JPH0441158B2

JPH0441158B2 -

Info

Publication number: JPH0441158B2
Application number: JP56162879A
Authority: JP
Inventors: Kuroodo Gasuku Jan; Jofuru Seruju; Osupitaru Misheru; Rooran Jatsuku
Original assignee: Roussel Uclaf SA
Current assignee: Sanofi Aventis France
Priority date: 1980-10-14
Filing date: 1981-10-14
Publication date: 1992-07-07
Also published as: FR2491922A1; EP0052028B1; US4412988A; ES506192A0; JPS5795950A; CA1169854A; ATE6148T1; FR2491922B1; ES8207129A1; DE3162181D1; EP0052028A1; PT73814B; PT73814A

Description

【発明の詳細な説明】

本発明は新規なヘキサペプチド、その製造、薬
物としてのその使用及びそれを含有する組成物に
関するものである。本発明の主題は、一般式（） Cys−Ｘ−Ｙ−Ｄ−Lys−Ｚ（）〔式中、Ｘは順序Ala−Ala又は順序Glu−His
を示し、ＹはCys又はPheを示し、ＺはＹがCys
を示すときPheを示し又はＹがPheを示すとき
Cysを示し、分子中に存在する２個の基Cysはジ
スルフイド橋を介して接続される〕の化合物並びに式（）の化合物の官能誘導体で
ある。本明細書中に使用する命名はIUPAC命名法に
従い、その規則は特にバイオケミストリー・ジヤ
ーナル、第126巻（1972）、第773〜780頁に記載さ
れている。この命名法の規則によれば、３文字の略記号の
みで表わされるペプチドは天然に存在するＬ型で
ある。これらのペプチドがＤ型で存在する場合
は、配置(D)を３文字の略記号の前に特記する。したがつて次の記号は次のα−アミノカルボン
酸を示すために使用されている： Cys：システイン Ala：アラニン Glu：グルタミン酸 His：ヒスチジン Phe：フエニルアラニン式（）のペプチドの「官能誘導体」という用
語は次のものを意味する：鉱酸又は有機酸の塩、
例えば塩酸、臭化水素酸、硝酸、硫酸、燐酸、酢
酸、トリフロオロ酢酸、蟻酸、プロピオン酸、安
息香酸、マレイン酸、フマル酸、コハク酸、酒石
酸、クエン酸、蓚酸、グリオキシル酸及びアスパ
ラギン酸、アルカンスルホン酸、たとえばメタン
若しくはエタンスルホン酸、アリールスルホン
酸、たとえばベンゼン若しくはｐ−トルエンスル
ホン酸及びアリールカルボン酸により形成される
塩；塩基の塩、好ましくはたとえば水酸化ナトリ
ウム、炭酸ナトリウム又は酸性炭酸ナトリウムの
ようなアルカリ金属から得られる塩基の塩。本発明の主題は、特にＸが順序Ala−Alaを示
す上記式（）により定義される化合物及びその
官能誘導体、並びにＸが順序Glu−Hisを示す式
（）により定義される化合物及びその官能誘導
体である。これら化合物のうち、特に次のものが考えられ
る：Ｎ−（システイニルアラニルアラニルフエニル
アラニル−Ｄ−リシル）システインの環状ジスル
フイド（１→６）及びその酢酸塩、Ｎ−（システイニルアラニルアラニルシステイ
ニル−Ｄ−リシル）フエニルアラニンの環状ジス
ルフイド（１→４）及びその酢酸塩、及びＮ−（システイニルグルタミルヒスチジルシス
テイニル−Ｄ−リシル）フエニルアラニンの環状
ジスルフイド（１→４）。さらに、本発明の主題は式（）のペプチド又
はその官能誘導体の金属錯体である。金属錯体
は、ペプチドを金属塩（たとえば金属燐酸塩）、
金属水酸化物又は金属酸化物と接触させることに
より公知の標準法で製造することができる。使用
しうる金属はたとえばコバルト、ニツケル、銅、
鉄及び好ましくは亜鉛である。金属錯体は、たとえばペプチドと金属の塩、水
酸化物若しくは酸化物とを水性媒体中で混合して
製造することができる。本発明によれば、上記式（）の化合物及びそ
の官能誘導体は、α−アミノカルボン酸の順次縮
合反応を適当な順序で行ない、その際α−アミノ
カルボン酸を封鎖基によつて保護し次いでこれら
封鎖基を除去すること、及び所望に応じ得られた
