JPH04500160A - 昆虫に対する活性を有するセロリ・シャクトリ虫からの多重包埋核多角体病ウイルス - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 発明の名称 昆虫に対する活性を有するセロリ・シャクトリ虫からの多重包埋核多角体病ウィ ルス 技術分野 本発明１ｉ　昆虫に対して広い宿主域の活性スペクトラムを有するセロリ・シャ クトリ血　即ちシングラハフアルシフエラ（Ｓｙ＋ｉｇ口ｐｂｓ　Ｉｔｌｃｉｌ ｓ口）から単離する多重包埋核多角体病ウィルスに関すも 本発明に於いて＋１　概念を正確に伝えるため次の略語を使用する場合があム ＾ｃＭＥＶ：　多重包埋オートグラバ・カルホルニカ（Ａ＋＋Ｌｏ（ｒｘｐｂｉ 　Ｃｓ１ｉｌ＋ｒｅｉｃｔ　ＭｕｌｔｉｐｌｅＥｍｂｅｄｄａｄｌウィルス １１ＰＶ−８５−ＣＬＭＥＶ＋　多重包埋セロリ・シャクトリ虫（Ｃａｌｅｒ７ 　Ｌａｏｐｅ＋　１１ｗ１ｌｉｐｉｅ　Ｅｍｂｅｄｄｅｄｌウィルス ＤＯＣ：　デオキシコール酸ナトリウム（ｌｉｏｄｉａｍ　Ｄｅｏｚ７ｃｈｏｌ ｉｌｅｌＨＩＭＥＶ：　多重包埋ヘリオチス・アルミゲラ１ＨａｌｉｏＬｈｉｓ 　ｔｒａｉｇｅロＭｕ１ロｐｌｅ　ＥｍｂｅｄｄｅｄｌＩＢ；　封入体ｆｌｎｃ ｌｏｓｉｏｎ　ＢａｄｉｅｓｌＭＥＩＢ：　多重包埋封入体（１日ｐｌｅ　Ｅ＋ ＋ｂｅｄｄｅｄｔａｃｌａｓｉｏｍ　Ｂｏｄｉｅｓ） ＭＥＮＰｖ：　多重包埋核多角体病ウィルス（Ｍｕ日１ｐｌｅ　Ｅｍｂｅｄｄｅ ｄ　Ｎｕｃｌｅａ＋Ｐｏ１ｙｂｅｄｔｏｓ口Ｖｉ＋ｕｓ１ １１ＥＶ　＋　多重包埋ｆＭｕｌｌｉｐｌｅ　ＥｍｂｅｄｄｅｄｌウィルスＮＰ Ｖ　：　シス多角体病ウィルス（Ｎｕｅｌｅｉ＋　Ｐｏ１ｙｂｅｄ＋ｏ＋ｉｓ１ ｒｕｓｌ Ｏ３：　＠濁原液ｆｏ＋１（ｉｎｔｌ　５ｕｓｐｅｎ＋１ｏｎｌＦＩＢ：　多角 体封入体（Ｐｏｌｙｂｅｄ＋ａ　ＩｎｃｌｕｓｉｏｎＢｏｄ７　（ｉｅｓｌｌ ＲＥＮ：　制限酵素（Ｒｅｓｌ＋１Ｎｉｏｎ　Ｅｎｄｏａｕｃｌａ＊５ｅｌＳＤ Ｗ：　無菌蒸留水（Ｓｔｅｒｉｌｅ　Ｄｉｓｔｉｌｌｅｄ　Ｗｔｔｅ＋１ＳＥＶ ：　単純包埋ｆｓｉＢＩｅ　ＥｍｂｅｄｄｅｄｌウィルスＳｏＭＥＶ：シス多重 包埋スボドブテラ・オルニソガリ［５ｐｏｄｏｐｌｅ＋ｔ　ｏｒｎｉｌｂｏ（ａ ｌｌｉ　Ｍｏ１ｌｉｐｉｅＥＩＩｂｅｄｄｅｄｌウイルス ＴＥＩ１１＝　透過型電子顕微鏡ｔＴ＋ｔｎｓｍｉｓｘｉｏｎ　Ｅｌｅｃｔｒｏ ｎＭｉｃ＋ｏｓｃｏｐｙｌ 背景技術 ウィル＼　軸直　真直　原虫などを含む微生物製剤による昆虫の制御方法が多く の研究機関によって研究されている。　微生物殺虫剤（＝　環境に於し−て特定 の害虫にのみ毒性を持っているカー　他の生物には無害であると期待される。　 さらＧ：、微生物殺虫剤は外界では急速に失活分解し無害化してしまうと考えら れる［ＡＳｅ＋＋ａｌ、＾ｇｒｉｃｂｅｍｉｃｍｌ　Ａ（ｅ、ｐ、２１　ｆ１９ １１７年１月発行）参照コ。 ウィルス殺虫剤＋ｉ　効用を期待されてはいるカー　研究開発および市場開発に 多額の費用がかかること、使用時期に正確なタイミングを必要とすること、　昆 虫に対する特異性は優れているが対象が限れていることなどからこれまで使用が 抑えられてきた しかしながら、現在までにウィ′シス殺虫Ｍ４ＡＩ１１がアメリカ合衆国政府か ら使用を認められるまでになってきている［　５ｅｎａｌｔの上記文献参照：　 ’Ｔｈｅ　Ｂｉｏｌｏｇｙ　ｅｌＢｉｅｕｌｏｖｉ＋ｕｓｅｓ、　Ｖｏｌ、Ｉｆ 、Ｐ口ｃｌｉｅｕｌ＾ｐｐｌｉｅａＬｉｏｎｌｏｔ　Ｉｎ５ｅｃｌ　Ｃｏａｔｒ ｏｌ、’　Ｒ，Ｒ，Ｇｚｎｉｄｏｔ　ａｎｄ　Ｂ、＾。 Ｆｅｄｅ＋ｉＣｉ　、　ｅｄｓ、、　ＣＲＣＰ「ｅｓｓ　Ｉｎｃ、、　Ｂｏｃｉ 　ＲＩＩＯＩＩ、　ＦＬ。 ３２０　ｐＰ、ｉ目８６年発行）のＢｅＬ３　Ｒｅ（ｉｓｌｅｓむｉｏｎ　ｏ！ Ｂｉｃｕｌｏｖｉ＋ｕｓｅｓ　ｓｓ　Ｐｅｓ口ｃｉｄｅｓ　参照］、　これら４ 剤の中には　［ピロンＨ（Ｖｉ＋ｏｎ　ＨＩＪ　、最近では［エルカ−ｆＥＬｃ ＡＲＩ　Ｊの商標で市販されており、　ワタミバナゾウ虫！ｃｏｔｔｏｎ　ｂｏ ｌ１ｗｏ＋ｉｌ、タバコ蛾ｆｌｏｂｉｃｃｏ　ｂｕｄｗｏ＋＠ｌ、毒蛾（Ｆｕｓ ｓｏｃｋ　ｍｏｔｈｌの幼虫　マイマイ蛾１ｔｙｐｘｙ　ｍｏｌｌ＋］の幼上　 松ハバチ（ｐｉｎｅ　ｘｍｗｌｌｙｌの幼虫などに用いられる多角体病へリオチ ス１Ｈｅｌｉｏｌｂ目）があム多角体病ウィルスはこれ迄に　ヘリオチス・ジー ｆＨｅｌｉｏｌｈｉｘ　ｔｅｌｔ　［ｔｇｏｏｌｌｏ、　Ｊ、　Ｉａｖｅ＋ｌｅ ｂ＋、Ｐｌｈｏｌ。 ７：　３１５−３１９　ｆ＋９６５年発行）参照］、　オートグラバ・カルホル ニカ（＾ａｌｏｇ＋ｘｐｂｔ　ｃｓ！ｉｌａ＋ｎｉｅｍｌ　［Ｖａｉｌ　ａｔ　 ａｌ、。 Ｊ、Ｉｎ５ｅｃｌｅｂ＋、　Ｐｔｔｂｏｌ、Ｈ：　３８３−３８８ｆ１９７１年 発行）参剰およびヘリオチス・アルミゲラｔＨｅｌｉｏｔｈ目ＢＬｇｅ口）［Ｗ ｉｌｌｉ＊ｍｘ　ｔａｄ　Ｐｔｙｎｅ、　＾ａｎ、　＾ｐｐ１．　Ｂｉｏｌ、　 １０４：　４０５−４１２　ｆ＋９８４年発行）参照］［Ｃｈ＊ｕｌｂ＊ｎｉ　 ａｎｄ　Ｒｅｂｎｂｏ＋（。 Ｊ、１ｎｖｅ＋ｌｅｂ＋、Ｐｘ＋ｂｏ１．　Ｉｆ：　２３４−２３７　（１９７ １年発行）１Ｐ＋＊ｃＬｉｃ＊ｌ　Ａｐｐｌｉｃｘｔｉｏｏ　ｌｏｔ　］＋ｚｅ ｃｌ　Ｃｏｎｔｒｏｌ、’　Ｒ，Ｒ。 Ｇ＋ｔｏｔｄｏｓ　ｔｎｄ　Ｂ、＾、Ｆｅｄｅ＋ｉｅｉ、ｅｄｓ、、　ＣＲＣＰ ｒｅｓｓＩａｅ、、ＢＯＣＩ　Ｒｔｔｏｎ、ＦＬ　Ｎ！１８６年発行）の５ｈｔ ｐｉ＋ｏ。 １ｍ　ｙｉｖｏ　Ｐｒｏｄ＋＋ｃｌｉｏｎ　ｏｆ　Ｂｍｃｕｌｏｖｉ＋ｕｓｅｘ 　参照］を起源として単離された　しかし、　セロリ・シャクトリ虫であるシン グラバ・ファルシフエラからウィルス力（単離されたとの報告（Ｌ　まだ知られ ていない。 