JPH04301765A

JPH04301765A - 免疫学的測定法

Info

Publication number: JPH04301765A
Application number: JP6712891A
Authority: JP
Inventors: Takao Uejima; 植嶋　孝夫
Original assignee: Konica Minolta Inc
Current assignee: Konica Minolta Inc
Priority date: 1991-03-29
Filing date: 1991-03-29
Publication date: 1992-10-26

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、免疫学的測定法に関す
るものである。

【０００２】

【発明の背景】生物学的流体試料中に極微量含有される
物質を検出する方法として、各種の分析法が開発されて
来ている。この分析法の一つとして、免疫反応をその原
理とするものがある。そして、この原理を用いた測定法
として種々のものが開発され、精度の高いものとして知
られている。すなわち、ＢｅｒｓｏｎとＹａｌｌｏｗが
放射性同位元素Ｉで標識したウシインシュリンと糖尿病
患者血清中の抗インシュリン抗体を用いて血清中のイン
シュリンを測定することに成功して以来、ラジオアイソ
トープを用いた免疫測定法が広く用いられて来た。そし
て、これ以後、標識物質として放射性同位元素以外のも
のも種々開発されて来た。例えば、酵素、酵素基質、補
酵素、酵素阻害物質、バクテリオファージ、循環反応体
、金属及び有機金属の錯体、有機補欠分子族、化学発光
性反応体及び螢光性分子等が挙げられる。

【０００３】このような免疫学的測定法は、均一免疫測
定法と非均一免疫測定法に大別される。すなわち、抗原
抗体反応生成物（Ｂｏｕｎｄ体）と非反応物（Ｆｒｅｅ
体）との分離（Ｂ／Ｆ分離）が必要な非均一免疫測定法
と、Ｂ／Ｆ分離の必要のない均一免疫測定法とに大別さ
れる。このうち、測定対象物質が高分子である場合には
、Ｂ／Ｆ分離が必要な非均一免疫測定法が利用されてい
る。

【０００４】ところで、この非均一免疫測定法は洗浄操
作、試薬の調整が必要であること、標識物質、基質、反
応停止液等の添加が必要であることから操作が煩雑であ
ること等の問題がある。これらの問題点に対して各種の
技術が提案されている。例えば、特開昭６４−６３８６
３号公報、特開昭６４−６３８６４号公報、特開平２−
８３４４号公報においては、乾式分析素子を用いること
により操作性はかなり簡便になっているものの、簡便性
に対する要求は高まる一方であり、改善が待たれている
。

【０００５】

【発明の開示】本発明の目的は、液体試料中の特定成分
を、簡便な操作で、再現性良く正確に定量できる技術を
提供することである。この本発明の目的は、容器中で免
疫反応を行わせた後、この容器中の反応液に毛細管現象
を発揮できる吸水性素材を浸け、この吸水性素材を介し
て標識体を吸水性素材に接合された分析素子に移行させ
、標識体を分析素子で測定することにより試料中の特定
成分を分析することを特徴とする免疫学的測定法によっ
て達成される。

【０００６】又、固定化担体に固定化された固定化抗体
（又は抗原）、酵素標識抗体（又は抗原）及び試料中の
抗原（又は抗体）による免疫反応を容器中で行わせた後
、分析素子と接合された吸水性素材を反応液に浸け、吸
水性素材の毛細管現象により遊離の酵素標識抗体（又は
抗原）を分析素子に移行させ、その後前記分析素子を取
り、標識酵素を分析素子で測定することにより試料中の
抗原（又は抗体）を分析することを特徴とする免疫学的
測定法によって達成される。