式（）の化合物を官能誘導体に変換することを
特徴とする方法により製造することができる。この種の反応を制御するには、一方のアミノ酸
のアミノ基と他方のアミノ酸のカルボキシル基と
を封鎖する必要がありかつこれら封鎖基はその後
容易に除去できねばならない。ペプチドの合成には多くの方法が完成されてい
る。使用しうる方法の一つは、ジヤーナル・オ
ブ・アメリカン・ケミカル・ソサイエテイ、第85
巻、第2149〜2154頁（1963）に記載されたメリフ
イールドの技術である。この技術によれば、たとえばエステル結合によ
りアミノ酸を固体樹脂粒子に結合させることから
出発し、ペプチドはこれら保護アミノ酸を生成す
るそばから連鎖に順次固定することにより数段階
で調製される。反応体と副生物とは過によつて
除去される。所望の順序が構成された後、ペプチドは固相支
持体から外される。本発明によれば、上記式（）の化合物及びこ
の化合物の官能誘導体は、アミノ酸を順次縮合さ
せる方法に従つて製造することができ、この場合
固相支持体を使用する。アミノ酸は任意適当な重合体に付着させること
ができ、この重合体は反応していない反応体から
容易に分離できねばならない。これは、最初の保
護アミノ酸を共有結合により結合させうる官能基
を持たねばならない。これには各種の重合体が適
しており、たとえばセルロース、ポリビニルアル
コール、ポリメタクリレート及びスルホン化ポリ
スチレンが挙げられる。後記の例で示す化合物の
製造においては、スチレンとジビニルベンゼンと
のクロルメチル化樹脂が使用される。一般的に云つて、全ての構成官能基は、それ自
体公知の原理に従つて保護することができる。 α位におけるアミノ基はたとえばｔ−ブチルオ
キシカルボニル、カルボベンゾキシ、アダマンチ
ルオキシカルボニル又はイソボルニルオキシカル
ボニル基によつて保護することができ、主として
ｔ−ブチルオキシカルボニル基が使用される。三
官能価アミノ酸は側官能基についても保護するこ
とができる。本発明の主題を構成する種々異なる
化合物を合成するにはCys、Ala、Glu、His及び
Ｄ−Lysが使用される。システインのSH基は、
たとえば４−メトキシベンジル基によつて保護す
ることができる。ヒスチジンのイミダゾール基は
たとえば２，４−ジニトロフエニル基によつて保
護することができる。グルタミン酸のγ−カルボ
キシル基はベンジルオキシ基によつて保護するこ
とができる。Ｄ−リシンのεNH₂基は２，４−ジ
クロルベンジルオキシカルボニル基で保護するこ
とができる。後記の合成例においては、第一のアミノ酸をそ
のセシウム塩により樹脂上に固定する〔ビー・エ
フ・ギシン・エルベチカ・ヒミカ・アクタ、第56
巻、第５号、第1476頁（1973）参照〕。アミノ酸はジシクロヘキシルカルボジイミド法
によつてカツプリング結合させた。ブチルオキシ
カルボニル基の封鎖解除は、塩化メチレン中のト
リフルオロ酢酸の50％溶液で行なつた。合成の終りにおいて、ヒスチジンのイミダゾー
ル基に対する２，４−ジニトロフエニル封鎖基は
メルカプトエタノールを用いて除去した。得られ
たペプチドは弗化水素酸によつて樹脂から分離
し、これは側官能基における他の全ての封鎖基を
も除去した。式（）の化合物から官能誘導体への変換は、
次のものの生成を包含することができる：たとえば前記したような１種の酸と式（）の
化合物との反応により生成される塩；たとえば水酸化ナトリウム、酸性炭素ナトリウ
ム又は水酸化カリウムのような塩基と式（）の
化合物との反応により生成される塩；たとえばメタノール、エタノール、プロパノー
ル、イソプロパノール又はブタノールのようなア
ルコールと式（）の化合物との反応により生成
されるエステル；アミド、又はアルキル基が１〜５個の炭素原子
を有する置換アルキルアミド〔公知方法による。
たとえばフーベン・ワイル・メトーデン・デル・
オルガニツシエン・ヘミー、第４版、第、１
巻、第315頁以降参照〕。ピクリン酸により遊離アミンの測定値を与える
試験は、ビー・エフ・ギシン、アナーレン・ヒミ
カ・アクタ、第58巻、第248頁（1972）に従つて
行なつた。合成ペプチドのアミノ酸の分析はベツクマン型
アミノ酸分析器によつて行なつた。上記式（）の化合物及び式（）の化合物の
官能誘導体は興味ある薬理学的性質を有する。す
なわち、特にこれらは条件回避反応の喪失を遅延
させ、学習反応の消失を遅延させ、さらに注意
力、警戒力及び記憶力を増進する。これらの性質は治療におけるその使用を正当化