本発明のウィルスを、制限酵素分析法（ＲＥＮＩにより上記の近縁ウィルスと比 較し、　また広い宿主域を持つことで知られている多重包埋オートグラバ・カル フオルニカ（ＡｃＭＥＶｌとも比較した　その結ＩＪ、ＩＩＥＮパターンＣＬ本 発明のウィルスが他の公知のウィルスとは異なるものであることを明確に示した 技術的課題 本発明の課題は　害虫の制御に有用なセロリ・シャクトリ主　即ちシングラバ・ ファルシフエラカ毫ら単離される新ウィルスを提供することにあム 本発明の他の課題番Ｌ　昆虫生息地において新ノ（キュロウイルスを使用してな る害虫の制御方法を提供することにあム 本発明の更に他の課題は下記に詳細に説明するが。 本発明の明細書を検討し、　かつ実施すれば　当業者に明白となろう。 発明の開示 本発明のウィルスの名称＋１　多重包埋セロリ・シャクトリ虫ウィルス（Ｃｅｌ ｏｔｙ　Ｌｏｏｐｃ＋　Ｍｕｌｔｉｐｌｅ　Ｅ＋＋ｂｅｄｄｅｄＶｉｚｓ）　（ ＨＰシー８５−ＣＬｌｌＩＥＶｌトｔつ、　コ（Ｄライにスｊ＊　フイダホ州　 ８３３４１　キンバレー、　郵便箱１８６．　ルート１、　合衆国農業省土壌水 質研究所（丁ｈｅ　Ｕｎｉｔｅｄ　５ｌａｔｅｓＤｅｐ＊＋ｔｍｅｎｔ　ｏｆ　 Ａｇ　「　１ｃｕｌｔｕｒｅ、　５ｏｉｌ　ａｏｄ　ＷｈｅｔＲｅｓｅａｒｃｈ 、　Ｒｏｌｅ　Ｉ、　Ｂｏｘ　１８６．　Ｋｉｍｂｅ＋ｌｙ、Ｉｄｔｂｏ　８３ ３４１）に長期保存されると共に　メリーランド州２０８５２　ロックビル、　 バークローンドライブ１２３０＋　アメリカン・タイプ・カルチャー・コレクシ ョン（ＴｈｅＡｌｅｒｉｅａｎ　Ｔｙｐｅ　Ｃｕ目ａｔｅ　Ｃｏ１１ｅｃｔｉｏ ｎ、Ｎ３０１　Ｐｘｒｋ１ｍｗｎＤ＋ｉｙａ、　Ｒｏｃｋｗｉｌｌｅ、　ＭＤ　 ２Ｇ８５２１　ｉ：、ブタベスト条約に基づく寄託がなされていａ ミズリー州り−パー郡ブレイリーホームのキャベツ畑から四齢のシャクトリ虫幼 虫を数匹を採集し、　当研究所に於て人工食餌を与えながら観察すると共に　寄 生虫の有無を確認した　２Ｂ後２匹の幼虫がリンシ目の核多角体病の典型的な徴 候［Ａｉｘｔｖｍ、’　ＩＩｌｓｅｃｔＰｕｂｏｌｏｇｙ、Ａｎ　ｋｄｖｔａｃ ｅｄ　Ｔｒｅａｔｉｓｅ、’　Ｅ、　＾。 Ｓｌｅｉｍｉｕｓ　、ｅｄ、、Ｖｏｌ、　ｌ、ｐｐ、３８１−４１２．　Ａｅｍ ｄｅ＋＋ｉｃ　Ｐ＋ｅ！答、Ｎｅｗ Ｙｏｌｋ　＆　Ｌｏｎｄｏｎ　（１９６３年発行）参照〕を示して死亡したこの 幼虫を取り分けて顕微鏡で調べたところ、　大きさが異なり、　且つ形態学的特 徴を備えた無数の封入体が組織に存在することが観察された　死体を無菌蒸留水 （ＳＤＷ）　３．Ｏｍｌ中で粉砕し、　ホモゲネート（ｈｏｍｏｇｅｎｔｔｅｌ をナイロン・オーガンデー布で濾通した後　生物検定および透過型電子顕微鏡ｉ ＴＥＭｌ観察用のアリコートｆｉｌｉｑｕｏ＋ｘ）を作成した　サンプルのうち 、　非感染の幼虫は生態条件に合わせて飼育を続け、　セロリ・シャクトリ東　 即ちシングラバ・ファルシフェラ（Ｋｉ＋ｂｙｌに成長することを確認した 懸濁原液（Ｏ８）中のｌ　Ｂ／ｓ　ｌ数は１．４Ｘｌｏ”であった　Ｏ８のアリ コートを連続希釈して、　セロリ・シャクトリ虫の新生幼虫およびギヤベラ　シ ャクトリ虫、即ちトリコブラシア　ニ（Ｔ＋１ｃｈｏｐｌｕｉｉｘ　１ｌｉ）　 （Ｈｕｂｎｅ＋ｌの生後２４時間の幼虫を用いて生物検定を行った［　１１ｏｎ ｏｌ＋ｏ　ｓｏｄＢｅａｍｉｎｇ、Ｊ、Ｅｃｏｎ、１．ｏｌｏｍｏｌ、６３：　 １６Ｎ−１６９？　ｆ１９７Ｇ年発行）参照コ、　全ての幼虫（１処置後１０日 以内に死亡融解した　感染組織を顕微鏡（５００倍、位相差）で調べたところ、 　１．６−２．６μ−の大きさを有するＩＢが無数存在し、そのうち大サイズＩ Ｂが支配的であることが観察された（約３．１比）、ＩＢの形態が異なるの１１ 　単純包埋［５ＥＶｌと多重包埋ｆＭＥＶｌとが共に存在することを示すものと 考えられた　そこで、　さらに　もとの分離物からＩＢを分画して透過型電子顕 微鏡により観察したところＳＥＶの存在を確認したカー　格子状に広範囲に観察 を続けた結果でＣよ　多重封入体ｉＭＥＩＢ＋が支配的な形態であった）ＩＰＶ −８５−ＣＬＭＥＶの分裂増殖に１１トリコブラシア・二の幼虫が適しているこ とが分かった　従って、　１０００１Ｂ１０．１ｍを含む懸濁液（凍結貯蔵）か ら、　希釈による細菌汚染を防ぐため連続希釈液＋２００．　＋００□　５０． 　＋５．１０．　および１．０　ＩＢ／ｍ＠”ｌを調製した　この中量低濃度の ＩＢで死亡した幼虫（各回２５匹、６回処理）を選び出して、　その後の分裂増 殖に使用した　希釈液処理をしたトリコブラシア・二幼虫は４日以内に全て死亡 融解したが　このうち２つの最低濃度の幼虫１２匹を調べたところ、　細菌に汚 染されていなかった　これらの幼虫のうち大サイズＩＢのみを含む２匹を無菌蒸 留水中で粉砕し、　ＩＢを単離し、水洗し且つ分画遠心法により濃縮した　この 懸濁液は細菌汚染がなく、　その後の全ての分裂増殖および試験にはこのものか ら取り分けて使用した ・ＨＰＶＪ５−ＣＬＩＪＥＶ＋＝ 感染した幼虫１Ｌ　リンシ目幼虫の核多角体病の典型的な徴候［＾口ｉｗｔの上 記文献参照］を示すのが肉眼で観察された　これらの幼虫は　嗜眠に陥り１食餌 の摂取をや八　乳白色になって死亡し、続いて全般的に黒色化し最後には皮膜が 破裂（融解）してゆくのが認められた　脂肪体　気管基又　血球　表皮の細胞核 にＩＢが観察された　不作為法により抽出したＩＢの平均直径は測微計（５０Ｇ 倍、　位相差）による測定値で１．８７±０．０９μ烏標準偏差値（範囲一２． ０−３．０μｓ、ｅｘｔｏｌであった　電子顕微鏡写真で１１　ウィルス粒子（ ビリョン）は多重包埋で、各ＩＢに多数の塊りがついていることを示していた制 限酵素分析法においてはＩＩＰＶ−８５ＰＣＬＭＥＶのＤＮＡは独特の切断パタ ーンを示し、　このウィルスが他の近縁ウィルスとは異なるものであることを結 論づけている。 ”　’　−ＲＰＶ−８５−ＣＬＭＥＶとＡｃＭＥＶと（ｉ　トリコブラシア・二 幼虫により容易に分裂増殖することができた　集菌方法は時間がかからず、遠心 分離法による１Ｂの単離も容易であった　集菌時。 