JPH04346801A - リンパ球サブクラス分離剤、分離装置および分離方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は免疫学的研究や臨床検査
、免疫疾患治療において、Ｂリンパ球を除去したり、Ｔ
リンパ球を純化して回収、あるいは移入する為に使用さ
れるリンパ球サブクラス分離剤と、これを用いた分離装
置、分離方法に関する。

【０００２】

【従来の技術】血球の由来細胞である多能性幹細胞は、
リンパ球、単球（マクロファージ）、顆粒球（好中球、
好酸球、好塩基球）、血小板、赤血球の細胞群へと分化
していく。

【０００３】免疫監視機構で重要な役割を果たすリンパ
球は、大別して、胸腺の影響を受けて成熟するＴリンパ
球と、ファブリキウス嚢、あるいは哺乳類ではこれに相
当する器官（肝、骨髄などの造血巣）の影響を受けて成
熟するＢリンパ球とに分別される。Ｔリンパ球は細胞性
免疫を、Ｂリンパ球は液性免疫を担っている。

【０００４】Ｔリンパ球は機能的な面からいくつかのサ
ブセットに分けることができる。例えばヘルパーＴ細胞
や遅廷型過敏症反応に関与するＴ細胞、サプレッサーＴ
細胞や細胞障害性キラーＴ細胞などである。Ｂリンパ球
は形質細胞に分化し、Ｔリンパ球の指令に基づいて抗体
産生を行なう。

【０００５】近年、このように重要な機能を有するリン
パ球を分離、分画し、免疫科学的基礎研究あるいは各種
の診断や治療に利用する試みがなされているが、それぞ
れ以下のような欠点を有するものであった。

【０００６】すなわち、［１］細胞の大きさの差を利用
した速度沈降報による方法、［２］細胞の比重差を利用
した比重遠心法による方法、および［３］細胞表面電荷
量の差を利用した細胞電気泳動法による方法は、Ｔリン
パ球とＢリンパ球との間に比重、密度等の物理的諸物性
に際だった差がないため、分離回収された細胞の収率あ
るいは純度に高い精度が要求できないものであった。特
に、［２］の比重遠心法においては、媒体の価格が高価
になってしまうか、あるいは安い場合でも操作に熟練を
要する、また、［３］の細胞電気泳動法においては、細
胞の成熟度によって移動度が異なる、細胞機能に与える
電場の影響が解明されていない、大量処理が困難である
といった欠点も有するものであった。

【０００７】また、［４］細胞の特異的結合能を利用し
たアフィニティークロマトグラフィーによる方法、［５
］細胞のロゼット形成を指標とするロゼット沈降法によ
る方法、［６］細胞膜表面の特異抗原、免疫グロブリン
と標識抗体との反応を利用したフルオレセンスアクチベ
イテッドセルソーター（Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ−Ａ
ｃｔｉｖａｔｅｄ　　Ｃｅｌｌ　　Ｓｏｒｔｉｎｇ、Ｆ
ＡＣＳ）法による方法は、いずれも処理細胞が生物学的
に特異性の高い強固な結合や刺激を受けるため、インタ
クトな状態で目的細胞を回収するのが難しく、かつ大量
処理に適さないものであり、さらに［４］のアフィニテ
ィークロマトグラフィーは、高価な抗体を必要とし、ま
た［６］のＦＡＣＳ法は、細胞を標識する等の前処理が
煩雑であり、高価な抗体と装置を必要とするといった欠
点を有するものであった。

【０００８】また、支持体や固定層を使用しない多段分
離の手段として、［７］フィールドフローフラクショネ
ーション（Ｆｉｅｌｄ−Ｆｌｏｗ　　Ｆｒａｃｔｉｏｎ
ａｔｉｏｎ、ＦＦＦ）法（例えば、矢田純一、藤原道夫
編著、新リンパ球機能検索法、１９７８年、中外医学社
などを参照）が検討されているが、回転軸を介して溶離
液を連続的に流入、流出する装置的な困難さと共に、ロ
ーター状分離セルと流路の材質が細胞の接着を招くため
に、細胞の相互分離を実用化するところまでには至って
いない。

