JPH0448265A - 免疫測定法 - Google Patents
免疫測定法Info
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- JPH0448265A JPH0448265A JP15933090A JP15933090A JPH0448265A JP H0448265 A JPH0448265 A JP H0448265A JP 15933090 A JP15933090 A JP 15933090A JP 15933090 A JP15933090 A JP 15933090A JP H0448265 A JPH0448265 A JP H0448265A
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- antigens
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
〔産業上の利用分野〕
本発明は、体液（血液、血清、血しよう、髄液。
尿等）中の抗原又は抗体の測定法に関するものである。
詳しくは、同一検体の同時２項目免疫測定法に関するも
のである。
のである。
近年、医学や臨床検査の分野において、免疫測定法、特
に抗原抗体反応に基づく凝集を光学的濁度変化として測
定する比濁法は、試薬や自動分析装置の進歩と相俟って
急速に普及してきた。
に抗原抗体反応に基づく凝集を光学的濁度変化として測
定する比濁法は、試薬や自動分析装置の進歩と相俟って
急速に普及してきた。
従来、その測定方法としては、良く知られているように
、反応の結果生じる凝集塊を光学的濁度変化として測定
する比濁法、比朧法（ネフエロメトリー）が用いられて
いる。比濁法は、光学的濁度変化を透過光の変化として
測定するものであり［ｒｃｌｉｎ、ｃｈｅｍ、」、第２
８巻第１．０号、第２１２１〜２１２４頁（１９８２）
参照〕、比朧法は、光学的濁度変化を散乱光の変化とし
て測定するものである（ ｒＡｍ、Ｊ、Ｃ１１ｎ、Ｐａ
ｔｈｏｌ、Ｊｗ第７６巻、第７５３頁（１９８１）参照
〕、又、ラテックスのような微粒子に抗原又は抗体を担
持した試薬を用い測定感度を高めたラテックス凝集比濁
法［ｒＰｒｏｔＬｄｅｓ ｏｆ ｔｈｅＢｉｏｌｏｇｙ
ｃａｌ Ｆｌｕｉｄｓ（ＰＥＲＧＡＭＯＮ ＰＲＥＳＳ
社）」、第１版、第５８９〜第５９３頁（１９７３）参
照］等が用いられている。
、反応の結果生じる凝集塊を光学的濁度変化として測定
する比濁法、比朧法（ネフエロメトリー）が用いられて
いる。比濁法は、光学的濁度変化を透過光の変化として
測定するものであり［ｒｃｌｉｎ、ｃｈｅｍ、」、第２
８巻第１．０号、第２１２１〜２１２４頁（１９８２）
参照〕、比朧法は、光学的濁度変化を散乱光の変化とし
て測定するものである（ ｒＡｍ、Ｊ、Ｃ１１ｎ、Ｐａ
ｔｈｏｌ、Ｊｗ第７６巻、第７５３頁（１９８１）参照
〕、又、ラテックスのような微粒子に抗原又は抗体を担
持した試薬を用い測定感度を高めたラテックス凝集比濁
法［ｒＰｒｏｔＬｄｅｓ ｏｆ ｔｈｅＢｉｏｌｏｇｙ
ｃａｌ Ｆｌｕｉｄｓ（ＰＥＲＧＡＭＯＮ ＰＲＥＳＳ
社）」、第１版、第５８９〜第５９３頁（１９７３）参
照］等が用いられている。
このような免疫測定法においては、現在単一項目毎の測
定で行われている。たとえば、汎発性血管向凝固症候群
（ＤＩＣ）患者の診断には、フィブリノーゲンとフィブ
リノーゲン、フィブリン分解産物（Ｆｌ）Ｐ、ＦＤＰ−
Ｅ、ＦＤＰ−Ｄダイマー等）の測定が行われているが、
測定は項目毎に検体を採取して別々の専用試薬で実施さ
れているのが現状である。又、リウマチ性熱、心筋炎、
糸球体腎炎等の各種炎症性疾患では、抗ストレプトリジ
ンＯ価（ＡＳＯ）、Ｃ反応性蛋白（ＣＲＰ）。
定で行われている。たとえば、汎発性血管向凝固症候群
（ＤＩＣ）患者の診断には、フィブリノーゲンとフィブ
リノーゲン、フィブリン分解産物（Ｆｌ）Ｐ、ＦＤＰ−
Ｅ、ＦＤＰ−Ｄダイマー等）の測定が行われているが、
測定は項目毎に検体を採取して別々の専用試薬で実施さ
れているのが現状である。又、リウマチ性熱、心筋炎、
糸球体腎炎等の各種炎症性疾患では、抗ストレプトリジ
ンＯ価（ＡＳＯ）、Ｃ反応性蛋白（ＣＲＰ）。
自己免疫疾患（ＲＦ因子と抗核抗体の検出）等、同一患
者について複数項目の測定が行われているが、これらも
項目毎に検体を採取して別々の専用試薬で実施されてい
るのが現状である。上記の例の他にも、感染症や悪性腫
瘍等の各種疾患等でも同一患者の複数項目の測定が行わ
れている。又、特に新生児や癌患者からの検体の採取は
困難であり、患者の負担も大きく検体の必要量をより少
なくすることが望まれている。このためにも、診断上必
要な項目についての多項目同時測定が望まれている。し
かし、多数反応の混在により同一反応容器内での同時多
項目測定は困難であった。
者について複数項目の測定が行われているが、これらも
