JPH051716B2 - - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】

〔産業上の利用分野〕 本発明は新規微生物を利用するＬ−アミノ酸の
製造方法に関する。 なお、本発明において、特に断わらない限り５
置換ヒダントイン及びＮ−カルバモイルアミノ酸
なる化合物名は、各々Ｄ体、Ｌ体、DL体の総称
を意味する。 〔従来の技術及び問題点〕 従来、DL−５置換ヒダントイン類を酵素的に
Ｌ−アミノ酸に転換する方法については、特公昭
42−13850号以降多くの特許出願がなされており、
特に芳香族アミノ酸の製造方法としては、フラボ
バクテリウム アミノゲネス（Flavobacterium
aminogenes）FERM−3133及びその変異株
FERM−3134、FERM−3135を５置換ヒダント
インに作用させる方法が知られている。 また、Ｌ−Ｎ−カルバモイルアミノ酸を酵素的
にＬ−アミノ酸に転換する方法としては、Ｌ−又
はDL−Ｎ−カルバモイルメチオニンにコリネバ
クテリウムセペドニカム（Corynebacterium
sepedonicam）IF3306等を作用させて、含まれる
Ｌ−Ｎ−カルバモイルメチオニンをＬ−メチオニ
ンに転換する方法が知られている（特公昭55−
29678号）。しかし、この方法によつて転換するこ
とができるのはＬ体のみであつてＤ体をＬ−メチ
オニンに転換することはできない。 更にまた、従来の酵素法によるＬ−アミノ酸の
製造法では、５置換ヒダントインを原料とする場
合とＮ−カルバモイルアミノ酸を原料とする場合
とでは、各々別種の微生物を使用する必要があ
り、５置換ヒダントインとＮ−カルバモイルアミ
ノ酸の両方に作用し、対応するそれぞれのＬ−ア
ミノ酸に転換しうる微生物は見出されていなかつ
た。 従つて、DL−５置換ヒダントイン類を原料と
する場合には、その原料の製造の際に副生した
DL−Ｎ−カルバモイルアミノ酸を除去する必要
があり、またDL−Ｎ−カルバモイルアミノ酸を
原料とする場合にはＤ−Ｎ−カルバモイルアミノ
酸が反応系に混入するのを防止する措置又は反応
終了後残存するＤ−Ｎ−カルバモイルアミノ酸を
分取、ラセミ化するための煩雑な工程を採らざる
を得なかつた。更に、DL−Ｎ−カルバモイルア
ミノ酸を水溶性塩として用いれば反応液濃度を高
くできるため反応を有利に行ない得るはずである
が、Ｄ−Ｎ−カルバモイルアミノ酸に作用してＬ
−アミノ酸に転換し得る微生物がなく操作の単純
化は不可能であつた。 〔問題点を解決するための手段〕 本発明者らは、５置換ヒダントイン類の微生物
による分解機作について研究中、発明者らが土壞
中より新たに分離した微生物がヒダントイン化合
物を開裂し、アミノ酸を生成する際にＬ−Ｎ−カ
ルバモイルアミノ酸とＤ−Ｎ−カルバモイルアミ
ノ酸を生成すること、そして遂次的に生成してく
るアミノ酸がＬ体であることをも発見した。本発
明は、この新知見に基き５置換ヒダントイン及び
Ｎ−カルバモイルアミノ酸からＬ−アミノ酸を簡
易かつ高収率で製造する方法を完成するに至つた
ものである。 すなわち本発明は、アルスロバクター
（Arthrobacter）属に属し５置換ヒダントイン及
びＮ−カルバモイルアミノ酸をＬ−アミノ酸に転
換する能力を有するアルスロバクター エスピー
DP−Ｂ−1001菌株又はその変異株であるアル
スロバクター エスピーDP −Ｂ−1002菌株の
培養物を、次式（）及び（）、