し、したがつて本発明の主題はさらに薬物として
の上記式（）により定義された化合物及び医薬
上許容しうる式（）の化合物の官能誘導体であ
る。したがつて、本発明の主題は特に、式（）に
おいてＸが順序Ala−Alaを示すことを特徴とす
る上記定義の薬物及びその医薬上許容しうる官能
誘導体、並びに式（）においてＸが順序Glu−
Hisを示すことを特徴とする薬物及びその医薬上
許容しうる官能誘導体である。特に、本発明の主題は薬物としての次のもので
ある：Ｎ−（システイニルアラニルアラニルフエニル
アラニル−Ｄ−リシル）システインの環状ジスル
フイド（１→６）及びその酢酸塩、Ｎ−（システイニルアラニルアラニルシステイ
ニル−Ｄ−リシル）フエニルアラニンの環状ジス
ルフイド（１→４）及びその酢酸塩、及びＮ−（システイニルグルタミルヒスチジルシス
テイニル−Ｄ−リシル）フエニルアラニンの環状
ジスルフイド（１→４）。さらに、本発明の主題は薬物としての、上記に
定義した式（）のペプチド又はその官能誘導体
の医薬上許容しうる金属錯体である。本発明の化合物はたとえば知的若しくは神経的
無力症、記憶欠陥症、大脳若しくは小脳の血管障
害、老衰又は精神緊張の治療に使用することがで
きる。本発明の化合物は好ましくは鼻孔内、経口、非
経口、舌下又は経腸ルートで投与することができ
る。通常の投与量は問題とする症状、使用する化合
物、処置患者及び投与ルートに応じて変化させる
ことができる。１日当りの投与量は非経口ルート
の場合体重１Kg当り0.01〜500μｇであり、経口、
鼻孔内及び舌下ルートの場合は体重１Kg当り0.1
〜500mgである。本発明は、さらに、上記薬物の少なくとも１種
を活性成分として含有する医薬組成物にまで拡大
される。これら組成物は消化器系、非経口又は鼻孔内ル
ートにより投与しうるよう構成される。そのた
め、ペプチドは選択ルートによる投与に適した形
態に変換される。好ましくは、これらを適当な液
体中に溶解、懸濁又は乳化させる。これらのペプ
チドは、これを標準的補形薬と混合することによ
り経口、経腸、鼻孔内、非経口又は舌下投与に適
する形態で提供することもできる。これら医薬組
成物は固体又は液体とすることができ、人間用医
薬として現在使用されている医薬形態物、たとえ
ば普通錠、糖衣錠、圧搾錠、ゼラチンカプセル、
顆粒、坐薬、及び注射製剤として提供することが
でき、これらは常法に従つて調製される。活性成分は、これら医薬組成物中に通常使用さ
れる補形薬、たとえばタルク、アラビヤゴム、乳
糖、殿粉、ステアリン酸マグネシウム、ココア
脂、水性若しくは非水性ベヒクル、動物性若しく
は植物性の脂肪物質、パラフイン誘導体、グリコ
ール、各種の湿潤剤、分散剤又は乳化剤及び保存
料に混入することができる。特に興味ある製剤は、本発明のペプチドをたと
えば上記したような金属錯体に変換することによ
り長期活性を持たせた形態物にして得られるもの
である。後記に示す例ではメリフイールドの固相技術の
使用を例示するが、上記したようにペプチド製造
用のその他標準的技術をも本発明の主題を構成す
る化合物の製造に使用することができる。本発明の化合物は、たとえば単離アミノ酸若し
くはペプチドを適当に保護し、これをカルボン酸
官能基を活性化する物質により単離アミノ酸若し
くはペプチドの適当に保護されたものとカツプリ
ング結合させて製造することができ、活性化物質
についてはフーベン・ワイル、メトーデン・デ
ル・デル・オルガニツシエン・ヘミー、第15／２
巻「ペプチドの合成」第２〜364頁（1974）、ジヨ
ージ・チーメ出版、ストツトガルトに記載されて
いる。前記活性化物質としてはたとえばジシクロ
ヘキシルカルボジイミド、Ｎ−エチル−N′−（ジ
メチルアミノプロピル）−カルボジイミド、ｏ−
ニトロフエノール、ｐ−ニトロフエノール又はペ
ンタクロルフエノールが触媒物質の添加と共に又
は添加なしに使用される。下記に示す例においては、次の略記号を使用し
た： Boc：ｔ−ブチルオキシカルボニル ₄MeOBn：メトキシベンジル２，４−DNP：２，４−ジニトロフエニル OBn：ベンジルオキシ DMF：ジメチルホルムアミド DCC：ジシクロヘキシルカルボジイミド HPLC：
高性能液体（調製用）クロマトグラフイー以下の例により本発明を説明するが、これらに
限定されるものではない。例１：Ｎ−〔システイニルアラニルアラニル
フエニルアラニル−Ｄ−リシル〕システイン酢
酸塩の環状ジスルフイド（１→６）、式

