JPH0439316B2 - - Google Patents
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- JPH0439316B2 JPH0439316B2 JP14110685A JP14110685A JPH0439316B2 JP H0439316 B2 JPH0439316 B2 JP H0439316B2 JP 14110685 A JP14110685 A JP 14110685A JP 14110685 A JP14110685 A JP 14110685A JP H0439316 B2 JPH0439316 B2 JP H0439316B2
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Landscapes
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Description
〔産業上の利用分野〕
本発明はアルスロバクター（Arthrobacter）
属に属し、５置換ヒダントイン及びＮ−カルバモ
イルアミノ酸を対応するそれぞれのＬ−アミノ酸
に転換する能力を有する新規な微生物に関するも
のである。 なお、本発明において、特に断わらない限り５
置換ヒダントイン及びＮ−カルバモイルアミノ酸
なる化合物名は、各々Ｄ体、Ｌ体、DL体の総称
を意味する。 〔従来の技術及び問題点〕 従来、DL−５置換ヒダントイン類を酵素的に
Ｌ−アミノ酸に転換する方法については、特公昭
42−13850号以降多くの特許出願がなされており、
特に芳香属アミノ酸の製造方法としては、フラボ
バクテリウム アミノゲネス（Flavpbacterium
aminogenes）FERM−3133及びその変異株
FERM−3134，FERM−3135を５置換ヒダント
インに作用させる方法が知られている。 またＬ−Ｎ−カルバモイルアミノ酸を酵素的に
Ｌ−アミノ酸に転換する方法としては、Ｌ−又は
DL−Ｎ−カルバモイルメチオニンにコリネバク
テリウムセペドニカム（Corynebacterium
sepedonicam）IFO3306等を作用させて、含まれ
るＬ−Ｎ−カルバモイルメチオニンをＬ−メチオ
ニンに転換する方法が知られている（特公昭55−
29678号）。しかし、この方法によつて転換するこ
とができるのはＬ体のみであつてＤ体をＬ−メチ
オニンに転換することはできない。 更にまた、従来の酵素法によるＬ−アミノ酸の
製造法では、５置換ヒダントインを原料とする場
合とＮ−カルバモイルアミノ酸を原料とする場合
とでは、各々別種の微生物を使用する必要があ
り、５置換ヒダントインとＮ−カルバモイルアミ
ノ酸の両方に作用し、対応するそれぞれのＬ−ア
ミノ酸に転換しうる微生物は見出されていなかつ
た。 従つて、DL−５置換ヒダントイン類を原料と
する場合には、その原料の製造の際に副生した
DL−Ｎ−カルバモイルアミノ酸を除去する必要
があり、またDL−Ｎ−カルバモイルアミノ酸を
原料とする場合にはＤ−Ｎ−カルバモイルアミノ
酸が反応系に混入するのを防止する措置又は反応
終了後残存するＤ−Ｎ−カルバモイルアミノ酸を
分取、ラセミ化するための煩雑な工程を採らざる
得なかつた。更に、DL−Ｎ−カルバモイルアミ
ノ酸を水溶性塩として用いれば反応液濃度を高く
できるため反応を有利に行ない得るはずである
が、Ｄ体のＮ−カルバモイルアミノ酸に作用して
Ｌ−アミノ酸に転換し得る微生物がなく操作の単
純化は不可能であつた。 〔問題点を解決するための手段〕 本発明者らは、５置換ヒダントイン類の微生物
