JPH0448263A - カテコールアミンの分析方法および分析装置 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ［産業上の利用分野］ 本発明は生体液中のカテコールアミンの分析方法に係わ
り、特に試料生体液中の残存蛋白等の分析に不要な共存
成分を除去する分析方法並びに分析装置に関する。

［従来の技術］ カテコールアミンはエピネフリン（Ｅ）、ノルエピネフ
リン（ＮＥ）、　　ドーパミン（ＤＡ）等の総称であり
、副腎髄質ホルモンや交感神経伝達物質として重要な働
きをしている。そして、褐色細胞腫や交感神経芽細胞腫
の診断、治療効果の判定のために血液や尿などの生体液
中のカテコールアミンが測定されており、臨床医学的に
も極めて重要な要素である。

しかし、生体液中のカテコールアミンの濃度は低く、そ
の測定には高感度と高選択性を備えたものが要求される
。こうした分析、測定に最も適したものとして高速液体
クロマトグラフィ　（ＨＰＬＣ）が広く用いられている
。

前記ＨＰＬＣの検出方法には電気化学検出法や蛍光法が
知られているが、前者は特異性にや）欠けるので、カテ
コールアミンと不要成分の分離検品が困難である〔臨床
検査、　３２．　Ｎｏ、ｌ　２．第１５２２〜１５２７
頁（１９１１１８年１１月）Ｌ後者はトリヒドロキシイ
ンドール（ＴＨＩ）法とジフェニルエチレンジアミン（
ＤＰＥ）法があるが、ＴＨＩ法はドーパミン（ＤＡ）の
感度が低く血中レベルの測定が困難であるためＤＰＥ法
が一般に用いられている。

また、酸処理アルミナを用いてカテコール化合物を抽出
するアルミナ抽呂法、陽イオン交換カラムによりアミノ
化合物等のイオンを吸着溶出させる陽イオン交換法、硼
酸ゲルを用いる硼酸ゲル法などがある。

［発明が解決しようとする課題］ 前記方法によるカテコールアミンの回収率は、陽イオン
交換法が約８５％、硼酸ゲル法が６０〜８０％、アルミ
ナ抽呂法が６０〜７ｏ％であり、いずれの方法も不十分
であった。

これらの方法においては、試料生体液の前処理（除蛋白
操作）による測定誤差も含まれている。

こうしたカテコールアミンの分析には、試料生体液の保
存方法も含め多くの工程と複雑な操作が必要なために、
高度に熟練したオペレータが求められていた〔ジャーナ
ル　オブ　クロマトグラフィ。

３４４、第６１〜７０頁（１９８５年）〕。

前前記従来術は、いずれもカテコールアミンの回収率が
低く（８５％以下）、再現性も悪いので高精度の分析法
としては不十分である。また前処理における蛋白の除去
（除蛋白率９９％以上）が容易でなく、従って、カテコ
ールアミン回収率の最も高い前記陽イオン交換カラム法
においても、該カラムの充填剤がスチレン−ビニルベン
ゼン系ポリマゲルであるため、該充填剤に試料生体液中
の残存蛋白が疎水結合によって吸着され、カテコ−ルア
ミンの完全な吸着を妨げるためにカテコールアミンの回
収率が向上しないと云う問題がある。

さらにまた、試料生体液中のカテコールアミン以外の陽
イオン性成分や中性物質を吸着して、クロマトグラム上
に不要なピークとなって現われ、カテコールアミンのピ
ークと重なって分析を妨害するなどの問題がある。

本発明の目的は、プレカラムを用い、該カラムでの蛋白
や不要共存成分の吸着を防ぎ、これらのクロマトグラム
上のピークを低減してカテコールアミン分析の精度を向
上した分析方法、並びに該分析装置を提供することにあ
る。

［課題を解決するための手段］ 前記目的を達成する本発明の要旨は下記のとおりである
。

試料生体液中の蛋白成分を除く工程。

前記除蛋白試料生体液に必要量の誘導体（ラベル）化試
薬を添加し、該液中のカテコールアミンをラベル化する
工程。

前記ラベル化カテコールアミンを含む試料生体液を、表
面に疎水性基を有するメタクリレート系ポリマゲルを充
填したプレカラムに導入し、該ポリマゲルに前記ラベル
化カテコールアミンを吸着させ、分析の不要共存成分を
前処理液により洗浄、除去する工程、 溶離液により前記プレカラムに吸着されているラベル化
したカテコールアミンを離脱させ、有機シラン処理され
たシリカ系ゲルを充填剤とする分離カラムに導入する工
程、 前記分離カラムに吸着させたラベル化カテコールアミン
を溶離液で展開し、検呂器により検出する工程、 を含むことを特徴とするカテコールアミンの分析方法、
並びに該装置。