項目毎に検体を採取して別々の専用試薬で実施されてい
るのが現状である。上記の例の他にも、感染症や悪性腫
瘍等の各種疾患等でも同一患者の複数項目の測定が行わ
れている。又、特に新生児や癌患者からの検体の採取は
困難であり、患者の負担も大きく検体の必要量をより少
なくすることが望まれている。このためにも、診断上必
要な項目についての多項目同時測定が望まれている。し
かし、多数反応の混在により同一反応容器内での同時多
項目測定は困難であった。
本発明は、同一患者検体を用いて同一反応容器内で２項
目の抗原又は抗体に基づく凝集反応を連続して行うこと
により、最少の検体採取量で、測定簡便性、迅速性に優
れる免疫測定法を提供するものである。
目の抗原又は抗体に基づく凝集反応を連続して行うこと
により、最少の検体採取量で、測定簡便性、迅速性に優
れる免疫測定法を提供するものである。
本発明は、抗原と抗体による凝集反応を光学的な濁度変
化しとて測定し、検体中の目的とする抗原又は抗体の存
在又は量を求める免疫測定法において、同一の反応容器
中で、まず１項目の抗原又は抗体に基づく第１の凝集反
応を行ない、次いで他の１項目の抗原又は抗体に基づく
第２の凝集反応を行なうことにより、１つの検体につい
て同時に２項目の目的とする抗原又は抗体の存在又は量
を求めることを特徴とする免疫測定法に関する。
化しとて測定し、検体中の目的とする抗原又は抗体の存
在又は量を求める免疫測定法において、同一の反応容器
中で、まず１項目の抗原又は抗体に基づく第１の凝集反
応を行ない、次いで他の１項目の抗原又は抗体に基づく
第２の凝集反応を行なうことにより、１つの検体につい
て同時に２項目の目的とする抗原又は抗体の存在又は量
を求めることを特徴とする免疫測定法に関する。
以下、本発明の詳細な説明する。
抗原と抗体による凝集反応を光学的な濁度変化として測
定し、検体試料中の抗原又は抗体の存在又は量を求める
免疫測定法は古くから良く知られている。
定し、検体試料中の抗原又は抗体の存在又は量を求める
免疫測定法は古くから良く知られている。
「抗原と抗体による凝集反応」は、水溶性の緩衝液中で
、抗原と抗体の特異的な結合反応（抗原抗体反応）の結
果凝集する反応である。通常、測定しようとする目的の
検体中の抗原又は抗体を試料とし、それに対する抗体又
は抗原が試薬として用いられている。この反応の進行の
度合は、抗原と抗体の量的関係、抗体の力価、抗原の種
類、反応温度（通常、室温から３７℃）、反応媒体とし
ての水溶性の緩衝液等により変動する。通常、水溶性の
緩衝液としては０．１〜０．２ｍｏＱ／Ｑの塩化す１−
リウムを含むｐＨ５〜１０、好ましくはｐＨ６〜８のり
ん酸緩衝液、トリス〔トリス（ヒドロキシメチル）アミ
ノメタン〕塩酸緩衝液、グリシン緩衝液、はう酸緩衝液
、アンモニア緩衝液。
、抗原と抗体の特異的な結合反応（抗原抗体反応）の結
果凝集する反応である。通常、測定しようとする目的の
検体中の抗原又は抗体を試料とし、それに対する抗体又
は抗原が試薬として用いられている。この反応の進行の
度合は、抗原と抗体の量的関係、抗体の力価、抗原の種
類、反応温度（通常、室温から３７℃）、反応媒体とし
ての水溶性の緩衝液等により変動する。通常、水溶性の
緩衝液としては０．１〜０．２ｍｏＱ／Ｑの塩化す１−
リウムを含むｐＨ５〜１０、好ましくはｐＨ６〜８のり
ん酸緩衝液、トリス〔トリス（ヒドロキシメチル）アミ
ノメタン〕塩酸緩衝液、グリシン緩衝液、はう酸緩衝液
、アンモニア緩衝液。
トリエタノールアミン緩衝液等が反応の媒体として用い
られ、場合により、安定化剤、防腐剤、キレート剤、界
面活性剤、増感剤（ポリエチレングリコール）等の添加
剤と共に用いられる。又、抗原と抗体による凝集反応は
、光学的な濁度変化として測定される。
られ、場合により、安定化剤、防腐剤、キレート剤、界
面活性剤、増感剤（ポリエチレングリコール）等の添加
剤と共に用いられる。又、抗原と抗体による凝集反応は
、光学的な濁度変化として測定される。
本発明において試薬として用いる抗原としては、蛋白質
、菌体及びその成分、ペプチド、多糖体。
、菌体及びその成分、ペプチド、多糖体。
脂質、核酸、ホルモン、ビタミン、ステロイド。
薬物等のハプテン、花粉等のアレルゲンなど抗原性を有
する全てのものが挙げられる。又、本発明において試薬
として用いる抗体としては、抗原に親和性を有する物質
および上記抗原から公知の方法により得られる抗体であ
り、抗体を含む抗血清。
する全てのものが挙げられる。又、本発明において試薬
として用いる抗体としては、抗原に親和性を有する物質
および上記抗原から公知の方法により得られる抗体であ
り、抗体を含む抗血清。
ポリクローナル抗体（ＩｇＧ画分）、モノクローナル抗
体等及びこれらの抗体から誘導されるＦａｂ ＋Ｆａｂ
’ 、Ｆ（ａｂ’ ）、等が挙げられる（但し、微粒子
担体への感作には、抗血清を除く）。
体等及びこれらの抗体から誘導されるＦａｂ ＋Ｆａｂ