による分解機作について研究中、発明者等が土壌
中より新たに分離した微生物がヒダントイン化合
物を開裂し、アミノ酸を生成する際にＬ−Ｎ−カ
ルバモイルアミノ酸とＤ−Ｎ−カルバモイルアミ
ノ酸を生成すること、そして逐次的に生成してく
るアミノ酸がＬ体であることから、この微生物が
従来知られていない能力を有する新規微生物であ
ることを見出し、別途出願した。 この微生物は、アルスロバクター属に属し、５
置換ヒダントイン及びＮ−カルバモイルアミノ酸
を対応するそれぞれのＬ−アミノ酸に転換する能
力を有する新菌種アルスロバクター エスピー
（Arthrobacter sp.）DP−Ｂ−1001（微工研菌寄
第8190号）である。 本発明の微生物は、このDP−Ｂ−1001株から
誘導された変異株であつて、DP−Ｂ−1001株と
同様の能力を有する。 すなわち本発明は、アルスロバクター属に属
し、５置換ヒダントイン及びＮ−カルバモイルア
ミノ酸を対応するそれぞれのＬ−アミノ酸に転換
する能力を有する新菌種アルスロバクター エス
ピー（Arthrobacter sp.）DP−Ｂ−1002（微工研
菌寄第8191号）である。 次に、アルスロバクター エスピー DP−Ｂ
−1002の菌学的性質を同DP−Ｂ−1001のそれと
共に示す。
属に属し、５置換ヒダントイン及びＮ−カルバモ
イルアミノ酸を対応するそれぞれのＬ−アミノ酸
に転換する能力を有する新規な微生物に関するも
のである。 なお、本発明において、特に断わらない限り５
置換ヒダントイン及びＮ−カルバモイルアミノ酸
なる化合物名は、各々Ｄ体、Ｌ体、DL体の総称
を意味する。 〔従来の技術及び問題点〕 従来、DL−５置換ヒダントイン類を酵素的に
Ｌ−アミノ酸に転換する方法については、特公昭
42−13850号以降多くの特許出願がなされており、
特に芳香属アミノ酸の製造方法としては、フラボ
バクテリウム アミノゲネス（Flavpbacterium
aminogenes）FERM−3133及びその変異株
FERM−3134，FERM−3135を５置換ヒダント
インに作用させる方法が知られている。 またＬ−Ｎ−カルバモイルアミノ酸を酵素的に
Ｌ−アミノ酸に転換する方法としては、Ｌ−又は
DL−Ｎ−カルバモイルメチオニンにコリネバク
テリウムセペドニカム（Corynebacterium
sepedonicam）IFO3306等を作用させて、含まれ
るＬ−Ｎ−カルバモイルメチオニンをＬ−メチオ
ニンに転換する方法が知られている（特公昭55−
29678号）。しかし、この方法によつて転換するこ
とができるのはＬ体のみであつてＤ体をＬ−メチ
オニンに転換することはできない。 更にまた、従来の酵素法によるＬ−アミノ酸の
製造法では、５置換ヒダントインを原料とする場
合とＮ−カルバモイルアミノ酸を原料とする場合
とでは、各々別種の微生物を使用する必要があ
り、５置換ヒダントインとＮ−カルバモイルアミ
ノ酸の両方に作用し、対応するそれぞれのＬ−ア
ミノ酸に転換しうる微生物は見出されていなかつ
た。 従つて、DL−５置換ヒダントイン類を原料と
する場合には、その原料の製造の際に副生した
DL−Ｎ−カルバモイルアミノ酸を除去する必要
があり、またDL−Ｎ−カルバモイルアミノ酸を
原料とする場合にはＤ−Ｎ−カルバモイルアミノ
酸が反応系に混入するのを防止する措置又は反応
終了後残存するＤ−Ｎ−カルバモイルアミノ酸を
分取、ラセミ化するための煩雑な工程を採らざる
得なかつた。更に、DL−Ｎ−カルバモイルアミ
ノ酸を水溶性塩として用いれば反応液濃度を高く
できるため反応を有利に行ない得るはずである
