JPH04501255A

JPH04501255A - 抗ウィルス性ヌクレオシドの脂質誘導体、リポソームの取込みおよび使用方法

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Publication number: JPH04501255A
Application number: JP1508037A
Authority: JP
Inventors: ホステトラー，カール・ワイ; クマール，ラージュ; ストゥミラー，ルイス・エム
Original assignee: ネクススター・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッド
Priority date: 1988-07-07
Filing date: 1989-06-30
Publication date: 1992-03-05
Anticipated expiration: 2018-10-20
Also published as: DK1291D0; US5223263A; CA1334846C; AU620901B2; ES2151877T3; ATE196636T1; AU3967689A; HUT56378A; FI910031A7; NZ229844A; KR900701810A; HU894392D0; JP3458900B2; EP0350287A2; DK175780B1; DE68929250D1; DK1291A; WO1990000555A1; DE68929250T2; EP0350287A3

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】抗ウイルス性ヌクレオシドの脂質誘導体、リポソームの取込みおよび使用方法発明の背景この発明は、一般的には、抗ウイルス性ヌクレオシド類縁体の脂質誘導体を使用する、ウィルスの感染の治療に関するものである。より特定的には、この発明は、脂質および特に修飾された抗ウイルス性類縁体のリン脂質誘導体に関し、それは、リポソームの構造内に統合することができ、それによってより安定したリポソーム複合体を形成し、それはより少ない毒性で標的細胞に、より大量の薬物を運ぶことができる。

ここに参照される刊行物および他の参照材料は、それを引用することによりここに援用され、かつ便宜上この明細書の終りに添付された文献目録に載せられる。

近年、ウィルスの感染を治療するためのヌクレオシド類縁体の使用に非常な関心が寄せられている。ヌクレオシドは、ピリミジンまたはプリン塩基からなり、それはリボース、環構造を有する五炭糖、に結合される。抗ウイルス性ヌクレオシド類縁体は、天然のヌクレオシドに非常に類似し、かつ新しいＤＮＡまたはＲＮＡの合成を妨げることによりウィルスの機能を抑制するようにつくられる。ヌクレオシドは、ＤＮＡまたはＲＮＡに酵素で組立てられる。

ＤＮＡ合成の間に、遊離ヌクレオシド三リン酸（３つのリン酸基が付加されたヌクレオシド）は、成長するＤＮＡ鎖の末端と反応する。反応は、入来するヌクレオシド三リン酸上の５′の位置におけるリン酸基と成長するＤＮＡ鎖の末端上の糖源の３′の位置における水酸基との結合を含む。他の２つのリン酸基は、反応の間に遊離させられ、それによって結果としてＤＮＡ鎖へのヌクレオチドの付加を生ずる。

ヌクレオシド類縁体は、それらがウィルスのＤＮＡ合成に関与できるように、天然由来のヌクレオシドに十分に模倣された化合物である。しかしながら、抗ウイルス性ヌクレオシド類縁体は、化学的構造における戦略的に置かれた差異を有し、それは、逆転写酵素のようなウィルスの酵素を抑制するか、またはそれはひとたび類縁体が成長するＤＮＡ鎖に付加されればさらなるＤＮＡ合成を妨げる。

ジデオキシヌクレオシドは、通常リボースの第２および第３の位置に存在する水酸基が欠失した抗ウィルス化合物である。ジデオキシヌクレオシドが成長するＤＮＡ鎖に組入れられるときには、それのリボース基土の３−ＯＨ基の欠如は、他のヌクレオチドを付加することを不可能にし、かつ鎖は終結される。ジデオキシヌクレオシドは、特に、ウィルスの複製がウィルスの逆転写酵素によるウィルスのＲＮＡのＤＮＡへの転写を必要とする、レトロウィルスの感染を治療することにおいて有用である。他のヌクレオシド類縁体は、デオキシヌクレオシドおよびリボースまたは他のペントースの断片だけが塩基分子に接続されたヌクレオシド類縁体を含む。

後天性免疫不全症候群（Ａ　Ｉ　Ｄ　Ｓ）は、ヒト免疫不全ウィルス（ＨＩ　Ｖ）により引き起こされる。ＨＩＶは、ｃＤ４＋ヘルパーリンパ球、ＣＤ４＋単球およびマクロファージならびにある他のＣＤＪ＋細胞タイプのような、ＣＤ４（Ｔ４）表面抗原を持つ細胞に感染する。ＣＤ４＋リンパ球のＨＩＶ感染は、細胞溶解およびＡＩＤＳの免疫不全に寄与する細胞の死を結果として生じさせるが、ｃＤ４＋単球およびマクロファージは、ウィルスにより大きく害されないかもしれない。これらの細胞におけるウィルスの複製は、より長期に引延ばされかつリンパ球におけるよりもより少なく細胞障害性であることがわかり、かつ結果として、単球及びマクロファージがＨＩＶ感染の重要な受け皿として代わりに働く。

ＨＩＶ抗体の存在について試験で陰性であることが確かめられたＡＩＤＳ患者においてさえも、マクロファージがＨＩＶ感染の受け皿として働いているであろうことが最近発見されてきた。ジデオキシヌクレオシドが延命効果を示し、さらにＡＩＤＳに伴う致命的な感染症の発生率を減少させるとはいえ、ＡＩＤＳの効果的な治療剤は存在しない。

リッチマン（Ｒｉ　ｃ　ｈｍａ　ｎ）氏らによる（１）により示されるように、ある単球誘導されたマクロファージは、ＨＩＶ株により感染されたときには、ジブオキシチジン、アジドチミジンおよび生体外での他のジデオキシヌクレオシドによる治療に抵抗性であることがわかっている。この抵抗性は、部分的にはジデオキシヌクレオシドキナーゼの低いレベルに起因するであろう。その結果、ＡＺＴ、ｄｄＣまたはｄｄＡをリン酸化する能力は減少させられる。明らかに、ＨＩＶまたは他のウィルスにより感染されたマクロファージ、およびウィルスに感染された他の細胞に大量の有効な抗ウイルス性化合物を運ぶより有効な方法を有することが有用である。また、それらの潜在能を増加させるだけでなくそれらの効能を引き延ばす、抗ウイルス性化合物を運ぶより有効な方法を有することが有用である。

ＡＺＴのようなジデオキシヌクレオシド類縁体は、ＡＩＤＳを治療するための現在量もよく知られた効力ある薬であるが、最近のヒトの試みにおいて、重大な毒性が注目され、それは、貧血（２４％）および顆粒球（１６％）（２，３）により明らかにされた。したがって、ＡＺＴおよび他のジデオキシヌクレオシドを、これらの薬の毒性の副作用が減少されるような態様において投与するための手段を提供することが望ましい。さらに、単球／マクロファージへの、この細胞群におけるウィルスの感染に抗した薬の効能を向上させるため、ジデオキシヌクレオシドの選択的な目標攻撃を付与することが望ましい。これを行なうための１つの方法は、マクロファージによるリポソームの取込みを利用することである。

１９６５年に、アレックス・パンガム（Ａｌｅｘ　Ｂａｎｇｈａｍ）氏およびその協力者は、ホスファチジルコリンの乾燥フィルムが、水和による閉じられた２分子の小葉状液胞を自発的に形成したことを発見した（４）。結局は、これらの構造は、リポソームとして知られるようになった。

リポソームのための多数の使用が、薬物において提案されている。これらの使用のいくつかは、標的器官に治療剤を運ぶためのキャリアとしてである。薬剤は、リポソーム形成のプロセスの間にカプセル化され、かつリポソームが細胞表面膜の脂質と融合するときに生体内に遊離させられる。リポソームは、標的器官に、より高い濃度の治療剤を運ぶ手段を与える。さらに、リポソームの放出は、治療剤をリポソームの取込み部位に集中させるので、それは有毒な副作用を減少させる。

たとえば、ブラック（Ｂｌａｃｋ）氏およびワトソン（Ｗａ　ｔ　ｓ　ｏ　ｎ）氏（５）およびアルピング（Ａｌｖｉｎｇ）氏ら（６）により独立して示されるように、リポソームのアンチモン剤は、リーシュマニア症（Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａｓｉｓ）を治療することにおいて単独の薬剤より数百倍有効である。リポソームに取込まれたアンホテリシンＢは、全身性の真菌疾患（７）により免疫抑制された患者を治療することにおいて単独の薬剤より有効であることが明らかである。リポソームのカプセル化のための他の使用は、ドキソルビシン毒性（８）の制限およびアミノグリコシド毒性（９）の減少を含む。

先に述べられたように、今、マクロファージは、ＨＩＶ感染（１０，１１）の重要な受け皿であると考えられる。

また、マクロファージは、リポソームの取込み（１２，１３）の主要な部位である。したがって、ＡＩＤＳおよび他のウィルスの感染を治療することにおける抗ウイルス性ヌクレオシド類縁体の有効性を向上させるためにリポソームを利用することが望ましいであろう。

治療に対して抵抗性となっているＡＩＤＳ感染された細胞へ、リン酸化されたジデオキシヌクレオシドを運ぶためのリポソームの使用は、低いジデオキシヌクレオシドキナーゼの水準を高めるために提案されている。

ヨードデオキシウリジン（ＩＵＤＲ）、アシロビル（ＡＣ■）およびリバビリンのようなヌクレオシド類縁体を、ＡＩＤＳ以外の疾患を治療するためにリポソームに取込むこともまた企図されている。しかしながら、これらの企図は完全に満足なものではなく、なぜならばこれらの相対的に小さい水溶性のヌクレオシド類縁体は、リポソームからすぐに漏れがちであり（１４，１５）、目標攻撃の有効性が減少されることを結果として生ずるからである。他の欠点は、血清の存在下でリポソームから漏れる傾向、リポソームの組成および安定性における困難性、リポソームへの負荷の程度が低いこと、およびリポソームの細胞の取込みの後で酸性ヒドロラーゼに露出されたときのリポソームのジデオキシヌクレオシドリン酸の加水分解を含む。

アラビノフラノシルシトシン（ａｒａ−Ｃ）およびアラビノフラノシルアデニン（ａｒａ−Ａ）のようなヌクレオシド類縁体を、リン脂質により、種々のタイプのがん（１６）の治療におけるそれらの化学治療剤として、異化安定性を向上させるために結合することもまた企図されている。

結果として生ずる薬剤は、取込まれないヌクレオシド類縁体に勝って減少された毒性および増加された安定性を示した。しかしながら、結果として生ずる薬剤は、乏しい細胞の取込み（１６）および乏しい薬剤吸収（１７）を示した。

リポソームに取込まれたヌクレオシド類縁体をウィルスの感染を治療するためにより有効に使用するために、リポソームおよびヌクレオシド類縁体の間の結合の安定性を増加させることが望ましい。

これらの抗ウイルス性リポソームの有効性をさらに向上させるために、感染された細胞または感染の部位をリポソームに攻撃させることが望ましいであろう。リポソームの放出におけるより大きい特異性は、モノクローナル抗体または他のリガンドをリポソームに取込むことにより得られるだろう。そのようなリガンドは、リポソームに、リガンドを結合することができるリポソームの取込みの部位を目標攻撃させるであろう。免疫リポソームを形成するための抗体のリポソームへの取込みのための２つの異なった方策が述べられており、それは、バルミトイル抗体の合成を含むユアング（Ｈｕａｎｇ）氏および協力者のもの（１８）およびチオール化された抗体のリポソームを取込まれたホスファチジルエタノールアミン（Ｐ　Ｅ）への結合を含むルサーマン（Ｌｅ　ｓ　ｅ　ｒｍａｎ）氏らのもの（１９）である。

ここに開示された方法は、ＡＩＤＳおよび他のレトロウィルス性疾患の治療において使用されるジデオキシヌクレオシドに適用されるだけでなく、単純庖疹ウィルス（Ｈ３ｖ）、ヒトヘルペスウィルス６、シトメガロウィルス（ＣＭｖ）、Ｂ型肝炎ウィルス、エプスタイン−バールウィルス（ＥＢＶ）および水痘ウィルス（Ｖ　Ｚ　Ｖ）のような他のウィルスにより引起こされる疾患の治療における抗ウイルス性ヌクレオシドの使用にも適用される。したがって、用語「ヌクレオシド類縁体」は、ここにおいて、ウィルスの逆転写酵素の抑制を含む、種々のステップにおけるウィルスの複製を抑制できる、またはそこではそれらは鎖終結機能を示し、ウィルスのＤＮＡまたはＲＮＡに取込むことができる、化合物を示すために使用される。

発明の概要この発明は、ＨＩＶ　（ＡＩＤＳ）　、単純庖疹ウィルス（Ｈ３Ｖ）、ヒトヘルペスウィルス６、シトメガロウウィルス（ＣＭＶ）　、Ｂ型肝炎ウィルス、エプスタイン−バールウィルス（ＥＢＶ）および水痘ウィルス（Ｖ　Ｚ　Ｖ）を含む、ウィルスの感染を治療することにおける使用のための化合物および組成物を提供する。組成物は、医薬的に受容可能のキャリアに加えて、抗ウイルス性ヌクレオシド類縁体を少なくとも１つの脂質部に化学的に結合することにより調製される親油性の抗ウィルス化合物を含んでもよい。

抗ウイルス性ヌクレオシド類縁体は、−リン酸、ニリン酸または三リン酸の基を介して脂質に結合されてもよい。この発明は、さらに、抗ウィルス剤の改良された供給のために、そのような抗ウィルス剤の脂質誘導体をリポソームに取込むための方法を提供する。リポソームは、相対的に球状の二重層を含み、それは、完全にまたは部分的に、上述の抗ウィルス剤の脂質誘導体からなる。リポソームは、また、薬理学的に不活性な脂質を含んでもよい。さらに、リポソームは、ウィルス結合部位へのモノクローナル抗体（ＣＤ４のような）のような、リガンドまたは他の結合蛋白質を含んでもよい。そのようなリガンドは、抗ウィルス剤の供給部位における付加的な特異性を与える。この発明は、そのようなリガンドの抗ウイルス性リポソームへの取込みのための方法を提供する。

したがって、この発明に従って、抗ウイルス性特性を有する化合物が提供され、それは、プリンまたはピリミジンまたはそれの類縁体を含む塩基部分およびペントース残基を含む糖部分を有するヌクレオシド類縁体を含み、少なくとも１つの前記部分は、天然由来でないヌクレオシド成分であり、さらに、前記ペントース残基がアラビノフラノースでありかつ前記塩基部分がシトシンまたはアデニンであるときに前記化合物がリポソームの形態中にあるという条件下で、前記ペントース残基に結合された脂質部を含む。

１つの好ましい実施例においては、上記化合物は、ホスファチジルジデオキシヌクレオシドまたはジデオキシヌクレオシドニリン酸二グリセリドである。他のものにおいては、脂質部は、グルセロ−ルーリン酸の少なくとも１つのアシルエステル、エーテルまたはビニルエーテルの基を含んでもよい。少なくとも１つのアシルエステル、エーテルまたはビニルエーテルの基を有するホスファジン酸は、また、好ましい脂質部として働いてもよい。

他の実施例においては、ヌクレオシド類縁体は、β−Ｎ−グリコジル結合を介して、２′または３′炭素の少なくとも１つがなく、しかし５′炭素を保持するペントース残基に結合されるプリンまたはピリミジンであり、かつリン酸基は、５ ′炭素（すなわち、完全なペントース部における５′炭素であるであろうもの）に結合される。この発明の他の実施例においては、脂質部は、Ｎ−アシルスフィンゴシンである。

いくつかの好ましい実施例においては、たとえばエステル、エーテルまたはビニルエーテルのような、いかなる結合の脂質部のアシルまたはアルキル基も、２ないし２４の炭素原子を含む。１つの変形においては、アシルまたはアルキル基の少なくとも１つは飽和される。他のものにおいては、アシルまたはアルキル基の少な（とも１つは、６個までの二重結合を有する。さらに他の実施例においては、アシルまたはアルキル基は、エステルまたはアルキル結合により、ヌクレオシドの５′−水酸基に直接に付加されてもよい。

さらに他のものにおいては、脂質部位はグリセリドであり、かつグリセリドは、同一であるかまたは異なっている２つのアシル基を有する。この発明のさらに他の実施例においては、脂質部は、脂肪アルコール残基であり、それは、エステル結合を介してリン酸結合基に結合される。化合物は、有利に、１つないし３つのリン酸基および少なくとも１つの脂肪アルコールエステルを有してもよく、かつ構造が同一であるかまたは異なった、２つまたは３つ以上の脂肪アルコール残基を有してもよい。これらの脂肪アルコールは、好ましくは、化合物の末端リン酸基に結合される。

さらに、この発明は、上記化合物に加えて、さらにホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルグリセロール、ホスファチジルセリン、ホスファチジルイノシトールおよびスフィンゴミエリンからなる群から選択されたリン脂質をリポソームが備える、組成物を含む。

この発明の１つの実施例においては、抗ウィルス剤の割合は、リポソームの重量の０．０１ないし１００パーセントである。

他の実施例においては、リポソームは、さらに、脂質サブストレートに結合されたリガンドを含む。リガンドは、ウィルス抗原に対するモノクローナル抗体のような抗体であってもよい。ウィルス抗原は、ＨＩｖのｇｐ４１またはｇｐＨｏであるか、または任意の他の適当なウィルス抗ガントは、ＣＤ４受容体タンパク質またはＣＤ４タンパク質それ自体である。代替的には、リガンドは、ＣＤ４に対する抗体またはＣＤ４を結合するタンパク質もしくは他の物質である。

この発明は、また、ウィルスおよびレトロウィルスの感染を治療するための使用のための組成物を考慮し、それは、少なくとも部分的に親油性抗ウィルス剤から形成されたリポソームを含み、その薬剤は、塩基、およびヌクレオシド類縁体のペントース残基の５′水酸基に、　ＩＪリン酸ニリン酸または三リン酸の結合基を介してヌクレオシド類縁体に付加された少なくとも１つの脂質部とともにペントース残基を有するヌクレオシド類縁体、ならびにそのための医薬的に認められるキャリアを備えている。

したがって、抗ウイルス性の特性を有する化合物が提供され、それは、置換または非置換プリンまたはピリミジンを含む塩基部分およびペントース残基を含む糖部分を有する抗ウイルス性ヌクレオシド類縁体と、ペントース残基がリボースでありかつ塩基性部分がシトシンであり、またペントース残基がアラビノフラノースでありかつ塩基部分がシトシンまたはアデニンであるときには、化合物はリポソームの形態中にあるという条件下で、ペントース残基に結合された脂質部とを含む。１つの実施例においては、ヌクレオシド類縁体は、プリン、ピリミジンまたはそれの誘導体である窒素塩基であり、かつペントース残基は、リボースの２ ’、３’−ジデオキシ、２’、３’　−ジデヒドロ、アジドもしくはハロ誘導体またはリボースの非環で水酸化された断片である。したがって、ペントース残基は、２′。

３′−ジデオキシリボースであり、かつヌクレオシド類縁体は、２’、３’−ジデオキシシチジン、２’、３’　−ジデオキシチミジン、２’　、３’　−ジデオキシグアノシン、２’、３’−ジデオキシアデノシン、２’、３’　−ジデオキシイノシンまたは２，６ジアミノプリン、２’　、３’　−ジデオキシリボシドであってもよい。

他の実施例においては、ペントース残基は２’　、３’　−ジデヒドロリボースであり、かつヌクレオシドは、２′。

３′　−ジデヒドロチミジン　２ｔ、３ｔ　−ジデヒドロシチジン次素環または２’、３’　−ジデヒドログアノシンである。

さらに他の実施例においては、ペントース残基はリボースのアジド誘導体であり、かつヌクレオシドは、３′　−アジド−３′−デオキシチミジン、３′　−アジド−３′　−デオキシグアノシンまたは２，６−ジアミツプリンー３−アジド −２’、３’　ジデオキシリボシドである。

この発明のさらに他の実施例においては、ペントース残基は、リボースのハロ誘導体であり、かつヌクレオシドは、３′　−フルオロ−３′−デオキシチミジン、３′　−フルオロ−２’、３’−ジデオキシグアノシン、２’、３’　−ジデオキシ−２′−フルオロ−ａｒａ−アデノシンまたは２゜６−シアミツプリンー３′　−フルオロ−２’　、３’　−ジデオキシリボシドである。この発明は、また、たとえば２−クロロ−デオキシアデノシンのような、プリンまたはピリミジン環のハロ誘導体を含む。代替的には、ペントース残基は、リボースの非環で水酸化された断片であり、かつ、ヌクレオシドは、９−（４，−ヒドロキシ−１ ’　、２’　−ブタジェニル）アデニン、３−　（４，−ヒドロキシ−１′。

２′−ブタジェニル）シトシン、９−（２−ホスホニルメトキシエチル）アデニンまたはホスホメトキシジアミノプリンである。

この発明の他の局面に従って、ヌクレオシド類縁体は、アシクロビル、ガンシクロビル、１−　（２’　−デオキシ−２′−フルオロ−１−β−Ｄ−アラビノフラノシル）−５−ヨードシトシン（Ｆ　Ｉ　ＡＣ）または１（２′−デオキシ− ２′−フルオロ−１−β−Ｄ−アラビノフラノシル）−５−ヨードウラシル（Ｆ　Ｉ　ＡＵ）である。