【０００７】以下、本発明をさらに詳しく説明する。本
発明において、試料としてはあらゆる形態の溶液、コロ
イド溶液などが使用しうるが、好ましくは生物由来の試
料、例えば血液、血漿、血清、脳脊髄液、唾液、羊水、
乳、尿、汗、肉汁等が挙げられる。免疫反応において用
いられる標識物質としては、例えば酵素、酵素基質、酵
素及び酵素前駆体の活性を変化させる物質（酵素阻害物
質、補欠分子族、補酵素）、酵素前駆体、アポ酵素、螢
光物質などが挙げられるが、例えばβ−Ｄ−ガラクトシ
ダーゼ、アルカリホスフォダーゼ、ペルオキシダーゼ、
グルコースオキシダーゼ、グルタメートデヒドロゲナー
ゼ、アミラーゼ等の酵素が好ましく、これらの酵素を標
識物質とする場合、酵素反応系、発色系は公知のものを
使用できる。具体的には、特開昭６１−２９２０６０号
公報、特開昭６２−９０５３９号公報、特開昭６３−１
３１０６２号公報、特開昭６３−４５５６２号公報、特
願昭６３−２１９８９３号明細書に記載の物質（物質群
）が挙げられるが、これらに限定されるものではない。そして、標識物質の抗体（抗原）への結合は、当業者間
で知られている公知の試薬と方法で行うことができ、例
えば石川　　栄治、河合忠、宮井　　潔　　編「酵素免
疫測定法（第２版）、医学書院、１９７８年」や日本臨
床病理学会編「臨床病理」臨時増刊特集第５３号「臨床
検査の為のイムノアッセイ−技術と応用−、臨床病理刊
行会、１９８３年」などに記載された方法を参考にする
ことができる。

【０００８】本発明の免疫反応で使用される抗体は、そ
の由来を特に限定されるものではなく、哺乳動物等に抗
原を投与、免疫して得られる抗血清、腹水液をそのまま
か、あるいは従来公知の方法である硫酸ナトリウム沈澱
法、硫酸アンモニウム沈澱法、セファデックスゲルによ
るゲル濾過法、イオン交換セルロースクロマトグラフィ
法、電気泳動法等（右田俊介偏「免疫化学」中山書店ｐ
ｐ７４ないし８８参照）で精製して用いることができる
。あるいは、抗原で感染した哺乳動物など（例えばマウ
ス）の脾臓細胞や骨髄腫細胞（ミエローマ）から雑種細
胞（ハイブリドーマ）を得てモノクローナル抗体を作成
し、これを特定成分と特異的に結合しうる物質として使
用すると特異性が向上し、好ましい。又、これらの抗体
はＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ各分画を用
いることができ、或いはこれらの抗体を酵素処理してＦ
ａｂ、Ｆａｂ’又はＦ（ａｂ’）２　といった活性抗体
フラグメントにして使用しても良い。さらに、これらの
抗体は単一で使用しても、複数の抗体を組み合わせて使
用しても良い。

【０００９】本発明の免疫測定方法による反応型式とし
ては、競合法、２抗体法、サンドイッチ法などが挙げら
れるが、特に限定はされない。又、他の生物活性物質（
例えば、ビオチン、アビジン）を利用した免疫測定方法
も適用できる。本発明においては、試料中の特定成分を
測定する反応型式として免疫反応を挙げているが、免疫
反応に準ずる生物活性を示す物質の特異反応（本明細書
では、この特異反応も免疫反応に包含）を利用すること
も可能である。この特異的に結合する物質の組み合わせ
としては、次のようなものが挙げられる。

【００１０】酵素と基質（生成物）酵素と阻害剤酵素と補欠分子族酵素と補酵素酵素とアロステリックエフェクター抗体と抗原抗体とプロテインＡレクチンと多糖類レクチンと糖タンパク質核酸と相補性の塩基配列核酸とヒストン核酸と核酸核酸とポリメラーゼホルモンと受容体ピオチンとアビジン（ストレプトアビジン）ビオチシン
とアビジン（ストレプトアビジン）デスチオビオチンと
アビジン（ストレプトアビジン）オキシビオチンとアビ
ジン（ストレプトアビジン）本発明で使用される抗原は
特異抗体と反応するものであり、ハプテン及びその誘導
体を含有する。

