JPH04368378A - フサリウム種からの新規代謝産物アジスタチン類、その製造方法およびその使用 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明によれば薬理活性を有し、
そのために治療活性を有しそして対応する薬理学的有用
性のあるコレステロール生合成阻害剤として特に有利に
使用できる新規代謝産物アジスタチン類をフサリウム菌
株が生産しうるということが見出された。

【０００２】

【発明の構成】すなわち、本発明は １．式Ｉ

【化２】 〔式中、Ｒ１は水素またはヒドロキシルであり、Ｒ２は
ヒドロキシルまたはオキソ基であり、Ｒ３はメトキシま
たはヒドロキシルであるか、またはＲ１と一緒になって
エーテル橋を形成しそして Ｒ４は水素またはヒドロキシルであり、Ｒ５は水素であ
るかまたはＲ４と一緒になって１つの追加の結合を示し
そしてＲ６は水素であるか、またはＲ３と一緒になって
１つの追加の結合を示す〕で表される化合物の製造にお
いて、式Ｉの化合物が培養中に蓄積されるまで栄養培地
中でフサリウム種ＤＳＭ　５９８３を培養することから
なる上記の製造方法； ２．コレステロール生合成阻害剤としての式Ｉの化合物
の使用並びにその薬理学的利用；に関する。

【０００３】以下、本発明を詳細に、特にその好ましい
実施態様について記載する。本発明はさらに特許請求の
範囲に記載の内容によって決定される。

【０００４】本発明化合物は好ましくはフサリウム種（
Ｆｕｓａｒｉｕｍ　ｓｐ．　）ＤＳＭ　５９８３を用い
て製造される。この菌株はハワイの土壌試料から単離さ
れ、ブダペスト条約規定に従ってドイツ国微生物収集機
関〔Ｇｅｒｍａｎ　Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｍｉ
ｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｓ〕に前記番号で１９９０年６
月６日に寄託された。

【０００５】該菌株フサリウム種ＤＳＭ　５９８３は白
色の気中菌糸および白色の分生子を有する。それはフサ
リウムに特徴的である大分生子および小分生子並びに厚
膜胞子を形成する。

【０００６】炭素源および窒素源並びに慣用の無機塩を
含有する栄養溶液中において、フサリウム種好ましくは
ＤＳＭ　５９８３は式Ｉの化合物を生産する。菌株ＤＳ
Ｍ　５９８３の代わりに勿論それらが該化合物を合成す
る限りその突然変異体および変異体を用いることも可能
である。このような突然変異体は物理学的手法例えば紫
外線もしくはＸ線による照射または化学的突然変異原例
えばメタンスルホン酸エチル（ＥＭＳ）、２−ヒドロキ
シ−４−メトキシベンゾフェノン（ＭＯＢ）もしくはＮ
−メチル−Ｎ′−ニトロ−Ｎ−ニトロソグアニジン（Ｍ
ＮＮＧ）を使用するそれ自体知られた手法で製造されう
る。

【０００７】好気性発酵に適当な好ましい炭素源は同化
されうる炭水化物および糖アルコール例えばグルコース
、ラクトースまたはＤ−マンニトールおよび炭水化物含
有の自然産物例えば麦芽エキスである。窒素含有栄養と
して適当なのはアミノ酸、ペプチドおよびタンパク質並
びにそれらの分解生成物例えばペプトンもしくはトリプ
トン、さらにまたミートエキス、例えばトウモロコシ、
小麦、豆類、大豆またはワタ植物の粉砕種子、アルコー
ル製造の蒸留残留物、ミートミールまたは酵母エキス、
さらにアンモニウム塩および硝酸塩である。栄養溶液が
含有できる無機塩は例えばアルカリ金属またはアルカリ
土類金属、鉄、亜鉛、コバルトおよびマンガンの塩化物
、炭酸塩、硫酸塩またはりん酸塩である。

【０００８】式Ｉの化合物は、それぞれ完全栄養溶液の
重量を基準として約０．２〜５％好ましくは１〜４％の
麦芽エキスおよび０．０２〜０．５％好ましくは０．１
〜０．４％の酵母エキス並びに０．２〜５．０％好まし
くは０．５〜２％のグルコースおよび０．０１〜０．１
％好ましくは０．０４〜０．０６％の（ＮＨ４）２ＨＰ
Ｏ４を含有する栄養溶液中で特に容易に生成される。培
養は好気性条件下で、すなわち例えば液内条件で、シェ
ーカーフラスコまたは発酵槽中で振盪または撹拌しなが
らかつ必要により空気または酸素を通過させて遂行する
。培養は約１５〜３０℃好ましくは約２０〜３０℃特に
２３〜２８℃の温度で行うことができる。ｐＨ範囲は１
〜７、有利には２．５〜４．５であるべきである。一般
に、微生物はこれらの条件下で２４〜３００時間好まし
くは３６〜１４０時間培養される。

