JPH04500162A - 組換え酵母による成熟タンパク質の分泌に関するシグナルペプチドについてコードする配列として新規ｄｎａ断片の適用、発現カセット、形質転換酵母及びそれに対応するタンパク質の製造方法 - Google Patents

組換え酵母による成熟タンパク質の分泌に関するシグナルペプチドについてコードする配列として新規ｄｎａ断片の適用、発現カセット、形質転換酵母及びそれに対応するタンパク質の製造方法

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JPH04500162A JP2507971A JP50797190A JPH04500162A JP H04500162 A JPH04500162 A JP H04500162A JP 2507971 A JP2507971 A JP 2507971A JP 50797190 A JP50797190 A JP 50797190A JP H04500162 A JPH04500162 A JP H04500162A
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Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ２３、請求項２２に記載の酵母細胞。
２４、請求項２２又は２３で記載された細胞が培養され、タンパク質が培地から 回収される、異種タンパク質の製造方法。
２５、　細胞が酵母細胞である、請求項２４に記載の方法。
２６、タンパク質がヒルジンである、請求項２４又は２５に記載の方法。
２７、タンパク質が昆虫デフエンジンである、請求項２４又は２５に記載の方法 。
明　細　書 組換え酵母による成熟タンパク質の分泌に関するシグナルペプチドについてコー ドする配列として新規ＤＮＡ断片の適用、発現カモ２ト、形質転換酵母及びそれ に対応するタンパク質の製造方法 本発明は、新規ＤＮＡ断片、及び真核（動物又は植物）又は原核（細菌）細胞、 更に詳しくはサツカロミセス（Ｓｉｃｃｈａ＋ｏｍ、７ｃｅｓ）株のような酵母 による異種タンパク質の分泌に関して有用なシグナルペプチドについてコードす るＤＮＡ断片としてのそれらの用途に関する。
組換えＤＮＡ技術による異種タンパク質の製造に際して通常追求される目的の１ つは、異種タンパク質を合成する細胞の培地中に分泌される産物の産生である。
実際上、特に大量産生用として産業上重要なタンパク質の製造の場合において、 それが成熟形として産生されるタンパク質について望ましい性質を留めているこ と、即ちタンパク質に融合されて留まっているいずれのアミノ酸又は付加ペプチ ド配列もないことが望ましい。更に、回収及び精製操作を容易化させるためには それが培地中に分泌されることが有利である。
細胞、特に真核細胞から分泌されるタンパク質は、成熟タンパク質に相当する断 片（活性形）と、ｐｒｅ”断片として知られ、シグナルペプチドとも称され、細 胞によるタンパク質の分泌メカニズムに関与するＮ末端断片とを含むポリペプチ ド前駆体の形で極めて一般的に合成される。加えて、このポリペプチド前駆体は “ｐｒｏ”断片と称される１以上の付加断片も含むことができる。
後者の場合において、ポリペプチド前駆体は“ｐｒｅｐｒｏ”前駆体又は第一前 駆体とも称される。
“ｐｒｏ″断片は大多数の場合においてシグナルペプチドと成熟タンパク質に相 当する断片との間に挿入されるが、但しこれは絶対的ルールではない。
シグナルペプチドは（１）細胞膜中へのタンパク質の挿入、（２）細胞膜を介す るタンパク質の移動又は（３）小胞体を介するタンパク質の分泌目的のため細胞 の小胞体中へのタンパク質の侵入を開始させる。シグナルペプチドがその機能を 果たすと、通常タンパク質加水分解開裂により分断されて、第一前駆体と同様に 生物活性を有しないか又は成熟タンパク質の完全生物活性を有しない“ｐｒｏ” 前駆体と称される第二前駆体あるいは成熟タンパク質を遊離する。
“ｐｒｏ”断片はそれがタンパク質の活性を阻止又は修正しているかぎり有用で あり、それによってタンパク質で生じうる毒性作用から細胞を保護できるか又は 生じうる修正もしくは分解からタンパク質を保護できる。それは分泌メカニズム にもある程度関与しうる。分泌プロセスの最後において、第二前駆体のｐｒｏ” 断片はタンパク質分解開裂により分断されて成熟タンパク質（活性形）を遊離す る。
・ｐｒｅ”断片と“ｐｒｏ”断片との結合部並びに“ｐｒｏ”断片と成熟タンパ ク質に相当する断片との結合部に、タンパク質が合成される細胞のプロテアーゼ の１つによって認識されるタンパク質分解開裂部位が存在する。このタンパク質 分解開゛裂部位は、“ｐｒｏ”前駆体においてプロテアーゼに接近可能であるが 、但しそれが成熟タンパク質に相当する断片中に存在する場合には接近不可能な ２．３又はそれ以上のアミノ酸の配列（以下、タンパク質分解配列と称される） から通常なる。明らかに３つのケースが可能であり、“ｐｒｅ”及び“ｐｒｏ” 断片の結合に関し以下で説明されている一一プロチアーゼは配列の開始部で切断 し、したがってタンパク質分解配列は“ｐｒｏ”断片で読取られねばならない； ・プロテアーゼは配列の末端で切断し、したがってタンパク質分解配列は“ｐｒ ｅ”断片で読取られねばならない；又は −プロテアーゼは配列の中間で切断し、したがってタンパク質分解配列は“ｐｒ ｅ”及び“ｐｒｏ”双方の断片で読取られねばならない。
これらの考慮事項は、“ｐｒｏ”断片と成熟タンパク質に相当する断片との結合 部に位置する開裂部位にも当然同様に該当する。
遺伝子工学法による合成前駆体の組立てのために可能なアプローチは、天然断片 （即ち自然界に存在する）を用いること、断片と組合せて新しいタンパク質分解 開裂部位を再形成させるようにあるアミノ酸又は新しいタンパク質分解開裂部位 を適切な箇所に挿入することであるが、この新しい開裂部位は合成前駆体が発現 される細胞のプロテアーゼの１つにより当然認識される。
合成タイプ及び前記分泌方法に関する例は、α因子（ＭＦα１又はＭＦα２遺伝 子でコードされる）とも称されるα性フェロモンＳ、セレビシアエ（Ｓ、　ｃｅ ＋ｅｖｉ＋１ａｅ）酵母のケースで説明される。α因子は）ｉｕｒｊａｎ及びＨ ｅ　ｒ　ｓｋｏｗｉ　ｌｚ、　Ｃｅ　ｌ　ｌ　（１９８２）　３０　：９３３で 記載されるように実際上“ｐｒｅｐｒｏ”前駆体の形で合成される。α因子の前 駆体の“ｐｒｅ”断片のアミノ酸配列はＭｅｔ−＾ｒｇ−Ｐｈｅ−Ｐ＋ｏ−３ｅ ｒ−１１ｅ−Ｐｂｅ−Ｔｂｒ−Ａｌｘ−Ｖａ　１−ＬｅＩＩ−Ｐｈｅ−＾１ａ− ＾１ａ−３ｅｒ−Ｓｅ＋−Ａｌｘ−Ｌｃｕ−Ａｌａであり、一方α因子の前駆体 の”ｐ　ｒ　ｏ”断片の場合は＾Ｉｔ−Ｐ＋ｏ−Ｍａｌ−人５ｎ−Ｔｂｒ−Ｔｂ ｒ−丁ｂｒ−Ｇｌｕ−＾５ｐ−Ｇｌｕ−Ｔｂｒ−Ａｌａ−Ｇｌｎ−１１ｅ−Ｐｒ ｏ−＾１ａ−Ｇｉｎ−＾Ｉａ−Ｖｉｌ−１１ｅ−Ｇｌｙ−Ｔ７ｒ−５ｅｔ−＾＋ ｐ−Ｌｃｕ−Ｇｌｕ−Ｇ１７−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ａｓｐ−Ｖａｌ−Ａｌａ−Ｖａ ｌ−Ｌｅｏ−Ｐ＋ｏ−Ｐｂｅ−８ｃｒ−＾５ｎ−５ｅｔ−Ｔｂｒ−Ａｓ＊−＾５ ｎ−Ｇｌｙ−Ｌｅｏ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ−！１ｔ−Ａｓｎ−Ｔｈ＋−Ｔｂ＋−１１ ｅ−＾Ｉａ−８ｅｒ−１１ｅ−Ａｌａ−Ａｌｘ−Ｌ７ｓ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−ＧＩ ７−Ｖａｌ−９ｅｒ−Ｌ！ｕ−Ａｓｐである。
意外にも、Ｎ末端がアミノ酸配列：　Ａｔｇ−Ｐｈｅ−３ｅｔ−Ｔｂｒ−Ｔｈｒ −Ｌｅｕ−＾１ｌ−Ｔｈｒ−＾１１−＾１ａ−Ｔｈｒ−Ａｌｘ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ −Ｐｈｅ−７ｂ＋−Ａｌａ−３ｅｔ−Ｇｌｎ−Ｖａｌ−３ｅｒ−Ａ１１を有する 酵母酵素の前駆体のＮ末端及びこのＮ末端の異なる変異体は異種タンパク質の分 泌に関するシグナルペプチドとして用−゛うることがここに判明した。“異種タ ンパク質”とは、宿主細胞で自然に産生されないか又は宿主細胞に由来しない配 列でコードされたタンパク質を意味する。
これによれば、本発明の主題は、アミノ酸配列がアミノ酸配列（１）又は（ｌｌ ）、好ましくは配列（１１）と少なくとも６０％、好ましくは少なくとも８０％ の相同度を示すペプチドについてコードする単離されたＤＮＡ断片である。配列 （１）及び（１１）は下記のとおりである：（１）＾ｒｇ−Ｐｂｅ−Ｓｅｒ−Ｔ ｂ＋−Ｔｈｒ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｔｂｒ−＾１ａ−Ａｌａ−Ｔｂｒ−＾１ｘ−Ｌ ｅｏ−Ｐｂｅ−Ｐｂｅ−Ｔｈｒ−＾１ｘ−３ｅｔ−Ｇｌｎ；（Ｉ　Ｉ）　Ａｒｇ −Ｐｈ！−Ｓｅ　ｒ−Ｔｈ　＋−Ｔｂｒ−Ｌｅｌｌ−Ａ１ｇ−Ｔｈ　＋−Ａ　ｌ 　ａ−Ａｔ　ａ−Ｔｂ　ｒ−Ａｌｘ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−Ｔｂｒ−Ａｌｌ −３ｅｒ−Ｇｌｎ−Ｖｘｌ−Ｓｅ＋−Ａｌａ　０“単離されたＤＮＡ断片”とは 、特にＫｉｅｂｌ　＆　Ｔａｎｎ化１、　ＢｘｃＬ、　Ｎｏｙ　１９ｇ９．１７ に６２５９で記載されるように、３′末端がβ−１，３−グルカナーゼ活性を有 する酵素についてコードするＤＮＡ断片と共有結合で結合されていないＤＮＡ断 片を意味する。
更に詳しくは、本発明のＤＮＡ断片は下記アミノ酸配列（ＩＩＩ）・ （ＩＩＩ）Ｒ１−Ｒ２−Ｒ３−Ｔｂｒ−Ｔｈｒ−Ｒ４−山−Ｔｈ＋−Ａｌａ−山 −Ｔｂｒ−山−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−Ｔｂｒ−Ａｌａ−Ｒ５−Ｒ６＋０　１ ５　１９ 〔上記式中Ｒ１はＡｒｇ及びＬＹ；から選択されるアミノ酸である；Ｒ及びＲ６ は各々独立してＡｌａ　、Ａｓｎ　、Ｃｙｓ　。
Ｇｌｎ　５Ｇ１７　、Ｈｉｓ　、　ｌｔｅ　、　Ｌｅｕ　、　Ｍｅｔ　、Ｐｂｅ 　５Ｐｒｏ、ｂｒ　、　Ｔｈｒ　ＳＴ＋ｐ　５Ｔ７ｒ及びＭａｌから選択される アミノ酸である；Ｒ及びＲ５は各々独立して川、Ｇｌｙ　。
Ａｓｎ　、Ｐｒｏ及びＳｅｔから選択されるアミノ酸である；Ｒ４はＶｓｌ　、 Ｌｅａ　、　Ａｌｉ　、Ｃ７ｓ　、　Ｐｈｅ　、　Ｉｌｅ及びＭｅｔから選択さ れるアミノ酸である〕 を含むペプチドについてコードする。
好ましくは、本発明のＤＮＡ断片は下記アミノ酸配列（ＩＶ）： （ＩＶ）　Ｒ１−Ｒ２−Ｒａ　”Ｔｂｒ−Ｔｈｒ−Ｒ４−Ａｌａ−Ｔｈｒ−由一 山−Ｔｈｒ−山−Ｌｅａ−Ｐｂｅ−Ｐｈｅ−Ｔｂｒ−＾１ａ−Ｒ５−Ｒ６−Ｒ７ 〔上記式中Ｒ１はＡｒｇ及びＬｙｓから選択されるアミノ酸である；Ｒ及びＲ６ は各々独立して山、Ａｓｎ　、　Ｃｙｓ　。
Ｇｉｎ　５ＧＩ７　、　Ｈｉｓ　−、ｌｌｅ　、　Ｌｅｌｌ、Ｍｅｔ　、Ｐｈｅ 　、　Ｐｒｏ　。
Ｓｔｒ　、　Ｔｂｒ　５ＴＩｐ−、Ｔ７ｒ及びＬａｉから選択されるアミノ酸で ある；Ｒ及びＲ５は各々独立して＾呻、ｃｌｙ　ｓ八＄”　ｓ　Ｐｒｏ及びＳｅ ｔから選択されるアミノ酸である；Ｒ４はＭａｌ　、Ｌｅｌｌ、山、Ｃ７ｓ　５ Ｐｈｅ　ｓ　ＩＩｇ及びＭｅｔから選択されるアミノ酸である；Ｒ７はタンパク 質分解配列である。Ｒ７は好ましくはタンパク質分解配列Ｒｓ　−Ｒ−Ｒである （式中Ｒ８は山、Ｖａｌ　％　Ｓｅｒ　ｓ　ＣＨ−。
ＧＩ７　、　Ｉｌｅ　、　Ｌｅｅ及びＴｈｒから選択されるアミノ酸であるｉ　 Ｒ９はＡ１１、Ａｒｇ　５Ｃｙｓ　、Ｇｌｎ　、　ＧＩ７　、　ｆｌｉｔ　ｓ山 、Ｌｅａ　、　Ｍｅｔ　、Ｐｈｅ　、　Ｐｒｏ　ＳＳｅ＋　、　Ｔｂｒ　５Ｔｔ ｐ　、丁７ｒ及びＶｘｌから選択されるアミノ酸である；ＲｌｏはＡｌｇ　、Ｃ ７ｓ　。
Ｇ１７５Ｌｅｅ　、Ｐｒｏ　、　Ｇｌｎ　、　Ｓｔｒ及びＴｂｒから選択される アミノ酸である）〕 を含むペプチドについてコードする。