【０００９】これに対し、［８］細胞の非特異的付着活
性の差を利用した、ナイロンウール、ガラスウールなど
を充填したカラムを用いる方法は、処理細胞の機能を損
傷するおそれが少なく、また価格、操作性、および大量
処理性の面でも適当なものであるが、目的細胞に対する
選択性および回収率の面では不十分なものであり、さら
に前記したカラム法などにおいては、分離操作を行う場
合の経験的技術的習熟が必須であるという大きな課題も
存在しているものであった。

【００１０】このような非特異的付着特性を利用する分
離剤及び分離方法としては、疎水性材料（特公昭５９−
１７３８７号、同５９−３６９６３号、同６２−４５２
０６号、特開昭５７−２０４４５４号）、酸性官能基を
有する材料（特公昭５９−３６９６１号、特開昭５６−
１４０８８６号、同５６−１５２７４０号）、塩基性官
能基を含有する重合体（特開昭５９−２１６５８４号、
同６０−１０５４９０号）、ヒドロキシアパタイト繊維
（特開昭６３−２８４号）、特定の高分子体（特開昭６
１−２２１１２３号、同６４−３４２８５号）を用いる
ことも提唱されているが、これらのものにおいても目的
細胞に対する選択性および回収率の面では末だ十分なも
のではなかった。

【００１１】

【発明が解決しようとする課題】本発明は、このような
従来の技術において、リンパ球を含む被検液の細胞分離
において、分離回収された細胞の収率あるいは純度に高
い精度が要求できない点や操作に習熟を要する点、細胞
に刺激や損傷を与え易い点などの問題点を鑑みてなされ
たものである。従って、本発明は、免疫担当細胞のリン
パ球サブクラスを効率よく分離でき、かつ細胞機能を損
なうことなく回収することができるリンパ球サブクラス
分離剤と、これを用いた分離装置、分離方法を提供する
ことを目的とするものである。

【００１２】本発明は、さらに、操作が簡便でかつ特殊
な装置を必要とせず、効率よくリンパ球サブクラス細胞
を分離できるリンパ球サブクラス分離剤と、これを用い
た分離装置、分離方法を提供することを目的とするもの
である。

【００１３】

【課題を解決するための手段】このような目的は、下記
１〜７の本発明により達成される。 （１）オキシラン─アクリルビーズにオキシアルキルア
ミンを結合してなることを特徴とするリンパ球サブクラ
ス分離剤。 （２）前記オキシラン−アクリルビーズは、オキシラン
基を有する不飽和のラジカル重合性モノマーと架橋性モ
ノマーとの混合物から得られた重合物である１項に記載
のリンパ球サブクラス分離剤。 （３）前記オキシラン−アクリルビーズのオキシラン基
含有量は、乾燥重量１ｇあたり０．１〜１０ｍｍｏｌで
ある１または２項に記載のリンパ球サブクラス分離剤。 （４）前記ラジカル重合性モノマーが５〜６０，重量％
、前記架橋性モノマーが５重量％以上であることを特徴
とする２または３項に記載のリンパ球サブクラス分離剤
。 （５）前記オキシアルキルアミンは、モノオキシモノア
ミンの第一アルカノールアミン群から選択されたもので
ある１〜４項のいずれかに記載のリンパ球サブクラス分
離剤。 （６）１〜５項のいずれかに記載のリンパ球サブクラス
分離剤を充填した容器からなることを特徴とするリンパ
球サブクラス分離装置。 （７）１〜５項のいずれかに記載のリンパ球サブクラス
分離剤にリンパ球を含む被検液を接触させ、被検液中の
Ｂリンパ球及び非リンパ球系白血球を前記リンパ球サブ
クラス分離剤に選択的に吸着させることにより、被検液
中のＴリンパ球を純化することを特徴とするリンパ球サ
ブクラス分離方法。

【００１４】本発明に係るリンパ球サブクラス分離剤は
、オキシラン−アクリルビーズにオキシアルキルアミン
を結合してなることを特徴とし、Ｂリンパ球および非リ
ンパ球系白血球を選択的に吸着するものであるから、血
液等の体液、あるいは組織中のリンパ球サブクラス細胞
、とくにＴリンパ球を収率よく分離できるものである。