【０００９】培養は数段階で遂行するのが有利である。 すなわち１つ以上の前培養を最初に液体栄養培地中で遂
行し次に実際の生産培地の主要培養にこれらを例えば１
：１０の容量比で接種する。前培養は例えば、栄養溶液
に胞子形成しつつある菌糸体を接種し、それを約３６〜
１２０時間好ましくは４８〜７２時間生長させることに
よって得られる。この胞子形成しつつある菌糸体は例え
ば菌株を、固形または液体培地例えば酵母／麦芽アガー
または馬鈴薯／デキストロースアガー上で約３〜４０日
間好ましくは４〜１０日間生長させることによって得る
ことができる。

【００１０】発酵の進行は培養のｐＨまたは菌糸体の容
量でモニターされうるし、さらにまたクロマトグラフィ
ー法例えば薄層クロマトグラフィーまたは高圧液体クロ
マトグラフィーによってまたは生物活性の諸検定によっ
てモニターされうる。式Ｉの化合物は菌糸体中および培
養濾液中の両者に含有される。

【００１１】該化合物は生産物の化学的、物理学的およ
び生物学的性質を考慮して、培地から知られた手法によ
って単離される。培地中または個々の単離工程中におけ
る代謝産物濃度の検定では、例えば溶離剤としてブタノ
ール／氷酢酸／水または酢酸エチル／メタノール／水の
混合物を用いるシリカゲル上の薄層クロマトグラフィー
を使用することが可能である。薄層クロマトグラフィー
による分離の場合には、検出は例えばアニスアルデヒド
のような着色試薬によりまたは例えばコレステロール生
合成阻害剤としてのバイオアッセイにより実施すること
ができ、生成される物質の量は検量溶液と比較するのが
有利である。

【００１２】化合物Ｉを単離するには、培養液および菌
糸体を最初に非極性有機溶媒例えばｎ−ヘキサン、石油
エーテルまたはハロゲン化炭化水素例えばクロロホルム
等で抽出して非極性不純物を除去する。次いでさらに極
性有機溶媒例えば低級アルコール、アセトンおよび／ま
たは酢酸エチルおよびまたこれら溶媒の混合物で抽出す
る。

【００１３】式Ｉの純粋化合物の単離は適当な物質好ま
しくは例えばシリカゲル、酸化アルミニウム、イオン交
換体または吸着剤樹脂上で有機極性溶媒または溶媒混合
物例えばアルキルアセテート、アルキルアセテートと低
級アルカノールとの混合物、クロロホルムまたはメチレ
ンクロライドまたはこれら溶媒と低級アルカノールとの
混合物、場合によってはさらに水、イオン交換体樹脂に
適当なｐＨまたは塩勾配剤例えば塩化ナトリウムまたは
トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタンＨＣｌ（トリ
スバッファー）および各生物活性フラクションの組合せ
を用いて溶出させることによって遂行される。

【００１４】固体状態中およびｐＨ１〜９特に３〜７の
溶液中において式Ｉの化合物は安定であり、従って製剤
中に混入させることが可能である。

【００１５】〔有用性〕本発明化合物は脂質調整剤とし
て、特にコレステロール生合成を阻害するのに使用され
うる。

【００１６】式Ｉの化合物は増加したコレステロールレ
ベルによる疾患、特に冠状動脈性心臓病、アテローム性
動脈硬化症および類似疾患の予防および治療に使用でき
る。また用途は式Ｉの化合物の製剤にも関する。

【００１７】〔製剤の調製〕製剤調製では、活性物質の
外に製薬的に許容しうる添加剤例えば希釈剤および／ま
たは賦形剤を使用することも可能である。これらは、活
性物質との混合後にそれを投与に適した形態にする生理
学的に許容しうる物質を意味するものと解される。

【００１８】適当な固形または液体製剤形態の例として
は錠剤、コーティング錠剤、粉剤、カプセル剤、坐剤、
シロップ剤、乳液、懸濁液、滴剤または注射用溶液並び
に活性物質の徐放性製剤をあげることができる。頻繁に
使用される賦形剤または希釈剤の例としては種々の糖ま
たは種々のタイプの澱粉、セルロース誘導体、炭酸マグ
ネシウム、ゼラチン、動物性および植物性油、ポリエチ
レングリコール類、水またはその他の適当な溶媒さらに
また水を含有しかつグルコースまたは塩を加えることに
よって等張性にされうる緩衝剤がある。

