JPH0439398A

JPH0439398A - 動物性油脂の親水性有機溶媒抽出物から脂質画分を分画精製する方法

Info

Publication number: JPH0439398A
Application number: JP2146921A
Authority: JP
Inventors: Mototake Murakami; 元威村上; Masami Kawanari; 川成　正美
Original assignee: Snow Brand Milk Products Co Ltd
Current assignee: Snow Brand Milk Products Co Ltd
Priority date: 1990-06-05
Filing date: 1990-06-05
Publication date: 1992-02-10

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】〔産業上の利用分野〕本発明は動物性油脂を親水性有機溶媒で処理して抽出し
た抽出物中に含まれる各脂質画分をそれぞれ効率よく、
高純度に分画精製する方法に関する。

〔従来の技術〕

中性脂質は脂肪酸のグリセリンエステルである。

動物の主な中性脂質はステアリン酸、バルミチン酸のよ
うな飽和脂肪酸を多く含むトリアジルグリセロール（ト
リグリセリドともいう）で、常温で固体のことが多い。

生体の有効なエネルギー貯蔵物質であり、腸管リパーゼ
で加水分解され吸収される。細胞膜で代謝的に生ずるア
シルグリセロールのうちには細胞におけるホルモン作用
など情報伝達の仕組みの上で重要な役割を演じているも
のがある。

コレステロールはステロイドの一種で、生体内で生産さ
れ、溶血物に対して赤血球を保護する作用がある。

天然にはグリセロリン脂質に属するフォスファチジルコ
リン（ＰＣ）、フォスファチジルエタノールアミン（Ｐ
Ｅ）やスフィンゴリン脂質に属するスフィンゴミエリン
（ＳＰＭ）などのリン脂質が存在する。

ＰＣは天然に最も広く分布しているリン脂質であって、
界面活性作用があるので乳化剤として食品添加物など、
或いは医薬、その他の工業用原料として広く利用されて
いる。また、ＰＥ、　ＳＰＭなども生理活性を有するこ
とが知られている。特にＳＰＭはＰＡＦ（Ｐｌａｔｅｌ
ｅＬ　Ａｃｔｉｖａｔｉｎｇ　Ｆａｃｔｏｒ）　の血小
牟反凝集に対するアンタゴニストとして注目され始めて
いる［Ｊ、Ｂｉｏｌ、Ｃｈｅｍ、　、２６２．１３１７
４（１９８７）　）。

これらのリン脂質は、主に卵黄、大豆などから溶剤で抽
出し、これを分画精製することによって製造されていた
。また、リン脂質の一部は化学的にも合成されていた。

糖脂質としては、種々の生理活性をもつラクトシルセラ
ミド、グルコシドセラミド、ガングリオシドなどがある
。

一方、食生活の洋風化に伴って、肉類やバターなどの動
物性脂肪を含む食品を多量に摂取すると動物性油脂中に
含まれるコレステロールによって動脈硬化、心筋梗塞、
脳卒中などを発症するという問題が発生し、コレステロ
ール含量を低減した動物性油脂を含む食品が要望される
ようになってきている現状にある。

そこで、動物性油脂中のコレステロール含量を低減する
有効な方法として、観水性有ｌａｄ媒を用い、動物性油
脂からコレステロールを抽出、除去する方法が提案され
ている（特願平２−２５８１１号）。

この方法は主にエタノールを溶媒として用いるので、安
価で、かつ安全性の高い方法と考えられる。

しかしながら、大量に使用した抽出溶媒を蒸留して回収
する程度で、抽出液中に含まれている各種成分の回収に
ついては、全く考慮されていない現状にあった。

〔発明が解決しようとするｉＩ題）本発明者らは、上述した状況に鑑み、動物性油脂からコ
レステロールを抽出、除去するのに用いた親水性有Ｎ　
溶媒から各種成分を回収し、利用することを目的として
鋭意研究を重ねてきた結果、最近、微量成分を分離する
為に開発された遠心液々分配クロマトグラフ（Ｃｅｎｔ
ｒｉｆｕｇａｌ　Ｐａｒｔｉ　ＬｉｏｎＣｈｒｏ＋ｍａ
ｔｏｇｒａｐｈ）　（以下、ｃｐｃという）を用い、適
当な溶媒を選択することによって、抽出液中に含まれる
フォスファチジルコリン、フォスファチジルエタノール
アミン、スフィンゴミエリンなどのリン脂質画分、更に
はラクトシルセラミド、グルコシルセラミド、ガングリ
オシドなどのグリセロ糖脂質画分、コレステロールなど
のステロイド画分、短鎖脂肪酸トリグリセリド画分を効
率よく分画精製出来るとの知見を得、本発明をなすに至
、った。