【００１５】リンパ球サブクラス細胞は、前述したよう
に、免疫担当細胞として重要な役割を果たしている。従
って、上述のごとく、Ｂリンパ球および非リンパ球系白
血球を選択的に吸着除去し、Ｔリンパ球を回収できれば
、免疫学的研究や臨床検査、免疫疾患治療に役立つだけ
でなく、癌疾患の養子免疫療法にも対応可能と考えられ
る。

【００１６】本発明のリンパ球サブクラス分離剤は、オ
キシラン−アクリルビーズを不溶性担体とし、そのグリ
シジル基にオキシアルキルアミンを結合したものである
。そこで、不溶性担体、オキシランアルキルアミンおよ
びこれらの結合方法についてそれぞれ説明する。

【００１７】不溶性担体として用いるオキシラン−アク
リルビーズは、メタクリル酸グリシジルまたはアリルグ
リシジルエーテル、メタクリルアミド、メチレン−ビス
−メタクリルアミドの共重合により得られる。その製法
は、レーム・ファルマ社により開示されている（英国特
許第１３２９０６２号、ドイツ国特許公告第２２３７３
１６号、ドイツ国特許第２２６３２８９号明細書参照）
。これらのオキシラン−アクリルビーズのうち、本発明
における不溶性担体として特に好適に用いられるのは、
架橋性モノマーの比率が５重量％以上、オキシラン基を
有するラジカル重合性モノマーの比率が５〜６０重量％
のモノマー混合物から得られたものである。このように
特に好ましいオキシラン−アクリルビーズの具体例とし
ては、レーム・ファルマ社の商品名オイパーギットＣが
あげられる。

【００１８】上記オキシラン−アクリルビーズの形状は
、細胞の損傷を与えず、また砕けや欠けが生じがたいよ
うに球形とされることが好ましい。平均粒径は、被検液
の流量や流通圧力を考慮し、０．０５〜５ｍｍの範囲、
好ましくは０．１〜０．２ｍｍの範囲のものが用いられ
る。

【００１９】オキシラン−アクリルビーズは、その表面
にオキシラン基を有している。後述するように、このオ
キシラン基がオキシアルキルアミンと反応し、共有結合
するものである。

【００２０】オキシラン−アクリルビーズにおけるオキ
シラン基の含有量は、チオサルフェート法（Ｒ．Ａｘｅ
ｎ，ａｓ　　ｑｕｏｔｅｄ　　ｂｙ　　Ｌ．Ｓｕｎｄｂ
ｅｒｇ　　ａｎｄ　　Ｊ．Ｐａｒａｔｈ　　ｉｎ　　Ｃ
ｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ，９０，８９（１９７４）
）で測定した場合に、０．１〜１０ｍｍｏｌ／ｇ−ｄｒ
ｙの範囲が好ましく、より好ましくは０．６〜１．０ｍ
ｍｏｌ／ｇ−ｄｒｙである。

【００２１】次に、オキシラン−アクリルビーズに結合
されるオキシアルキルアミンについて説明する。

【００２２】オキシアルキルアミンは、分子中にヒドロ
キシル基とアミノ基を有する脂肪族化合物であり、アル
カノールアミンあるいはアミノアルコールとも称される
。

【００２３】オキシアルキルアミンの中でも、下記の分
子式（Ｉ）で示されるモノオキシモノアミンの第１アル
カノールアミン群に属する化合物が、単純な構造でオキ
シアルキルアミン分子間の相互作用や非特異的な吸着を
惹起しないので特に好適である。 　　　　ＨＯ（ＣＨ２）ｎＮＨ２　　ｎは整数、好まし
くはｎ＝１〜１０　　（式Ｉ）上記のオキシアルキルア
ミンは、前記オキシラン−アクリルビーズの表面に存在
するオキシラン基に結合される。この結合の形成には、
オキシラン基の開環を伴い、オキシラン基を形成してい
た酸素原子はヒドロキシル基になって結合する。この結
合に関与するオキシアルキルアミンの官能基はアミノ基
であるが、一部ヒドロキシル基が関与する場合もある。