’ 、Ｆ（ａｂ’ ）、等が挙げられる（但し、微粒子
担体への感作には、抗血清を除く）。
尚、本発明において、２種類の目的とする測定項目の組
合せは、検体中の同一成分を目的としない限り可能であ
る。
合せは、検体中の同一成分を目的としない限り可能であ
る。
本発明において、「光学的な濁度の変化の測定」は検出
装置の面からいえば、通常の分光光度計や生化学自動分
析装置を用い吸光度（透過光）の変化を測定する比濁法
が利用できる。又、試薬面からいえば、目的とする抗体
又は抗原に対する抗原又は抗体をそのまま（すなわち微
粒子担体を使用しないで）用いる試薬と抗原又は抗体を
ラテックス等の不溶性の微粒子担体に感作した感作微粒
子担体を使用する試薬が水沫に利用できる。
装置の面からいえば、通常の分光光度計や生化学自動分
析装置を用い吸光度（透過光）の変化を測定する比濁法
が利用できる。又、試薬面からいえば、目的とする抗体
又は抗原に対する抗原又は抗体をそのまま（すなわち微
粒子担体を使用しないで）用いる試薬と抗原又は抗体を
ラテックス等の不溶性の微粒子担体に感作した感作微粒
子担体を使用する試薬が水沫に利用できる。
本発明に利用できる微粒子担体としては、測定に使用す
る水溶性の緩衝液中で不溶性の、有機高分子重合性の微
粒子担体等であり、ポリスチレン。
る水溶性の緩衝液中で不溶性の、有機高分子重合性の微
粒子担体等であり、ポリスチレン。
スチレン−ブタジェン共重合体、スチレン−スチレンス
ルホン酸の様な乳化重合により得られるラテックス粒子
やリポソームのような球状粒子が挙げられる。この微粒
子担体へ抗原又は抗体を感作（結合）させ測定用試薬と
して用いるが、感作は公知の方法により、物理的に吸着
させても良いし、化学的に結合させても良い。
ルホン酸の様な乳化重合により得られるラテックス粒子
やリポソームのような球状粒子が挙げられる。この微粒
子担体へ抗原又は抗体を感作（結合）させ測定用試薬と
して用いるが、感作は公知の方法により、物理的に吸着
させても良いし、化学的に結合させても良い。
一般に、微粒子担体を使用しない比濁法用試薬は、その
ままの反応では吸光度の変化量がｔＪ・さいためポリエ
チレングリコール６０００等の増感剤が必要である０通
常、反応系中の濃度で３〜４％のポリエチレングリコー
ル６０００の存在が好ましい、又、測定の波長はより高
感度な測定を可能にするためには３４０〜４００ｎｍ位
の比較的短波長領域を主波長とする二波長測定、又は、
−波長測定が好ましい。尚、当然、試薬としての抗原又
は抗体の量は、検出目的の抗体又は抗原の測定範囲等の
兼ねおいて適宜設定すべきである。
ままの反応では吸光度の変化量がｔＪ・さいためポリエ
チレングリコール６０００等の増感剤が必要である０通
常、反応系中の濃度で３〜４％のポリエチレングリコー
ル６０００の存在が好ましい、又、測定の波長はより高
感度な測定を可能にするためには３４０〜４００ｎｍ位
の比較的短波長領域を主波長とする二波長測定、又は、
−波長測定が好ましい。尚、当然、試薬としての抗原又
は抗体の量は、検出目的の抗体又は抗原の測定範囲等の
兼ねおいて適宜設定すべきである。
微粒子担体を使用する比濁法用試薬による測定の感度は
高感度で、検体中の微量成分の測定に最適である。微粒
子担体の使用は、粒子自身濁度を呈し、光の透過を遮り
、光を散乱する０反面、反応前のブランク値が高くなり
、反応の為に使える領域が限定される。検体中の抗原ま
たは抗体を精度、再現性とも良く、しかも広範囲の濃度
範囲で測定するためには必要に応じ、測定波長、微粒子
担体の粒子径及びその濃度を選択することにより改善で
きる。例えば、比濁法での微粒子担体の粒子濃度が同一
の場合、微粒子担体の粒子径がより微小で測定波長が粒
子径に比べより長波長な程、反応前のブランク値は低く
なる。逆に、微粒子担体の粒子径がより大きくて測定波
長が粒子径に近いほど、反応前のブランク値は高くなる
。測定系と試薬化の条件は、当業者が測定項目に応じ適
宜設定しているように、目的項目の要求される感度と測
定範囲の兼ねあいから微粒子担体の粒子径と濃度及び測
定波長を設定すべきである。
高感度で、検体中の微量成分の測定に最適である。微粒
子担体の使用は、粒子自身濁度を呈し、光の透過を遮り
、光を散乱する０反面、反応前のブランク値が高くなり
、反応の為に使える領域が限定される。検体中の抗原ま
たは抗体を精度、再現性とも良く、しかも広範囲の濃度
範囲で測定するためには必要に応じ、測定波長、微粒子
担体の粒子径及びその濃度を選択することにより改善で
きる。例えば、比濁法での微粒子担体の粒子濃度が同一
の場合、微粒子担体の粒子径がより微小で測定波長が粒
子径に比べより長波長な程、反応前のブランク値は低く
なる。逆に、微粒子担体の粒子径がより大きくて測定波
長が粒子径に近いほど、反応前のブランク値は高くなる
。測定系と試薬化の条件は、当業者が測定項目に応じ適
宜設定しているように、目的項目の要求される感度と測