【００１９】さらに、本発明による製剤中に使用されう
るその他の添加剤は、適切な場合には表面活性剤、着色
剤、香味剤、安定剤および保存剤である。また、薬理学
的に許容しうる重合状賦形剤例えばポリフェニルピロリ
ドンまたはその他の製薬的に許容しうる添加剤例えばシ
クロデキストリンもしくはポリサッカライドを使用する
こともできる。特に、これらの化合物はまた胆汁酸を結
合させる添加剤、特に胃腸管中で吸収され得ない無毒性
の塩基性陰イオン交換体と合一させることができる。

【００２０】製剤は経口、直腸または非経口投与されう
る。製剤は投与量単位で調製するのが好ましい。適当な
投与量単位としては特に錠剤、カプセル剤または坐剤が
ある。特に経口用の各投与量単位は活性成分を１０００
ｍｇまで、好ましくは１０〜１００ｍｇ含有することが
できる。しかしまた、上記の量以上または以下でありか
つ必要により投与前に分割または増加させうる投与量単
位を使用することもできる。

【００２１】適切な場合には、経口用の投与量単位は、
例えば微粒子状活性物質を適当なポリマー、ワックス等
中に被覆または埋め込むことによって放出を遅らせるこ
とができるように、すなわち放出をより長い期間にわた
って延長させることができるようにマイクロカプセル化
することができる。

【００２２】非経口投与は、液体剤形例えば筋肉内また
は皮下注射用の滅菌溶液および懸濁液を用いて実施され
うる。この種の剤形は計量した活性物質を適当な生理学
的に許容しうる希釈剤例えば水性または油性媒体中に溶
解または懸濁し、その溶液または懸濁液を所望により適
当な安定剤、乳化剤および／または保存剤および／また
は抗酸化剤と一緒にして滅菌することによって調製され
る。

【００２３】特に長期治療に関して好ましい投与形態は
経口投与形態であり、それは前記疾患の予防および治療
を実質的に容易にする。

【００２４】製剤は一般的に慣用な方法で調製される。 投与量スケジュールは患者または危険な状態にある人の
体型、年令、体重、性別および身体状態によって左右さ
れうる。

【００２５】

【実施例】以下に本発明を実施例によってより詳細に記
載する。百分率は特記しない限り、重量基準である。

【００２６】実施例１ ａ）　　生産菌株の胞子懸濁液の調製 滅菌した５００ｍｌエルレンマイヤーフラスコ中に入れ
た栄養溶液（水道水１リットル中に入れた麦芽エキス６
０ｇ、酵母エキス２ｇ、グルコース１０ｇ、（ＮＨ４）
２ＨＰＯ４　０．５ｇからなる。滅菌前のｐＨ６．０）
１００ｍｌに菌株ＤＳＭ　５９８３を接種し、培養物を
回転振盪器上で２５℃および１４０ｒｐｍにおいて７２
時間培養する。滅菌した５００ｍｌエルレンマイヤーフ
ラスコ中において、培養液２０ｍｌを栄養培地（馬鈴薯
注入４．０ｇ／リットル〔馬鈴薯２００ｇの注入〕、２
０．０ｇ／リットル　Ｄ−グルコース、滅菌前のｐＨ５
．６）中に引続いて均一に分配し、それに固化のために
リットル当たり１５ｇのアガーをさらに加え、混合物を
傾瀉する。培養物を２５℃で１０〜１４日間培養する。 その後に形成された、１フラスコの胞子を、商業的に入
手しうる非イオン性界面活性剤（例えばＴｒｉｔｏｎＲ
Ｘ　１００、Ｓｅｒｖａ社製）１滴を含有する脱塩水５
００ｍｌですすぎ次いで直ちに再使用するかまたは−２
２℃で５０％グリセロール中に貯蔵する。

【００２７】ｂ）　　エルレンマイヤーフラスコ中にお
ける生産菌株の培養物または前培養物の生産前記ａ）の
栄養溶液１００ｍｌを含有する滅菌した５００ｍｌエル
レンマイヤーフラスコに、アガースラント上で生長した
培養物または０．２ｍｌの胞子懸濁液を接種し、混合物
を回転振盪器上で１４０ｒｐｍおよび２５℃において培
養する。約１２０時間後に式Ｉの化合物の最高生産が達
成される。１０リットルおよび１００リットルの各発酵
槽に接種するには、前記と同一の栄養溶液からの７２時
間令の液内培養（接種物は約５％）を使用すれば十分で
ある。