前述の化合物のすべてにおいて、−リン酸、ニリン酸または三リン酸の結合基が、ペントース残基の５′部位と脂質部の間に与えられてもよい。代替的には、２つの官能基を含み、官能基の間に０ないし１ｏの炭素原子を有する脂肪族の架橋があってもよく、架橋は、脂質とペントース残基を結合する。この発明のさらに他の実施例においては、脂質部は、脂肪酸、モノアシルグリセロール、ジアシルグリセロールまたはリン脂質である。リン脂質は、糖またはポリヒドロアルコールを含む頭部の基を有してもよい。リン酸の特定的な例は、ビス（ジアシルグリセロ）−リン酸およびジホスファチジルグリセロールを含む。脂質部の他の例は、Ｄ、Ｌ−２，３−ジアシルオキシプロピル−（ジメチル）〜β−ヒドロキシエチルアンモニウム基を含む。

この発明の他の局面に従って、脂質部は、１から４までの脂肪酸部を含み、各部は、２ないし２４の炭素原子を含む。有利に、脂質部の少なくとも１つの脂肪酸部は不飽和で、しかも１から６個の二重結合を有する。

これらの化合物の特定的な例は、３〜ホスボッメトキシエチル−２，６−シアミツプリン、１，２−ジアシルグリセロホスホ−５’　−（２’　、３’−ジデオキシ）チミジン（Ｌ）ｍ　−（Ｗ）　１ｌ−Ａ−Ｑ−Ｚを有する特定の化合物が与えられ、そこではＺはヌクレオシド類縁体の塩基部分であり、Ｑはペントース残基であり、ＡはＯＸＣまたはＳであり、Ｗはリン酸であり、ｎ＝Ｑないし３であり、かつＬは脂質部であり、そこにおいてｍ＝工ないし５であり、がっｎ＝Ｑである各りが八に直接結合される場合を除いては各りはＷに直接に結合される。

また、化学式を有する化合物が含まれ、そこにおいてＺはヌクレオシド類縁体の置換もしくは非置換のプリンまたはピリミジン基であり、Ｑはペントース残基であり、Ｗはリン酸であり、ＡはｏｌｃまたはＳであり、Ｌ、は（ＣＨ２−ＣＨＯＨ−ＣＨ２）であり、かつＬは脂質部である。

この発明の１つの実施例において、前述の化学式を参照して、各りはそれぞれ独立してＲからなる群から選択され、そこにおいてＲ，Ｒ，およびＲ２はそれぞれ独立してＣ２ないしＣ２４の脂肪族基であり、がっＲ，Ｒ，およびＲ２はそれぞれ独立して０ないし６個の不飽和部位を有し、かつ構造ＣＨ３（ＣＨ２）　−（ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ２）　ｂ　−（ＣＨ２）ｃＹを有し、そこにおいてａおよびＣの和は工ないし２３であり、かつｂ制ないし６であり、かっＹはＣ（０）Ｏ−１Ｃ−０−１ｃ＝ｃ−ｏ−１Ｃ（０）Ｓ−１ｃ− ｓ−まタハＣ＝Ｃ−５−である。

前述の化合物の１つの実施例においては、ペントース残基は、プリンの９位またはピリミジンの１位に付加された、リボース、ジデオキシリボース、ジデヒドロリボースまたはアジドもしくは八ツ置換リボースを含む。

この発明は、また、抗ウイルス性ヌクレオシドの脂質誘導体を合成するための方法を提供し、それは、リボース水酸基を有する抗ウイルス性ヌクレオシドを、リン脂質により、結合試薬の存在下で反応させるステップを含み、それによってヌクレオシドはリボースの水酸基の位置でリン酸結合によりｉル脂質に結合される。１つの好ましい実施例においては、リン脂質はジアシルリン酸である。他のものにおいては、リン脂質はボスフ７チジン酸またはセラミドである。またここには、抗ウイルス性ヌクレオシドの脂質誘導体を合成する方法が提供され、それは、抗ウィルス性ヌクレオシド−リン酸を反応試薬ＨＬにより反応させるステップを含み、そこにおいてＬは、リン酸結合を介して酸をヌクレオシドに結合するためにヌクレオシドＰＯ４−Ｌをホスファチジン酸と反応させてヌクレオシドＰＯ４−Ｌを形成するための遊離基を表わす。方法の１つの変形において、ヌクレオシド−リン酸は、ＡＺＴ５’　−−リン酸である。

この発明によって提供されたさらに他の方法は、ヌクレオシド類縁体のグリセリド誘導体を合成する方法であり、それは、塩基性触媒の存在下でモノグリセリドまたはジグリセリドと抗ウィルス性ヌクレオシド−リン酸を結合試薬を用いて結合するステップを含む。１つの実施例においては、グリセリドは１−０−ステアロイルグリセロールであり、かつヌクレオシドはＡＺＴ−リン酸である。

また、この発明の一部は、哺乳動物におけるウィルスおよびレトロウィルスの感染を治療することにおける使用のためのリポソームの懸濁物を調製するための方法であり、それは、ヌクレオシドのペントース残基の５′位において一リン酸、ニリン酸または三リン酸の結合基を介してヌクレオシド類縁体に付加された少なくとも１つの脂質部を含む親油性の抗ウィルス剤を与えるステップと、混合物を形成するために親油性の抗ウィルス剤および薬理学的に受容可能の水性溶剤を配合するステップと、親油性の抗ウィルス剤からリポソームを形成するステップとを含む。リボソ−ムは、たとえば、超音波処理、押出し成形またはミクロ流動化により形成されてもよい。１つの好ましい実施例においては、配合するステップは、さらに、薬理学的に不活性の親油性の脂質を配合に含むステップを含む。この不活性の脂質は、たとえば、ホスファチジルエタノールアミン、スフィンゴリピド、ステロールまたはグリセロホスファチドであり得る。方法は、また、免疫リポソームを生成するためにチオ−抗体によりリポソームを処理するステップまたは部分的にリガンドからなる親油性の脂質を配合に含むステップを含んでもよい。したがって、リポソームは、脂質サブストレートに結合されたリガンドを含んでもよい。

加えて、この発明は、治療の投与量の抗ウィルス剤を哺乳動物に供給するために十分な量のここに述べられた抗ウイルス性ヌクレオシド類縁体を投与することにより、ヒトのような、哺乳動物におけるレトロウィルスのおよびウィルスの感染を治療するための方法を含む。好ましい実施例においてその方法は、レトロウィルスが従来の形態の抗ウィルス剤により治療に抵抗性となっている、哺乳動物におけるレトロウィルスのおよびウィルスの感染を治療するために使用される。この発明は、また、ＡＺＴに対して発達した抵抗性またはＡＺＴに対して減少された感度を有するＨＩＶの株を有する患者の治療のための方法を含み、それは、そのような患者に、この発明の化合物を有効な、レトロウィルスを抑制する投与量において投与するステップを含む。また、この発明に含まれるのは、哺乳動物におけるウィルスの感染を治療するための方法であり、それは、有効な量のここに述べられた化合物を哺乳動物に投与するステップを含む。感染は、単純庖疹感染であってもよく、かつ化合物はホスファチジルアシクロビルであってもよい。

代替的には、ウィルスは、ＨＩｖレトロウィルスであってもよく、かつ化合物は５′−バルミトイルＡＺＴであってもよい。この方法は、レトロウィルスはヌクレオシド類縁体に対する抵抗性を発達させているＨＩＶ株に対しての使用を含む。

またここに開示されるのは、哺乳動物におけるヌクレオシド類縁体の抗ウイルス性効果をより持続させるための方法であって、それは、ここに開示されたヌクレオシド−脂質誘導体の形態でヌクレオシド類縁体を哺乳動物に投与するステップを含む。また開示されるのは、ここに開示された脂質誘導体化合物の形態において類縁体を投与することを介して、ヌクレオシド類縁体に対するレトロウィルスの抵抗性を避けるかまたは克服するための方法である。

この発明は、ヒトのウィルスの感染の治療のための薬剤の調製におけるこの発明の化合物および組成物の使用を含む。この発明の組成物は、この発明の化合物および医薬的に受容可能のキャリアを含んでもよい。この発明の組成物は、この発明の化合物および少なくとも１つの他の抗ウイルス性化合物を含んでもよい。

抗レトロウィルスおよび抗ウィルスの薬剤のリポソームでの配送は、リポソームを容易に取込むマクロファージおよび単球細胞へのより高い量の投与を結果として生ずる。

この発明の独特の利点は、抗ウイルス性ヌクレオシドの脂質誘導体は、水性の区画よりもリポソームのリン脂質層に主として組込まれることである。このことにより、ヌクレオシドの水溶性リン酸エステルが使用されるときの場合よりも多くの量の抗ウイルス性類縁体がリポソームに取込まれるようになる。リポソームへの抗ウイルス誘導体の完全な取込みが得られ、したがって、薬剤対脂質の割合および組成物の有効性の双方を改良するであろう。さらに、貯留の間にリポソームからの抗ウイルス性脂質類縁体の漏れはないであろう。最終的には、これらの化合物を使用するリポソームの治療は、大量の抗ウイルス性化合物を、感染されたマクロファージおよび単球細胞に供給するようになる。

部位特異的リガンドを含むリポソームの化合物による治療は、さらにより大量の抗ウイルス性化合物をより特異的に供給するようになる。

この発明の他の新しい利点は、下に開示された各分類の抗ウイルス性ヌクレオシドの脂質誘導体が、細胞の代謝によって抗ウイルス性のリン酸化されたかまたはリン酸化されないヌクレオシドを直接上昇させると信じられることである。

この発明のさらなる利点は、新しい脂質誘導体は細胞に組込まれ、薬剤が除去された後で４８時間までまたは４８時間を超えて、より引延ばされた時間、細胞を保護することである。

この発明のこれらおよびその他の利点ならびに特徴は、以下の説明および添付の請求の範囲からより十分に明らかになるであろう。

図面の簡単な説明第１図ないし第５図は、生体外で投与されたこの発明の化合物量の関数としてＨＩＶ感染された細胞によるｐ２４生成をプロットしたグラフである。

発明の詳細な説明この発明は、リポソームの脂質二重層に組込むことができるヌクレオシド類縁体の脂質誘導体を含む。これらの誘導体は、構成細胞の代謝過程によりヌクレオシド類縁体に変換され、かつ生体内および生体外で抗ウイルス性効果を有する。

ヌクレオシド類縁体の適当な脂質誘導体は、ホスファチジルヌクレオシド、ヌクレオシドニリン酸、ジアシルグリセロール、ヌクレオシドアシルリン酸およびセラミドホスホヌクレオシドを含む。１から５個のアシル基を含むことができるアシルリン酸を除いて、これらの化合物の脂質誘導体は、リポソームの脂質二重層にヌクレオシドを留めるために１つまたは２つの疎水性アシル基を与える。この発明は、また、付加的なアシル基およびさらにヌクレオシド類縁体をより強くひき留めることができる脂質誘導体を含む。ひき留める力の増加は、より大きい極性のヌクレオシド類縁体をリポソームの処方において利用することを可能にする。したがって、リポソームの治療における使用のためのこのタイプの付加的なヌクレオシド構造が開示される。

また、そこにおいて脂質基が、リン酸結合を介してよりも直接にヌクレオシドに付加される、ヌクレオシド類縁体の脂質誘導体が開示される。

学名命名法この発明の脂質誘導体は、厄介な用語によって初めて正確に規定することができる、複合構造からなる。明快さのために、脂質およびヌクレオシド成分ならびにそれらの結合の記述は、当該技術分野において知られている、通常使用される慣用名によるであろう。たとえば、よく知られた薬剤、３′−アジド−３′−デオキシチミジンは、しばしばＡＺＴと呼ばれるであろう。同様に、１，２ジアシルグリセロール−３−リン酸部を含むＡＺＴの誘導体は、しばしばホスファチジルＡＺＴまたはｐＡＺＴと呼ばれるであろう。ジデオキシチミジンまたはジデオキシシチジンの同様の誘導体は、同様に、ホスファチジルｄｄＴまたはｐｄｄＴならびにホスファチジルｄｄｅおよびｐａａｃと呼ばれるであろう。ハロゲン化されたヌクレオシドの誘導体は、たとえば、ホスファチジル−３’　ＢｒｄｄＴと呼ばれるであろう。

この発明のヌクレオシド類縁体は、ウィルスの感染のために治療されるべき種において天然由来でない任意のヌクレオシドであり得る。それは、天然由来のリボース基の類縁体に付加された天然由来のプリンまたはピリミジン塩基を含んでもよい。同様に、それは、天然由来のヌクレオシドに存在するリボースまたはデオキシリボース基に付加されたプリンまたはピリミジン塩基の類縁体を含んでもよい。

代替的には、ヌクレオシド類縁体の塩基およびリボ・−ス部の双方は、天然に見つけられるものの類縁体であってもよい。ヌクレオシド類縁体は、また、リボースでない糖部に付加された通常の塩基または塩基類縁体のどちらかを含んでもよい。

プリンまたはピリミジン塩基およびリボース基の双方の類縁体は、そこに新しい置換基が付加されることにより、天然由来の置換基がそこから省かれることにより、または通常存在する原子が他のものにより置換えられることにより、対応する天然由来の部分と異なる。置換により形成された類縁体の例は、２，６−シアミツプリンおよび３′−アジド−３′デオキシリボース、欠失により６−オキシプリンまたはジデヒドロリボース、置換えにより８−アザグアニンである。

ヌクレオシド類縁体は、また、たとえばピリミジンの１位より３位において窒素を介したような、天然由来でない結合においてペントース部に付加されたプリンまたはピリミジン塩基を含んでもよい。

一般的には、この発明のリポソームを調製することにおいて使用されるヌクレオシド類縁体は、リボースまたはリボース残基および／または誘導体のような、ペントースに付加された、プリンまたはピリミジン塩基、たとえば、アデニン、グアニン、シトシンまたはチミンまたはそれの類縁体を有するであろう。付加は、プリンの９位における窒素を介して、かつピリミジンの１位における窒素を介してである。これらの窒素は、β−Ｎ−グリコジル結合により、ペントース残基の炭素１に結合される。

ペントース残基は、完全なペントースまたはジオキシ−またはジデオキシペントースのような類縁体であってもよい。加えて、ペントース残基は、ヒドロキシル化された２−プロポキシメチル残基またはヒドロキシル化されたエトキシメチル残基のような、ペントースの断片であり得る。

これらの構造を有する特定のヌクレオシド残基は、アシクロビルおよびガンシクロビルを含む。また、ペントースはたとえば、デオキシリボース３′位に（ＢＣＨ−１８９）、炭素原子の代わりに酸素または硫黄の置換を有してもよい。

リン酸基は、通常この発明の化合物におけるペントースの５′炭素に結合されるが、そこにおいてリン酸基がペントースの３′水酸基に付加される化合物は、もしそれらが抗ウイルス性活性を所有すればこの発明の範囲内にある。

脂質がペントース基に直接に結合されるところでは、それらの結合は、また、３ ′または好ましくは５′ペントース炭素を介して行うことができる。

完全なペントースではないペントース残基を有する化合物においては、リン酸基は、もしペントースが完全であれば５′炭素であるであろう炭素に結合されることを認識することが重要である。これらのペントース断片においては、２′および／または３′炭素は消失していてもよいが、それにもかかわらず、それらはこの発明の手段内のヌクレオシド誘導体であると考慮され、かつそこにリン酸基が結合される炭素原子は、使用の継続性の目的のために、５′炭素としてここに一般的に参照されるであろう。

抗ウイルス性活性を有するヌクレオシド類縁体の任意の脂質誘導体は、この発明の範囲内である。抗ウイルス性活性は、脂質−ヌクレオシド複合体の任意の成分に、すなわち、ヌクレオシド塩基類縁体に、リボース類縁体に、またはリポソームのための他のペントースの置換に、あってもよい。それは、また、そこにおいて、たとえば、弱い抗ウイルス性の類縁体またはわずかなもしくは潜在的なウィルス活性を所有するものがそれのヌクレオシドの脂質誘導体への取込みに従ってより効力が発揮するようになる、全体としての複合体にあってもよい。

そのような活性を有すると知られているヌクレオシドは、３′−アジド−２’　、３’　−ジデオキシピリミジンヌクレオシド、たとえば、ＡＺＴ、ＡＺＴ−Ｐ −ＡＺＴ、ＡＺＴ−Ｐ−ｄｄＡ、ＡＺＴ−Ｐ−ｄｄ　Ｉ、Ａｚ　ｄｄＣＩＵＳ　ＡｚｄｄＭｅｃ、ＡｚｄｄＭｅＣＮ４−○Ｈ，Ａ　ｚ　ｄ　ｄ　ＭｅＣＮ４Ｍｅ、ＡＺＴ−Ｐ−ＣｙＥ−ｄｄＡ、ＡｚｄｄＥｔＵ　（Ｃ８−８５）　、ＡｚｄｄＵ　（Ｃ３−８７）　、ＡｚｄｄＣ（Ｃ８−９１）　、ＡｚｄｄＦＣ，ＡｚｄｄＢｒＵおよびＡｚｄｄＩＵをを含む分類のメンバーであり、分類は、３′−ハロピリミジンジデオキシヌクレオシド、たとえば３−ＦｄｄＣＩＵ１３−ＦｄｄＵ、３−ＦｄｄＴ、３−ＦｄｄＢ　ｒＵおよび３−ＦｄｄＥｔＵを含み、分類は、２′。

３′−ジデヒドロ−２’、３’　−ジデオキシヌクレオシド（Ｄ４ヌクレオシド）、たとえば、Ｄ４Ｔ、Ｄ４Ｃ，Ｄ４ＭｅＣおよびＤ４Ａを含み、分類は、２’ 、３’　−非置換ジデオキシピリミジンヌクレオシド、たとえば、５−Ｆ−ｄｄＣ，ｄｄＣおよびｄｄＴを含み、分類は、２’、３’−非置換ジデオキシプリンヌクレオシド、たとえば、ｄｄＡＳｄｄＤＡＰＲ（ジアミノプリン）　、ｄｄＧ、ｄｄｌおよびｄｄＭｅＡ（Ｎ６メチル）を含み、かつ分類は、糖置換されたジデオキシプリンヌクレオシド、たとえば、３−Ｎ５ｄｄＤＡＰＲ，３−Ｎ５ｄｄＧ、３−ＦｄｄＤＡＰＲ。

３−ＦｄｄＧ、３−ＦｄｄａｒａＡおよび３−ＦｄｄＡを含み、そこにおいてＭｅはメチルであり、Ｅｔはエチルであり、かつＣｙＥ　ｔはシアノエチルである。

下に述べられるように、他の適当なヌクレオチド類縁体は、アシクロビルまたはガンシクロビル（ＤＨＰＧ）、または他の類縁体のような抗ウィルス剤であってもよい。好ましいジデオキシ誘導体は、３′　−アジド−３′　−ジデオキシチミジン（アジドチミジンまたはＡＺＴ）　、２’　、３′−ジデオキシチミジン（ｄｄＴ）　、２’　、３’　−ジデオキシシチジン（ｄｄｅ）　、２’　、３ ’　−ジデオキシアデノシン（ｄｄＡ）および２’、３’　−ジデオキシグアノシン（ｄｄＧ）を含む、ＡＩＤＳの治療において使用されるものである。ＡＺＴ、ｄｄＴおよびｄｄＣは、現在量も好ましい類縁体である。カルボビル、炭素環の２’　、３’　−ジデヒドログアノシンと同様にジデヒドロピリミジンもまた好ましい。デオキシグアノシン（Ａ　Ｚ　Ｇ）およびピリミジンの３′−アジド誘導体、デオキシウリジンならびにデオキシチミジンおよびデオキシグアノシンの３′−フルオロ誘導体は同様に好ましい。２’、６’　−ジアミノプリンの中では、２’、３’　−デオシキリボシドおよびそれの３′−フルオロおよび３′ −アジド誘導体が好ましい。また、２−クロロ−デオキシアデノシンが好ましい。

非環式糖誘導体の中では、９−　（４，−ヒドロキシ−１１２Ｚ　ブタジェニル）アデニン（アデナリン）およびそれのシトシン等硬物が好ましい。プリンまたはジアミノプリン塩基を有する好ましい非環式誘導体は、９−　（２−ホスホニルメトキシエチル）アデニンおよびホスホノメトキシエチルデオキシジアミノプリン（ＰＭＥＤＡＤＰ）である。

２′−フルオロ−ａｒａ−ｄｄＡのような、これらのヌクレオシドの立体異性体は、有利であるかもしれず、それは、それらの抗ウイルス性活性を引延ばす、グリコシド結合の酸−触媒された加水分解へのそれらの抵抗性のためである。そのような場合においては、それらは好ましい。