細菌汚染による障害は少なかったばかりでなく、　しかもその全ては人工食餌に 起因するものであり、　従って接種材料として用いたウィルス懸濁液が細菌に汚 染されることはなかった　一方、　感染幼虫の中から同一の外観を持つのみを選 び出すことにより物理的に汚染を防止する試みも数回行った　最も効果的な方法 としては融解前に幼虫の死体を集めて凍結する方法を拳げることができも　この 他にも死亡前に幼虫を人工食餌から離し無菌ベトリデッシュに移して、　３０℃ で死亡融解するまで培養することも行った　ホモゲネートは無菌蒸留水と混合し た＠、ＩＢを遠心分離法により採取した＾ｃＭＥＶ製剤１工　細菌その他の細胞 を溶解するため３゜３′％デオキシコール酸ナトリウム溶液で処理した　この方 法は非常に効果的で、　実質的に純粋なＩＢ懸濁液を得ることができた　ウィル ス粒子がアルカリを放出する（ｔｈｅ　ｈ１友ｌｉ　＋ｅｌｅ■ｅ　ａｔ　ｔｂ ａ　ａｌＩｃｌｅｏｃｉｐｓｉｄｓｌ前あるいは制限酵素による特性付は前に純 粋なＩＢ懸濁液を調製する方法として常にこの技術が用いられている。 〜 通常の生物検定試験１１ＰＶ−８５−ＣＬＭＥＶトＡｃ１１ＥＶ〕比較　および 感受性試験はすべて懸濁原液毎に作成したアリコートによって行った　トリコブ ラシア・二に対するＡｃＭＥＶ（Ｆ）活性ｆＬｃｓｍ＊ｏ、　Ｈ１８／ｍ１１” ｌハペイｈ　ｆＶｔｉｌｌらの報告［Ｅｎｖｉ＋ｏｎ、Ｅｎｔｏｍｏｌ、ＩＩ： 　１１８７−１１９２　（目８２年発行）参照コと同一であった。　生物検定試 験で１１　１回５０匹の幼虫を用いる試験を少なくとも４回宛繰り返してデータ を作成し２一方比較生物検定は全てこれと同時に行った　通常の感受性試験１上 　必ずしも繰り返して行はなかった　しかし、　感受性ありと報告された幼虫は 全て顕微鏡によって調べ代表的観察事項　例えば感染組織を写真で記録した　マ ンジュカ・セクスタｉＭｘｍｄｏｃ＊　５ｅｘＮｌ幼虫の場合１１１Ｂを感染幼 虫（Ｍｔｎｄｕｅｘ　５ｅｘＮｌから採取し、　トリコブラシア・二の新生幼虫 に対して生物検定を行った力（、）リコブラシア・二幼虫は全て３日以内に死亡 融解し、ＩＰｖ−８５−ＣＬＭＥＶが検出された　この感受性試験において１上 　市販のウィルス殺虫剤［エルカ−ｆＥＬｃＡＲＩ　Ｊの推奨使用量（４ｏＬ／ 為ｃｒｅ、　Ａ、１．４Ｘ］０”　ＦＩＢ／２）と同様の濃度ｔｏｏ　ｌＢ／■ ”での試験も行った　このことにより現実的ではあるが　比較的には穏健な感受 性推定値となった 生物検定の結果でＩｔ　ｌ（ＰＶ−８５−ＣＬＭＥＶがシングラバ　ファルシフ エラ１ｓｙａ（＋＊ｐｂｉ　Ｉａｌｃｉｌｅ＋ｍｌ、　トリコブラシア・二（丁 ＋ｉｅ）＋ｏｐｌｕｓｉａ　ｏｉｌ、ヘリオチス・ジーｔＨｅｌｉｏｔｈｉｔｘ ｅｓｌおよびヘリオチス・ビルセンスｆＨｅｌｉｏｌｂ口マｉ＋ｅｓｃｅｎｓｌ の幼虫に対して特に高い活性を持っていた二とおよびリンシ目１Ｂｄｅ＋ｌの中 １０科ｆｌｓｍｉｌｙＮ３種（ｓｐｅｃｉｅｘｌ　（Ｔｘｂｌｅ　Ｖ）に感染力 があったことを示していたＴｉｂｌｅ　ｌ　Ｉｔ　シングラバ・ファルシフェラ とトリコブラシア・二の新生幼虫のＩＩＰＶ−８５−ＣＬＭＥＶの各種濃度に対 する使用量関連死亡反応を纒めたものである。　トリコブラシア・二幼虫１１　 ＨＰ　Ｖ　−８５−ＣＬ　１１　Ｅ　Ｖ全濃度に対してシングラバ・ファルシフ ェラ幼虫よりも高い感受性を持っていも ＲＰＶ−８５−ＣＬｌｉＥＶｌｔ　スヘ’）　ト５　ムカ広く、　活性ノ高イ多 重包埋核多角体病ウィルスである。　公知の文献と比較しても、　ヘリオナス属 複合（ｃｏｍｐｌｅｘ）に対してこのウィルスが既存の［エルカ−（ＥＬＣＡＲ ＩＪ　（ｔ・リオチス単純包埋ウィルス）　Ｎｇｗｌｌｏ、　Ｊ、１ｎｖｅ＋ｔ ｅｂｒ、Ｐｉｔｂｏｌ、７：３１５−３１９　ｆ＋９６ｓ年発行１；　Ｉｇｎｏ ｌｌｏ、Ｊ、１ｎｖｅ＋ｔｅｂｒ。 Ｐｔ１ｈｏ１．８：　５３１−５３６　［１９６６年発行１；　１ｕ１１＋１１ １０１ａｄＣｏｕｃｈ、Ｍｉｔ＋ｏｂｉ＋Ｉ　Ｃｏｎｔｒｏｌ　ｏｆ　Ｐｅ５ｌ 　ｓｎｄ　Ｐｌ！＋ＮＤｉｓｅ■ｅｓ　１９７０−１９８０．　Ｈ，Ｄ、　Ｂｕ ＋ｇｅｓ　（ｅｄ、ｌ、ｐｐ、　３３０−３６２、＾ｅ１ｄｅｍｉｅ　Ｐ＋ｅｇ ｔ　Ｉｎｃ、、　Ｌｏｎｄｏｎ（１９８１年発行）参照］よりも邊かに高い活性 を持つことが分かもＲＰＶ−８５−ＣＬＭＥＶｆ＾ｃｌＪＥＶノ幼虫死亡必要日 数および両割のＬＴｓｓ値の相違点を丁ｘｂｌｅ　ＩＩに示す。 Ｔｘｂｌｅ　１．　ＨＰＶ−Ｐ、５−ＣＬＭＥＶＩ：　ヨルシングラハ・ファル シフェラとトリコブシア・二の１　′直゛−、− シングラバ・ファルシフェラ 使用量　平均値 １　ｔ　＋Ｍ Ｏ，７５９３１３ｔｏｏ　８５．７１７９．５９　８９．６６±６．３６０．５ ０　７５．００　８７．５０６０．００７６．０９　７４．６５±５．２７０． ２５　５６．２５　８２．ＧＯ６３，０４５８，３コ　６４．９１±　７，１フ ０．１０　３５．５６　５２．０８３４．６９２５．００　３６．Ｈ±８，７８ ０、！Ｉｓ　２７．６６　３０．Ｎ　２５．００１３．８４　２３．９３±４． ９９トリコブラシア　ニ 使用量　平均値 ｔ　＋Ｓ Ｏ，７５８７，７６９４，１２ｔｏｏ　Ｌｏ、２０　９３．０２±９．７７０、 ＳＧ　６２．５０　７８．００９５．９２８１．６３　７９．５１±９．０８０ ．２５　６６．００　８０．００８２１５５４．９０　７０．８１±８，３８０ １０　３１．３７　３２．６９４２．８６３５．２９　３５．５５±４．５８０ ．０５　１６．３３　２０．００３４．ＧＯ２５，８０２３，８３±５．１７Ｔ ＊ｂｌａ　Ｉｆ、ｗｌｌｏが及ｆｆ１ｏｏ　ＩＢ／ｍｆｌＰＶ−８５−ＣＬＭＥ Ｖ、！＝ＡｃＭＥＶニ、！、ルリンシ目αｍｄ軒住蝿力昧ψ）ＬＴｓｓしＴｓｗ −日数 ＨＰＶ−１ｔｓ−ＣＩｊ［ＥＶ　ＡｅＭＥＶ種　ＩＱ　ＩＢ／ｗ”　１００１８ ／ｍ　１０１８／ｕ”　１００１８／ｗ”１１ＰＶ−８５−ＣＬＭＥＶと人ｃＭ Ｅνとを比較する上で２　アグロチス・イプシロン幼虫の感受性と急速に駆除さ れた事実は特に興味深イ、Ｔａｂｌｅ　ＩＩＩ　ｔ！　ＨＰＶ−８５−Ｃ１，Ｍ ＥＶトＡｅＭＥＶ（７）３濃度に対する１０種の反応を示したものである。　