【００２８】実施例２ 式Ｉの化合物の製造 １０リットル発酵槽を下記の条件で操作する。 栄養培地：麦芽エキス　　２０ｇ／リットルグルコース
　　１０ｇ／リットル 酵母エキス　　２ｇ／リットル （ＮＨ４）２ＨＰＯ４　　０．５ｇ／リットルｐＨ６．
０（滅菌前） 培養時間：１２０時間 培養温度：２５℃ 撹拌速度：２００ｒｐｍ 通　　　　気：空気２リットル／分

【００２９】泡の生成はエタノール性ポリオール溶液数
滴を繰返し加えることによって抑制することができる。 約９６時間後に最高の生産が達成される。収穫中のｐＨ
は約３．５である。式Ｉの化合物の収量は１リットル当
たり約８０ｍｇである。

【００３０】実施例３ 式Ｉの化合物の単離 ＤＳＭ　５９８３の発酵が終了した時点で、約２％のフ
ィルタ助剤（例えばセライト）を加えて培養液を濾過す
る。後処理は添付の図１および２に従って実施すること
ができる。

【００３１】実施例４ コレステロール生合成阻害剤としてのバイオアッセイａ
）　　インビトロ測定 リポタンパク質を含まない栄養培地中のＨＥＰ−Ｇ２細
胞単層を適当な濃度の式Ｉの供試物質とともに１時間前
培養する。１４Ｃ−標識した生合成プレカーサの〔１４
Ｃ〕酢酸ナトリウムを加え、ついで培養を３時間続ける
。その後、あらかじめ３Ｈコレステロールの内標準を加
えた後にこれら細胞のいくつかをアルカリ加水分解に付
す。 加水分解された細胞の脂質をクロロホルム／メタノール
混合物で抽出する。支持体コレステロールを加え、この
脂質混合物を調製用薄層クロマトグラフィーにより分離
し、コレステロールバンドを染色しついで単離し、１４
Ｃ−プレカーサから得られた１４Ｃ−コレステロールの
量をシンチグラフィーにより測定する。適量の細胞にお
いて細胞タンパク質を測定し、細胞タンパク質１ｍｇ当
たりの、１４Ｃ−プレカーサから生成された１４Ｃ−コ
レステロールの量を細胞単位当たりについて計算するこ
とができる。加えた供試製剤の阻害作用を比較するのに
対照を使用し、培地中の供試製剤の個々のモル濃度にお
けるコレステロール生合成の阻害を直接指摘することが
できる。 適量の細胞培養において、製剤の作用によってもたらさ
れる細胞培養の正常ないし細胞に対する損傷の欠除は形
態学的に評価され（光学顕微鏡で）かつ培地中へのラク
テートデヒドロゲナーゼの分泌を測定することによって
生化学的に測定される。標準製剤としてはロボスタチン
を用いた。ＲがＨである式Ｉの化合物によるコレステロ
ール生合成阻害の程度は、１０−８モル／リットルの濃
度では４１％である。ロボスタチンでのコレステロール
生合成阻害は１０−７モル／リットルでは７４％であり
そして１０−８モル／リットルでは４８％である。

【００３２】ｂ）　　インビボ測定 雄ラットでの慢性試験で証明されうるように、肝コレス
テロール生合成阻害は血清脂質の減少をもたらす。ポリ
エチレングリコール４００中に入れた各供試製剤を、出
発体重が約２４０ｇの系統ＨＯＥ：ＷＩＳＫｆ（ＳＰＦ
　７１）の雄ラットの各群に胃管栄養法によって毎朝投
与し、ここでの対照群にはビヒクルだけを摂取させた。 最終投与の２４時間後にかつ２４時間の絶食後に血液試
料を採取し、プールした群のラットから得た血清中のリ
ポタンパク質を調製用超遠心分離技法で分離した。該手
法ではＶＬＤＬ、ＬＤＬおよびＨＤＬの分離のために用
いた密度限界は下記のとおりであった。 ＶＬＤＬ　　１．００６ ＬＤＬ　　　　１．０４ ＨＤＬ　　　　１．２１

【００３３】コレステロールおよびトリグリセリドを測
定するには十分に酵素的であるＢｏｅｈｒｉｎｇｅｒ／
Ｍａｎｎｈｅｉｍ手法を用いそしてタンパク質を測定す
るにはＬｏｗｒｙ氏および協力者による手法を用いた。