が、Ｄ体のＮ−カルバモイルアミノ酸に作用して
Ｌ−アミノ酸に転換し得る微生物がなく操作の単
純化は不可能であつた。 〔問題点を解決するための手段〕 本発明者らは、５置換ヒダントイン類の微生物
による分解機作について研究中、発明者等が土壌
中より新たに分離した微生物がヒダントイン化合
物を開裂し、アミノ酸を生成する際にＬ−Ｎ−カ
ルバモイルアミノ酸とＤ−Ｎ−カルバモイルアミ
ノ酸を生成すること、そして逐次的に生成してく
るアミノ酸がＬ体であることから、この微生物が
従来知られていない能力を有する新規微生物であ
ることを見出し、別途出願した。 この微生物は、アルスロバクター属に属し、５
置換ヒダントイン及びＮ−カルバモイルアミノ酸
を対応するそれぞれのＬ−アミノ酸に転換する能
力を有する新菌種アルスロバクター エスピー
（Arthrobacter sp.）DP−Ｂ−1001（微工研菌寄
第8190号）である。 本発明の微生物は、このDP−Ｂ−1001株から
誘導された変異株であつて、DP−Ｂ−1001株と
同様の能力を有する。 すなわち本発明は、アルスロバクター属に属
し、５置換ヒダントイン及びＮ−カルバモイルア
ミノ酸を対応するそれぞれのＬ−アミノ酸に転換
する能力を有する新菌種アルスロバクター エス
ピー（Arthrobacter sp.）DP−Ｂ−1002（微工研
菌寄第8191号）である。 次に、アルスロバクター エスピー DP−Ｂ
−1002の菌学的性質を同DP−Ｂ−1001のそれと
共に示す。
【表】
【表】
【表】
本発明のアルスロバクター エスピー DP−
Ｂ−1002は、後記試験例に示す如く５置換ヒダン
トイン及びＮ−カルバモイルアミノ酸をＤ体、Ｌ
体、DL体の如何を問わず対応するそれぞれのＬ
−アミノ酸に転換する作用を有する。 〔発明の効果〕 本発明の新規微生物は叙上の如き能力を有する
ため、これをＬ−アミノ酸の製造に用いれば、そ
の生産性の飛躍的な向上を図ることができる。す
なわち、 (1) 従来、適当な微生物がなく使用し得なかつた
Ｄ−Ｎ−カルバモイルアミノ酸をも対応するＬ
−アミノ酸製造の出発原料にできる。 (2) 化学的に５置換ヒダントインを製造する際に
副生するDL−Ｎ−カルバモイルアミノ酸を反
応系から除去する必要がないため、工業的に容
易かつ安価に得られるDL−５置換ヒダントイ
ンとDL−Ｎ−カルバモイルアミノ酸の混合物
から一段の反応で定量的にＬ−アミノ酸を製造
することができる。それ故、従来のDL−５置
換ヒダントイン類を出発原料にするＬ−アミノ
酸製造工程に必要であつたDL−５置換ヒダン
トインへのＤ−Ｎ−カルバモイルアミノ酸の混
入を防止する措置及び反応終了後残存するＤ−
Ｎ−カルバモイルアミノ酸を分取、ラセミ化す
るための煩雑な工程が全く不要となり、製造工
程が極めて単純化されると共に目的とするＬ−
アミノ酸を高収率で製造できるようになつた。 (3) DL−Ｎ−カルバモイルアミノ酸の水溶性塩
を原料として固定化菌体カラムを用いて反応を
行ない得るので、製造工程の連続化が容易であ
る。 (4) アルスロバクター エスピー DP−Ｂ−
1002株は活性が高いので、菌体活性を高めるた
めの活性のインデユーサーとなる物質を培養液
に添加する必要が全く不要な変異株であるた
め、これを用いた本発明方法は従来法に比べ培
養コストを大幅に低減し得ると共に培養管理を
簡略化でき工業的に非常に有利である。 〔実施例〕 次に参考例、実施例及び試験例を挙げて説明す
る。 参考例 １ アルスロバクター エスピー DP−Ｂ−1001
（微工研菌寄第8190号）株は、栃木県日光市の土