【式】

【式】 （式中、ＲはＮ−カルバモイルアミノ酸残基又は
ヒダントイン残基を示す） で表わされるＮ−カルバモイルアミノ酸又は／及
び５置換ヒダントインに作用させることを特徴と
する次式（）、 （式中、Ｒは前記と同じ） で表わされるＬ−アミノ酸の製造方法である。 本発明において使用される微生物は、アルスロ
バクター属に属し、５置換ヒダントイン及びＮ−
カルバモイルアミノ酸をＬ−アミノ酸に転換する
能力を有するものであれば特に制限されず、その
変異株であつてもよく、その代表的なものとして
は、本発明者らが土壞中より新たに分離した微生
物で、次の菌学的性質を有するアルスロバクター
エスピー（Arthrobacter sp.）DP−Ｂ−1001
（微工研菌寄第8190号）及びこれより誘導された
変異株であるアルスロバクター エスピー DP
−Ｂ−1002（微工研菌寄第8191号）が挙げられる。

【表】

【表】

【表】

〔作用〕

本発明において使用されるアルスロバクター属
に属する新規微生物は、５置換ヒダントインを開
裂しＬ−アミノ酸を生成する能力、かつ、Ｎ−カ
ルバモイルアミノ酸からＬ−アミノ酸を生成する
能力を有する。そして、この能力は５置換ヒダン
トイン及びＮ−カルバモイルアミノ酸のそれぞれ
がＤ体、Ｌ体、DL体のいずれかを問わず発揮さ
れる。 〔発明の効果〕 本発明のＬ−アミノ酸の製造方法は、 (1) 従来、適当な微生物がなく使用し得なかつた
Ｄ−Ｎ−カルバモイルアミノ酸をも対応するＬ
−アミノ酸製造の出発原料にできる。 (2) 化学的に５置換ヒダントインを製造する際に
副生するDL−Ｎ−カルバモイルアミノ酸を反
応系から除去する必要がないため、工業的に容
易かつ安価に得られるDL−５置換ヒダントイ
ンとDL−Ｎ−カルバモイルアミノ酸の混合物
から一段の反応で定量的にＬ−アミノ酸を製造
することができる。それ故、従来のDL−５置
換ヒダントイン類を出発原料にするＬ−アミノ
酸製造工程に必要であつたDL−５置換ヒダン
トインへのＤ−Ｎ−カルバモイルアミノ酸の混
入を防止する措置及び反応終了後残存するＤ−
Ｎ−カルバモイルアミノ酸を分取、ラセミ化す
るための煩雑な工程が全く不要となり、製造工
程が極めて単純化さると共に目的とするＬ−ア
ミノ酸を高収率で製造できるようになつた。 (3) DL−Ｎ−カルバモイルアミノ酸の水溶性塩
を原料として固定化菌体カラムを用いて反応を
行ない得るので、製造工程の連続化が容易であ
る。 (4) アルスロバクター エスピー DP−Ｂ−
1002株は活性が高いので、菌体活性を高めるた
めの活性のインデユーサーとなる物質を培養液
に添加する必要が全く不要な変異株であるた
め、これを用いた本発明方法は従来法に比べ培
養コストを大幅に低減し得ると共に培養管理を
簡略化でき工業的に非常に有利である。 等、種々の利点を有する。 〔実施例〕 次に参考例及び実施例を挙げて説明する。 参考例 １ アルスロバクター エスピー DP−Ｂ−1001
株は栃木県日光市の土壞から以下の方法でスクリ
ーニングを行なつた結果単離されたものである。 土壞約0.5ｇを滅菌水５mlに懸濁し希釈した後
トリプトソイ寒天平板上に塗布し、28℃にて培養
を行つて菌を得た。このようにして得た菌をグル
コース10ｇ／、酵母エキス５ｇ／、ポリペプ
トン５ｇ／、肉エキス２ｇ／、MgSO₄・
7H₂O0.04ｇ／、FeSO₄・7H₂O0.01ｇ／、
MnSO₄・5H₂O0.01ｇ／から成りPHを7.0に調節
した液体培地に接種し、28℃２日間振とう培養を
行ない菌体を得た。菌体は10ｇ／のＮ−カルバ
モイルアミノ酸（例えばDL−Ｎ−カルバモイル
トリプトフアン）又は５置換ヒダントイン（例え
ばDL−５−インドリルメチルヒダントイン）を
含む0.2Mアンモニウム緩衝液（PH9.0）に添加
し、37℃に24時間保温した。保温後緩衝液上清中
のＬ−アミノ酸をロイコノストツク・メゼンテロ
イデスＰ−60を用いたバイオアツセイ法及びシリ
カゲルプレートによる薄層クロマトグラフイーに
より測定した所、、特に高いアミノ酸生成活性を
与えた菌株として本菌が得られた。 参考例 ２ アルスロバクター エスピー DP−Ｂ−1002
株は、参考例１で得た同DP−Ｂ−1001株の変異
株で以下の方法により単離されたものである。 DP−Ｂ−1001株を参考例１で用いたものと同
じ液体培地に１mg／mlのｐ−ジメチルアミノベン
ゼンジアゾスルホン酸ナトリウムを加えた液体培
地にて培養した後トリプトソイ寒天平板上に塗布
し、28℃にて培養を行つて菌を得、上述の方法に
よりアミノ酸生成活性を測定し、非常に高いアミ
ノ酸生成活性を与えた変異株として本菌を得た。 実施例 １ (1) 種菌の培養 参考例１で用いたものと同じ液体培地を500
ml容三角フラスコに200ml分注し、滅菌後参考
例１で得たアルスロバクター エスピー DP
−Ｂ−1001を一白金耳接種し、28℃で24時間振
とう培養した。 (2) 本培養、菌体作成 参考例１で用いたものと同じ液体培地に0.15
％の５−インドリルメチルヒダントインを添加
した培地を調製し、(1)で得られた培養液を４ml
接種し、28℃で24時間振とう培養した。培養液
から、18000G、10分間の遠心により菌体を集
め、生理食塩水により１回洗浄し、湿菌体を、
酵素反応に用いる洗浄菌体とした。 (3) 酵素反応 (2)で得られた洗浄菌体10ｇを精製水50mlに懸
濁したものに、0.8M NH₄OH−NH₄Cl（PH
8.0）、４ｍＭ FeSO₄・7H₂O及び４ｍＭ
MnSO₄・5H₂Oなる組成の緩衝液25mlを加え、
更に原料としてＤ−Ｎ−カルバモイルフエニ
ルアラニン200ｇ／、Ｄ−Ｎ−カルバモイ
ル−３−Ｏ−メチルドーパ20ｇ／、Ｄ−Ｎ
−カルバモイルチロシン20ｇ／、Ｄ−Ｎ−
カルバモイルトリプトフアン20ｇ／、Ｄ−
Ｎ−カルバモイルメチオニン20ｇ／、Ｄ−
Ｎ−カルバモイルバリン20ｇ／、Ｄ−Ｎ−
カルバモイルロイシン20ｇ／の各ナトリウム
塩溶液25mlを加え、N₂気流を吹き込み、37℃
に48時間保温した。 反応終了後、菌体を遠心分離により除き、遠
心上清中のアミノ酸を日立638−50型、反応型
液体クロマトグラフイー（カラム：日立ゲルNo.
2619、４mmφ×150mm、溶出液：クエン酸ナト
リウム緩衝液0.4ml／分、アツセイ；ニンヒド
リン反応570nｍ）及びロイコノストツクメゼ
ンテロイデスを用いたバイオアツセイ法にて定
量したところ、次の第１表に示す量のＬ−アミ
ノ酸が蓄積していた。