本発明によると、好ましいＤＮＡ断片は下記アミノ酸配列ｍ、（ｖｌ）、（Ｖｌ ｌ）及び（Ｗｉｌｌ）から選択されルアミノ酸配列を含むペプチドについてコー ドする：（Ｖ）　Ａｒｇ−Ｐｈｅ−９ｅｒ−Ｔｈｒ−Ｔｈｒ−Ｌｅａ−＾１ｍ− Ｔｂｔ−＾１ｇ−Ａｌａ−丁ｈ＋−＾１ｓ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−Ｔｂｒ− Ａｌａ−３ｅｒ−Ｇｌｎ；（ｖ＋）＾＋ｇ−Ｐｈｅ−３ｅｒ−Ｔｂｒ−Ｔｂ＋− Ｖａｌ−＾１ａ−Ｔｈ＋−＾１１−＾１ａ−Ｔｈ＋−＾１ｘ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ− Ｐｂｅ−Ｔｂｒ−Ａｌａ−５ｕ−Ｇｌｎ；（Ｖｌｌ）Ａｒｇ−Ｐｂｅ−３ｅｔ− Ｔｂｒ−Ｔｈｒ−Ｌｅｕ−Ａｌｉ−Ｔｈｒ−＾１ｍ−＾１ｉ−Ｔｈｒ−山−Ｌｅ ｕ−Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−Ｔｂｒ−山−３ｅｒ−Ｇｌｎ−Ｒ７（式中Ｒ７は前記と同 義である）；及び （Ｗｉｌｌ）　Ａｔｇ−Ｐｈ！−Ｓｅ＋−ＴｈｒＴｈｒ−Ｖｘｌ−Ａｌａ−Ｔｈ ｒ−Ａ１１−＾１ａ−Ｔｂｒ−山−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ−Ｐｂｅ−Ｔｂｒ−山−Ｓｅ ＋−Ｇｌｎ−Ｒ（式中Ｒ７は前記と同義である）。
絶対的に好ましくは、Ｒ７はＲ８カ由１、Ｒ９がＳｅｒ及びＲｌＧが山の配列で ある。
非常に特に好ましくは、本発明のＤＮＡ断片はそのヌクレオチド配列として下記 配列（ＩＸ）、（Ｘ）　、（ＸＩ）及び（Ｘｌｌ）のうち１つを有している： （ＩＸ）　ＣＧＴ　ＴＴＣＴＣＴ　ＡＣＴ　ＡＣＡ　ＧＴＣＧＣＴ　ＡＣＴ　Ｇ ＣＡ　ＧＣＴ　ＡＣＴＧＣＧ　ＣＴＡ　ＴＴＴ　ＨＣＡＣＡ　ＧＣＣＴＣＣＣＡ Ａ（Ｘ）　ＣＧＴ　ＴＴＣＴＣＴ　ＡＣＴ　ＡＣＡ　ＣＴＣＧＣＴ　ＡＣＴ　Ｇ ＣＡ　ＧＣＴ　ＡＣＴＧＣＧ　ＣＴＡ　ＴＴＴ　ＴＴＣＡＣＡ　ＧＣＣＴＣＣＣ ＡＡ（ＸＩ）　ＣＧＴ　ＴＴＣＴＣＴ　ＡＣＴ　ＡＣＡ　ＧＴＣＧＣＴ　ＡＣＴ 　ＧＣＡ　ＧＣＴ　ＡＣＴＧＣＧ　ＣＴＡ　丁ＴＴ　ＴＴＣＡＣＡ　ＧＣＣＴＣ ＣＣＡＡ　ＧＴＴ　ＴＣＡ　ＧＣＴ（Ｘｌｌ）　ＣＧＴ　ＴＴＣＴＣＴ　ＡＣＴ 　ＡＣＡ　ＣＴＣＧＣＴ　ＡＣＴ　ＧＣＡ　ＧＣＴ　ＡＣＴＧＣＧ　ＣＴＡ　Ｔ ＴＴ　ＴＴＣＡＣＡ　ＧＣＣＴＣＣＣＡＡ　ＧＴＴ　ＴＣＡ　ＧＣＴ本発明のＤ ＮＡ断片でコードされるペプチドは、３位のアミノ酸と１８位のアミノ酸との間 にα−へリックス構造を有する疎水性領域を含んでいる。この構造はシグナルペ プチドとしてそれらを使用に適したものにさせる上で役立つ。シグナル配列の疎 水性部分は、主にアミノ酸＾Ｉｎ　、Ｃ７ｓ　、　Ｐｈｅ　、　ｌｌｅ　、　Ｌ ｅａ　、　Ｍｅｔ及びＶａｌから構成されることが知られている。したがって、 アミノ酸の一部修正でシグナルペプチドがその役割を果たしうる能力に修正を起 こさないことを予測することも可能になる。
したがってもう１面において、本発明は異種タンパク質が合成される宿主細胞で の異種タンパク質の分泌に関して有用なシグナルペプチドについてコードするＤ ＮＡ断片として本発明のＤＮＡ断片の適用を提案している。
一般的に言えば、本発明は原核又は真核細胞、好ましくは後者で実施される。真 核細胞とは、例えば哺乳動物又は酵母細胞である。絶対的に好ましくは、本発明 の断片でコードされるシグナルペプチドを用いた異種タンパク質の分泌は、例え ばサツカロミセス属、更に詳しくはＳ。
セレビシアエ種の酵母細胞で実施される。
当然ながら、シグナルペプチドについてコードするＤＮＡ断片として本発明のＤ ＮＡ断片は翻訳開始コドン、通常メチオニンについてコードするコドン、特ニＡ ＴＧによって前置される。
本発明のＤＮＡ断片はタンパク質発現用カセットの組立てに用いてもよいが、そ の断片は開始コドンで前置されており、単独であるか又は他の成分、例えば“ｐ ｒｏ”断片と組合されている。これらのＤＮＡ断片は当業者に公知の技術による オリゴヌクレオチドシンセサイザーを用いた化学合成で製造してもよい。
本発明は、異種タンパク質のシグナルペプチドについてコードするＤＮＡＷｆｒ 吟として本発明のＤＮＡ断片を含む異種タンパク質発現用カセットにも関する。
詳しくは、成熟異種タンパク質の分泌に必要な情報を含んだ本発明の発現カセッ トは、少なくとも。
ａ）転写及び翻訳開始シグナルを含むＤＮＡ断片ｂ）本発明のＤＮＡ断片及び　 ・ Ｃ）成熟異種タンパク質についてコードするＤＮＡＥ片（翻訳終結コドン含有） を順次含んでいる。
東−変異体において、断片ｂ）と断片Ｃ）との結合部に、発現及び分泌プロセス の最後に成熟タンパク質を遊離させるようなタンパク質分解開裂部位につ（・て コ・・ドするＤＮＡ配列が存在するかぎり、断片ｂ）は断片Ｃ）と枠内で直接融 合させてよい。好ましくは、タンパク質分解開裂部位についてコードするＤＮＡ 配列は断片ｂ）上で読取られる。
第二変異体において、本発明の発現カセットは“ｐｒｏ”ペプチド断片について コードするＤＮＡ断片ｂ’りを更に含んでいる。一方で断片ｂ）及びｂ’）　と 他方で断片ｂ’）及びＣ）との結合部にタンパク質分解開裂部位についてコード するＤＮＡ配列が存在するかぎり、この断片ｂ’）は断片ｂ）及び断片Ｃ）と枠 内で融合される。
多数の断片ｂ’）が本発明のカセットで使用可能である。
特に、様々な断片ｂ’）が合成で組立てられる。例えば、α因子の前駆体の“ｐ ｒｏ”断片についてコードするＤＮＡ断片からの合成断片ト′）の組立ては以下 で記載されている。この配列は全体でも又は一部として用いてもよい。具体例に おいて、この配列は“ｐｒｏ”断片中３〜４２位のアミノ酸についてコードする 部分、即ちＡｌａ−Ｐ　ｒｏ−Ｇ　ｌ　７−Ｌｅｕ−Ｌ　ｅｕ−Ｐｂ　ｅ−１１ ｅ−Ａｓｎ−Ｔｈ　ｒ＝Ｔｈ　＋−１１ｅ−Ａ　Ｉ　ａ−３ｅ　ｒ−１１ｅ−Ａ ｌｇ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ｇｌｏ−Ｇｌｕ−ＧＩｙＪ’ａｌ−３ｕ−Ｌｅｉ−Ａｓ ｐについＣコードする配列の欠失後に用いられる。断片ｂＭを形成させるため、 後者のＤＮＡ配列の後に（１）タンパク質分解開裂部位を含むペプチド又は（２ ）タンパク質分解開裂部位についてコードする配列を続けるが、後者の態様が好 ましい。最も詳シ、＜は、後者の開裂部位はＬｙｓ−Ａｒｇ又はＡｔａ−ＡＢで あるが、これはＫＥＸ２遺伝子でコードされかつジペプチドＬｙｓ−Ａ＋Ｈ又は ＾ｒｇ−ＡｒｇのＣ末端で切断する酵母ｙｓｃＦエンドペプチダーゼで認識され る。要するに、具体的断片ｂ’）はＡｔａ−Ｐｒｏ’−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ Ｐｈｅ−１１ｅ−Ａｓｈ−Ｔ）＋＋−Ｔ）ｕ−！Ｉｅ−Ａｌａ−８ｅｔ−１１ｅ −Ａｌａ−＾１ａ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｖｌ−３ｅ＋−４ｅｎ− Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ａｔａに〜・）いてコードする。
配列ａ）は、断片（′−）でコードされる異種タンパク質を合成する上で望まし 、い細胞内Ｃ機能性であるプロモーター、好まＩ７＜は酵母内で機能性であるプ ロモータ・−を特に含んでいる。例えば、ＰＧＫ、ＥＮＯｌ及びＭＦαｊプロモ ー　ター又＋、！　Ｐ　）Ｉ　Ｏ５及びＧ　Ａ　Ｉ、　］のような誘導プロモー ターのように、異種タンパク質についてフードする遺伝子の転写で機能性が確認 された酵母の構成プロモーターが挙げられる。例えば酵母のＭ　Ｆａｌ遺伝子の 要素が登用カセットで用いられる場合には、λ１Ｆα］遺伝子のプロモーターが 使用可能である。
最後に、発現カセットは好ましくは酵母内で機能性である転写終結シグナルを含 むＤＮＡ断片ｄ）、例えばＰＧＫ遺伝子の断片も含むことができる。
一般的に言えば、本発明の発現カセットは原核又は真核細胞、好ましくは哺乳動 物又は酵母細胞のような真核細胞中に導入されるが、酵母細胞が特に最も好まし い。
この導入は酵母のゲノムに直接導入される組込み用構造中に又は自己複製プラス ミド中にカセットを入れて、双方のケースで形質転換細胞を得るように実施して もよい。
プラスミドが自律的である場合には、分布及び複製のための要素、例えば酵母の ２μプラスミドの場合のような複製源を含む。加えて、プラスミドはｕ　ｒ　ａ 　３又は１ｅｕ２酵母を補完するＵＲＡ３又はＬＥＵ２遺伝子のような選択要素 を含んでいてもよい。特に、欠失されたそのプロモーターからのＵＲＡ３遺伝子 （ＵＲＡ３−　ｄ）が有利に用いられる。
これらのプラスミドは、プラスミドがシャトルプラスミドでなければならない場 合、細菌内でそれらを複製するための要素、例えばｐＢＲ３２２の場合のような 複製源、ＡｍｐＲのような選択マーカー遺伝子及び／又は当業者に公知の他の要 素も含んでいてよい。
前記のように、本発明はプラスミドに挿入された又は細胞のゲノムに組込まれた いずれかの（１）本発明のＤＮＡ断片又は（２）本発明の発現カセットにより形 質転換された細胞にも関する。
プロモーターがＭＦα１遺伝子の場合であるとき、形質転換された酵母細胞はＭ ＡＴα接合型であることが好ましい。例えば、適切な選択圧力で酵母内にプラス ミドを維持するためプラスミドで補完された遺伝子型ｕｒａ３又は１ｅｕ２の株 が用いられる。
ｊ：Ｌ後に、本発明の主題は本発明の細胞が培養されてタンパク質が培地から回 収されることを特徴とする異種タンパク質の製造方法である。このプロセスはい かなる異種タンパク質の製造にも適用される。これらのタンパク質の中では、ヒ ルジン又はデフエンジン類、例えばデフエンジンＡが特に挙げられる。
更に詳しくは、本発明は本発明の形質転換酵母株からの成熟形ヒルジンの分泌方 法に関する。
本発明は最も具体的にはヒルジンの産主にうまく適用され、この理由から本発明 について説明する例の１つはこのタンパク質に関する。実際上、主供給源が医用 ヒルの唾液腺であるヒルジンがトロンビンの非常に特異的かつ非常に有効な阻害 剤である。したがって、それは、臨床的使用上非常に高純度の産物を要求し、こ のため遺伝子工学産生用の有利な候補である、非常に有利な治療剤である。
ＨＶＩ、ＨＶ２及びＨＶ３と命名されたヒルジンのいくつかの自然変異体が同定 された。次いで、これらの自然変異体及び他の類似体が例えば本出願人名の欧州 特許公開ＥＰ−Ａ−２００．６５５号及びＥＰ−Ａ−２７３゜８００号明細書で 記載されているように種々の宿主細胞中で遺伝子工学によって産生された。大腸 菌（Ｅｓｃｂｅ＋ｉｃｈｉｍ　ｃｏｌｉ（Ｅ、ｃｏｌｉ））及びＳ、セレビシア エ属の酵母で合成されたヒルジンの比較では、大腸菌で合成されたヒルジ〉が細 胞内に留まり、このため非常に多数の大腸菌ポリペプチドから精製されねばなら ないことを示した。したがって、成熟形で分泌されるヒルジンを得るように酵母 内でヒルジン遺伝子を発現させ、ヒトに対して発熱原性又は毒性の物質を酵母で 産生させないことが特に有利である。
このため本発明はすべてのヒルジン分子、即ちヒルジンの自然変異体自体又は１ 以上の変異を生じたが抗血栓活性を留めたヒルジンにも関するが、後者のタイプ の変異体はアナログと称される。下記例は既に記載された特許公開ＥＰ−Ａ−２ ７３．８０００号明細書で記載されているｒＨＶ２Ｌｙｓ４７　（４７位のアミ ノ酸Ａｓｐがアミノ酸Ｌｙｓに変異した組換え変異体ＨＶ２）と命名されたアナ ログについて更に詳細に関する。
本発明はデフエンジン類の産生にも関する。フォルミシン類としても知られるデ フエンジン類は、グラム陽性微生物に対して殺菌活性を有するある昆虫双翅類の 血リンパから本来抽出されるペプチドである。これらのデフエンジン類は欧州特 許出願ＥＰ−Ａ−３４９，４５１号明細書で更に詳細に記載されている。デフエ ンジンＡはその配列としてＡｌｘ−Ｔｂ＋−Ｃｙｓ−Ａｓｐ−Ｌｅｕ−Ｌｅｉ− ３ｅｒ−ＧＩＹ−Ｔｂ＋−Ｇｌ７−１１ｅ−＾＄ｎ−旧５−５ｅｔ−Ａｌｔ−Ｃ ７ｓ−＾１ｌ−Ａｌｌ−旧５−Ｃ７ｓ−ＬｅＩｌ−Ｌｅｙ−Ａ　ｒｇ−Ｇ　Ｉ　 ７−Ａｓｎ−Ａｒｇ−Ｇｌ７−Ｇｌ　ｙ−Ｔ　７　ｒ−Ｃｙ　５−Ａｓ　ｎ−Ｇ 　ｌ　７−Ｌ７５−Ｇｌ７−Ｖｓ　ｌ−Ｃ７ｓ１−Ｃ７ｓ−Ｖａｔ−Ｃ７ｓ−Ａ ｒを有する基本ペプチドである。デフエンジンＢは３２位のアミノ酸のみがデフ エンジンＡと異なり、アルギニンがグリシンに代わっている。