壌から以下の方法でスクリーニングを行なつた結
果単離された。 土壌約0.5ｇを減菌水５mlに懸濁し希釈した後
トリプトソイ寒天平板上に塗布し、28℃にて培養
を行つて菌を得た。このようにして得た菌をグル
コース10ｇ／、酵母エキス５ｇ／、ポリペプ
トン５ｇ／、肉エキス２ｇ／、MgSO4・
7H2O0.4ｇ／、FeSO4・7H2O0.01ｇ／、
MnSO4・5H2O0.01ｇ／から成りPHを7.0に調節
した液体培地に接種し、28℃２日間振とう培地を
行ない菌体を得た。菌体は10ｇ／のＮ−カルバ
モイルアミノ酸（例えばDL−Ｎ−カルバモイル
トリプトフアン）又は５置換ヒダントイン（例え
ばDL−５−インドリルメチルヒダントイン）を
含む0.2Mアンモニウム緩衝液（PH9.0）に添加
し、37℃に24時間保温した。保温後緩衝液上清中
のＬ−アミノ酸をロイコノストツク・メゼンテロ
イデスＰ−60を用いたバイオアツセイ法及びシリ
カゲルプレートによる薄層クロマトグラフイーに
より測定した所、特に高いアミノ酸生成活性を与
えた菌株として本菌が得られた。 実施例 １ アルスロバクター エスピー DP−Ｂ−1002
株は、参考例１で得た同DP−Ｂ−1001株の変異
株で以下の方法により単離されたものである。 DP−Ｂ−1001株を参考例１で用いたものと同
じ液体培地に１mg／mlのｐ−ジメチルアミノベン
ゼンジアゾスルホン酸ナトリウムを加えた液体培
地にて培養した後トリプトソン寒天平板上に塗布
し、28℃にて培養を行つて菌を得、参考例１と同
様の方法によりアミノ酸生成活性を測定し、非常
に高いアミノ酸生成活性を与えた変異株として本
菌を得た。 試験例 １ (1) 種菌の培養、菌体作成 参考例１で用いたものと同じ液体培地を500ml
容三角フラスコに200ml分注し、減菌後実施例１
で得たアルスロバクター エスピー DP−Ｂ−
1002株を接種し、28℃で72時間振とう培養した。
培養液から18000G10分間の遠心により菌体を集
め、生理食塩水により１回洗浄し、湿菌体を得、
酵素反応に用いる洗浄菌体とした。 (2) 酵素反応 (1)で得られた洗浄菌体10ｇを精製水50mlに懸濁
したものに、0.8MNH4OH−Cl（PH8.0）、4mM
FeSO4・7H2Ｏ及び4mM MnSO4・5H2Ｏなる組
成の緩衝液25mlを加え、更に原料としてＤ−Ｎ
−カルバモイルフエニルアラニン200ｇ／、
Ｄ−Ｎ−カルバモイル３−０−メチルドーパ20
ｇ／、Ｄ−Ｎ−カルバモイルチロシン20ｇ／
、Ｄ−Ｎ−カルバモイルトリプトフアン20
ｇ／、Ｄ−Ｎ−カルバモイルメチオニン20
ｇ／、Ｄ−Ｎ−カルバモイルバリン20ｇ／
、Ｄ−Ｎ−カルバモイルロイシン20ｇ／の
各ナトリウム塩溶液25mlを加え、N2気流を吹き
込み、37℃に48時間保温した。 反応終了後、菌体を遠心分離により除き、遠心
上清中のアミノ酸を日立638−50型、反応型液体
クロマトグラフイー（カラム：日立ゲルNo.2619、
４mmφ×150mm、溶出液：クエン酸ナトリウム緩
衝液0.4ml／分、アツセイ；ニンヒドリン反応
570nm）及びロイコノストツクメゼンテロイデス
を用いたバイオアツセイ法にて定量したところ、
次の第１表に示す量のＬ−アミノ酸が蓄積してい
た。
Ｂ−1002は、後記試験例に示す如く５置換ヒダン
トイン及びＮ−カルバモイルアミノ酸をＤ体、Ｌ
体、DL体の如何を問わず対応するそれぞれのＬ
−アミノ酸に転換する作用を有する。 〔発明の効果〕 本発明の新規微生物は叙上の如き能力を有する
ため、これをＬ−アミノ酸の製造に用いれば、そ
の生産性の飛躍的な向上を図ることができる。す