【式】のペプチドBoc−（Ｓ−４−MeOBn）−Cys−Ｒ（Ｒ
＝樹脂）樹脂に対する第一のアミノ酸の固定は、１％の
クロルメチル化ジビニルベンゼンを含有するポリ
スチレン樹脂（樹脂の容量：樹脂１ｇ当り
0.87meq）10ｇ上で、BocS（４−MeOBn）Ｌ−
システインのセシウム塩4.73ｇを用いてDMF200
ml中にて行なつた〔前記セシウム塩は、BocS（４
−MeOBn）Ｌ−システインとエタノールと水と
炭酸セシウムとをPH７にて混合し、周囲温度で１
時間攪拌して調製した〕。全体を60℃にて18時間
攪拌し、次いで樹脂を分離し、200mlのDMFで３
回、200mlのメタノールで２回及び200mlの塩化メ
チレンで３回洗浄し、次いで樹脂を滅圧乾燥しそ
して最終樹脂１ｇ当り封鎖Ｌ−システイン
0.4meqの分析値を有する樹脂13ｇを得た。 Cys−Ｒ上記で得られた樹脂13ｇを塩化メチレン中のト
リフルオロ酸の50％溶液150mlで順次２回10分間、
塩化メチレン150mlで２回、イソプロパノール150
mlで１回、塩化メチレン150mlで２回、塩化メチ
レン12％を含有するトリエチルアミン150mlで10
分間２回、塩化メチレン150mlで２回、イソプロ
パノール150mlで１回、メタノール150mlで１回及
び塩化メチレン150mlで６回処理した。 N〓−Boc−N〓（２，４−ジクロルベンジルオ
キシカルボニル）Ｄ−リシン−Cys−Ｒ上記で得られたCys−Ｒに、塩化メチレン150
ml中に溶解させた15.8モルのN〓−Boc−N〓（２，
４−ジクロルベンジルオキシカルボニル）Ｄ−リ
ジンを加え、次いで塩化メチレン中のDCC18ml
を加えた。10分後にカツプリング結合が完結し
（ニンヒドリン試験陰性）、次いで全体を塩化メチ
レン150mlで２回、メタノール150mlで１回、イソ
プロパノール150mlで１回及び塩化メチレン150ml
で５回洗浄した。Ｄ−Lys−Cys−ＲＤ−Lysを封鎖解除したが、操作は上記Cysの
封鎖解除と同様に行なつた。袋のカツプリング次いでカツプリング結合と洗浄と封鎖解除と
を、上記の第二のアミノ酸Ｄ−Lysのカツプリン
グ、洗浄及び封鎖解除と同様にして、次の保護ア
ミノ酸につき次の順序で行なつた： − BocL−フエニルアラニン − BocL−アラニン − BocL−アラニン − BocS−（４−メトキシベンジル）Ｌ−システ
イン最終のアミノ酸であるシステインを封鎖解除し
た後、16.8ｇの最終樹脂を得た。樹脂からのペプチドの分離弗化水素酸反応器中に前記で得られた樹脂16.8
ｇとアニソール18mlとを入れ弗化水素酸80mlを濃
縮し、反応器の内容物を０℃にて１時間攪拌し、
減圧蒸発させ、樹脂を酢酸エチル200mlで３回洗
浄し、次いでペプチドCys−Ala−Ala−Phe−Ｄ
−Lys−Cysをこの樹脂から酢酸20mlで順次４回、
水20mlで４回及び水50％含有の酢酸20mlで４回抽
出し、抽出物を合して凍結乾燥し、かくしてCys
−Ala−Phe−Ｄ−Lys−Cys酢酸塩3.9ｇを得た。
生成物を直ちに水100ml中に溶解させ、過しそ
して液を集めてこれを直ちに次の段階に使用し
た。ペプチドの環化フエリシアン化カリウム４ｇを含有する水500
mlに上記で得られたペプチド溶液を1.5時間かけ
て滴加し、その間PHを1Mアンモニアで7.5に保つ
た。得られた黄色溶液を次いでダウエツクス樹脂
（C₁型）500ｇに通し、この樹脂を２回蒸留水300
mlで２回洗浄し、得られた無色溶液を凍結乾燥し
て粗製