本発明においては、除蛋白後の試料生体液中の残存蛋白
が、前処理用のプレカラムに吸着されないように該プレ
カラムの充填剤として、母材が親水性のメタクリレート
系ポリマゲルの表面に疎水性基を有するゲルを用いる。

これによって疎水性の蛋白の吸着を防止した。即ち、プ
レカラムでカテコールアミンと残存蛋白成分を分離した
ことにある。

前記メタクリレート系ポリマゲル表面の疎水性基として
は、炭素数１〜６個のアルキル基、フェニル基がよい。

なお、プレカラムは、ゲルろ過クロマトグラフィの原理
である、 ＶＭ　＝　　Ｖｏ十Ｖｉ （但し、ｖＭ二カラム内の全移動層容量ｖｏニゲル粒子
外部容量 ｖｉミニゲル子内部容量） に基づき、その大きさを内径４ｍｍＸ長さ１０ｍｍとし
た場合、内容積ＶＡＩは１２６μρとなる。

これによって、該ポリマゲルの粒径、ボアーサイズ等を
選定し、前記残存蛋白をはじめ不要成分物質の吸着を抑
制することができる。

本発明の前記ポリマゲルとしては粒径５〜５０μｍ、ボ
アーサイズ５０〜５００人のものが好ましい。

［作用］ クロマトグラム上のカテコールアミンのピークを妨害す
るものが少ないのは、前記ポリマゲルの表面の疎水性基
が逆相クロマトグラフィと同様に作用しカテコールアミ
ンを吸着、濃縮するためである。但し、上記疎水性基は
逆相クロマトグラフィで用いられる吸着ゲル、例えば、
オクタデシルシラン化シリカゲルのように分子鎖が大き
くないので比較的低吸着能であるために、蛋白やその他
の不要成分物質の吸着が少なく、前処理液によって容易
に洗浄、除去できるためと考える。

［実施例コ 本発明を実施例により具体的に説明する。

〔実施例１〕 まず、本発明の分析工程を示す。

工程１：生体液中のカテコールアミンの安定化試料生体
液としては、ＥＤＴＡ採血による血漿を用いた場合につ
いて説明する。

初めに２００ｍＭ硼酸バッファ（ｐＨ：　７．３）。

１ｍＭアスコルビン酸、１ｍＭ　　ＥＤＴＡからなる液
を！ｇＩ製し、該液６００μＱを前記試料生体液６００
μΩに加えて十分混合する。

工程２：除蛋白 上記工程１で得た試料溶液を分画分子量が１万の限外ろ
過膜（アミコン社製Ｃｅｎｔｒｉｃｏｎ−１０）を用い
て遠心分離（２０００Ｇ、２０分）を行い、ろ液をカテ
コールアミン分析試料（以下サンプルと云う）とする。

工程３：カテコールアミンのラベル化 ラベル化（誘導体化）試薬として、２０ｍＭ　　１゜２
−ジフェニルエチレンジミン（１，２−ＤＰＥ）。

１２ｍＭフェリシアン化カリウム、１２ｍＭモリブデン
酸アンモニウムおよび４０％アセトニトリルからなる溶
液を調製する。

該試薬５００μΩと前記工程２で得たサンプル５００μ
Ωとを混合し、４５℃、３分間ラベル化反応を行い、速
やかに次の工程に移す。

工程４：プレカラムによる吸着、濃縮 前記工程３で得たラベル化カテコールアミンを含むサン
プルをプレカラムに導入しプレカラム中の前記疎水性基
を有するアクリレート系ポリマゲル（三菱化成製：Ｂｕ
ｔｙｌ−ＣＱＰ−３０Ｓ、疎水性基がブチル基、ボアー
サイズ３００人）に吸着して濃縮すると同時に、不要な
共存成分を前処理液で洗浄、除去する。