【表】 ＊ アミノ酸分析計による測定値。
実施例 ２ 実施例１の(1)、(2)と同様にして得られたDP−
Ｂ−1001株の洗浄菌体10ｇを精製水50mlに懸濁し
たものに、0.4M NH₄Cl−NH₄OH（PH9.0）、２ｍ
Ｍ FeSO₄・7H₂O及び２ｍＭ MnSO₄・5H₂O
なる組成の緩衝液50mlを加え100mlとした。これ
にDL−５−ベンジルヒダントイン10ｇ、DL
−５−（3′−メトキシ−4′−ヒドロキシベンジル）
ヒダントイン10ｇ、DL−５−（4′−ヒドロキシ
ベンジル）ヒダントイン１ｇ、DL−５−イン
ドリルメチルヒダントイン１ｇ、DL−５−メ
チルメルカプトエチルヒダントイン１ｇ、DL
−５−イソプロピルヒダントイン１ｇ、DL−
５−イソブチルヒダントイン１ｇをそれぞれ懸濁
し、N₂気流を吹き込み37℃に48時間保温した。 反応終了後、菌体を遠心分離により除き、遠心
上清中のアミノ酸を実施例１と同様にして定量し
たところ、次の第２表に示す量のＬ−アミノ酸が
蓄積していた。