【式】 6.6ｇを得た。精製粗生成物を、C₁₈に炭化水素結合を有するシリ
カのカートリツジを通して高性能液体調製クロマ
トグラフイー（HPLC）により精製し、この場合
溶出は次のものを用いて順次に行なつた：１１当り酢酸アンモニウム３ｇを含有するメ
タノール／２回蒸留水混合物（15：85）の10
、及び２１当り酢酸アンモニウム３ｇを含有するメ
タノール／２回蒸留水混合物（20：80）の2.5
。最終溶出物を凍結乾燥して

【式】を得、これを２回蒸留水で数回溶解させ、恒量になるま
で凍結乾燥し、かくして予期した精製ペプチド
1.91ｇを得た。アミノ酸分析理論値：Cys：Ala：Phe：Lys＝２：２：１：
１実測値：〃＝2.02：2.12：1.02：
１〔α〕_D（水中）＝−5° 円偏光二色性（水中）：max220nmD〓＝＋5.8 max270nmD〓＝−0.25 例２：Ｎ−〔システイニルアラニルアラニル
システイニル−Ｄ−リシル〕フエニルアラニン
酢酸塩の環状ジスルフイド（１→４）

【式】CH₃ COOH。 Boc−Phe−Ｒ（Ｒ＝樹脂）樹脂に対する第一のアミノ酸の固定は、例１の
化合物の製造において使用した樹脂と同じジビニ
ルベンゼン１％含有のポリスチレン樹脂7.5ｇ上
にて、セシウム塩Boc−Phe−OC_s4.46ｇを用い
て行ない、その際攪拌はDMF 95ml中で55℃にて
一晩行なつた。 Phe−Ｒ保護基Bocを、塩化メチレン中50％溶液として
のトリフルオロ酢酸による10分間の作用で除去し
た。ピクリン酸試験で測定した樹脂のPhe含量は
樹脂１ｇ当り0.76meqであつた。次いでこの樹脂
をDMFと塩化メチレンとイソプロパノールとで
順次に洗浄し、最後に塩化メチレンで洗浄した。 Boc−Ｄ−Lys−Phe−Ｒ次いでN〓−Boc−N〓（２，４−ジクロルベンジ
ルオキシカルボニル）−Ｄ−Lys4.49ｇのカツプリ
ング結合を、塩化メチレン中のDCCの１モル溶
液13mlを用いて行なつた。カツプリング反応は１時間で完結し（ニンヒド
リン反応が陰性となる）、塩化メチレン150mlとメ
タノール150mlとイソプロパノール150mlと塩化メ
チレン150ml５回とにより順次洗浄した。 Boc基を、塩化メチレンの50％溶液としてのト
リフルオロ酢酸による10分間の作用で除去し、次
いで残留物をDMFと塩化メチレンとメタノール
とで再び洗浄した。 Boc（Ｓ−4MeOBn）−Cys−Ｄ−Lys−Phe−
Ｒ次いでカツリング反応を、塩化メチレン中の
DCCの１モル溶液13ml中においてBoc−（Ｓ−
4MeOBn）−Cys3.41ｇを固定させることにより