なお、本実施例においてはプレカラムサイズは内径４ｍ
ｍＸ長さｌＱｍｍである。また、サンプルの移送、吸着
および洗浄には５０ｍＭ１ｉｌｌ酸、０゜１ＭＮａＣＡ
、１ｍＭ　　ＥＤＴＡから成る前処理液を用いた。この
前処理液をプレカラムに２ｍΩ流し、サンプル中のラベ
ル化カテコールアミンを濃縮すると共に、不要成分を洗
浄、除去した。

工程５：分析 前記プレカラムに吸着されているラベル化カテコールア
ミンを、溶離液で分離展開してクロマトグラフィ分析を
行う。

本実施例の溶離液はアセトニトリル／メタノール／水の
容積比が５／２１５溶液（５０ｍＭ硼酸バッファ、１０
ｍＭドデシルスルホン酸ナトリウム（ＳＤＳと云う）〕
を用いた。

なお１分離カラムは内径４　、６　ｍ　ｍ　Ｘ長さ８０
ｍｍのものに、シリカ−〇ＤＳ（粒径３μｍ）を充填し
たものである。また、送液流速は前処理液および溶離液
共に１　ｍ　Ｑ　／分である。

工程６：クロマトグラム 分離カラムで分離されたラベル化カテコールアミンは蛍
光々度肝（日立製作所製：Ｆ−１０５０）により励起波
長（Ｅｘ）３４５ｎｍ、モニタ波長（Ｅｍ）４８５ｎｍ
で検出し、カテコールアミンの定量分析を行った。

以上の方法で、ＮＥ、ＥおよびＤＡをそれぞれ１　ｐ　
Ｍ　／　ｍ　Ｑを含む標準サンプルを測定し、その測定
値を用いて濃度計算する外部樟準法によって求めた。

その結果、再現性を示すＣＶ　（４１準偏差ＳＤ／平均
値Ｘ）値は４％以下、添加回収率９６％以上と優れてお
り、分析に要する時間も３分以内と高速分析を行うこと
ができた。なお、本実施例により得られたクロマトグラ
ムを第２図に示す。

〔実施例２〕 本発明のカテコールアミン分析装置の流路系統図の一例
を第１図に示す。

本システムは、オートサンプラ１と、データ処理装置３
３を備えた分析部１９とで構成されている。

オートサンプラ１のサンプルステージ３にはサンプルラ
ック２が装着され、該サンプルラックには各種の試料４
と、蛍光ラベリング用の反応試薬５、内部標準溶液６．
標準サンプル７がそれぞれの容器に収容されて装着され
ている。サンプルとしての血漿や尿などは予め前記工程
１．２で除蛋白処理したものを用いる。

また、サンプルステージ３の近傍には反応容器８、ノズ
ル洗浄槽９、ドレインポート１０、注入ポート１１が併
設されている。ノズル１３の駆動機構１２はｘ、ｙ、ｚ
方向に自在に駆動できる機能を有し、ノズル１３を縦横
上下自在に駆動して、前記サンプルを始め各容器や各ポ
ート上に移動させることができる。

ノズル１３はフッ素樹脂（ポリテトラフルオロエチレン
）製の管１４で三方弁１５を介して、分注ポンプ１６お
よび洗浄液１７の容器に連結されている。

分注ポンプ１６はパルスモータで翻動するシリンジポン
プを使用している１反応容器恒温槽１８は反応容器８を
所定の温度に保つため温度センサを備え、また、サンプ
ルステージ３には冷却装置が組込まれており、サンプル
ランク２上のサンプルや試薬を低温で保持できるよう温
度センサと制御装置により温度制御される。

分析部１９は、サンプルの濃縮と不純物除去を行なうプ
レカラム系、サンプル成分の分離を行なう分離カラム系
、検出器およびデータ処理部からなる。

プレカラム系では、前処理液２０がポンプ２１により一
定流速で送液され、サンプルインジェクタ２２を経由し
てプレカラム２３に流入する。サンプルインジェクタ２
２には、オートサンプラ１の注入ボート１１から注入さ
れたサンプルの所定量を計量して分析部に導入する計量
管２４が設けられている。プレカラム２３はその温度を
所定温度に保持する恒温槽が設けられている。