【００３４】クロフィブレートと比較して式Ｉの化合物
について測定された値は下記のとおりである。

【００３５】

【表１】

【００３６】実施例５ ａ）　　下記式Ｉ

【化３】 の化合物の特性。

【００３７】アジスタチンＡ（上記式）は無定形固形物
として単離された。これはＣＨ２Ｃｌ２、ＣＨＣｌ３、
エーテル、酢酸エチル、アセトン、エタノールおよびイ
ソプロパノールに可溶性である。アジスタチンＡはｎ−
ペンタン、ｎ−ヘキサンおよびシクロヘキサンに不溶性
である。

【００３８】融点：７３℃ 旋光度：〔α〕２０Ｄ＝−３６．２（ｃ＝０．９；メタ
ノール） 薄層クロマトグラフィー： シリカゲル６０，Ｆ２５４：クロロホルム／メタノール
（９：１，ｖ：ｖ）：Ｒｆ０．７０ ｎ−ブタノール／酢酸／水（頂上層）（４：１：５，ｖ
：ｖ：ｖ）：Ｒｆ０．７５ 着色反応：オルシノール：茶色；アニスアルデヒド／硫
酸：茶色 ＥＩ　ＭＳ：ｍ／ｅ＝２４２（８％，Ｍ＋，　高分解能
：２４２．１１５４，Ｃ１２Ｈ１８Ｏ５）、２２４（１
０％，Ｍ−Ｈ２Ｏ）、２１０（１０％）、１８２（３２
％）、１６８（４６％）、１４０（２４％）、　１３９
（２４％）、１１１（６４％）、８５（９９％）分子量
：２４２．２７（Ｃ１２Ｈ１８Ｏ５）ＩＲ（ＫＢｒ）：
３４２０，　２９６０，　２９２０，　１７３０，　１
６８０ｃｍ−１ＵＶ（ＭｅＯＨ）：λ＝２０３ｎｍ（ε
＝３２５０）；２２４（１３００）、２６１（１０００
）ｎｍ ＋ＨＣｌ：λ＝２０３（ε＝４４５０）、２２４（１７
５０）、２７１（９００）ｎｍ＋ＮａＯＨ：λ＝２１１
（ε＝４７００）、２７１（１６００）、３０３（１４
５０）ｎｍ。

【００３９】１Ｈ　ＮＭＲ（２００　ＭＨｚ，　ＣＤＣ
ｌ３）：δ＝０．９８（ｔ，　３Ｈ，　Ｊ＝７．０　Ｈ
ｚ，　１１−Ｈ３）；１．３２〜１．６４（ｍ，　２Ｈ
，　１０−Ｈ２）；１．８５（ｍ，　１Ｈ，　６−Ｈ）
；１．９４〜２．２６（ｍ，　２Ｈ，　７−Ｈ２）；２
．４４（ｄ，　１Ｈ，　Ｊ５−ＯＨ，５＝３．５　Ｈｚ
，　５−ＯＨ）；２．６２（ｄｄ，　１Ｈ，　Ｊ３ａ，
３ｂ＝１４．５　Ｈｚ，　Ｊ３ａ，２＝２．５　Ｈｚ，
　３−Ｈａ）；２．７６（ｓ，　１Ｈ，　４ａ−ＯＨ）
；３．３２（ｄｄ，１Ｈ，　Ｊ３ｂ，３ａ＝１４．５　
Ｈｚ，　Ｊ３ｂ，２＝４　Ｈｚ，　３−Ｈｂ）；３．４
２（ｓ，　３Ｈ，　９−Ｈ３）；４．０９（ｄｄ，　１
Ｈ，　Ｊ５，５−ＯＨ＝３．５およびＪ＝３．５　Ｈｚ
，　５−Ｈ）；５．１３（ｄｄ，　１Ｈ，　Ｊ２，３ｂ
＝４Ｈｚ，　Ｊ２，３ａ＝２．５　Ｈｚ，　２−Ｈ）；
　５．６１（ｄｄ，　１Ｈ，　Ｊ＝２．５および５．０
　Ｈｚ，　８−Ｈ） １３Ｃ　ＮＭＲ（５０　ＭＨｚ，　ＣＤＣｌ３）：δ＝
１１．６（ｑ，　Ｃ−１１）；２４．３（ｔ，　Ｃ−１
０）；２６．１（ｔ，　Ｃ−７）；３４．６（ｄ，　Ｃ
−６）；４３．８（ｔ，Ｃ−３）；５５．６（ｑ，　Ｃ
−９）；７１．５（ｄ，　Ｃ−５）；７３．６（ｓ，　
Ｃ−４ａ）；１００．０（ｄ，　Ｃ−２）；１１５．３
（ｄ，　Ｃ−８）；１４６．１（ｓ，　Ｃ−８ａ）；２
０５．５（ｓ，　Ｃ−４）元素分析値： 計算値：Ｃ　　５９．５３　　　　Ｈ　　７．４３実測
値：Ｃ　　５９．５６　　　　Ｈ　　７．３８