従って本発明は、動物性油脂からコレステロールを抽出
、除去するのに用いた親水性有機溶媒から各脂質画分を
分画精製する方法を提供することを課題とする。

〔課題を解決するための手段〕

本発明の脂質画分の分画精製法は、動物性油脂を親水性
有機溶媒で処理して抽出した抽出物を特定の溶媒を用い
て遠心液々分配クロマトグラフにかけて各脂質画分を分
画、精製する方法に関する。

本発明における動物性油脂には、コレステロールを含む
バター、バターからクリームを分離したバターオイル、
ラード、牛脂、豚脂、羊脂、魚油、肝油などがある。ま
た、親水性有機溶媒には、エタノール、アセトン等を用
いることができるが、食品衛生上からはエタノールを用
いることが好ましい。これらの親水性有機溶媒は含水の
状態であってもよい。しかし含水率が１０容量％以上の
ものを用いることが好ましい。含水率が１０容量％以↓
２のものを使用すると脂質の回収率が低下するので好ま
しくない。抽出手段としては、回分式の抽出装置、連続
式多段向流抽出装置等による液−液抽出方式が好ましい
。

動物性油脂を、親水性有機溶媒で抽出するには、動物性
油脂を油脂の融点以上の温度で約１０分〜１時間程度接
触させた後、同温度の下に約２０分〜１時間程度静置し
て相分離させる。なお、動物性油脂の融点は、種類によ
り異なるが、一般に常温で固体を呈する油脂では３０〜
５０°Ｃで抽出し、魚油のような常温で液状を呈する油
脂では２０〜３０’Ｃで抽出することが好ましい。この
相分離によって得られる上層を親水性有ｌｌ溶媒抽出物
とする。

本発明では、このような親水性有機溶媒抽出物を遠心液
々分配クロマトグラフ（ＣＰＣ）で処理する。

ＣＰＣ処理は、例えば特開昭５９−６２３１２号公報に
記載されているように、二層に分離される二層分離液を
溶媒として使用し、そのうち一方を固定相として遠心力
により保持しつつ、他方を移動相として連続的に固定相
内を通過させて移動相内に注入された試料を分画精製す
る方法である。

本発明における親水性有機溶媒抽出物には、中性脂質、
リン脂質及びグリセロ糖脂質が含まれており、本発明で
は、これらの両分を溶媒に対する溶解度の差を利用して
ｃｐｃ処理により分画する。

ｃｐｃ処理に使用する溶媒は、通常混合溶媒が使用され
る。混合溶媒は、リン脂質、グリセロ糖脂質の分画精製
をすることが出来、安価で食品工業などに異和感のない
ものから選定される。このような観点から、飽和炭化水
素、アルコール、水よりなる混合溶媒、或いは飽和炭化
水素、エーテル、アルコール、水よりなる混合溶媒が用
いられる。

飽和炭化水素では、ペンタン、ヘキサン、ヘプタンなど
が望ましく、エーテルとしては、ジエチルエーテルが望
ましく、アルコールとしては、メタノール、エタノール
が望ましい。

またｃｐｃ処理は、下層液を固定相、上層液を移動相と
して用いる上昇法、１層液を固定相、下層液を移動相と
して用いる下降法のどちらかの分離方法を選択して行わ
れる。更に、溶出は目的物を移動相に分配させる正溶出
、もしくは固定相に分配させる反転溶出のどちらか選択
して行われる。

本発明の動物性油脂由来の脂質画分の分画、精製方法の
概略を第１図を示しながら説明する。

まず、動物性油脂を、固体の場合は、加’ＩＡＬ、で溶
融し、これに親水性有機溶媒を加えて撹拌し、抽出を行
う。次に、これを遠心分離して上層の親水性有機溶媒層
を採取し、この撹拌抽出及び遠心分離の操作を数回繰り
返し親水性有機溶媒層を集め、減圧下に濃縮乾固して親
水性有４！！ａ溶媒抽出物を得る。