下記例で本発明の他の特徴及び利点を明らかにできる。
これらの例は下記図面で説明される。
−図１はプラスミドｐＴ０２９５８の概略構造について示す。
一図２はベクターＭ１３ＴＧ３８３９及びＭｌ　３ＴＧ３８４１の概略構造につ いて示す。Ｍ１３７Ｇ３８３９の場合に端部の斜線枠はＭ１３ＴＧ１０３、Ｍ１ ３ＴＧ３８４１の場合はＭ１３７Ｇ３１４９に相当する。
−図３はベクターＭ１３７Ｇ３８４５の概略構造について示す。斜線枠はＭ１３ ７Ｇ３１４９に相当する。
−図４はプラスミドｐＴＧ３８２８の概略構造について示す。
一図５はプラスミドｐＴＧ３８６４の概略構造についｐＴＧ３８６７、ｐＴＧ３ ｇ９４及び ｐＴＧ３８８４の組立て Ａ、ベクターＭ１３７Ｇ３８４５の組立てプラスミドｐＴ０２９５８　（図１） は欧州特許公開ＥＰ−Ａ−２５２．８５４号明細書で記載されたプラスミドｐＴ Ｇ１８３３とほとんど異ならず、ｒＨＶ２Ａｓｐ４７に関するコード配列を有す る。プラスミドｐＴＧ２９５８は人工的に導入されるＨ　ｉ　ｎ　ｄ　ＩＩＩ制 限部位を含んでいない。プラスミドｐＴＧ２９５８は以下を含んでいるニ ーＭＦα１遺伝子の５′領域に相当する１２１７塩基対（プロモーター、シグナ ルペプチドについてコードする配列、“ｐｒｏ”領域及びペプチドＬｙｓ−Ａｒ ｇについてコードする配列を含む）及び４塩基対（Ｂｇｌｌ＋’部位；フレノウ 処理）の断片 −ｒＨＶ２Ｌｙｓ４７の相補的ＤＮＡを含む２３４塩基対の断片 一酵母のＰＧＫターミネータ−を含む２４３塩基対の断片 −特にこのプラスミドの複製源及びアンピシリン耐性遺伝子を含むｐＢＲ３２２ のＰｖｕｌｌ−ＥｃｏＲＩ断片（２２９２塩基対） −ＰｓｔＩ部位に挿入された欠失形として酵母のＬＥＵ２遺伝子を含む酵母（Ｂ 形）の２μプラスミドのＥｃｏＲＩ−Ｈｉｎｄｌ！Ｉ断片 一酵母のＵＲＡ３遺伝子のＨｉ　ｎｄｌｌｌ　−Ｓｍａ　Ｉ断ＬＥＵ−２ｄ、２ μ及びＵＲＡ３配列を有するベクターｐＴＧ２９５８のＮｅｏ　Ｉ−Ｎｃｏ　Ｉ 断片を欧州特許公開ＥＰ−Ａ−２６８．５０１号明細書で記載されたｐＴＣ２３ Ｑ　ＯのＮＣＯ！　’　Ｆ！　ＣＯ■断片で置き換えるが、これはプロモーター が欠失されたＵＲＡ３遺伝子（ＵＲＡ３−　ｄ）及び２μプラスミドの配列を有 しており、ｐＴＧ２８７７を生じる。
ベクターＭ１３ＴＧ３８３９　（図２）をＭ１３７Ｇ１０３　［Ｋｉｅｎ７．Ｍ 、　Ｐ、、　ｅｌＩ＋、　（１９Ｈ）Ｇｅｎｅ、　２６．９１−９９３から誘導 し、ｐＴＧ２８７７のＨｉ　ｎｄｌｌｌ　−Ｈ１ｎｄｌｌｌ断片を同部位に導入 する。５ａｌＩ制限部位を下記オリゴヌクレオチド：　５’　ＣＡＡＴＧ＾ＡＡ ＡＡＴＧＧＴＣＧＡＣＴＡＴＣＡＡＴＣＡＴＡＧを用いた特定変異誘発によりｒ ＨＶ２Ｌｙｓ４７についてコードする領域の翻訳終結コドンから下流でこのベク ター内に導入し、Ｍ１３ＴＧ３８３９Ｓａｌｌを得る。次いでｓｐｈ　Ｉ制限部 位を下記オリゴヌクレオチド：５’　ＧＡＣＧＧＣＣＡＧＴＡＧ＾＾ＴＴＧＧＣ ＡＴＧＣＴＡＴＴＧＡＴＡＡＧＡＴＴＴＡＡＡＧを用いた特定変異誘発により発 現カセットから上流で導入すると同時にＵＲＡ３−　ｄ配列を除き、Ｍ１３７Ｇ ３８４０を得る。
ベクターＭ　１３　ＴＧ　１３１　（Ｋｉｅｎ７．Ｍ、Ｐ、、　ｅｌ　１１．　 （１９１１３）Ｇｅｎｅ、　２６．９］−９９）をＰｓｔｌで開裂させ、末端を ＤＮＡポリメラージーのフレノウ断片による処理でプラント化し、しかる後それ を自らと再結合させ、Ｍ１３７Ｇ３１６０を得る。次いでこのベクターをＳｍａ 　Ｉ及びＥ。ｏＲＶで開裂し、しかる後再結合させ、Ｍ１３７Ｇ３１４９を得る 。
ｒＩ！Ｖ２ＬｙＳ４７発現カセット（転写終結配列なし）を有するＭ１３７Ｇ３ ８４０　（前記）の５ｐｈＩ−ｓｐｈ　Ｉ断片をＭ１３７Ｇ３１４９のｓｐｈ　 Ｉ　−５ｐｈ　Ｉ部位に導入し、Ｍ１３７Ｇ３８４１を得る（図２）。
ＭＦα１の前駆体の“ｐｒｏ”断片における３〜４２位のアミノ酸についてコー ドする配列を特定変異誘発でＭ１３ＴＧ３１４９から除去し、Ｓｍａ　Ｉ制限部 位を下記オリゴヌクレオチド： ５’　ＣＴＣＣＧＣＡＴＴＡＧＣＴＧＣＴＣＣＣＧＧＧＴＴＡＴＴＧＴＴＴＡＴ ＾＾ＡＴを用いて導入し、欠失“ｐｒｏ”配列と以下称されるものを得る。
Ｍ１３ＴＧ３８４２をこれにより得る。α因子の前駆体のＡＴＧを破壊するＢａ ｒｎＨＩ制限部位を下記オリゴヌクレオチド： ５′＾ＡＴＡＴＡＡＡＣＧＡＴＴ＾＾ＡＡＧＧＡＴＣＣＧＡＴＴＴＣＣＴＴＣ＾ ＾ＴＴＴＴＴＡでの特定変異誘発によりこのベクター内に導入する。これでＭ１ ３７Ｇ３８４３を得る。リン酸化後、下記オリゴヌクレオチド： ５’　ＧＡＴＣＣＧＴＴＴＣＴＣＴＡＣ丁ＡＣＡＧＴＣＧＣＴＡＣＴＧＣＡＧＣ ＴＡＣＴＧＣＧＣＴＡＴＴＧＣＡＡＡＧＴＧＡＴＧＡＴＧＴＣＡＧＣＧＡＴＧ　 ５’及び ５’ＴＴＴＣＡＣＡＧＣＣＴＣＣＣＡＡＧＴＴＴＣＡＧＣＴＧＣＴＣＣＣＡＣＧ ＴＣＧＡＴＧＡＣＧＣＧＡＴＡＡＡＡＡＧＴＧＴＣＧＧＡＧＧＧＴＴＣＡＡＡＧ ＴＣＧＡＣＧＡＧＧＧ５’　をＢａｍＨＩ及びＳｍａ　Ｉで切断されたベクター Ｍ１３７Ｇ３８４３内に挿入し、それによってＡＴＧのない配列ｘ１を導入する 。ＡＴＧを復元するため、ＢａｍＨ１部位を下記オリゴヌクレオチド： ５′＾ＡＴＡＴＡＡＡＣＧＡＴＴＡＡＡＡＧＡＡＴＧＣＧＴＴＴＣＴＣＴＡＣＴ ＡＣＡＧＴＣを用いた特定変異誘発により除去し、以下を含むベクターＭ１３７ Ｇ３８４５　（図３）を得るニ ー断片ａ）としてＭＦα１遺伝子のプロモーター、次いでＡＴＧコドン 一断片ｂ）として配列ｘ１ 一断片り’）としてＭＦα１遺伝子の欠失“ｐｒｏ”配列、次いでＬ７ｓ−Ａ＋ １についてコードするコドン−断片Ｃ）としてｒＨＶ２Ｌｙｓ４７についてコー ドする配列 一ベクターＭ１３７Ｇ３１４９の一部 Ｂ、プラスミドｐＴＧ３８６４の組立て欧州特許公開ＥＰ−Ａ−２５２，８５４ 号明細書で記載されたプラスミドｐＴＧ８４８をＢｇｌｌｌで切断し、しかる後 再結合させ、ｐＴＧ２８８６を得る。ｐＴＧ２８８６の大Ｈｉｎｄｌｌｌ　−Ｅ ｃｏＲＩ断片をＴ４リガーゼの存在下でＳ、セレビシアエの２μプラスミドの配 列を有するプラスミドｐ　Ｆ　Ｌ　１　（Ｐｕｅｎｔ、　Ｓ、Ａ、　ｔｌ　ａｌ 。
（１９８５）Ｙｕｓ＋、　１．８３−１３８）の２．１ｋｂＨｉｎｄｌｌｌ　− ＥｃｏＲＩ断片に結合させ、プラスミドｐＴＧ２８８６ＬＥＵ２−　ｄＳＵＲＡ ３−　ｄを得る。次いで欧州特許公開ＥＰ−Ａ−２５８，５０１号明細書で記載 されたＵＲＡ３−ｄ遺伝子を有するプラスミドｐＴＧ２８００の０．９ｋｂＨｉ ｎｄｌｌｌ断片をこのプラスミドのＨｉｎｄ１１１部位に挿入し、ｐＴＧ２８８ ６ＵＲＡ３−ｄ１デルタＬＥＵ２−ｄを得る。次いでいくつかの制限部位を有す るＭｌ　３ＴＧ１３１　（Ｋｉｅｎ７．Ｍ、Ｐ、、ｃｌ　ａｔ。
（１９８３）　Ｇｅｎｅ、　２６．９１−９９３のＳｍａ　Ｉ　−Ｂｇ　ＩＩＩ 断片をこのプラスミドに導入し、以下を有するｐＴＧ３８２８（図４）を得るニ ープロモーターが欠失したＵＲＡ３遺伝子の配列（ＵＲＡ３−　ｄ）　− 一本ケースにおいて異種タンパク質ｒＨＶ２Ｌｙｓ４７の発現用要素を挿入しう るＭ１３ＴＧ１３１由来の制限部位 一酵母のＰＧＫ遺伝子の転写ターミネーターー大腸菌内で複製及び選択しうるｐ 　ＢＨ３２２の断片−酵母内での複製及び分裂エネルギー等分配に必要な構造要 素を有する２μプラスミドの断片ベクターＭ１３７Ｇ３８４５　（図３）の５ｐ ｈｌ−３ａｌＩ断片をｓｐｈ　Ｉ及び５ａｌＩで消化されたプラスミドｐＴＧ３ ８２８に導入し、発現ベクターｐＴ６３８６４を得る（図５）。
Ｃ０発現ベクターｐＴＧ３８６７の組立てＭＦα１遺伝子の前駆体についてコー ドする配列を完全に除去するため、下記オリゴヌクレオチド：５’　ＧＣＣＴＣ ＣＣＡＡＧＴＴＴＣＡＧＣＴＡＴＴＡＣＧＴＡＴＡＣＡＧＡＣＴＧＣを用いた特 定変異誘発をＭ１３７Ｇ３８４５　（図３）で行い、ベクターＭ１３７Ｇ３８４ ６を得る。コノベクターの５ｐｈｌ−８ａｌＩ断片をｓｐｈ　Ｉ及び５ａｌＩで 消化されたプラスミドｐＴＧ３８２８　（図４）に導入して、発現ベクターｐＴ Ｇ３８６７を得る。このベクターでは、配列Ｘ１及びｒＨＶ２Ｌｙｓ４７につい てコードする配列が隣接している。このプラスミドの概略構造を得るためには、 図５においてＭＦα１の欠失”ｐｒｏ”配列を除去するだけでよい。
Ｄ８発現ベクターｐＴＧ３８９４の組立てＳｍａ１部位を、下記オリゴヌクレオ チド：　、５’　ＴＣＣＧＣＡＴＴＡＧＣＴＧＣＴＣＣＣＧＧＧＡＡＣＡＣＴＡ ＣＡＡＣＡＧＡ＾１こよるＭＬ３ＴＧ３８４１　（図２）での特定変異誘発でα 因子の前駆体の“ｐｒｏ”断片についてコードする配列内に作成し、Ｍ１３７Ｇ ３８６９を得る。次いでこのベクターをｓｐｈ　＋及びＳｍａ　Ｉで消化し、小 断片を単離し、Ｍ１３７Ｇ３８４５　（図３）の大Ｓｐｈ　Ｉ　−Ｓｍａ　Ｉ断 片に結合させ、ベクターＭ１３７Ｇ３８９１を得る。このベクターの５ｐｈｌ− ３ａｌＩ断片をｓｐｈ　Ｉ及び５ａｌＩ部位で開かれたプラスミドｐＴＧ３８２ ８（図４）に導入して、α因子の前駆体の変異“ｐｒＱ”配列を含んだ発現ベク ターｐＴＧ３８９４を得る。このブラフ、ミドの概略構造を得るためには、図５ においてＭＦα１の欠失“ｐｒｏ”配列を変異″ｐｒｏ”配列に代えるだけでよ い。
Ｅ１発現ベクターｐＴＧ３８８４の組立て配列ｘＩを下記オリゴヌクレオチド： ５′６丁ＴＴＣＴＣＴＡＣＴＡＣＡＣＴＣＧＣＴＡＣＴＧＣを用いたＭ１３７Ｇ ３８４５での特定変異誘発により修正する。単一塩基の修正で配列Ｘ目を得、シ グナルペプチドのアミノ酸Ｒ４としてバリンからロイシンへの置換えを誘導する 。それによりバクテリオファージＭ１３ＴＧ３８４．６を得る。
Ｍ１３ＴＧ３８４６の５ｐｈｌ−８ａｌＩ断片をｓｐｈ　Ｉ及び５ａｌＩ部位で 開かれたプラスミドｐＴＧ３８２８　（図４）に導入して、以下を含む発現ベク ターｐＴＧ３８８４を得るニ ープロモーターが欠失したＵＲＡ３遺伝子の配列（ＵＲＡ３−　ｄ） 一断片ａ）としてＭＦα１のプロモーター、次いでＡＴＧコドン 一断片ｂ）として配列Ｘ１ｌ −断片り’）としてＭＦα１遺伝子の欠失”ｐｒｏ”配列、次いでＬｙｓ−Ａｕ ｇについてコードするコドン−断片Ｃ）としてｒＨＶ２Ｌｙｓ４７についてコー ドする配列 一酵母のＰＧＫについてコードする遺伝子のターミネータ− −ｐＢＲ３２２の断片 一２μプラスミドの断片 例２二用いられるプラスミドに関する培養上澄でのｒＨＶ２Ｌｙｓ４７の産生 遺伝子型ＭＡＴａ、ｕｒａ３−２５１、−３７３、−３２８．１ｅｕ２−３、− １１２、ｈ　ｉ　ｓ　３、ｐｅｐ４〜３のプッカロミセス・セレビシアエ種の酵 母株ヲ酢酸Ｉ）チウム法［Ｎｏ、　Ｉｌ、　！Ｉ　Ｐ！、　、　１．　Ｒａｃｊ ｅｔｉｏ！、（１９８３＞　１５３：１６１１によりプラスミドｐ　Ｔ　Ｇ　３ ８６４、ｐＴＧ３８６７、ｐＴＧ３８９４及びｐＴＧ３８８４で形質転換させ、 ｔＪｒａ″′原栄養体を選択する。次いでそれらをエルシンマイヤー中の選択培 地（酵母窒素ベース０．７％、カザミノ酸０．５％及びグルコース１％）上３０ ℃で培養する。４８時間の培養後、細胞及び上澄を遠心で分離し１、。
トロコノビン阻害活性を比色試験〔ベーリンガー・マンハイム（Ｂｏｅｈ＋ｉｎ ｇｅ＋　Ｍａｎｎｈｅｉｍ）の合成基質クロモザイムＴＨでのタンパク質分解活 性〕により上澄で調べる。表１はアッセイの結果について示すが、多値は２回の 独立実験の平均値に相当する。ｒＨＶ２Ｌｙｓ４７活性は＾Ｔυ／ｍｌ上澄で示 されている。
表１ プラスミド、−□−−−−コ山Ｖ１ ｐＴＧ３８９４　４０ ｐＴ６３８６４　・　５０ ｐＴ０３８６７　１３０ ｐＴ０３８８４　１２５ ずべ°Ｃのケースにおいて、抗トロンビン活性が検出される。このため酵母から 産生されるｒＨＶ２Ｌｙｓ４７タンパク質は上澄中に放出されている。更に、そ れは活性形で分泌される。最良の結果はｐ　Ｔ　Ｇ　３８８４及びｐＴＧ３８６ ７で形質転換された株で得られる。