【表】 ＊ 第１表と同じ。
実施例 ３ Ｄ−Ｎ−カルバモイルフエニルアラニン60ｇ／
、DP−Ｂ−1001株の湿菌体100ｇ／、0.2M
NH₄Cl−NH₄OH（PH8.0）、１ｍＭ FeSO₄・
7H₂O、１ｍＭ MnSO₄・5H₂Oなる組成の反応
液１を作成し、N₂ガスを吹き込みつつ、37℃
に48時間保温した。 反応終了後、遠心分離により、菌体を除き、上
清を得た。上清中には、Ｌ−フエニルアラニン46
ｇ（収率96％）が蓄積していた。この上清を濃
縮、活性炭処理し、冷却することにより、結晶を
得た。結晶の比旋光度を測定したところ、〔α〕²⁰ _D
−34.1°ですべてＬ体であつた。 実施例 ４ (1) 種菌の培養、菌体作成 参考例１で用いたものと同じ液体培地を500
ml容三角フラスコに200ml分注し、滅菌後参考
例２で得たアルスロバクター エスピー DP
−Ｂ−1002株を接種し、28℃で72時間振とう培
養した。培養液から、18000G10分間の遠心に
より菌体を集め、生理食塩水により、１回洗浄
し、湿菌体を得、酵素反応に用いる洗浄菌体と
した。 (2) 酵素反応 (1)で得られた洗浄菌体10ｇを精製水50mlに懸
濁したものに、0.8M NH₄OH−NH₄Cl（PH
8.0）、４ｍＭ FeSO₄・7H₂O及び４ｍＭ
MnSO₄・5H₂Oなる組成の緩衝液25mlを加え、
更に原料としてＤ−Ｎ−カルバモイルフエニ
ルアラニン200ｇ／、Ｄ−Ｎ−カルバモイ
ル３−Ｏ−メチルドーパ20ｇ／、Ｄ−Ｎ−
カルバモイルチロシン20ｇ／、Ｄ−Ｎ−カ
ルバモイルトリプトフアン20ｇ／、Ｄ−Ｎ
−カルバモイルメチオニン20ｇ／、Ｄ−Ｎ
−カルバモイルバリン20ｇ／、Ｄ−Ｎ−カ
ルバモイルロイシン20ｇ／の各ナトリウム塩
溶液25mlを加え、N₂気流を吹き込み、37℃に
48時間保温した。 反応終了後、菌体を遠心分離により除き、遠
心上清中のアミノ酸を実施例１と同様にして定
量したところ、次の第３表に示す量のＬ−アミ
ノ酸が蓄積していた。

【表】 ＊ 第１表と同じ。
実施例 ５ 実施例４の(1)と同様にして得たDP−Ｂ−1002
株の洗浄菌体10ｇを水50mlに懸濁したものに、
0.4M NH₄Cl−NH₄OH（PH9.0）、２ｍＭ
FeSO₄・7H₂O、２ｍMMnSO₄・5H₂Oなる組成
の緩衝液50mlを加え100mlとした。これに、DL
−５−ベンジルヒダントイン10ｇ、DL−５−
（3′−メトキシ−4′−ヒドロキシベンジル）ヒダ
ントイン10ｇ、DL−５−（4′−ヒドロキシベン
ジル）ヒダントイン１ｇ、DL−５−インドリ
ルメチルヒダントイン１ｇ、DL−５−メチル
メルカプトエチルヒダントイン１ｇ、DL−５
−イソプロピルヒダントイン１ｇ、DL−５−
イソブチルヒダントイン１ｇをそれぞれ懸濁し、
N₂気流を吹き込み、37℃に48時間保温した。 反応終了後、菌体を遠心分離により除き、遠心
上清中のアミノ酸を実施例１と同様にして定量し
たところ、次の第４表に示す量のＬ−アミノ酸が
蓄積していた。

【表】 ＊ 第１表と同じ。
実施例 ６ グルコース10ｇ／、コーンステイープリカー
20ｇ／を含有する培地をPH7.0に調整し、３
容ミニジヤーフアーメンターに２分注し、アル
スロバクター エスピー DP−Ｂ−1002株を接
種し、１／分の通気、700rpmの撹拌下、28℃
で36時間培養した。培養終了後、遠心により菌体
を集め、78ｇの湿菌体を得た。 上記湿菌体を800mlの精製水に懸濁し、1.2ｍＭ
の酢酸コバルト溶液400mlと、80ｇ／のDL−Ｎ
−カルバモイルフエニルアラニン400mlを加え、
N₂気流吹き込み下、PHを塩酸とアンモニアで6.7
に調節しつつ、37℃に22時間保温した。反応終了
後、菌体は、遠心により回収し、再び上記反応液
作成方法に従い、新たな反応に用いた。 以上の操作を７回にわたつて行つた結果、下表
に記す量のＬ−フエニルアラニンを含む上清液が
得られた。