ヘルペス、シトメガロウィルスおよびＢ型肝炎の感染を治療するために、アシクロビル、ガンシクロビル、１−（２′　−デオキシ−２′　−フルオロ−１−β −Ｄ−アラビノフラノシル）−５−ヨードシトシン（Ｆ　Ｉ　ＡＣ）または１（２′−デオキシ−２′−フルオロ−１−β−Ｄ−アラビノフラノシル）−５−ヨードウラシル（ＦＩＡＵ）の脂質誘導体を利用してもよい。

脂質は、好ましくは、リン酸結合を介してヌクレオシド類縁体に付加される。ヌクレオシド類縁体と脂質の間のリン酸結合を含む脂質誘導体は、リン脂質、リン酸化されたヌクレオシド類縁体、または双方から調製されてもよい。

適当なリン脂質は、ホスホグリセリド、スフィンゴリピドまたはアシルリン酸を含む。

そこにおいて脂質がモノ−、ジーまたはトリホスフェート基のいずれかを介して結合される、ヌクレオシド類縁体の脂質誘導体は、リン酸化されたヌクレオシド類縁体から調製されてもよい。リン酸化されたヌクレオシド類縁体は知られている。ジデオキシヌクレオシド類縁体は、トーチエン（Ｔｏｏｒｈｅｎ）氏およびトーパル（Ｔｏｐａｌ）氏の三価リンのオキシクロリド法（２０）のような従来の方法に従ってリン酸化される。好ましい修飾された類縁体は、５′−一リン酸である。ＡＺＴ、ｄｄｅおよび他のジデオキシヌクレオシドは５′−水酸基のみを有するので、リン酸化の間に５′−一リン酸のみが形成され、しかしながら、そこにおいて３′水酸基が存在する他の類縁体においては、３′−一リン酸が形成できる。抗ウイルス性ヌクレオシドのニリン酸および三リン酸誘導体もまた使用されてもよい。

脂質部の脂肪族基は、好ましくは、２ないし２４の炭素原子の鎖の長さを有し、かつ０ないし６の二重結合を有する。脂肪族基は、アシル、エーテルまたはビニルエーテル結合により、グリセロール部に付加されてもよい。

合成方法この発明の脂質ヌクレオチド化合物は、図のフロー図において示されかつ例工ないし７において特定的に説明されるように、下に述べられるすべての脂質およびすべての抗ウイルス性ヌクレオシドに適用できる一般的な方法に従って合成することができる。

脂肪酸、アルコール、グリセリドおよびリン脂質を含む脂質は、商業的供給者（アバンテイ・ポーラ・リピツズ・インコーホレーテッド（Ａｖａｎｔｉ　Ｐｏ１ａｒ　Ｌｉｐｉｄｓ　Ｉｎｃ、）、ペルハム、アラバマ（Ｐｅｌｈａｍ、Ａｔ　ａｂａｍａ３５１２４））から購入されてもよ（、または公知の方法に従って合成されてもよい。抗ウイルス性ヌクレオシド類縁体は、アルドリッチ、ミルウォーキー、ライスコンシン（Ａｌｄｒ　ｉ　ｃｈ、Ｍｉ　１ｗａｕｋｅｅ。

Ｗｉｓｃｏｎｓｔｎ）からまたはシグマ、セント−ルイス、ミズーリ　（Ｓｉｇｍａ、Ｓｔ、Ｌｏｕｉｓ、Ｍｉｓｓｏｕｒｉ、）から入手可能である。

痕跡量の水のすべては、結合反応が進行するために、反応物から除去されることが重要である。し、たがって、脂質は、第１に、真空下での溶媒蒸発または真空オーブン中においてＰ２Ｏ５下のどちらかで冷凍乾燥される。また、反応は、たとえばアルゴンのような不活性ガスの下で実施される。

この発明の化合物は、リン脂質をヌクレオシド類縁体に結合するかまたはリン脂質をヌクレオシド類縁体−リン酸またはニリン酸に結合する、合成方法に従って形成することができ、そこにおいてリン酸基は、ヌクレオシドのリボース基土で、３′または好ましくは５′の位置に置かれる。

第１級長鎖脂肪酸もしくはアルコール、モノグリセリドまたはジグリセリド、セラミドならびに下に述べられる他の脂質種を含むヌクレオシドに結合するために適当な脂質は、たとえばブラウン氏の方法（３２）に従ってフェニルホスホロジクロル化を使用して、適当な試薬による処理により、例６におけるような三価リンのオキシクロリドによる処理により、または他の公知のホスホリル化法により、リン酸化されてもよい。

第１のタイプの合成においては、たとえば、ホスファチジン酸のようなリン脂質は、選択されたヌクレオシド類縁体に３′または５′　ヒドロキシルのどちらかにおいて結合され、それは、室温において、塩基性触媒、たとえば、無水ピリジンがあるところで、たとえば、２．　４．　６−ドリイソプロビルベンゼンスルホニルクロリドのような、結合試薬によって行なわれる。また、ジシクロへキシルカルボジイミドのような他の結合試薬を使用することができる。

脂質誘導体は、また、ホスファチジン酸を抗ウィルス性ヌクレオシド−リン酸に、ピロリン酸結合を介して結合することにより合成されてもよい。この方法においては、ヌクレオシド−リン酸またはニリン酸は、アグラノフ（Ａｇｒａｎｏｆｆ）氏およびスオミ（Ｓｕｏｍｉ）氏の方法（２１）に従って、かつ、ＡＺＴの誘導体を調製するために、例４に例示されたように、かつ、ｄｄＡの誘導体のために、例６のように、終結リン酸基に付加された、遊離基、たとえばモルホリンを有する誘導体に変換される。ホスファチジン酸とヌクレオシドリン酸モルホリダートの結合は、室温における無水ピリジンのような塩基性触媒を用いた２つの反応試薬の乾燥混合処理において起こる。

反応は、薄層クロマトグラフィ　（Ｔ　Ｌ　Ｃ）と適当な溶剤を使用して追跡される。ＴＬＣにより測定された結果、反応が完全であるときには、生成物は、有機溶剤により抽出され、かつ脂質分離のために適当な保持体、たとえば、珪酸の上のクロマトグラフィーにより精製される。

反応性アミノ基を有するアデニンまたはシチジンを含む生成物の合成は、無水酢酸による処理により、結合反応の前にこれらの基を酢酸で保護することにより、促進されてもよく、最終精製物のクロトグラフィーの後で、アミノ基は、水酸化アンモニウムを使用して保護を解かれる（例３）。

脂質誘導体最も有効であろう化合物は、材料を安定した方法でリポソームの二重層または他の高分子の配列に組込むことができるために十分な脂質部分を有するであろう。

この発明の範囲内のヌクレオシド類縁体のいくつかの好ましい脂質誘導体は、４つの一般的な分類に入る。

これらの抗ウイルス脂質化合物の構造は、以下に示され、そこではＮは、ＡＺＴ、ａａＣ，ａａＡ、ｄｄＩまたはアシクロビルもしくはガンシクロビルのような他の抗ウイルス性ヌクレオシドのような「鎖終結」ジデオキシヌクレオシドであり、Ａはカルコゲン（ＯＳＣまたはＳ）であり、かつ、同一であるかまたは異なったＲ７およびＲ２は、Ｃ７ないしＣ２４の脂肪基であり、０ないし６個の不飽和部位を有し、かつ、好ましくは、構造ＣＨ３（ＣＨ２）　ａ−（ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ２）ｂ　（ＣＨ２）。−Ｙを有し、そこでは、ａおよびＣの和は１ないし２３であり、かつｂは０ないし６であり、かつそこにおいてＹは、Ｃ（０）Ｏ−、Ｃ−０−、Ｃ＝Ｃ−０−、Ｃ（０）Ｓ−１Ｃ３−１Ｃ＝Ｃ−Ｓ−であり、アシルエステル、エーテルまたはビニルエーテル結合を、それぞれに、脂肪族基とグリセロール部の間に形成する。したがって、これらのアシルエステル結合における脂肪族基は、ラウリン、ミリスチン、パルミチン、ステアリン、アラキシンおよびリグノセリンのような天然由来の飽和脂肪酸と、天然由来の不飽和脂肪酸、パルミトレイン酸、オレイン酸、リノール酸、リルイン酸およびアラキドン酸を含む。好ましい実施例は、モノエステルまたはジエステルまたは１−エーテル、２−アシルエステルホスファチジル誘導体を含む。他の実施例においては、脂肪族基は、同一の炭素数の分枝鎖であり得、かつ−級または二級アルカノールまたはアルコシキ基、シクロプロパン基ならびに内部エーテル結合を含む。

この化合物の分類は、たとえば、例１における１、２シミリストイルグリセルホスホ−５’　−（３’　−アジド−３′−デオキシ）チミジンの調製のために述べられたように、ピリジン中でジアシルホスファチジン酸と抗ウイルス性ヌクレオシド類縁体の反応から調製されてもよい。

リポソームの取込みの上で、化合物は、細胞に存在するホスホリパーゼによる代謝を受けると考えられる。たとえば、ヌクレオシドのジアシルホスファチジル誘導体の特定的な場合には、ホスホリパーゼＣは、下に示されるように、ジアシルグリセロールとヌクレオシド−リン酸を与えるように作用する。

代替的には、同一のホスファチジルヌクレオシドは、ホスホリパーゼＡにより加水分解され、かつリゾホスホリパーゼが、下に示されるシーケンスに従ってグリセロールおよびヌクレオシド−リン酸を与えるために、ホスホジェステラーゼにより追従されるであろう。　Ωスエ９．ｔａ）この分類の化合物の化学構造は、下に示され、そこではＮ、ＡおよびＲ１およびＲ２は、上に述べられたとおりである。

ヌクレオシドニリン酸ジグリセリドは知られている。抗ウイルス性ヌクレオシドニリン酸ジグリセリドは、プロツテイ（ｐｒｏｔｔｅｙ）氏およびホーソン（Ｈａｗｔｈ。

ｒｎｅ）氏により修飾されたように（２２）、アグラノフ氏およびスオミ氏の方法（２１）により、ホスファチジン酸および抗ウィルス性ヌクレオシドモノホスホモルホリダートから調製されてもよい。このタイプの合成は、例４において、ＡＺＴ５’　−二リン酸ジパルミトイルグリセロールのために与えられている。

細胞へのリポソームの放出において、この分類の化合物は、いくつものタイプの反応に加わり、なぜならば、下に示されるように、それは、ＣＤＰ−ジグリセリドの類縁体、ホスファチジルグリセロール、カルシオリピンおよびホスファチジルイノシトールの生合成における重要な天然由来の中間体であるからである。

これらの反応のすべては、ヌクレオシド−リン酸および新しいリン脂質を形成する。ブーシュイス（Ｐｏｏｒｔｈｕｉｓ）氏およびホステトラ−（Ｈｏｓｔｅｔｌｅｒ）氏（２３）が先に、種々のヌクレオシドがこれらの反応においてＣＤＰ −ジグリセリドと置換でき、それは、ＵＤＰ−ジグリセリド、ＡＤＰ−ジグリセリドおよびＧＤＰ−ジグリセリド（２３）を含むことを示したことに注目することが重要である。重要には、ター・シュゲット（Ｔｅｒ　Ｓｃｈｅｇｇｅｔｔ）氏ら（２４）は、デオキシＣＤＰ−ジグリセリドを合成し、かつ、それは、また、ホスファチジルグリセロールおよびカルシオリピンのミトコンドリアの合成においてＣＤＰ−ジグリセリドを置換することができ（以下余白）ることかわかり、それによって標的細胞における抗ウイルス性ヌクレオシドリン酸を発生するためにこれらの新しい化合物を使用する可能性を示唆した。

ＣＤＰ−ジグリセリドヒドロラーゼは、下に示されるように、他の重要な代謝変換を触媒し、それは、ヌクレオシドニリン酸およびホスファチジン酸を増加させる。

この経路は、第１に、リッテンハウス（Ｒｉｔｔｅｎｈｏｕｓｅ）氏ら（２５）により、哺乳動物の組織において述べられた。ピロホスファターゼであるこの酵素は、ジデオキシヌクレオシドニリン酸ジグリセリドをヌクレオシド−リン酸とホスファチジン酸に開裂させることが予期され、そこにおいてヌクレオシド−リン酸が標的細胞において形成されることができる第２の態様をもたらす。

３、抗ウイルス性ヌクレオシドアシルリン酸リポソートによって脂質化合物を細胞に導入するための他の方法は、ヌクレオシド−リン酸、ニリン酸または三リン酸のアシルエステルを合成することである。この合成は、ジヘキサアデシルホスホー５′−ジデオキシシチジンの合成のために、例５における方法に従って実施されてもよい。

ジアシルホスホヌクレオシドの構造は、下に示され、そこにおいて、Ｎ、Ａ、Ｒ，およびＲ２は、先に規定されたとおりである。原則として、リン酸の１つまたは２つ以上の酸部はエステル化されてもよく、かつリン酸と脂肪アルコール置換の多くの他の組み合わせが可能である。たとえば、ヌクレオシド−リン酸は、１つまたは２つの脂肪族エステルを有することができ、ヌクレオシドニリン酸は１つないし３つの脂肪族エステルを有することができ、ヌクレオシドニリン酸は１つないし４つの脂肪族エステルを有することができる。ヌクレオシドは、「鎖終結」ジデオキシヌクレオシドまたは他の抗ウイルス性ヌクレオシドであり得る。

細胞は種々のエステラーゼを含むので、この分類の化合物は、リン酸化されたヌクレオシドに加水分解され、ヒトの単球およびマクロファージにおけるジデオキシヌクレオシドキナーゼの欠失を迂回し、かつそれによって抗ウイルス性活性を回復することが予期される。

４、　セラミド抗ウイルス性ホスホヌクレオシド抗ウイルス性ヌクレオシドリン酸は、また、下に示された一般的な構造を有するセラミド抗ウイルス性ヌクレオシドリン酸のリポソームによる配送の後、細胞において発生することができ、そこではＣＥＲは、構造を有するＮ−アシルスフィンゴシンであり、そこにおいてＲは先に規定されたとおり、または等価なスフィンゴシンの脂質−置換誘導体であり、かつＮは「鎖終結」抗レトロウイルスヌクレオシドまたは先に規定されたような抗ウイルス性ヌクレオシドである。この分類の組成物は、リポソームの処方ならびにＡＩＤＳおよび他のウィルス性疾患の治療において有用であり、なぜならば、それは、細胞におけるスフィンゴミエリナーゼまたはホスホジェステラーゼにより作用させることができ、ヌクレオシド−リン酸量を上昇させるからである。上に示された化合物に加えて、セラミドニリン酸ジデオキシヌクレオシドがまた合成されることができ、それは、細胞のピロホスファターゼにより分解されてヌクレオシド−リン酸およびセラミドリン酸を与えることができる。

セラミド抗ウイルス性ヌクレオシドリン酸は、開始原料の適当な変更により、抗ウイルス性ヌクレオシドニリン酸ジグリセリドを調製するための方法と同様の方法において調製されてもよい。

５、　抗ウイルス性ヌクレオシドの他の脂質誘導体リポソーム内のヌクレオシド類縁体の脂質誘導体のなおさらに大きな安定性を達成するための１つの方策は、脂質−ヌクレオシド構造と二重層の間の脂質−脂質相互作用を増加させることによる。したがって、好ましい実施例においては、４つまでの親油基を有するヌクレオシド類縁体の脂質誘導体が合成されてもよい。これらの１つの分類は、ジホスファチジルグリセロール誘導体を含み、それは、一般的な構造を有する。この分類において、ヌクレオシドは、抗ウイルス性ヌクレオシドのデオキシリボース、リボースまたはジ合により、１つまたは両方のリン酸へ付加される。アシクロビルまたはガンシクロビルのような、非環式ヌクレオシドの場合には、結合は、リボース、デオキシリボースまたはジデオキシリボースの５′− 位のそれと同等のＯＨ基に対してなされるであろう。各分子に１つまたは２つのヌクレオシドを付加してもよい。例４におけるように、ヌクレオシドリン酸は、また、リン酸結合により付加されてもよい。

脂質成分がふやされた他の分類の誘導体は、ビス（ジアシルグリセロ）ホスホヌクレオチドを含み、それは、−殻構造を有する。Ｒ１−４は、先に規定されたようにそれぞれ独立したＲである２つ、３つまたは４つの脂肪族基であってもよく、前記基は、アシルエステル、エーテルまたはビニルエーテル結合されている。この化合物は、例３の方法によりつくられてもよい。

以下の構造ｄｅを有するこの化合物のニリン酸変形物は、例４の方法に従って、ヌクレオシドモノホスホモルホリダートをビス（ジアシルグリセロ）リン酸のホスホエステル残基に結合することによりつくられてもよい。この化合物は、細胞において、ＣＤＰ−ジグリセリドヒドロラーゼ（ピロホスファターゼ）により、細胞中でＡＺＴ −Ｐに代謝されるであろう。

これらの２タイプの化合物は、優れた代謝的および物理的性質を与えるだろう。

他の適当なヌクレオシドの脂質誘導体は、新しい脂質を使用して合成されてもよい。たとえば、抗ウイルス性および抗レトロウイルス性ヌクレオシドのリン脂質誘導体を合成することが望ましく、それは、脂質組成物を取込む標的細胞による代謝の代替経路上で効力のある抗ウィルス剤に上昇を与えるであろう。以下のタイプの化合物からつくられた誘導体に対して、より従来のリン脂質誘導体のそれと別の細胞の代謝が予期されてもよく、なぜならば、これらは、窒素を含む基により通常の脂質基から除去されるリン酸基を有するからである。これらの脂質の構造は、四級アンモニウム誘導体を特徴付ける。

化合物が示される。

Ｄ、Ｌ、−２，３−ジステアロイルオキシプロピル（ジメチル）−β−ヒドロキシエチルアンモニウム酢酸は、第１に、ロゼンタル（Ｒｏｓｅｎｔｈａｌ）氏およびゲイヤー（Ｇｅｙｅｒ）氏により、１９６０年に合成され（３５）、かつカルビオケム、ラジョラ、カリフォルニア９２０３９（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ、Ｌａ　Ｊｏｌｌａ、Ｃａ１ｉｆｏｒｎｉａ　９２０３９）から入手可能である。それは、例１または７に述べられるように、トリイソプロピルベンゼンスルホニルクロリド（Ｔ　Ｉ　Ｅ　Ｓ　Ｃ）を使用して、ＡＺＴ−リン酸または任意の他の抗ウイルス性ヌクレオシドリン酸を結合するために働くことができる。

代替的には、ＡＺＴは、ＴＩＢＳＣを使用して、ｐｏｃ１３により調製されたホスホリル化されたアンモニウム脂質に結合されてもよい。好ましい構造が下に示されるものは、ホスホリル化された化合物Ｉ、　Ｄ、　Ｌ、　−２，３−ジアシルオキシプロピル（ジメチル）−β−ヒドロキシエチルアンモニウム酢酸のＡＺＴ誘導体であり、そこでは、Ｒ１およびＲ２は、先に規定されたような脂肪族基である。

さらに、ロゼンタル氏およびゲイヤー氏の化合物■は、彼らが彼らの論文において述べるようにホスホリル化されてもよい（３５）。■のリン酸エステルを調製するために、トーチエン氏およびトーパル氏の三価のリンを含むオキシクロリドの方法（２０）を使用してもよい。次いで、アグラノフ氏およびスオミ氏により報告されるように（２１）、またブロッテイ氏およびホーソン氏により１９６７年ｌこ修飾されたように（２２）、ヌクレオシドリン酸のモルホリダート誘導体を使用して、このホスホリル化された種に、任意の抗ウイルス性または抗レトロウイルス性ヌクレオシドを結合してもよい。結果として生ずる■のヌクレオシドニリン酸誘導体は、感染された細胞にリポソームで供給された抗ウィルス剤としての標準的な特性を有するであろう。

好マシイヌクレオシドは、ＡＺＴ、ｔｉｄＡＳｄｄＣＳｄｄ１１アシクロビールおよびガンシクロビールを含むが、それらに制限されない。化合物■のＡＺＴニリン酸誘酸誘導体心下される。

上の先の区分工ないし５において述べられた任意の脂質誘導体において、ヌクレオシドは、任意の抗ウイルス性ヌクレオシドであってよ＜、ＲＩ　−２（ビス（ジアジノレグ１〕七口）種のためのＲ３−４と同様に）は、２なｌ、ＸＬ２４の炭素原子を有する、飽和または不飽和脂肪酸であってもよい。ポリ不飽和、ヒドロキシ、分枝鎖およびシクロプロパン脂肪酸は、また可能である。グリセロール部の立体化学は、５ｎ−１またはＳｎ　３ホスホエステル結合またはそれのセラミ体混合物を含むことができる。必要とされるように、１または２、（また、ビス（ジアシルグリセロ）種のために３または４）のアシルエステル基またはアルキルエーテルもしくはビニルエーテル基があってもよい。