行なつた。１時間後、ニンヒドリン試験は陰性となつた。
次いで全体を20時間攪拌下に放置した。次いで、
洗浄、Bocの除去及び洗浄を２回の従前のカツプ
リング反応後におけると同様に行なつた。後のカツプリング次いでカツプリング、洗浄、封鎖解除及び洗除
を前段階におけると同様に行ない、この場合次の
保護アミノ酸を順次に使用した： −Boc−Ala（２回） −Boc−（Ｓ−４−MeOBn）−Cys. かくして生成ヘキサペプチドを担持する樹脂14.5
ｇが得られた。 Cys−Ala−Ala−Cys−Ｄ−Lys−Phe−Ｒ樹脂からのペプチドの分離（側鎖の保護解除
を伴う）上記で得られた樹脂14.5ｇを弗化水素酸反応器
中において弗化水素酸で加水分解した。ペプチド樹脂14.5ｇとアニソール14.5mlとを反
応器中に入れ、内容物を約−80℃にて減圧下に濃
弗化水素酸により100mlとなし、全体を０℃で45
分間攪拌し、減圧下で90分間蒸発させ、樹脂を酢
酸エチルで洗浄した後にペプチドを抽出しそして
蒸留水と酢酸とにより交互に洗浄を行ない、過
した後この液を凍結乾燥して4.2ｇのCys−Ala
−Ala−Cys−Ｄ−Lys−Phe酢酸塩を得た。環化得られたペプチドを水350ml中で攪拌し、過
してこの液をフエリシアン化カリウムの0.02M
溶液450ml中に注ぎ入れ、その間PHを1Mアンモニ
アにより6.5〜７に保つた。次いで酢酸によりPH
を５となし、この溶液をダウエツクス樹脂（C1
型）と共に攪拌し、全体を過した後、25℃にて
減圧下で乾固させ、次いで水により溶解させ、凍
結乾燥して６ｇの

【式】酢酸塩を得た。精製粗生成物をシリカ−C₁₈のカートリツジを備え
るウオーター調製500型装置でHPLCにより精製
し、生成物を含有するフラクシヨンを次のメタノ
ール／水混合物（全て１当り３ｇの酢酸アンモ
ニウムを含有する）で順次に溶出させた：１メタノール／水混合物（25：75）２メタノール／水混合物（21：79）３メタノール／水混合物（22：78）４メタノール／水混合物（23：77）予期した純生成物0.365ｇが得られた。アミノ酸の分析理論値：Cys：Ala：Cys：Phe＝２：２：１：
１実測値：〃＝1.96：2.06：1.08：
１〔α〕_D＋16℃（Ｃ＝0.5％、過水溶液）円偏光二色性（水中）：max211nmD〓＝＋4.7 max229nmD〓＝−6.0 max285nmD〓＝＋0.3 例３：Ｎ−〔システイニルグルタミルヒスチ
ジルシステイニル−Ｄ−リシル〕−フエニルア
ラニンの環状ジスルフイド（１→４）、