【表】

【表】 実施例 ７ グルコース10ｇ／、コーンステイープリカー
20ｇ／を含有する培地をPH7.0に調整し、30
容ジヤーフアーメンターに20仕込み、アルスロ
バクター エスピー DP−Ｂ−1002株を接種し、
10／分の通気、400rpmの撹拌のもと、28℃、
40時間の培養を行つた。20の培養液からは、平
均642ｇの湿菌体が得られた。 反応は20ｇ／DL−Ｎ−カルバモイルフエニ
ルアラニン及び0.3ｍＭ酢酸コバルトを含む反応
液に、第１図に示す菌濃度となるように菌体を加
え、N₂気流を吹き込み、塩酸とアンモニアでPH
6.7に調節しつつ、37℃に22時間保温して行つた。 反応終了後、菌体は遠心によつて回収し、培養
液より新たに得られる菌体とともに、上記反応方
法に従い反応液を作成し、反応液量を増加させる
操作を３回繰り返し、１回当りの反応で540ｇの
Ｌ−フエニルアラニンを生成する反応液とした。
それ以後、反応10回目と14回目に新たに菌を補充
しつつ18回の反応を行つたところ、第１図に示す
如く合計8.4KgのＬ−フエニルアラニンが得られ
た。 実施例 ８ グルコース10ｇ／、コーンステイープリカー
20ｇ／、DL−５−インドリルメチルヒダント
イン1.5ｇ／を含有するPH7.0の培地を３容ミ
ニジヤーフアーメンターに２仕込み、アルスロ
バクター エスピー DP−Ｂ−1001株を接種し、
別にグルコース10ｇ／、コーンステイープリカ
ー20ｇ／を含有するPH7.0の培地に、同様にア
ルスロバクター エスピー DP−Ｂ−1002株を
接種した。そして、各々のミニジヤーフアーメン
ターを１／分の通気、700rpmの撹拌のもと、
28℃40時間の培養を行つた。培養液50mlから遠心
により菌体を集め、生理食塩水で洗浄し、各々の
洗浄菌体を得た。 反応は、50ｇ／DL−５−ベンジルヒダント
イン、１ｍＭ FeSO₄・7H₂O、１ｍＭ
MnSO₄・5H₂O、0.2M NH₄Cl−NH₄OH（PH9.0）
を含有する反応液10ml、及び50ｇ／Ｄ−Ｎ−カ
ルバモイルフエニルアラニン、１ｍＭ FeSO₄・
7H₂O、１ｍＭ MnSO₄・5H₂O、0.2M NH₄Cl
−NH₄OH（PH8.0）を含有する反応液10mlの２種
類の反応液を調整し、DP−Ｂ−1001株又はDP−
Ｂ−1002株の上記洗浄菌体を各々等量ずつ加えて
密栓をし、37℃に24時間保温して行つた。 反応終了後、遠心により菌体を除き、上清液を
得、含まれるＬ−フエニルアラニンを定量した。
その結果を第６表に示す。

【表】 実施例 ９ グルコース10ｇ／、コーンステイープリカー
20ｇ／を含有する培地をPH7.0に調節し、30
容ジヤーフアーメンターに20仕込み、アルスロ
バクター エスピー DP−Ｂ−1002株を接種し、
10／分の通気、400rpmの撹拌のもと、28℃、
40時間培養した。培養終了後、遠心により菌体を
集め、828ｇの湿菌体を得た。 この湿菌体を1.5の精製水に懸濁させ、これ
に50％アクリルアミドモノマー1.25％、Ｎ，N′−
メチレンビスアクリルアミド溶液1.5を加え、
均一にし、Ｎ，Ｎ，N′，N′−テトラメチルエチ
レンジアミン３ml及び２％過硫酸アンモニウム溶
液150mlを加え混和し、厚さ２mmの薄膜状に固化
させた。完全に固化した後、２mm四方に切断し、
固定化菌体ゲル断片を得、６容のカラムに充填
した。 次いで、4.49ｇ／のDL−５−インドリルメ
チルヒダントインと4.84ｇ／のDL−Ｎ−カル
バモイルトリプトフアン及び0.3ｍＭ酢酸コバル
トを含む0.1Mリン酸緩衝液（PH6.7）を約900
ml／時の流速で37℃に保温された上記カラムに導
いた。 上記反応の操作を15日間にわたつて行つた結
果、第７表に示す量のＬ−トリプトフアンを含む
反応混合計346が得られた。