種々の他のリン脂質がヌクレオシドに結合されてもよく、それは、ホスファチジルグリセロール、ホスファチジルイノシトールまたは任意の他のリン脂質を含むがそれに制限されず、そこにおいて、頭部の基は、イノシトールのような天然のポリヒドロキシアルコールか、またはそれが天然か合成物かを問わない、糖のような、炭水化物または他のポリヒドロキシアルコールにより置換されているものかのどちらかにおいて結合可能な水酸基を含む。この場合には、ヌクレオシドリン酸は、エステル化により、アルコールまたは炭水化物の１つまたは２つ以上の水酸基に付加されるであろう。他の糖脂質は、また、そこにヌクレオチドのリン酸基が糖脂質水酸基へのエステル化によって付加されるリガンドとして働いてもよい。適当な疎水性を有する、天然または合成のどちらかの、選択されたセレブロシドまたはガングリオシドのような、他の糖脂質は、リン脂質であろうとなかろうと、また、有利に使用することができる。

これらは、炭水化物水酸基の同様のエステル化により、ヌクレオシドに結合することができる。

さらに、抗ウイルス性ヌクレオシドは、ホスファチジルイノシト−ルー−、ニーおよび三リン酸のリン酸基に、または、天然か合成のどちらかの、リン脂質もしくは糖脂質のリン酸−置換炭水化物部分に、結合されてもよい。

ホスファチジルセリンは、ヌクレオシドリボース基の５′−水酸基とともにそのカルボキシル基のエステル化により、直接に、ヌクレオシド類縁体に結合されてもよい。極性の頭部の基におけるカルボキシル基を含む、ホスファチジルセリンに構造で類似している合成のリン脂質は、類似の方法において結合されてもよい。

エーテルまたはビニルエーテル結合により付加されたアルキル鎖を有するホスホリピドは、また、この発明に従ってヌクレオシド誘導体を調製するために使用されてもよい。

この目的のための適当なホスホリピドは、天然由来のアセタールホスファチドまたはプラズマローゲンを含み、それは、不飽和ビニルエーテル結合に存在する長鎖脂肪酸基を含む。代替的には、１−０−アルキルグリセロールまたは２−０− アルキルグリセロールの類縁体は、合成により調製され、かつ例７において述べられるように選択されたヌクレオチドに結合されてもよい。グリセロ−３−ホスホ−５′−アジドチミジンの誘導体が好ましく、かつＡＺＴ−リン酸を、グリセロールの１位において２ないし２４の炭素鎖長のアルキル基を有する１−０−アルキル−グリセロールの種々の類縁体により縮合することにより調製されてもよい。１−０−アルキル基は、２ないし２４の炭素原子の鎖の長さを有する、飽和、不飽和脂肪族基からなってもよい。１−０−アルキルグリセロール残基は、セラミ体であるかまたは立体特異性であってもよい。この化合物は、脂肪酸の塩化物または無水物によりアシル化され、１−０−アルキル、２−アシル−グリセロ −３−ホスホ−５′アジドチミジンの合成を結果として生じてもよい。同様に、大過剰のアジドチミジン−リン酸を使用して、ｌ−〇−アルキル、２，３−ビス（ホスホ−５’　−３’−アジド、３′−デオキシチミジン）グリセロール類縁体が合成されてもよい。これらの誘導体は、一般的な構造そこでは、ＲＩ　は、不飽和または飽和アルキル鎖であり、それは、エーテルまたはビニルエーテル結合における長さにおいて工ないし２３炭素原子である。Ｒ２は、ＯＨまたは２ないし２４炭素原子の飽和または不飽和脂肪酸エステルである。また、Ｒ２においてエーテルまたはビニルエーテル結合が可能である。もしＲ２がエーテル結合されたアルキル鎖であれば、グリセロールの１位における基もまたＯＨであってもよい。Ｎは、５′ホスポジエステル結合において結合された任意の抗ウイルス性ヌクレオシドであり、かつＡはカルコゲン（０，、ＣまたはＳ）である。

ホスホリル化された抗ウイルス性ヌクレオシド（ヌクレオチド）は、この発明の好ましい実施例であるけれども、もし細胞の代謝のプロセスを介して抗ウイルス効果を達成するために感染された細胞にヌクレオシドリン酸を与えることが必要でなければ、ヌクレオシド類縁体の脂質誘導体を含む三価リンでないものを利用することが可能である。

このタイプの化合物のいくつかの例は、エステル化された脂肪酸を有するか、または例１３の合成方法に従ったヌクレオシドの５′−水酸基へ直接アルキル結合したものに存在するであろう。

代替的には、たとえば、どちらかの端部にカルボキシル基および中心に０ないし１ｏＣＨ２基を有する「スペーサ」分子は、抗ウイルス性ヌクレオシドの５′− 水酸基にエステル化することができる。「スペーサ」の他のカルボキシル基は、ジアシルグリセロールまたは利用可能な水酸基を有する任意の他の脂質の遊離した水酸基にエステル化されてもよい。端部に適当な官能基を有する他の結合（「スペーサ」）基は、また、当該技術分野においてよ（知られている化学的方法により、ジグリセリドまたは他の適当な脂質基をヌクレオシドに結合するために使用されてもよい。

抗ウイルス性ヌクレオシドの脂質誘導体を含むリポソームの調製合成の後で、ヌクレオシド類縁体の脂質誘導体は、リポソーム、または他の適当なキャリアに取込まれる。取込みは、超音波処理、押し出し成形またはミクロ流動化のような、よ（知られたリポソーム調製法に従って実施することができる。

リポソーム調製の適当な通常の方法は、パンガム（Ｂａｎｇｈａｍ）氏ら（４）、オルリン（Ｏｌｓｏｎ）氏ら（２６）、スゾカ（Ｓ　ｚ　ｏ　ｋ　ａ）氏およびバラハジャポーロス（Ｐａｐａｈａｄｊａｐｏｕｌｏｓ）氏（２７）、メイヒュー（Ｍａ　ｙ　ｈ　ｅｗ）氏ら（２８）、キム（Ｋ　ｆ　ｍ）氏ら（２９）、メイヤー（Ｍａｙｅｒ）氏ら（３０）およびフクナガ（Ｆｕｋｕｎａｇａ）氏ら（３１）により開示されたものを含むが、それらに制限されない。

リポソームは、単独のヌクレオシド類縁体の脂質誘導体から、または、ホスファシチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルグリセロール、スフィンゴミエリン、ホスファチジルセリンまたはホスファチジルイノシトールのような、卵、植物または動物のような天然の源からのリン脂質を含む任意の通常の合成または天然のリン脂質リポソーム材料との組み合わせにおいてつくることができる。さらに使用されてもよい合成リン脂質は、シミリストイルホスファチジルコリン、ジオレオイルホスファチジルコリン、ジパルミトイルホスファチジルコリンおよびジステアロイルホスファチジルコリンならびに相当する合成のホスファチジルエタノールアミンおよびホスファチジルグリセロールを含むが、それらに制限されない。

コレステロールまたは他のステロール、コレステロールヘミスクシネート、グリコリピド、セレブロシド、脂肪酸、ガングリオシド、スフィンゴリピド、１，２ −ビス（オレオイルオキシ）−３−０リメチルアミノ）プロパン（ＤＯＴＡＰ）　、Ｎ−［１−（２，３−ジオレオイル）プロピル］−Ｎ、Ｎ、Ｎ−１−リエチルアンモニウム（クロリド）（ＤＯＴＭＡ）　、Ｄ、Ｌ、−２，３−ジステアロイルオキシプロピル（ジメチル）−β−ヒドロキシエチルアンモニウム（アセテート）、グルコシコシンまたはシコランのような、他の付加物も、通常知られているように、付加されることができる。もし望まれるならば、リポソームにおいて使用されるリン脂質および付加物の相対的な量は、変化されてもよい。好ましい範囲は、約８０ないし９５モルパーセントのリン脂質および５ないし２０モルパーセントのシコランと他の添加物である。コレステロール、コレステロールヘミスクシネート、脂肪酸またはＤＯＴＡＰは、０から５０モルパーセントの範囲の量において使用されてもよい。リポソームの脂質層に取込まれた抗ウイルス性ヌクレオシド類縁体の量は、約０．０１から約１００モルパーセントの範囲でそれらの脂質の濃度とともに変化させることができる。

活性化合物を取込むための通常の方法を使用すれば、溶液に存在する物質の約２０ないし５０％を取込む。したがって、活性化合物の約５０ないし８０％は浪費される。対照的に、ヌクレオシド類縁体が脂質内に取込まれるところでは、事実上ヌクレオシド類縁体のすべてはリポソーム内に取込まれ、かつ事実上活性化合物は浪費されない。

上記処方によるリポソームは、標的のために特定のモノクローナル抗体または他のリガンドの組込みにより、それらの意図された標的に対してなおさらに特異的につくられてもよい。たとえば、ＣＤ４　（Ｔ４）受容体へのモノクローナル抗体は、レサーマン氏らの方法（１９）により、リポソーム内に組込まれたホスファチジルエタノールアミン（Ｐ　Ｅ）への結合により、リポソーム内に組込まれてもよい。先に述べられたように、ＨＩＶは、ＣＤ４　（Ｔ４）　受容体を持つそれらの細胞に感染するであろう。したがって、このＣＤ４−目標攻撃された免疫リポソームの使用は、抗ウイルス性化合物を、ＨＩＶが感染するであろう部位に集中させる。他のＣＤ４認識タンパク質の置換は、同一の結果を達成するであろう。他方では、モノクローナル抗体のｇｐＨｏまたはｇｐ４１（ＨＩＶウィルス被覆タンパク質）への置換は、抗ウイルス性免疫リポソームを一般に活性なＨＩＶ感染および複製の部位に集中させるであろう。

単純庖疹ウィルスまたはシトメガロウィルスのような、他のウィルスへのモノクローナル抗体は、活性化合物を、これらのウィルスの感染の部位に集中させるであろう。

脂質誘導体の治療的使用リポソームが取込まれたリン酸化されたヌクレオシド類縁体は、リポソームを投与するために使用される任意の公知の方法により患者に投与される。リポソームは、静脈中に、腹腔内に、筋肉に、または皮下に緩衝水性溶液として投与することができる。任意の医薬的に受容可能の水性緩衝液または他の賦形剤は、それがリポソーム構造または脂質ヌクレオシド類縁体の活性を破壊しない限り利用することができる。１つの適当な水性緩衝液は、約７．４のｐＨを有する５ｍＭのリン酸ナトリウムを含む１５０ｍＭのＮａｃｌまたは他の生理的緩衝塩溶液である。

ヒトを含む、哺乳動物のための投与量は、感染の程度および重さならびに投与された化合物の活性に依存して変化する。ヌクレオシド類縁体のための投与量水準は、よく確立されている。ヌクレオシド類縁体の脂質誘導体の投与量水準は、約０．００１ｍｇ／キログラムないし１０００ｍｇ／キログラムが患者に日常的に投与され、かつより好ましくは約０．０５ｍｇ／キログラムから約１００ｍｇ／キログラムである様にされるべきであろう。

この発明は、リポソームに取込まれた上記抗ウイルス性ヌクレオシド誘導体を、これらの化合物をマクロファージ、単球、およびリポソーム組成を取込む他の任意の細胞に、向けるために利用する。リガンドは、また、リポソームの特異性をさらに集中させるために取込まれてもよい。

述べられた誘導体は、すでに提出の系統の出願において述べられた水溶性ジデオキシヌクレオシドリン酸に勝っていくつもの独特のおよび新しい利点を有する。

第１に、それらはより有効に処方することができる。ヌクレオシド類縁体の脂質誘導体を含むリポソームは、脂質にずっと高い割合の薬剤を有し、なぜならばそれらは、水性の中心区分におかれる代わりにリポソームの壁内に取込まれるからである。第２に、上に述べられた親油性のジデオキシヌクレオシド誘導体を含むリポソームは、貯蔵の間に漏れず、改良された生成物の安定性を与える。さらに、これらの組成物は、凍結乾燥され、室温において乾燥して貯蔵され、使用のために再構成され、改良されたシェルフライフを与える。それらは、また、活性化合物の大きな浪費なしに抗ウイルス性化合物のリポソーム組成物への有効な取込みを可能にする。

それらは、また、治療上の利点を与える。リポソームに取込まれた薬剤の安定性は、より大きい割合で投与された抗ウイルス性ヌクレオシドが意図された標的に達することを引起こし、また、通常細胞により取込まれる量は最小限であり、そのためヌクレオシドの毒性の副作用を減少させる。ヌクレオシドの毒性の副作用は、さらに、リポソームを目標攻撃させることにより減少され、そこにおいてそれらはそこに特異的に結合するリガンドをリポソームに取込むことにより感染の活性部位または潜在的部位に含まれる。

最終的に、上に述べられた化合物は、リン酸化されたジデオキシヌクレオシドまたはさらなる細胞の代謝によって他の抗ウイルス性ヌクレオシド量の上昇を与えるような新しい態様において構成されている。これは、単球およびマクロファージまたは遊離した抗ウイルス性化合物の効果に対して抵抗性であると知られている他の細胞におけるそれらの抗レトロウィルス（抗ウィルス）効果を改良する。

さらに、リンパ球とともに予めインキュベートされた化合物は、薬剤が除去された後で４８時間までおよび４８時間を超過してＨＩＶ感染からの完全な保護を与え、また、ヌクレオシド単独では、除去後２４時間の保護を与えない。最終的に、脂質化合物は、抗レトロウイルス性ヌクレオシド類縁体単独に対して抵抗性のウィルス株に起因するＨＩＶ感染を治療することにおいて有用であると予期される。

抗ウィルス剤の脂質誘導体は、脂質のない薬剤に比べて引延ばされた抗ウイルス性効果を有し、したがって３、それらはリポソーム内に取込まれないときにさえ薬剤としての治療的利点を与える。抗ウイルス性ヌクレオシド類縁体の非リポソームの脂質誘導体は、皮膚もしくは粘膜に、または体内に適用されてもよく、それは、たとえば、口内に、気管内に、または他に、肺の経路により、腸内に、直腸内に、鼻内に、膣内に、舌に、静脈内に、動脈内に、筋肉に、腹腔内に、皮膚内に、または皮下に適用されてもよい。この医薬の調製は、単独の活性剤を含むことができるか、またはさらなる医薬的に価値のある物質を含むことができる。

それらは、さらに、医薬的に受容可能のキャリアを含むことができる。

抗ウイルスヌクレオシドの脂質誘導体を含む医薬の調製は、通常の溶解および凍結乾燥プロセスにより、約０．１％ないし１００％、好ましくは約１％ないし５０％の有効成分を含むように生成される。それらは、心地よくまたは快適に使用するために、有効な補助剤、賦形剤、希釈液、香水または香料と一緒に、吹こう、膏薬、錠剤、カプセル、パウダまたはスプレーとして調製することができる。

口内摂取のための処方は、錠剤、カプセル、ピル、粉にされた有効成分のアンプルまたは油性もしくは水性懸濁液もしくは溶液の形態である。錠剤または他の非液体口内組成物は、医薬的組成物の製造のために当該技術分野において知られている、受容可能の補助剤を含んでもよく、それは、ラクトースまたは炭酸カルシウムのような増量剤、ゼラチンまたはスターチのような結合剤および調製物に嗜好性を与えるための甘味料、着香料、色素または保存料からなる群から選択された１つまたは２つ以上の成分を含む。

さらに、そのような口内調製物は、腸管における分解および吸収をさらに遅らせるために、公知の技術により被覆されてもよい。

水性懸濁液は、薬理学的に受容可能の補助剤と混合した有効成分を含んでもよく、それは、メチルセルロースのような懸濁剤およびレシチンまたは長鎖脂肪アルコールのような湿潤剤を含む。前記水性懸濁液は、工業標準に従って、防腐剤、着色剤、着香料および甘味料を含んでもよい。

全身および局所的投与のための調製は、医薬的に適当な補助剤でのエアゾルスプレー、ローションゲル、および軟こうを含み、それは、低級脂肪族アルコール、グリセロールのようなポリグリコール、ポリエデリックリコール、脂肪酸のエステル、油および脂肪ならびにシリコーンを含んでもよい。調製物は、さらに、アスコルビン酸またはトコフェロールのような抗酸化剤およびｐ−ヒドロキシ安息香酸エステルのような防腐剤を含んでもよい。

非経口の調製物は、特に無菌または滅菌された生成物を含む。活性化合物および任意の公知の注入可能のキャリアを含む、注入可能の組成物が与えられてもよい。これらは、浸透圧を調整するための塩を含んでもよい。

脂質誘導体の治療的に有効な量は、活性抗ウイルス性ヌクレオチドの奨励される投与量の参照により決定され、それは、任意の特定の場合における適当な投与量の選択において、患者の重量、一般的な健康、代謝、年齢および薬剤への反応に影響を与える他の要因が考慮されなければならないことを念頭に置いてである。

非経口の投与量は、適当には、口内の投与量より低い大きさのオーダであろう。

この発明のより完全な理解は、以下の例示的な例を参照して得ることができるが、それらが発明を不当に制限することは意図されていない。

例１１．２−シミリストイルグリセロホスホ−５’　−（３’−アジドー３′−デオキシ）チミジン、−ナトリウム塩シミリストイルホスファチジン酸（ＤＭＰＡ− Ｈ）の調製分液漏斗（５００ｍ　ｌ）において、シミリストイルホスファチジン酸二ナトリウム塩（Ｉｇ、　、１．５７ｍｍｏ　ｌ）は、第１にクロロホルム：メタノール中に溶解され（２５０ｍｌ、体積で２　：　１）　、かつよく混合される。蒸留水（５０ｍｌ）が溶液に添加され、かつｐＨは濃塩酸を添加することにより、１に調整された。溶液はよく混合され、かつクロロホルム層は収集された。クロロホルム層は、一度メタノール：水（体積で１　：Ｌ　８０ｍ１）で水洗いされ、かつ３０℃において減圧下で蒸発させられて白い泡としてシミリストイルホスファチジン酸（ＤＭＰＡ−Ｈ）を生成した。シクロヘキサン（１，０ｍ１）が添加され、かつ溶液は乾燥するように凍結乾燥され、白い粉（８５０ｍｇ）を得、それは次いで一２０℃において貯蔵された。結合反応の１日前に、ＤＭＰＡ−Ｈ（２５０ｍｇ、０．４２ｍｍｏ１）は、丸底（５０ｍ　ｌ）フラスコにおいてシクロヘキサン（１，０ｍ１）に溶解されかつ溶剤は室温において減圧下で蒸発させられた。このプロセスはさらに４回繰り返され、かつＤＭＰＡ−Ｈは、さらに真空オーブンにおいて室温で一夜Ｐ２Ｏ５の下で乾燥され、かつ−２０ ℃において貯蔵された。

結合反応アルゴン下で、乾燥ＤＭＰＡ−Ｈ（２５０ｍｇ、Ｏ１４２ｍｍｏｌ）を含む５０ｍ１の丸底フラスコに、シグマ・ケミカル（Ｓｉｇｍａ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ）、セントルイス（Ｓｔ、Ｌｏｕｉｓ）、ミズーリ　（Ｍｉｓｓｏｕｒｉ）の乾燥３ ′−アジド−３′−デオキシチミジン（Ａ　Ｚ　Ｔ）（８５ｍｇ、０．　３１ｍｍｏ　１．真空下でＰ２Ｏ５を介して一夜乾燥させられた）および２．　４．　６−ｈリイソプロピルベンゼンスルホニルクロリド（３１５ｍｇ、１．０４ｍｍｏｌ）が添加され、かつ無水ピリジン（２ｍｌ）がシリンジを介して透明溶液を得るために添加された。反応混合物は、室温において、１８時間かく拌された（反応は、薄層クロマトグラフィーにより追跡された）。水（１ｍｌ）が過剰の触媒を破壊するために粗生成物に添加され、かつ溶剤は減圧下で蒸発させら、れて黄色ガムを生成し、それは、次いで少量のメタノール：クロロホルム（体積で１：９）に再溶解され、かつシリカゲルのカラム（４５ｇ、キーゼルゲル（Ｋｉｅｓｅ　Ｉｇｅ　１）６０、西ドイツ）に与えられる。カラムは、クロロホルム中８％メタノールにより溶出された。前流（廃棄された）の後、ＡＺＴは回収され、かつ次いでシミリストイルホスファチジル−３′−アジド−３′−デオキシチミジン（Ｄ　Ｍ　Ｐ　Ａ　Ａ　Ｚ　Ｔ　）が得られた。生成物を含む画分は混合され、かつ溶剤は減圧下で蒸発させられた。シクロヘキサン（５ｍｌ）が残渣に添加され、かつ混合物は真空下でＰ２Ｏ５において乾燥するまで凍結乾燥されて、精製ＤＭＰＡ−ＡＺＴ　（２７０ｍｇ、０゜２９ｍｍｏ　Ｌ　９５％）を得た。