【式】 Boc−Phe−Ｒ（Ｒ＝樹脂）例１の化合物を製造するのに使用したものと同
じクロルメチル化ジビニルベンゼン１％を含有す
るポリスチレン樹脂５ｇを固体支持体として使用
した。第一のアミノ酸Pheの縮合は、DMF50mlに溶
解させたBoc−Phe−OC_s2.978ｇを使用して行な
つた。全体を50℃にて攪拌下に20時間加熱した。
Pheの封鎖解除は例１と同様に行なつた。後のカツプリング次いで順次のカツプリングを例１の化合物の製
造におけると同様に行ない、次の保護アミノ酸を
順次に使用した： − N〓−Boc−N〓（２，４−ジクロルベンジルオ
キシカルボニル）−DLys （操作は例１と同様
に行なつた）、 − Boc−（Ｓ−４−MeOBn）−Cys （操作は
例１と同様に行なつた）、 − αBoc−（２，４−DNP）−His（αBoc基は塩
化メチレン中に50％トリフルオロ酢酸の作用に
よつて除去し、２，４−ジニトロフエニル基は
合成の終末時に下記のようにして２−メルカプ
トエタノールによつて除去した）、 − αBoc−Glu（OBn） − Boc−（Ｓ−４−MeOBn）−Cys かくして10ｇのCys−Glu−（２，４−DNP）−
His−Cys−Ｄ−Lys−Phe−Ｒが得られた。 Hisの２，４−DNPの封鎖解除上記の樹脂全部とDMF100mlと２−メルカプト
エタノール100mlとを混合し、トリエチルアミン
によりPH８に調整して周囲温度で攪拌下に18時間
放置しそして樹脂を分離し、DMFと酢酸エチル
と塩化メチレンとメタノールと塩化メチレンとで
洗浄し、減圧下で乾燥して樹脂に結合された予期
へキサペプチド9.75ｇを得た。樹脂からのペプチドの分離上記の生成物4.875ｇとアニソール５mlと再蒸
留弗化水素酸50mlとを攪拌下に０℃／＋５℃にて
45分間混合し、弗化水素酸とアニソールとを減圧
下で除去し、樹脂を酢酸エチルで洗浄し次いで生
成物を純酢酸及び次いで水により洗浄して回収
し、過してこの液を凍結乾燥し、かくして
2.143ｇのCys−Glu−His−Cys−Ｄ−Lys−Phe
酢酸塩を得た。環化操作は例２における上記環化段階と同様に行
い、1.704ｇの粗製の予期生成物を得た。精製粗生成物をカルボキシメチルセルロースで精製
した。粗生成物をPH４の酢酸アンモニウムの0.025M
溶液に溶解し、この溶液をカラムに通し、溶出を
PH４の酢酸アンモニウムの0.025M溶液及び次い
でPH４の酢酸アンモニウムの0.05M溶液によつて
行なつた。凍結乾燥後、422mgの予期ペプチドが得られた。アミノ酸の分析理論値：Cys：Glu：His：Ｄ−Lys：Phe＝
２：１：１：１：１実測値：〃＝1.6：１：1.02：
1.12：1.12 〔α〕_D（Ｃ＝0.5％、水中）＝＋11°±2° 円偏光二色性（水中）：max222nmD〓−2.8 max260nmD〓−0.2 薬理学的検討陰性の反射増強を伴う活動回避の学習喪失に対
する作用使用した方法と装置はデ・フイードにより記載
されている〔『プロシーデイングス・オブ・ザ・
ソサエテイ・フオア・エクスペリメンタル・バイ
オロジー・アンド・メデイスン（Proceedings
of the Society for Experimental Biology and
Medcine）』、第122巻、第28〜32頁（1966年）〕。
ラツトにおいて条件づけられた回避反応の喪失を
遅延させ、学習反応の消失を遅延させる効果を有
する化合物は、人間の注意力、警戒力若しくは記
憶力を増進させる作用を有し、知的若しくは神経
的無力症、記憶欠陥症、大脳若しくは小脳の血管
障害、老衰又は精神緊張の治療に用いることがで
きる。学習は60ワツトランプ（条件刺戟：CS）と柱
と75ボルトの痛撃（非条件刺戟：UCS）を与え
うる電気刺戟器に連結した感電性床部とを備えた
箱内で行なつた。条件刺戟（CS）を５秒間だけ与え、次いで動
物が柱にへばりつくまで非条件刺戟（UCS）を
与え、かくして求める回避反応を得た。動物が条
件刺戟に応答する場合は、条件反射（CR）が得
られている。 60秒間の間隔で10回の試験を３日間にわたり毎
日行なつた。非条件刺戟（UCS）の抑圧により
得られた学習喪失の検査は、少なくとも７回の条
件反射（CR）を示す動物につき、２時間の間隔
で３回の試験において４日目に行なつた。化合物は、学習喪失の第一回試験の直後に、燐
酸塩／亜鉛錯体として５匹のラツト群に皮下ルー
トにて注射した。その結果を、対照動物群につき
得られた結果と比較した。化合物注射の２時間後及び４時間後における学
習喪失期間中の条件反射の発生を、処理前の第一
回喪失試験で観測された条件反射の回数と対比し
て変化％で表わした。次の結果が得られた：

