JPH04500959A - 抗炎症剤および免疫抑制剤としてのカスタノスペルミンの使用 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 抗炎症剤および免疫抑制剤としての カスタノスペルミンの使用 この発明は、オーストラリア産天然マメ類から抽出されるイントリジジン系アル カロイドであるカスタノスペルミン（ｃａｓ　ｔａｎｏｓｐｅｒｍｉ　ｎｅ）の 抗炎症剤および免疫抑制剤としての使用に関するものである。

カスタノスペルミン（Ｃ３）は、オーストラリアマメＣａＳｔａｎＯ８ｐｅｒｍ Ｕｍ　ａｕｓｔｒａｌｅ　の種子から最初に単離されたイントリジジン系アルカ ロイドとして最近記述され（ｔ（ｏｈｅｎｓｃｈｕｔｚら、＋９８１）　、次の 構造式を有する：Ｃ８は、オリゴ糖工程をインビトロで阻害することが示されて いるグリコシダーゼＩの有望な阻害剤である（　５ａｓａｋ　ら、１９８５、Ｈ ａｍｐｈｒｉｅｓ　ら、１９８６およびＧｒｏｓｓら、＋９８６）。該アルカロ イドは、インビトロにおいて酵素、３−グルコシダーゼおよびβ−グルコセレプ ロシダーゼをも阻害しく　Ｓａｕ　ｌら、１９８３）　、またα−グルコシダー ゼをインビボ（Ｓａｕｌら、１９８５）およびインビトロ（Ｓａｕｌら、１９８ ３　；　Ｅｌｌｍｅｒｓら、１９８７ならびにＣｈａｍｂｅｒｓおよびＥｌｂｅ ｉｎ、　１９８６）の両方において阻害する。

国際特許明細書ＷＯ８７０３９０３は、ＡＩＤＳおよびネコ白血病の病原学的薬 剤を含めて、欠陥のないレトロウィルス性病原に対抗する治療的薬剤として、グ ルコンダーゼＩ阻害剤、好ましくはカスタノスペルミンの使用を記述している。

この明細書において、グリコシダーセＩ阻害剤の作用は、感染細胞内におけるレ トロウィルスの複製の妨害、感染細胞上におけるウィルス性ｅｎｖ糖蛋白質の提 示に伴う病原性効果の軽減、また可能的にピリオンに認識される細胞内受容体の 発現の妨害による標的細胞への感染阻止として記述されている。

加えて、ヨーロッパ特許明細書第２０２６６１号には、糖尿病の治療、好ましく は食後の高血糖症の治療または糖尿病における炭水化物吸収の阻止のためのカス タノスペルミン含有組成物の使用が記述されている。この明細書において、カス タノスペルミンの活性は、消化酵素の阻害として記述されており、これによって 増大した脂質生合成の阻害に加えて複合糖の加水分解によるグルコース形成を低 減し、もって高脂血症および過剰な脂質蓄積を防止する。

本発明を導いた研究において、カスタノスペルミンは、受容動物にインビボで与 えられた場合に、受動的に誘発された実験的アレルギー性脳を髄炎（ＥＡＥ）に 対して阻害効果を有することが見出された。

実験的アレルギー性脳を髄炎は、細胞媒介自己免疫で、中枢神経系（ＣＮＳ）の 脱髄性疾患である（Ｐａｔｅｒｓｏｎ、１９７６　；　Ｂｅｒｎａｒｄら、１９ ８３）　、これは、完全フロインドアジュバント（ＣＦＡ）に組込まれたミニリ ンの塩基性蛋白質（ＢＰ）の注射投与により、多くの動物種において容易に誘発 され得る。また、これはＣＮＳ抗原で感作された供与体のリンパ細胞を純粋同系 受容体に注射することにより、受動的に誘発され得る（Ｐａｔｅｒｓｏｎ、１９ ６０　。

５ｔｏｎｅ　％１９６１　；　ＬｅｖｉｎｅおよびＳｏｗｉｎｓｋｉ　、　１９ ６７）。

ＥＡＥの脱髄的特徴のために、これはヒトの脱髄性疾患である多発性硬化症のモ デルとしても広く使用されてきた。従って、この疾患を阻害し、または抑制する 方法を見出すべく努力が注がれてきた。これまでのところ論理的に最も関連する 研究は、該疾患の効果相、神経免疫的炎症を阻害するための試験方法であろう。