−ナトリウム塩への変換クロロホルム：メタノール（３０ｍｌ、体積で２＝１）において再溶解された乾燥ＤＭＰＡ−ＡＺＴには、蒸留水（６ｍｌ）が添加され、よく混合され、かつ水層のｐＨは、１に調整された。クロロホルム層は収集され、かつ１０ｍ１のメタノール：水（１：　１）が添加されかつよく混合された。水層のｐＨは、メタノール性ＮａＯＨ（０，１ＮＮ）により６．８に調整され、よく混合されかつ水層はｐＨ６，８に維持された。混合されたクロロホルム、メタノールおよび水の混合物は、減圧下において蒸発させられ、シミリストイルホスファチジル３′−アジド−３′デオキシチミジン−ナトリウム塩を生じた。残渣はクロロホルム：メタノール（２ｍ　１体積で２；１）において再溶解され、かつアセトンがＤ　Ｍ　Ｐ　Ａ　−Ａ　Ｚ　Ｔ−ナトリウム塩を沈殿させるために添加され、それは、さらに、シクロヘキサン（５ｍｌ）から乾燥させられて、白い粉（２２０ｍｇ、Ｑ。

２６ｍｍｏ　１ＳＡＺＴに対して７８％の収率）を生じた。

融点は２３０℃であり、シリカゲルＧ薄層プレート上のＲｆ値は０．３２（クロロホルム：メタノール：水：アンモニア、８０：２０：１：１）、Ｒｆ　ｏ、５８　（クロロホルム：メタノール：水：アンモニア　７０：３０：３：２）、Ｒｆ　００３１（クロロホルム、メタノール：水　６５゜２５：４）、ＵＶ吸収極大２６６ｎｍ　（＜１０，８００）、Ｃａ　＋　Ｎ！、Ｏ＋　ＩＰＩ　Ｎ７゜・ｌＨ２Ｏのための元素分析の計算値：Ｃ，５７，２４；Ｈ，８，４４；Ｐ：３．６１；測定値：Ｃ５６，８０；Ｈ，ｓ、８３；Ｐ：３．５２０Ｍ５．ｍ／ｅ８６４．６０　ＣＭ＋）。

プロトンＮＭＲ：　（ＣＤＣｌ２）δ０．８８　（６Ｈ，ｂｔ。

Ｊ＝６．９Ｈｚ、アシルＣＨ３）、１．２６　（４０Ｈ，ｓ。

アシルＣＨ２）、１．６０　（４Ｈ，ｂｓ、βアシルＣＨ２’）、１．　９４　（３Ｈ，ｓ、チミンＣＨ３）、２．３１　（４Ｈ。

ｍ、αアシルＣＨ２）、２．３９　（２Ｈ，ｍ、リボース２’　Ｈ）、３．３８　（２Ｈ，ｂｄ、Ｊ＝１２．６Ｈｚ、リボース５’　Ｈ）、３．７８　（２Ｈ，ｍ、５ｎ−３ＣＨ２グリセロール）、４．００　（ＩＨ，ｄｄ、Ｊ１＝１２Ｈｚ、ＪＣＨ２グリセロール）　、４．　０７　（ＬＨ，ｍ、リボース３’　Ｈ）　、４．　４１　（ＬＨ，ｍ、リボース４’　Ｈ）、５．　２４　（ＬＨ，ｍ、５ｎ２ＣＨグリセロール）、７．　６２　（ＩＨ，ｓ、チミン６Ｈ）、６．２１　（ＬＨ，ｔ、Ｊ＝６Ｈｚ。

リボース１′Ｈ）。ＡＺＴに対するホスファチジン酸のピーク面積比は１である。

１．２−シミリストイルグリセロホスホ−５’　−（３’デオキシ）チミジン− ナトリウム塩シグマ・ケミカル、セントルイス、ミズーリから３′−デオキシチミジンが得られた。この類縁体の脂質誘導体は、例１において上に述べられた同一の方法を利用して合成された。融点２３５℃、シリカゲルＧ上のＲｆｏ、２５　（クロロホルム／メタノール／水／アンモニア　８０：２０：１：ｌ）；０．５７　（クロロホルム：メタノール：アンモニア：水　７０：３０：３：２）；０．２４　（クロロホルム：メタノール：水　６４：２５：４）；ＵＶ吸収極大２６９ｎｍ　（＜８，４００）：分析：Ｃ４１Ｎ２０１　ｔ　Ｐ＋Ｎ７２　Ｎａｌ　・ＩＨ２０の計算値：Ｃ，５８，５３，Ｈ。

８．８７；Ｐ、３．６９；測定値：Ｃ，５６，７５，Ｈ。

９．３３；Ｐ、３゜５８　ＭＳ、ｍ／ｅ８２３．００　（Ｍ＋）。

プロトンＮＭＲ：　（ＣＤＣｌ２）　δ０．９１　（６Ｈ，ｂｔ。

Ｊ＝６．８Ｈｚ、アシルＣＨ３）、１．２３　（４Ｈ，ｂｓ。

アシルＣＨ２）、１．２６　（４Ｈ，ｂｓ、アシルＣＨ２）。

１、　２８　（３２Ｈ，ｂｓ、アシルＣＨ２）、１．６２　（４Ｈ，ｍ、βアシルＣＨ２）、１．９７　（３Ｈ，ｓ、チミンＣＨ３）、２．０５　（２Ｈ，Ｍ、リボース２’Ｈ）、２゜３５　（４Ｈ，ｍ、　αアシルＣＨ２）、３．３９　（２Ｈ，ｂ２グリセロール）、４．２４　（ＩＨ，ｍ、５ｎ−ＩＣＨ２グリセロール）　、４．　３８　（ＩＨ，ｍ、リボース４’Ｈ）。

５．２３　（ＩＨ，ｍ、５ｎ−２グリセロール）、６．１０（ＬＨ，ｂｔ、リボース１’　Ｈ）　、７．　６８　（ＩＨ，ｓ。

チミン６Ｈ）。２′　３′−ジデオキシチミジンに対するホスファチジン酸のピーク面積比は１である。

例３１．２−シミリストイルグリセロホスホ−５’　−（２’　。

３′−ジデオキシ）シチジン４−アセチル−２′　３′−ジブオキシチジンの調製無水エタノール（３５ｍｌ、第１にＬ　ｉ　ｎｄｙタイプの４Ｘモルキュラシーブにより乾燥させられ、かつマグネシウム片にさらして２回蒸留される）における２’　−３’　−ジオキシシチジン（Ｄ　Ｄ　Ｃ）のかく拌された還流溶液に、無水酢酸（０，４ｍ　１．　５．　４ｍｍｏ　１）が添加された。

３時間の還流期間の工程の間に、さらに３０分置きに４回無水酢酸０．４ｍ１部が、添加された。反応は、薄層クロマトグラフィ　（シリカゲルＦ２５４、コダック・クロマグラム（Ｋｏｄａｋ　Ｃｈｒｏｍａｇｒａｍ）　、クロ、ｏホルム中１０％のメタノールにより展開させられた）で追跡された。最終的な添加の後、溶液は、さらに１時間の間遠流された。反応混合物は、冷却され、かつ溶剤は減圧下で蒸発させられた。残渣は、クロロホルム中８％のメタノール（５ｍｌ）に再溶解され、かつシリカゲルカラム（２，２ｃｍＸ３０ｃｍ、キーイルゲル（Ｋｉ　ｅｓｅ　Ｉｇｅ　１）６０．７０−２３０メツシユ、ＥＭサイエンス、４５ｇ）上で分画された。カラムは、クロロホルム中８％のメタノールが流され、８０％収率で精製４−アセチル−２’　３’　−ジデオキシシチジン（ＤＤＣ− ＯＡＣ）を得た。

結合反応結合反応の１日前に、ＤＭＰＡ−Ｈ（前のように、２５Ｑｍｇ、０．４２ｍｍｏ　を調製された）が丸底フラスコ（５０ｍ　ｌ）においてシクロヘキサンに溶解され、かつ溶剤は室温で減圧下で蒸発させられた。このプロセスは、さらに４回繰り返され、かつＤＭＰＡ−Ｈは、さらに、真空オーブンにおいて、室温で、− 夜Ｐ２Ｏ５の下で乾燥させられた。アルゴンの下で、乾燥ＤＭＰＡ−Ｈを含む５０ｍ１容丸底フラスコには、乾燥（ＤＤＣ−ＯＡＣ）（８５ｍｇｓ　０．３３ｍｍｏ　Ｉ、真空下で一夜Ｐ２Ｏ５の下で乾燥させられた）および２．４．６・− トリイソプロピルベンゼンスルホニルクロリド（３１５ｍｇ、１．０４ｍｍｏｌ）および無水ピリジン（２ｍｌ）が、シリンジを介して、透明溶液を得るために添加された。反応混合物は、室温で、１８時間かく拌された。（反応は、薄層クロマトグラフィにより追跡された）。水（１ｍ　ｌ　）は、過剰の触媒を破壊するために添加された。溶剤は、減圧下で蒸発させられ、黄色ガムを生じ、それは、クロロホルム中の少量のメタノール（体積で１：９）に再溶解させられ、かつシリカゲル（４５ｇ、キーイルゲル６０、ＥＭサイエンス）のカラムに供された。カラムには、サンプルが溶出の間に浮かぶことを妨ぐために、少量の砂（５００ｒｎｇ）が上に載せられた。カラムには、クロロホルム中８％のメタノール（１゜５Ｌ）が流された。前流（廃棄された）の後、次いで、シミリストイルホスファチジル−５’　−（２’　３’　−ジデオキシ）シチジン（ＤＭＰＡ−ＤＤＣ）が得られた。生成物を含む画分は、混合され、かつ溶剤は、減圧下で蒸発させられた。残渣は、さらに、シクロヘキサンを用いて乾燥させられ、精製ＤＭＰＡ−ＤＤＣ−ＯＡＣ（７０９６の収率において２　：ｔ　Ｏｍｇ、ｓ　０．　２１ｍｍｏ　１）を得た。Ｒ１０゜４０（シリカゲルＧＦ、、２０Ｘ２０ｃｍ、アナルテク（Ａｎａｌｔｅｃｈ）、体積で、クロロホルム：メタノール：水：アンモニア　８０：２０：１：１）９Ｎ　ＮＨ４０Ｈを用いる脱保護ＤＤＣ−ＯＡＣ−ＤＭＰＡ　（４０ｍｇ、０．０４ｍｍ。

ｌ）が、クロロホルム：メタノール（１：１．２ｍ１）に溶解され、かつすぐに９Ｎ　ＮＨ４ＯＨ（１０滴）が添加された。溶液は、室温において１５分間攪拌され、かつ次いで氷酢酸によりｐＨ７に迅速に中和された。中和された溶液は、減圧下で、−夜乾燥され、シミリストイルホスファチジル５’　（２’　３’− ジデオキシ）シチジン（ＤＭＰＡ−ＤＤＣ，３５ｍｇ、０．０３７ｍｍｏｌ）を生成した。

融点＝２４０℃においてＤＭＰＡ　ｄｄＣが分解された。

シリカゲルＧＦプレートの上の薄層クロマトグラフィの上で、Ｒｆ値は０．１１（クロロホルム：メタノール：水：アンモニア　８０：２０：１：１）；ｏ、３８　（クロロホルムメタノール、アンモニア：水　７０：３０：３：２）：０．１５（クロロホルム：メタノール：水　６５：２５＝４）、ＵＶ吸収極大２７３ｎｍ　（＜５，８００）ＮＭＲ：　（ＣＤＣＬ３）δ０．８６　（６Ｈ，ｂｔ、アシルＣＨ３）、１．２４　（４０Ｈ，ｂｓ、アシルＣＨ２）、１゜５７　（４Ｈ，ｍ、βアシルＣＨ２）、２゜２８　（４Ｈ，ｍ。

αアシルＣＨ２）、３．３６　（２Ｈ，ｍ、リボース５′Ｈ）０　（ＬＨ，ｂｓ、リボース４’　Ｈ）、５．１９　（１８，ｍ。

５ｎ−２ＣＨグリセロール）　、５．　８９　（ＩＨ，ｍ、チミン５−Ｈ）、７゜４４　（ＩＨ，ｂｓ、　チミンＮＨ３）、７゜９４　（ＬＨ，ｂｓ、チミンＮＨ２）。ホスファチジン酸の２′　３′−ジデオキシシチジンに対するピーク面積比は１（３′アジド−３′デオキシ）チミジン−５７−二リンこの化合物は、アグラノフおよびスオミの方法（２１）に従って合成された。ＡＺＴ−−リン酸は、水に溶液をＤｏｗｅｘ　５０Ｗ　（５０Ｘ２−２００，１００−２００メッユ、ジグ７’ケミカルズ（Ｓ　ｉ　ｇｍａ　Ｃｈｅｍｊ　ｅａｌＳ）、セントルイス（Ｓ　ｔ、Ｌｏｕ　ｉ　ｓ）　、ＭＯ）のカラムを介して通過させることにより、酸の形に変換された。

３ｍｌ水中の１１７ｍｇのＡＺＴ−−リン酸（０，３ミリモル）溶液は、２つのネック丸底フラスコに移された。３ｍｌのｔ−ブタノールおよび０．１．０６ｍ１の新しく蒸留したモルホリン（１，２０ミリモル）が添加され、力Ａつ混合物は、９０℃において油浴におかれた。４．５ｍｌのｔ−ブタノールにおけるジシクロヘキシルカルボジイミド４９ｍｇ，１．２０ミリモル）４当量が透下された。反応は、展開溶剤としてクロロホルロ／メタノール／酢酸／水（体積で５０／２５／３／７）を用いるシリカゲル６０。

Ｆ　２　５　４．　プレート上の薄層クロマトグラフィによりモニタされた。反応は、３時間後に完全であること力（認められた。混合物は、冷却され、かつ４．５ｍｌの水の添加の後、１５ｍｌのジエチルエーテルにより４回抽出された。

水層は、乾燥するように蒸発させられ、かつ真空にお０てＰ２Ｏ５の下で乾燥させられた。生成物は、得られ（１９９ｍｇ，１００％収率）、かつさらなる精製なシフ１こホスファチジン酸に結合するために使用された。

ジパルミトイルホスファチジン酸へのＡＺＴ−−ＩＪリン酸ー−―ーーー騨一岬ーニーー―ーーーーーーー“　−一一ルホリダートの結合ジパルミトイルホスファチジン酸、二ナトリウム塩は、０．１ＮＨＣＩを水相として使用したブライ（Ｂｌｉｇｈ）氏およびダイヤ（Ｄｙｅｒ）氏の方法（３４）により、クロロホルムから材料を抽出することにより、遊離酸に変換された。

クロロホルム層は、真空において乾燥するように蒸発させられ、ホスファチジン酸（１９６ｍｇ、０．３ミリモル）は、クロロホルムに再溶解され、かつ、ＡＺＴ−−リン酸モルホリダートを含む容器に移された。クロロホルムが真空においてロータリーエバポレータを使用して除去された後で、混合物は、ベンゼンの添加および蒸発により乾燥させられ、かつ最終的に真空においてＰ２Ｏ５下で乾燥させられた。反応は、３０ｍ１の無水ピリジンの添加により始められ、かつ透明な混合物は室温においてかく拌された。反応は、展開溶剤としてクロロホルム／メタノール／アンモニア／水（体積で７０／３８／８／２）を用いて、上に述べられたように薄層クロマトグラフィによりモニタされた。ホスファチジン酸、ＡＺＴ−−リン酸モルホリダートおよびＡＺＴ−二リン酸ジパルミトイルグリセロールのＲｆは、それぞれ、０．１１．０．５０および０゜３０である。

７０時間後、ピリジンが蒸発させられ、かつ生成物は、１５ｍ１の水、３０ｍ１のメタノール、２２ｍ１のり０ロホルムおよびｐＨを４．０に調整するための十分なＩＮギ酸の付加の後、クロロホルム内に抽出された。２回の抽出の後、混合されたクロロホルム層は、乾燥するまで蒸発させられ、残渣は、クロロホルム／メタノール／アンモニア／水、７０／３８／８／２において溶解され、がっ生成物は、１メートルの水に等しい空気圧を与えながら、この溶剤においてシリカゲルカラムクロマトグラフィにより精製された。完全に純粋でない画分は、さらに、溶出液として水／メタノール（体積で８／２）およびメタノールを使用した逆相カラム上のＨＰＬＣにより精製された。所望の生成物を含む画分は、乾燥するまで蒸発させられ、１３２ｍｇの白い固体（４４％収率）を与え、それは、薄層クロマトグラフィにより単一のスポットを与え、クロロホルム／メタノール／アンモニア／水、７０／３８／８／２　（ＲｆＯ，３５）およびクロロホルム／メタノール／水、６５／３５／４　（Ｒｆｏ、５４）でシリカゲルＧプレートに展開された。

５００ＭＨｚ　ＮＭＲ（ＣＤＣ１３）δ０．８８　（３Ｈ。

ｔ、Ｊ＝６．９３Ｈｚ、５ｎ−２−７シルＣＨ３）、ｏ。

９２　（３Ｈ，ｔ、Ｊ＝７．４８Ｈｚ、５ｎ−１−アシル鎖ＣＨ３）、１．２５　（４８Ｈ，ｓ、ＣＨ２アシル鎖）、１゜５５　（４Ｈ，ｂｓ、βＣＨ２アシル鎖）、１．８３　（３Ｈ。

ｓ、ＣＨ３チミン）、２．２５　（２Ｈ，ｔ、Ｊ＝６．９７Ｈｚ、２Ｈ，アルフｙＣＨ２ｓｎ−２−アシル鎖）、２゜アシル鎖）、２．４４　（４Ｈ，ｂｓ、２ ’　および５’　Ｈリボース）、３．７８　（ＩＨ，ｄｄ、Ｊ＝１．６８，５．５１Ｈｚ、３’　Ｈリボース）、３．９５　（２Ｈ，ｂｓ、５ｎ−３ＣＨ２グリセロール）、４．　０７　（ＩＨ，ｂｓ、　Ｈｅ／Ｈａｓｎ−ＩＣＨ２グリセロール）、４．　１３　（ＬＨ。

ｔ）ｓ、ＩＨ，５ｎ−２ＣＨグリセロール）、４．　３６　（ＩＨ，ｂ　ｓ、Ｈａ／Ｈｅ　５ｎ−ＩＣＨ２グリセロール）、５゜２１　（ＩＨ，ｂｓ、５ｎ−２ＣＨグリセロール）、５．６６　（ＬＨ，ｂｓ、１’　Ｈリボース）、７．１４　（ＩＨ，ｄ。

Ｊ＝６．２５Ｈｚ、６Ｈチミン）。適当な共鳴から演鐸されたアシル鎖：グリセロール：リボース：チミンの比は、２．１２：０．９３：０．９８：１．００になった。ＩＲ（ＫＢｒ、ｄｉｓｋ）は、同定可能なバンドとして２１０５（アジド）、１７４５（Ｃ＝○エステル）および１７０５　（ｃ＝○チミン）を示した。

氾抗ウイルス性ヌクレオシドジアシルリン酸の合成ジヘキサデシルホスホー５′− ジデオキシシチジンは、例１において述べられた方法に従って合成され、それは、反応物がジデオキシシチジンおよびジヘキサデシル水素リン酸であることを除く。開始原料ジヘキサデシル水素リン酸は、第１にデー・エイ・ブラウン（Ｄ、Ａ、Ｂｒｏｗｎ）氏らにより報告されたように（３２）ヘキサデカン−１−オールおよびビニルホスホロジクロリダートから合成される。

倒」− ジデオキシアデノシンニリン酸セラミド抗ウイルス性ホスホヌクレオシドの合成ジデオキシアデノシン−リン酸モルホリダートがジデオキシシチジン−リン酸モルホリダートと置換されることを除いて、例２の方法が繰り返される。セラミドリン酸は、セラミド上の３価リンのオキシクロリドの作用により調製される。セラミドリン酸は、シミリストイルホスファチジン酸と置換される。類似の結果が得られる。

［１−〇−ステアロイルグリセローｒａｃ−３−ホスホ−５’　−（３’−デオキシ、３．−アジド）チミジン乾燥１−０−ステアロイル−ｒａｃ−３−グリセロール（バチル（ｂａｔｙｌ）アルコール、２５０ｍｇ）、３’−アジド−３′デオキシチミジン−リン酸ナトリウム塩（０，７２５ｇｍ）および２．４．６．− トリイソプロピルベンゼンスルホニルクロリド（ＴＰＳ、１．２１９ｇｍ）は、乾燥ピリジン中に混合され、かつ窒素下で一夜かく拌された。クロロホルム（５０ｍ　ｌ）が、添加され、かつ反応混合物は、冷０．２Ｎ　ＨＣＩおよび０．２Ｎ重炭酸ナトリウムで２回洗われた。有機相は、真空において、ロータリーエバポレータにより除去され、かつ生成物は、２０ｍ１のクロロホルム／アセトン（体積で１２：８）から−２０℃において結晶化された。化合物の最終精製は、クロロホルム／メタノール／濃アンモニア／水（体積で７０／３０　／　１　／　１　）により展開されたシリカゲルＧの５００ミクロンの層を使用して、予め調製された薄層クロマトグラフィにより行なわれた。

