos）−OMe〔41〕 〔40〕9.39ｇ（16.5ｍＭ）にTFA50mlを加え
室温で20分間撹拌した後、TFAを減圧下留去
した。残渣にエーテルを加え、生じた沈澱物を
取し、DMF50mlに溶かした。この溶液に
HOBT3.24ｇ（1.45倍Ｍ）、BOC−Ser（Bzl）−
OH7.07ｇ（1.45倍Ｍ）およびWSCI4.39ml
（1.45倍Ｍ）を加え、室温で一夜撹拌した。反
応後、DMFを減圧下留去し、残渣を酢酸エチ
ル300mlに溶かした後、５％重曹、1N塩酸、水
の順に洗浄した。酢酸エチル層を無水芒硝で乾
燥後、減圧濃縮した。残渣を酢酸エチル−エー
テルから結晶化を２回行い、〔41〕10.0ｇ（収
率81.0％）を得た。 融点；97〜102℃ 元素分析〔C34H49O10N7S・1/2H2Oとして〕 Ｃ％ Ｈ％ Ｎ％ 測定値 54.07 6.90 13.29 計算値 53.95 6.66 13.00 (42) Ｐ（46−50）；BOC−Ala−Gly−Ser（Bzl）
−Gln−Arg（Tos）−OMe〔42〕 〔41〕9.72ｇ（13ｍＭ）にTFA50mlを加え、
室温で30分間撹拌した。反応後、TFAを減圧
下で留去し、残渣にエーテルを加えた。生じた
沈澱物を取し、DMF100mlに溶かした。この
溶液にBOC−Ala−Gly−OH3.84ｇ（1.2倍
Ｍ）、HOBT2.11ｇ（1.2倍Ｍ）および
WSCI2.85ml（1.2倍Ｍ）を加え、室温で２日間
撹拌した。反応後、DMFを減圧下留去し、残
渣を酢酸エチル200mlに溶かした後、水洗した。
無水芒硝で乾燥し、減圧濃縮した後、残渣をエ
タノール−エーテルで２回結晶化して〔42〕
10.46ｇ（収率91.9％）を得た。 融点；154〜157℃ 元素分析〔C39H57O12N9Sとして〕 Ｃ％ Ｈ％ Ｎ％ 測定値 53.21 6.90 14.38 計算値 53.47 6.56 14.39 (43) Ｐ（46−50）；BOC−Ala−Gly−Ser（Bzl）
−Gln−Arg（Tos）−NHNH2〔43〕 〔42〕9.64ｇ（11ｍＭ）をエタノール50mlに
溶かし、これに50％NH2NH26.4mlを加え室温
で一夜撹拌した。反応液にエタノール100mlを
加え、不溶物を取した。これをエタノール
100mlに懸濁し、加熱した。冷却後、過して
〔43〕9.02ｇ（収率93.6％）を得た。 融点；178〜180℃ 元素分析〔C38H57O11N11Sとして〕 Ｃ％ Ｈ％ Ｎ％ 測定値 52.13 6.86 16.65 計算値 52.10 6.56 17.59 (44) Ｐ（46−54）；BOC−Ala−Gly−Ser（Bzl）
−Gln−Arg（Tos）−Pro−Arg（Tos）−Lys（Ｚ
−Cl）−Lys（Ｚ−Cl）−PAC〔44〕 〔37〕8.04ｇ（6.6ｍＭ）にTFA40mlを加え、
室温で20分間撹拌した後、TFAを減圧下留去
した。残渣にエーテルを加え、生じた沈澱物を
取して粗製のＨ−Pro−Arg（Tos）−Lys（Ｚ
−Cl）−PAC・TFAを得た。 一方、〔43〕6.83ｇ（7.8ｍＭ）をDMF30mlに
溶かし、これに−50℃に冷却下4.32N塩化水素
のジオキサン溶液5.42ml（23.4ｍＭ）とイソア
ミルニトリル1.10ml（8.09ｍＭ）を加えた後、
−20℃で20分間撹拌した。次いで上記Ｈ−Pro
−Arg（Tos）−Lys（Ｚ−Cl）−PAC・TFAを加
え、−35℃でEt3N5.46ml（39ｍＭ）を加えた
後、０〜５℃で２日間撹拌した。反応後、
DMFを減圧下留去し、残渣をクロロホルム300
mlに溶かした後、５％重曹水、1N塩酸、水の
順で洗浄した。クロロホルム層を無水芒硝で乾
燥し、減圧濃縮した。エタノール−エーテルお
よびクロロホルム−エーテルにより精製して
〔44〕13.42ｇを得た。 TLC；Rf＝0.64〔クロロホルム−メタノール酢
酸（83：18：3.5）〕 元素分析〔C92H120O22N18Cl2S・3H2Oとして〕 Ｃ％ Ｈ％ Ｎ％ 測定値 54.68 6.21 12.72 計算値 54.72 6.29 12.49 アミノ酸分析；Ser0.65(1)、Glu1.10(1)、Pro1
(1)、Gly1.02(1)、Ala1.00(1)、Lys1.89(2)、
Arg2.02(2) (45) Ｐ（46−54）；BOC−Ala−Gly−Ser（Bzl）
−Gln−Arg（Tos）−Pro−Arg（Tos）−Lys（Ｚ
−Cl）−Lys（Ｚ−Cl）−OH〔45〕 亜鉛末15ｇ／酢酸30mlに〔44〕5.31ｇの酢酸
40ml溶液を加え、室温で２時間撹拌した。反応
後、亜鉛末を別し、液を減圧濃縮した。残
渣にエーテルを加え、生じた沈澱物をエタノー
ル−エーテルで１回、エタノール−酢酸エチル
で２回精製して〔45〕4.41ｇ（収率87.7％）を
得た。 TLC；Rf4＝0.22 元素分析〔C84H114O22N18S3Cl2・2H2Oとし
て〕 Ｃ％ Ｈ％ Ｎ％ 測定値 52.89 6.16 13.22 計算値 53.12 6.26 13.28 アミノ酸分析；Ser0.88(1)、Glu1.11(1)、
Pro1.02(1)、Gly1.02(1)、Ala1(1)、Lys2.00(2)、
Arg2.09(2) (46) Ｐ（46−84）；BOC−Ala−Gly−Ser（Bzl）