リンパ細胞−マクロファージ相互作用は、この炎症性応答において極めて重要で あると考えられている。感作されたリンパ細胞は、ＣＮＳへ侵入時、おそらく特 定の抗原、すなわちＢＰを認識し、これは、溶解性媒介体の放出を引き起こす。

次いでこれらの媒介体が、脱髄の最終的媒介体と考えられているマクロファージ を誘引し、活性化する。この工程の阻害は、例えば、リンパ細胞−内皮細胞相互 作用を妨害し、これにより細胞のＣＮＳへの侵入を阻止する：媒介体産生／作用 の阻害または活性化マクロファージの活性の阻害等、多くの段階で起こり得る。

最近、ヘパリンおよびフコイジン等の硫酸化多糖類が、ＥＡＥのＣＮＳ炎症の強 力な阻害剤であることが示された（Ｗｉ　ｌｌｅｎｂｏｒｇおよびＰａｒｉｓｈ 　５１９８８）　ｏこの阻害は、ヘパリン調製物が抗凝集活性を欠き、また該疾 患を部分的に阻害することから、これらの化合物の抗凝集活性のみによるもので はない。これらの薬剤による正確な阻害機構は知られていないが、これらの研究 は、炎症過程のある臨界的段階に炭水化物残基があることを示唆している。

カスタノスペルミンは、能動的に誘発された関節炎に加え、受動的に誘発された 補助的関節炎においても抗炎症効果を示すことが見出された。ラットにおける補 助薬誘発関節炎は、例えば増殖性骨膜炎および皮下小節、四肢の浮腫、および最 終的な軟骨および骨の侵食の存在等、ヒトの関節炎と多くの特徴を共通して有す る。この動物モデルは、抗炎症および免疫抑制剤の検出のために広く使用されて きた。

最後に、カスタノスペルミンは、準備的な実験において免疫抑制剤として、特に 組織移植片拒絶反応、および遅延型過敏性反応の調節において有効であることが 見出された。

従って、第１の面において本発明は、抗炎症および／または免疫抑制剤としての カスタノスペルミンの使用に関する。この面において本発明は、患者に対して有 効量のカスタノスペルミンを投与することを含む、動物またはヒト患者の抗炎症 的および／または免疫抑制的治療方法を提供する。

カスタノスペルミンの有効量は、例えば、０．Ｏ１〜５００■／ｋｇ／日を含む 。

他の面において、本発明は、抗炎症および／または免疫抑制治療のための医薬ま たは動物薬組成物の調製または製造におけるカスタノスペルミンの使用に関する 。この面において、カスタノスペルミンを医薬もしくは獣医　・薬として許容さ れる担体、またはその希釈剤と共に含む医薬または獣医薬組成物が提供される。

カスタノスペルミンの抗炎症的および免疫抑制的効果は、以下の例において更に 示される。

１５０〜２００ｇの雌Ｌｅｗｉｓ　（ＲＴ−１’　）ラットは、Ｊｏｈｎ　Ｃｕ ｒｔｉｎ　５ｃｈｏｏｌ　ｏｆ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈの動物飼育 施設から入手した。

ＥＡＥの誘発 モルモットＢＰをＤｅｉｂｌｅｒら（１９７２）の方法に従って調製し、食塩水 中のＢＰを４ｍｇ／ｍｌの　Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｂｕｔｙｒｉｃｕｍが 添加された当容量のフロイント不完全アジュバント中に乳化させた。ラットに０ ．１ｍｌのエマルジョンを、両後足の各内針のひとつに投与した。全投与量は、 ５０μｇのＢＰおよび４００μｇのＭｙＣＯｂａＣｔｅｒｉＵｍ特表平４−５０ ０９５９　（３） ＥＡＥの受動的転移のための細胞を、Ｐａ１ｎｉｔｃｈおよびＭｃＦａｒｌｉｎ 　（１９７７）の方法に従って生成させた。単一細胞懸濁物を、上述のように１ ０−１２日前にＢＰ−ＣＦＡにより感作させた供与体ラットの牌臓から調製した 。５％の胎児性ウシ血清（Ｆｅ２）　、５　Ｘ　Ｉ　Ｏ−’Ｍのメルカプトエタ ノール、２００ｍＭのし一グルタミンならびにペニシリンおよびストレプトマイ シンを含むＲＰＭＩ中にて細胞を２ｘｌＯ＠／ｍｌとして培養した。コンカナバ リン２μｇ／ｍｌとなるように添加し、３７°ＣにてｌＯ％ＣＯａ　、　７５％ 　０２および残部のＮ２雰囲気中で培養した。