先の合成においては、プロトンＮＭＲスペクトルは、ゼネラル−エレクトリック（Ｇｅｎｅｒａｌ　Ｅｌｅｅｔｒｉｃ）のＱＥ−３００スペクトルメータにより得られ、それは、テトラメチルシランを内部標準として使用した（記号：ｓ＝ニシンブレラ−、ｄ＝ダブレット、ｔ＝ニトリプレットｑ＝カルチット、ｄｄ＝ダブルダブレット、ｂ＝ニブ−ド）。ＵＶスペクトルは、シマヅ（Ｓｈｉｍａｄｚｕ）のＵＶ−１６０，スペクトロホトメータに記録された。速い原子衝撃質量分析は、マススペクトロメトリサービスラボラトリ　（Ｍａｓｓ　Ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ　５ｅｒｖｉｃｅ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ）、ミネソタ大学（Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　Ｍｉｎｎｅｓｏｔａ）により測定された。原子分析は、ガルブレイスラボラトリーズ、ツクビール、ＴＮ（Ｇａｌｂｒａｉｔｈ　Ｌａｂｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｋｎｏｘｖｉ　Ｌｉｅ、ＴＮ、）およびシュワルツコフミクロアナリテイカルラボラトリ、Ｎ、Ｙ　（Ｓｃｈａｗａｒｚｋｏｐｆ　Ｍｉｃｒｏａｎａｌｙｔｉｃａｌ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ、Ｎ、Ｙ、）により測定された。融点は、フィッシャージョーンズ（Ｆｉｓｈｅｒ−Ｊｏｈｎｓ）融点測定器により得られた。カラムクロマトグラフィは、Ｍ　ｅ　ｒ　ｅ　ｋシリカゲル６０　（７０−２３０メツシユ）上で実施された。Ｒｆ値は、ＨＰＴＬＣメルク、キーイルゲル６０プリコートプレート無水ピリジン、２．　４．　６−ドリイソプロビルベンゼンスルホニルクロリド（ＴＰＳ）および３′−アジド−３′−デオキシチミジン（Ａ　Ｚ　Ｔ）は、アルドリッチ（Ａ　１　ｄ　ｒｉｅｈ）から購入された。シミリストイルホスファチジン酸二ナトリウム塩は、アバンテイ　（Ａｖａｎｔｉ）から購入され、バチルアルコールは、シグマ−ケミカル、セントルイス、ミズーリから得られた。

６、４２マイクロモルのジオレオイルホスファチジルコリン、３．８５マイクロモルのコレステロール、１．２８マイクロモルのジオレオイルホスファチジルグリセロールおよび１．２８マイクロモルのシミリストイルホスファチジル−アジドチミジンが、無菌の２．０ｍｌガラスバイヤルに混合され、かつ溶剤はロータリーエバポレータにおいて真空下で除去された。いくつかの実験においては、シミリストイルホスファチジルアジドチミジンは、シミリストイルホスファチジルジデオキシチミジン、シミリストイルホスファチジルジデオキシシチジンまたはアジドチミジンニリン酸ミリストイルグリセロールのいずれかにより置換され、対照のリポソームは、抗ウイルス性リボヌクレオシドを省略することにより調製された。乾燥フィルムは、溶剤の痕跡を除去するために、室温において一夜高い真空の下に置かれた。脂質フィルムは、３０℃で、等張のデキストロースを含む０．３ｍｌの無菌の１０ｍＭ酢酸ナトリウム緩衝液により水和された。１０分間断続的にかく拌され、９０ないし１２０分間の出力制御設定＃９におけるカップホルンジェネレータ（４　３　１　Ｂ）を有するヒートシステムウルトラソニックス超音波発生器を使用する超音波処理をＯ・き続いて行い、サンプルは清澄にされた。この超音波処理は、滅菌されたＲＰＭＩｉ衡液により希釈され、かつ示された濃度において組織培養器に添加された。

ハ抗ウイルス性脂質含有リポソームへのＣＤ４に対するモノクローナル抗体の結合３９：３９：２０：２のモル比で、例１の方法によって生じられたシミリストイルホスファチジル−ＡＺＴ，シミリストイルホスファチジルコリン、コレステロールおよびシミリストイルホスファチジルエタノールアミンの脂質混合物２００ｍｇは、１００ｍｌ丸底フラスコにおいて薄膜を形成するためにロータリーエバポレータを使用し真空状態で乾燥された。１ｍｌの滅菌リン酸緩衝塩水が添加され、かつ混合物は２０分間２０℃でゆっくりと振られ、次に１０回の３０秒サイクルのかき混ぜが続きマルチラメラリポソームを形成した。懸濁液は２　０　０　ｎｍの孔直径を有する２つの積み重ねられたヌクレオボアポリカーボネートフィルタを通して５サイクルの押し出し成形に供され、均一のリポソーム群を生じた。超音波処理、逆相エバポレーション、およびフレンチプレスまたはミクロフリュイダイザ（ミクロフリュイデイクス、ニュートン、マサチューセッツ）の使用のような他の方法が用いられてもよい。ＣＤ４抗原に対する工ないし２　ｍ　ｇのＯＫＴ４ａモノクローナル抗体は０．０８ｍＭ　Ｎ−スクシンイミジル３− （２−ピリジルジチオ）プロピオン酸（ＳＰＤＰ）と共にインキュベートすることによってチオール化される。未反応のＳＰＤＰはセファデックスＧ２５を介するゲル濾過により除去される。流出するＤＴＰ−タンパク質は２０分間ｐｉ（４゜５で０．１Ｍ　酢酸塩緩衝塩において０．　０５Ｍ　ジチオスレイトールで還元され、還元チオール化抗体を生じる。

５マイクロモルのリン脂質に相当する例５の方法により生じられたリポソームは、０．２０ｍ１の等張ＭＥＳ／ＨＥＰＥＳ緩衝液、ｐＨ６，７においてチオール化された抗体で室温で一夜インキユベートされる。結果として生じる免疫リポソームはヒース（Ｈｅａｔｈ）他（３３）の不連続メトリンミド（ｍｅ　ｔ　ｒ　ｉ　ｚ　ｉｍｉ　ｄｅ）勾配法によって精製され、かつ２００　ｎｍフィルタを通すことより滅菌脂質ヌクレオシド接合体による組織培養細胞におけるＨＩＶ複製の抑制ヒトＴリンパ芽球細胞系、ＣＣＲＧ−ＯＥＭ　（以下ＯＥＭと称す）は、１００Ｕ／ｍｌペニシリンＧ、１１００ｕ／ｍｌストレプトマイシン、２ｍＭグルタミンおよび１０％ウシ胎児血清を含むＲＰＭ１１６４０培地（ヘイクロン研究所、ローガン、ユタ（Ｈｙｃ　Ｌｏｎｅ　Ｌａｂｏｒａｔ’ｏｒｉｅｓ、Ｌｏｇａｎ、Ｕｔａｈ））において培養された。細胞は１％ポリブレンを含む培地において３７℃で６０分間１組織培養５０％感染量（ＴＣＩＤ５Ｇ）／細胞の感染多重度でＬＡＶ−１株（Ｌ、モンタニエ（Ｍｏｎｔａｇｎｉｅｒ）、パリ、フランス）で感染された。ＣＥＭ細胞は６Ｘ１０’細胞／ｍｌでの懸濁において感染され、遠心分離および再懸濁によって３回洗浄され、かつそれからリポソーム抗レトロウイルス性リボヌクレオチド剤を含む培地の添加の前に、６Ｘ１０’細胞／井戸型で９６井戸型プレートに分配された。

ＨＩＶ　ｐ２４検定によって測定される抗ウィルス活性：抗ウィルス活性は、異なった濃度の薬剤にさらされた感染された細胞のセルフリー培養培地においてＨＩＶ　ｐ２４（ｇａｇ）抗原の生産の抑制によって３日後に検定された；ｐ２４抗原は製造者の説明書に従ってＥＬＩＳＡ（アボット研究所（Ａｂｂｏｔｔ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）、シカゴ、イリノイ）によって測定された。データは２つの測定値の平均であって、かつ薬剤の不在においてインキュベートされた対照（コントロール）の割合として表現される。

Ｂ、実験　Ｈ５３３−１：第１図示された濃度において、シミリストイルホスファチジルアジドチミジン（ＬＮｌ）、シミリストイルホスファチジルジデオキシチミジン（ＬＮ２）またはアジドチミジンニリン酸シミリストイルグリセロール（Ｌ　Ｎ　４）のいずれか１０モル％を含むリポソームは生体外でのＣＥＭ（野生のタイプ）細胞でのＨＩＶ複製を抑制する能力に対して検査された。これらの抗レトロウイルス性リボヌクレオチドの３つのすべてはＨＩＶ　ｐ２４生産を抑制した；５０％（Ｅ、Ｄ、５０）ウィルス生産を低減するのに必要とされる薬剤の量は以下のとおりである：ホスファチジルアジドチミジン（ＬＮＩ）　ｕＭホスファチジルジデオキシチミジン（ＬＮ２）０　ｕＭＡＺＴ　ニリン酸シミリストイルグリセロール（Ｌ　Ｎ　４）　ｕＭこのことは、抗レトロウイルス性ヌクレオチドの脂質誘導体はＣＥＭ細胞に入ることができ、かつ予期されるように活性ヌクレオシドに変換されることができるということを示す。抗レトロウイルス性ヌクレオチドを含まなかった対照リポソーム（ＣＯＮＴ）はＣＥＭ細胞によるｐ２４生産に影響を及ぼさなかった。

Ｃ０実験　Ｈ７４７−１ａ：第２図リポソームにおけるシミリストイルホスファチジルアジドチミジン（ＬＮＩ）は、フリーのアジドチミジン（Ｎ１）と比較された。Ｑ、ｌｕＭより下の低い濃度では、フリーのＡＺＴはりポヌクレオチドより効果的であった。２から１７０ｕＭの範囲に及ぶ濃度において、ホスファチジルＡＺＴリポソームはフリーのＡＺＴより効果的であった。方法において示されたように不活性脂質だけしか含まない対照リポソーム（ＣＯＮＴ）はｐ２４を低減するのに効果的でなかった。

Ｄ、実験　Ｈ７４７−１ｂ　：第３図ジデオキシチミジン（Ｎ２）はＨＩＶ　ｐ２４生産の弱い抑制体である。驚くべきことに、ホスファチジルジデオキシチミジン（ＬＮ２）はフリーのヌクレオシドよりいくいらかより効果的である。図から見られ得るように、ホスファチジルジデオキシチミジンでよりもわずかに多いフリーのｄｄＴがｐ２４生産を低減するのに必要とされる。匹敵する総リン脂質濃度での対照リポソーム（ＣＯＮＴ）は効果がない。

Ｅ、実験　Ｈ６３７−１ｂ：第４図この実験では、ＯＥＭ細胞は、チミジンキナーゼ酵素（ＣＥＭｔｋ−）を欠如する（デニス　カーソン（Ｄａｎｎｉｓ　Ｃａｒｓｏｎ）博士、スクリップスクリニック（Ｓｃｒｉｐｐｓ　Ｃ１１ｎｔｃ）、サンディエゴ、カリフォルニアによって与えられる）変異細胞で置換えられた。

これらの細胞はチミジン誘導体をホスホリル化することができず、かつＡＺＴはそれゆえ不活性である、なぜならばそれはＨＩＶ　ｐ２４複製を抑制するのに必要とされる活性三リン酸誘導体に変換されることができないからである。

図に示されるように、ＡＺＴ　（Ｎｌ）は広範囲の濃度（０゜２から１０１００ｕにわたってｐ２４生産に完全に影響を及ぼさない。しかしながら、ホスファチジルＡＺＴ　（ＬＮｌ）とホスファチジルｄｄＴ　（ＬＮ２）との両方はｐ２４生産を低減することができ、これらの化合物が、ほかの細胞の酵素によって三リン酸にさらに活性化され得るヌクレオシドーーリン酸へ、細胞において代謝されるということを証明する。このデータは、ヌクレオシド−リン酸への直接代謝を予測する特許において略述された原理の証明を提供する。

Ｆ、実験　Ｈ８０５−ｉ：第５図この実験では、シミリストイルホスファチジル−ジデオキシシチジン（ＬＮ３）およびシミリストイルジデオキシチミジン（ＬＮ２）が生体外でＯＥＭ　（野生のタイプ）細胞におけるフリーのＡＺＴ　（Ｎ２）およびジデオキシシチジン（Ｎ３）の効果と比較された。ホスファチジルｄｄｅは最も効力のあるリボヌクレオチド（ＥＤ５゜１．１ｕＭ）であり、かつホスファチジルｄｄＴは前述のようにあまり活性ではなかった（ＥＤ５゜　２０μＭ）。添加された抗レトロウイルス性ヌクレオチドを有さないフリーのリポソーム（ＣＯＮＴ）は不活性であった。

Ｇ、実験　Ｉ２７６：この実験において、上述のように準備されたリポソームにおけるシミリストイルホスファチジルアジドチミジン（ＬＮＩ）での予備的インキュベーションによって与えられる抗ウイルス性の保持はフリーのアジドチミジン（Ｎ１）のそれと比較された。ＯＥＭ（野生のタイプ）細胞は、７゜１４μＭのフリーのＡＺＴ　（Ｎｌ）またはホスファチジルＡＺＴ　（ＬＮＩ）のどちらか一方を含むＲＰ　Ｍ　Ｉ培地において標準状態の下で３日間予備的にインキュベーションされた。細胞はそれからＰＢＳで２回洗浄され、かつ新しいＲＰＭＩ培地が付加された。細胞各グループはそれから３つのバッチに分けられた。１つのバッチは上述のようにＨＩＶで即座に感染された；結合していないＨＩＶを洗浄した後、サンプルは３日間培地のみでインキュベートするこを許容された。２つのほかのバッチは２４または４８時間の間培地のみでインキュベートすることを許容され、存在する任意の細胞内の抗ウイルス性剤が使い尽くされるのを許容した。それから、それらはＨＩＶで感染され、細胞はウィルスを洗浄され、かつ新しいＲＰＭＩ培地が添加された。３日間のさらなるインキュベーションの後、すべてのバッチの上清はｐ２４タンパク質の存在が検査された。

対照細胞：　ＣＥＭ細胞は予備的インキュベーションなしにＨＩＶ感染にさらされた；薬剤は示されるようにＨＩＶ感染に続いて添加され、かつ細胞は３日間インキュベート（Ｎ１）またはホスファチジルＡＺＴ　（ＬＮＩ）を含む培地で３日間予めインキュベートされた；３日後細胞は洗浄され、ＨＩＶ感染にさらされ、薬剤なしの培地の添加が続いた。３日間のさらなるインキュベーションの後、ｐ２４は測定された。

結果：ｐ２４：ｎｇ／ｍｌＣＥＭ対照：予備的インキュベーションなし３日インキュベーション後ＨＩ　Ｖ感染のみ　２０４；２０７ＨＩ　Ｖ＋　７．　１４　μＭアジドチミジン（Ｎｌ）６４；６９ＨＩＶ＋７．１４μＭホスファチジルＡＺＴ　（ＬＮＩ）１６；１．６ｐ２４；ｎｇ／ｍ１７．１４．ｃｚＭアジドチミジ：／　（Ｎｌ）　２４ｈ　４０４；４３３４８ｈ　２７＋、２４５７．１４μＭホスファチジルＡ４Ｔ（ＬＮＩ）　２４ｈ　、　６；　７４８ｈ　４；１５薬剤の除去の後通常の培地における４８時間のインキュヘーショ：／７５＜続＜３日間の予備的インキュベーションノ後、ホスファチジルＡＺＴは低減されたｐ２４生産によって評価されるようにＨＩＶ複製からの完全な保護を提供した。

しかしながら、ＡＺＴ予備的インキュベーションは薬剤の除去の後２４および４８時間ＨＩＶ感染から細胞を保護できなかった。

Ｈ１実験　Ｊ４５：この実験において、例７の化合物（１−ｏ−ステアロイルグリセロ−ｒａｃ−３ −ホスホ−５’　−（３’　−デオキシ、３′−アジド）チミジン）は、例８に示されるような１０モル％のりボヌクレオチドを含むリポソームに取込まれた。

この材料はＲＰＭＩ培地で所望の濃度まで希釈され、かつこの例で先に述べられたようにＬＡＶ−１で感染されていた、ロッキーマウテンナショナル研究所（ｔｈｅ　Ｒｏｃｋｙ　Ｍｏｕｎｔａｉｎ　Ｎａｔｉｏｎａｌ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）（ハミルトン、モンタナ）のブルース　チェスプロ（Ｂｒｕｃｅ　Ｃｈｅｓｂｒｏ）博士から得られたＨＴ４−６Ｃ細胞（ＣＤ４＋ＨｅＬａ細胞）に添加された。３７℃で３日間のインキュベーションの後、細胞はＰＢＳで洗浄され、固定され、かつクリスタルバイオレットで染色され、かつプラークが数えられた。結果は以下に示すとおりである。

リボヌクレオチド濃度　プラーク平均　未反応の対照の％０．３１６　３２　５８０、　１００　３９　７１０、　０３１６　４３　７８データは、１−０−ステアロイル−ｒａｃ−３−ホスホ−５’　−（３’−デオキシ、３′アジド）チミジンが、ＬＡＶ−１で感染されたＨＴ４−６０細胞においてＨＩＶプラーク形成を抑制するのに効果的であるということを示す。

５０％抑制を生じるために必要とされる濃度はおよそ０゜３５マイクロモルである。

例１１ＨＩＶ対分離：抗ウイルス感度Ｉ、Ｃ，５ｏ、　μＭ；ＨＴ４　６Ｃプラーク低減検定方法：　ＨＴ４−６０細胞（ＣＤ４＋ＨｅＬａ細胞）はブルース　チェセブロ博士、ロッキーマウンテンナショナル研究所、ハミルトン、ＭＴ）から得られ、かつ例１０で述べられたＨＩＶ分離株で感染された。３日間のインキュベーションの後、細胞は洗浄され、固定され、かつクリスタルバイオレットで染色され、かつプラークが数えられた。

ＨＩＶの臨床サンプルはＡＺＴ治療（プレ）の前およびＡＺＴ治療（ポスト）の後６から１２力月分離された（リッチマン、Ｄ、Ｄ、　、ラーゾ、Ｂ６、およびダービ、Ｇ１、発行のために提出された原稿、１９８９）。ＨＴ４−６Ｃプラ一ク還元検定を使用して、１対の臨床上の分離株の感度がＡＺＴ、ホスファチジルＡＺＴまたはホスファチジルｄｄＴのいずれかを使用し測定された。

分離株　ΔＩエ　ｐ−ＡＺＴ　ｐｄｄＴプレ（Ｇ７６２−３）　Ｑ、　０１　Ｑ、　５３　４．２ポスト（Ｇ６９１−２）　２　Ｑ、　３７　６．６プレ（Ｈ１１２−２）　Ｑ、　０１　０．４７　７．４ポスト（Ｇ９１０−６）　４　０．５９　６．３Ｏ３６プレ（Ｇ１７４−６ｃ）　０．００？　０．４２　７．４ポスト（Ｇ７０４−２）　５．６　Ｑ、　５９　４．２ＣＰＱ２２プレ（Ｈ１１２−５１０，０３Ｑ、　４７　４．２ポスト（Ｇ７８０−１）　５．６　１゜０５　６．６ＣＰＯ２６プレ（Ｈ１１２−６）　０．０１　０．３３　６．６ポスト（Ｇ８９０−１）　２．８　０．７４　２．６省略形：ｐＡＺＴ、ホスファチジルアジドチミジンｐｄｄｔ、ホスファチジルジデオキシチミジンポストＡＺＴ治療、すべての５分離株はＡＺＴへの感度の著しい減少を示した。このことはｐＡＺＴおよびｐｄｄＴでは起こるのが観察されず、ポスト−ＡＺＴ分離株は、新規のリン脂質誘導体の形態で与えられる抗レトロウイルス性ヌクレオシドに対する感度のそれらの通常のレベルを保つということを示した。

例１２ホスファチジルアシクロビルの合成および単純庖疹ウィルス感染されたＷＩ−３８細胞における効能シミリストイルホスファチジル酸にナトリウム塩）はアバンティボーラリピッド（Ａｖａｎｔｉ　Ｐｏ１ａｒＬｉｐｉｄｓ）、バービンガム、ＡＬから得られ、かつ例１で上述されたように遊離酸（ＤＭＡ−Ｈ）に変換された。

アシクログアノシン（アシクロビル、Ｚｏｖｉ　ｒａｘＲ）はシグマケミカル（Ｓｉｇｍａ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｃｏ。