Ｉ ＩＰＶ−８Ｓ　−ＣＬ　Ｍ　Ｅ　Ｖは１０種金工に対して活性があり、　しかも １０日の試験期間内で１０種のうち７種で死亡率１００％となっていａＡｃＭＥ Ｖは１０種の中３種で死亡率１００％となってはいるがビニリス・ラパエ１Ｐｉ ｅｒｉｓ　＋ａｐａｅ１．　ベリドロマ・ソウシア（Ｐｅｒｉｄ＋ｏＩＩｉ　５ ｔｕｅｉｉｌまたはダイアクリシアー／（−ジニカ（Ｄｉａｃ＋１ｔｉａ　ｖｉ ｒｇｉｎｉｃｉｌに対しては感染力を持たなかった　（即ち、　ＩＩＰＶ−８５ −ＣＬＭＥＶが奏功した幼虫において。 ＡｃＭＥＶｌｔ死亡率０％テあツタｔ、ｔｌＰＶＪ６−ＣＬＩＪＥＶがこれラノ 濃度において＾ｃＭＥＶよりも高い活性を持っていることは明かであも　生物検 定によるＬＣｓ自値（Ｔｉｂｌｅ　ＩＶＩで転１（ＰＶ−８５−ＣＬＭＥＶと＾ ｅＭＥＶの活性の違いを明白に示している。 ＨＰＶ−８５−ＣＬＭＥＩＩトＡｃ１１ＥＶＩ：　ヨルヘＩＪ　ｔ　チス・シー 幼虫ノＬＣｓｓを比較するト、ｌ！ＰＶ−８５−ＣＬＭＥＶノ生物検定活性ｊｔ ＡｃＭＥＶのそれよりも２８．６％高い。 Ｔｌｂｌｅ　Ｖａ上）ＩＰＶ−！Ｉｓ−ＣＬＭＥＶヲ１００−２００１８／ｕｍ ”濃度で食餌培養基に混入して奏功した種をまとめたものであって、　これで全 部であるとは言えないにせＡ　ＲＰＶ−８５−ＣＬＭＥＶの適用範囲（ｘｐｅｃ ｔ＋ｕｍｌがいかに広いかを示してい＆　ＨＰＶ−８５−ＣＬＭＥＶｌｌ　ブラ ックカット・’７−　Ａ　（ｂｌｔｃｋｃｌｗｏｒｉ、　フォールウェッブワー ム（Ｉｓｌｌ　ｗｅｂｗｏ＋ｉ、ベルベットビーン・キャタピラ−（ｙｅｔマｅ ｔ　ｂｅａｎｃ　＊　ｌ　ｅ　ｒ　ｐ　ｉ　Ｉ　Ｉ　ｔ　＋ｌ、　タバコ蛾ｆ＋ ｏｂｘｃｃｏ　ｂｕｄｗｏ＋ｌ１１．　コーンイヤー１ワームｆｃｏ＋ｎ　ｅｍ ＋ｔｏ＋ｍ１．　キャベツ°シャクトリ虫ｆｃｉｂｈｘｇｅ　１ｏｏｐｅ＋ｌ、 　大豆シャクトリ虫ｔｓｏｙｂｅｘｎ１ｏｏｐｅ＋１．　フォールアーミーワー ム１ｌａｌｌ　ａ＋ｍｙｗｏ＋ｄ。　コドリングモス（ｃｏｄｌｉｎｇ　１ｉｏ ｌｈｌ、　渡来型キャベツ虫（ｉｍｐｏｒｔｅｄ　ｃｓｂｂｘｇｅ　ｔｏｔａｌ 、ネーブルオレンジ・ワーム（＋＋ｘｖｅｌ　ｏ口Ｂｅｗｏ＋ｔ　ダイヤモンド パックド°モスｆｄｉａｍｏｎｄ　ｂａｃｋｅｄ　ｍｏｌｂｌ、Ｂ　−ロビアン ・コーン・ボアジー［Ｅｕｒｅｐｅｘｎ　ｃｏｒＯｂｏ＋ｅｒ）、サンフラワー モス（ｓｕｎｆｌｏｗｅｒ　ｒＡｏｔｂｌ、アーモンド・モス（ｉｌｍｏｎｄ　 ｍｏｔｂｌ。 メディタレニアン・フラワー−モスｆＭｅｄｉｌｅｚ１ｎｅａｎｆｌｏｏｒ　１ ｌｏｉｂ１．　レイズンーモス（＋ｉｉｉｎ　ｍｏｌｂｌ（７）他１６のリンシ 目昆虫など、広範囲の感染力を持っているたぬ　広い適用範囲で個体群を駆除す る方法を与える点で極めて重要であム　大きい経済的被害を与える昆虫のうち二 のように広範囲の種類に感染力を持つ多重包埋核多角体病ウィルスζ裏　このも の以外では報告されていない。 本発明のウィルス殺虫剤１よ　ウィルスを純粋な形で単離する必要はなく、幼虫 ホモゲネートなどの培地あるいはホモゲネートの分画から直接に工業生産するこ とができる。　もちろん　これ以外の手段よって生産してもよい、　高い特異性 　即ち対象生物と非対象生物の反応各々を高い確度で予測することがめられる使 用方法で１１　純粋あるいは実質的に純粋なウィルスの組成にすることが好まし く行われる。　例えば　幼虫材料中に含まれる不要の成分のため所望の作用に好 ましくない影響のおそれがある場合などがこれに当たａＴｘｂｌｅ　ＩＩｌ、リ ンシ目各種新生幼虫を宿セとする場合の３濃度によるＲＰＶ−８５−ＣＬＭＥＶ トＡｃＭＥＶノ比較％死亡率 ＲＰＶ−８５−ＣＬｌｌＥＶ　ＡｃＭＥＶ５日　１０日　５日　１０日 １１１／ｍｍ’　１００　１０　Ｃｏ　１００　１０　１．Ｇ　ｔｏｏ　１０　 １．０　１００　ｔｏ　１．０へリオチス・ジー（Ｈｅｌ　１ａｌｈｉｓ　ｔｅ ａ１８０　９６　０　１００１ｆ）０　１９　Ｉ８　１６　０　５６　５２　０ へリオチス・ビルセンスＱＬ　ｖｉ＋ｅｓｃｅｎｓ）＋００＋ＯＯＯ−−７９１ ００１０００−−０ヘリオチスサブフレキシアＯｆ　５ｕｂｌｌｅｘａ１１００ １００　０　−　−　６７　１００１００　０　−　−　ＩＪツボドブテラ・フ ルギベルダ（Ｓｐｏｄｏｐｌｅ＋２１＋Ｂｉｐｅ＋ｄｉ１９８７４　Ｇ　１Ｈ７ ４４７０２１０７４２１０ツボドブテラ・オルニソガリ（Ｓ、ｏ＋ａｉｌｂｏｇ ｓｌｌｉｌＩＱ［ｌ　９６　０　１００１００　５　９８　８９　０　１００　 ９５　０アグロチス・イプシロンηにｒｏ【ｉｉ　１ｐｓｉｌｏｎ１５７６４　 ０　７１８８　３　４３２８　０　５９　３６　ｆｌアンチカルシア・ケマタリ ス伽いｃｕｓｉｉ　ｑｅｗａＬｘｌｉｓ１ビニリス・ラバｚ（Ｐｉｃ＋ｉｉ　＋ ｘｐｉｅｌＴＯ０１３００００００００ ベリドロマ・ソウシア（Ｐｅｒｉｄｒｏ＋ｕ　ｏｕｃｉａ１２４Ｇ　−４４６− ０００Ｏ００ ダイアクリシア・パージ二が■１為ｃｒｉｓｉｓ　ｖｉ＋に１ｎｉｃｔ１１００ ０　−　１０００−　Ｇｏ　ＯＯ００１匁世峰鵠０匹々宵寛 ｂ　二三齢の幼虫 Ｔａｂｌｅ　ＩＶ、新生幼会により生物検定したＨＰＶ−８５＜Ｌｌ＋ＩＥＶト ＡｃＭＥＶ　９洲中乳α１）ＩＰＶ−８５−ＣＬＭＥＶ　ＡｃＭＥＶ恕濁夜 種　ＩＢ／ゴ　ｌ　Ｂ／ａｆ　相対比 （Ｈｅｌｉｏｌｈｉｓ　ｚｅａｌ　０．３６　１０．３　２８．６倍へリオチス ・ビルセンス （）Ｌ　ｖｉ＋ｔｃｅｎｓｌ　Ｏ，３５０，４５１，３倍トリコプラシア・二 （丁＋１ｃｈｏｐｌｕｓｉｘ　ｎｉｌ　０１１５　０．