７２時間後に細胞を採取し、Ｈａｎｋの平衡塩溶液（ＨＢＳＳ）にて洗浄し、受 容体動物に側部尾静脈を通して転移させた。すべての転移母集団は３０Ｘ１０’ の生細胞を含ん臨床的Ｅ八Ｅは、以下のスキームに従って級分けした：〇−無症 候性；１−尾の先半分が弛緩性；２−尾全体が弛緩性；３−運動失調、正立困難 ：４−後足弱化＝５−後足麻痺。

カスタノスペルミン（ＣＳ） カスタノスペルミンを、Ｈｏｈｅｎｓｃｈｕｔｚら、１９８１の方法により調製 した。予測されるＣ８の短い半減期のため、これを７日間にわたりｌＯμｍ／時 で分配する小型−浸透ポンプ（Ａｌｚａモデル２１ＪＬＩ）により投与した。該 ポンプは、ラットの背に皮下的に埋設され、また各実験対照ラットはにせの手術 をうけた。

ｂ、結果 準備的な毒性試験（データは示していない）は、５００■／ｋｇ／日で７日間の Ｃ８の投与で、処理後６週間に何らの毒性効果も動物に観察されないことを示し た。第１の実験において、受動的誘発ＥＡＥに対する１００．２００または３０ ０■／ｋｇ／日のＣ８の効果を試験した。

この実験において、Ｃ３を含む浸透ポンプは細胞転移時に埋設された。表１は、 ３００■／ｋｇ１日では臨床的ＥＡＥに対して完全な保護を与えることを示し、 一方、２００■／ｋｇ／日では平均臨床得点の減少で示されるように部分的保護 のみが与えられることを示している。

１００■／　ｋｇ　／日では、保護効果はなかった。

対照ラットおよび３００■／ｋｇ／日のＣ３を受けたものを、ＣＮＳ組織の組織 学的実験のために、８日目に殺した。図１および２は、それぞれ、細胞転移から ７日Ｃ３（３００■／ｋｇ／日）により処置されたラット、および対照（非処置 ）ラットの組織学的実験のための顕微鏡写真である。図１においては、臨床的Ｅ ＡＥは見られないが、多くの炎症領域が下側を髄に存在し、ａおよびｃ−ｆは、 集中した小さい脈管周囲の炎症領域を示す。

実線の矢印は、内皮を指しており、細胞が内皮を通して移動していることを示し ている。破線の矢印は、細胞が実質へ更に移動することを制限するであろうある 種の構造を示している。ｂは、処理ラットにおける集中した髄膜炎を示している 。図２は、ａおよびｃ−ｆにおいて拡散した炎症領域を六している。ｂは、軽い 髄膜炎関連部分を示している。処置ラットは、驚くべきことに、非処置ラットと ほぼ同じ数の炎症領域を有しているが、その分布および質が異なっている。処置 ラットは、を髄の髄膜炎中の集中的炎症の浸潤ならびに出口帯および入口帯基部 の頻繁な関与がみられる。対照ラットにおける髄膜炎関連部分は、希に軽微な場 合にのみ見られる。更に、Ｃ３処置ラツトにおける脈管周囲の炎症領域は、しば しば集中的であるが炎症細胞が高密度であり、脈管の周囲に近接して境界をもっ ている。対照的に、対照群のラットの病変部は、より拡散して細胞が脈管から離 れて移動し、を髄の実質中に広く浸透している。図３の顕微鏡写真は、ＥＡＥ細 胞転移の始めから浸透ポンプにより３００■／ｋｇ／日のＣ８を受けたラット（ 臨床的疾患は観察されず、動物は８日目に電子顕微鏡用に殺された）においては 、リンパ細胞（Ｌ　ｙ）が小静脈上皮を横切り（矢印）、しかしながら脳の実質 には入り込んでいない。対照的に、図４は、ＥＡＥ細胞細胞転移後８ト目床的Ｅ ＡＥを示す非処置対照ラットにおいては、脳実質へのリンパ細胞（Ｌｙ）の浸潤 がある。