−Gln−Arg（Tos）−Pro−Arg（Tos）−Lys（Ｚ
−Cl）−Lys（Ｚ−Cl）−Glu（OBzl）−Asp
（OBzl）−Asn−Val−Leu−Val−Glu（OBzl）
−Ser（Bzl）−His−Glu（OBzl）−Lys（Ｚ−Cl）
−Ser（Bzl）−Leu−Gly−Glu（OBzl）−Ala−
Asp（OBzl）−Lys（Ｚ−Cl）−Ala−Asp（OBzl）
−Val−Asp（OBzl）−Val−Leu−Thr（Bzl）−
Lys（Ｚ−Cl）−Ala−Lys（Ｚ−Cl）−Ser（Bzl）
−Gln−OBzl〔46〕 〔32〕10.44ｇ（２ｍＭ）にTFA80mlを加
え、室温で60分間撹拌した後、TFAを減圧下
留去した。残渣にエーテルを加え、生じた沈澱
物をDMF160mlとNMP160mlの混液に溶かし
た。これに０℃に冷却下〔45〕4.28ｇ（1.15倍
Ｍ）、HOBT0.32ｇ（1.2倍Ｍ）および
WSCI0.44ml（1.2倍Ｍ）を加えた後、室温で２
日間撹拌した。反応後DMFを減圧下留去し、
残渣に氷水を加えた後、生じた沈澱物を取し
た。これにメタノール200mlを加えて加熱し、
冷却後不溶物を取する操作を２回繰り返して
〔46〕12.17ｇ（収率87.4％）を得た。 (47) ｈ−PTH（46−84） 無水HF60ml120℃に冷却下〔46〕4.18ｇ
（0.6ｍＭ）とアニソール10mlを加え、60分間撹
拌した。反応後、HFを減圧下留去し、残渣に
エーテルを加えた。生じた沈澱物を集め、10％
酢酸50mlに溶かし、ダウエツクス×１のカラム
（アセテート型、2.5×24cm）に通した。流出液
を凍結乾燥して粗生成物2.82ｇを得た。 これを8M尿素水溶液（PH9.0）50mlに溶か
し、60分間室温で放置した。次いでこの溶液を
8M尿素水溶液で充填したCM−セルロースの
カラム（2.0×33cm）にチヤージし、0.01M酢
酸アンモニウム水溶液（PH4.5）500ml〜0.3M
酢酸アンモニウム水溶液（PH4.5）500mlの直線
型濃度勾配による溶出を行つた。溶出液は7.5
mlづつ分画し、各分画はFolin−Lowry法
（500nｍ）により測定して１〜22本目の区分
C1、23〜45本目のC2、46〜80本目の区分C3お
よび81〜120本目の区分C4の溶出液を得た。各
区分をセフアデツクスLH−20のカラムに通し
て脱塩した。区分C1は3.0×120cmのカラムに通
し、流出液を7.5mlづつ分画し、28〜42本目の
区分C1Lを得た。区分C2は3.4×120cmに適し、
流出液を7.6mlづつ分画し、33〜40本目の区分
C2L1および41〜62本目の区分C2L2を得た。区
分C3は3.0×120cmのカラムに通し、流出液を
6.0mlづつ分画し、31〜40本目の区分C3L1およ
び41〜51本目の区分C3L2を得た。区分C4は、
3.4×120cmのカラムに通し、流出液を7.5mlづ
つ分画し、35〜48本目の区分C4Lを得た。各区
分を凍結乾燥してC1L区分312mg、C2L1区分
142.3mg、C2L2区分1380mg、C3L1区分104mg、
C3L2区分510mgおよびC4L区分130mgを得た。 前記のC2L2区分1380mgを0.1N酢酸13mlに溶
かし、CM−セルロースのカラム（4.3×6.0cm）
にチヤージし、0.01M酢酸アンモニウム水溶液
（PH4.5）500ml〜0.3M酢酸アンモニウム水溶液
（PH4.5）500mlの直線型濃度勾配による溶出を
行つた。溶出液は7.6mlづつ分画し、40〜50本
目の区分C2L2−C1および53〜77本目の区分
C2L2−C2を得た。各区分をセフアデツクスLH
−20のカラムに通して脱塩した。区分C2L2−
C1は2.9×120cmのカラムに通し、流出液を8.0
mlづつ分画し、26〜30本目の区分C2L2−C1L1
および31〜39本目の区分C2L2−C1L2を得た。
区分C2L2−C2は3.4×120cmのカラムに通し、流
出液を8.0mlづつ分画し、34〜44本目の区分
C2L2−C2L1および45〜53本目の区分C2L2−
C2L2を得た。各区分を凍結乾燥してC2L2−
C1L1区分79.0mg、C2L2−C1L2区分455mg、C2L2
−C2L1区分157.3mgおよびC2L2−C2L2区分551.7
mgを得た。 C2L2−C2L2区分のアミノ酸分析；Asp4.65(5)、
Thr0.97(1)、Ser3.47(4)、Glu5.99(6)、Pro0.93
(1)、Gly1.96(2)、Ala4(4)、Val3.97(4)、
Leu3.01(3)、Lys6.13(6)、His0.93(1)、Arg1.96
(2) 前記のC2L2−C2L2区分を0.1N酢酸５mlに溶
かし、CM−セルロースのカラム（4.2×7.0cm）
にチヤージし、0.01M酢酸アンモニウム水溶液
（PH4.5）300ml〜0.3M酢酸アンモニウム水溶液
（PH4.5）の直線型濃度勾配による溶出を行つ
た。溶出液は8.0mlづつ分画し、39〜45本目の
区分C2L2−C2L2−Ｃを得た。この区分をセフ
アデツクスLH−20のカラム（2.9×120cm）の
カラムに通して脱塩する。流出液を8.0mlづつ
分画し、24〜30本目の区分C2L2−C2L2−CL1、
31〜35本目の区分C2L2−C2L2−CL2および36〜