【００１１】抗体（又は抗原）は不溶化担体に固定化さ
れる。不溶化担体としては粒状体、例えば大きさが２ｍ
ｍ以下の粒状体が好ましい。不溶化担体（微粒子）の材
料としては、アガロース、セルロース、架橋デキストラ
ン、ポリアクリルアミド、セルロース、微結晶セルロー
ス、架橋アガロース、架橋ポリアクリルアミド、ガラス
、シリカゲル、ケイ藻土、二酸化チタン、硫酸バリウム
、酸化亜鉛、酸化鉛、ケイ砂、ポリスチレン等の各種の
合成樹脂のほか、多孔質な素材、さらには磁性微粒子が
利用できる。好ましくはアガロース、架橋アガロース、
架橋デキストラン、ポリアクリルアミド、架橋ポリアク
リルアミド、ガラス、シリカゲル、ポリスチレン、セル
ロース、微結晶セルロース等であり、更に好ましくはポ
リアクリルアミド、架橋ポリアクリルアミド、ポリスチ
レン、微結晶セルロース等である。これらの不溶化担体
は数種を混合して用いても良い。抗体又は抗原は、これ
ら不溶化担体に、当業者で公知の方法で化学的及び／又
は物理的に直接、あるいは間接的に結合させることがで
きる。結合法については１９７６年、講談社発行、千畑
一郎ほか２名編「実験と応用　　アフィニティクロマト
グラフィー」（第１刷）、１９７５年、講談社発行、山
崎　　誠ほか２名編「アフィニティクロマトグラフィー
」（第１版）を参考にできる。結合反応後、標識抗体（
又は抗原）の非特異反応を排除する目的で、測定すべき
特異的反応に関与しない蛋白質を担持させることができ
る。それらの代表的な例としては、哺乳動物及び鳥類の
正常血清蛋白質、アルブミン、スキムミルク、乳酸醗酵
物、コラーゲン及びそれらの分解物質等が挙げられる。尚、非特異吸着抑制蛋白質は、不溶化担体に担持させる
だけでなく、免疫反応時に、その一定量を免疫反応溶液
中に添加することにより、一層非特異吸着の抑制効果が
上がる。

【００１２】そして、上記したような固定化抗体（又は
抗原）、酵素標識抗体（又は抗原）及び試料中の抗原（
又は抗体）による免疫反応が容器中で行われた後、この
反応溶液にタバコのフィルターのような毛細管現象を発
揮できる吸水性素材が浸けられると、免疫反応溶液中の
遊離の酵素標識抗体（又は抗原）が吸水性素材側に移行
するようになる。尚、吸水性の素材としては如何なるも
のでも良い。

【００１３】この吸水性の素材には分析素子が接合され
ている。尚、図１に示す如く、吸水性素材１と分析素子
２とが予め一体型になったものを免疫反応後の容器３中
に落とし、吸水性素材１を反応溶液４に浸け、毛細管現
象により遊離の酵素標識抗体（又は抗原）が吸水性素材
１側に移行し、さらに分析素子２側に移行した所定時間
後に分析素子２を引き上げると、吸水性素材１は分析素
子２から剥離し、分析素子２だけが引き上げられるよう
なものであったり、図２に示す如く、吸水性素材１を免
疫反応後の反応溶液４に浸け、続いて分析素子２を吸水
性素材１の上に置き、吸水性素材１の毛細管現象により
遊離の酵素標識抗体（又は抗原）が吸水性素材１側に、
さらに分析素子２側に移行した所定時間後に分析素子２
を引き上げられるようにしたものであれば良い。

【００１４】本発明に用いる分析素子は、少なくとも一
層以上の多孔質層を持つことが好ましい。多孔質層の素
材は特に限定されないが、好ましい例としてはサイズ１
ないし３５０μｍの粒状体あるいは４０ないし４００メ
ッシュの繊維から一つ以上選ばれた素材により構成され
る構造体が挙げられる。該粒状体の材料としては、ケイ
藻土、二酸化チタン、硫酸バリウム、酸化亜鉛、酸化鉛
、微結晶セルロース、ケイ砂、ガラス、シリカゲル、架
橋デキストリン、架橋ポリアクリルアミド、アガロース
、架橋アガロース、ポリスチレン等の各種の合成樹脂の
ほか、ポリ（スチレン−グリシジルメタクリレート）、
ポリ（スチレン−メチルアクリレート−グリシジルメタ
クリレート）のような反応性基を持つ化合物から成る自
己結合型粒子が挙げられる。