先行する受動的誘発疾患によりもたらされた既に傷ついた血管脳障壁を育する受 容体動物におけるＣ８の受動的誘発ＥＡＥ阻害能力を試験した。受動的誘発疾患 のエピソードから回復したラットは、２回目の攻撃に対しても純真（ｎａｉｖｅ ）な動物と同様に感受性がある（Ｗｉ　ｌｌｅｎｂｏｒｇ、１９７９　；　Ｈｉ ｎｒｉｃｈｓら、１９８１）　、このような動物に、２回目の転移と同日に３０ ０■／ｋｇ／日のＣ３を分配する浸透ポンプを埋設すると、それらは該疾患の２ 回目のエピソードを現わさない（表２）。同じ投与量のＣ５（３００■／ｋｇ） は、再度第１の疾患から純真な動物を保護することが示されている。

細胞転移後に治療が数日遅れた場合のＣ８の疾患阻害能力を試験した。Ｃ３の１ ５０■／ｋｇの２回の注射投与を、朝と晩とに細胞転移後４日目から始めて３日 間続けた。表３（実験ｌ）に示されるように、これらの動物はＥＡＥの臨床的徴 候を表さなかった。しかしながら、この実験を繰返すと、処置された動物は保護 されずにすべてが臨床的疾患を表した（実験２：表３）。データの検討は、しか しながら、第１回の実験において非処理動物の疾患の徴候が第６日まで表れず、 一方、第２回の実験においてはすべての動物は、処置開始時には少なくとも最小 の徴候を表わしていた。従って、このことはＣ３による抑制が、疾患の症状によ る攻撃前に治療を始めた場合にのみ有効であることを示すと思われる。他の可能 性は、第２回の実験における１日２回の注射は、適切な薬剤水準を維持すること が何らかのためにできなかったことである。この可能性を試験するために、細胞 転移後４日目に浸透ポンプを埋設する実験を行なった。この実験において、すべ ての動物は、４日目には軽微な臨床的微特表平４−５００９５９　（４） 候を示しており、Ｃ８による処置は、引続く疾患の発現を変化させることができ ず（実験３；表３）、このことは処理を臨床的徴候の始まる前に開始しなければ ならないことを示唆している。

上述の結果は、アルカロイドであるカスタノスペルミンが、臨床的疾患の始まる 前に該薬剤を投与した場合に受動的誘発実験的アレルギー性脳を髄炎を阻害する ことを示している。処置動物からの組織学は、Ｃ３がＥＡＥを阻害する有力な機 構に関していくつかの洞察を与える。

臨床的描像から期待されるであろうことに反して、処置を受けた動物中に病変部 か見出された。これらは、特徴的に集中しているが高密度であって、小静脈周囲 に炎症細胞が硬く充填され、対照と比較して、実質内部への移動はほとんど無い 。該細胞は、明らかに上皮を横切ることができるが、次いで、上皮とある種の制 限構造と考えられるものとの間に蓄積されるものと思われる。これらの病変部の 存在は、Ｃ８が、上皮を越えた血液からのリンパ細胞の遊出の阻害により作用す るのではなく、作動細胞がＣＮＳの実質へ更に侵入することを阻止することによ り機能することを示唆している。

この活性を負っている機構は知られていないが、受動的誘発ＥＡＥにおけるヘパ リンに関する先の知見に基づくと（Ｗｉ　ｌｌｅｎｂｏｒｇおよびＰａｒｉｓｈ 　、　１９８８）　、　Ｃ３は、作動細胞が血管上皮およびその基礎となる基底 板を横切って遊出するために必要な酵素活性を阻害することにより作用している のであろう。Ｃ３は、ホスホリル化後にリソソーム酵素の特異的認識標識となる いわゆる高マンノース構造の形成に要するＮ−結合オリゴ糖処理の特異的段階を 阻害することが知られている。これらの標識が存在しない場合に、リソソーム酵 素は、粗小胞体／ゴルシ複合体からリゾソームへ運搬され得ず、またそれらは細 胞表面に再捕捉されて通常のように内在化されることもない（ｖｏｎ　Ｆｉｇｕ ｒａおよびＨａｓｉｌｉｋ、　１９８６　；　Ｗｅｓｔ　、　１９８６；　Ｋｏ ｒｎｆｉｅｌｄ　、　１９８７）　ａ従って、Ｃ８の全体としての効果は、ＥＡ Ｅ作動細胞の小静脈から脳実質への遊出に要する酵素を除去、または機能的に除 去することであろう。