定範囲の兼ねあいから微粒子担体の粒子径と濃度及び測
定波長を設定すべきである。
本発明は、以上に詳述した免疫測定法において、同一の
反応容器中で、まず１項目の抗原又は抗体に基づく第１
の凝集反応を行ない、次いで他の１項目の抗原又は抗体
に基づく第２の凝集反応を行なうことにより、１つの検
体について同時に２項目の目的とする抗原又は抗体の存
在又は量を求める。
反応容器中で、まず１項目の抗原又は抗体に基づく第１
の凝集反応を行ない、次いで他の１項目の抗原又は抗体
に基づく第２の凝集反応を行なうことにより、１つの検
体について同時に２項目の目的とする抗原又は抗体の存
在又は量を求める。
その場合、次のようにすると第１の凝集反応による第２
の凝集反応への影響を減少又は除去できるので好ましい
。
の凝集反応への影響を減少又は除去できるので好ましい
。
（１）第１の凝集反応は感作微粒子担体を使用せず、第
２の凝集反応で感作微粒子担体を使用する。
２の凝集反応で感作微粒子担体を使用する。
（２）第１の凝集反応及び第２の凝集反応とも感作微粒
子担体を使用する。
子担体を使用する。
前者（１）の組合せの場合、第１の凝集反応の測定を３
４０〜４００ｎｍ位の比較的短波長領域で、次いで、第
２の凝集反応の測定はより長波長領域４００〜２４００
ｎｍで行うことにより第１の凝集反応の影響を減じるこ
とが８来るので特に好ましい。
４０〜４００ｎｍ位の比較的短波長領域で、次いで、第
２の凝集反応の測定はより長波長領域４００〜２４００
ｎｍで行うことにより第１の凝集反応の影響を減じるこ
とが８来るので特に好ましい。
また、後者（２）の場合、第２の凝集反応の試薬中に、
第１の凝集反応の試薬で使用した抗原又は抗体を適当量
共存させることにより、第１の凝集反応の第２の凝集反
応への影響を減少又は除去できるので特に好ましい。
第１の凝集反応の試薬で使用した抗原又は抗体を適当量
共存させることにより、第１の凝集反応の第２の凝集反
応への影響を減少又は除去できるので特に好ましい。
各々の凝集反応における濁度変化の測定は、反応開始後
一定時間後の１点で測定するワンポイントエンド測定法
（Ｏｎｅ Ｐｏ１ｎｔ Ｅｎｄ Ａｓ５ａｙ）、反応開
始前と反応開始後一定時間後の２点で測定するツーポイ
ントエンド測定法（Ｔｗｏ Ｐｏ１ｎｔ Ｅｎｃｌ Ａ
ｓ５ａｙ）、反応開始後の２点で測定するレート測定（
Ｔｗ。
一定時間後の１点で測定するワンポイントエンド測定法
（Ｏｎｅ Ｐｏ１ｎｔ Ｅｎｄ Ａｓ５ａｙ）、反応開
始前と反応開始後一定時間後の２点で測定するツーポイ
ントエンド測定法（Ｔｗｏ Ｐｏ１ｎｔ Ｅｎｃｌ Ａ
ｓ５ａｙ）、反応開始後の２点で測定するレート測定（
Ｔｗ。
Ｐｏ１ｎｔ Ｒａｔｅ Ａｓ５ａｙ）及び２点以上の時
点で測定するマルチポイント測定法（Ｍｕｌｔｉ Ｐｏ
１ｎｔ Ｒａｔｅａｓｓａｙ）により行なわれる。第１
の凝集反応の測定にはエンドポイント測定法及びレード
測定法のいずれも適しているが、第２の凝集反応の測定
にはレート測定法が最適である。レート測定法は反応開
始後の比較的短時間、好ましくは５分以内で測定が好ま
しい、あまり長い期間での測定は迅速測定の利点を損な
うばかりでなく測定可能な範囲を狭くするからである。
点で測定するマルチポイント測定法（Ｍｕｌｔｉ Ｐｏ
１ｎｔ Ｒａｔｅａｓｓａｙ）により行なわれる。第１
の凝集反応の測定にはエンドポイント測定法及びレード
測定法のいずれも適しているが、第２の凝集反応の測定
にはレート測定法が最適である。レート測定法は反応開
始後の比較的短時間、好ましくは５分以内で測定が好ま
しい、あまり長い期間での測定は迅速測定の利点を損な
うばかりでなく測定可能な範囲を狭くするからである。
また、濁度変化の測定において、実際に測定する光は、
いわゆる透過光（吸光度）、散乱光のいずれでもよい。
いわゆる透過光（吸光度）、散乱光のいずれでもよい。
本発明における免疫測定法の波長は、測定装置や測定方
法の選択、微粒子担体の使用の有無、該担体の粒子径及
びその濃度などにより適宜選択される。一般に、微粒子
担体を使用しない比濁法では３００ｎｍ〜４００ｎｍ、
微粒子担体を使用する比濁法では波長４００ｎｍ〜２４
００ｎｍの単色光又は多色光が用いられる。
法の選択、微粒子担体の使用の有無、該担体の粒子径及
びその濃度などにより適宜選択される。一般に、微粒子
担体を使用しない比濁法では３００ｎｍ〜４００ｎｍ、
微粒子担体を使用する比濁法では波長４００ｎｍ〜２４
００ｎｍの単色光又は多色光が用いられる。
上記の測定値から目的とする抗原又は抗体の存在又は量
を求める。例えば濃度を求めるには、予め既知濃度の標
準試料を検体と同様に測定して目的物質の濃度と濁度変
化量との関係を求めておくことにより、検体試料による
濁度変化量から目的物質の濃度が換算できる。
を求める。例えば濃度を求めるには、予め既知濃度の標
準試料を検体と同様に測定して目的物質の濃度と濁度変