【００１５】又、多孔質層に用いる繊維としては、パル
プ、粉末濾紙、綿、麻、絹、羊毛、キチン、キトサン、
セルロースエステル、ビスコースレーヨン、銅アンモニ
アレーヨン、ポリアミド（６−ナイロン、６，６−ナイ
ロン、６，１０−ナイロン等）、ポリエステル（ポリエ
チレンテレフタレート等）、ポリオレフィン（ポリプロ
ピレン、ビニロン等）、ガラス繊維、石綿などの植物性
、動物性、合成、半合成、再生繊維を用いることができ
、あるいはこれらを混合して用いても良い。あるいは別
の態様としては吸水性の洋紙、和紙、濾紙、ブラッシュ
ポリマー、あるいはガラス繊維、鉱物性繊維（石綿など
）、植物性繊維（木綿、麻、パルプ等）、動物性繊維（
羊毛、絹など）、合成繊維（各種ナイロン、ビニロン、
ポリエチレンテレフタレート、ポリプロピレン等）、再
生繊維（レーヨン、セルロースエステル等）などを単独
あるいは混合して製造した織物、不織布、合成紙などを
該多孔質層に用いることもできる。

【００１６】このような粒状体、繊維、あるいは粒状体
と繊維の混合物を塗布及び／又は製膜することにより、
自由に接触し得る相互連絡空隙孔を有する多孔性構造が
存在する多孔質層を形成する。自己結合性を有しない粒
子は適当な接着剤を用いて粒子同志が点接着する形で製
膜することができ、例えば特開昭４９−５３８８８号公
報、特開昭５５−９０８５９号公報、特開昭５７−６７
８６０号公報に記載の方法を適用することができる。自
己結合性を有する有機ポリマー粒子は特開昭５７−１０
１７６０号公報、特開昭５７−１０１７６１号公報、特
開昭５８−７０１６３号公報に記載の方法により同様に
製膜できる。繊維又は繊維及び粒子の混合物については
特開昭５７−１２５８４７号公報、特開昭５７−１９７
４６６号公報に記載された繊維分散液を塗布することに
より多孔質層を形成できる。又、特開昭６０−１７３４
７１号公報で行われている方法のようにゼラチンやポリ
ビニルピロリドンのような水溶性バインダーを使用した
繊維分散液を塗布することも可能である。又、このとき
のバインダーは水溶性に限らず、疏水性のバインダーの
使用も可能である。このような分散液を製造する為には
、多くの方法を単独又は組み合わせて用いることが可能
である。例えば、有用な方法の一つとして、界面活性剤
を液体キャリヤーへ添加し、粒状体及び／又は繊維の分
散液中に分布及び安定化を促進することができる。

【００１７】使用可能な代表的な界面活性剤の例として
は、トライトンＸ−１００（ロームアンドハース社製、
オクチルフェノキシポリエトキシエタノール）、サーフ
ァクタント１０Ｇ（オリーン社製、ノニルフェノキシポ
リグリシドール）等の非イオン性界面活性剤がある。こ
れらの界面活性剤は広範に選択された量を用いることが
可能であるが、粒状体及び／又は繊維の重量に対して０
．００５ないし１０重量％、好ましくは０．１５ないし
６重量％用いることができる。更に、別の方法として、
該粒子単位と液体キャリヤーの音波処理、物理的混合、
及び物理的攪拌処理、ｐＨ調整がある。これらは前記の
方法と組み合わせることにより、更に有用である。

【００１８】乾式分析素子の形態は分析を行いうるもの
であればよく、特に制限されるものではないが、製造上
及び測定操作上、フィルム状あるいはシート状であるこ
とが好ましい。乾式分析素子は一層から成っていても、
多層から成っていてもよい。例えば、酵素基質を内蔵し
た多孔質層のみからなるものとか、吸水層上に多孔質層
（基質が少なくともどちらかの層に内蔵）が設けられて
なるものとか、吸水層上に複数の多孔質層（基質が少な
くとも何れかの層に内蔵）が設けられてなるものとかが
考えられ、必要に応じて、それらは光透過性支持体上に
設けられたり、光反射性支持体上に設けられたり、光透
過性支持体上に設けられ、その上に光反射性層が設けら
れたりする。