炎症細胞が実質に侵入することが最終的に不能であることは、臨床的疾患を阻止 している。当然のことながら、細胞表面蛋白質の不適当なグリコジル化、Ｃ８の 抗転移活性が寄与している工程等、Ｃ３が機能することによる他の可能な機構も 存在する（Ｈｕｒｎｐｈｒｉｅｓら、１９８６）。

表１．受動的ＥＡＥに対するＣ３の保護効果Ｃ８投与量”　ＥＡＥを伴っ　開始 の　平均臨床１なし　４／４　４±０　４．２５±０．１４１００　４／４　４ ±０４．θ±０ ２００　４／４　５±０　２．０＋Ｏ ａ、薬剤は、細胞転移と同時に皮下的に設けられた小型浸透ポンプにより分配さ れた。

ｂ、可能な５士標準誤差からの平均点数表２．傷ついた血液脳障壁を有するラッ トにおける受動的ＥＡＥに対するＣ３の効果純真　０　４／４　３．７５±０． １４純真　３００　０／４ 回復期　０　４／４　４±Ｏ ａ、薬剤は、細胞転移と同時に皮下的に設けられた小型浸透ポンプにより分配さ れた。

ｂ、可能な５士標準誤差からの平均値 表３．臨床的徴候発生後に投与した場合のＣＳのＥＡＥ緩和の失敗 ａ、４日目に処置開始 す、可能な５士標準誤差からの平均値 例２−受動的、に誘発５されたアジュバント関節秀に対するカスタノスペルミン の効果 ａ、方法 （ＤＡｘＬｅｗｉｓ）　Ｆ　＋　ラットを、両後足に皮肉的に注射した軽鉱油中 の３■のＭ、　ｂｕｔｙｒｉｃｕｍで免疫した。１０日後に牌臓を取出し、５％ 胎児性ウシ血清、２００ｍＭのし一グルタミン、５Ｘ１０−’Ｍの２−ＭＥ、ペ ニシリンおよびストレプトマイシンを含むＲＰＭＩ中の単細胞懸濁物に調製した 。細胞を２Ｘ１０’細胞／ｍｌに調節し、５０ｍ１の培地中で７５ｍ１の培養フ ラスコ内にて培養した。

Ｃｏｎ　Ａを２μｇ／ｍｌとなるように加え、培養物を１０％ＣＯ２，７％０２ および残余のＮ２雰囲気下に３７°Ｃにて７２時間培養した。次いで細胞を洗浄 し、５０Ｘ１０＠または６０Ｘ１０“細胞／ラットで静脈内的に１０週令の雄（ ＤＡｘＬｅｗｉｓ）’　Ｆ　ｌに転移させた。

カスタノスペルミンを、５μｇ／時で１４日間分配する浸透ポンプ（Ａｌｚａ　 Ｃａｒｐ、）に入れた。ポンプを細胞転移時に皮下的に埋設した。ラットは、３ ５０■／ｋｇ／日のカスタノスペルミンを受けた。

ｂ、結果 細胞転移の日に始め、ラットの後足を４個所の直径について測定した。測定値は 平均値を得、足の体積について％変化として表した二 細胞転移の日に開始して、３５０■／ｋｇ２日のカスタノスペルミンによりラッ トを処理して行なう２つの実験を行なった。結果を表４に示しである。

表４．受動的に誘発されたアジュバント関節炎に対するＣ３の効果 衷鰺↓−５０８１０’細胞　足体積の％Δ対　照　７日目　１４４日 目、　＋１８％　＋４０％ ２　＋２２％　＋２６％ ３　＋１７％　＋３２％ ４　＋１８％　＋２５％ ５　＋１６％　＋２５％ Ｃ８処置−３０Ｘ１０＠細胞 １　＋１２％　＋４％ ２　−５％　−１％ ３　５％　０ ４　０　＋９％ 寒鰺２−６０ｘｌＯ’細胞　足体積の％Δ対　照　７日目　１４４日 目　’　＋１２％　＋４０％ ２　＋３１％　＋９９％ ３　＋１７％　＋７７％ ４　＋２１％　＋１８％ ５　＋２８％　＋４５％ Ｃ８処置−６ＯＸ１０’細胞 １　−５％　−８％ ２　７９４　１８％ ３　−３％　−１４％ ４　＋３％　−１％ いずれの場合においてもＣ３処置ラツトは、炎症を示さなかったが、１例のみ（ ＃ｌ、実験ｌ）が一時期中程度の浮腫を示した。実験ｌのすべてのラットは、組 織学的試験のために殺された。