なわち、 (1) 従来、適当な微生物がなく使用し得なかつた
Ｄ−Ｎ−カルバモイルアミノ酸をも対応するＬ
−アミノ酸製造の出発原料にできる。 (2) 化学的に５置換ヒダントインを製造する際に
副生するDL−Ｎ−カルバモイルアミノ酸を反
応系から除去する必要がないため、工業的に容
易かつ安価に得られるDL−５置換ヒダントイ
ンとDL−Ｎ−カルバモイルアミノ酸の混合物
から一段の反応で定量的にＬ−アミノ酸を製造
することができる。それ故、従来のDL−５置
換ヒダントイン類を出発原料にするＬ−アミノ
酸製造工程に必要であつたDL−５置換ヒダン
トインへのＤ−Ｎ−カルバモイルアミノ酸の混
入を防止する措置及び反応終了後残存するＤ−
Ｎ−カルバモイルアミノ酸を分取、ラセミ化す
るための煩雑な工程が全く不要となり、製造工
程が極めて単純化されると共に目的とするＬ−
アミノ酸を高収率で製造できるようになつた。 (3) DL−Ｎ−カルバモイルアミノ酸の水溶性塩
を原料として固定化菌体カラムを用いて反応を
行ない得るので、製造工程の連続化が容易であ
る。 (4) アルスロバクター エスピー DP−Ｂ−
1002株は活性が高いので、菌体活性を高めるた
めの活性のインデユーサーとなる物質を培養液
に添加する必要が全く不要な変異株であるた
め、これを用いた本発明方法は従来法に比べ培
養コストを大幅に低減し得ると共に培養管理を
簡略化でき工業的に非常に有利である。 〔実施例〕 次に参考例、実施例及び試験例を挙げて説明す
る。 参考例 １ アルスロバクター エスピー DP−Ｂ−1001
（微工研菌寄第8190号）株は、栃木県日光市の土
壌から以下の方法でスクリーニングを行なつた結
果単離された。 土壌約0.5ｇを減菌水５mlに懸濁し希釈した後
トリプトソイ寒天平板上に塗布し、28℃にて培養
を行つて菌を得た。このようにして得た菌をグル
コース10ｇ／、酵母エキス５ｇ／、ポリペプ
トン５ｇ／、肉エキス２ｇ／、MgSO4・
7H2O0.4ｇ／、FeSO4・7H2O0.01ｇ／、
MnSO4・5H2O0.01ｇ／から成りPHを7.0に調節
した液体培地に接種し、28℃２日間振とう培地を
行ない菌体を得た。菌体は10ｇ／のＮ−カルバ
モイルアミノ酸（例えばDL−Ｎ−カルバモイル
トリプトフアン）又は５置換ヒダントイン（例え
ばDL−５−インドリルメチルヒダントイン）を
含む0.2Mアンモニウム緩衝液（PH9.0）に添加
し、37℃に24時間保温した。保温後緩衝液上清中
のＬ−アミノ酸をロイコノストツク・メゼンテロ
イデスＰ−60を用いたバイオアツセイ法及びシリ
カゲルプレートによる薄層クロマトグラフイーに
より測定した所、特に高いアミノ酸生成活性を与
えた菌株として本菌が得られた。 実施例 １ アルスロバクター エスピー DP−Ｂ−1002
株は、参考例１で得た同DP−Ｂ−1001株の変異
株で以下の方法により単離されたものである。 DP−Ｂ−1001株を参考例１で用いたものと同
じ液体培地に１mg／mlのｐ−ジメチルアミノベン
ゼンジアゾスルホン酸ナトリウムを加えた液体培
地にて培養した後トリプトソン寒天平板上に塗布
し、28℃にて培養を行つて菌を得、参考例１と同
様の方法によりアミノ酸生成活性を測定し、非常
に高いアミノ酸生成活性を与えた変異株として本
菌を得た。 試験例 １ (1) 種菌の培養、菌体作成 参考例１で用いたものと同じ液体培地を500ml
容三角フラスコに200ml分注し、減菌後実施例１
で得たアルスロバクター エスピー DP−Ｂ−
1002株を接種し、28℃で72時間振とう培養した。
培養液から18000G10分間の遠心により菌体を集