この親水性有機溶媒抽出物を飽和炭化水素、アルコール
及び水よりなる溶媒、例えばヘプタン、メタノール及び
水よりなる溶媒を使用して上昇法でＣＰＣ処理を行い、
トリグリセリド・コレステロ−ル画分、リン脂質画分！
、リン脂質画分■及びグリセロ糖脂質画分に分画する。

ここで得られるトリグリセリド・コレステロール画分は
、飽和炭化水素、アルコール及び水よりなる溶媒、例え
ばヘキサン、メタノール及び水よりなる溶媒を使用して
上昇法でＣＰＣ処理を行いトリグリセリドとコレステロ
ールとに分画し、高純度のコレステロールを採取し、ま
たトリグリセリドは、飽和炭化水素、アルコール及び酢
酸よりなる溶媒、例えばヘキサン、メタノール及び酢酸
よりなる溶媒を用い上昇法でｃｐｃ処理を行って短鎖脂
肪酸トリグリセリドを得る。

一方、リン脂質画分Ｉは、飽和炭化水素、アルコール及
び水よりなる溶媒、例えばヘキサン、エタノール及び水
よりなる溶媒を用い上昇法でＣＰＣ処理を行って高純度
のＰＥ画分を採取する。

また、ＰＣ，ＳＰＭの混合画分であるリン脂質画分■は
、飽和炭化水素、エーテル、アルコール及び水よりなる
溶媒、例えばヘキサン、ジエチルエーテル、メタノール
及び水よりなる溶媒を用い上昇法でｃｐｃ処理を行って
ｐｃ画分とＳＰＭ画分とに分画し、それぞれの両分を採
取する。

本発明を実施例を挙げて具体的に説明する。

実施例１バター１５０ｇを加温し、融解したものに４５０ｄのエ
タノールを加え、長さ４０閣のテフロン製撹拌子を用い
て、５０°Ｃで２０分間、毎分５００回転で撹拌し、抽
出を行った後、毎分３０００回転、１５分間の条件で遠
心分離し、上層のエタノール層を採集し、更に同一の条
件で２回抽出を繰り返した後、親水性有機溶媒抽出物１
３５０ｄを得た。これを減圧下で濃縮、乾固して親水性
有機溶媒抽出物１１．２ｇを得た。

この親水性有機溶媒抽出！１ｈ１１．２ｇを、ヘプタン
：メタノール：水＝２００：９７：３の比率にし、その
下層を固定相とし、上層を移動相とした溶媒系を用いｃ
ｐｃに供給した。この時の運転条件は、２０°Ｃ１流速
１５．０ｄ／＋ｉｎ、容量１０，０００Ｍ１、回転数１
．６０Ｏｒ、ｐ、ｍであった。この操作によってこの両
分を正溶出でトリグリセリド・コレステロール画分１０
．７５　ｇ、リン脂質画分１１２４■、リン脂質画分■
１６３■及びグリセロ糖脂質画分２１■に分画した。

得られたトリグリセリド・コレステロール画分１０．７
５ｇをヘキサン：メタノール：水＝２００：９５：５の
比率にした溶媒を用い、その下層を固定相とし、上層を
移動相とし、ＣＰＣに供給した。この時の運転条件は、
２５’Ｃ１流速１５．Ｏａｆ／ｗｉｎ、流量４．ＯＯＯ
＃Ｉｌ！、回転数１　、５０Ｏｒｐｍであった。この操
作で正溶出でトリグリセリド１０．３ｇ、反転溶出でコ
レステロール３１２■を得た。

このトリグリセリドを、ヘキサン：メタノール：酢酸＝
５０：３０：１０の比率にした溶媒を用い、同様にして
ＣＰＣに供給した。この時の運転条件は、１５°Ｃ１流
速１０．０ｄ／ｗｉｎ、流１ｔｌ、０００ｍＮ、回転数
１．４００ｒｐＩ１１であった。この操作で正溶出で短
鎖脂肪酸（Ｃ４〜Ｃ８）トリグリセリド２．４ｇを得た
。