１澄のタン・々り質含量はＨＰＬＣで分析する。得られる主ピークはｒＨ１ノ２ Ｌｙｓ４７（その６５アミノ酸形として）の場合にぴったりと一致し２Ｎ末端配 列の決定で正確に合成された分子の産生を確認しうる。
Ａ、ｆｆ、虫デフエンジンＡについてコードするＤ　Ｎ　Ａ配列の合成 合成はＫｐｎｌ付着端により組立てられた２一つのブロックで行う。第一ブロッ クは１〜３と番号付けられた３つのオリゴヌクレオチドからなり、第ニブロック は４〜９と番号付けられた６つのオリゴヌクレオチドからなる。
それらオリゴヌクレオチドの配列及び位置（表の最後のライン；円はオリゴヌク レオチドの５′部分を表す）は表２で示されている。
表２ 合液を９５℃で３分間加熱し、しかる後２時間かけてＨｉｎｄｌｌｌ　＋ｌ　Ｋ ｐｎ１ ６．７．８及び９を用い、下記方法で行う・−オリゴヌクレオチド５．６．７及 び８を最初それらの５′末端でリン酸化して、組立て時のポリマー形成を回避す る。これらオリゴヌクレオチドの各々につき１００１００ｐを３２Ｐ標識ＡＴＰ 　７３．　３μｍｏｌ　（５０００Ｃｉ／ａ＋ｍｏｌ）を含有したｐＨ７−５の ６０μＭ）リスＨＣｌ。
１０μＭＭｇＣ１２及び８μＭジチオスレイトール（リン酸緩衝液）の最終容量 ２０μ！中ポリヌクレオチドキナ一ゼ２単位で処理する。３７℃で１５分間のイ ンキュベート後、未標識ＡＴＰ５μｎｏｔを加える。
−３７℃で３０分間のインキュベート後、７５ｐＩＩｏｌのオリゴヌクレオチド ５．６．７及び８を混合し、９５℃で３分間加熱し、しかる後オリゴヌクレオチ ド４及び９を最終容量９０μｍａｔの前記リン酸緩衝液に加える。混前記バクテ リオファージＭ１３ＴＧ３８４６　（例１の３７℃まで徐々に冷却させる。
−これらのハイブリッド形成オリゴヌクレオチド２５ｐｍｏ　Ｉを１５℃で１時 間Ｔ４リガーゼ処理に付す。次いでこの反応混合液（１ｐｍｏｌ）をＥｃｏＲＩ 及びＫｐｎｌで処理（１５℃で１時間）されたバクテリオファージＭ１３ＴＧ１ ３１　［ＫｉｅＢ、Ｍ、Ｐ、ｅｌ　ｘｌ、（１９８３）Ｇｅｎｅ、　２６．９１ −９９　）　５０　ｎＨに加える。結合混合物を大腸菌株Ｊ　Ｍ　１０３　（Ｍ ｅｓｓｉｎｇ、　Ｊ、　ｒｔ　ａｔ、　（１９８１）Ｎｕｅｌｅｉｃ＾ｃｉｄ　 Ｒｅｓ、、　９．３０９　）のコンピテント細胞を形質転換させるために用いる 。望ましい配列を有するクローンを単離するが、これはＭ１３７Ｇ３８２１と称 される。
第ニブロックの合成ではオリゴヌクレオチド１．２及び３を用い、第一ブロック の合成に関して記載された場合と同様の操作に従い行う。このケースにおいては 、オリゴヌクレオチド２のみをその５′末端でリン酸化させる。
この第ニブロックをバクテリオファージＭ１３ＴＧ３８２１のＨｉｎｄｌｌｌと ＫｐｎＩとの間の部位に組込んでクローニングし、デフエンジンＡについてコー ドするＤＮＡ配列（図５）を有するクローンを単離するが、これはＭ１３７Ｇ３ ８４９と称される。
Ｂ、デフエンジンＡ発現用プラスミドｐＴＧ４８３９の組立て Ｅ）の１０４５塩基対のＳｐｈ　Ｉ　−Ｓｍａ　Ｉ断片を既にｓｐｈ　Ｉ及びＳ ｍａ　Ｉで消化された前記ベクターＭ１３７０３８６９　（例１のＤ）に移す。
以下を有するベクターＭ１３ＴＧ４８０３　ニ ーＭＦα１遺伝子のプロモーター、次いでＡＴＧコドン 一配列Ｘｌ＋ −ＭＦα１遺伝子の変異“ｐｒｏ”配列、次いでＬｙｓ−Ａｒｇについてコード するコドン −ｒＨＶ２Ｌｙ　ｓ　４７についてコードする配列をそれによって得る。
−ｒＨＶ２Ｌｙｓ４７についてコードする配列を昆虫デフエンジンＡについてコ ードする配列で置換えるため１、Ｈｉｎｄｌ！１部位を下記配列のオリゴヌクレ オチド：５’　ＧＡＡＧＧＧＧＴＡＡＧＣＴＴＧＧＡＴＡＡ＾を用いてＭＦα１ の変異“ｐｒｏ”についてコードする配列中に導入する。次いでデフエンジンＡ についてコードする合成配列を有する前記Ｍ１３ＴＧ３８４９のＨｔｎｄｌｌｌ 　−ＢａｍＨＩ断片を既にＨｉｎｄｌｌｌ及びＢａｍＨＩで処理されたこのベク ター中に導入して、ｒＨＶ２Ｌｙｓ４７についてコードする配列を除去する。
Ｍ１３ＴＧ４８１３の５ｐｈＩ−８ａｌＩ断片をＳｐｈ　ｒ及び５ａｌＩ部位で 開かれたプラスミドｐＴＧ３８２８　（図４）中に導入して、以下を含む発現ベ クターｐＴＧ４８３９を得る： プロモーターが欠失したＵＲＡ３遺伝子の配列（ＵＲＡ３−　ｄ） ？ｖＸＦ　ａ”１遺伝子のブロモ−クー、次いてＡ　Ｔ　Ｇ配列Ｘｌ＋ ＭＦα１遺伝子の変異”ｐｒｏ”配列、次いでＬｙｓ−ＡＢについてコードする コドン 昆虫デフエンジンＡについてコードする合成配列酵母のＰＧＫについてコードす る遺伝子のターミネータ− ｐＢＲ３２２の断片 ２μプラスミドの断片 例４：培養上澄におけるデフエンジンＡの産生遺伝子型Ｍ　Ａ　Ｔ　ａ、ｕｒａ ３２５１、−３７３、−３２８．１ｅｕ２−３、−１１２、ｈｉｓ３、ｐｅｐ４ ３のサツカロミセス・セレビシアエ種の酵母株を酢酸リチウム法［１ｔｏ、　Ｈ ，ｅｌ　ａｌ、　、　Ｊ、　Ｂａｃｌｃ＋ｉｏ１．　（１９８３）　１５３：１ ６３］によりプラスミドｐＴＧ４８３９・で形質転換させ、Ｕｒａ　原栄養体を 選択する。次いでそれらをエルシンマイヤー中の選択培地（酵母窒素ベース０． 　７％、カサミノ酸０．５％及びグルコース１％）上３０℃で培養する。４８時 間の培養後、細胞及び上澄を遠心で分離し、上澄を２２μフイルターで濾過し、 しかる後セブ・バク（Ｓｅｐ−Ｐａｋ）　０１８カートリツジに通す。結合物質 を水中６０％アセトニトリル、０．１％トリフルオロ酢酸で溶出し、真空下で乾 燥させる。次いで、デフエンジンＡ抗菌活性をＬａｍｂｅｎｔ　ｅｔ　８１．　 （１９Ｂ９）ＰＮＡＳ、　８６：２６２−２６６で記載された操作に従−・細菌 微生物〔ミク：コ・ンカス、ルテウス（Ｍｉｃ＋ｏｃｏｃｃｕｓ　ＩｕｔｅｕＳ ））で播種された寒天又はアガロース上でブレーティング（ｐｌａｔｉＢ）試験 により調べる。
プラスミドｐＴＧ４８３’９で形質転換された酵母の上澄において、抗菌活性が 実際に検出される。このためその酵母から産生されたデフエンジンＡタンパク質 は上澄中に排出されている。更に、それは活性形で分泌される。
上澄のタンパク質含量はＨＰＬＣで分析する。得られた主ピークは昆虫デフエン ジンＡの場合にぴったりと一致し、タンパク質配列の決定で正確に合成された分 子の産生を確認しうる。
ＩＧ−１ 国際調査報告 国際調査報告

Claims (27)

    【特許請求の範囲】
  1. １．アミノ酸配列が下記式（Ｉ）又は（ＩＩ）のアミノ酸配列： （Ｉ）【配列があります】 （ＩＩ）【配列があります】 と少なくとも６０％の相同度を示すペプチドについてコードする単離されたＤＮ Ａ断片。
  2. ２．アミノ酸配列が下記式（Ｉ）又は（ＩＩ）のアミノ酸配列： （Ｉ）【配列があります】 （ＩＩ）【配列があります】 と少なくとも８０％の相同度を示すペプチドについてコードする、請求項１に記 載のＤＮＡ断片。
  3. ３．下記アミノ酸配列（ＩＩＩ）： （ＩＩＩ）【配列があります】 〔上記式中Ｒ１はＡｉｇ及びＬｙｓから選択されるアミノ酸である；Ｒ２及びＲ ６は各独立してＡｌａ、Ａｓｎ、Ｃｙｓ、Ｇｌｎ、Ｇｌｙ、Ｈｉｓ、Ｉｌｅ、Ｌ ｅｕ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｐｒｏ、Ｓｅｔ、Ｔｈｒ、Ｔｒｐ、Ｔｙｒ及びＶａｌか ら選択されるアミノ酸である；Ｒ３及びＲ５は各々独立してＡｓｐ、Ｇｌｙ、Ａ ｓｎ、Ｐｒｏ及びＳｅｒから選択されるアミノ酸である；Ｒ４はＹａｌ、Ｌｅｕ 、Ａｌａ、Ｃｙｓ、Ｐｈｅ、Ｉｌｅ及びＭｅｔから選択されるアミノ酸である〕 を含むペプチドについてコードする、請求項１又は２に記載のＤＮＡ断片。
  4. ４．下記アミノ酸配列（ＩＶ）： （ＩＶ）【配列があります】 〔上記式中Ｒ１はＡｒｇ及びＬｙｓから選択されるアミノ酸である；Ｒ２及びＲ ６は各々独立してＡｌａ、Ａｓｎ、Ｃｙｓ、Ｇｌｎ、Ｇｌｙ、Ｈｉｓ、Ｉｌｅ、 Ｌｅｕ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｐｒｏ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｔｒｐ、Ｔｙｒ及びＶａｌ から選択されるアミノ酸である；Ｒ３及びＲ５は各々独立してＡｓｐ、Ｇｌｙ、 Ａｓｎ、Ｐｒｏ及びＳｅｔから選択されるアミノ酸である；Ｒ４はＶａｌ、Ｌｅ ｕ、Ａｌａ、Ｃｙｓ、Ｐｈｅ、Ｉｌｅ及びＭｅｔから選択されるアミノ酸である ；Ｒ７はタンパク質分解配列である〕 を含むペプチドについてコードする、請求項１又は２に記載のＤＮＡ断片。
  5. ５．Ｒ７がタンパク質分解配列Ｒ８−Ｒ９−Ｒ１０：〔上記式中Ｒ８はＡｌａ、 Ｖａｌ、Ｓｅｒ、Ｃｙｓ、Ｇｌｙ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ及びＴｈｒから選択されるア ミノ酸である；Ｒ９はＡｌａ、Ａｒｇ、Ｃｙｓ、Ｇｌｎ、Ｇｌｙ、Ｈｉｓ、Ｉｌ ｅ、Ｌｅｕ、Ｍｅｌ、Ｐｈｅ、Ｐｒｏ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｔｒｐ、Ｔｙｒ及びＶ ａｌから選択されるアミノ酸である；Ｒ１０はＡｌａ、Ｃｙｓ、Ｇｌｙ、Ｌｅｕ 、Ｐｒｏ、Ｇｌｕ、Ｓｅｒ及びＴｈｒから選択されるアミノ酸である〕 である、請求項４に記載のＤＮＡ断片。
  6. ６．下記アミノ酸配列（Ｖ）及び（ＶＩ）：（Ｖ）【配列があります】 （ＶＩ）【配列があります】 から選択されるアミノ酸配列を含むペプチドについてコードする、請求項１又は ２に記載のＤＮＡ断片。
  7. ７．下記式（ＶＩＩ）及び（ＶＩＩＩ）のアミノ酸配列：（ＶＩＩ）【配列があ ります】 （式中Ｒ７はタンパク質分解配列である）；及び（ＶＩＩＩ）【配列があります 】 （式中Ｒ７はタンパク質分解配列である）；から選択されるアミノ酸配列を含む ペプチドについてコードする、請求項１、２、４又は５に記載のＤＮＡ断片。
  8. ８．Ｒ７がＶａｌ−Ｓｅｒ−Ａｌａである式（ＶＩＩ）及び（ＶＩＩＩ）のアミ ノ酸配列から選択されるアミノ酸配列を含むペプチドについてコードする、請求 項７に記載のＤＮＡ断片。
  9. ９．異種タンパク質が合成される細胞での異種タンパク質の分泌に関して有用な シグナルペプチドについてコードするＤＮＡ断片として、請求項１〜８のいずれ か一項で記載されたＤＮＡ断片の適用。
  10. １０．ＤＮＡ断片が異種タンパク質が合成される酵母細胞での異種タンパク質の 分泌に関して有用なシグナルペプチドについてコードする、請求項９に記載のＤ ＮＡ断片の適用。
  11. １１．少なくとも： ａ）転写及び翻訳開始シグナルを含むＤＮＡ断片ｂ）請求項１〜８のいずれか一 項で記載されたＤＮＡ断片及び ｃ）成熟異種タンパク質についてコードするＤＮＡ断片 を含んだ異種タンパク質の発現用カセット。
  12. １２．“ｐｒｏ”ペプチド断片についてコードするＤＮＡ断片ｂ′）を更に含む 、請求項１１に記載のカセット。
  13. １３．配列として【配列があります】 を有する“ｐｒｏ”ペプ チド断片についてコードするＤＮＡ断片ｂ′）を含む、請求項１２に記載のカセ ット。
  14. １４．断片ａ）が酵母細胞で機能性のプロモーター及びＡＴＧ翻訳開始コドンを 含む、請求項１１〜１３のいずれか一項に記載のカセット。
  15. １５．ＤＮＡ断片ｃ）がヒルジンについてコードする、請求項１１〜１４のいず れか一項に記載の発現カセット。
  16. １６．ＤＮＡ断片ｃ）がヒルジン変異体ｒＨＶ２Ｌｙｓ４７についてコードする 、請求項１５に記載の発現カセット。
  17. １７．ＤＮＡ断片ｃ）が昆虫デフェンシンについてコードする、請求項１１〜１ ４のいずれか一項に記載の発現カセット。
  18. １８．ＤＮＡ断片ｃ）がデフェンシンＡについてコードする、請求項１７に記載 の発現カセット。
  19. １９．請求項１１〜１８のいずれかで記載された発現カセットを含むプラスミド ベクター。