39本目の区分C2L2−C2L2−CL3を得た。各区分
を凍結乾燥してC2L2−C2L2−CL2区分200mgお
よびC2L2−C2L2−CL1区分〔ｈ−PTH（46−
84）〕94.9mgを得た。 TLC；Rf9＝0.76 アミノ酸分析；Asp4.86(5)、Thr0.99(1)、
Ser3.58(4)、Glu6.17(6)、Pro0.96(1)、Gly1.97
(2)、Ala4(4)、Val4.02(4)、Leu2.93(3)、
Lys6.05(6)、His0.90(1)、Arg1.87(2) 実施例 ２ 〔Tyr45〕ｈ−PTH（46−84）；Ｈ−Tyr−Ala−
Gly−Ser−Gln−Arg−Pro−Arg−Lys−Lys
−Glu−Asp−Asn−Val−Leu−Val−Glu−
Ser−His−Glu−Lys−Ser−Leu−Gly−Glu
−Ala−Asp−Lys−Ala−Asp−Val−Asp−
Val−Leu−Thr−Lys−Ala−Lys−Ser−Gln
−OH (1) Ｐ（45−84）；BOC−Tyr（Bzl−Cl2）−Ala−
Gly−Ser（Bzl）−Gln−Arg（Tos）−Pro−Arg
（Tos）−Lys（Ｚ−Cl）−Lys（Ｚ−Cl）−Glu
（OBzl）−Asp（OBzl）−Asn−Val−Leu−Val
−Glu（OBzl）−Ser（Bzl）−His−Glu（OBzl）−
Lys（Ｚ−Cl）−Ser（Bzl）−Leu−Gly−Glu
（OBzl）−Ala−Asp（OBzl）−Lys（Ｚ−Cl）−
Ala−Asp（OBzl）−Val−Asp（OBzl）−Val−
Leu−Thr（Bzl）−Lys（Ｚ−Cl）−Ala−Lys（Ｚ
−Cl）−Ser（Bzl）−Gln−OBzl〔47〕 実施例１に記載の〔46〕6.27ｇ（0.9ｍＭ）
TFA60mlを加え、室温で60分間撹拌した。反
応後、TFAを減圧下留去し、残渣にエーテル
を加えた。生じた沈澱物を取して脱BOC化
物6.30ｇを得た。 上記脱BOC化物2.10ｇ（0.3ｍＭ）をDMF35
mlとNMP35mlの混液に溶かし、これに０℃に
冷却下BOC−Tyr（Bzl−Cl2）−OH0.16ｇ（1.2
倍Ｍ）、HOBT0.05ｇ（1.2倍Ｍ）および
WSCI0.07ml（1.2倍Ｍ）を加えた後、室温で一
夜撹拌した。反応後、DMFを減圧下留去し、
残渣に氷水を加えた。生じた沈澱物を取して
〔47〕2.00ｇを得た。 (2) 〔Try45〕−ｈ−PTH（46−84） 無水HF20mlに０℃に冷却下〔47〕2.00ｇ
（0.27ｍＭ）およびアニソール1.0mlを加え、60
分間撹拌した。反応後、HFを減圧下留去し、
残渣にエーテルを加えた。生じた沈澱物を集
め、0.1N酢酸20mlに溶かし、ダウエツクス×
１のカラム（アセテート型、2.5×15cm）に通
した。流出液を凍結乾燥して粗生成物1.37ｇを
得た。 これを8M尿素水溶液（PH9.5）50mlに溶か
し、室温で60分間放置する。次いでこの溶液を
8M尿素水溶液で充填したCM−セルロースの
カラム（4.3×8.0cm）にチヤージし、0.01M酢
酸アンモニウム水溶液（PH4.5）400ml〜0.3M
酢酸アンモニウム水溶液（PH4.5）400mlの直線
型濃度勾配による溶出を行つた。溶出液は6.5
mlづつ分画し、各分画はFolin−Lowry法
（500nｍ）により測定して30〜43本目の区分
C1、51〜68本目の区分C2、69〜83本目の区分
C3および84〜100本目の区分C4を得た。各区分
をセフアデツクスLH−20のカラムに通して脱
塩した。分C1は3.4×120cmのカラムに通し、流
出液を7.5mlづつ分画し、25〜41本目の区分C1L
を得た。区分C2は3.0×120cmのカラムに通し、
流出液を7.5mlづつ分画し、25〜36本目の区分
C2Lを得た。区分C3は2.9×120cmのカラムに通
し、流出液を8.0mlづつ分画し、24〜27本目の
区分C3L1および28〜38本目の区分C3L2を得た。
区分C4は2.9×95cmのカラムに通し、流出液を
7.6mlづつ分画し、20〜25本目の区分C4L1およ
び26〜30本目の区分C4L2を得た。各区分を凍
結乾燥してC1L区分521.6mg、C2L区分230.2mg、
C3L1区分41.8mg、C3L2区分222.4mg、C4L1区分
74.3mgおよびC4L2区分48.9mgを得た。 前記のC2L区分を0.1N酢酸３mlに溶かし、
CM−セルロースのカラム（2.1×25cm）にチヤ
ージし、0.01M酢酸アンモニウム水溶液（PH
4.5）300ml〜0.3M酢酸アンモニウム水溶液
（PH4.5）300mlの直線型濃度勾配による溶出を
行つた。溶出液は8.0mlづつ分画し、30〜36本
目の区分C2L−Ｃを得た。この区分をセフアデ
ツクスLH−20のカラム（2.9×90cm）のカラム
に通して脱塩した。流出液を8.0mlづつ分画し、
20〜29本目の区分を凍結乾燥して〔Tyr45〕−ｈ
−PTH（46−84）163.3mgを得た。 TLC；Rf9＝0.75 アミノ酸分析；Asp4.86(5)、Thr1.02(1)、
Ser3.51(4)、Glu6.05(6)、Pro0.93(1)、Gly1.90
(2)、Ala4(4)、Val4.00(4)、Leu2.93(3)、