一方、リン脂質画分■をヘキサン：エタノール：水−２
００：９０：１０の比率にし、その下層を固定相とし、
上層を移動相とした溶媒系を用いｃｐｃに供給した。こ
の時の運転条件は、２０°Ｃ１流速３．０ｄ／ｗｉｎ、
流量５００ｄ、回転数８００ｒｐ−であった、この操作
により、正溶出でＰＨ画分９７１ｇを得た。この画分は
フォスファチジルエタノールアミン８７％及びフォスフ
ァチジルコリン１３％よりなるものであった。

また、リン脂質画分ＩＩをヘキサン：ジエチルエーテル
：メタノール：水＝１００：１００：８７：１３の比率
にし、その下層を固定相とし、上層を移動相とした溶媒
系を用いｃｐｃに供給した。この時の運転条件は、１５
°Ｃで、流速３　、０　ｔｎＲ／　ｍ　ｉ　ｎ、流量１
，５００ｍ、回転数９０Ｏｒｐｍであった。この操作に
より、正溶出でフォスファチジルコリン８２■、反転溶
出でスフィンゴミニリンフ１１１ｇを得た。

さらに、前記のようにして得られたグリセロ糖脂質画分
をシリカゲルクロマトグラフィーで分析したところ、ラ
クトシルセラミド３６％、グルコシドセラミド２８％及
びガングリオシドＤ３３２％よりなっていた。

〔発明の効果〕

本発明によると、動物性油脂の親水性有機溶媒抽出物か
らリン脂質、糖脂質、コレステロール、トリグリセリド
等生理活性物質を効率よく、高純度に分画精製すること
ができる。

従って動物性油脂からコレステロールを抽出除去に用い
た溶媒中に含まれる各種有効成分を効率よく回収するこ
とができる。

【図面の簡単な説明】

第１図は、本発明における動物性油脂の親水性有機溶媒
抽出物の分画精製方法の概略を示す図である。出　願　人　　雪印乳業株式会社

Claims

【特許請求の範囲】

（１）動物性油脂の親水性有機溶媒抽出物を、飽和炭化
水素、アルコール及び水の混合溶媒あるいは飽和炭化水
素、エーテル、アルコール及び水の混合溶媒を溶媒とし
て用いて遠心液々分配クロマトグラフにかけて脂肪酸ト
リグリセリド、コレステロール、フォスファチジルエタ
ノールアミン、フォスファチジルコリン、スフィンゴミ
エリン、及び／又はグリセロ糖脂質に分画し、これを精
製することを特徴とする動物性油脂の親水性有機溶媒抽
出物から脂質画分を分画精製する方法。
（２）動物性油脂の親水性有機溶媒抽出物を飽和炭化水
素、アルコール及び水の混合溶媒を用いて遠心液々分配
クロマトグラフにかけて脂肪酸トリグリセリド・コレス
テロール画分、フォスフアチジルエタノールアミンを主
成分とするリン脂質画分 I 、フォスファチジルコリン
及びスフィンゴミエリンを主成分とするリン脂質画分I
I及び／又はグリセロ糖脂質画分とに分画し、これを精
製することを特徴とする動物性油脂の親水性有機溶媒抽
出物から脂質画分を分画精製する方法。
（３）請求項（２）の脂肪酸トリグリセリド・コレステ
ロール画分を飽和炭化水素、アルコール及び水の混合溶
媒を用いて遠心液々分配クロマトグラフにかけて脂肪酸
トリグリセリドとコレステロールとに分画精製すること
を特徴とする動物性油脂の親水性有機溶媒抽出物から脂
質画分を分画精製する方法。
（４）請求項（２）のリン脂質画分 I を飽和炭化水素
、アルコール及び水の混合溶媒を用いて遠心液々分配ク
ロマトグラフにかけてフォスファチジルエタノールアミ
ンを分画精製することを特徴とする動物性油脂の親水性
有機溶媒抽出物から脂質画分を分画精製する方法。
（５）請求項（２）のリン脂質画分IIを飽和炭化水素、
エーテル、アルコール及び水の混合溶媒を用いて遠心液
々分配クロマトグラフにかけてフォスファチジルコリン
及びスフィンゴミエリンに分画精製することを特徴とす
る動物性油脂の親水性有機溶媒抽出物から脂質画分を分
画精製する方法。