め、生理食塩水により１回洗浄し、湿菌体を得、
酵素反応に用いる洗浄菌体とした。 (2) 酵素反応 (1)で得られた洗浄菌体10ｇを精製水50mlに懸濁
したものに、0.8MNH4OH−Cl（PH8.0）、4mM
FeSO4・7H2Ｏ及び4mM MnSO4・5H2Ｏなる組
成の緩衝液25mlを加え、更に原料としてＤ−Ｎ
−カルバモイルフエニルアラニン200ｇ／、
Ｄ−Ｎ−カルバモイル３−０−メチルドーパ20
ｇ／、Ｄ−Ｎ−カルバモイルチロシン20ｇ／
、Ｄ−Ｎ−カルバモイルトリプトフアン20
ｇ／、Ｄ−Ｎ−カルバモイルメチオニン20
ｇ／、Ｄ−Ｎ−カルバモイルバリン20ｇ／
、Ｄ−Ｎ−カルバモイルロイシン20ｇ／の
各ナトリウム塩溶液25mlを加え、N2気流を吹き
込み、37℃に48時間保温した。 反応終了後、菌体を遠心分離により除き、遠心
上清中のアミノ酸を日立638−50型、反応型液体
クロマトグラフイー（カラム：日立ゲルNo.2619、
４mmφ×150mm、溶出液：クエン酸ナトリウム緩
衝液0.4ml／分、アツセイ；ニンヒドリン反応
570nm）及びロイコノストツクメゼンテロイデス
を用いたバイオアツセイ法にて定量したところ、
次の第１表に示す量のＬ−アミノ酸が蓄積してい
た。
【表】
＊ アミノ酸分析計による測定値。
試験例 ２ 試験例１の(1)と同様にして得られたDP−Ｂ−
1002株の洗浄菌体10ｇを精製水50mlに懸濁したも
のに、0.4MNH4Cl−NH4OH（PH9.0）、2mM
FeSO・7H2Ｏ及び2mM MnSO4・5H2Ｏなる組
成の緩衝液50mlを加え100mlとした。これにDL
−５−ベンジルヒダントイン10ｇ、DL−５−
（3′−メトキシ−4′−ヒドロキシベンジル）ヒダ
ントイン10ｇ、DL−５−（4′ヒドロキシベンジ
ル）ヒダントイン１ｇ、〓DL−５−インドリル
メチルヒダントイン１ｇ、〓DL−５−メチルメ
ルカプトエチルヒダトイン１ｇ、〓DL−５−イ
ソプロピルヒダントイン１ｇ、〓DL−５−イソ
ブチルヒダントイン１ｇをそれぞれ懸濁し、N2
気流を吹き込み、37℃に48時間保温した。 反応終了後、菌体を遠心分離により除き、遠心
上清中のアミノ酸を試験例１と同様にして定量し
たところ、次の第２表に示す量のＬ−アミノ酸が
蓄積していた。
試験例 ２ 試験例１の(1)と同様にして得られたDP−Ｂ−
1002株の洗浄菌体10ｇを精製水50mlに懸濁したも
のに、0.4MNH4Cl−NH4OH（PH9.0）、2mM
FeSO・7H2Ｏ及び2mM MnSO4・5H2Ｏなる組
成の緩衝液50mlを加え100mlとした。これにDL
−５−ベンジルヒダントイン10ｇ、DL−５−
（3′−メトキシ−4′−ヒドロキシベンジル）ヒダ
ントイン10ｇ、DL−５−（4′ヒドロキシベンジ
ル）ヒダントイン１ｇ、〓DL−５−インドリル
メチルヒダントイン１ｇ、〓DL−５−メチルメ
ルカプトエチルヒダトイン１ｇ、〓DL−５−イ
ソプロピルヒダントイン１ｇ、〓DL−５−イソ
ブチルヒダントイン１ｇをそれぞれ懸濁し、N2
気流を吹き込み、37℃に48時間保温した。 反応終了後、菌体を遠心分離により除き、遠心
上清中のアミノ酸を試験例１と同様にして定量し
たところ、次の第２表に示す量のＬ−アミノ酸が
蓄積していた。
【表】
＊ 第１表と同じ。
試験例 ３ グルコース10ｇ／、コーンステイープリカー
20ｇ／を含有する培地をPH7.0に調整し、３
容ミニジヤーフアーメンターに２分注し、アル
スロバクター エスピー DP−Ｂ−1002株を接
種し、１／分の通気、700rpmの攪拌下、28℃
で36時間培養した。培養終了後、遠心により菌体