分離カラム系では、溶離液２５がポンプ２６により一定
流速で送液され、カラム切換／＜ルブ２８を経由して分
離カラム２９に流入する。カラム切換バルブ２８を切換
えることにより、溶離液はプレカラム２３を経て流れ、
プレカラムで処理されたサンプルを分離カラム２９に移
送する０分離カラム２９は、所定の温度に保持する恒温
槽が設けられている。

検出器３１は、分離カラム２９から溶出するサンプル成
分の蛍光強度を測定する蛍光光度計でフローセル３２を
有している。

データ処理部は、検出器３１の測定結果を演算処理する
データ処理装置３３、各種センサの測定値の演算処理、
メモリおよび各部装置の制御を行なうＣＰＵ３４、出力
プリンタ３５、ＣＲＴ３６等を備えている。なお、切換
コック３７．３８は、前処理液２０、溶離液２５、ポン
プ２１．２６内の液を必要に応じて排出できるように設
けられている。

第３図に分析工程のフローチャートを示す。該フローに
基づき９本実施例の分析方法について述べる。

（１）反応容器洗浄 ノズル１３を反応容器８の位置に移動し、分注ポンプ１
６を即動して洗浄液１７を注入する。注入量は反応容器
の容量より多量に注入し、余剰の洗浄液はオーバーフロ
ーさせドレインボート１０から排出する１以上の動作を
数回（例えば３回）繰り返し、反応容器８内を洗浄する
。

管１４内に空気が有る場合にはノズル１３をドレインボ
ート１０に移動し、洗浄液の吸入吐出を数回行なうこと
によりノズル内の空気を追い出す。

（２）サンプル分注 ノズル１３を分析すべきサンプルが入った試料４の位置
に移動し、所定量のサンプルを吸入する。

また、この際、カラム等の装置全体の回収率の変動を補
正するために、内部標準液６（本実施例では、イソプロ
テレノールを使用）を同様の操作で吸入する。

ノズル１３を反応容器８の位置に移動させ、吸入したサ
ンプルを反応容器８に分注する。

（３）ノズル洗浄 ノズル１３をドレインボート１０に移動し、洗浄液を吐
出して、ノズル内壁に付着しているサンプルを洗い出し
た後、ノズル洗浄槽９に移動し槽内に降下させて、洗浄
液を吐出しノズル尖端外側を洗浄する。

（４）試薬分注混合 ノズル１３をラベル化用の反応試薬５の位置に移動し、
該試薬を所定量吸入する。

ノズル１３を反応容器８の位置に移動させ、吸入した反
応試薬を反応容器に注入し、先に注入したサンプルと混
合する。混合の方法は空気吐出による方法、外部からの
振動、撹拌等による方法があるが、低粘性液体であれば
、高速吐出することにより混合される。

（５）反応 上記サンプルと反応試薬の混合液を反応容器８内で所定
時間反応させ、サンプルの誘導体化（うベル化）を行な
う。

（６）サンプル導入 前記反応が終了したラベル化サンプルは、ノズル１３で
吸入し注入ボート１１に移動してサンプルインジェクタ
２２の計量管２４に導入する。次いでサンプルインジェ
クタ２２を切換え、前処理液２０を流入することにより
ラベル化サンプルはプレカラム２３に送られる。

（７）濃縮、洗浄 プレカラム２３に移送されたラベル化サンプルは、前記
アクリレート系ポリマゲルによって吸着、濃縮させると
共に、分析の妨害となる残存蛋白等の不要成分物質を前
処理液を流すことによって排出口３９から排呂する。

（８）サンプル移送 カラム切換バルブ２８を切換えて、流路４０．４１間に
プレカラム２３を連結し、溶離液２Ｓをプレカラム２３
を経由して流すことにより、該プレカラムで濃縮された
ラベル化サンプルを離脱させ、分離カラム２９に移送す
る。ラベル化サンプルの全部が分離カラム２９に移動し
た時点で、カラム切換バルブ２８を再び切換える（第１
図に示す状態）と、溶離液２５はプレカラム２３を経由
せず直接分離カラム２９に流れ、プレカラム２３には前
処理液２０が流れる。