  20. ２０．酵母の２μプラスミドの断片を含む、請求項１９に記載のプラスミドベク ター。
  21. ２１．選択遺伝子としてプロモーターが欠失されたＵＲＡ３遺伝子を含む、請求 項１９又は２０に記載のプラスミドベクター。
  22. ２２．請求項１９〜２１のいずれかで記載されたプラスミドベクターで形質転換 された又は請求項１１〜１８のいずれかで記載された発現カセットをゲノム中に 組み込んだ細胞。
  23. ２３．請求項２２に記載の酵母細胞。
  24. ２４．請求項２２又は２３で記載された細胞が培養され、タンパク質が培地から 回収される、異種タンパク質の製造方法。
  25. ２５．細胞が酵母細胞である、請求項２４に記載の方法。
  26. ２６．タンパク質がヒルジンである、請求項２４又は２５に記載の方法。
  27. ２７．タンパク質が昆虫デフェンシンである、請求項２４又は２５に記載の方法 。
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Families Citing this family (314)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR2669931B1 (fr) * 1990-11-29 1995-03-31 Transgene Nouveaux variants derives des interferons-alpha et leur procede de production.
AU656353B2 (en) 1990-11-29 1995-02-02 Institut National De La Recherche Agronomique (Inra) New variants derived from interferons of type I, production process thereof and their applications
GB9127250D0 (en) * 1991-12-23 1992-02-19 Unilever Plc Modification
FR2700338B1 (fr) * 1993-01-11 1995-03-31 Transgene Sa Nouvelle séquence pro permettant la secrétion de protéines hétérologues à partir d'une cellule de levure.
FR2714908A1 (fr) * 1994-01-11 1995-07-13 Transgene Sa Famille de peptides appelés xénoxines.
DK0706567T3 (da) * 1993-06-29 2001-09-17 Transgene Sa Peptidfamilie betegnet xenoxiner
US5712114A (en) * 1995-06-06 1998-01-27 Basf Aktiengesellschaft Compositions for expression of proteins in host cells using a preprocollagen signal sequence
US5837247A (en) * 1995-06-16 1998-11-17 United States Of America As Represented By The Public Health Service National Institutes Of Health Chemotactic agents for t-cells
US6030945A (en) * 1996-01-09 2000-02-29 Genentech, Inc. Apo-2 ligand
US6998116B1 (en) 1996-01-09 2006-02-14 Genentech, Inc. Apo-2 ligand
CA2249206A1 (en) 1996-04-01 1997-10-09 Genentech, Inc. Apo-2li and apo-3 apoptosis polypeptides
US5851984A (en) * 1996-08-16 1998-12-22 Genentech, Inc. Method of enhancing proliferation or differentiation of hematopoietic stem cells using Wnt polypeptides
US6159462A (en) * 1996-08-16 2000-12-12 Genentech, Inc. Uses of Wnt polypeptides
US6462176B1 (en) 1996-09-23 2002-10-08 Genentech, Inc. Apo-3 polypeptide
AU4977697A (en) 1996-09-25 1998-04-17 Vanderbilt University Genetically engineered yeast with modified signal peptidase complex
US6342369B1 (en) 1997-05-15 2002-01-29 Genentech, Inc. Apo-2-receptor
US6291643B1 (en) 1997-06-05 2001-09-18 Board Of Reports, The University Of Texas System Apaf-1 an activator of caspase-3
IL133122A0 (en) 1997-06-18 2001-03-19 Genentech Inc Apo-2dcr polypeptides
US6342220B1 (en) 1997-08-25 2002-01-29 Genentech, Inc. Agonist antibodies
JP4303883B2 (ja) 1997-09-18 2009-07-29 ジェネンテック・インコーポレーテッド ＤｃＲ３ポリペプチドというＴＮＦＲ相同体
EP1021542B1 (en) 1997-10-10 2009-03-04 Genentech, Inc. Apo-3 ligand
JP2001520885A (ja) 1997-10-29 2001-11-06 ジェネンテック・インコーポレーテッド Ｗｎｔ−１誘導遺伝子
DK1027437T3 (da) 1997-10-29 2008-11-24 Genentech Inc Anvendelse af det WNT-1 inducerede udskilte polypeptid WISP-1
ATE410512T1 (de) 1997-11-21 2008-10-15 Genentech Inc Plättchen-spezifische antigene und deren pharmazeutische verwendung
US7192589B2 (en) 1998-09-16 2007-03-20 Genentech, Inc. Treatment of inflammatory disorders with STIgMA immunoadhesins
JP2002508962A (ja) 1998-01-15 2002-03-26 ジェネンテク・インコーポレイテッド Ａｐｏ−２リガンド
US6727079B1 (en) 1998-02-25 2004-04-27 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services cDNA encoding a gene BOG (B5T Over-expressed Gene) and its protein product
NZ525914A (en) 1998-03-10 2004-03-26 Genentech Inc Novel polypeptides and nucleic acids encoding the same
ATE405651T1 (de) 1998-03-17 2008-09-15 Genentech Inc Zu vegf und bmp1 homologe polypeptide
EP3112468A1 (en) 1998-05-15 2017-01-04 Genentech, Inc. Il-17 homologous polypeptides and therapeutic uses thereof
AU740405B2 (en) 1998-05-15 2001-11-01 Genentech Inc. IL-17 homologous polypeptides and therapeutic uses thereof
EP1865061A3 (en) 1998-05-15 2007-12-19 Genentech, Inc. IL-17 homologous polypeptides and therapeutic uses thereof
US6545140B1 (en) * 1998-07-13 2003-04-08 University Of Georgia Research Foundation, Inc. DNA encoding an avian beta-defensin and uses thereof
US20020172678A1 (en) 2000-06-23 2002-11-21 Napoleone Ferrara EG-VEGF nucleic acids and polypeptides and methods of use
EP1950300A3 (en) 1998-11-18 2011-03-23 Genentech, Inc. Antibody variants with higher binding affinity compared to parent antibodies
EP2075335A3 (en) 1998-12-22 2009-09-30 Genentech, Inc. Methods and compositions for inhibiting neoplastic cell growth
EP1141299A2 (en) 1998-12-23 2001-10-10 Genentech, Inc. Il-1 related polypeptides
PL209392B1 (pl) 1999-01-15 2011-08-31 Genentech Inc Przeciwciało, komórka gospodarza, sposób wytwarzania przeciwciała oraz zastosowanie przeciwciała
DE60043367D1 (de) 1999-06-15 2009-12-31 Genentech Inc Sekretierte und Transmembran-Polypeptide sowie Nukleinsäuren zu deren Kodierung
CN100340575C (zh) 1999-06-25 2007-10-03 杰南技术公司 人源化抗ErbB2抗体及其在制备药物中的应用
KR100874280B1 (ko) 1999-10-20 2008-12-18 제넨테크, 인크. Ｔ 헬퍼 세포 매개 질환의 치료를 위한 ｔ 세포 분화의조절
CA2491433A1 (en) 1999-12-01 2001-06-07 Genentech, Inc. Secreted and transmembrane polypeptides and nucleic acids encoding the same
DK1897945T3 (da) 1999-12-23 2012-05-07 Genentech Inc IL-17 homologe polypeptider og terapeutiske anvendelser deraf.