【００１９】尚、吸水層の素材としては、例えばゼラチ
ン、フタル化ゼラチン等のゼラチン誘導体、ポリビニル
アルコール、ポリビニルピロリドン、ポリビニルイミダ
ゾール、ポリアクリルアミド、ポリアクリル酸ナトリウ
ム等の合成高分子、ヒドロキシエチルセルロース、カル
ボキシメチルセルロースナトリウム塩などのセルロース
誘導体の多糖類などが挙げられる。好ましくは、ゼラチ
ン、フタル化ゼラチン等のゼラチン誘導体である。

【００２０】光透過性支持体の素材としては、例えば酢
酸セルロース、ポリエチレンテレフタレート、ポリカー
ボネート及びホリビニル化合物（例えばポリスチレン）
のような透明高分子化合物あるいはガラスのような透明
無機化合物が挙げられる。光反射性支持体の素材として
は、例えばセラミックス、金属、あるいは樹脂被覆され
た紙などが挙げられ、必要に応じてこれらの素材中には
ＴｉＯ２　、ＢａＳＯ４　、マイカなどの白色顔料など
を含有又は塗布させたものでも良い。

【００２１】そして、例えば光透過性支持体上に基質を
内蔵した多孔質層が設けられてなる乾式分析素子が用い
られる場合には、免疫反応溶液中に浸けられた吸水性素
材に対して乾式分析素子の多孔質層側が接合され、吸水
性素材を介して遊離の酵素標識抗体（又は抗原）が乾式
分析素子の多孔質層に移行することから、これによる発
色信号の測定が両側から行われる。又、光反射性支持体
上に基質を内蔵した多孔質層が設けられてなる乾式分析
素子が用いられる場合には、免疫反応溶液中に浸けられ
た吸水性素材に対して乾式分析素子の多孔質層側が接合
され、吸水性素材を介して遊離の酵素標識抗体（又は抗
原）が乾式分析素子の多孔質層に移行することから、信
号の測定は多孔質層側から行われる。尚、光透過性支持
体上に基質を内蔵した多孔質層が設けられ、その上に光
反射性層が設けられてなる乾式分析素子が用いられる場
合には、吸水性素材は光反射性層側に接合がなされ、信
号の測定は光透過性支持体側から行われる。

【００２２】標識に起因した信号は、紫外線、可視光、
近赤外光などを利用した吸光度法（比色法）　などで検
出することができ、測定法としては信号の経時的変化を
測定するレート測定法または一定時間後の信号を測定す
るエンドポイント測定法で測定することができる。乾式
分析素子は、展開層を有するものであっても良い。展開
層の素材としては、多孔質層と同様なものを塗布、製膜
、貼付しても良い。又、展開層内に基質等を内蔵させ、
反応層としての役目を持たせても良い。乾式分析素子に
は、他の添加剤、例えば緩衝剤、保恒剤、界面活性剤、
媒染剤等を目的に応じて添加することができる。緩衝剤
は、特異的結合反応、酵素反応、発色反応等に適したｐ
Ｈとする為に含有される。用いることができる緩衝剤と
しては日本化学会編「化学便覧基礎編」（東京、丸善株
式会社　　１９６６）ｐｐ１３１２ないし１３２０、Ｎ
．Ｅ．Ｇｏｏｄ等；　Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　　Ｖ
ｏｌ　　５、ｐ４６７（１９６６）、今村、斎藤；　化
学の領域、Ｖｏｌ３０（２）、ｐ７９（１９７６）、Ｗ
．Ｊ．Ｆｅｒｇｕｓｏｎ等　　Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅ
ｍ．Ｖｏｌ　　１０４、ｐ３００（１９８０）等の文献
に記載されているものを挙げることができる。具体的な
例としては、ホウ酸塩、クエン酸塩、燐酸塩、炭酸塩、
トリスバルビツール、グリシン、グッド緩衝剤などが挙
げられる。これらの緩衝剤は必要に応じて単独で層を形
成させてもよい。保恒剤は基質発色試薬の保存安定化の
為に含有され、酸化防止剤などがある。その物質として
は、日本生化学会編「生化学実験口座１、蛋白質の化学
１」（東京化学同人株式会社　　１９７６）　ｐｐ６６
，６７、実験と応用「アフィニティクロマトグラフィ」
ｐｐ１６ないし１０４、特開昭６０−１４９９２７号公
報などに記載されているものが挙げられる。具体的例と
しては、ゼラチン、ゼラチン分解物、アルブミン、シク
ロデキストリン類、非還元糖類（シュクロース、トレハ
ロース）、ポリエチレングリコール、アミノ酸、各種イ
オン、アジ化ソーダ等が挙げられる。界面活性剤として
は、前述のものが挙げられる。その他の層中に含有され
る試薬としては、溶解助剤、ブロッカー試薬などがある
。これらの添加剤は必要に応じて適当量添加する。媒染
剤は、酵素活性測定の為の検出物質を測光部側に集中的
に集めたり、検出物質が色素の場合吸光度係数を高めた
り、波長をシフトさせる物質であり、検出物質と強い相
互作用を示す。カチオン性ポリマー、アニオン性ポリマ
ー及びこれらのポリマーのラテックスが用いられる。乾
式分析素子は、さらに生体試料が血液（全血）の場合に
有用な血球分離層、必要に応じて設ける接着層、保護層
、タイミング層といった補助層を設けることができる。これらの層は、その機能に応じて設けられるべき位置が
決定される。