（９）分離 溶離液２５を分離カラム２９に流し、目的のラベル化カ
テコールアミンを分離する。

上記ラベル化カテコールアミンの分離と並行して、プレ
カラム２３に前処理液を流し、次のラベル化サンプルを
受は入れるための再生処理を行う。

（１０）測定 分離カラム２９により分離、溶出したラベル化カテコー
ルアミンの分析成分は、順次検出器３１のフローセル３
２に導入し蛍光強度を検出する。

（１１）データ処理、出力 前記検出結果は、データ処理装ｗ３３で演算処理して各
成分の濃度を求め、ＣＰＵ３４によりＣＲＴ３６および
プリンタ３５に上記演算データおよびクロマトグラムを
出力する。

なお、標準サンプルの測定は、クロマトグラムフローチ
ャートに基づき分析する。この場合クロマトグラムのピ
ーク高さ２面積等から試薬の健全度を、ピークの形状（
割れ、リーディング、テーリング）でカラム、溶離液の
健全度を判定することができる。上記の結果がよければ
未知サンプルの測定に移る。

なお１本実施例における蛍光ラベリングは、除蛋白した
サンプル５００μΩ、蛍光ラベリング用反応試薬４５０
μΩおよび内部標準溶液５０μＱを混合し、温度４５℃
、３分間行った。また、前処理液および溶離液はそれぞ
れ１　ｍ　Ｑ　／分で流入した０分析条件を第１表に示
す。

また、分析結果のクロマトグラムを第４図に、同一サン
プルを用いた場合の再現性（ＣＶ値）と回収率を第２表
に示す。

第２表から明らかなように、本実施例においては、ＮＥ
、ＥおよびＤＡともにＣＶ値２．５％以下、回収率９８
％以上と優れている。

第 表 第 表 Ｘ：平均値　ＳＤ：標準偏差 ＣＶ　　＝　　ＳＤ／Ｘ 〔実施例３〕 カテコールアミン分析装置の他の一例の流路系統図を第
５図に示す。

実施例２では、第１図に示すように、前処理液および溶
離液の移送ポンプとして、それぞれポンプ２１および２
６を用いたが、本実施例ではこれらを一つのポンプ２６
′で兼用した点が特徴である。

従って、前処理液２０と溶離液２５とはそれぞれの開閉
弁４２と４３とを交互に開閉して移送する。その他はは
ゾ実施例２の第１図と同様である。

オートサンプラ１でラベル化されたサンプルは、注入ポ
ート１１からサンプルインジェクタ２２の計量管２４に
導入される。サンプルインジェクタ２２とカラム切換弁
２８を切換えることにより、プレカラム２３にラベル化
サンプルが移送される。

その際、開閉弁４２を開、同４３を閉とすることによっ
て前処理液２０を流入させ、残存蛋白等の不要成分を洗
浄除去する。

次に、カラム切換弁２８を切換え、開閉弁４２を閉、同
４３を開とすることにより、溶離液２５が流入して、プ
レカラム２３に吸着されているラベル化サンプルが分離
カラム２９に移送され、分離カラムによって脱着、分離
されたラベル化カテコールアミンが検出器３１に移送さ
れて蛍光強度が測定される。

本実施例においては、移送ポンプが−っで済み、前処理
液および溶離液の消費量が少なくてすむと云う効果があ
る。また、プレカラムの洗浄状態がクロマトグラムに連
続的に得られるので、分析結果の判定に好都合である。

本実施例も前記実施例２と同じく除蛋白したサンプルを
用い、分析条件等も第１表と同様に行った。但し、プレ
カラムの充填剤として第３表に示すものを用いた。なお
、サンプルとしては、ＥＤＴＡ採血による血漿に、１ｐ
Ｍのカテコールアミンと内部標準液であるイソプロテレ
ノールを添加したものを用いた。

第３表の充填剤を充填したプレカラムを用いて処理した
サンプルのクロマトグラムを第６図に示す。

第　　３　　表 各充填剤とも粒径：１０μｍ ＣＱＰ　：三菱化成製 第６図から明らかなように、　Ｂｕｔｙｌ　−ＣＱ　Ｐ
　−３Ｏ３を充填剤とするプレカラムを用いた場合が最
もよい分析結果を示している。

コレニ対シテ、ＣＱＰ−１０，Ｌ−１１８０ではＮＥピ
ークに不要共存成分のピークが重なって分析精度が低下
している。また、ＣＱＰ−３０ｔ−はカテコールアミン
類のピーク高が低下しており、回収率が低いことを示し
ている６ また、Ｐｈｅｎｙｌ　−ＣＱ　Ｐ　−３ＯＳは、Ｂｕｔ
ｙｌ　−ＣＱＰ−３Ｏ８に比べ若干ノイズが大きい。