Tyr0.88(1)、Lys6.02(6)、His0.86(1)、Arg1.81
(2) 実施例 ３ 〔Cys（Acm）45〕−ｈ−PTH（46−84）〕；Ｈ−
Cys（Acm）−Ala−Gly−Ser−Gln−Arg−Pro
−Arg−Lys−Lys−Glu−Asp−Asn−Val−
Leu−Val−Gln−Ser−His−Glu−Lys−Ser
−Leu−Gly−Glu−Ala−Asp−Lys−Ala−
Asp−Val−Asp−Val−Leu−Thr−Lys−Ala
−Lys−Ser−Gln−OH (1) Ｐ（45−84）；BOC−Cys（Acm）−Ala−Gly
−Ser（Bzl）−Glu−Arg（Tos）−Pro−Arg
（Tos）−Lys（Ｚ−Cl）−Lys（Ｚ−Cl）−Glu
（OBzl）−Asp（OBzl）−Asn−Val−Leu−Val
−Glu（OBzl）−Ser（Bzl）−His−Glu（OBzl）−
Lys（Ｚ−Cl）−Ser（Bzl）−Leu−Gly−Glu
（OBzl）−Ala−Asp（OBzl）−Lys（Ｚ−Cl）−
AlaAsp（OBzl）−Val−Asp（OBzl）−Val−
Leu−Thr（Bzl）−Lys（Ｚ−Cl）−Ala−Lys（Ｚ
−Cl）−Ser（Bzl）−Gln−OBzl〔48〕 実施例２で得た残りの脱BOC化物4.20mg
（0.6ｍＭ）をDMF70mlとNMP70mlの混液に溶
かし、これに０℃に冷却下HOBT0.10ｇ（1.2
倍Ｍ）、BOC−Cys（Acm）−OH0.20ｇ（1.2倍
Ｍ）およびWSCI0.13ml（1.2倍Ｍ）を加えた
後、室温で一夜撹拌した。反応後、DMFを減
圧下留去し、残渣に氷水を加え、生じた沈澱物
を集めた。これをエタノールに懸濁して加熱
し、冷却した後、不溶物を取した。この操作
を２回繰り返して〔48〕4.07ｇ（収率95.0％）
を得た。 (2) 〔Cys（Acm）45〕−ｈ−PTH（46−84） 無水HF60mlに０℃に冷却下〔48〕4.00ｇ
（0.57ｍＭ）およびアニソール10mlを加え、60
分間撹拌した。反応後、HFを減圧下留去し、
残渣にエーテルを加えた。生じた沈澱物を集
め、20％酢酸40mlに溶かし、ダウエツクス×１
のカラム（アセテート型、2.8×35cm）通した。
流出液を凍結乾燥した。これを8M尿素水溶液
50mlに溶かし、アンモニア水でPH9.0に調節し
た後、30分間放置した。次いでこの溶液を8M
尿素水溶液で充填したCM−セルロース（3.4×
35cm）にチヤージし、0.01M酢酸アンモニウム
水溶液（PH4.5）700ml〜0.3M酢酸アンモニウ
ム水溶液（PH4.5）700mlの濃度勾配による溶出
を行つた。溶出液は8.0mlづつ分画し、各分画
はFolin−Lowry法（500nｍ）により測定して
25〜35本目の区分C1、36〜45本目の区分C2お
よび46〜84本目の区分C3を得た。各区分をセ
フアデツクスLH−20のカラムに通して脱塩し
た。区分C2は3.0×120cmのカラムに通し、流出
液を8.0mlづつ分画し、27〜33本目の区分C2L1
および34〜40本目の区分C2L2を得た。区分C3
は3.4×120cmのカラムに通し、流出液を8.0ml
づつ分画し、35〜47本目の区分C3L1および48
〜53本目の区分C3L2を得た。各区分を凍結乾
燥してC2L1区分148mg、C2L2区分620mg、C3L1
区分212mgおよびC3L2区分605mgを得た。 前記のC2L2区分を0.1N酢酸６mlに溶かし、
これをCM−モルロースのカラム（5.0×12cm）
にチヤージし、0.01M酢酸アンモニウム水溶液
（PH4.5）400ml〜0.3M酢酸アンモニウム水溶液
（PH4.5）400mlの直線型濃度勾配による溶出を
行つた。溶出液は6.0mlづつ分画し、110〜126
本目の区分C2L2−Ｃを得た。これをセフアデ
ツクスLH−20のカラム（4.0×120cm）に通し
て脱塩した。流出液は8.0mlづつ分画し、38〜
54本目の区分C2L2−CLを得た。この区分を凍
結乾燥して〔Cys（Acm）45〕−ｈ−PTH（46−
84）246.8mgを得た。 TCL；Rf9＝0.74 アミノ酸分析；Asp4.91(5)、Thr0.98(1)、
Ser3.50(1)、Glu6.11(6)、Pro0.98(1)、Gly1.98
(2)、Ala4(4)、Val4.04(4)、Cys0.42（0.5）、
Leu2.90(3)、Lys5.99(6)、His0.87(1)、Arg1.87
(2) 実施例 ４ 〔Cys45〕−ｈ−PTH（46−84）；Ｈ−Cys−Ala−
Gly−Ser−Gln−Arg−Pro−Arg−Lys−Lys
−Glu−Asp−Asn−Val−Leu−Val−Glu−
Ser−His−Glu−Lys−Ser−Leu−Gly−Glu
−Ala−Asp−Lys−Ala−Asp−Val−Asp−
Val−Leu−Thr−Lys−Ala−Lys−Ser−Gln
−OH 実施例３で得た〔Cys（Acm）45〕−ｈ−PTH
（46−84）88mg（0.02ｍＭ）を50％酢酸２mlに溶
かし、これに酢酸第二水銀57.24mg（0.18ｍＭ）
を加えた後、室温で70分間撹拌した。次いで、β
−メルカプトエタノール3.4mlを加え、室温で24
時間撹拌した。反応液を遠心分離し、上澄液をセ
フアデツクスLH−20のカラム（3.2×42cm）にチ