実験２において、浸透ポンプは１５５日目除去され、すべての動物は２８十日ま で遂行された。対照は有意な程度の浮腫および炎症を示したが、一方Ｃ３処置ラ ットは、薬剤中断２週間後においてさえも正常を保った。

Ｎ３−受動的に誘発されたアジュバント関節炎に対するカスタノスペルミンの効 果 受動的に誘発されたアジュバント関節炎に対するＣ３の効果を測定するための別 の実験において、例２の方法を反復したが、Ｃ８による処置（３２５■／ｋｇ／ 日）は、細胞注射（６０Ｘ１０＠細胞／ラツト）後７日目に開始した。

処置および対照ラット（５匹のラット／群）の足の大きさ変化の％を示す独立し た２つの実験の結果を図５および６にグラフ的に示す。

例４−能動的に誘発された関節炎に対するカスタノスペルミンの効果 この例においては、Ｍ、　ｂｕｔｙｒｉｃｕｍを軽鉱油中において、尾の基部お よび背の下部にわたる数個所の部位に皮下的に注射することによって能動的に関 節炎を誘発した。中肢およびくるぶしの幅を５０日間にわたって測定した。

関節炎の変化は、１０日後から顕著となった。２００■／ｋｇ／日のカスタノス ペルミンを含むポンプをＭ、　ｂｕｔｙｒｉｃｕｎ＋の注射後５日に埋設した。

試験および対照群の両者において７匹のラットを使用した。対照および試験群の 結果を図７．８および９に中肢幅、平均中肢周囲および平均くるぶし幅をそれぞ れ比較してグラフ的に疫抑制効果 ａ、方法 供与体マウスは、Ｂａ１ｂ／　ｃ（Ｈ２’）であり、また受容体はＣＢＡ（８２ ，’）であった。供与体の膵臓小島（ランゲル／）ンス島）を標準的技術により 調製した。約４００の小島を１０匹の供与体マウスから単離した。これらの新し く単離した小島を、５０の群においてＣＢＡ血餅中に入れ、これらを糖尿病ＣＢ Ａマウス（血中グルコース２０ｍＭ／リットル）の腎臓のカプセル下に置いた。

２匹の受容体には、小島移植時にＣ８を含む小型浸透ポンプを埋設（皮下的）し た。これらのポンプは、Ｃ３を３００■／ｋｇ／マウス／日の投与量で１４日間 分配した。２匹の対照マウスにはにせの手術を行なった。

血液試料（１０μｌ）を毎日採取し、自動分析装置（Ｂｅｃｋｍａｎ　Ｇｌｕｃ ｏｓｅ　Ａｎａｌｙｚｅｒ　２）を用いて血中グルコースをアッセイした。

すべての移植受容体は、２４時間以内に血糖正常となり、すべての移植片の移植 の成功を示した。移植片の拒絶反応は、動物が高血糖になった場合に起こると考 えられる。対照動物は、９日および１２日日月拒絶反応を起こした。

１匹のＣ３処置マウスは、小型浸透器が機能を停止した後の５日目である１９日 目土で拒絶反応を起こさなかった。他方のＣ８処置動物は、１２日日月拒絶反応 を起こした。このことの理由は、小型浸透ポンプを除去して試験を行ない、Ｃ３ 荷重を分配しなかったことが分かった時点で明らかとなった。

例６−腎臓移植片生存におけるカスタノスペルミンの効果 この例は、カスタノスペルミンにより処理された完全に同種異系（ＤＡ／ＬＥＷ ）の供与体由来の腎同種移植片を受けたＤＡクラット移植片生存を示す。各ラッ トの一個の腎臓を供与体の腎臓と置換し、その後、残っている元のラット腎臓を 除去した。結果を下記の表５に示す。