〔実施例４〕 Ｂｕｔｙｌ−ＣＱＰ−３０Ｓを充填したプレカラムを用
いて、カテコールアミンの回収率に対する前処理液の添
加塩の影響について検討した。

該塩として、硼酸（＋Ｎａ０Ｈ）、酢酸（＋Ｎ　ａ　Ｏ
Ｈ）　、硝酸リチウム、塩化ナトリウム、リン酸カリウ
ムについて行った。なお、冬場の濃度は、０．１Ｍ、ｐ
Ｈ７，０で、１　ｍ　Ｍ　（７）　Ｅ　Ｄ　Ｔ　Ａを添
加した。その他の条件は実施例３と同様である。

測定結果を第７図に示す。

図から明らかなように、硼酸塩を添加した前処理液を用
いた場合のカテコールアミンの回収率が１００％に最も
近い、他の塩を用いた場合は、不要共存成分のピークと
重なって、見かけ上１００％を超えてしまう場合があり
好ましくない。

〔実施例５〕 次に、Ｂｕｔｙｌ−ＣＱＰ−３Ｏ３を充填したプレカラ
ムを用いて、カテコールアミンの回収率に及ぼす前処理
液のｐＨの影響について検討した。

前処理液として、０．１Ｍ硼酸、１ｍＭのＥＤＴＡを添
加し、ＰＨの調節はＮ　ａ　ＯＨの添加量を変えて行っ
た。

測定結果を第８図に示す。

図から明らかなように、前処理液のｐＨとしては矢印で
示すｐＨ６，５〜７．５の範囲が好ましい。

〔実施例６〕 次に、溶離液に添加するバッファの影響について検討し
た。

溶離液としては、アセトニトリル／メタノール／水（容
積比：　５／２１５）にｌｏｍＭ　　ＳＤＳ、５０ｍＭ
バッファ、ＰＨ７，２で、バッファとして硼酸アンモニ
ウム塩、酢酸ナトリウム塩およびりん酸カリウム塩をそ
れぞれ用いた場合についてのクロマトグラムを比較した
。なお、前処理液としては、０．１Ｍ硝酸リチウム、１
ｍＭ　　ＥＤＴＡを用いた。また、分析は、第５図に示
す装置を用い第１表と同様の条件で行った。

分析結果のクロマトグラムを第９図に示す。

図から明らかなように、溶離液も硼酸塩を添加した場合
が不要共存成分のピークが少ない。

〔実施例７〕 次に、カテコールアミンの回収率に及ぼす溶離液中のバ
ッファのｐＨの影響について検討した。

バッファとしては、５０ｍＭ硼酸アンモニウム塩にＮ　
ａ　ＯＨを添加してｐＨを調節した。

なお、測定条件は実施例６と同様にして行った。

測定結果を第１０図に示す。

図から明らかなように、ｐＨ７付近が回収率１００％に
最も近いことが分かる。

〔比較例〕

プレカラムの充填剤にＢｕｔｈｙｌ　−ＣＱ　Ｐ　−３
Ｏ８を１分雛カラムの充填剤にスチレン−ジビニルベン
ゼン系ポリマゲルを用いた以外は、実施例３と同様にし
てカテコールアミンを分析した。

測定結果を第１１図に示す。

第６図−ａと比較しても分かるように、不要共存成分が
多く、正確な回収率が得られない、［発明の効果コ 本発明によれば、プレカラム充填剤として、前記メタク
リレート系ポリマゲルを用いたことにより、カテコール
アミン以外の残存蛋白等の不要共存物質を容易に除去す
ることでき、カテコールアミンの回収率を高めることが
できると云う効果があり、カテコールアミンの分析精度
を向上することができる。