CN1415016B (zh) 1999-12-30 2012-07-11 金克克国际有限公司 Trichoderma reesei木聚糖酶
CA2397207C (en) 2000-01-13 2013-12-03 Genentech, Inc. Novel stra6 polypeptides
DE60124080T2 (de) 2000-03-23 2007-03-01 Elan Pharmaceuticals, Inc., San Francisco Verbindungen und verfahren zur behandlung der alzheimerschen krankheit
CA2403842C (en) 2000-03-24 2012-09-25 Genencor International, Inc. Increased production of secreted proteins by recombinant eukaryotic cells
WO2004043361A2 (en) 2002-11-08 2004-05-27 Genentech, Inc. Compositions and methods for the treatment of natural killer cell related diseases
JP2003531588A (ja) 2000-04-11 2003-10-28 ジェネンテック・インコーポレーテッド 多価抗体とその用途
CA2648046A1 (en) 2000-06-23 2002-01-03 Genentech, Inc. Compositions and methods for the diagnosis and treatment of disorders involving angiogenesis
EP2275549A1 (en) 2000-06-23 2011-01-19 Genentech, Inc. Compositions and methods for the diagnosis and treatment of disorders involving angiogenesis
PE20020276A1 (es) 2000-06-30 2002-04-06 Elan Pharm Inc COMPUESTOS DE AMINA SUSTITUIDA COMO INHIBIDORES DE ß-SECRETASA PARA EL TRATAMIENTO DE ALZHEIMER
US6846813B2 (en) 2000-06-30 2005-01-25 Pharmacia & Upjohn Company Compounds to treat alzheimer's disease
JP2004502664A (ja) 2000-06-30 2004-01-29 イーラン　ファーマスーティカルズ、インコーポレイテッド アルツハイマー病処置用化合物
DE60136816D1 (de) 2000-07-27 2009-01-15 Genentech Inc Sequentielle verabreichung von cpt-11 und apo-2l polypeptid
ATE412009T1 (de) 2000-08-24 2008-11-15 Genentech Inc Methode zur inhibierung von il-22 induziertem pap1
EP1944317A3 (en) 2000-09-01 2008-09-17 Genentech, Inc. Secreted and transmembrane polypeptides and nucleic acids encoding the same
US6673580B2 (en) 2000-10-27 2004-01-06 Genentech, Inc. Identification and modification of immunodominant epitopes in polypeptides
US20070160576A1 (en) 2001-06-05 2007-07-12 Genentech, Inc. IL-17A/F heterologous polypeptides and therapeutic uses thereof
PT2000545E (pt) 2001-06-20 2011-12-21 Genentech Inc Composições e métodos para o diagnóstico e tratamento do tumor pulmonar
BR0210721A (pt) 2001-06-27 2004-07-20 Elan Pharm Inc Composto, sal ou éster farmaceuticamente aceitável, método para fabricar um composto, e, método para tratar um paciente que tem, ou para evitar que o paciente adquira uma doença ou condição
EP2311960A3 (en) 2001-08-29 2011-06-01 Genentech, Inc. Bv8 nucleic acids and polypeptides with mitogenic activity
DE60238143D1 (de) 2001-09-18 2010-12-09 Genentech Inc Zusammensetzungen und verfahren für die diagnose von tumoren
AU2002367318B2 (en) 2002-01-02 2007-07-12 Genentech, Inc. Compositions and methods for the diagnosis and treatment of tumor
EP1575480A4 (en) 2002-02-22 2008-08-06 Genentech Inc COMPOSITIONS AND METHODS OF TREATING IMMUNE-INFLAMMATORY DISEASES
JP2005536190A (ja) 2002-04-16 2005-12-02 ジェネンテック・インコーポレーテッド 腫瘍の診断と治療のための組成物と方法
EP2305710A3 (en) 2002-06-03 2013-05-29 Genentech, Inc. Synthetic antibody phage libraries
EP1553912A4 (en) 2002-06-07 2007-08-08 Genentech Inc COMPOSITIONS AND METHODS FOR TUMOR DIAGNOSIS AND TREATMENT
WO2004004649A2 (en) 2002-07-08 2004-01-15 Genentech, Inc. Compositions and methods for the treatment of immune related diseases
WO2004008099A2 (en) 2002-07-15 2004-01-22 Genentech, Inc. METHODS FOR IDENTIFYING TUMORS THAT ARE RESPONSIVE TO TREATMENT WITH ANTI-ErbB2 ANTIBODIES
JP5401001B2 (ja) 2002-09-11 2014-01-29 ジェネンテック， インコーポレイテッド 免疫関連疾患の治療のための新規組成物と方法
EP1578373A4 (en) 2002-09-11 2007-10-24 Genentech Inc NEW COMPOSITIONS AND METHOD FOR THE TREATMENT OF ILLNESSES OF THE IMMUNE SYSTEM
US20070010434A1 (en) 2002-09-16 2007-01-11 Genetech, Inc. Novel compositions and methods for the treatment of immune related diseases
CA2499843A1 (en) 2002-09-25 2004-04-08 Genentech, Inc. Novel compositions and methods for the treatment of psoriasis
EP2322200A3 (en) 2002-10-29 2011-07-27 Genentech, Inc. Compositions and methods for the treatment of immune related diseases
JP2011516026A (ja) 2002-11-26 2011-05-26 ジェネンテック・インコーポレーテッド 免疫関連疾患の治療のための組成物と方法
WO2004070011A2 (en) 2003-02-01 2004-08-19 Tanox, Inc. HIGH AFFINITY ANTI-HUMAN IgE ANTIBODIES
JP4912144B2 (ja) 2003-03-12 2012-04-11 ジェネンテック， インコーポレイテッド 造血促進のためのｂｖ８及び／又はｅｇ−ｖｅｇｆの使用
MXPA05010555A (es) 2003-04-04 2006-03-09 Genentech Inc Formulaciones de proteina y anticuerpo de alta concentracion.
UA101945C2 (uk) 2003-05-30 2013-05-27 Дженентек, Инк. Лікування злоякісного новоутворення за допомогою бевацизумабу
DK1641823T3 (da) 2003-06-12 2011-12-12 Lilly Co Eli GLP-1-analog fusionsproteiner
US7097993B2 (en) 2003-06-25 2006-08-29 Wisconsin Alumni Research Foundation Method for identifying an agent that modulates type 1 phosphatidylinositol phosphate kinase isoform β661 activity
EP2784084B2 (en) 2003-07-08 2023-10-04 Novartis Pharma AG Antagonist antibodies to IL-17A/F heterologous polypeptides
US20050106667A1 (en) 2003-08-01 2005-05-19 Genentech, Inc Binding polypeptides with restricted diversity sequences
WO2005019258A2 (en) 2003-08-11 2005-03-03 Genentech, Inc. Compositions and methods for the treatment of immune related diseases
DK2295073T3 (da) 2003-11-17 2014-07-28 Genentech Inc Antistof mod cd22 til behandling af tumor af hæmatopoietisk oprindelse
ATE502298T1 (de) 2003-12-19 2011-04-15 Univ California Verfahren und materialien zur beurteilung von prostatakrebstherapien
SI2311873T1 (sl) 2004-01-07 2018-12-31 Novartis Vaccines And Diagnostics, Inc. M-CSF-specifična monoklonska protitelesa in njihova uporaba
NZ550102A (en) 2004-02-24 2010-10-29 Univ California Methods and materials for assessing prostate cancer therapies and compounds (thiohydantoine derivatives)
PT1730191E (pt) 2004-03-30 2011-10-04 Glaxo Group Ltd Imunoglobulina que se liga a hosm
TWI307630B (en) 2004-07-01 2009-03-21 Glaxo Group Ltd Immunoglobulins
SI1771474T1 (sl) 2004-07-20 2010-06-30 Genentech Inc Inhibitorji angiopoetinu podobnega proteina kombinacije in njihova uporaba
EP2230517A1 (en) 2005-01-07 2010-09-22 Diadexus, Inc. OVR110 antibody compositions and methods of use
US7709517B2 (en) 2005-05-13 2010-05-04 The Regents Of The University Of California Diarylhydantoin compounds
WO2006132788A2 (en) 2005-06-06 2006-12-14 Genentech, Inc. Transgenic models for different genes and their use for gene characterization
JP5457671B2 (ja) 2005-07-28 2014-04-02 ノバルティス アーゲー Ｍ−ｃｓｆ特異的モノクローナル抗体およびその使用
EP1922410A2 (en) 2005-08-15 2008-05-21 Genentech, Inc. Gene disruptions, compositions and methods relating thereto
UA96139C2 (uk) 2005-11-08 2011-10-10 Дженентек, Інк. Антитіло до нейропіліну-1 (nrp1)
AU2006315037C1 (en) 2005-11-18 2013-05-02 Ichnos Sciences SA Anti-alpha2 integrin antibodies and their uses
EP1962584A2 (en) 2005-11-21 2008-09-03 Genentech, Inc. Novel gene disruptions, compositions and methods relating thereto
EP2050335A1 (en) 2006-02-17 2009-04-22 Genentech, Inc. Gene disruptions, compositions and methods relating thereto
JP2009529915A (ja) 2006-03-20 2009-08-27 ゾーマ テクノロジー リミテッド ガストリン物質に対して特異的なヒト抗体および方法
RU2008141912A (ru) 2006-03-23 2010-04-27 Новартис АГ (CH) Противоопухолевые лекарства на основе антител к клеточным антигенам
SI2656842T1 (sl) 2006-03-27 2016-10-28 The Regents Of The University Of California Modulator androgenih receptorjev za zdravljenje raka prostate in bolezni, povezanih z androgenimi receptorji
WO2007127010A2 (en) 2006-03-29 2007-11-08 The Regents Of The University Of California Diarylthiohydantoin compounds
AU2007243946B2 (en) 2006-04-05 2012-11-29 Curis, Inc. Method for using BOC/CDO to modulate hedgehog signaling
CA2649387A1 (en) 2006-04-19 2008-03-27 Genentech, Inc. Novel gene disruptions, compositions and methods relating thereto
MX2008015830A (es) 2006-06-30 2009-01-09 Novo Nordisk As Anticuerpos anti-nkg2a y usos de los mismos.
CA2659820A1 (en) 2006-08-04 2008-02-14 Novartis Ag Ephb3-specific antibody and uses thereof
AR064801A1 (es) 2006-08-18 2009-04-29 Xoma Technology Ltd Anticuerpo especifico prlr (receptor de prolactina) y sus usos
KR20090105913A (ko) 2006-11-02 2009-10-07 다니엘 제이 카폰 이동 부분을 갖는 하이브리드 면역글로불린
MX2009005466A (es) 2006-11-22 2009-08-17 Adnexus A Bristol Myers Sqibb Terapeuticos dirigidos a base de proteinas manipuladas para receptores de tirosina cinasas, incluyendo receptor de factor de crecimiento tipo insulina-i.
JP5391073B2 (ja) 2006-11-27 2014-01-15 ディアデクサス インコーポレーテッド Ｏｖｒ１１０抗体組成物および使用方法
WO2008070780A1 (en) 2006-12-07 2008-06-12 Novartis Ag Antagonist antibodies against ephb3
EP2111228B1 (en) 2007-02-02 2011-07-20 Bristol-Myers Squibb Company 10Fn3 domain for use in treating diseases associated with inappropriate angiogenesis
MX2009008430A (es) 2007-02-09 2009-10-28 Genentech Inc Anticuerpos anti-robo4 y sus usos.
AU2008218199B2 (en) 2007-02-22 2013-10-31 Genentech, Inc. Methods for detecting inflammatory bowel disease
RU2473563C2 (ru) 2007-06-07 2013-01-27 Дженентек, Инк. АНТИТЕЛА ПРОТИВ C3b И СПОСОБЫ ПРОФИЛАКТИКИ И ЛЕЧЕНИЯ СВЯЗАННЫХ С КОМПЛЕМЕНТОМ НАРУШЕНИЙ
PE20090943A1 (es) 2007-07-16 2009-08-05 Genentech Inc Anticuerpos anti-cd79b e inmunoconjugados
EP2176295B1 (en) 2007-07-16 2014-11-19 Genentech, Inc. Humanized anti-cd79b antibodies and immunoconjugates and methods of use
EP2620432A3 (en) 2007-10-26 2013-12-18 The Regents Of the University of California Diarylhydantoin compounds
US8158762B2 (en) 2007-11-08 2012-04-17 Genentech, Inc. Anti-factor B antibodies and their uses
JP4932940B2 (ja) 2007-11-12 2012-05-16 セラクローン サイエンシーズ， インコーポレイテッド インフルエンザの治療および診断のための組成物および方法
TWI468417B (zh) 2007-11-30 2015-01-11 Genentech Inc 抗－ｖｅｇｆ抗體
AR070141A1 (es) 2008-01-23 2010-03-17 Glenmark Pharmaceuticals Sa Anticuerpos humanizados especificos para el factor von willebrand
KR20100110864A (ko) 2008-01-24 2010-10-13 노보 노르디스크 에이/에스 인간화된 항-인간 ｎｋｇ2ａ 모노클로날 항체
KR101607346B1 (ko) 2008-01-31 2016-03-29 제넨테크, 인크. 항-ｃｄ７９ｂ 항체 및 면역접합체 및 사용 방법
AU2009213141A1 (en) 2008-02-14 2009-08-20 Bristol-Myers Squibb Company Targeted therapeutics based on engineered proteins that bind EGFR
AU2009223688B2 (en) 2008-03-10 2014-12-11 Theraclone Sciences, Inc. Compositions and methods for the therapy and diagnosis of cytomegalovirus infections
SG10202112838YA (en) 2008-04-09 2021-12-30 Genentech Inc Novel compositions and methods for the treatment of immune related diseases
CR20170001A (es) 2008-04-28 2017-08-10 Genentech Inc Anticuerpos anti factor d humanizados
WO2009142773A2 (en) 2008-05-22 2009-11-26 Bristol-Myers Squibb Company Multivalent fibronectin based scaffold domain proteins
WO2010052556A1 (en) 2008-11-06 2010-05-14 Glenmark Pharmaceuticals S.A. Treatment with anti-alpha2 integrin antibodies
TWI496582B (zh) 2008-11-24 2015-08-21 必治妥美雅史谷比公司 雙重專一性之ｅｇｆｒ／ｉｇｆｉｒ結合分子
KR20110101212A (ko) 2008-12-17 2011-09-15 제넨테크, 인크. Ｃ형 간염 바이러스 조합 요법
UY32341A (es) 2008-12-19 2010-07-30 Glaxo Group Ltd Proteínas de unión antígeno novedosas
SI3260136T1 (sl) 2009-03-17 2021-05-31 Theraclone Sciences, Inc. Humani imunodeficientni virus (HIV)-nevtralizirajoča protitelesa
RU2587621C2 (ru) 2009-04-01 2016-06-20 Дженентек, Инк. АНТИТЕЛА К FcRH5, ИХ ИММУНОКОНЪЮГАТЫ И СПОСОБЫ ИХ ПРИМЕНЕНИЯ
WO2010118243A2 (en) 2009-04-08 2010-10-14 Genentech, Inc. Use of il-27 antagonists to treat lupus
US8609101B2 (en) 2009-04-23 2013-12-17 Theraclone Sciences, Inc. Granulocyte-macrophage colony-stimulating factor (GM-CSF) neutralizing antibodies
EP2432803A2 (en) 2009-05-20 2012-03-28 Theraclone Sciences, Inc. Compositions and methods for the therapy and diagnosis of influenza
TW201106972A (en) 2009-07-27 2011-03-01 Genentech Inc Combination treatments
CA2772715C (en) 2009-09-02 2019-03-26 Genentech, Inc. Mutant smoothened and methods of using the same
KR101952453B1 (ko) 2009-10-15 2019-02-26 제넨테크, 인크. 수용체 특이성이 변경된 키메라 섬유모세포 성장 인자
JP5819308B2 (ja) 2009-10-22 2015-11-24 ジェネンテック， インコーポレイテッド マクロファージ刺激タンパク質のヘプシン活性化を調節するための方法及び組成物
WO2011056494A1 (en) 2009-10-26 2011-05-12 Genentech, Inc. Activin receptor-like kinase-1 antagonist and vegfr3 antagonist combinations
WO2011056502A1 (en) 2009-10-26 2011-05-12 Genentech, Inc. Bone morphogenetic protein receptor type ii compositions and methods of use
WO2011056497A1 (en) 2009-10-26 2011-05-12 Genentech, Inc. Activin receptor type iib compositions and methods of use
US20110110942A1 (en) 2009-11-12 2011-05-12 Genentech, Inc. Method of promoting dendritic spine density
PH12012500982A1 (en) 2009-11-30 2019-07-10 Genentech Inc Antibodies for treating and diagnosing tumors expressing slc34a2 (tat211=seqid2)
WO2011071577A1 (en) 2009-12-11 2011-06-16 Genentech, Inc. Anti-vegf-c antibodies and methods using same
WO2011080050A2 (en) 2009-12-11 2011-07-07 Novartis Ag Binding molecules
BR112012013093A2 (pt) 2009-12-21 2017-12-12 Genentech Inc ''formulação farmacêutica aquosa estável, artigo, métodos para estabilizar um anticorpo, para tratamento de uma doença ou distúrbio em um indivíduo, para reduzir a agregação de um anticorpo monoclonal terapêutico e de fabricação de uma formulação farmaceutica, frasco e tanque de aço inoxidável
PE20170687A1 (es) 2010-01-28 2017-06-13 Glaxo Group Ltd Proteinas de enlace a cd127
AU2011218173C1 (en) 2010-02-16 2015-04-16 Aragon Pharmaceuticals, Inc. Androgen receptor modulators and uses thereof
JP2013520426A (ja) 2010-02-18 2013-06-06 ブリストル−マイヤーズ スクイブ カンパニー Ｉｌ−２３に結合する、フィブロネクチンをベースとする足場ドメインタンパク質
CA2790866C (en) 2010-02-23 2019-02-12 Sanofi Anti-alpha2 integrin antibodies and their uses
MA34057B1 (fr) 2010-02-23 2013-03-05 Genentech Inc Compositions et methodes pour le diagnostic et le traitement d'une tumeur
UA108227C2 (xx) 2010-03-03 2015-04-10 Антигензв'язуючий білок
HUE049849T2 (hu) 2010-03-31 2020-10-28 Boehringer Ingelheim Int Anti-CD40 antitestek
EP2558491B1 (en) 2010-04-13 2018-07-04 Bristol-Myers Squibb Company Fibronectin based scaffold domain proteins that bind pcsk9
WO2011133931A1 (en) 2010-04-22 2011-10-27 Genentech, Inc. Use of il-27 antagonists for treating inflammatory bowel disease
SG185027A1 (en) 2010-05-03 2012-11-29 Genentech Inc Compositions and methods for the diagnosis and treatment of tumor
TW201138808A (en) 2010-05-03 2011-11-16 Bristol Myers Squibb Co Serum albumin binding molecules
KR101976853B1 (ko) 2010-05-25 2019-05-09 제넨테크, 인크. 폴리펩티드의 정제 방법
JP6023703B2 (ja) 2010-05-26 2016-11-09 ブリストル−マイヤーズ スクイブ カンパニーＢｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ Ｃｏｍｐａｎｙ 改善された安定性を有するフィブロネクチンをベースとする足場タンパク質
EP2576622A4 (en) 2010-06-01 2013-11-27 Univ Monash ON THE UNPROCESSED RECEPTOR TYROSINE KINASE C-MET TARGETED ANTIBODIES
AR081556A1 (es) 2010-06-03 2012-10-03 Glaxo Group Ltd Proteinas de union al antigeno humanizadas
BR112012033121B1 (pt) 2010-06-25 2019-08-20 Institut Pasteur De Lille Métodos e composições farmacêuticas para o tratamento de infecções do trato respiratório.