【表】結論対照動物で観測された結果と比較し、本発明の
化合物は反射増強の不存在の期間中に現われる学
習喪失を遅延させることが判る（反射増強は陰性
の反射増強であつて非条件刺戟（UCS）により
構成される。）本発明の化合物の致死薬量DL₀をマウスに腹腔
内経路及び経口で投与することによつて試験す
る。 DL₀とは８日間何ら死亡を引き起こさない最大
薬量である。本発明の例１の化合物についての結果を注射し
た化合物の動物１Kg当たりのmg数で示す。次の結
果が得られた。

【表】この結果は、本発明の化合物に急性毒性がない
ことを示す。

Claims

【特許請求の範囲】１一般式（） Cys−Ｘ−Ｙ−Ｄ−Lys−Ｚ（）［式中、Ｘは順序Ala−Ala又は順序Glu−His
を示し、ＹはCys又はPheを示し、ＺはＹがCysのときPheを示し又はＹがPheを
示すときCysを示し、分子中に存在する２個のCys基はジスルフイド
橋を介して接続される］の化合物並びに前記式（）の化合物の鉱酸若し
くは有機酸との塩及び塩基との塩から選択される
官能誘導体。２Ｘが順序Ala−Alaを示す特許請求の範囲第
１項記載の化合物。３Ｘが順序Glu−Hisを示す特許請求の範囲第
１項記載の化合物。４Ｎ−（システイニルアラニルアラニルフエニ
ルアラニル−Ｄ−リシル）システインの環状ジス
ルフイド（１→６）及びその酢酸塩である特許請
求の範囲第１項記載の化合物。５Ｎ−（システイニルアラニルアラニルシステ
イニル−Ｄ−リシル）フエニルアラニンの環状ジ
スルフイド（１→４）及びその酢酸塩である特許
請求の範囲第１項記載の化合物。６Ｎ−（システイニルグルタミルヒスチジルシ
ステイニル−Ｄ−リシル）フエニルアラニンの環
状ジスルフイド（１→４）である特許請求の範囲
第１項記載の化合物。７一般式（） Cys−Ｘ−Ｙ−Ｄ−Lys−Ｚ（）［式中、Ｘは順序Ala−Ala又は順序Glu−His
を示し、ＹはCys又はPheを示し、ＺはＹがCysのときPheを示し又はＹがPheを
示すときCysを示し、分子中に存在する２個のCys基はジスルフイド
橋を介して接続される］の化合物並びに前記式（）の化合物の鉱酸若し
くは有機酸との塩及び塩基との塩から選択される
官能誘導体の製造方法であつて、固相支持体を用いて対応するα−アミノカルボ
ン酸の順次縮合反応を適宜順序で行ない、その際α−アミノカルボン酸を封鎖基によつて
保護し、次いでこれら保護基を除去し、環化を実施し、得られる式（）の化合物を所望に応じて前記
官能誘導体に変換することを特徴とする前記製造方法。８一般式（） Cys−Ｘ−Ｙ−Ｄ−Lys−Ｚ（）［式中、Ｘは順序Ala−Ala又は順序Glu−His
を示し、ＹはCys又はPheを示し、ＺはＹがCysのときPheを示し又はＹがPheを
示すときCysを示し、分子中に存在する２個のCys基はジスルフイド
橋を介して接続される］の化合物又は前記式（）の化合物の鉱酸若しく
は有機酸との塩及び塩基との塩から選択される官
能誘導体の少なくとも１種を有効量で含有する、
記憶欠乏症の治療用の製薬組成物。