３２　１１倍シングラバ ・ファルシフェラ （Ｓｙｎｇｒａｐｈｔ　ｌ１ｌｃｉｌｅｒｉｌ　Ｏ，Ｉｓ　−１１Ｔｉｂｌｅ　 Ｖ、人工また（−斗を宿主とするＨＰＶ−８５−ＣＩ、ＭＥＶｈ懸濁匣懸濁対液 る各ｍｍ受性パ４叶ｂＹある昆虫 ｆＬＥＰＩＤＯＰＴＥＲＡｌ ん　ヒドリガ科 （Ａｒｃい１ｄａｅ１ ０　セヤリチョウ科 ３、オートグラハ−ビロバ［５ｌｅｐｈｅｎｓ）５ヘリオチス・サブフレキシア （Ｇｕｅｎｅｅｌワタミハナゾウ虫 ｆｃｏｌｌｏｎ　ｂｏｌ１ｗｏｒｉ トマト・フルシーツワーム （ｔｏｍａｔｏ　Ｉｔ旧Ｌｖｏｒｍ） ８ベリドロマ・ソウシアｆＨｕｂｎｅ＋ｌ　バリエゲエテットカットワームｆＰ ｅｒｉｄ＋ｏ１１ａ　ｏｕｅｉａｌ　（ｖａ＋１ｅ３１【ｅｄ　ｃｕｉｗｏ＋ａ ｄ９、スドウフルシア・インクルデンス肯１ｋｅ＋ｌ　大豆シャクトリ虫ｆＰｓ ｅｕｄｏｐｌｕｓｉａ　１ｎｅｌｕｄｅｎｓｌ　ｆｘｏｙｂｅａｎ　１ｏｏｐｅ ｄ）１０、スボドブテラ・フルギベルダ（Ｊ、　Ｉｎ　Ｓ組ｔｂ）　フォール・ アーミーワームｆｓｐｏｄｏｐｌｅｒａ　Ｉ＋ｕｇｉｐｅ＋ｔｉｌ　ｆ！ａｌｌ 　ａｒｉｙｗｏｒｉ＋１．スボドブテラ・オルニソガリ（Ｇｕｅｎｅｅｌｉｓｐ ｏｄｏｐｊｅ＋ｉ　ｏ＋ｎ１ｔｈｏ（ａｌｌｉ）　イエローストライブト・アー ミーワーム（ｙｅｌｌｏｍ＋１ｐｅｄ　ａ＋ｒＡｙｖｏ＋ｃ１１２Ｊリコブラシ ア・二（ｌＩｕｂｎｅ＋）　キャベツ・シャクトリ虫［Ｔｒｉｃｂｏｐｌｕｓｉ ｘ　ｎｉｌ　（ｃａｂｂａｇｅ　１ｏｏｐｅｒｌＬ　ヒメハマキガ科 （Ｏｌｅｔｂｒｅｕｔ　ｉｄｍｅｌ ！、ラスベイレシア・ボモネラＬｌ　コドリング・モス１（Ｌａｓｐｅｙｒｅｓ ｉｘ　ｐｏｕｏｎｅｌｌａｌ　（ｃｏｄｌｉｎ（ｍｏｔｈｌＦ、　シロチョウ科 １Ｐｉｅ＋１ｄａｅ１ １、ビニリス・ラパエ（Ｌｌ　渡来型キャベツ虫ｆＰｉｅｒｉｘ　＋ａｐｉｅ） 　（ｉｍｐｏｒｔｅｄ　ｃａｂｂａｇｅｗｏ＋１１１２、コリアス・ユウリテー ムｆＥｏｉｓｄｕｍｌ　アルファルファ・キャタピラ−ｆｃｃｌｉａｉ　ｅ＋＋ ＋ｙｔｈｅｍｅｌ　（ａｌｌａｌｌｇ　ｃａｌｅ＋ｐｉｌｌｕ）０　メイガ科 （Ｐｙｔｉｌｉｄｉａｌ ｌ、アミエロイス・トランシテラ偕ａｌｋｅｒ）　ネーブルオレンジワームｆｈ ｙｅｌｏｉｓ　ｔｒｉｎｓｉｔｅｌｌａｌ　（ｎａｖａｌ　ｏ＋ａｎｇｅｖｏｒ ｉλアナカスタ・クエニエラ（Ｚｅｌｌｅ＋ｌ　メジタレニアン・フロア−モス １（Ａｕｑａｏａ　ｋｕｅｈｎｉｅｌｌａｌ　ｆＭｅｄｉ【ｅｔｒａｎｅ凰ｎ　 ｆｌｏｕｔ　ｍｏｔｈ１３、カドラ・フィクリレラ（Ｅｖｅｇｓｏｎｌ　レイズ ン゛モス０ｆｃａｄｒａ　ｌ１ｑｕｌｉｌｅｌｌａｌ　ｆｒａｉｓｉｎ　ｍｏ＋ ｈ１４、ダイアトラエア・グランデオセラ（Ｄｙａ＋）　サウスウエスタン・ツ ーンボアラー■ｉｘｔ＋ｚｅｔ　ｇｒａｎｄｉｏｉｅｌｌａ）　ｆｓｏｕｌｈｗ ｅｔＬｅ＋ｎ　ｃｏｒｎ　ｂｏ＋ｅ＋１５、エフニスチアコラテラ肯１ｋｅｒｌ 　アーモンドモズ（ＥｐｂｅｓＬｉａ　ｃａｕＬｅｌＬａｌ　ｆｉｌｍｏｎｄ　 ＠ｏｔｈ）６、エバークエスチス・リモサリス（Ｇｕｅｎｅｅｌｉｅ＋ｏｓｓ− ｓｔｒｉｐｅｄ　ｃａｂｂａｇｅｗｏ＋ｎｌ比　スズメガ科 １、　リンシ目 （ＬＥＰＩＤＯＰＴＥＲＡＩ 入　ヒトリガ科 ｌ　ヤガ科 ５、ブラシペナ・スキャブラ（Ｆ、）　グリーン・クローバ−ワームｆＰＩａｌ ｈｙｐｅｎａ　ｘｅｘｂ＋ｘｌ　ｆｒｅｅｎ　ｃｌｏｖｅｒａｏ＋ｄＣシャチホ コガ科 ［ＮｏＬｏｄｏｎｔｉｄｘｅｌ １、シンメリスタ・アルビフロンズ（Ｈｕｂｎｅ＋ｌ　レッド・ハンブトオーク ワーム６（Ｓｙｍｅｒｉｘｉａ　ａｌｂ由ｏｎｓｌ　（ｒｅｄ　ｈｕｎｐｅｄ　 ｐａｋｗｏ＋ｉＤ、　メイガ科 （Ｐｙ「ａｌ　１ｄａｅ） １、エラスモバルバス・リクノセラス（Ｚｅｌｌｅ＋］（Ｅｌａｓｌｌｏｐｘｌ ｐｕｓ　１ｉｑｎｏｓｅｌｌｕｓ）レッサー・コーンストーク・ボアジー （ｌｅｓｓｅｒ　ｃｏ＋ｎ５ｔａｌｋ　ｂｏｗｅｒ）已　スズメガ科 （Ｃｅ＋ｓＬｏｍｉｘ　ｃａｔｘｌｐａｅｌ　（ｃｔｌａｌｐａ　ａｐｈｉｎｘ ｌｌｌ、ショウシ目 （Ｃ：０ＬＥＯＰＴＥ劾〕 入　ハムシ科 （Ｃｈｒｙｓｏｍｅｌ　１ｄａｅ１ １、ジイコクラマ・スチュラリス（Ｆ、）　ラグウイード・ビートル（Ｚｙｑｏ ｑ＋ａＩＭＩａ　５ｕｔｕ＋１ｌｉｓｌ　（＋ａｇｗｅｅｄ　ｈｅｅｔｌｅ）１ １１６　ソウシ目 ■ＩＰＴＥＲＡ） 入　ユスリカ科 （Ｃｂｉ＋ｏｎｏｉｉｄａｅ１ １、チロノマス・リバリアス−１にｅｎｌ　ユスリカ、ブゴｉｃｈｉｒｏｎｏｍ ｕｓ　＋ｉｐａ＋１ｕｓｌ　ｉｅｏｍａｏｎ　ｍｉｄｇｅ）＆　イエバエ科 （Ｍｕｌｄｉｄａｅ） １、マスカド・メスチカ（Ｆ、　ｊ　イエバエ［ＧＪｕｓｃａ　ｄｏｎｅｓｌｉ ｃｉｌ　ｆｂｏｕｓｅ　ｌ１ｙｌｂ　食餌また（お諏ひ割酊に１００１Ｂ／ｍＣ 食餌表面に１３９１８／ｍ＄ ｄ　処理したシロザＬａｍｂｓ　ｑｕａｒ！ｅ＋ｓ）　ｆｃｈｅｎｏｐｏｄｉｕ ｍ　１ｌｂｕｏｌｌの群葉Ｃ食餌表面＋：２５０１Ｂ／ｍ １　食餌に１５０１８／ｍ；　Ｐ、Ｖ、Ｖａｉｌ、ＵＳＤＡ−ＡＲＳ、Ｆ＋ｅｓ ｎｏ、　Ｃａ１ｉ＋ｏｒｏｉｘ２　処理したクライミング・ミルクライード（Ｃ ｌｉｍｂｉａ（ｎｉｌｋｗｅｅｄｌ　（Ａｘｃｌｅｐｉｕ　ｓｐ、ｌの肝葉 ｂ　処理したビンオーク（Ｐｉｎ　ｏｉｋｌ　（Ｑｕｅ＋ｃｕｓ　ｐａｌｕａｌ ｒｉｉ　Ｍｕｅｎｃｈｈ、ｌの群葉１　処理したカタルバ（ｃｉＦｉｌｐａｌ　 （Ｃｚｌｉｌｐｉ　ｂｉｇｎｏｎｉｏｉｄｅｓ　Ｗｔｌｌ、ｌの肝葉］　処理し たテマリカンボクｆｏ鵬ｏｎ　ｒａｇｖｅｅｄ）　（Ａｍｂｒｏｓｉｘ　ａｒｌ ｅｍｉｓｉｉｌｏｌ　ｉａｌの詳萎ｋ　５０ｍ１の水中に４．４７５　ｘ　ＩＱ ’　ＩＢ／ｉｆを添加し、溶液を２５０　ｍ１通気ビーカーに入れて食餌とした 　−５の１処理１回 １　イエバニ用食餌 １（ＰＶ−！Ｉｓ−ＣＬＭＥＶ＋ｉ　公知の担体または賦形剖の中から適当なも のを用いて製剤に調製すム　特Ｃ：、農業経営上好ましいものがよい、　適当と される化合物担体の具体例として（ｉ　セルロース　砂態　水和性粉末のような 活性のない固体および水性界面活性剤混合物などが拳げられゑ　組成中のウィル ス濃度は　培養基（ｓｕｂｉｔｒｘｌｅｉ、対象昆虫の種類　使用方法　どのよ うな反応を所望するのかによって大きく異なるが　典型例としては少すくトも約 ４．０　Ｘ　ｌＯ’ナイＬ　４、Ｇ　Ｘ　ｌｆ１日＋１１＃カテある。　処理さ れる植物に対する植物毒性　非対象昆虫の耐薬性などを考慮して、　最高濃度を きめてもよい。 