参考文献ニ ア　２５０ｍｇ／ｋｇ　１　３３ 欅５　ポンプ無し　０　一 本　この対照は、他の多くの場合にも実施され、１４日以上に生存したラットは なかった。

本本同系の対照 例７−遅延型過敏性（ＤＴＨ）：カスタノスペルミンの効果 Ｃ５７ＢＬマウスに１０”のヒツジ赤血球細胞（ＳＲＢＣ）を静脈内的に与えた 。５日後に１０ｍ１の体積の１０　’　５ＲＢＣを左の後足内針に、また１０ｍ １の食塩水を右側に注射した。カスタノスペルミンを、内証試験の開始と共に４ 時間毎に腹腔内的に与えた。２４時間にわたるＣ８の全投与量は、３００■／ｋ ｇ／マウスであった。

対照マウスは、４時間毎に食塩水を投与され、また試験および対照の両者につい て、５匹のマウス／群を用０た。　・ 対照群においては、足の浮腫における３３％の増大が生じたが、Ｃ８を投与され た試験群においては相当する足の浮腫における増大は１１％であった。

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Ｄ、Ｐ、　Ｌｅｗｏｒｔｈｙ、　Ｒ，Ｊ、　Ｐｒｙｃｅ、　Ｅ、　Ａｒｎｏｌｄ およびＪ、　Ｃ１ａｒｄｙ　（１９８１）、Ｃａｓｔａｎｏｓｐｅｒｍｕｍ　ａ ｕｓｔｒａｌｅ　の種子由来のカスタノスペルミン、１．６．７．８−テトラヒ ドロキシ−オクタヒドロインドリジンアルカロイド、Ｐｈｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔ ｒｙ　２０　：　８１１−８１４９、　Ｈｕｍｐｈｒｉｅｓ、　Ｍ、Ｊ、、　Ｋ 、　Ｍａｔｓｕｍｏｔｏ、　Ｓ、Ｌ、　Ｗｈｉｔｅおよびに、　０１ｄｅｎ　（ １９８６）、マウスにおけるカスタノスペルミンによる実験的転移の阻害：腫瘍 コロニー化の２つの異なる段階のオリゴサツカライド生成阻害剤による阻止、Ｃ ａｎｃｅｒ　Ｒｅｓ、　４６　：　５２１５−５２２２１０、　Ｋｏｒｎｆｉｅ ｌｄ、　Ｓ　（１９８７）リソソーム酵素の輸送、ＦＡＳＥＢ　Ｊｏｕｒｎａｌ 　１　：　４６２−４６８Ｉ１．　Ｌｅｖｉｎｅ、　ＳおよびＲ，Ｓｏｗｉｎｓ ｋｉ　（１９６８）全血によるアレルギー性態腎炎および脳を髄炎の受動的転移 、Ｐｒｏｃ、　Ｓｏｃ、　Ｅｘｐ、　Ｂｉｏｌ、　Ｍｅｄ、＋２９　：　２２１ −２２３１２、Ｐａｎ１ｔｃｈ、　Ｈ，Ｓ、およびり、Ｅ、　ＭｃＦａｒｌｉｎ 　（１９７７）　、実験的アレルギー性脳を髄炎：コンカナバリンＡによる細胞 媒介転移の増強、Ｊ、　Ｉｍｍｕｎｏｌ、　１１９　：　１１３４−１３、　Ｐ ａｔｅｒｓｏｎ、　Ｐ、Ｙ、　（１９６０）　、リンパ節細胞によるラッ１４、 　Ｐａｔｅｒｓｏｎ、　Ｐ、Ｙ、　（１９７６）　、実験的自己免疫（アレルギ ー性）脳を髄炎、Ｐ、Ａ、　ＭｉｅｓｃｈｅｒおよびＨ，Ｊ。

Ｍｕｌｌｅｒ　−Ｅｂｅｒｈａｎｄ　（編）、“Ｔｅｘｔｂｏｏｋ　ｏｆ　Ｉｍ ｍｕｎｏ−ｐａｔｈｏｌｏｇＹ”、　Ｇｒｕｎｅ　ａｎｄ　５ｔｒａｔｔｏｎ、 　Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ、　１７９−２１３頁 １５、５ａｓａｋ、　Ｖ、Ｗ、　Ｊ、Ｗ、０ｒｄｏｖａｓ、　Ａ、Ｄ、　２１ｂ ｅｉｎおよびＲ，Ｗ。