【００２４】次に、上記のようにして得られた本発明の
リンパ球サブクラス分離剤について説明する。

【００２５】本発明のリンパ球サブクラス分離剤の１つ
の特徴は、不溶性担体として用いたオキシラン−アクリ
ルビーズとオキシアルキルアミンが上記のように共有結
合を介して強固に結合されている点にある。有機化合物
を不溶性担体表面に固定する方法としては、共有結合以
外にも、イオン結合、物理的吸着、疎水結合、生化学的
特異結合等の担体結合法、あるいは架橋法、包括法、複
合法などが一般に行われているが、共有結合以外の方法
で固定した場合には被検液中でオキシアルキルアミンが
脱離しやすく安定性に欠ける。

【００２６】本発明のリンパ球サブクラス分離剤の最も
大きな特徴は、後述する実施例の結果に示されるように
、Ｂリンパ球および非リンパ球系白血球に対して、高効
率、かつ高い選択性をもった吸着能力を発揮する点にあ
る。この特徴は、オキシアルキルアミンの寄与のみなら
ず、担体として用いたオキシラン−アクリルビーズによ
る寄与との組み合わせによって初めて得られるものであ
る。

【００２７】一般に、疎水性化合物だけで構成された分
離剤、即ち疎水結合性の強い分離剤には脂質が吸着され
やすく、そのために細胞膜脂質が強固に吸着された細胞
は損傷を受ける。一方、静電結合性の強い荷電基を多く
有する化合物で構成された分離剤では、塩基性あるいは
酸性アミノ酸を多く含む蛋白質が吸着されやすく、その
ために細胞膜蛋白質が強固に吸着された細胞は損傷を受
ける。従って、被検液中のリンパ球サブクラスを分離す
るには、種々の相互作用が適度に組み合わされた分離剤
が好適となる。この観点から、本発明のリンパ球サブク
ラス分離剤を検討すれば以下の通りである。

【００２８】まず、オキシラン基の開環で形成されたヒ
ドロキシル基と、オキシアルキルアミンのヒドロキシル
基は親水性を示す。また、オキシラン基との結合で形成
されたイミノ基は水素結合性を有している。次に、アク
リルビーズは高分子炭素鎖の表面に疎水性を示すメチル
基と、水素結合性および静電結合性を示す酸アミド基を
有している。

【００２９】これらの要素によって、本発明の分離剤は
、Ｂリンパ球および非リンパ球系白血球の細胞膜表面物
質との間に、疎水性結合、静電結合、水素結合が適度に
組み合った相互作用を発揮し、優れたリンパ球分離能を
有するものと推測される。

【００３０】次に、本発明のリンパ球サブクラス分離装
置を図１を参照して説明する。

【００３１】図１は、本発明のリンパ球サブクラス分離
装置の好ましい一実施例の構造を示す図である。

【００３２】本発明のリンパ球サブクラス分離装置１は
、体液の導入口２および導出口３を有するカラム容器４
内に、上記のリンパ球サブクラス分離剤５を充填、保持
したものである。

【００３３】カラム容器４の材質としては、ガラス、ス
テンレス、ポリエチレン、ポリプロピレン、ポリカーボ
ネート、ポリスチレン、ポリメチルメタクリレート等を
使用できるが、オートクレーブ滅菌が可能で取り扱いや
すいポリプロピレンやポリカーボネートが特に好ましい
。また、体液の導入口２および導出口３と、分離剤５層
との間には、体液は通過するが分離剤は通過できない網
目フィルター６ａ，６ｂを備えることが好ましい。当該
フィルター６ａ，６ｂの材質としては、生理学的に不活
性であってある程度の強度を有するものならば特に限定
されないが、ポリエステル製、ポリアミド製のものが好
ましく使用される。

【００３４】すなわち、カラム容器４の導入口２から導
入された体液は、フィルター６ａ、６ｂで保持されたリ
ンパ球サブクラス分離剤層を通過して吸着処理が施され
、導出口３から導出されるものである。

【００３５】

【作用】本発明のリンパ球サブクラス分離装置を用いて
体外循環体液浄化療法を行うには、２通りの方法がある
。

【００３６】第１の方法は、体内から取り出した血液を
遠心分離してバッフィーコート（白血球層）を採取し、
このバッフィーコートを本発明のリンパ球サブクラス分
離装置で処理した後、バッフィーコート以外の成分とあ
わせて体内に返還する方法である。あるいは、体内から
取り出した血液を密度勾配遠心分離して単核球（ＰＢＭ
Ｃ：Ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ　Ｂｌｏｏｄ　Ｍｏｎｏｎｕ
ｃｌｅａｒ　Ｃｅｌｌｓ）を採取し、単核球を本発明の
リンパ球分離装置で処理した後、残りの成分とあわせて
体内に戻す方法である。