ウィルスのような昆虫病原菌の場合、　生物を保菌担体として用い病原菌を伝播 することが望ましい、　保菌担体に用いる生物して１裏　例えば対象昆虫に近い 種の昆虫で、　しかも病原菌の影響が比較的にすくないものが拳げられる０本発 明において（ｉ　「担体」なる語は化合物担体と生物を用いる保菌担体の双方を 含むものとする。 本発明のウィルスを使用する場合にＣ友　予め通常の試験により感染を起こすに 充分な有効量を設定して使用すａ　本発明においては害虫の撲滅を最終目的とし ており、従って「有効量」即ち「殺虫有効量」なる語は未処置群と比べ試験群に おいて有意の死亡率を達成するに足るウィルスの量を意味するものとすも　実際 使用の場合、　害虫の種類　幼虫の成長段限　培養基の性質　賦形副あるいは担 体の種類　使用期間など、　関連する要因により有効量を変えてもよい。 本発明のウィルス１上　昆虫が摂取することにより始めて効果を発揮するもので あり、従って制御対象である昆虫の所在位置またはその近辺で使用する。植物で ある場合に１１　使用方法の典型例として葉の表面に塗布することが拳げられる 。 本発明のウィルス殺虫剤は各種の昆虫の制御に効果があも　さらに詳しくは農業 経営上重大な被害のある昆虫　特にリンシ目に分類されるものが水剤の使用に適 しているカー　本発明の実施態様はこれによって制限されるのもではない。 本発明を次の実施例により詳細説明するが　本発明の特許請求範囲はこれによっ て制限されるものではない。 実施例１ 生物検定試験用ＨＰＶ−８５−ＣＬＭＥＶ懸濁仕込液の調製１１ＰＶ−８５−Ｃ ＬＭＥＶの接種材料原液（制限酵素試験用ウィルスの増殖に用いたもの）を用い て懸濁仕込液を調製し生物検定試験用とした　ウィルスの増殖にはトリコブラシ ア・二の幼虫（四齢中間期）を使用した　これらの幼虫は実験用コロニー（２０ 年以上連続継代飼育）から提供を受けたのもので、　小麦幼芽からなる標準人工 食餌［１Ｗｉ１日ａｓｏａ　ｅｔ　ｔｌ、、Ｊ、Ｅｃｏｏ、Ｅｌｏｍｏｉ　６５ ：　２６４−２６８　ｆ＋９７２年発行）参照］により四齢中間期に成長するま で飼養した　この中から一定の大きさの幼虫５００匹を肉眼により選び出し、　 区画セルのついたディスポーザブル・プラスチック・トレー［ｌＨｏ１ｌｏ　ｓ ｏｄ　ＢｏｅｎｉＢの上記文献参照］を）ＩＰＶ−１ｔｓ−ＣＬＭＥＶ水性懸濁 液＋４．４１１　Ｘ　１０’　ＩＢ；　５０１Ｂ／ｉ１１”）　０．１　ｍｌで 処理し、　この上に幼虫をおき人工食餌ｆ８９５　＋＋ｍ”ｌを与えた　このよ うにしたトレーを２６℃で４日間培養した（完全に遮光）、４日間の培養で幼虫 は死亡　体は弛緩し融解し始めていた　この瞳　死亡した感染個体の融解がさら に進むのを防ぐため、　トレーを一７０℃のフリーザー中においた（４８時間） 、　このようニシテ、　ＨＰＶ−８５−ＣＬＩＪＥＶ　ＩＢ（７）採集用トシテ 選Ａ、　、？：　５００匹の中から４３０匹の凍結幼虫（皮膜は完全に残存）を 得た実施例２ 採集方法 凍結幼虫を無菌蒸留水（幼虫１匹／１．０　ａｌｌに添加　「ストーパルｆｓｏ ｒマｔｌｌｌＪホモゲナイザー中におき、　３分随６０００　ｔｐｒＩで処理し てＩＢの水性懸濁液を調製したホモゲネートはナイロン・オーガンディ布で濾通 　５０−１のアリコートに分けた＆　５Ｏ−ａｔの分離管におき、　３０秩　２ ０００　ｒ　ｐ　ｍ　＋＝より組織の大破片を沈澱させた　さらに　１０分ＩＳ Ｉ　７０００　＋ｐｍによりＩＢをペレットにすると共（二　上澄み液を捨てた 後再びベレットを同量の無菌蒸留水に懸濁させた　この操作を３回繰り返し、　 最後に懸濁液１２”ｌＳ　＋＋ｌｌを水洗したｉ　ＩＢの計測を行った（改良型 ニューバウワ−（Ｎｅｏｂｒａｃｒｌモデル、発光線血球肚　位相差５００倍） ところ、　懸濁原液中のＩＢ濃度はｉ、７２　Ｘ　ＩＱｓＩＢ／ｉｆ　ｆｓＥＭ ：０．２３１　”’Ｃアリｌ”−懸濁原液２２５　ｍｌカラ！、　０−ｍｌのア リコート１３個を取分け、　頭部に栓のついた１５−ｍ１無菌ジスポーザブル・ プラスチック　チューブ中にこれらのアリコートを入れ　−４℃で凍結させて生 物検定用とした　このように調製したアリコート（Ｌ　試験毎に解凍希釈して用 いたが　この方法により生物検定を行う度に懸濁原液の解凍　再凍結を繰り返す 必要がな（なった 実施例３ ＡｅＭＥＶ＠濁仕込液の調製 アルファルファルーバー、　即ちオートグラバ・カルフオルニカ［５ｐｅｙｅ＋ ｌの多重包埋核多角体病ウィルス（ＡｃｋｌＥＶｌの凍結乾燥粉末を入手した　 提供先はアリシナ州フェニツク人　合衆国農業省農業研究馬匹部綿花研究所、　 フレッド　スチュワード博±ｉＤ＋、　ＦｅｃｄＳＬｅｗ＊Ｎ、υ５ＤＡ−＾Ｒ Ｓ、　ｗｅ！ｔｅ＋ｎ　Ｃｏｃｏａ　Ｒｅ＋ｅｔ＋ｃｈＬｔｂｏｚｌｏ＋７．　 Ｐｂｏｅｎｉｘ、＾＋１ｘｏｏａｌであった　この粉末の多角体封入体含有量は 約６．ＯＸ　ＩＱ曹ＦＩＢ／ｇ　テ、　１９７４年以来参照サンプルとして冷凍 貯蔵されて来たものであム　粉末　１００　Ｂをメスフラスコ中で無菌蒸留水　 １００ｍ１に懸濁し、　増殖原液を１４ｆｘ　さらに連続希釈して、血球計計測 を行いつつ８．８９　ｘ　１０’　ＩＢ／ｍｌ　を含有する接種材料５０ｍ　ｌ を作成した　このウィルスが長期保存（１２年）されたものであることから、　 増殖媒に四齢のトリコブラシア・二幼虫を使用すること、　任意に濃度を１００ ｔＢ／ｍｓ”とすること、　このものを食餌の表面に散布すること、　また細菌 感染を抑えるため、標準食餌（阻害剤含有）を用いることとした　食餌トレー９ 個（１個当り幼虫５０匹　各トレーの区画セルに分けて収容）を上記に従って処 理した上　２６℃で培養した（完全遮光）、処理後４日で、　幼虫は核多角体病 ウィルス感染症特有の徴候を示して死に始めた　通常の場合に問題となる二次細 菌感染を防ぐたゐ　嗜眠に陥ったり死んだりして弛緩した幼虫３２ｆ１匹を集ぬ 　無菌ジスボザブル・ペトリ・皿（直径１０　ｃａｌの上に置き３０℃でさらに もう１日すべての幼虫が融解するまで培養した　組織のホモゾネートを無菌蒸留 水９Ｇ１に添加しナイロン　オーガンデー布で濾過したところ、　バチルス型細 菌に汚染されていることが分かった（後日人工食餌トレーに起因したことが判明 ）。 