【００２３】

【実施例】以下、本発明を実施例によって更に具体的に
説明するが、本発明はこれら実施例によって限定される
ものではない。１−（１）　　β−Ｄ−ガラクトシダーゼ標識ＣＲＰ抗
体の作成ＣＲＰ抗体（ウサギＩｇＧフラクション、タウンズ社製
）２０ｍｇを０．１Ｍのリン酸緩衝液（ｐ６．５）２．
０ｍｌに溶解し、これにＮ−（ε−マレイミドカプロイ
ルオキシ）スクシンイミド（同仁化学研究所製）が２．
５ｍｇ／ｍｌのジメチルホルムアミド溶液７７μｌを加
えて、３０℃で２０分間反応後、５ｍＭのＥＤＴＡを含
有する０．１Ｍのリン酸緩衝液（ｐＨ６．０）で平衡化
したセファデックスＧ−２５カラムで精製し、マレイミ
ド化したＣＲＰ抗体を得た。

【００２４】次に、β−Ｄ−ガラクトシダーゼ（東洋紡
社製）が１０．５ｍｇ／ｍｌの０．１Ｍリン酸緩衝液１
．８ｍｌに、前記マレイミド化したＣＲＰ抗体を１３．
６ｍｇ含む溶液３．２ｍｌを加えて、４℃で４５時間反
応後、０．１Ｍの２−メルカプトエチルアミン１７５μ
ｌを加えて３０℃で２０分間反応させ、０．１５Ｍの塩
化ナトリウムを含有する０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７
．４）で平衡化したスーパーローズ６プレップグレード
（ファルマシア社製）カラムで分離、精製し、β−Ｄ−
ガラクトシダーゼ標識ＣＲＰ抗体を得た。

【００２５】１−（２）　　ＣＲＰ抗体固定化オイパー
ギットＣの合成オイパーギットＣ（ロームファーマ社製）３ｇを０．１
５Ｍの塩化ナトリウムを含有する０．１Ｍリン酸緩衝液
（ｐＨ８．０）４０ｍｌ中に分散し、これにＣＲＰ抗体
（ウサギＩｇＧフラクション、タウンズ社製）１３６ｍ
ｇを入れ、４℃で２０時間攪拌し反応させる。反応後、
濾取し、０．１Ｍ酢酸緩衝液（ｐＨ４．０）と０．１Ｍ
の炭酸緩衝液（ｐＨ８．０）を交互に用い、充分洗浄し
た。