化量との関係を求めておくことにより、検体試料による
濁度変化量から目的物質の濃度が換算できる。
以下に実施例を挙げ、本発明を更に詳細に説明するが、
本発明は以下の実施例によって限定されるものではない
。
本発明は以下の実施例によって限定されるものではない
。
（実施例１）
血しようのフィブリノーゲンとＦＤＰ−Ｅの 量１）試
薬 （１）フィブリノーゲン測定試薬 ５０ｍＭりん酸塩緩衝溶液（ｐＨ７，３）中に、過剰量
のＦＤＰ −Ｅ抗原で吸収したウサギ抗ヒトフィブリノ
ーゲン抗血清の２０（ｖ／ Ｖ ）％、ポリエチレング
リコール６００゜の３（ｗ／ｖ）％及び０．１Ｍ塩化ナ
トリウムを含有する。
薬 （１）フィブリノーゲン測定試薬 ５０ｍＭりん酸塩緩衝溶液（ｐＨ７，３）中に、過剰量
のＦＤＰ −Ｅ抗原で吸収したウサギ抗ヒトフィブリノ
ーゲン抗血清の２０（ｖ／ Ｖ ）％、ポリエチレング
リコール６００゜の３（ｗ／ｖ）％及び０．１Ｍ塩化ナ
トリウムを含有する。
（２）ＦＤＰ−Ｅ測定試薬（抗ＦＤＰ −Ｅ抗体感作ラ
テックス） 抗ＦＤＰ −Ｅ抗体の５０ｍＭりん酸塩緩衝溶液（抗体
濃度；０．５ｍｇ／ｍＱ）の８０ｍＭに、平均粒子径が
０．１１μｍのポリスチレンラテックス（日本合成ゴム
社製、固形分濃度；１０重量％）の０．５ｍβ を加え
、１０℃で一時間攪拌し、次いで１０℃で３０分間遠心
分離（２００００ｒ、Ｐ、■）した。未反応の上清をデ
カンテーションし、残った抗体感作ラテックス粒子を５
０ｍＭりん酸塩緩衝溶液（２（ｗ／ｖ）％牛血清アルブ
ミン（Ｂ Ｓ Ａ）、０．１Ｍ塩化ナトリウム含有）８
０ｍρに再分散させた。
テックス） 抗ＦＤＰ −Ｅ抗体の５０ｍＭりん酸塩緩衝溶液（抗体
濃度；０．５ｍｇ／ｍＱ）の８０ｍＭに、平均粒子径が
０．１１μｍのポリスチレンラテックス（日本合成ゴム
社製、固形分濃度；１０重量％）の０．５ｍβ を加え
、１０℃で一時間攪拌し、次いで１０℃で３０分間遠心
分離（２００００ｒ、Ｐ、■）した。未反応の上清をデ
カンテーションし、残った抗体感作ラテックス粒子を５
０ｍＭりん酸塩緩衝溶液（２（ｗ／ｖ）％牛血清アルブ
ミン（Ｂ Ｓ Ａ）、０．１Ｍ塩化ナトリウム含有）８
０ｍρに再分散させた。
２）測定方法
フィブリノーゲン測定試薬（第１の凝集反応用試薬、以
下Ｒ工と略す）３５０μＱとともに生理食塩水２ｏμＱ
を反応容器（光路長６ｍ＋のセル）中に添加混合し、３
７℃保温下で反応させ、５分後に主波長３４０ｎｍ、副
波長７００ｎｍで吸光度差を測定しフィブリノーゲン測
定試薬の試薬ブランク（Ｂｌｋ−ＡｂｓＦｇ）とした。
下Ｒ工と略す）３５０μＱとともに生理食塩水２ｏμＱ
を反応容器（光路長６ｍ＋のセル）中に添加混合し、３
７℃保温下で反応させ、５分後に主波長３４０ｎｍ、副
波長７００ｎｍで吸光度差を測定しフィブリノーゲン測
定試薬の試薬ブランク（Ｂｌｋ−ＡｂｓＦｇ）とした。
続けて同時に、ＦＤＰ・Ｅ測定試薬（第２の凝集反応用
試薬、以下Ｒ７と略す）３５０μＱを添加混合し３７℃
で保温下で反応させ、１分後及び３分後に波長７００ｎ
ｍで吸光度を測定した。これから単位時間当りの吸光度
変化量を求めＦＤＰ −Ｅｓ定試薬の試薬ブランクＢｌ
ｋ−ΔａｂｓＦＤＰ−Ｅ）とした。
試薬、以下Ｒ７と略す）３５０μＱを添加混合し３７℃
で保温下で反応させ、１分後及び３分後に波長７００ｎ
ｍで吸光度を測定した。これから単位時間当りの吸光度
変化量を求めＦＤＰ −Ｅｓ定試薬の試薬ブランクＢｌ
ｋ−ΔａｂｓＦＤＰ−Ｅ）とした。
次に上記操作と同様にして、患者検体血清２゜μＱとＲ
エ ３５０μＱを反応容器中に添加混合し、３７℃保温
下で反応させ５分後の波長３４０ｎｍでの吸光度を測定
し検体中フィブリノーゲンによる反応吸光度（Ｓ−Ａｂ
ｓＦｇ）とした。続けて同時に、Ｒ，３５０μρを添加
混合し３７℃保温下で反応させ、１分後及び３分後の波
長７００ｎｍでの吸光度を測定した。これから単位時間
当りの吸光度変化量を求め検体中ＦＤＰ −Ｈによる吸
光度変化量（Ｓ・ΔＡｂｓＦＤＰ−Ｅ）とした、、患者
検体血清中のフィブリノーゲンによる吸光度変化量（Δ
ＡｂｓＦｇ）及び検体中のＦＤＰ −Ｈによる吸光度変
化量（ΔＡｂｓＦＤＰ−Ｅ）を式１，２から算出した。
エ ３５０μＱを反応容器中に添加混合し、３７℃保温
下で反応させ５分後の波長３４０ｎｍでの吸光度を測定
し検体中フィブリノーゲンによる反応吸光度（Ｓ−Ａｂ
ｓＦｇ）とした。続けて同時に、Ｒ，３５０μρを添加
混合し３７℃保温下で反応させ、１分後及び３分後の波
長７００ｎｍでの吸光度を測定した。これから単位時間
当りの吸光度変化量を求め検体中ＦＤＰ −Ｈによる吸
光度変化量（Ｓ・ΔＡｂｓＦＤＰ−Ｅ）とした、、患者
検体血清中のフィブリノーゲンによる吸光度変化量（Δ
ＡｂｓＦｇ）及び検体中のＦＤＰ −Ｈによる吸光度変
化量（ΔＡｂｓＦＤＰ−Ｅ）を式１，２から算出した。
ΔＡｂｓＦｇ＝Ｓ−ＡｂｓＦｇ−Ｂ１に−ＡｂｓＦｇ
−式１％式％ ・・・式２ 予め、患者検体血清の代わりに既知濃度のフィブリノー