JP5883443B2 (ja) 2010-07-22 2016-03-15 グラクソスミスクライン バイオロジカルズ ソシエテ アノニム 新規の抗原結合タンパク質
CA2807664A1 (en) 2010-08-12 2012-02-16 Theraclone Sciences, Inc. Anti-hemagglutinin antibody compositions and methods of use thereof
CA2808185A1 (en) 2010-08-13 2012-02-16 Genentech, Inc. Antibodies to il-1.beta. and il-18, for treatment of disease
PT3556396T (pt) 2010-08-31 2022-07-04 Scripps Research Inst Anticorpos neutralizantes do vírus da imunodeficiência humana (vih)
JP2014506115A (ja) 2010-09-15 2014-03-13 アリグナ テクノロジーズ，インク． リグニン由来の化合物からの芳香族化学物質のバイオプロダクション
DK2625197T3 (en) 2010-10-05 2016-10-03 Genentech Inc Smoothened MUTANT AND METHODS OF USING THE SAME
CA2814029C (en) 2010-10-08 2017-05-09 Shanghai Kexin Biotech Co., Ltd. Moesin fragments associated with immune thrombocytopenia
US9354241B2 (en) 2010-10-08 2016-05-31 Shanghai Kexin Biotech Co., Ltd. Moesin fragments associated with aplastic anemia
EP2624851B1 (en) 2010-10-08 2016-11-30 Shanghai Kexin Biotech Co., Ltd Moesin fragments and uses thereof
CA2814030C (en) 2010-10-08 2019-04-30 Shanghai Kexin Biotech Co., Ltd. Diagnostic and therapeutic uses of moesin fragments
WO2012045274A1 (en) 2010-10-08 2012-04-12 Shanghai Kexin Biotech Co., Ltd. Moesin modulators and uses thereof
MX2019000046A (es) 2010-11-04 2023-10-05 Boehringer Ingelheim Int Anticuerpos anti-il-23.
CN103380143B (zh) 2010-12-22 2016-01-06 百时美施贵宝公司 结合il-23的基于纤连蛋白的支架结构域蛋白质
US9505826B2 (en) 2010-12-22 2016-11-29 Teva Pharmaceuticals Australia Pty Ltd Modified antibody with improved half-life
WO2012112489A2 (en) 2011-02-14 2012-08-23 Theraclone Sciences, Inc. Compositions and methods for the therapy and diagnosis of influenza
EP2683735A1 (en) 2011-03-10 2014-01-15 HCO Antibody, Inc. Bispecific three-chain antibody-like molecules
WO2012122512A1 (en) 2011-03-10 2012-09-13 Hco Antibody, Inc. Recombinant production of mixtures of single chain antibodies
BR112013023576A2 (pt) 2011-03-15 2016-12-06 Theraclone Sciences Inc composições e métodos para a terapia e diagnóstico de influenza
EP3415528B1 (en) 2011-04-13 2021-05-26 Bristol-Myers Squibb Company Fc fusion proteins comprising novel linkers or arrangements
CN103732623B (zh) 2011-06-03 2017-09-29 佐马技术有限公司 对TGF‑β具有特异性的抗体
JP2013040160A (ja) 2011-07-01 2013-02-28 Genentech Inc 自己免疫疾患を治療するための抗ｃｄ８３アゴニスト抗体の使用
US8822651B2 (en) 2011-08-30 2014-09-02 Theraclone Sciences, Inc. Human rhinovirus (HRV) antibodies
JP2015504038A (ja) 2011-10-31 2015-02-05 ブリストル−マイヤーズ スクイブ カンパニーＢｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ Ｃｏｍｐａｎｙ 低減した免疫原性を有するフィブロネクチン結合ドメイン
US20140315274A1 (en) * 2011-11-11 2014-10-23 Novozymes A/S Methods For Production of Archeae Protease in Yeast
SI3536710T1 (sl) 2011-11-16 2026-04-30 Boehringer Ingelheim International Gmbh Protitelesa proti IL-36R
ES2651521T3 (es) 2011-12-01 2018-01-26 Innovent Biologics, Inc. Inhibidores proteicos de las rutas del complemento y de VEGF y métodos de uso de los mismos
KR20140119777A (ko) 2012-01-31 2014-10-10 제넨테크, 인크. 항-ig-e m1'' 항체 및 그의 사용 방법
WO2013166099A1 (en) 2012-05-01 2013-11-07 Glaxosmithkline Llc Novel antibodies
PL3326649T3 (pl) 2012-05-03 2022-04-25 Boehringer Ingelheim International Gmbh Przeciwciała anty-il-23p19
ES2984405T3 (es) 2012-09-13 2024-10-29 Bristol Myers Squibb Co Proteínas de dominio de andamio basadas en fibronectina que se unen a la miostatina
NZ744456A (en) 2012-09-26 2019-09-27 Aragon Pharmaceuticals Inc Anti-androgens for the treatment of non-metastatic castrate-resistant prostate cancer
CN110669136A (zh) 2012-11-05 2020-01-10 全药工业株式会社 抗体或抗体组合物的制备方法
BR112015012986A2 (pt) 2012-12-07 2017-09-12 Danisco Us Inc composições e métodos de uso
BR112015012968A2 (pt) 2012-12-07 2017-09-12 Danisco Us Inc composições e métodos de uso
EP2929023B1 (en) * 2012-12-07 2017-08-16 Danisco US Inc. Compositions and methods of use
PL2945628T3 (pl) 2013-01-15 2020-09-21 Aragon Pharmaceuticals, Inc. Modulator receptorów androgenowych w skojarzeniu z octanem abirateronu i prednizonem do leczenia nowotworu stercza
WO2014116749A1 (en) 2013-01-23 2014-07-31 Genentech, Inc. Anti-hcv antibodies and methods of using thereof
EP2951206A2 (en) 2013-02-01 2015-12-09 Bristol-Myers Squibb Company Fibronectin based scaffold proteins
WO2014126871A1 (en) 2013-02-12 2014-08-21 Bristol-Myers Squibb Company Tangential flow filtration based protein refolding methods
US10065987B2 (en) 2013-02-12 2018-09-04 Bristol-Myers Squibb Company High pH protein refolding methods
AR095398A1 (es) 2013-03-13 2015-10-14 Genentech Inc Formulaciones con oxidación reducida
AR095399A1 (es) 2013-03-13 2015-10-14 Genentech Inc Formulaciones con oxidación reducida, método
CN110538322A (zh) 2013-03-13 2019-12-06 豪夫迈·罗氏有限公司 抗体配制剂
EP2968587A2 (en) 2013-03-13 2016-01-20 Bristol-Myers Squibb Company Fibronectin based scaffold domains linked to serum albumin or a moiety binding thereto
MX369671B (es) 2013-03-13 2019-11-15 Genentech Inc Formulaciones con oxidacion reducida.