このホモゾネートを分画遠心分離機により洗浄すると共Ｌ＝、１０分、　７．０ ００　＋ｐ＋＋でペレットにした　ベレットは（残存する細菌細胞を溶解するた め）３．３％ｆｗ／ｖｌデオキシコール酸ナトリウム溶液で処理し２６℃で約２ ４時間培養した　デオキシコール酸ナトリウム溶液を傾注しながら（上記のよう に１１８ベレツトを取り出し、　無菌蒸留水５０　ｉｔに再び懸濁した後　同様 にして水洗を二度繰り返した　水洗後ＩＢペレットを無菌蒸留水Ｔｏ　Ｉｌｌに 再び懸濁し、　この懸濁液のコードをＡｃＭＥＶ懸濁原液とし、　その後の全て のＡｅＭＥＶ生物検定に用いた　血球計計測では原液ｌ　ｉｔ当りのＩＢ含有量 は２．７３６　ｘ　１０−であった　ＡｃＭＥＶ懸濁原液から１．Ｇ−ｉｆのア リコート１２個を取分け、　その各々を頭部に栓のついた１５１１無菌プラスチ ツク・チューブ各−個にいれ　ラベルを貼り凍結して生物検定用とした 実施例４ 使用量関連死亡率　経時死亡凧　感受性各試験次の新生幼虫を用いて、　ＨＰＶ −８５−ＣＬＭＥＶオヨＵ　ＡｅＭＥＶ）使用量関連死亡率と経時死亡率を検討 した：　アグロチス・イプシロン（＾１＋ｏｌｉｓ　１ｐｔｉｌｏｉｌ、ヘリオ チス゛サブフレキシア（Ｈｅｌｉｏｔｈｉｓ　５ｕｂｌｌｅｘｓｌ、　ヘリオチ ス・ビルセンス（Ｈ，ｙｉｒｅｓｃｅｎｓｌ、　ヘリオチス・ジー（Ｌ　！ｅｔ ）、スボドブテラ・フルギベルダ（Ｓｐｏｄｏｐｌｅ＋ｔ　Ｉ＋Ｂｉｐｅ＋ｄｓ １．　シングラバ・ファルシフェラｆｓｙＢｔｔｐｈｔ　ｌ１ｌｃｉｌｅ＋ｘ１ ．　トリコブラシ７　・二ｔＴ＋ｉｅｂｏｐｌＩＩｓｉｍ　ｎｉｌ　ｆＡｃＭＥ Ｖ）増殖前ニシングラバ・ファルシフエラのコロニーが失われたた数ＡｅＭＥＶ の試験はこの昆虫については行わなかった）。 実施例５ シングラバ・ファルシフエラ新生幼虫に対するＩＩＰＶ−８５−ＣＬＭＥＶ（７ ）効果 シングラバ・ファルシフエラとトリコプラシア・二新生幼虫の使用量関連死亡反 応を測定した　事前に使用量について広範囲のスクリーニングテストを行った結 果でｉｔ　ＬＣｓｓは＜１．０１８／ａｍ’であった　１．６　ｘ　ｆｉｌ’　 ＩＢ／ＩＩｌを含む水性懸濁液を用いて連続希釈液をつくり食餌表面汚染法［１ （ｎｅｌｌｏ　ｉｎｄ　Ｂｏｅｎｉｎｇの上記文献参照］により生物検定を行ッ ？−ＩＢ濃度各々０．７５．０．５０．０．２５、　Ｏ，ＩＯ，Ｏ，Ｏ５ＩＢ／ ■”　を食餌表面に散布し、幼虫５０匹にｌ濃度を連続４日間与え　これを４回 繰り返してｌ濃度につき合計２００匹とするとともに　同時に幼虫５０匹に無処 理の食餌を与えてコントロールした　処理した食餌は随意に幼虫にとらせ（幼虫 １匹／セル）、　これを１０日間続け（死亡数は毎日記録）、　１０日０をもっ て実験を終了した　トレーは２６℃の常温器（完全遮光）に保持した各濃度によ る幼虫死亡数を計算し必要な場合には訂正［Ａｂｂｏｕ、Ｊ、Ｅｃｏｎ、Ｅｏｔ ｏａｏｌ、１８：　２６５−２６７　ｆ１９２５年発行）参照］を行っ）’、１ ０日間死亡数をパーセントに換算の五　プロビット（ｂｏｂ目）分析を行い回帰 方程式を計算した［Ｆｉｎａｅ７．　Ｐ＋ｏｂｉｌ　Ａｎ＊１７ｓｉｓ、　３ｄ 　ｅｄ、。 Ｃｏｍｂｒｉｄ（ｅ　υｎｉｖ、Ｐｒｅｓｓ、Ｌｏｎｄｏｎ　（１９７１年発行 ）；Ｂｏｇｗｉａｅ、　Ａ　Ｃｒ１ｔｉｅｉｌ　Ｒｅｖｉｅｗ　ｏｒ　口ｅ　Ｔ ｅｃｈｎｉｑｕｅｓ　Ｉ＋＋Ｔ６目ｉＢ　Ｉｎ５ｅｃｔｉｃｉｄｅｓ、　Ｃｏｍ 層ｏｉｗｅｓｌｔｈ＾（ｒｉｃ。 Ｂｕｒｅｘｕ、　３４５　ｐｐ、（１９７１年発行）参照コ、ＬＣｓｓの信頼限 界は確率９５％で計算した　トリコプラシア・二新生幼虫に対するＡｅＭＥＶの 実験も同一の手続によって行ったカーシングラハフアルシフエラ新生幼虫による ＾ｅｌＪＥＶの生物検定は行わなかった　２４時間俵　試験期間１０日間（毎日 １６００−１６３０時の間）の幼虫死亡数を処理毎に分けてプロットし、　上記 ２種の昆虫の経時死亡曲線（幼虫死亡数／処理のパーセント）を作成した 実施例６ 感受性　宿主域試験 この感受性および宿主域試験は　ミズリー州コロンビア、　合衆国農業省農業研 究ｉ　ＢＣＩＲＬ　ｆＵｓＤＡ−ＡＩＩＳ−ＢＣＩＲＬ、　Ｃｏｌｏｍｂｉ息、 　１ｌｌｉ目０す「ｉ）で飼育されているリンシ目昆虫ミズリー州中部で繁殖し ているものを野外から採集した幼虫段階のリンシ目昆血　およびミズリー州コロ ンビア、　ミズリー大学昆虫科目ｈｅ　Ｕｎｉｙｅ口！ｌｙ　ｏ！Ｍｉｓｘｏｕ ＋ｉ　Ｅｏｌｏａｏｌｏｇ７　Ｄｅｐｘ＋ｔｍｅｎ［、Ｃｏｌａｍｂｉ３Ｍ口５ ｏｕｒｉ）から提供された若干のコロニーを試験対象として実施した　また　メ リーランド州ベルッピル（Ｂｅｌｌｉｖｉｌｌｅ、　１Ｊｘｒｙｌｓｎｄ１．　 ミシシッピー州ストーンビルｆ！１ｌｏｎａｖｉｌｌｅ、　Ｍｉｘ慕口日ｐｐｉ １．　カルフォルニア州フレスノ（Ｐｒｅｘａｏ、　Ｃｓ１ｉｌｏ＋ｎ１ｚｌ、 　ジョーシア州チフトンｆＴｉｌｌｏｎ、　Ｇｅｏｆｇ目）に所在の合衆国農業 省農研究所から御協力を得、　それぞれが保持しているリンシ目幼虫から選んだ ものを用いてＨＰＶ−８５−ＣＬＭＥＶのスクリーニングテストを実施して頂い た　このようにして、　広範な種類の宿主（および成長段階）について、　ＨＰ Ｖ−８５−（：ＬＩＩＥＶ感受性試験を行った　（実用の場合の典型例として） 標準懸濁仕込液１０および１００　ＩＢ／ａｍ’　Ｉ使用量）を食面培養基（人 工および天然の宿主植物）に添加することにより、幼虫の感受性の生物検定を行 うこととしたが　上記濃度の中１００１８／ａｍ”は「ニレカー（ＥＬＣＡＲＩ 　Ｊの推奨使用量［ＩＮ、４　ｇ、４　ｘ　ＩＱ・Ｉ　Ｂ／ｇ＾１）と同等であ った　また１０日の試験期間内で上記濃度に対する幼虫の感受性が立証されたが （特有の徴候／症状、顕微鏡所見）２　野外に於ける実用の場合でもこれとはど んと同じものが所望されている。　