を集め、78ｇの湿菌体を得た。 上記湿菌体を800mlの精製水に懸濁し、1.2nM
の酢酸コバルト溶液400mlと80ｇ／のDL−Ｎ−
カルバモイルフエニルアラニン400mlを加え、N2
気流吹き込み下、PHを塩酸とアンモニアで6.7に
調整しつつ37℃に22時間保温した。反応終了後、
菌体は遠心により回収し、再び上記反応液作成方
法に従い新たな反応に用いた。 以上の操作を７回にわたつて行つた結果、下表
に記す量のＬ−フエニルアラニンを含む上清液が
得られた。
試験例 ３ グルコース10ｇ／、コーンステイープリカー
20ｇ／を含有する培地をPH7.0に調整し、３
容ミニジヤーフアーメンターに２分注し、アル
スロバクター エスピー DP−Ｂ−1002株を接
種し、１／分の通気、700rpmの攪拌下、28℃
で36時間培養した。培養終了後、遠心により菌体
を集め、78ｇの湿菌体を得た。 上記湿菌体を800mlの精製水に懸濁し、1.2nM
の酢酸コバルト溶液400mlと80ｇ／のDL−Ｎ−
カルバモイルフエニルアラニン400mlを加え、N2
気流吹き込み下、PHを塩酸とアンモニアで6.7に
調整しつつ37℃に22時間保温した。反応終了後、
菌体は遠心により回収し、再び上記反応液作成方
法に従い新たな反応に用いた。 以上の操作を７回にわたつて行つた結果、下表
に記す量のＬ−フエニルアラニンを含む上清液が
得られた。
【表】
試験例 ４
グルコース10ｇ／、コーンステイプリカー20
ｇ／、DL−５−インドリルメチルヒダントイ
ン1.5ｇ／を含有するPH7.0の培地を３容ミニ
ジヤーフアーメンターに２仕込み、アルスロバ
クター エスピー DP−Ｂ−1001株を接種し、
別にグルコース10ｇ／、コーンステイープリカ
ー20ｇ／を含有するPH7.0の培地に、同様にア
ルスロバクター エスピー DP−Ｂ−1002株を
接種した。そして、各々のミニジヤーフアーメン
ターを１／分の通気、700rpmの攪拌のもと、
28℃、40時間の培養を行つた。培養液50mlから遠
心により菌体を集め、生理食塩水で洗浄し、各々
の洗浄菌体を得た。 反応は、50ｇ／DL−５ベンジルヒダントイ
ン、1mM FeSO4・7H2Ｏ、1mM MnSO4・5H2
Ｏ、0.2M NH4Cl−NH4OH（PH9.0）を含有する
反応液10mm及び50ｇ／Ｄ−Ｎ−カルバモイルフ
エニルアラニン、1mM FeSO4・7H2Ｏ、1mM
MnSO4・5H2Ｏ、0.2M NH4Cl−NH4OH（PH
8.0）を含有する反応液10mlの２種類の反応液を
調製し、DP−Ｂ−1001株又はDP−Ｂ−1002株の
上記洗浄菌体を各々等量ずつ加えて密栓をし、37
℃に24時間保温して行つた。 反応終了後、遠心により菌体を除き、上清液を
得、含まれるＬ−フエニルアラニンを定量した。
その結果を第４表に示す。 第４表から、DP−Ｂ−1002株の方が活性が高
いことが判る。
ｇ／、DL−５−インドリルメチルヒダントイ
ン1.5ｇ／を含有するPH7.0の培地を３容ミニ
ジヤーフアーメンターに２仕込み、アルスロバ
クター エスピー DP−Ｂ−1001株を接種し、
別にグルコース10ｇ／、コーンステイープリカ
ー20ｇ／を含有するPH7.0の培地に、同様にア
ルスロバクター エスピー DP−Ｂ−1002株を
接種した。そして、各々のミニジヤーフアーメン
ターを１／分の通気、700rpmの攪拌のもと、
28℃、40時間の培養を行つた。培養液50mlから遠
心により菌体を集め、生理食塩水で洗浄し、各々
の洗浄菌体を得た。 反応は、50ｇ／DL−５ベンジルヒダントイ