ヤージし、0.1M酢酸で溶出した。溶出液は５ml
づつ分画し、ニンヒドリン反応陽性の９〜14本目
の区分を集めた。これを凍結乾燥して〔Cys45〕−
ｈ−PTH（46−84）76.1mgを得た。 TLC；Rf9＝0.73 参考例 １ ｈ−PTH（53−84）；Ｈ−Lys−Lys−Glu−
Asp−Asn−Val−Leu−Val−Glu−Ser−His
−Glu−Lys−Ser−Leu−Gly−Glu−Ala−
Asp−Lys−Ala−Asp−Val−Asp−Val−Leu
−Thr−Lys−Ala−Lys−Ser−Gln−OH (a) 無水弗化水素（HF）25mlに０℃に冷却下実
施例１に記載の〔35〕3.49ｇ（0.6ｍＭ）およ
びアニソール３mlを加え、75分間撹拌した。反
応後、HFを減圧下留去し、残渣にエーテルを
加えた。生じた沈澱物を集め、0.1N酢酸50ml
に溶かし、ダウエツクス×１のカラム（2.7×
35cm）に通した。流出液を凍結乾燥して粗生成
物2.18ｇを得た。これを8M尿素水溶液50mlに
溶かし、アンモニア水でPH9.5に調節した後、
50分間放置した。次いでこの溶液を8M尿素水
溶液で充填したCM−セルロースのカラム（4.4
×12cm）にチヤージし、0.01M酢酸アンモニウ
ム水溶液（PH4.5）約100mlで流出した後、
0.01M酢酸アンモニウム水溶液（PH4.5）700ml
〜0.1M酢酸アンモニウム水溶液（PH4.5）700
mlの直線型濃度勾配による溶出を行い、次いで
0.2M酢酸アンモニウム水溶液（PH4.5）300ml
で溶出した。溶出液は、13.5mlづつ分画し、各
分画はFolin−Lowry法（500nｍ）により測定
して30〜50本目の区分C1、56〜119本目の区分
C2および120〜150本目の区分C3の溶出液を得
た。 各区分をセフアデツクスLH−20のカラムに
通して脱塩した。流出液は8.5mlづつ分画し、
各分画は上記と同じ方法で測定した。区分C1
は3.4×113cmのカラムに通し、31〜40本目の区
分L1、41〜44本目の区分L2および45〜54本目
の区分L3を得た。区分C2は3.4×120cmのカラム
に通し、35〜45本目の区分L1、46〜52本目の
区分L2および53〜60本目の区分L3を得た。区
分C3は3.4×120cmのカラムに通し、31〜44本目
の区分L1および45〜52本目の区分L2を得た。
各区分を凍結乾燥して、次の各成分を得た。
【表】
(b) C2L2の精製
前記のC2L2565mgの0.1N酢酸５mlに溶かし、
CM−セルロースのカラム（4.4×70cm）にチヤ
ージし、0.01M酢酸アンモニウム水溶液（PH
4.5）500ml〜0.1M酢酸アンモニウム水溶液
（PH4.5）500mlの直線型濃度勾配による溶出を
行つた。溶出液は6.0mlづつ分画し、各分画は
Folin−Lowry法により測定して113〜136本目
の区分C2L2−C1、137〜1551本目の区分C2L2−
C2および152〜190本目の区分C2L2−C3を得た。 各区分をセフアデツクスLH−20のカラムに
通して脱塩した。流出液は5.2mlづつ分画し、
各分画は上記と同じ方法で測定した。区分
C2L2−C1は3.4×120cmのカラムに通し、55〜72
本目の区分C2L2−C1L1および73〜80本目の区
分C2L2−C1L2を得た。区分C2L2−C2は3.4×
110cmのカラムに通し、50〜59本目の区分C2L2
−C2L1および60〜67本目の区分C2L2−C2L2を
得た。区分C2L2−C3は3.4×110cmのカラムに通
し、45〜60本目の区分のC2L2−C3L1および61
〜72本目の区分C2L2−C3L2を得た。各区分を
凍結乾燥して、次の各成分を得た。 C2L2−C1L1 108.7mg C2L2−C1L2 95.9mg C2L2−C2L1 53.6mg C2L2−C2L2 44.1mg C2L2−C3L1 97.0mg C2L2−C3L2 95.1mg (c) C2L2−C1L1の精製 前記のC2L2−C1L1を0.1N酢酸１mlに溶かし、
CM−セルロースのカラム（2.0×15cm）にチヤ
ージし、0.01M酢酸アンモニウム水溶液（PH
4.5）300ml〜0.1M酢酸アンモニウム水溶液
（PH4.5）300mlの直線型濃度勾配による溶出を
行つた。溶出液は7.4mlづつ分画し、各分画は
Folin−Lowry法（500nｍ）により測定して46
〜56本目の区分C2L2−C1L1−Ｃを得た。これ
を減圧濃縮し、セフアデツクスLH−20のカラ
ム（3.0×90cm）にチヤージし、0.1N酢酸で溶
出した。溶出液は6.0mlづつ分画し、上記と同
じ方法で測定して25〜35本目の区分C2L2−
C1L1−CLを得た。これを凍結乾燥してｈ−
PTH（53−84）90.0mgを得た。 TLC；R9＝0.76 １スポツト アミノ酸分析；Asp4.45(5)、Thr0.92(1)、
Ser2.16(3)、Glu4.94(5)、Gly0.96(1)、Ala3、
Val3.96(4)、Leu2.92(3)、Lys6.22(6)、His1.01
(1) 参考例 ２ ｈ−PTH（51−84）；Ｈ−Pro−Arg−Lys−
Lys−Glu−Asp−Asn−Val−Leu−Val−Glu