【００４
０】ｂ）　　下記式Ｉ

【化４】 の化合物の特性。

【００４１】アジスタチンＢ（上記式）：実験式：Ｃ１
１Ｈ１８Ｏ４ 分子量：２１４．２６ コンシステンシー：無色、結晶性 可溶性：ＭｅＯＨ、ＥｔＯＨ 不溶性：ｎ−ペンタン、ｎ−ヘキサン 融点：１６１℃ ＩＲ（ＫＢｒ）：３４４０，　３４００，　２９４０，
　１１２０，　１０８５，　９３０　ｃｍ−１元素分析
値： 実測値：Ｃ　　６１．４６　　　　Ｈ　　８．３９計算
値：Ｃ　　６１．６６　　　　Ｈ　　８．４７旋光度：
〔α〕２０Ｄ＝＋３８．２；（ｃ＝１．０）質量スペク
トル：ｍ／ｚ＝２１４（２２％，Ｍ＋，　高分解能：２
１４．１２０５，　Ｃ１１Ｈ１８Ｏ４）１９６（４％，
Ｍ−１８）、１８６（４％，Ｍ−２８）、１７０（６％
，Ｍ−４４）、１６７（１４％，Ｍ−４７）、１４２（
６６％，Ｍ−７２）、１１３（６６％，Ｍ−１０１）、
９５（９９％，Ｍ−１１９）。

【００４２】１３Ｃ　ＮＭＲ（５０．３　ＭＨｚ，　Ｃ
Ｄ３ＯＤ）：δ＝１１．９（ｑ，　Ｃ−１１）；２２．
２（ｔ，　Ｃ−１０）；２６．１（ｔ，　Ｃ−７）；２
６．６（ｔ，　Ｃ−８）；３７．６（ｄ，Ｃ−６）；４
０．８（ｔ，　Ｃ−２）；６７．４（ｓ，　Ｃ−４）；
６９．８（ｄ，　Ｃ−３）；７１．５（ｄ，　Ｃ−５）
；７４．５（ｄ，　Ｃ−９）；９１．２（ｄ，　Ｃ−１
） １Ｈ　ＮＭＲ（５００　ＭＨｚ，　ＣＤＣｌ３）：δ＝
０．９４（ｔ，　３Ｈ，　Ｊ１１，１０＝７．５　Ｈｚ
，　１１−Ｈ３）；１．３０〜１．８０（ｍ，　７Ｈ，
　６−Ｈ，　７−Ｈ２，　８−Ｈ２，１０−Ｈ２）；１
．９７（ｄｄｄ，　１Ｈ，　Ｊ２ａ，２ｂ＝１４　Ｈｚ
，　Ｊ２ａ，３＝３．５　Ｈｚ，　Ｊ２ａ，１＝２　Ｈ
ｚ，　２−Ｈａ）；２．０９（ｂｒ　ｓ，　１Ｈ，　Ｏ
Ｈ）；２．１４（ｂｒ　ｓ，　１Ｈ，　ＯＨ）；２．５
５（ｄｄｄ，　１Ｈ，　Ｊ２ｂ，２ａ＝１４　Ｈｚ，　
Ｊ２ｂ，３＝１０　Ｈｚ，　Ｊ２ｂ，１＝２　Ｈｚ，　
２−Ｈｂ）；３．８１（ｍ，　１Ｈ，　９−Ｈ）；３．
９９（ｄｄ，　１Ｈ，　Ｊ３，２ｂ＝１０　Ｈｚ，　Ｊ
３，２ａ＝３　Ｈｚ，　３−Ｈ）；４．１９（ｂｒ　ｓ
，　１Ｈ，　５−Ｈ）；４．９６（ｄｄ，　１Ｈ，　Ｊ
＝２および２　Ｈｚ，　１−Ｈ）