成長が進んだ段階の昆虫（例えＩｆ、三−四 齢のカットワーム）および１０日の試験期間内で感染発生の蓋然性が低いと判断 された場合２　それに応じて使用量を増量した 実施例７ 水性粉末剤の調製 研究用の参考あるいは基準として、　標準化された安定性の高い水性粉末剤を調 製した［　Ｐ＋ａｅ、　４ｔｈ　Ｉｎ。 Ｃｏ１１ｏｑ、Ｉｎ５ｅｃｔ　Ｐｉｌｈｃｌ、、ＣｏＣｏ１１ｅ　Ｆｉｒに、Ｍ Ｏ（１９７１年発行）のＣｕｎｎｉｎｇｂ＋ｍ、　’Ｐｏ１ｙｈｅｄ＋ｏｓｉｘ 　ＶｉｒｕｓｅｓＩｎｆｅｃｔｉｎｇ　ｔｈｅ　Ｅａｓｌｅｚ＋　Ｈｅｍ１ｏｃ ｋ　Ｌｏｏｐｅｄ、Ｌｍｍｂｄｉｎａ１ｉ＋ｃｅｌｌｔ＋ｉａ’およびＭａ＋１ ｉ（ａｃｎｉ、　’？ｏｄｕｃｋｉｏｏ。 Ａｃｔｉｖｉｔｙ、　ｓｏｄ　５ａｆｅｌｙ　ｏｆ　ｔｈｅ　Ｄｏａ４１ａｓ− Ｆｉｒ　ＴｕｔｓｏｅｋＭｏｔｈ　Ｎ＋＋ｃｌｅｏｐｏ１７ｂｅｄ＋ｏｘｉｘ　 ｌｌｉ＋ｕｓ、’　υＳＤＡ、　ＦｏｒｅｓｔＳｅｒｖ、　Ｔｅｅｈ、Ｂｕｌｌ 、　Ｎｏ、１５８５　ｆ１９７ｇ発行）参照　］、調調製法としては　ペイルら ［Ｖｓｉｌ　ｅｌ　龜１．の上記文献参照］の方法を一部変更したものを用い九 　五齢のトリコブラシア・二幼虫５００匹からホモゲネートを作り、これから１ ．１３５　！　１０・１８／ｉｔを含む懸濁液２００　ｍｌを得たこの懸濁液を ２５０　ｍｌの「ナルジーン［Ｎｔｌ（ｅ＋＋ｅｌＪ遠心管に入れ１０分間　７ ．０００　Ｉｐｍにより分離した後　上澄み液を捨てた　ベレットを（細菌と細 胞の溶解のため）３．３％デオキシコール酸ナトリウム５０　ｅｌ中に再び懸濁 し、約２０時力２７℃で培養した　上記と同様の遠心分離により懸濁液からデオ キシコール酸ナトリウムを除き。 ベレットを無菌蒸留水１５０　ｍｌに懸濁し、　１０分間７．０００ＩｐＨの回 転をさせることにより水洗を行い、　これを２回繰り返した　第二回目の水洗を 終えた後　ベレットを無菌蒸留水１５０　ｍｌに懸濁し、　試薬用Ｄ（十目２２ ４８ラクトース（α−ラクトースの一水和物１　（Ｊ、　Ｔ、Ｈｉｋｅｄ、Ｉｎ ｃ、製）３５０！と共に１２００　ａｔ　ｒビルチス（Ｖｉ＋口Ｓ）」凍結乾燥 容器に入れ濃厚なスラリー（マルトースの代わりにラクトースを用いた）を形成 させた　凍結乾燥フラスコを回転させることによりスラリーをフラスコ内に一様 に散らせた後　先ず一７０℃のフリーザー内に１時間放置し、続いて２４時間の 凍結乾燥を行った　フラスコの内容物を取り出し乳鉢と乳棒により粉砕し、　こ れをＮｏ、４２真ちゅうスクリーン（３４５μ）でふるいにかけパラビン紙上に 落とした　これにより、均質度の高い白色粉末を得た凍結乾燥製剤は一部フリー ザー（−４℃）に収容した後１Ｂ／ｇの計量と活性の生物検定を行った実施例８ ＩＢ／区の測定 粉末１０　グラムを１００　ｍｌ　メスフラスコにとり、　充分量を加えて１０ ０　ｍｌとした　この懸濁液を２００１　ビーカーに入れ　短時間の音波処理（ １分間７５−１００ワツト）をして塊を粉砕した　連続希釈液を調製し、　血球 計によす凍結乾燥粉末のＩＢ／ｘ数を測定した　さらに　この懸濁液を濃度８９ ５（ｌ　ｌＢ１０．１　ｍｌに調整した後　三齢のトリコブラシア・へ　へリオ チス・ジー、　ヘリオチス・ビルセンスおよびスボドブテラ・フルギベルダの幼 虫を用いて生物検定を行い力価／感染力を追認した実施例９ 病理および顕微鏡所見 感染幼虫（裏　嗜眠に陥り、食餌をとらなくなり、乳白色となって死んで行き皮 膜は破裂した（融解）、　位相差顕微鏡（５００倍）で観察を行ったところ、　 切除して水性封入を通して見た感染組織および血液細胞　血液リンパにおいてＩ Ｂを容易に確認することができた実施例１０ 透過型電子顕微鏡測定 水性懸濁液（懸濁原液）を「エッペンドルフｆＥ　ｐ　ｐ　ｅ　ａ　ｄ　。 ｒｌ）Ｊ５４１２遠心分離機により１０分間Ｉｓ、ＯＮ　Ｉｐｍの処理を行いベ レット状の封入体（ＩＢ）を得た　このＩＢを２時間４℃で１％グルタルアルデ ヒド中ｆｐＨ７，２１で固定し、　４時間５％庶糖−カコジル酸ナトリウム緩衝 液（ｐＨ７，２１で洗い。 各回１時間宛の間隔をおいてこれを４回繰り返し２％四酸化オスミウムで固定（ １時間）、　再び蔗糖−カコジル酸ナトリウム緩衝液で洗った（１０分間）後　 各々２０．４Ｇ、　６０、８０．　９０および１００％エタノールで連続脱水し ｔ−、ＩＢを１００％エタノールに３０分間放置しそのｉ　１０分間！５．００ Ｏｒｐｍで遠ノｂ分離をおこなった　ベレットをスバーズ（Ｓｐｕｒｔ）培地に 浸透　包埋させて、　これからＬＫ、８２０８８ウルトラドームＶ　１ＬＩＮ＋ ｔｌｏｍｅ　Ｖｌ　ｌ：より薄片ｆ０．７−１゜０μｍ）を作成した　薄片には Ｉ−エタノール化酢酸ウラニルで色付け（１０分間）シ、続いて消イオ〉・水で 洗いクエン酸鉛で色付け（２分間）を行った　さらに　無菌蒸留水で洗い、　乾 燥の後ジオール＋ＪＥＯＬｌ　１００８電子顕微鏡により８０　ＫＶで観察した 国際調査報告

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １．ＨＰＶ−８５−ＣＬＭＥＶ，ＡＴＣＣ　Ｎｏ．ＶＲ　２２３７であることを 同定し得る特性を有することを特徴とするウイルス２．昆虫または昆虫の生息地 に殺虫剤を使用してなる昆虫の制御方法において、昆虫または昆虫の生息地にＨ ＰＶ−８５−ＣＬＭＥＶ，ＡＴＣＣ　Ｎｏ．ＶＲ２２３７であることを同定し得 る特性を有するウイルスの殺虫有効量を使用することを特徴とする昆虫の制御方 法。 ３．上記の昆虫がリンツ目であることを特徴とする請求項２に記載の昆虫の制御 方法。 ４．殺虫剤の組成において、ＨＰＶ−８５−ＣＬＭＥＶ，ＡＴＣＣＮｏ．ＶＲ　 ２２３７であることを同定し得る特性を有するウイルスの殺虫に充分な量と活性 がない担体とを含有することを特徴とする殺虫剤の組成。 ５．上記の活性がない担体がラクトースであることを特徴とする請求項４に記載 の殺虫剤の組成。