−Ser−His−Glu−Lys−Ser−Leu−Gly−
Glu−Ala−Asp−Lys−Ala−Asp−Val−Asp
−Val−Leu−Thr−Lys−Ala−Lys−Ser−
Gln−OH 無水HF40mlに０℃に冷却下実施例１記載の
〔39〕3.73ｇ（0.6ｍＭ）およびアニソール４mlを
加え、60分間撹拌した。反応後、HFを減圧下留
去し、残渣にエーテルを加えた。生じた沈澱物を
集め、0.1N酢酸50mlに溶かし、ダウエツクス×
１のカラム（アセテート型−2.7×33cm）に通し
た。流出液を凍結乾燥して粗生成物2.41ｇを得
た。 これを8M尿素水溶液50mlに溶かし、アンモニ
ア水でPH10.0に調節した後、30分間放置した。次
いでこの溶液を8M尿素水溶液で充填したCM−
セルロースのカラム（4.2×11.5cm）にチヤージ
し、0.01M酢酸アンモニウム水溶液（PH4.5）で
尿素を流出した後、0.01M酢酸アンモニウム水溶
液（PH4.5）700ml〜0.1M酢酸アンモニウム水溶
液（PH4.5）700mlの直線型濃度勾配による溶出を
行い、次いで0.2M酢酸アンモニウム水溶液（PH
4.5）250mlで溶出した。溶出液は8.5mlづつ分画
し、各分画はFolin−Lowry法（500nｍ）により
測定して30〜63本目の区分C1、105〜150本目の
区分C2および151〜195本目の区分C3溶液を得た。
区分C2および区分C3をセフアデツクスLH−20の
カラムに通して脱塩した。流出液は5.2mlづつ分
画し、区分C2は3.4×110cmのカラムに適し、51〜
63本目の区分C2L1および64〜80本目の区分C2L2
を得た。区分C3は3.4×120cmに適し、50〜69本目
の区分C3L1および70〜78本目の区分C3L2を得た。
各区分を凍結乾燥して次の各成分を得た。
CM−セルロースのカラム（4.4×70cm）にチヤ
ージし、0.01M酢酸アンモニウム水溶液（PH
4.5）500ml〜0.1M酢酸アンモニウム水溶液
（PH4.5）500mlの直線型濃度勾配による溶出を
行つた。溶出液は6.0mlづつ分画し、各分画は
Folin−Lowry法により測定して113〜136本目
の区分C2L2−C1、137〜1551本目の区分C2L2−
C2および152〜190本目の区分C2L2−C3を得た。 各区分をセフアデツクスLH−20のカラムに
通して脱塩した。流出液は5.2mlづつ分画し、
各分画は上記と同じ方法で測定した。区分
C2L2−C1は3.4×120cmのカラムに通し、55〜72
本目の区分C2L2−C1L1および73〜80本目の区
分C2L2−C1L2を得た。区分C2L2−C2は3.4×
110cmのカラムに通し、50〜59本目の区分C2L2
−C2L1および60〜67本目の区分C2L2−C2L2を
得た。区分C2L2−C3は3.4×110cmのカラムに通
し、45〜60本目の区分のC2L2−C3L1および61
〜72本目の区分C2L2−C3L2を得た。各区分を
凍結乾燥して、次の各成分を得た。 C2L2−C1L1 108.7mg C2L2−C1L2 95.9mg C2L2−C2L1 53.6mg C2L2−C2L2 44.1mg C2L2−C3L1 97.0mg C2L2−C3L2 95.1mg (c) C2L2−C1L1の精製 前記のC2L2−C1L1を0.1N酢酸１mlに溶かし、
CM−セルロースのカラム（2.0×15cm）にチヤ
ージし、0.01M酢酸アンモニウム水溶液（PH
4.5）300ml〜0.1M酢酸アンモニウム水溶液
（PH4.5）300mlの直線型濃度勾配による溶出を
行つた。溶出液は7.4mlづつ分画し、各分画は
Folin−Lowry法（500nｍ）により測定して46
〜56本目の区分C2L2−C1L1−Ｃを得た。これ
を減圧濃縮し、セフアデツクスLH−20のカラ
ム（3.0×90cm）にチヤージし、0.1N酢酸で溶
出した。溶出液は6.0mlづつ分画し、上記と同
じ方法で測定して25〜35本目の区分C2L2−
C1L1−CLを得た。これを凍結乾燥してｈ−
PTH（53−84）90.0mgを得た。 TLC；R9＝0.76 １スポツト アミノ酸分析；Asp4.45(5)、Thr0.92(1)、
Ser2.16(3)、Glu4.94(5)、Gly0.96(1)、Ala3、
Val3.96(4)、Leu2.92(3)、Lys6.22(6)、His1.01
(1) 参考例 ２ ｈ−PTH（51−84）；Ｈ−Pro−Arg−Lys−
Lys−Glu−Asp−Asn−Val−Leu−Val−Glu
−Ser−His−Glu−Lys−Ser−Leu−Gly−
Glu−Ala−Asp−Lys−Ala−Asp−Val−Asp
−Val−Leu−Thr−Lys−Ala−Lys−Ser−
Gln−OH 無水HF40mlに０℃に冷却下実施例１記載の
〔39〕3.73ｇ（0.6ｍＭ）およびアニソール４mlを
加え、60分間撹拌した。反応後、HFを減圧下留
去し、残渣にエーテルを加えた。生じた沈澱物を
集め、0.1N酢酸50mlに溶かし、ダウエツクス×
１のカラム（アセテート型−2.7×33cm）に通し
た。流出液を凍結乾燥して粗生成物2.41ｇを得
た。 これを8M尿素水溶液50mlに溶かし、アンモニ
ア水でPH10.0に調節した後、30分間放置した。次
いでこの溶液を8M尿素水溶液で充填したCM−