RU2707550C2 (ru) 2013-03-13 2019-11-27 Дженентек, Инк. Составы со сниженным окислением
CN105188733B (zh) 2013-03-13 2020-05-08 建新公司 包含pdgf和vegf结合部分的融合蛋白及其使用方法
PT3611180T (pt) 2013-03-15 2022-03-15 Biomolecular Holdings Llc Imunoglobulina híbrida que contém uma ligação não peptídica
JP2016513478A (ja) 2013-03-15 2016-05-16 ジェネンテック， インコーポレイテッド 細胞培養培地及び抗体を産生する方法
WO2014145016A2 (en) 2013-03-15 2014-09-18 Genentech, Inc. Il-22 polypeptides and il-22 fc fusion proteins and methods of use
AU2014233393B2 (en) 2013-03-15 2020-05-28 Genentech, Inc. Cell culture compositions with antioxidants and methods for polypeptide production
MY175472A (en) 2013-09-27 2020-06-29 Genentech Inc Anti-pdl1 antibody formulations
WO2015069459A1 (en) 2013-11-05 2015-05-14 Novartis Ag Organic compounds
WO2015095423A2 (en) 2013-12-17 2015-06-25 Genentech, Inc. Combination therapy comprising ox40 binding agonists and pd-1 axis binding antagonists
AU2014364593A1 (en) 2013-12-17 2016-07-07 Genentech, Inc. Methods of treating cancer using PD-1 axis binding antagonists and an anti-CD20 antibody
JP2017507900A (ja) 2013-12-17 2017-03-23 ジェネンテック， インコーポレイテッド Ｐｄ−１軸結合アンタゴニスト及び抗ｈｅｒ２抗体を使用してｈｅｒ２陽性がんを治療する方法
EA033604B1 (ru) 2014-01-31 2019-11-08 Boehringer Ingelheim Int Молекула анти-baff антитела, фармацевтическая композиция, содержащая эту молекулу, способы ее применения и кодирующий ее изолированный полинуклеотид
ES2694857T3 (es) 2014-02-04 2018-12-27 Genentech, Inc. Smoothened mutante y métodos de uso de la misma
KR102587838B1 (ko) 2014-03-14 2023-10-12 바이오몰레큘러 홀딩스 엘엘씨 비-펩티드 결합을 함유하는 하이브리드 면역글로불린
CA2943228C (en) 2014-03-20 2023-03-14 Bristol-Myers Squibb Company Stabilized fibronectin based scaffold molecules
ES2736127T3 (es) 2014-03-20 2019-12-26 Bristol Myers Squibb Co Dominios de tipo III de fibronectina de unión a seroalbúmina
HRP20200372T1 (hr) 2014-03-25 2020-06-12 F. Hoffmann - La Roche Ag Postupci proizvodnje poloksamera za upotrebu u mediju za staničnu kulturu
KR20160146747A (ko) 2014-03-31 2016-12-21 제넨테크, 인크. 항혈관신생제 및 ox40 결합 효능제를 포함하는 조합 요법
EP3708679A1 (en) 2014-07-24 2020-09-16 Boehringer Ingelheim International GmbH Biomarkers useful in the treatment of il-23a related diseases
CN106794247B (zh) 2014-09-15 2022-12-02 豪夫迈·罗氏有限公司 抗体配制剂
US20170211053A1 (en) 2014-09-30 2017-07-27 Danisco Us Inc. Compositions comprising beta mannanase and methods of use
WO2016054194A1 (en) 2014-09-30 2016-04-07 1/1Danisco Us Inc Compositions comprising beta-mannanase and methods of use
US20170211054A1 (en) 2014-09-30 2017-07-27 Dansico Us Inc. Compositions comprising beta mannanase and methods of use
WO2016054185A1 (en) 2014-09-30 2016-04-07 Danisco Us Inc Compositions comprising beta-mannanase and methods of use
WO2016054176A1 (en) 2014-09-30 2016-04-07 Danisco Us Inc Compositions comprising beta-mannanase and methods of use
WO2016059602A2 (en) 2014-10-16 2016-04-21 Glaxo Group Limited Methods of treating cancer and related compositions
SG10201807625PA (en) 2014-11-17 2018-10-30 Genentech Inc Combination therapy comprising ox40 binding agonists and pd-1 axis binding antagonists
CA2969067A1 (en) 2014-11-25 2016-06-02 Bristol-Myers Squibb Company Novel pd-l1 binding polypeptides for imaging
US10954282B2 (en) 2014-12-09 2021-03-23 Wentao Zhang NBP158 and uses thereof
WO2016100825A1 (en) 2014-12-18 2016-06-23 Danisco Us Inc Engineered multifunctional enzymes and methods of use
WO2016100837A1 (en) 2014-12-18 2016-06-23 Danisco Us Inc Engineered multifunctional enzymes and methods of use
AU2015364396B2 (en) 2014-12-19 2018-08-09 Alkermes, Inc. Single chain Fc fusion proteins
EP3253784B1 (en) 2015-02-04 2020-05-06 Genentech, Inc. Mutant smoothened and methods of using the same
AU2016215535B2 (en) 2015-02-04 2021-09-16 Boehringer Ingelheim International Gmbh Methods of treating inflammatory diseases
KR20170135972A (ko) 2015-04-14 2017-12-08 베링거 인겔하임 인터내셔날 게엠베하 질환을 치료하는 방법
EA035332B1 (ru) 2015-04-24 2020-05-28 ВАЙВ ХЕЛТКЕР ЮКей (№5) ЛИМИТЕД Полипептиды, нацеленные на слияние вич
AR105618A1 (es) 2015-05-29 2017-10-25 Genentech Inc Metilación del promotor del ligando al receptor de muerte programada (pd-l1) en cáncer
KR102689256B1 (ko) 2015-06-17 2024-07-30 제넨테크, 인크. Pd-1 축 결합 길항제 및 탁산을 사용하여 국소적 진행성 또는 전이성 유방암을 치료하는 방법
TWI870789B (zh) 2015-08-04 2025-01-21 美商再生元醫藥公司 補充牛磺酸之細胞培養基及用法
TWI811716B (zh) 2015-09-18 2023-08-11 德商百靈佳殷格翰國際股份有限公司 治療發炎性疾病之方法
CN108290941A (zh) 2015-09-23 2018-07-17 百时美施贵宝公司 快解离速率的血清白蛋白结合性纤连蛋白iii型结构域
CN108884147B (zh) 2015-09-23 2024-02-27 百时美施贵宝公司 结合磷脂酰肌醇蛋白聚糖3的基于纤连蛋白的支架分子
JP7046814B2 (ja) 2015-12-30 2022-04-04 ジェネンテック， インコーポレイテッド タンパク質製剤のためのトリプトファン誘導体の使用
CN115400220A (zh) 2015-12-30 2022-11-29 豪夫迈·罗氏有限公司 减少聚山梨酯降解的制剂
KR20180097615A (ko) 2016-01-08 2018-08-31 에프. 호프만-라 로슈 아게 Pd-1 축 결합 길항물질 및 항-cea/항-cd3 이중특이성 항체를 사용하는 cea-양성 암의 치료 방법
TWI726969B (zh) 2016-01-11 2021-05-11 比利時商健生藥品公司 用作雄性激素受體拮抗劑之經取代之硫尿囊素衍生物
EP3411396A1 (en) 2016-02-04 2018-12-12 Curis, Inc. Mutant smoothened and methods of using the same
US11767362B1 (en) 2016-03-15 2023-09-26 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Methods of treating cancers using PD-1 axis binding antagonists and anti-GPC3 antibodies
JP6728392B2 (ja) 2016-04-15 2020-07-22 ベーリンガー インゲルハイム インターナショナル ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング 炎症性疾患の処置法
JP7016323B2 (ja) 2016-06-01 2022-02-21 ブリストル－マイヤーズ スクイブ カンパニー Ｐｄ－ｌ１結合ポリペプチドを用いるｐｅｔ造影
US10994033B2 (en) 2016-06-01 2021-05-04 Bristol-Myers Squibb Company Imaging methods using 18F-radiolabeled biologics
SG11201810687SA (en) 2016-06-03 2018-12-28 Janssen Biotech Inc Serum albumin-binding fibronectin type iii domains
WO2018029124A1 (en) 2016-08-08 2018-02-15 F. Hoffmann-La Roche Ag Therapeutic and diagnostic methods for cancer
EP3526252A2 (en) 2016-10-14 2019-08-21 Boehringer Ingelheim International GmbH Methods of treating diseases with il-23a antibody
WO2018152496A1 (en) 2017-02-17 2018-08-23 The Usa, As Represented By The Secretary, Dept. Of Health And Human Services Compositions and methods for the diagnosis and treatment of zika virus infection
JP2020512344A (ja) 2017-03-27 2020-04-23 ベーリンガー インゲルハイム インターナショナル ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング 抗ｉｌ−３６ｒ抗体併用治療
EP3615569A1 (en) 2017-04-25 2020-03-04 The U.S.A. As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Antibodies and methods for the diagnosis and treatment of epstein barr virus infection
TWI897843B (zh) 2017-05-03 2025-09-21 美商必治妥美雅史谷比公司 結合至肌肉生長抑制素以纖維連接蛋白為主之支架結構域蛋白質的穩定調配物
US10793634B2 (en) 2017-06-09 2020-10-06 Boehringer Ingelheim International Gmbh Anti-TrkB antibodies
WO2019018629A1 (en) 2017-07-19 2019-01-24 The Usa, As Represented By The Secretary, Dept. Of Health And Human Services ANTIBODIES AND METHODS FOR DIAGNOSING AND TREATING INFECTION WITH HEPATITIS B VIRUS
US10702508B2 (en) 2017-10-16 2020-07-07 Aragon Pharmaceuticals, Inc. Anti-androgens for the treatment of non-metastatic castration-resistant prostate cancer
US20240239877A1 (en) 2017-12-18 2024-07-18 Viiv Healthcare Uk (No. 5) Limited Antigen binding polypeptides
CN112020365A (zh) 2018-01-26 2020-12-01 豪夫迈·罗氏有限公司 组合物和使用方法
CR20200327A (es) 2018-01-26 2020-11-05 Genentech Inc Proteínas de fusión fc il-22 y métodos de uso
KR20200123118A (ko) 2018-02-21 2020-10-28 제넨테크, 인크. IL-22 Fc 융합 단백질로 치료를 위한 투약
WO2019213416A1 (en) 2018-05-02 2019-11-07 The Usa, As Represented By The Secretary, Dept. Of Health And Human Services Antibodies and methods for the diagnosis, prevention, and treatment of epstein barr virus infection
MY205645A (en) 2018-06-23 2024-11-02 Genentech Inc Methods of treating lung cancer with a pd-1 axis binding antagonist, a platinum agent, and a topoisomerase ii inhibitor
WO2020006347A1 (en) 2018-06-29 2020-01-02 Boehringer Ingelheim International Gmbh Anti-cd40 antibodies for use in treating autoimmune disease
KR102898177B1 (ko) 2018-08-08 2025-12-10 제넨테크, 인크. 단백질 제제를 위한 트립토판 유도체 및 l-메티오닌의 용도
KR102739487B1 (ko) 2018-09-21 2024-12-10 제넨테크, 인크. 3중-음성 유방암에 대한 진단 방법
MX2021004684A (es) 2018-10-23 2021-06-04 Glycardial Diagnostics S L Anticuerpos especificos para apoj glucosilada y usos de los mismos.
IL286100B2 (en) 2019-03-08 2024-12-01 Boehringer Ingelheim Int Anti-il-36r antibody formulations
WO2020225400A1 (en) 2019-05-09 2020-11-12 Boehringer Ingelheim International Gmbh Anti-sema3a antibodies and their uses for treating eye or ocular diseases
TWI877179B (zh) 2019-06-27 2025-03-21 德商百靈佳殷格翰國際股份有限公司 抗-angpt2抗體
TW202535466A (zh) 2019-09-09 2025-09-16 德商百靈佳殷格翰國際股份有限公司 抗-il-23p19抗體調配物
TWI859339B (zh) 2019-09-24 2024-10-21 德商百靈佳殷格翰國際股份有限公司 抗nrp1a抗體及其用於治療眼或眼部疾病之用途
US12297451B1 (en) 2019-10-25 2025-05-13 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Cell culture medium
CN111018960B (zh) * 2019-12-04 2021-09-10 中国农业科学院饲料研究所 一种抗菌肽id13及其制备方法和应用
CN115175691B (zh) 2019-12-18 2026-02-10 Aro生物疗法公司 结合血清白蛋白的纤连蛋白iii型结构域及其应用
JP7758672B2 (ja) 2019-12-20 2025-10-22 ノヴァロック バイオセラピューティクス， リミテッド 抗インターロイキン－２３ ｐ１９抗体およびそれの使用方法
WO2021174045A1 (en) 2020-02-28 2021-09-02 Bristol-Myers Squibb Company Radiolabeled fibronectin based scaffolds and antibodies and theranostic uses thereof
WO2021202727A2 (en) 2020-03-31 2021-10-07 Repertoire Immune Medicines, Inc. Barcodable exchangeable peptide-mhc multimer libraries
WO2021207662A1 (en) 2020-04-10 2021-10-14 Genentech, Inc. Use of il-22fc for the treatment or prevention of pneumonia, acute respiratory distress syndrome, or cytokine release syndrome
CR20220596A (es) 2020-05-26 2023-01-23 Boehringer Ingelheim Int Anticuerpos anti-pd-1
AU2021293038A1 (en) 2020-06-16 2023-02-02 F. Hoffmann-La Roche Ag Methods and compositions for treating triple-negative breast cancer
EP4208259A2 (en) 2020-09-04 2023-07-12 NovaRock Biotherapeutics, Ltd. Nectin-4 antibodies and uses thereof
WO2022087154A1 (en) 2020-10-20 2022-04-28 Repertoire Immune Medicines, Inc. Mhc class ii peptide multimers and uses thereof
WO2022162587A1 (en) 2021-01-27 2022-08-04 Centre Hospitalier Universitaire Vaudois (C.H.U.V.) Anti-sars-cov-2 antibodies and use thereof in the treatment of sars-cov-2 infection
CN117062836A (zh) 2021-02-05 2023-11-14 勃林格殷格翰国际有限公司 抗il1rap抗体
TW202317620A (zh) 2021-06-04 2023-05-01 德商百靈佳殷格翰國際股份有限公司 抗ＳＩＲＰα抗體
WO2022263638A1 (en) 2021-06-17 2022-12-22 Centre Hospitalier Universitaire Vaudois (C.H.U.V.) Anti-sars-cov-2 antibodies and use thereof in the treatment of sars-cov-2 infection
CR20240265A (es) 2021-12-22 2024-10-16 Boehringer Ingelheim Int Anticuerpos anti-c3 y fragmentos de unión al antígeno de estos y sus usos para tratar enfermedades oftálmicas u oculares
EP4238988A1 (en) 2022-03-01 2023-09-06 Consejo Superior De Investigaciones Científicas Antibodies against sars-cov-2 and uses thereof
US20250326844A1 (en) 2022-04-07 2025-10-23 Repertoire Immune Medicines, Inc. T cell receptor multimers and uses thereof
EP4577578A1 (en) 2022-08-22 2025-07-02 Abdera Therapeutics Inc. Dll3 binding molecules and uses thereof
WO2024068996A1 (en) 2022-09-30 2024-04-04 Centre Hospitalier Universitaire Vaudois (C.H.U.V.) Anti-sars-cov-2 antibodies and use thereof in the treatment of sars-cov-2 infection
WO2025147575A1 (en) 2024-01-06 2025-07-10 Generate Biomedicines, Inc. Anti-il-13 antibodies and methods of use thereof
WO2025177263A1 (en) 2024-02-25 2025-08-28 Biohaven Therapeutics Ltd. Myostatin-binding proteins
WO2025181215A1 (en) 2024-03-01 2025-09-04 Boehringer Ingelheim International Gmbh Antibodies to connective tissue growth factor (ctgf) and uses thereof
US20260078179A1 (en) 2024-07-18 2026-03-19 Novarock Biotherapeutics, Ltd. Cdh17 antibodies and uses thereof

Family Cites Families (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA1341417C (fr) * 1984-03-27 2003-01-21 Paul Tolstoshev Vecteurs d'expression de l'hirudine, cellules transformees et procede de preparation de l'hirudine
FR2593518B1 (fr) * 1985-05-02 1989-09-08 Transgene Sa Vecteurs d'expression et de secretion de l'hirudine par les levures transformees
MY101203A (en) * 1985-12-12 1991-08-17 Ucp Gen Pharma Ag Production of thrombin iinhibitors.
MC1834A1 (fr) * 1986-07-10 1988-06-03 Transgene Sa Bloc fonctionnel d'adn et plasmide codant pour l'hirudine,levure transformee,procede de preparation de l'hirudine,hirudine obtenue et son utilisation
FR2607517B2 (fr) * 1986-12-01 1989-12-22 Transgene Sa Vecteurs d'expression de variants de l'hirudine dans les levures, procede et produit obtenu
FR2628429B1 (fr) * 1988-03-08 1990-12-28 Transgene Sa Variants de l'hirudine, leurs utilisations et les procedes pour les obtenir
FR2633296B1 (fr) * 1988-06-24 1991-11-15 Centre Nat Rech Scient Molecules peptidiques a action sur les germes a gram positif

Also Published As

Publication number Publication date
CA2032153A1 (fr) 1990-10-29
WO1990013646A1 (fr) 1990-11-15
CA2032153C (fr) 2001-10-30
JP3085973B2 (ja) 2000-09-11
EP0423302B1 (fr) 1995-04-26
ES2073571T3 (es) 1995-08-16
DK0423302T3 (da) 1995-07-03
PT93910B (pt) 1996-10-31
ATE121781T1 (de) 1995-05-15
DE69018920T2 (de) 1995-09-07
FR2646437B1 (fr) 1991-08-30
PT93910A (pt) 1991-01-08
DE69018920D1 (de) 1995-06-01
EP0423302A1 (fr) 1991-04-24
US5631144A (en) 1997-05-20
FR2646437A1 (fr) 1990-11-02

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