ン、1mM FeSO4・7H2Ｏ、1mM MnSO4・5H2
Ｏ、0.2M NH4Cl−NH4OH（PH9.0）を含有する
反応液10mm及び50ｇ／Ｄ−Ｎ−カルバモイルフ
エニルアラニン、1mM FeSO4・7H2Ｏ、1mM
MnSO4・5H2Ｏ、0.2M NH4Cl−NH4OH（PH
8.0）を含有する反応液10mlの２種類の反応液を
調製し、DP−Ｂ−1001株又はDP−Ｂ−1002株の
上記洗浄菌体を各々等量ずつ加えて密栓をし、37
℃に24時間保温して行つた。 反応終了後、遠心により菌体を除き、上清液を
得、含まれるＬ−フエニルアラニンを定量した。
その結果を第４表に示す。 第４表から、DP−Ｂ−1002株の方が活性が高
いことが判る。
Claims (1)
- １ アルスロバクター属に属し、５置換ヒダント
イン及びＮ−カルバモイルアミノ酸を対応するそ
れぞれのＬ−アミノ酸に転換する能力を有する新
菌種アルスロバクター エスピー DP−Ｂ−
1002（微工研菌寄第8191号）。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP14110685A JPS62271A (ja) | 1985-06-27 | 1985-06-27 | 新規な微生物 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP14110685A JPS62271A (ja) | 1985-06-27 | 1985-06-27 | 新規な微生物 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS62271A JPS62271A (ja) | 1987-01-06 |
| JPH0439316B2 true JPH0439316B2 (ja) | 1992-06-29 |
Family
ID=15284315
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP14110685A Granted JPS62271A (ja) | 1985-06-27 | 1985-06-27 | 新規な微生物 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS62271A (ja) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE3702384A1 (de) * | 1987-01-23 | 1988-08-04 | Schering Ag | Verfahren zur herstellung von l-aminosaeuren |
| DE4316928C2 (de) * | 1993-05-19 | 1995-03-16 | Degussa | Neue Mikroorganismen, deren Verwendung und Verfahren zur Herstellung von L-alpha-Aminosäuren |
-
1985
- 1985-06-27 JP JP14110685A patent/JPS62271A/ja active Granted
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS62271A (ja) | 1987-01-06 |
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| EXPY | Cancellation because of completion of term |