セルロースのカラム（4.2×11.5cm）にチヤージ
し、0.01M酢酸アンモニウム水溶液（PH4.5）で
尿素を流出した後、0.01M酢酸アンモニウム水溶
液（PH4.5）700ml〜0.1M酢酸アンモニウム水溶
液（PH4.5）700mlの直線型濃度勾配による溶出を
行い、次いで0.2M酢酸アンモニウム水溶液（PH
4.5）250mlで溶出した。溶出液は8.5mlづつ分画
し、各分画はFolin−Lowry法（500nｍ）により
測定して30〜63本目の区分C1、105〜150本目の
区分C2および151〜195本目の区分C3溶液を得た。
区分C2および区分C3をセフアデツクスLH−20の
カラムに通して脱塩した。流出液は5.2mlづつ分
画し、区分C2は3.4×110cmのカラムに適し、51〜
63本目の区分C2L1および64〜80本目の区分C2L2
を得た。区分C3は3.4×120cmに適し、50〜69本目
の区分C3L1および70〜78本目の区分C3L2を得た。
各区分を凍結乾燥して次の各成分を得た。
【表】
前記のC2L2区分375mgを0.1N酢酸４mlに溶か
し、CM−セルロースのカラム（2.0×31cm）にチ
ヤージし、0.01M酢酸アンモニウム水溶液（PH
4.5）500ml〜0.2M酢酸アンモニウム水溶液（PH
4.5）500mlの直線型濃度勾配による溶出を行つ
た。溶出液は7.5mlづつ分画し、85〜103本目の区
分C2L2−Ｃを得た。この区分をセフアデツクス
LH−20のカラム（3.0×123cm）に通して脱塩し
た。流出液は６mlづつ分画し、34〜42本目の区分
C2L2−CL1および43〜50本目の区分C2L2−CL2を
得た。 各区分を凍結乾燥して次の各成分を得た。 C2L2−CL1 80.0mg アミノ酸分析；Asp4.95(5)、Thr0.98(1)、Ser2.47
(3)、Glu5.14(5)、Gly1.01(1)、Ala3(3)、Val4.05
(4)、Leu3.02(3)、Lys6.16(6)、His0.96(1)、
Arg0.97(1)、Pro1.06(1) C2L2−CL2 197.6mg アミノ酸分析；Asp5.00(5)、Thr0.93(1)、Ser2.30
(3)、Glu5.17(5)、Gly1.01(1)、Ala3(3)、Val4.03
(4)、Leu3.00(3)、Lys6.15(6)、His0.95(1)、
Arg1.01(1)、Pro1.04(1) 前記のC2L2−CL2区分195mgを0.1N酢酸２mlに
溶かし、CM−セルロースのカラム（2.0×15cm）
にチヤージし、0.01M酢酸アンモニウム水溶液
（PH4.5）300ml〜0.2M酢酸アンモニウム水溶液
（PH4.5）300mlの直線型濃度勾配による溶出を行
なつた。溶出液は6.4mlづつ分画し、55〜64本目
の区分C2L2−CL2−C1および56〜72本目の区分
C2L2−CL2−C2を得た。各区分をセフアデツクス
LH−20のカラムに通して脱塩した。区分C2L2−
CL2−C1は3.0×123cmのカラムに通し、流出液は
7.4mlづつ分画し、31〜38本目の区分C2L2−CL2
−C1L1と39〜43本目の区分C2L2−CL2−C1L2を
得た。区分C2L2−CL2−C1L1を凍結乾燥してｈ−
PTH（51−84）77.2mgを得た。 TLC；R10＝0.89 １スポツト
し、CM−セルロースのカラム（2.0×31cm）にチ
ヤージし、0.01M酢酸アンモニウム水溶液（PH
4.5）500ml〜0.2M酢酸アンモニウム水溶液（PH
4.5）500mlの直線型濃度勾配による溶出を行つ
た。溶出液は7.5mlづつ分画し、85〜103本目の区
分C2L2−Ｃを得た。この区分をセフアデツクス
LH−20のカラム（3.0×123cm）に通して脱塩し
た。流出液は６mlづつ分画し、34〜42本目の区分
C2L2−CL1および43〜50本目の区分C2L2−CL2を
得た。 各区分を凍結乾燥して次の各成分を得た。 C2L2−CL1 80.0mg アミノ酸分析；Asp4.95(5)、Thr0.98(1)、Ser2.47
(3)、Glu5.14(5)、Gly1.01(1)、Ala3(3)、Val4.05
(4)、Leu3.02(3)、Lys6.16(6)、His0.96(1)、
Arg0.97(1)、Pro1.06(1) C2L2−CL2 197.6mg アミノ酸分析；Asp5.00(5)、Thr0.93(1)、Ser2.30
(3)、Glu5.17(5)、Gly1.01(1)、Ala3(3)、Val4.03
(4)、Leu3.00(3)、Lys6.15(6)、His0.95(1)、
Arg1.01(1)、Pro1.04(1) 前記のC2L2−CL2区分195mgを0.1N酢酸２mlに
溶かし、CM−セルロースのカラム（2.0×15cm）
にチヤージし、0.01M酢酸アンモニウム水溶液
（PH4.5）300ml〜0.2M酢酸アンモニウム水溶液
（PH4.5）300mlの直線型濃度勾配による溶出を行
なつた。溶出液は6.4mlづつ分画し、55〜64本目
の区分C2L2−CL2−C1および56〜72本目の区分
C2L2−CL2−C2を得た。各区分をセフアデツクス
LH−20のカラムに通して脱塩した。区分C2L2−
CL2−C1は3.0×123cmのカラムに通し、流出液は