【００２６】次いで、水洗した後、経口３８μｍのメッ
シュでふるいをかけた。オイパーギットＣの非特異的結
合部位をブロックする為、上記のふるいをかけたオイパ
ーギットＣを３％脱脂乳添加の０．１Ｍのビストリス緩
衝液（ｐＨ７．２）５０ｍｌ中で４℃、２０時間攪拌し
た。次いで水洗し、ＣＲＰ抗体固定化オイパーギットＣ
を得た。

【００２７】１−（３）　　乾式分析素子の作成厚さ１
８０μｍの透明な下引き済ポリエチレンテレフタレート
フィルムの上に、下記の組成の塗布液（１）を塗布し、
乾燥させ、ゼラチン層を作成させた。　　　　　　塗布液−（１）　　　　脱イオン化ゼラチン　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　６．０ｇ　　　　トライ
トンＸ−１００　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　０．１５ｇ　　　　１，２−ビス（ビニル
スルホニル）エタン　　　　　　０．０１ｇ　　　　純
水　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　５４．０ｇ次に、塗布液
−（２）を前記ゼラチン層の上に塗布し、乾燥した。

【００２８】　　　　　　塗布液−（２）　　　　粉末ろ紙Ｃ（東洋濾紙社製）　　　　　　　　
　　　　　　　　２１．６ｇ　　　　ピロリドン−酢酸
ビニル（２対８）共重合体　　１１．０ｇ　　　　クロ
ロフェニルレッドβ−Ｄ−ガラクトピラノシド（ベーリ
ンガー社製）　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　３６５ｍｇ　　　　ｎ−ブタノール　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　４９．４
ｇこれを１．５ｃｍ×１．５ｃｍの大きさに裁断し、乾
式分析素子とし、この乾式分析素子の上に図１に示す如
く円柱形状（径５ｍｍ、高さ１０ｍｍ）のパルプ体を接
着した。

【００２９】１−（４）　　ＣＲＰの測定１ｍＭのＭｇ
Ｃｌ２　及び３％のＢＳＡを含む０．５Ｍビストリス緩
衝液１９０ｍｌに抗ＣＲＰ固定化オイパーギットＣ１５
ｍｇ、β−Ｄ−ガラクトシダーゼ標識ＣＲＰ抗体（２０
μｇ／ｍｌ）２５μｌ及びＣＲＰ溶液（０．３、１０、
３０、１００、３００μｇ／ｍｌ）７μｌを添加混合し
、室温下で１２分間免疫反応させる。反応後、乾式分析
素子の円柱形状のパルプ体を反応液中に浸け、５秒後に
乾式分析素子を持ち上げ、これを３７℃でインキュベー
トしながら５４６ｎｍの反射濃度を測定した。３分３０
秒ないし７分の反射濃度差（△Ｄｒ）を用いて検量線を
作成した結果を図３に示す。

【００３０】これによればＣＲＰが正確に測定されるこ
とが判り、又、測定は反応液中に吸水性素材及び分析素
子を落とすだけの手軽な作業で行える。すなわち、バッ
クグラウンドノイズは小さく、ＣＲＰが正確に測定でき
るものであり、かつ、Ｂ／Ｆ分離の為の特別な操作や液
の移し換えの操作をせずとも測定が行える。

【図面の簡単な説明】

【図１】本発明の免疫学的測定法を示す概略図である。

【図２】本発明の免疫学的測定法を示す概略図である。

【図３】検量線を示すグラフである。

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】　　容器中で免疫反応を行わせた後、この
容器中の反応液に毛細管現象を発揮できる吸水性素材を
浸け、この吸水性素材を介して標識体を吸水性素材に接
合された分析素子に移行させ、標識体を分析素子で測定
することにより試料中の特定成分を分析することを特徴
とする免疫学的測定法。
【請求項２】　　固定化担体に固定化された固定化抗体
（又は抗原）、酵素標識抗体（又は抗原）及び試料中の
抗原（又は抗体）による免疫反応を容器中で行わせた後
、分析素子と接合された吸水性素材を反応液に浸け、吸
水性素材の毛細管現象により遊離の酵素標識抗体（又は
抗原）を分析素子に移行させ、その後前記分析素子を取
り、標識酵素を分析素子で測定することにより試料中の
抗原（又は抗体）を分析することを特徴とする免疫学的
測定法。