）、セントルイス、ＭＯから得られ、かつ７３ｍｇ（Ｑ。

３２ｍｍｏｌ）は真空オーブンにおいて五酸化リンを介し夜通し乾燥された。２５０ｍｇのＤＭＰＡ−Ｈ（０，４２ｍｍｏｌ）は５０ｍ１丸底フラスコに添加され、かつ真空オーブンにおいて五酸化リンを介し夜通し乾燥された。乾燥アルゴンの下で、７３ｍｇのアシクログアノシン、３１５ｍｇ　（１，０４ｍｍｏ　ｌ）のトリイソプロピルベンゼンスルホニルクロリド（アルドリッチ、ミルウォーキー、ＷＩ）および２ｍｌの乾燥ピリジン（アルドリッチ、ミルウォーキー、Ｗｌ）が丸底フラスコに添加された。反応混合物は１８時間室温でかき混ぜられ、続いて１ｍｌの蒸留水が添加された。

溶剤は真空で蒸発させられ、イエローガムを生じ、それは少量のクロロホルム／メタノール（９／１）で再溶解され、かつシリカゲルのカラムに与えられた（４５　ｇｍ：Ｋｉ　ｅ　ｓ　ｅ　Ｉｇｅ　Ｌ６０ＳＥＭサイエンス、チェリーヒル、ＪＮ）。カラムはクロロホルム９８％メタノール（５００ｍｌ）、クロロホルムに中１０％メタノール（２５０ｍ　ｌ）、続いてクロロホルムに中１５％メタノール（１，５Ｌ）で溶出された。１．５リツトルの先溶出が排除された後、シミリストイルホスファチジルアシクログアノシン（ｐＡＣｖ）が得られた。３つのフラクションが収集され、かつ分析された：フラクション１　（２００ｍｌ、１３０ｍｇｐＡＣＶ）は純粋のｐＡＣＶを含んだ；フラクション２（２００ｍｌ、１５０ｍｇ）およびフラクション３（２００ｍｌ、５０ｍｇ）はｐＡＣＶおよび不純物として少量の開始材料を含んだ。フラクション１は真空で濃縮され、かつ残留物には５ｍｌのシクロヘキサンが添加された；溶液は凍結され、かつ五酸化リンの下で凍結乾燥され純粋のホスファチジルアシクログアノシン（８０ｍｇｚ　０．１ｍｍｏｌ）を生じた。

精製された化合物は、クロロホルム／メタノール／水／アンモニア（体積で７０／３０／１）で展開されたに６Ｇシリカゲルプレート（ワットマン（Ｗｈａｔｍａｎ）インターナショナル、メイドストーン、英国）に与えられるとき、０．２９のＲｆで単一スポットを与えた。ＵＶ吸収は２５６　ｎｍで極大であった（ＣＨＣＬ３において吸光係数＝８．４Ｘ１０３）。リン含有率は３．３０％（理論上３゜８９％）であって、かつ融点は２４５℃であった。ＨＰＬＣ分析のとき、ホスファチジルアシクログアノシンは、０゜５ｍｌ／ｍｉｎの流出速度で１−プロパツール１０．　２５ｍＭリン酸カリウム／ヘキサン／エタノール／酢酸（体積で２４５／１７９／３１１５０１０．５）の移動相で溶出されたとき、１１分の保持時間で単一のピークを与えた（Ｓｐｈｅ　ｒ　ｉ−５；ブラウンリー研究所（Ｂｒｏｗｎｌｅｅ　Ｌａｂｓ）、応用バイオシステム、サンタクララ、Ｗ　ｉ　−３８細胞はアメリカンタイプカルチアコレクション（ロックビル、メリーランド　２０８５２）から得られ、かつ１０％ウシ胎児血清（Ｆ　ＣＳ）でダルベコの（Ｄｕｌｂｅｃｃｏ　’Ｓ）最小必須培地（ＤＭＥＭ）で培養された。

細胞は密集するまで２５０ｃｍ２のビンにおいて培養された。

ウィルス単純庖疹ウィルス（Ｈ８ｖ）タイプ１　（Ｈ８Ｖ−１）およびタイプ２　（Ｈ８Ｖ−２）はアメリカンタイプカルチアコレクションから得られた。両方のウィルス株はＷ　ｉ　−３８細胞で準備された；株ウィルスが単なる凍結および解凍によって採集され、かつ細胞破片が低速遠心分離（２０００ｒｐｍ）によって清澄にされたとき、広範な細胞変性効果（ＣＰ　Ｄ）が観察された。ウィルスを含む上清液は小さなバイアルに分割され、かつ８℃で蓄えられた。Ｈ３Ｖ−１とＨ３Ｖ−２との両方の株は実験で使用される前にＷｉ−３８細胞において力価測定された。

単純庖疹ウィルスプラーク還元検定プラーク低減検定はホスファチジルアシクロビルまたはフリーのＡＣＶの抗ウイルス性効果を測定するために使用された。Ｗ　ｉ　−３８細胞は５分間０．２５％トリプシンでトリプシン化された。細胞は残りのトリプシンを除去するために採集され、かつ遠心分離され、かつ細胞ベレットは１０％ＦＣ８でＤＭＥＭにおいて再懸濁された。Ｗ　ｉ　−３８細胞は１時間の間９６井戸型プレート（５Ｘ１０細胞／井戸）に定置された。感染された細胞はそれからホスファチジルアシクロビルまたはＡＣＶで処理された。抗ウイルス性薬剤は貯蔵溶液で準備され、それらはそれから０．５％メチルセルロースを含むＤＭＥＭにおいて２％ＦＢＳで２倍希釈された。１００μｌの各希釈された抗ウイルス性薬剤はＨ８Ｖ感染された細胞の各井戸に添加された。

対照および薬剤治療された細胞培養は２４時間の間５％二酸化炭素で３７℃インキュベータにおいてインキュベーションされた。Ｈ８Ｖ感染された細胞（抗ウイルス性薬剤なしの対照）が読取り可能な数のプラークを示したとき、プレート全体はメタノールで固定され、かつ１０分間１％のクリスタルバイオレットで染色された。染料は水道水で濯がれ、かつプレートは乾燥され、かつプラークが数えられた。ＡＣＶまたはホスファチジルアシクロビルの抗ウイルス性効果は以下の例で示されるようにプラーク低減の測定により定められた。

結果＋ＷＩ−３８細胞におけるＨ８Ｖ−１によるプラーク形成へのアシクロビルおよびホスファチジルアシクロビルの効果アシクロ　１　２　平均　％ビル濃度　薬剤なし１０　ｕＭ　Ｏ０００２，５００００＋、２５　４　３　３．５　１３０．６２５　８　６　７　２６０．３１　１７　１９　２０　６５０．１５５　１８　２２　２０　７３０　２０；３０　３０；３０　２７．５　１００ホスフアチジル　ＡＣＶ　１　２　平均　％薬剤なし２１４ａＭ　有毒　有毒　−− ２７２３２，５９１３，４４６５１８６，７６９７，５２７３，３１０１２１１４０１，６７１７２０１８，５６７０，８４２４２６２５９１０２０；３０　３Ｇ、３０　２７．５　１００上に示されるデータは、ホスファチジルアシクロビルがＨ３Ｖ−１感染されたＷ　ｉ　−３８細胞において効果的であるということを示す。５０％抑制を生じる濃度はアシクロビルに対し２ｕＭ対０．４ｕＭである。同様の結果は感染されたＷ　ｉ　−３８細胞においてＨ３Ｖ−２で得られた。

皿よ１５′−バルミトイル（３′−デオキシ−３′−アジド）チミジンの合成０．５グラムのＡＺＴ　（１，８７ｍｍｏ　１）は、１０ｍ１の乾燥クロロホルムおよび２ｍｌの乾燥ピリジンにおいて溶解された。５ｍｌの乾燥クロロホルムで溶解された０゜７８グラム（２，８ｍｍｏ　ｌ）のバルミトイルクロリド（アルドリッチケミカルズ、ミルウォーキー　ＷＩ）は４℃で２０分の期間にわたってゆっくりと添加され、かつ反応混合物はかく拌で室温まで温まるようにされた。２０時間の後、反応は８ｍｌ＋の蒸留水の添加で停止され、がっ３８ｍ１のクロｏホルム／メタノール１０．５Ｎ　ＨＣＩ（体積で１／２１０．８）が添加された。相は１０ｍ１のクロロホルムおよび８ｍｌの０．５Ｎ　ＨＣＩの添加にょり分けられた。必要とされる化合物を含む有機相は０．　５Ｎ重炭酸ナトリウムでさらに洗浄された。下のクロロポルム相は無水硫酸ナトリウムで乾燥され、がっ真空の下で蒸発させられた。化合物は一２０℃でクロロホルム／アセトンから結晶化された。さらなる精製は珪酸カラムクロマトグラフィによって得られ、かつ１４５ｍｇの精製５′−バルミトイル（３′−アジド、３′−デオキシ）チミジンが得られた（収率１５．３％）。元素分析、理論値ｃ　６１゜５９、Ｈ８，５、Ｎ１３．８およびｏ　１５．８；実測値Ｃ６０，７４、Ｈ８，６、Ｎ１３．５および０１７．９゜シリカゲルＧ薄層クロマトグラフィプレート上のＲｆ：０．９２（クロロホルム／メタノール／アンモニア／水、７０／３０／１／１）；０．８３　（ヘキサン／エチルエーテル／酢酸、８０／２０／１）および０．８６（クロロホルム／アセトン、９４／６）　、ｍ、ｐ、７７−８０℃、ＵＶｍａｘ　２６５゜ＨＩＶ感染されたＨＴ４−６Ｃ細胞におけるバルミトイルＡＺＴの効能バルミトイルＡＺＴは例８で述べられたようにリポソームに取込まれ、かつ例１０および１１で述べられたようにＬＡＶ−１感染されたＨＴ４−６Ｃ細胞でインキュベートされた。０．８ｕＭバルミトイルＡＺＴは２５％プラーク形成を抑制した（処理されない対照において１３４プラーク対１７６）。

以上のことからほかのヌクレオシド類縁体およびそのリン脂質誘導体は同様の結果を得るために例において代わりに用いられ得るということが明らかであるはずである。ＡＺＴ−−リン酸またはほかの抗ウイルス性ヌクレオシドリン酸もまたリポソームの水性区分に含まれてもよい。脂質抗ウイルス性ヌクレオシドのモルパーセントは総脂質混合物の０．１から１００％に変化してもよい。さらに、抗ウイルスヌクレオシド脂質の混合物はウィルス性の病気の治療のためのリポソームを構成する際に使用されてもよい。

さらに、この発明は任意の特定の抗ウイルス性ヌクレオシド類縁体の使用に制限されず、むしろ、この発明の有益な結果はこれらの材料の脂質誘導体からのリポソームの形成からもたらされるということが強調されるべきである。このように、抗ウイルス性ヌクレオシドが現在知られているか、またはそれが将来知られるようになるかにかかわらず、そこから現在熟考される脂質誘導体を形成する方法は、当業者には明らかになるであろうように、確立された化学技術に基づき、かつリポソームへのそれらの取込みは前述の開示によって広く可能となる。この合成は、この発明の実施において使用するために本質的にすべてのヌクレオシド類縁体からの化合物の形成に広（適用可能であるということが再び強調されるべきである。

したがって、この発明はその精神または本質的な特徴から逸脱することなくほかの特定の形態において実施されてもよい。説明された実施例はすべての点において例示するものとしてのみ考えられるべきで、かつ制限するものではなく、シたがって、この発明の範囲は前述の説明によって゛　よりむしろ添付の請求の範囲によって示される。請求の範　囲の法律上有効な均等の意味および範囲の中に収まるすべての変更はそれらの範囲で包含されるべきである。

引用文献１、’　Ｒｉｃｈｍａｎ、　Ｄ、Ｄ、、　Ｋｏｒｎｂｌｕｊｈ、　Ｒ，Ｓ、　ａｎｄ　Ｃａｒｓｏｎ、　Ｄ、Ａ、　（１９８７）　Ｊ、　Ｅｘｐ、　Ｍｅｄ、、１６６：　１１４４−１１４９゜２、Ｆｉｓｃｈｌ、　Ｍ、Ｓ、　Ｒｉｃｈｍａｎ、　Ｄ、Ｄ、、　Ｇｒｉｅｃｏ、　Ｍ、Ｈ，ｅｊ　ａｔ、、　（１９８７）　Ｎｅｗ　Ｅｎｇ、Ｊ、　Ｍｅｄ、、３１７：　１８５−１９１３、Ｒｉｃｂｍａｎ、　Ｄ、Ｄ、、Ｆｉｃｈｌ、Ｍ、Ａ、、Ｇｔｉｅｃｏ、　Ｍ、Ｈ，ｅｔ　ａｌ。

、　（１９８７）　Ｎｅｗ　Ｅｎｇ、Ｊ、　Ｍｅｄ、、３１７＋　１９２−１９７４、Ｂａｎｇｈａｍ、　Ａ、Ｄ、、５ｔａｎｄｉｓｈ、　Ｍ、Ｍ、ａｎｄ　Ｗａｊｋｉｎｓ、Ｊ、Ｃ、（１９６５）　Ｊ、　Ｍｏｌ　Ｂｉｏｌ、、２３：　２３８−２５２゜５、Ｂｌａｃｋ、　Ｃ，Ｄ、Ｙ、、　Ｗａｊｓｏｎ、　Ｇ、Ｊ、　ａｎｄ　Ｗａｒｄ、　Ｒ，Ｊ、　（１９７７）　Ｔｒａｎｓ、Ｒｏｙ、ＳＯＣ，Ｔｒａｐ、　Ｍｅｄ、　Ｈ７ｇ、、７１：　５５０−５５２゜６、Ａｌｖｉｎｇ、　Ｃ，Ｒ，、５ｔｅｃｋ、Ｅ、Ａ、　Ｃｈａｐｍａｎ、　Ｗ、Ｌ、、　ＷｉｉＩｓ、　Ｖ、Ｂ、、Ｈａｎｄｒｉｃｋｓ、Ｌ、Ｄ、５ｖａｒｊｚ、　Ｇ、Ｍ、ａｎｄ　Ｈａｎｓｏｎ、　Ｗ、Ｌ。

（１９７８）Ｐ＋ｏｃ、Ｎａｊｌ、　Ａｃａｄ、Ｓｃｉ、　ＵＳＡ　７５：　２９５９−２９６３゜７、Ｌｏｐｅｚ−Ｂｓｒｅｓｔｅｉｎ、　Ｇ、（１９８６）　Ａｎｎ、Ｉｎｔ、　Ｍｅｄ、、１０３：　６９４−６９９゜８、Ｈａｒｍａｎ、Ｅ、Ｈ，Ｒａｈｍａｎ、　Ａ、、Ｆｅｒｒｘｎｇ、　Ｖ、１．　Ｖｉｃｋ、Ｊ、Ａ、ａｎｄ　Ｓｈ！ｉｎ、Ｐ、Ｓ、　（１９８３）Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓ、、４３：　５４２７−５４３２゜９、Ｏｓ＋ｒｏ、　Ｍ、（１９８７）　Ｓｃｉ、　Ａｍ、２５６：　１０３−１１１１０、　５ａｌａｈｕｄｄｉｎ、Ｓ、２．、　Ｒｏｓａ、　Ｒ，Ｍ、Ｇｒｏｏｐｍａｎ、１．Ｅ、。

Ｍａｒｋｈａｍ、Ｐ、Ｄ、ａｎｄ　Ｇ１１ｌｏ、　Ｒ，Ｃ，（１９１１５）　Ｂｌｏｏｄ、　６８：　２８１１１、Ｋｏｅｎｉｇ、Ｓ、、　Ｇｅｎｄｅｌｍｘｎ、　Ｈ，Ｅ、、　Ｏ＋ｅｎｕｅｉｎ、］、Ｍ。

Ｄａｌｃａｎｊｏ、　Ｍ、Ｃ０Ｐｅｚｃｓｈｋｐｕ、　Ｇ、［１，、Ｙｏｎｇｂｌｕｔｈ、　Ｍ、Ｊｉｎｏｊｔａ、Ｆ、、Ａｋｓｍｉｔ、Ａ、、Ｍａｒｔｉａ、Ｍ、Ａ、ｘｎｄ　Ｆｍｕｃｉ、Ａ、Ｓ、（１９８６）　５ｃｉｅｎｃｅ、２３３：　１０８９−１０９３１２、　Ｐｏ５ｔ、Ｇ、、Ｋｉｒｓｃｈ、Ｒ，ｘｎｄ　Ｋｏｅｓｊｌｅｔ、　Ｔ、　（１９８４）ｉｎ　Ｌｉｐｏｓｏｍｅ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇ７．　Ｍｏ１．　ＩＩＩ、Ｇ、Ｇｒｅｇｏｒｉａｄｉｓ、Ｅｄ、、ＣＲＣＰｒｅｓｓ、ＢＯＣＩ　Ｒａｔｏｎ、ｐ、１−２８゜１３、　５ｃｈｅｒｐｈｏｆ、　Ｇ、（１９８６）　ｉｎ　Ｌｉｐｉｄｓ　ｘｎｄ　Ｂｉｏｍｅｍｂｒｘｎｅｓ、Ｐａ５ｔ、Ｐｒｅｓｅｎｔ　ａｎｄ　Ｆｕｔｕｒｅ、ｏｐ　ｄｅｎ　Ｉｌ：ａｍｐ、Ｊ、、Ｒｏｅｌｏｆｔｅｎ、Ｂ、ａｎｄ　Ｗｉｒ＋ｚ、Ｋ、Ｗ、Ａ、、Ｅｄｓ、、Ｅｌｓｅｖｉｅｔ　Ｎｏｒｔｈ　Ｈ。

１１ａｎｄ、Ａｍｓｔｅｒｄａｍ、ｐ、１１３−１３６゜１４、　Ｎｕｌｅ７．　Ｓ、Ｇ、、Ｈｕａｎｇ、Ｌ、ｔｎｄ　Ｒｏｕｔｅ、Ｂ、Ｔ、（１９８７）　Ｊ、Ｉｍｍｕｎｏｌ、、Ｈ６：　６１１１−６１１５゜１５、　Ｋｏｎｄ、　Ｍ、、　Ａｌｖｉｎｇ、　Ｃ，Ｒ，Ｒ１１ｌ、　Ｗ、Ｌ、、　５ｖｘｒｊｘ、　Ｇ、Ｍ、ａｎｄ　Ｃｏｎｎｏｎｉｃａ、Ｐ、Ｐ、Ｇ、　（１９８５）　Ａｎｊｉｍｉｃｒｏｂ、Ａｇｅｎｔｓ　Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ、２７：　９０３−９０７゜１６、　Ｍａ＋５ａｓｈｉｔａ、Ｔ、、Ｒ７ｎ、Ｅ、に、、Ｈｏｎｇ、Ｃｏ、１．　ａｎｄ　Ｍａｃｃｏｓｓ、Ｍ、　（１９８１）　Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｔ、、４１　二　２７０？−２７１３゜１７、　Ｈｏ、Ｄ、Ｗ、Ｈ，ａｎｄ　Ｎｅ１ｌ、ｊ、Ｌ、（１９７７）　Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓ。

、３７：　１６４０−１６４３゜１８、　Ｈｕａｎｇ、Ａ、、Ｈｎａｎｇ、Ｌ、ａｎｄ　Ｋｅｎｎｃｌ、Ｓｌ、（１９８０）Ｊ、Ｂｉｏｌ、Ｃｈｅｍ、　２５５：　８０１５−８０１８゜１９、　Ｌｅｓａｒｍａｎ、Ｌ、Ｄ、、Ｂａｒｂｅｒ、Ｊ、ａｎｄ　Ｋｏｕｔｉｌｓｋ７．　Ｆ。

（１９８Ｑ）ＮＮｕｒｅ、２８８：　６０２−６０２゜２０、　Ｔｏｏｒｅｂ！ｎ、Ｄ、ａｎｄ　Ｔｏｐａｌ、　Ｍ、Ｄ、（１９８３）　Ｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｅｓｉｓ、４：　１５９１−１５９７゜２１、　Ａｇｔａｎｏｆｆ、Ｂ、Ｗ、ｓｎｄ　Ｓｕｏｍｉ、Ｗ、Ｄ、（Ｉｎ２）　Ｂｉｏｃｈｅ　−ｍ、Ｐｔｅｐ、、１０：　４６−５１゜２２、　Ｐｒｏｔｔｅｙ、Ｃ，ａｎｄ　Ｈｘｖｔｈｏｒｎｅ、Ｊ、Ｎ、（１９６７）　Ｂｔｏｃｂｅｍ、Ｊ、、１０５：　３７９−３９２゜２３、　Ｐｏｏｒｔｈｕｉｓ、Ｂ、Ｊ、Ｈ，Ｍ、ａｎｄ　Ｈｏ５ｔｅｔｌｅｒ、Ｋ、Ｙ、（１９７６）　Ｂｉｏｃｈｉｍ、Ｂｉｏｐｈ７ｓ、Ａｃｔｔ　４３１；４０Ｂ−４１５。