【００４３】ｃ）　　下記式Ｉ

【化５】 の化合物の特性。

【００４４】アジスタチンＤ（上記式）：実験式：Ｃ１
１Ｈ１４Ｏ４ 分子量：２１０．２３ コンシステンシー：白色粉末 可溶性：ＣＨ２Ｃｌ２、ＣＨＣｌ３、エーテル、ＥｔＯ
Ａｃ、アセトン、ＥｔＯＨ、イソプロパノール不溶性：
ｎ−ペンタン、ｎ−ヘキサン、シクロヘキサン融点：９
３℃ ＵＶ（ＭｅＯＨ）ｎｍ（ε）：２０１（３１７４）、２
２７（１１３２）、２８９（６９４２）ｎｍ（ＭｅＯＨ
／ＨＣｌ）（ε）：２０２（５２３４）、２２５（２３
３９）、２８８（７１２８）ｎｍ（ＭｅＯＨ／ＮａＯＨ
）（ε）：２１５（８０３７）、２７４（４７７０）、
３０５（４９３７）ｎｍ ＩＲ（ＫＢｒ）：３３８０　ｂｒ，　２９５０，　２９
２０，　２８６０，　１６８０，　１６５０，　１６２
０，　１６００，　１５８５，　１４１０，　１２８０
，　１００５ｃｍ−１旋光度（ＭｅＯＨ）：〔α〕２０
Ｄ＝−２５２．４；（ｃ＝０．５５） 質量スペクトル：ｍ／ｚ＝２１０（８４％，Ｍ＋）高分
解能（Ｃ１１Ｈ１４Ｏ４として）：計算値　　２１０．
０８９２ 実測値　　２１０．０８９３７ １９２（４４％，Ｍ−１８）、１６３（８９％，Ｍ−４
７）、１３９（１００％，Ｍ−７１）、１３７（８０％
，Ｍ−７３）、１２６（７５％，Ｍ−８４）、７１（８
７％，Ｍ−１３９）、５５（７６％，Ｍ−１５５）。

【００４５】１３Ｃ　ＮＭＲ（５０　ＭＨｚ，　ｄ６−
アセトン）：δ＝１１．９（ｑ，　Ｃ−１１）；２５．
１（ｔ，　Ｃ−９）；２６．７（ｔ，　Ｃ−７）；３５
．８（ｄ，　Ｃ−６）；７０．４（ｄ，　Ｃ−５）；７
２．１（ｓ，　Ｃ−４ａ）；１０５．５（ｄ，　Ｃ−３
）；１１７．４（ｄ，　Ｃ−８）；１５０．２（ｓ，　
Ｃ−８ａ）；１５９．４（ｄ，Ｃ−２）；１９２．１（
ｓ，　Ｃ−４） １Ｈ　ＮＭＲ（２００　ＭＨｚ，　ＣＤＣｌ３）：δ＝
０．９８（ｔ，　３Ｈ，　Ｊ＝７．０　Ｈｚ，　１０−
Ｈ３）；１．３６〜１．７２（ｍ，　２Ｈ，　９−Ｈ２
）；１．９５（ｍ，１Ｈ，　６−Ｈ）；２．０４〜２．
３８（ｍ，　２Ｈ，　７−Ｈ２）；２．５０（ｓ，　１
Ｈ，　５−ＯＨ）；２．８２（ｓ，　１Ｈ，　４ａ−Ｏ
Ｈ）；４．２５（ｓ，　１Ｈ，　５−Ｈ）；５．５４（
ｄ，　１Ｈ，　Ｊ２＝６．０　Ｈｚ，　３Ｈ）；６．０
０（ｄｄ，　１Ｈ，　Ｊ＝２．５および５．０　Ｈｚ，
　８−Ｈ）；７．４５（ｄ，　１Ｈ，　Ｊ３＝６．０　
Ｈｚ，　２Ｈ）

【００４６】ｄ）　　下記式Ｉ

【化６】 の化合物の特性。

【００４７】アジスタチンＥ（上記式）：実験式：Ｃ１
１Ｈ１６Ｏ５ 分子量：２２８．２４ コンシステンシー：無色、結晶性 可溶性：ＭｅＯＨ、ＥｔＯＨ、アセトン、ＣＨＣｌ３不
溶性：ｎ−ペンタン、ｎ−ヘキサン、ｎ−ヘプタン融点
：１２４℃ ＵＶ（ＭｅＯＨ／ＮａＯＨ）　　２１４（２９２９）、
２６６（１４７９８）、３０４（３７９４）ｎｍｎｍ（
ε）： ＩＲ（ＫＢｒ）：３４３０、２９７０、２９４０、１７
４５、１４６０、１４３５、１３５０、１２７０ｃｍ−
１ 旋光度（ＭｅＯＨ）：〔α〕２０Ｄ＝＋１０７．７；（
ｃ＝０．４４） 質量スペクトル：ｍ／ｚ＝２２８（４％，Ｍ＋）高分解
能（Ｃ１１Ｈ１６Ｏ５として）：計算値　　２２８．０
９９７２ 実測値　　２２８．０９９７２ ２１０（４％，Ｍ−１８）、１８１（１７％，Ｍ−４７
）、１６４（１４％，Ｍ−６４）、１４０（５４％，Ｍ
−８８）、１３９（５２％，Ｍ−８９）；１１１（６２
％，Ｍ−１１７）、８３（７９％，Ｍ−１４５）、５５
（７１％，Ｍ−１７３）、４３（１００％，Ｍ−１８５
）。