7.4mlづつ分画し、31〜38本目の区分C2L2−CL2
−C1L1と39〜43本目の区分C2L2−CL2−C1L2を
得た。区分C2L2−CL2−C1L1を凍結乾燥してｈ−
PTH（51−84）77.2mgを得た。 TLC；R10＝0.89 １スポツト
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １ 式 Ｒ−Ala−Gly−Ser−Gln−Arg−Pro−Arg−Lys−Lys−G
lu−Asp−Asn−Val−Leu −Val−Glu−Ser−His−Glu−Lys−Ser−Leu−Gly−G
lu−Ala −Asp−Lys−Ala−Asp−Val−Asp−Val−Leu−Thr−L
ys−Ala−Lys−Ser−Gln−OH （式中、ＲはＨまたはＨ−R1基、R1はCysまたは
Tyr基を示す）で表わされるペプチドまたはその
塩。
Priority Applications (8)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP55187686A JPS57126456A (en) | 1980-12-29 | 1980-12-29 | Peptide for determining human parathormone |
| SE8107687A SE453510B (sv) | 1980-12-29 | 1981-12-21 | Peptid for analys av humant paratyroidhormon |
| FR8124412A FR2497198B1 (fr) | 1980-12-29 | 1981-12-29 | Peptide pour le dosage de l'hormone parathyroide humaine |
| CH8335/81A CH661735A5 (de) | 1980-12-29 | 1981-12-29 | Fragment von menschlichem nebenschilddruesenhormon-peptid. |
| DE19813151738 DE3151738A1 (de) | 1980-12-29 | 1981-12-29 | Peptid fuer die analyse des menschlichen hormons der nebenschilddruese |
| US06/335,401 US4409141A (en) | 1980-12-29 | 1981-12-29 | Peptides for assaying human parathyroid hormone |
| GB8139060A GB2092160B (en) | 1980-12-29 | 1981-12-30 | Peptide for assaying human parathyroid hormone |
| US07/332,801 USRE33188E (en) | 1980-12-29 | 1989-04-03 | Peptides for assaying human parathyroid hormone |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP55187686A JPS57126456A (en) | 1980-12-29 | 1980-12-29 | Peptide for determining human parathormone |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS57126456A JPS57126456A (en) | 1982-08-06 |
| JPS6345680B2 true JPS6345680B2 (ja) | 1988-09-12 |
Family
ID=16210364
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP55187686A Granted JPS57126456A (en) | 1980-12-29 | 1980-12-29 | Peptide for determining human parathormone |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS57126456A (ja) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH0672880B2 (ja) * | 1985-10-09 | 1994-09-14 | ヤマサ醤油株式会社 | イムノアッセイ用試薬 |
-
1980
- 1980-12-29 JP JP55187686A patent/JPS57126456A/ja active Granted
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| ENDOCRINOL * |
| ENDOCRINOLOGY * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS57126456A (en) | 1982-08-06 |
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