ゲンとＦＤＰ −Ｅを含有する標準品を用い上記操作と
同様にして測定し式１，２から各々の吸光度変化量を求
め、各々の検量線を作成しておいた。検体中のフィブリ
ノーゲン及びＦＤＰ・Ｅの濃度は、この検量線とフィブ
リノーゲンΔＡｂｓＦｇ及びＦＤＰ −Ｅの吸光度変化
量（ΔＡｂｓＦｇ及びΔＡｂｓＦＤＰ−Ｅ）から各々の
濃度を求めた。以上の測定及び計算は、日立７０５０形
自動分析装置（（株）日立製作所要）により自動的に行
った。
−式１％式％ ・・・式２ 予め、患者検体血清の代わりに既知濃度のフィブリノー
ゲンとＦＤＰ −Ｅを含有する標準品を用い上記操作と
同様にして測定し式１，２から各々の吸光度変化量を求
め、各々の検量線を作成しておいた。検体中のフィブリ
ノーゲン及びＦＤＰ・Ｅの濃度は、この検量線とフィブ
リノーゲンΔＡｂｓＦｇ及びＦＤＰ −Ｅの吸光度変化
量（ΔＡｂｓＦｇ及びΔＡｂｓＦＤＰ−Ｅ）から各々の
濃度を求めた。以上の測定及び計算は、日立７０５０形
自動分析装置（（株）日立製作所要）により自動的に行
った。
表１に、フィブリノーゲン及びＦＤＰ −Ｅの患者検体
（５検体）について、単項目で測定を行なつた場合の測
定値と上記水沫との測定値の結果を示した。
（５検体）について、単項目で測定を行なつた場合の測
定値と上記水沫との測定値の結果を示した。
表 １
岨フィブリノーゲン測定法と測定値（単位； ｍ ｇ
／ ｄ Ｑ ）本２ＦＤＰ−Ｅの測定法と測定値（単位
；ｎｇ／ｍＱ）＊３従来法；単項目での測定（試薬はフ
ィブリノーゲン測定試薬）祠従来法；単項目での測定（
試薬はＦＤＰ−Ｅ測定試薬）（実施例２） ＣＲＰとＡＳＯの 量 １）試薬 （１）ＣＲＰ測定試薬 抗ヒトＣＲＰ抗体の５０ｍＭりん酸塩緩衝溶液（抗体濃
度； ０．５ｍ ｇ／ｍ １２）の８０ｍＱに、平均粒
子径が０．１１μｍのポリスチレンラテックス（種水化
学社製、固形分濃度；１０重量％）の０．５ｍｕ を
加え、１０℃で一時間攪拌し、次いで１０℃で３０分間
遠心分離（２０，０ＯＯｒ、９．ｍ、） Ｌ、、た。未
反応の上清をデカンテーションし、残った抗体感作ラテ
ックス粒子を５０ｍＭりん酸塩緩衝溶液［２（Ｗ／Ｖ）
％ＢＳＡ、０．１Ｍ塩化ナトリウム含塩化ナトリウム含
有３窃０ （２）ＡＳ○測定試薬 抗ヒトＣＲＰ抗体の５０ｍＭりん酸塩緩衝溶液（抗体濃
度； ０ 、 ５ ｍ ｇ ／ ｍ Ｑ ）の８０ｍＱ
に、平均粒子径が０．１１μｍのポリスチレンラテック
ス（種水化学社製，固形分濃度；１０重量％）の０ 、
５ ｍ ｆｌ を加え、１０℃で一時間攪拌し、次
いで１０℃で３０分間遠心分離（２０，０ＯＯｒ．ｐ．
ｍ．） シた。未反応の上清をデカンテーションし、残
った抗体感作ラテックス粒子を５０ｍＭりん酸塩緩衝溶
液〔２（ｗ／ｖ）％ＢＳＡ，０．１Ｍ塩化ナトリウム及
び０．０５（ｗ／ｖ）％抗ヒトＣＲＰ抗体含有）８０ｍ
Ｑに再分散させた。
／ ｄ Ｑ ）本２ＦＤＰ−Ｅの測定法と測定値（単位
；ｎｇ／ｍＱ）＊３従来法；単項目での測定（試薬はフ
ィブリノーゲン測定試薬）祠従来法；単項目での測定（
試薬はＦＤＰ−Ｅ測定試薬）（実施例２） ＣＲＰとＡＳＯの 量 １）試薬 （１）ＣＲＰ測定試薬 抗ヒトＣＲＰ抗体の５０ｍＭりん酸塩緩衝溶液（抗体濃
度； ０．５ｍ ｇ／ｍ １２）の８０ｍＱに、平均粒
子径が０．１１μｍのポリスチレンラテックス（種水化
学社製、固形分濃度；１０重量％）の０．５ｍｕ を
加え、１０℃で一時間攪拌し、次いで１０℃で３０分間
遠心分離（２０，０ＯＯｒ、９．ｍ、） Ｌ、、た。未
反応の上清をデカンテーションし、残った抗体感作ラテ
ックス粒子を５０ｍＭりん酸塩緩衝溶液［２（Ｗ／Ｖ）
％ＢＳＡ、０．１Ｍ塩化ナトリウム含塩化ナトリウム含
有３窃０ （２）ＡＳ○測定試薬 抗ヒトＣＲＰ抗体の５０ｍＭりん酸塩緩衝溶液（抗体濃
度； ０ 、 ５ ｍ ｇ ／ ｍ Ｑ ）の８０ｍＱ
に、平均粒子径が０．１１μｍのポリスチレンラテック
ス（種水化学社製，固形分濃度；１０重量％）の０ 、
５ ｍ ｆｌ を加え、１０℃で一時間攪拌し、次
いで１０℃で３０分間遠心分離（２０，０ＯＯｒ．ｐ．
ｍ．） シた。未反応の上清をデカンテーションし、残
った抗体感作ラテックス粒子を５０ｍＭりん酸塩緩衝溶
液〔２（ｗ／ｖ）％ＢＳＡ，０．１Ｍ塩化ナトリウム及
び０．０５（ｗ／ｖ）％抗ヒトＣＲＰ抗体含有）８０ｍ
Ｑに再分散させた。
２）測定方法
ＣＲＰ測定試薬（第１の凝集反応用試薬、以下Ｒ１と略
す）３５０μＱともに生理食塩水３μＱを反応容器（光
路長６ｍ＋のセル）中に添加混合し、３７℃保温下で反
応させ１分後及び３分後の波長５７０ｎｍでの吸光度を
測定した。これから単位時間当りの吸光度変化量を求め
ＣＲＰ測定試薬の試薬ブランク（Ｂｌｋ・ΔＡｂｓＣＲ
Ｐ）とした。続けて同時に、ＡＳＯ測定試薬（第２凝集
反応用試薬，以下Ｒ２ と略す）３５０μＱを添加混合
し３７℃保温下で反応させ、１分後及び３分後の波長７