【００３７】第２の方法は、体内から取り出した血液を
上記装置内に直接通過させて処理する方法である。

【００３８】そこで、この第２の方法を図２を参照して
説明する。

【００３９】図２は、第２の方法に係る体外循環体液療
法に用いられる回路構成を示す図である。

【００４０】すなわち、血液は血液採取口７から回路内
に導入され、血液ポンプ８、および圧力ゲージ１０ａを
備えるチャンバー９ａを通って一定流速にて本発明のリ
ンパ球サブクラス分離装置１内の導入口２に導入され、
カラム容器４内に収容された本発明のリンパ球サブクラ
ス分離剤５と接触する。

【００４１】このようにしてリンパ球サブクラス分離装
置１で処理された血液は、カラム容器４の導出口３から
導出され、圧力ゲージ１０ｂを備えるチャンバー９ｂを
通って、恒温槽１１で加温された後、血液返還口１２よ
り患者の体内に戻される。

【００４２】なお、体液の循環方法としては、臨床上の
必要性および設備の状況等に応じ、連続的に行ってもよ
く、断続的（間欠的）に行ってもよい。

【００４３】本発明のリンパ球サブクラス分離装置は、
血液と接触する部位が、使用前において滅菌されている
ことが好ましい。滅菌方法としては、湿熱滅菌（オート
クレーブ滅菌）、ガス滅菌（例えば、エチレンオキサイ
ド滅菌）、または放射線滅菌等の滅菌法があげられる。 なお、本発明のリンパ球サブクラス分離装置は、湿熱滅
菌、ガス滅菌または放射線滅菌等の滅菌処理をしても性
能の低下はみられず、安定したリンパ球分離能を示す。

【００４４】以上、本発明のリンパ球サブクラス分離剤
および分離装置について説明したが、本発明はこれに限
定されるものではなく、例えばカラム容器のかわりに、
シリンジ外筒を用いてもよい等、その構成は種々変更可
能である。

【００４５】次に、実施例を示して、本発明をさらに詳
細に説明する。

【００４６】

【実施例】［実施例１］０．２Ｍ炭酸緩衝液（ｐＨ１０
）にモノエタノールアミン（分子式ＨＯＣＨ２ＣＨ２Ｎ
Ｈ２）を０．５Ｍの濃度で溶解した。この溶液中にオキ
シラン−アクリルビーズ（レーム・ファルマ社製：商品
名オイパーギットＣ、重合性モノマーの比率は２０重量
％、架橋性モノマーの比率は３０重量％、平均粒径は０
．１５ｍｍ、オキシラン基含有量は０．８ｍｍｏｌ／ｇ
−ｄｒｙ）を０．５５ｇ／ｍｌの割合で投入し、脱気し
た。これを８０℃の水浴中で３時間加温した後に、緩速
回転混合機（大洋科学工業社製：商品名ローテータＩＩ
）を使用して一晩撹拌した。その後、逆浸透水（ＲＯ水
）、０．２Ｍ炭酸緩衝液（ｐＨ１０）、０．１Ｍ酢酸緩
衝液（ｐＨ４）、０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．４）
で順次洗浄した。そしてさらに、高圧蒸気滅菌器を利用
して、０．１Ｍ酢酸緩衝液（ｐＨ４）、次に０．１Ｍリ
ン酸緩衝液（ｐＨ７．４）で加熱（１２０℃、２０ｍｉ
ｎ）後、ＲＯ水で十分に洗浄した。

【００４７】得られた分離剤をｐＨ７．２のリン酸緩衝
化塩溶液（ＰＢＳ）に懸濁させ、先端内部にポリエステ
ル不織布を入れた容量２．５ｍｌのディスポーザブルシ
リンジ（テルモ社製）へ１ｍｌ充填した。そして、充填
した分離剤の上部に、ポリエステル不織布を入れて分離
剤層を保持し、シリンジ先端に２５Ｇ針および細胞収容
容器を取り付けてリンパ球サブクラス分離装置を作製し
た。