【表】 実施例 10 グルコース10ｇ／、コーンステイープリカー
20ｇ／を含有する培地をPH7.0に調整し、３
容ミニジヤーフアーメンターに２分注し、アル
スロバクター エスピー DP−Ｂ−1002株を接
種し、１／分の通気、700rpmの撹拌下、28℃
で36時間培養した。培養終了後、遠心により菌体
を集め、78ｇの湿菌体を得た。 上記湿菌体を800mlの精製水に懸濁し、1.2ｍＭ
の酢酸コバルト溶液400mlと、80ｇ／のDL−Ｎ
−カルバモイルフエニルアラニン200mlと、16ｇ
のDL−ベンジルヒダントインを懸濁した精製水
200mlとを混合し、N₂気流吹き込み下、PHを塩酸
とアンモニアで6.7に調節しつつ、37℃に22時間
保温した。反応終了後、菌体は、遠心により回収
し、反応液上清を得た。上清中には、Ｌ−フエニ
ルアラニン25.26ｇ（収率95％）が蓄積していた。
この上清を濃縮、活性炭処理し、冷却することに
より結晶を得た。この結晶の比旋光度を測定した
ところ、〔α〕²⁰ _D−34.1°で、すべてＬ体であつた。 実施例 11 グルコース10ｇ／、コーンステイープリカー
20ｇ／を含有する培地をPH7.0に調整し、３
容ミニジヤーフアーメンターに２分注し、アル
スロバクター エスピー DP−Ｂ−1002株を接
種し、１／分の通気、700rpmの撹拌下、28℃
で36時間培養した。培養終了後、遠心により菌体
を集め、78ｇの湿菌体を得た。 上記湿菌体を800mlの精製水に懸濁し、1.2ｍＭ
の酢酸コバルト溶液400mlと、20ｇ／のDL−Ｎ
−カルバモイル−３−Ｏ−メチルドーパ200mlと
28ｇのDL−５−（3′−メトキシ−4′−ヒドロキシ
ベンジル）ヒダントインを懸濁した精製水200ml
を混合し、N₂気流吹き込み下、PHを塩酸とアン
モニアで6.7に調節しつつ、37℃に22時間保温し
た。反応終了後、菌体は、遠心により回収し、反
応液上清を得た。上清中には、Ｌ−３−Ｏ−メチ
ルドーパ26.09ｇ（収率92％）が蓄積していた。
この上清を濃縮、活性炭処理し、冷却することに
より、Ｌ−３−Ｏ−メチルドーパ一水塩の結晶を
得た。この結晶の旋光度を測定したところ、〔α〕
²⁰ _D−25.5°で、すべてＬ体であつた。

【図面の簡単な説明】

第１図はDL−Ｎ−カルバモイルフエニルアラ
ニンにアルスロバクター エスピー DP−Ｂ−
1002を作用させた場合のＬ−フエニルアラニンの
生成量と反応の際の反応液中の菌濃度を各反応毎
に表わした図である。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ アルスロバクター属に属し５置換ヒダントイ
   ン及びＮ−カルバモイルアミノ酸をＬ−アミノ酸
   に転換する能力を有するアルスロバクター エス
   ピー DP−Ｂ−1001菌株又はその変異株である
   アルスロバクター エスピー DP−Ｂ−1002菌
   株の培養物を、次式（）及び（）、 【式】【式】 （式中、ＲはＮ−カルバモイルアミノ酸残基又は
   ヒダントイン残基を示す） で表わされるＮ−カルバモイルアミノ酸又は／及
   び５置換ヒダントインに作用させることを特徴と
   する次式（）、 （式中、Ｒは前記と同じ） で表わされるＬ−アミノ酸の製造方法。