Ｂｅｒｎｉｎｇｅｒ　（１９８５）、カスタノスペルミンは、ヒト肝癌細胞にお いてフルコシダーゼ■および糖蛋白質の分泌を阻害する、Ｂｉｏｃｈｅｍ、　Ｊ 、　２３２　：　７５９−７６６１６、５ａｕｌ、　Ｒ，、Ｊ、Ｐ、　Ｃｈａｍ ｂｅｒｓ、　Ｒ，Ｊ、　Ｍｏ１ｙｎｅａｕおよびＡ、Ｄ、　Ｅｌｂｅｉｎ　（１ ９８３）、β−グリコシダーセオヨヒβ−グルコセレブロシダーゼを阻害するテ トラヒドロキシル化アルカロイド、カスタノスペルミン、Ａｒｃｈ、　Ｂｉｏｃ ｈｅｍ、　Ｂｉｏｐｈｙｓ、　２２１　：　５９３−５９７１７、５ａｕ１．　 Ｒ，、Ｊ、Ｊ、　Ｇｈｉｄｏｎｉ、　Ｒ，Ｊ、　Ｍｏ１ｙｎｅａｕｘおよびＡ、 Ｄ、　Ｅｌｂｅｉｎ　（１９８５）、カスタノスペルミンはα−グルコシダーゼ 活性を阻害し、動物におけるグリコ−１８、５ｔｏｎｅ、　Ｓ、Ｈ，（＋９６１ ）、同系繁殖モルモットにおけるリンパ節細胞によるラット中のアレルギー性脳 を髄炎の転移、５ｃｉｅｎｃｅ　１３４　：　６１９−６２０１９、　Ｗｅｓｔ 、　Ｃ，Ｍ、　（１９８６）　、蛋白質のグリコリル化の意義に関する最近の概 念、Ｍｏ１．　Ｃｅ１１．　Ｂｉｏｃｈｅｍ、　７２　：　３２０、　Ｗｉｌｌ ｅｎｂｏｒｇ、　Ｄ、Ｏ，（１９７９）　、Ｌｅｗｉｓラットにおける実験的脳 を髄炎：疾患からの回復機構および再誘発に対する獲得抵抗性の研究、Ｊ、　Ｉ ｍｍｕｎｏｌ、　１２３　：２１、　Ｗｉｌｌｅｎｂｏｒｇ、　Ｄ、０．および Ｃ，Ｒ，Ｐａｒｉｓｈ　（１９８８）　、硫酸化ポリサッカライドによるラット におけるアレルギー性脳を髄炎の阻害、Ｊ、　Ｉｍｍｕｎｏｌ、　１４０　：　 ３４０１手続補正書（自発） 平成３年２　ガニに祷瞭

Claims (10)

【特許請求の範囲】
1. １．患者に対して有効量のカスタノスペルミンを投与することからなる、動物ま たはヒト患者の抗炎症および／または免疫抑制治療方法。
2. ２．前記カスタノスペルミンの有効量が、１００〜５００ｍｇ／ｋｇ／日を含む 請求の範囲１項に記載の方法。
3. ３．前記カスタノスペルミンが、抗炎症および／または免疫抑制治療を必要とす る臨床的症状の始まる前に投与される請求の範囲１項に記載の方法。
4. ４．前記治療が、中枢神経の自己免疫脱髄疾患の治療を含む請求の範囲１項に記 載の方法。
5. ５．前記治療が、関節炎の治療を含む請求の範囲１項に記載の方法。
6. ６．前記治療が、組織または器官移植片拒絶反応を阻害するための治療を含む請 求の範囲１項に記載の方法。
7. ７．カスタノスペルミンを医薬的または動物薬的に許容される担体またはその希 釈剤と共に含有する抗炎症的および／または免疫抑制的治療用医薬または獣医薬 組成物。
8. ８．前記カスタノスペルミンが、１００−５００ｍｇ／ｋｇ／日のカスタノスペ ルミンを与える単位投与形態である請求の範囲８項に記載の組成物。
9. ９．動物またはヒト患者の抗炎症的または免疫抑制的治療のためのカスタノスペ ルミンの使用。
10. １０．動物またはヒト患者の抗炎症的または免疫抑制的治療用医薬調製のための カスタノスペルミンの使用。