【００４８】この分離装置を使用して、以下のリンパ球
サブクラス分離実験を行った。

【００４９】分離装置を構成するシリンジの上端開口よ
り、単核球分離管（ベクトン・ディッキンソン社製：商
品名リューコプレップ）を使用して得られたヒト末梢血
単核球懸濁液（ＰＢＭＣ）２００μｍ（白血球数２００
０×１０４個）を添加し、牛胎児血清（ＦＣＳ）を１０
％含むＲＰＭＩ１６４０培養液１００μｌで細胞を分離
剤層に沈めた後、室温で３０分間静置した。次に、２ｍ
ｌの１０％ＦＣＳ−ＲＰＭＩ１６４０で分離剤をリンス
し、流出してきた細胞を回収した。そして、この回収液
中の細胞数を多項目自動血液分離装置（東亜医用電子社
製：商品名Ｓｙｓｍｅｘ　　ＮＥ−６０００）で測定し
た後、フィコエリスリン（ＰＥ）標識抗Ｌｅｕ−１２抗
体（ベクトン・ディッキンソン社製）で染色し、フロー
サイトメーター（日本分光社製：商品名Ｃｙｔｏ　　Ａ
ｃｅ−１５０）によって、Ｂリンパ球、リンパ球の割合
をそれぞれ求めた。そして、分離剤と接触する前の懸濁
液中の細胞数、Ｂリンパ球、およびリンパ球の割合を同
様にして求め、これらを比較することにより各細胞の分
離剤への接着率を算出した。その結果を表１に示す。

【００５０】［実施例２］モノエタノールアミン溶液の
かわりに、６−アミノ−１−ヘキサノール（分子式ＨＯ
（ＣＨ２）６ＮＨ２）溶液を用い、それ以外は実施例１
と全く同様にして分離剤を調製した。そして実施例１と
同様にして各細胞の分離剤への接着率を測定した。その
結果を表１に示す。

【００５１】［比較例１］モノエタノールアミン溶液の
かわりに、アミノ酸の１種であるβ−アラニン（分子式
ＨＯＯＣＣＨ２ＣＨ２ＮＨ２）を用い、それ以外は実施
例１と全く同様にして分離剤を調製した。そして実施例
１と同様にして各細胞の分離剤への接着率を測定した。 その結果を表１に示す。

【００５２】［比較例２］１Ｎ塩酸とＲＯ水で十分に洗
浄した後に乾燥した０．１２ｇのナイロンウール（Ｂｉ
ｏｔｅｓｔ社製）を、実施例１で用いた分離剤のかわり
にディスポーザブルシリンジへ１ｍｌとなるように充填
する以外は実施例１と同様にして、分離装置を作製した
。そして実施例１と同様にして各細胞の分離剤への接着
率を測定した。その結果を表１に示す。

【００５３】

【表１】

【００５４】表１より、実施例１および２に係るリンパ
球サブクラス分離剤は、Ｅが高値でＦが低値であるので
、Ｂ細胞が選択的に吸着していることが確認された。 また、Ｄも高値であり、非リンパ球系白血球も選択的に
吸着していることが示された。これに対し、比較例１お
よび２に係るリンパ球サブクラス分離剤は、Ｅが実施例
１および２より低値であり、Ｆが実施例１および２より
高値であるので、Ｂ細胞の選択性に劣ることが確認され
た。

【００５５】

【発明の効果】以上、詳述したように、本発明のリンパ
球サブクラス分離剤は、オキシラン基を有するオキシラ
ン─アクリルビーズにオキシアルキルアミンを結合して
なることを特徴とするものであるから、リンパ球サブク
ラスを選択的かつ大量に効率よく簡便に分離することが
できる。また、好適なオキシアルキルアミンは、低分子
の合成有機化合物であるので、滅菌操作も容易かつ確実
に行うことができる。これらの特徴から、本発明のリン
パ球サブクラス分離剤は、免疫機能に関連したリンパ球
の機能解析等の基礎研究、さらには各種免疫疾患の診断
や治療に有効である。