００ｎｍでの吸光度を測定した．これから単位時間当り
の吸光度変化量を求めＡＳＯ測定試薬の試薬ブランク（
Ｂｌｋ−ΔＡｂｓＡＳＯ）とした。
す）３５０μＱともに生理食塩水３μＱを反応容器（光
路長６ｍ＋のセル）中に添加混合し、３７℃保温下で反
応させ１分後及び３分後の波長５７０ｎｍでの吸光度を
測定した。これから単位時間当りの吸光度変化量を求め
ＣＲＰ測定試薬の試薬ブランク（Ｂｌｋ・ΔＡｂｓＣＲ
Ｐ）とした。続けて同時に、ＡＳＯ測定試薬（第２凝集
反応用試薬，以下Ｒ２ と略す）３５０μＱを添加混合
し３７℃保温下で反応させ、１分後及び３分後の波長７
００ｎｍでの吸光度を測定した．これから単位時間当り
の吸光度変化量を求めＡＳＯ測定試薬の試薬ブランク（
Ｂｌｋ−ΔＡｂｓＡＳＯ）とした。
次に上記操作と同様にして、患者検体血清３μｉとＲ，
３５０μβを反応容器中に添加混合し、３７℃保温下で
反応させ１分後及び５分後の波長５７０ｎｍでの吸光度
を測定し検体中ＣＲＰによる反応吸光度（Ｓ・ΔＡｂｓ
ＣＲＰ）とした。続けて同時に、Ｒ，３５０μａを添加
混合し３７℃保温下で反応され、１分後及び３分後の波
長７００ｎｍでの吸光度を測定した。これから単位時間
当りの吸光度変化量を求め検体中ＡＳＯによる吸光度変
化量（Ｓ・ΔＡｂｓＡＳＯ）とした。患者検体血清のＣ
ＲＰによる吸光度変化量（ΔＡｂｓＣＲＰ）及び検体中
のＡＳＯによる吸光度変化量（ΔＡｂｓＡＳＱ）を式３
゜４から算出した。
３５０μβを反応容器中に添加混合し、３７℃保温下で
反応させ１分後及び５分後の波長５７０ｎｍでの吸光度
を測定し検体中ＣＲＰによる反応吸光度（Ｓ・ΔＡｂｓ
ＣＲＰ）とした。続けて同時に、Ｒ，３５０μａを添加
混合し３７℃保温下で反応され、１分後及び３分後の波
長７００ｎｍでの吸光度を測定した。これから単位時間
当りの吸光度変化量を求め検体中ＡＳＯによる吸光度変
化量（Ｓ・ΔＡｂｓＡＳＯ）とした。患者検体血清のＣ
ＲＰによる吸光度変化量（ΔＡｂｓＣＲＰ）及び検体中
のＡＳＯによる吸光度変化量（ΔＡｂｓＡＳＱ）を式３
゜４から算出した。
ΔＡｂｓＣＲＰ ＝Ｓ・ΔＡｂｓＣＲＰ−Ｂｌｋ・ΔＡ
ｂｓＣＲＰ −式３ΔＡｂｓＡＳＯ＝Ｓ・ΔＡｂｓＡ
ＳＯ−８１？ΔＡｂｓＡＳＯ−式４予め、患者検体血清
の代わりに既知濃度のＣＲＰとＡＳＯを含有する標準品
を用い上記操作と同様にした測定し式１，２から各々の
吸光度変化量を求め、各々の検量線を作成しておいた。
ｂｓＣＲＰ −式３ΔＡｂｓＡＳＯ＝Ｓ・ΔＡｂｓＡ
ＳＯ−８１？ΔＡｂｓＡＳＯ−式４予め、患者検体血清
の代わりに既知濃度のＣＲＰとＡＳＯを含有する標準品
を用い上記操作と同様にした測定し式１，２から各々の
吸光度変化量を求め、各々の検量線を作成しておいた。
検体中のＣＲＰ及びＡＳＯの濃度は、この検線とＣＲＰ
及びＡＳＯの光吸度変化量（ΔＡｂｓＣＲＰ及びΔＡｂ
ｓ／＋ＳＯ）から各々の濃度を求めた。以上の測定及び
計算は、日立７０５０形自動分析装置により自動的に行
った。
及びＡＳＯの光吸度変化量（ΔＡｂｓＣＲＰ及びΔＡｂ
ｓ／＋ＳＯ）から各々の濃度を求めた。以上の測定及び
計算は、日立７０５０形自動分析装置により自動的に行
った。
表２に、ＣＲＰ及びＡＳＯの患者検体（５検体）につい
て、単項目での測定値と本性との測定値の表 ２ は抗体の存在又は量を同時に、しかも簡便で迅速求ＩＣ
ＲＰの測定法と測定値（単位；ｍｇ／ｄΩ）京２Ａ Ｓ
Ｏの測定法と測定値（単位；ｉｕ／ｍＱ）零３従来法
；単項目での測定（試薬はＣＲＰ測定試薬）祠従来法；
単項目での測定（試薬はＡＳＯ測定試薬、但し。
て、単項目での測定値と本性との測定値の表 ２ は抗体の存在又は量を同時に、しかも簡便で迅速求ＩＣ
ＲＰの測定法と測定値（単位；ｍｇ／ｄΩ）京２Ａ Ｓ
Ｏの測定法と測定値（単位；ｉｕ／ｍＱ）零３従来法
；単項目での測定（試薬はＣＲＰ測定試薬）祠従来法；
単項目での測定（試薬はＡＳＯ測定試薬、但し。
抗ヒトＣＲＰ抗体は添加していなレリ
〔発明の効果〕
以上のように、本発明の免疫測定法によれば。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、抗原と抗体による凝集反応を光学的な濁度変化とし
て測定し、検体中の目的とする抗原又は抗体の存在又は
量を求める免疫測定法において、同一の反応容器中で、
まず１項目の抗原又は抗体に基づく第１の凝集反応を行
ない、次いで他の１項目の抗原又は抗体に基づく第２の
凝集反応を行なうことにより、１つの検体について同時
に２項目の目的とする抗原又は抗体の存在又は量を求め
ることを特徴とする免疫測定法。 ２、第１の凝集反応が、感作微粒子担体を使用しない反
応であり、第２の凝集反応が感作微粒子担体を使用する
ものである請求項１記載の免疫測定法。 ３、第１の凝集反応及び第２の凝集反応が感作微粒子担