【００４８】１３Ｃ　ＮＭＲ（５０．３　ＭＨｚ，　Ｃ
ＤＣｌ３）：δ＝１１．６（ｑ，　Ｃ−１１）；２２．
２（ｔ，　Ｃ−７）；２４．２（ｔ，　Ｃ−１０）；３
２．４（ｔ，　Ｃ−８）；３５．４（ｄ，Ｃ−６）；４
４．６（ｔ，　Ｃ−２）；７４．８（ｄ，　Ｃ−５）；
７５．５（ｓ，　Ｃ−４）；９２．３（ｄ，　Ｃ−１）
；９８．２（ｓ，　Ｃ−９）；２０６．４（ｓ，　Ｃ−
３） １Ｈ　ＮＭＲ（２００　ＭＨｚ，　ＣＤＣｌ３）：δ＝
０．９２（ｔ，　３Ｈ，　Ｊ＝７．０　Ｈｚ，　１１−
Ｈ３）；１．４０（ｍ，　２Ｈ，　１０−Ｈ２）；１．
６０（ｍ，　１Ｈ，　６−Ｈ）；１．６５（ｍ，　２Ｈ
，　７−Ｈ２）；１．７５／１．９８（ｍ，　２Ｈ，　
８−Ｈ２）；２．７０（ｓ，　１Ｈ，　９−ＯＨ）；２
．８３／２．９０（ｄｄ，　２Ｈ，　ＪＡ，Ｂ＝１９．
０　Ｈｚ，　ＪＡ，１＝ＪＢ，１＝２．０　Ｈｚ，　２
−ＨＡおよび２−ＨＢ）、３．７４（ｓ，　１Ｈ，　４
−ＯＨ）；３．９４（ｓ，　１Ｈ，　５−Ｈ）；５．４
８（ｄｄ，　１Ｈ，　Ｊ１，２−ＨＡ＝Ｊ１，２−ＨＢ
３＝２．０　Ｈｚ，１−Ｈ）

【図面の簡単な説明】

【図１】培養液を濾過して得られる培養上澄み液から目
的の式Ｉの化合物を取り出すための操作のフロー図。

【図２】培養液を濾過して得られる菌糸体から目的の式
Ｉの化合物を取り出すための操作のフロー図。

Claims (6)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】　　式Ｉ 【化１】 〔式中、Ｒ１は水素またはヒドロキシルであり、Ｒ２は
   ヒドロキシルまたはオキソ基であり、Ｒ３はメトキシま
   たはヒドロキシルであるか、またはＲ１と一緒になって
   エーテル橋を形成しそして Ｒ４は水素またはヒドロキシルであり、Ｒ５は水素であ
   るかまたはＲ４と一緒になって１つの追加の結合を示し
   そしてＲ６は水素であるか、またはＲ３と一緒になって
   １つの追加の結合を示す〕で表される化合物の製造にお
   いて、式Ｉの化合物が培養中に蓄積されるまで栄養培地
   中でフサリウム種ＤＳＭ　５９８３を培養することから
   なる上記の製造方法。
2. 【請求項２】　　それぞれに完全栄養溶液の重量を基準
   にして、栄養培地が０．２〜５％の麦芽エキス、０．１
   〜０．５％の酵母エキス、０．５〜２％のグルコースお
   よび０．０１〜０．１％の（ＮＨ４）２ＨＰＯ４を含有
   する請求項１記載の方法。
3. 【請求項３】　　培養を１８〜３０℃で行う請求項１ま
   たは２に記載の方法。
4. 【請求項４】　　培養をｐＨ１〜７で行う請求項１〜３
   のいずれか１項またはそれ以上に記載の方法。
5. 【請求項５】　　コレステロール生合成阻害剤としての
   、請求項１記載の式Ｉの化合物の使用。
6. 【請求項６】　　請求項１記載の式Ｉの化合物を生産す
   る限りにおけるフサリウム種ＤＳＭ　５９８３並びにそ
   の変異体および突然変異体。