【００５６】また、本発明のリンパ球サブクラス分離装
置は、上記のリンパ球サブクラス分離剤を収容してなる
ことを特徴とするものであるから、優れた特性を有する
リンパ球サブクラス分離剤と体液や細胞懸濁液との接触
をより効率よく行うことができ、例えば、免疫疾患の体
外循環療法に応用した場合、患者の血液から特定のリン
パ球またはリンパ球のサブクラスを短時間でかつ効率よ
く除去することが可能となり、より効率的な治療、ある
いは処理操作が期待できる。

【００５７】さらに、上記のごとく本発明のリンパ球サ
ブクラス分離装置を体外循環療法に適用した場合におい
て、特定のリンパ球を補足した分離剤に、サイトカイン
、細胞分化因子あるいは免疫調節剤を作用させながら細
胞培養した後、リンパ球が産生したリンホカインや抗体
を回収したり、リンパ球を吸着拮抗剤で離脱させて患者
の体内へ返還することも可能であり、より多彩な治療が
期待できるものである。

【００５８】本発明のリンパ球サブクラス分離方法は、
リンパ球サブクラス分離剤にリンパ球を含む被検液を接
触させ、被検液中のＢリンパ球及び非リンパ球系白血球
をリンパ球サブクラス分離剤に吸着させることにより、
被検液中Ｔリンパ球を純化することを特徴とするもので
あるから、免疫機能に関連した研究や各種免疫疾患の診
断や治療に有効である。

【００５９】さらに、本発明のリンパ球サブクラス分離
装置は、湿熱滅菌、ガス滅菌または放射線滅菌等の滅菌
処理をしても性能の低下はみられず、安定したリンパ球
分離能を示すために、正確な診断、安全な治療を行うこ
とが可能になる。

【図面の簡単な説明】

【図１】本発明のリンパ球サブクラス分離装置の１実施
例の構造を模式的に示す断面図である。

【図２】本発明のリンパ球サブクラス分離装置を組み入
れた体外循環療法回路の構成を示す図面である。

【符号の説明】

１　　リンパ球サブクラス分離装置 ２　　体液導入口 ３　　体液導出口 ４　　カラム容器 ５　　リンパ球サブクラス分離剤 ６　　フィルター ７　　血液採取口 ８　　血液ポンプ ９ａ、９ｂ　　　　チャンバー １０ａ、１０ｂ　　圧力ゲージ １１　　恒温槽 １２　　血液返還口

Claims (7)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】　　オキシラン─アクリルビーズにオキシ
   アルキルアミンを結合してなることを特徴とするリンパ
   球サブクラス分離剤。
2. 【請求項２】　　前記オキシラン−アクリルビーズは、
   オキシラン基を有する不飽和のラジカル重合性モノマー
   と架橋性モノマーとの混合物から得られた重合物である
   請求項１記載のリンパ球サブクラス分離剤。
3. 【請求項３】　　前記オキシラン−アクリルビーズのオ
   キシラン基含有量は、乾燥重量１ｇあたり０．１〜１０
   ｍｍｏｌである請求項１または２に記載のリンパ球サブ
   クラス分離剤。
4. 【請求項４】　　前記ラジカル重合性モノマーが５〜６
   ０重量％、前記架橋性モノマーが５重量％以上であるこ
   とを特徴とする請求項２又は３記載のリンパ球サブクラ
   ス分離剤。
5. 【請求項５】　　前記オキシアルキルアミンは、モノオ
   キシモノアミンの第一アルカノールアミン群から選択さ
   れたものである請求項１〜４のいずれかに記載のリンパ
   球サブクラス分離剤。
6. 【請求項６】　　請求項１〜５のいずれかに記載のリン
   パ球サブクラス分離剤を充填した容器からなることを特
   徴とするリンパ球サブクラス分離装置。
7. 【請求項７】　　請求項１〜５のいずれかに記載のリン
   パ球サブクラス分離剤にリンパ球を含む被検液を接触さ
   せ、被検液中のＢリンパ球及び非リンパ球系白血球を前
   記リンパ球サブクラス分離剤に選択的に吸着させること
   により、被検液中のＴリンパ球を純化することを特徴と
   するリンパ球サブクラス分離方法。