体を使用するものである請求項１記載の免疫測定法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP15933090A JPH0448265A (ja) | 1990-06-18 | 1990-06-18 | 免疫測定法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP15933090A JPH0448265A (ja) | 1990-06-18 | 1990-06-18 | 免疫測定法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0448265A true JPH0448265A (ja) | 1992-02-18 |
Family
ID=15691465
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP15933090A Pending JPH0448265A (ja) | 1990-06-18 | 1990-06-18 | 免疫測定法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0448265A (ja) |
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2007074860A1 (ja) * | 2005-12-28 | 2007-07-05 | Sekisui Medical Co., Ltd. | 凝集測定用試薬及び凝集測定方法 |
| WO2008029873A1 (en) * | 2006-09-08 | 2008-03-13 | Nitto Boseki Co., Ltd. | Method for determination of antigen and antibody against the antigen, and determination reagent for use in the method |
| JP2009014602A (ja) * | 2007-07-06 | 2009-01-22 | Toshiba Corp | 自動分析装置 |
| JP2013055934A (ja) * | 2011-08-17 | 2013-03-28 | Sanwa Kagaku Kenkyusho Co Ltd | 測定方法 |
| JP2017156105A (ja) * | 2016-02-29 | 2017-09-07 | シスメックス株式会社 | 血液凝固分析装置および血液凝固分析方法 |
-
1990
- 1990-06-18 JP JP15933090A patent/JPH0448265A/ja active Pending
Cited By (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2007074860A1 (ja) * | 2005-12-28 | 2007-07-05 | Sekisui Medical Co., Ltd. | 凝集測定用試薬及び凝集測定方法 |
| JP5170742B2 (ja) * | 2005-12-28 | 2013-03-27 | 積水メディカル株式会社 | 凝集測定用試薬及び凝集測定方法 |
| US8987005B2 (en) | 2005-12-28 | 2015-03-24 | Sekisui Medical Co., Ltd. | Reagent for measuring agglutination and method of measuring agglutination |
| WO2008029873A1 (en) * | 2006-09-08 | 2008-03-13 | Nitto Boseki Co., Ltd. | Method for determination of antigen and antibody against the antigen, and determination reagent for use in the method |
| JP5177677B2 (ja) * | 2006-09-08 | 2013-04-03 | 日東紡績株式会社 | 抗原およびその抗原に対する抗体を測定する方法、並びにそれに用いる測定用試薬 |
| JP2009014602A (ja) * | 2007-07-06 | 2009-01-22 | Toshiba Corp | 自動分析装置 |
| JP2013055934A (ja) * | 2011-08-17 | 2013-03-28 | Sanwa Kagaku Kenkyusho Co Ltd | 測定方法 |
| JP2017156105A (ja) * | 2016-02-29 | 2017-09-07 | シスメックス株式会社 | 血液凝固分析装置および血液凝固分析方法 |
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