【図面の簡単な説明】

第１図および第５図は本発明のカテコールアミン分析装
置の流路系統図、第２図、第４図、第６図および第９図
はカテコールアミンのクロマトグラム、第３図は本発明
のカテコールアミンの分析工程を示すフロー図、第７図
は前処理液の塩の種類とカテコールアミンの回収率との
関係を示すグラフ、第８図は前処理液のＰＨとカテコー
ルアミンの回収率との関係を示すグラフ、第１０図は、
溶離液ＰＨとカテコールアミンの回収率との関係を示す
グラフ、第１１図は比較例のカテコールアミンのクロマ
トグラムである。 １・・・オートサンプラ、２・・・サンプルラック、３
・・・サンプルステージ、４・・・試料、５・・・反応
試薬、６・・・内部標準溶液、７・・・標準サンプル、
８・・・反応容器、９・・・ノズル洗浄槽、１ｏ・・・
ドレインポート。 １１・・・注入ボート、１２・・・駆動機構、１３・・
・ノズル、１４・・・管、１５・・・三方弁、１６・・
・分注ポンプ、１７・・・洗浄液、１８・・・反応容器
恒温槽、１９・・・分析部、２０・・・前処理液、２１
・・・ポンプ、２２・・・サンプルインジェクタ、２３
・・・プレカラム、２４・・・計量管、２５・・・溶離
液、２６・・・ポンプ、２８・・・カラム切換バルブ、
２９・・・分離カラム、３１・・・検呂器、３２・・・
フローセル、３３・・・データ処理装置、３４・・・Ｃ
ＰＵ、３５・・・出力プリンタ、３６・・・ＣＲＴ、３
７．３８・・・切換コック、４０，４１・・・流路、４
２．４３・・・開閉弁、４４・・・恒温槽、４５・・・
制御回線。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、液体クロマトグラフィによる生体液中のカテコール
   アミンの分析方法において、 試料生体液中の蛋白成分を除く工程、 前記除蛋白試料生体液に必要量の誘導体（ラベル）化試
   薬を添加し、該液中のカテコールアミンをラベル化する
   工程、 前記ラベル化カテコールアミンを含む試料生体液を、表
   面に疎水性基を有するメタクリレート系ポリマゲルを充
   填したプレカラムに導入し、該ポリマゲルに前記ラベル
   化カテコールアミンを吸着させ、分析の不要共存成分を
   前処理液により洗浄、除去する工程、 溶離液により前記プレカラムに吸着されているラベル化
   したカテコールアミンを離脱させ、有機シラン処理され
   たシリカ系ゲルを充填剤とする分離カラムに導入する工
   程、 前記分離カラムに吸着させたラベル化カテコールアミン
   を溶離液で展開し、検出器により検出する工程、 を含むことを特徴とするカテコールアミンの分析方法。 ２、前記疎水性基を有するメタクリレート系ポリマゲル
   の疎水性基が、炭素数１〜６個のアルキル基またはフェ
   ニル基であることを特徴とする請求項第１項記載のカテ
   コールアミンの分析方法。 ３、前記カテコールアミンの誘導体化（ラベル化）試薬
   が１，２−ジフェニルエチレンジミン、フェリシアン化
   カリウム、モリブデン酸アンモニウムおよびアセトニト
   リルを含み、前記検出器が蛍光検出器であることを特徴
   とする請求項第１項記載のカテコールアミンの分析方法
   。 ４、前記前処理液および／または溶離液が硼酸塩を含み
   、該前処理液のｐＨが６．５〜７．５であることを特徴
   とする請求項第１項記載のカテコールアミンの分析方法
   。 ５、除蛋白された試料生体液中のカテコールアミンをラ
   ベル化（誘導体化）試薬と反応させる反応容器と、 前記試料生体液中のラベル化カテコールアミンを吸着し
   、共存不要成分を前処理液により分離除去し得る充填剤
   が充填されたプレカラムと、前記プレカラムの下流に設
   けられ、該プレカラムによって共存不要成分を除去した
   前記ラベル化カテコールアミンを吸着し、溶離液により
   少なくともエピネフリン、ノルエピネフリン、ドーパミ
   ンを順次展開し得る充填剤が充填された分離カラムと、 前記分離カラムから順次展開される前記分析成分を検出
   する検出器を有し、 前記反応容器、プレカラム、分離カラムおよび検出器は
   配管で連結されており、該配管はプレカラムおよび分離
   カラムに前記前処理液または溶離液を任意に導入し得る
   よう切換弁を備え、前記プレカラムの充填剤は、表面に
   炭素数１〜６のアルキル基またはフェニル基を有するメ
   タクリレート系ポリマゲルであり、前記分離カラムの充
   填剤は有機シラン処理したシリカ系ゲルであることを特
   徴とするカテコールアミンの分析装置。