２４、　ｊｅｔ　Ｓｅｈｅｇｇｅｔｌ、Ｊ。ｖａｎ　ｄｅｎ　Ｂｏｓｃｈ、Ｈ，、ｖｔｎ　Ｂａａｋ、Ｍ、Ａ、、Ｈｏ５ｊｅｔｌｅｔ、Ｋ、Ｙ、ａｎｄ　Ｂｏｒｓｔ、Ｐ、（１９７１）　Ｂｉｏｃｈｉｍ、Ｂｉｏｐｈ７ｓ、Ａｃｊａ、２３９：　２３４−２４２゜２５、　Ｒｉｔｔｅｎｈｏｕｓｅ、Ｈ，Ｇ、、Ｓｇｇｕｉｎ、Ｅ、Ｂ、、Ｆｉｓｈｅｒ、Ｓ、に、ａｎｄ　Ａｇｒａｎｏｆｆ、Ｇ、Ｗ、（１９１ｔｌ）　Ｊ、Ｎｓｎｒｏｃｈｅｍ、、３６：　９９１−９９９゜２６．０１ｓｏｎ、Ｆ、、Ｈｕｎｔ、Ｃ，Ａ、５ｘｏｋａ、Ｆ、Ｃ，、Ｖｘｉｌ、Ｗ、Ｊ、ａｎｄ　Ｐａｐａｈａｄｉｏｐｏｕｌｏｓ、Ｄ、（１９７９）　Ｂｉｏｃｈｉａ＋、Ｂｉｏｐｈ７ｓ、Ａｅｔａ、５５７：　９−２３゜２７、３ｚｏｋａ、Ｆ、、ｘｎｄ　Ｐａｐａｈａｄｊｏｐｏｕｌｏｔ、Ｄ、（１９７ｇ）　Ｐｒ。

ｃ、Ｎａ１．Ａｃｘｄ、Ｓｃｉ、７５：　４１９４−４１９８゜２８、Ｍｘ７ｈｅｖ、Ｅ、、Ｌａ！ｏ、Ｒ，、Ｖａｉｌ、Ｗ、Ｊ、、Ｋｉｎｇ、Ｊ、、Ｇｔｅｅｎ、Ａ、Ｍ、（１９８４）　７７５：　１６９−１７５．２９、　Ｋｉｍ、Ｓ、、Ｔｕｔｋｅｒ、Ｍ、、Ｃｈｉ、Ｅ、、ｅｔ　ａｌ、、Ｂｉｏｃｈｉｍ、Ｂｉｏｐｂｙｓ、Ａｃｔ、？２１１：　３３９：３４ｇ。

３０、　Ｍａ４ｅｒ、Ｌ、Ｄ、、、Ｈｏｐｅ、Ｍ、Ｊ、ａｎｄ　Ｃａ１ｌｉｓ、Ｐ、Ｒ，（１９８６）　Ｂｉｏｃｈｉｍ、Ｂｉｏｐｈ７ｓ、Ａｃｔｘ、８５８：　１６１−ｊ６８゜３１、　Ｆｕｋａｎｇａ、Ｍ、、Ｍｉｌｌｅｒ、Ｍ、Ｍ、、Ｈｏ５ｊｅｔｌｅｔ、Ｋ、Ｙ、１ｎｄ　Ｄｅｆｔｏｔ、Ｌ、１．　（１９８４）　Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ、１１５：　７５７−７６１゜３２、　８ｔｏｖｎ、　Ｄ、Ａ、、　Ｍａｌｋｉｎ　Ｔ、　ａｎｄ　Ｍａｌｉｐｈａｎｊ、　Ｇ、に、　（１９５５）　Ｊ、　Ｃｈｅｍ、　Ｓｏｅ、（Ｌｏｎｄｏｎ）　ｐＬ　１５８４ −１５８８゜３３、Ｈｅａｔｈ、　Ｔ、Ｄ、　Ｌｏｐｅｘ、　Ｎ、Ｇ、　Ｐｉｐｅｒ、　Ｊ、Ｒ，、Ｍｏｎｊｇｏｍｅｒ７．　Ｊ、Ａ、、５ｔｅｒａ、　Ｗ、Ｈ，ａｎｄ　Ｐａｐａｈａｄｉｏｐｏｏｌｏｓ、　Ｄ、（１９８６）　Ｂｉｏｃｈｉｍ、Ｂｉｏｐｂｙｓ、Ａｃｊａ、８６２：　７２−８０゜３４、Ｂｌｉｇｈ、　Ｅ、　ａｎｄ　Ｄｙｅｒ、　Ｗ、（１９５９）　Ｃｘｎａｄ、　Ｊ、　Ｂｉｏｃｈｅｍ、Ｐｈ７ｓｉｏ１．　３７：　９１１−９１７゜３５、Ｒｏａｅｎｔｈａｌ、　Ａ、Ｆ、　ａｎｄ　Ｇｅ７ｅｒ、　Ｒ，Ｐ、　（１９６０）　Ｊ、旧ｏｆ、Ｃｈｅｗ、２３５＋２２０２゜メスタ／Ａ’７１！７−ノ’ｙ：、ＣＥＪ−４ｗｃ　ｆｔ１Ｂ＃ににる　ｐｘｔｌ　ｔＬｋ　にｆｆ１Ｊソ木−スフー＋甲の効１ヒ１ミイｉリ　ＩＬ＾５　、ＬＨＮ７１ｆ７−　ｌΔ：　ＣＥＨｗｔｊＷＥＥ＋；ｘうＰｚｕ　Ｉｌｋ　を才Ｄ４７Ａ、ｖＮ　めｌン臥゛りおスフし１杯１ｎ交を栗、ｔｉｅｓθｆ−１−”　もｓ’ｉｐ　’ｚ・ｔｙ＞　ＣＥＭ　Ｖ／７　Ｈｊｉｌｌｒ＝ｊ６　ＰＪ’ｌ　／Ａｌｌ：す１す番ＡＶＮろ・よム・９広゛１クレオケμ・　ｎ史々Ａ（東刺；￥１ＬＩＬ、　ＬＬ／’ｆ国際調査報告

Claims

【特許請求の範囲】

１．　抗ウィルス特性を有する化合物であって、プリンまたはピリミジンまたはその類縁体を含む塩基部分と、ペントース残基を含む糖部分とを有するヌクレオシド類縁体を含み、少なくとも１つの前記部分は天然由来でないヌクレオシド部分であり、前記ペントース残基に結合された脂質部をさらに含み、前記ペントース残基がアラビノフラノースであり、かつ前記塩基部分がシトシンまたはアデニンであるとき前記化合物はリポソームの形態であるという条件を有する、化合物。
２．　前記天然由来でないのヌクレオシド成分は代替、削除または置換によって天然由来の塩基またはペントースの類縁体である、請求項１記載の化合物。
３．　前記ペントース残基はリボースの２′，３′−ジデオキシ，２′，３′− ジヒドロ，アジドまたはハロ誘導体、またはリボースの非環の水酸化された断片である、請求項１記載の化合物。
４．　前記ペントース残基は２′，３′−ジデオキシリボースであり、かつ前記ヌクレオシド類縁体は２′，３′−ジデオキシシチジン；２′，３′−ジデオキシチミジン；２′，３′−ジデオキシグアノシン；２′，３′−ジデオキシアデノシン；２′，３′−ジデオキシイノシン；または２，６ジアミノプリン，２′ ，３′−ジデオキシリボシドである、請求項３記載の化合物。
５．　前記ペントース残基は２′，３′−ジデヒドロリボースであり、かつ前記ヌクレオシドは２′，３′−ジデヒドロチミジン；２′，３′−ジデヒドロシチジン炭素環；または２′，３′−ジデヒドログアノシンである、請求項３記載の化合物。
６．　前記ペントース残基はリボースのアジド誘導体であり、かつ前記ヌクレオシドは３′−アジド−３′−デオキシチミジン；３′−アジド−３′−デオキシグアノシン；または２，６−ジアミノプリン−３′−アジド−２′，３′ジデオキシリボシドである、請求項３記載の化合物。
７．　前記ペントース残基はリボースのハロ誘導体であり、かつ前記ヌクレオシドは３′−フルオロ−３′−デオキシチミジン；３′−フルオロ−２′，３′− ジデオキシグアノシン；２′，３′−ジデオキシ−２′−フルオロ−ａｒａ−アデノシン；または２，６−ジアミノプリン−３′−フロオロ−２′，３′−ジデオキシリボシドである、請求項３記載の化合物。
８．　前記ペントース残基はリボースの非環の水酸化された断片であり、かつ前記ヌクレオシドは９−（４，−ヒドロキシ−１′，２′−ブタジエニル）アデニン，３−（４，−ヒドロキシ−１′，２′−ブタジエニル）シトシン，９−（２ −ホスホニルメトキシエチル）アデニンまたは３−ホスホノメトキシエチル，２，６−ジアミノプリンである、請求項３記載の化合物。
９．　前記ヌクレオシド類縁体はアシクロビル，ガンシクロビル，１−（２′− デオキシ−２′−フルオロ−１−β−Ｄ−アラビノフラノシル）−５−ヨードシトシン（ＦＩＡＣ）または１（２′−デオキシ−２′−フルオロ−１−β−Ｄ− アラビノフラノシル）−５−ヨードウラシル（ＦＩＡＵ）である、請求項１記載の化合物。
１０．前記ヌクレオシド類縁体は２−クロロデオキシアデノシンである、請求項１記載の化合物。
１１．　前記ヌクレオシド類縁体は、ＡｚｄｄＣｌＵ，ＡｚｄｄＭｅＣ，ＡｚｄｄＭｅＣ　Ｎ４−ＯＨ，ＡｚｄｄＭｅＣ　Ｎ４Ｍｅ，ＡｚｄｄＥｔＵ，ＡｚｄｄＵ，ＡｚｄｄＣ，ＡｚｄｄＦＣ，ＡｚｄｄＢｒＵ，およびＡｚｄｄＩＵからなるグループから選択された３′−アジド−２′，３′ジデオキシピリミジンである、請求項１記載の化合物。
１２．　前記ヌクレオシド類縁体は、３′−ＦｄｄＣ；Ｕ，３′−ＦｄｄＵ，３ ′−Ｆｄｄｔ，３′−ＦｄｄＢｒＵ，および３′−ＦｄｄＥｔＵからなるグループから選択された３′−ハロピリミジンジデオキシヌクレオシドである、請求項１記載の化合物。
１３．　前記ヌクレオシド類縁体は、Ｄ４Ｔ，Ｄ４Ｃ，Ｄ４ＭｅＣ，およびＤ４Ａからなるグループから選択された２′，３′−ジデヒドロ−２′，３′−ジデオキシヌクレオシドである、請求項１記載の化合物。
１４．　前記ヌクレオシドは、５−Ｆ−ｄｄＣ，ｄｄＣおよびｄｄＴからなるグループから選択された２′，３′−非置換ジデオキシピリミジンヌクレオシドである、請求項１記載の化合物。
１５．　前記ヌクレオシドは、ｄｄＡ，ｄｄＤＡＰＲ，ｄｄＧ，ｄｄＩ，およびｄｄＭｅＡからなるグループから選択された２′，３′−非置換ジデオキシプリンヌクレオシドである、請求項１記載の化合物。
１６．　前記ヌクレオシドは、３−Ｎ３ｄｄＡＰＲ，３−Ｎ３ｄｄＧ，３−ＦｄｄＤＡＰＲ，３−ＦｄｄＧ，３−ＦｄｄａｒａＡ，および３−ＦｄｄＡからなるグループから選択された糖置換ジデオキシプリンヌクレオシドである、請求項１記載の化合物。
１７．　前記ペントース残基の５′位と前記脂質部との間の基を結合する−リン酸、二リン酸、または三リン酸をさらに含む、請求項１から請求項１６のいずれかに記載の化合物。
１８．　ホスファチジル（３′−アジド−３′−デオキシ）チミジン（ｐＡＺＴ）。
１９．　ホスファチジル（２′，３′−ジデオキシ）シチジン（ｐｄｄＣ）。
２０．　ホスファチジル（２′，３′−ジデオキシ）チミジン（ｐｄｄＴ）。
２１．　（３′−アジド−３′−デオキシ）チミジン二リン酸ジグリセリド（ＡＺＴｄｐｄｇ）。
２２．　ホスファチジルアシクロビル（ＰＡＣＶ）。
２３．　１−Ｏ−ステアロイルグリセロ−ｒａｃ−３−ホスホ−５′−（３′− アジド，３′−デオキシ）チミジン。
２４．　２つの官能基を含み、かつ前記官能基の間に０から１０の炭素原子を有する脂肪族の架橋をさらに含み、前記架橋は前記脂質および前記ペントース残基を接続する、請求項１から請求項１６のいずれかに記載の化合物。
２５．　前記脂質部は脂肪酸である、請求項１から請求項１６のいずれかに記載の化合物。
２６．　前記脂質部はモノアシルグリセロールまたはジアシルグリセロールである、請求項１から請求項１６のいずれかに記載の化合物。
２７．　前記脂質部はホスファチジン酸である、請求項１から請求項１６のいずれかに記載の化合物。
２８．　前記脂質は糖またはポリヒドロアルコールを含む頭部の基を有するリン脂質である、請求項１記載の化合物。
２９．　前記脂質部はビス（ジアシルグリセロ）リン酸を含む、請求項２７記載の化合物。
３０．　前記脂質部はジホスファチジルグリセロールを含む、請求項２７記載の化合物。
３１．　前記脂質部はＤ，Ｌ−２，３−ジアシルオキシプロピル−（ジメチル） −ベーターヒドロキシエチルアンモニウム基である、請求項１から請求項１６に記載の化合物。
３２．　前記脂質部は１ないし４の脂肪酸部を含み、各前記部は２ないし２４の炭素原子を含む、請求項１記載の化合物。
３３．　前記脂質部の少なくとも１つの脂肪酸部は不飽和であり、かつ１から６個の二重結合を有する、請求項２７記載の化合物。
３４．　１，２−ジアシルグリセロホスホ−５′−（２′，３′−ジデオキシ）チミジンを含む、請求項１記載の化合物。
３５．式：（Ｌ）ｍ−（Ｗ）ｎ−Ａ−Ｑ−Ｚを有し、そこでＺは前記ヌクレオシド類縁体の塩基部分であり、Ｑはペントース残基であり、ＡはＯ，Ｃ，またはＳであり、Ｗはリン酸であり、ｎ＝０〜３であり、かつＬは脂質部であり、そこでｍ＝１〜５であり、かつ各Ｌは、各しがＡに直接結合されるｎ＝０であるとき以外は、Ｗに直接結合される、請求項１記載の化合物。
３６．式： ▲数式、化学式、表等があります▼；▲数式、化学式、表等があります▼；または▲数式、化学式、表等があります▼を有し、Ｚは前記ヌクレオシド類縁体の置換もしくは非置換プリンまたはピリミジン基であり、Ｑはペントース残基であり、ＡはＯ，Ｃ，またはＳであり、Ｗはリン酸であり、Ｌ１は（ＣＨ２−ＣＨＯＨ−ＣＨ２）であり、かつしは脂質部である、請求項１記載の化合物。
３７．　各ＬはＲからなる基から独立して選択され、▲数式、化学式、表等があります▼；▲数式、化学式、表等があります▼；ａｎｄ▲数式、化学式、表等があります▼ここでＲ、Ｒ１およびＲ２はそれぞれ独立したＣ１ないしＣ２４の脂肪族基である、請求項３５または請求項３６に記載の化合物。
３８．　Ｒ、Ｒ１およびＲ２は独立して０から６の不飽和の部位を有し、かつ構造ＣＨ３−（ＣＨ２）ａ−（ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ２）ｂ−（ＣＨ２）ｃ−Ｙを有し、ａおよびｃの合計は１ないし２３であり、かつｂは０ないし６であり、かつＹはＣ（Ｏ）Ｏ−，Ｃ−Ｏ−，Ｃ＝Ｃ−Ｏ−，Ｃ（Ｏ）Ｓ−，Ｃ−Ｓ−，またはＣ＝Ｃ−Ｓ−である、請求項３７記載の化合物。
３９．　前記ペントース残基は、前記プリンの９位で、または前記ピリミジンの１位で付加されたリボース、ジデオキシリボース、ジデヒドロリボース、またはアジドまたはハロ置換リボースを含む、請求項３５から請求項３８のいずれかに記載の化合物。
４０．　少なくとも一部分請求項１から請求項３９のいずれかの化合物から形成されるリポソーム。
４１．　抗ウィルス性ヌクレオシドの脂質誘導体を合成するための方法であって、リボース水酸基を有する抗ウィルス性ヌクレオシドを結合試薬の存在においてリン脂質と反応させ、それによって前記ヌクレオシドはリン酸結合によって前記リボース水酸基の位置で前記リン脂質に結合され、請求項１から請求項３８のいずれかに記載の化合物を形成するステップを含む、方法。
４２．　リン脂質はジアシルリン酸である、請求項４１記載の方法。
４３．　前記リン脂質はホスファチジル酸である、請求項４１記載の方法。
４４．　前記リン脂質はセラミドである、請求項４１記載の方法。
４５．　抗ウィルス性ヌクレオシドの脂質誘導体を合成する方法であって、抗ウィルス性ヌクレオシドーリン酸を、Ｌが脱離基を表わす試薬ＨＬと反応させ、ヌクレオシドＰＯ４−Ｌを形成するステップと、前記ヌクレオシドＰＯ４−Ｌをホスファチジル酸と反応させ前記酸をピロリン酸結合を介し前記ヌクレオシドに結合するステップとを含む、方法。
４６．　前記ヌクレオシド１リン酸はＡＺＴ　５′−一リン酸である、請求項４５記載の方法。
４７．　ヌクレオシド類縁体のグリセリド誘導体を合成する方法であって、モノグリセリドまたはジグリセリドと抗ウィルス性ヌクレオシドーリン酸を塩基性触媒の存在において結合試薬を用いて結合するステップを含む、方法。
４８．　前記グリセリドは１−Ｏ−ステアロイルグリセロールであり、かつ前記ヌクレオシドはＡＺＴ−リン酸である、請求項４７記載の方法。
４９．　前記ヌクレオシド類縁体はアデニンまたはシチジン部分を含み、結合反応の前に前記部分の反応性アミノ基を保護するステップと、前記ヌクレオシド類縁体が脂質に結合された後、前記基を脱保護するステップとを含む、請求項４１、請求項４５、または請求項４７のいずれかに記載の方法。
５０．　哺乳動物のウィルス感染を治療するための方法であって、請求項１から請求項３９のいずれかに従った効果的な量の化合物を投与するステップを含む、方法。
５１．　前記ウィルス感染はヒトにおける単純庖疹感染であり、かつ前記化合物はホスファチジルアシクロビルである、請求項５０記載の方法。
５２．　前記哺乳動物はヒトであり、かつ前記ウィルスはＨＩＶレトロウィルスである、請求項５０記載の方法。
５３．　前記化合物は５′−パルミトイルＡＺＴである、請求項５２記載の方法。
５４．　前記レトロウィルスはヌクレオシド類縁体に対する発達した抵抗力を有するＨＩＶの株である、請求項５２記載の方法。
５５．　哺乳動物におけるヌクレオシド類縁体の抗ウィルス性効果を長くするための方法であって、請求項１から請求項３９のいずれかの化合物の形態でヌクレオシド類縁体を哺乳動物に投与することを含む、方法。
５６．　前記方法は前記化合物の形態で前記類縁体を投与することを介しヌクレオシド類縁体に対するレトロウィルスの抵抗性を避けること、または弱らせることをさらに含む、請求項５４記載の方法。
５７．　哺乳動物におけるウィルス感染を治療する際に使用するためのリポソームの懸濁液を準備するための方法であって、ヌクレオシド類縁体に付加された少なくとも１つの脂質部を含む、親油性の抗ウィルス性剤を与えることと、親油性の抗ウィルス性剤と薬理学的に許容できる水溶剤とを配合し混合物を形成することと、親油性の抗ウィルス性剤からリポソームを形成することとを含む、方法。
５８．　ヒトのウィルス性感染の治療のための薬剤の調製における請求項１から請求項３９のいずれかの化合物の使用。
５９．　ヒトのウィルス性感染の治療のための請求項１から請求項３９のいずれかに記載の化合物の使用。
６０．　ヒトにおけるＨＩＶ感染の治療のための請求項１から請求項３９のいずれかに記載の化合物の使用。
６１．　ヒトのウィルス性感染の治療における使用のための請求項１から請求項３９のいずれかに記載の化合物。
６２．　ヒトのＨＩＶ感染の治療における使用のための請求項１から請求項３９のいずれかに記載の化合物。
６３．　請求項１から請求項３９のいずれかに記載の化合物と、薬学上許容できるキャリアとを含む製薬組成物。
６４．　請求項１から請求項３９のいずれかに記載の化合物と、少なくとも１つのほかの抗ウィルス性化合物とを含む、製薬組成物。
６５．　ヒトのウィルス感染の治療のための請求項６３または請求項６４に記載の組成物の使用。
６６．　ヒトのウィルス感染の治療における使用のための請求項６３または請求項６４に記載の組成物。