JPH04501509A - Ｅｌａｍ―１およびその融合蛋白をコードしているクローンされた遺伝子、それから発現された蛋白質産物、医薬組成物およびその用途 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 発明の名称 ＥＬＡＭ−１およびその融合蛋白をコードしているクローンされた遺伝子、それ から発現された蛋白質産物、医薬組成物およびその用途 発明の分野 本発明は、組換遺伝子の分野におけるものである。

発明の背景 血管の内皮内層への白血球の付着は、炎症およびある種の血管性疾患の過程にお ける特徴的な段階である。血管壁における変化が白血球の付着を促進し得る（コ ーンハイム（Ｃｏｈｎｈｅｉｍ、Ｊ、、Ｌｅｃｔｕｒｅｓ　１ｎＧｅｎｅｒａｌ 　Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ　（Ｎｅｗ　Ｓｙｎｄｅｎｈａｍ　５ｏｃｉｅｔｙ、　Ｌ ｏｎｄｏｎ）　Ｖｏｌ、１＋　２ｎｄ＋：ａ、　（１８９８）））ということは 長い間推測されてきたが、最近まで、この相互作用のメカニズムおよびモジュレ ータ−は、明らかにされていなかッＩ；（バーラン（Ｈａｒｌａｎ、Ｊ、Ｍ、、 　Ｂｌｏｏｄ、　６５：５１３−５２５（１９８５）））。

インターロイキン−１（ＩＬ−１）および腫瘍壊死因子（Ｔ　Ｎ　Ｆ　）、およ び細菌性エンドトキシンを包含するある種の炎症／免疫サイトカインは、培養さ れたヒト血管内皮に亘接作用し、白血球および関連セルラインについてその表面 の付着性を増大することが示された。

ベビラクア等（Ｂｅｖｉｌａｃｑｕａ、Ｍ、Ｐ、　ｅｔ　ａｌ、）、　Ｊ、Ｃｌ １ｎ、！ｎｖｅｓＬ、　７６：２００３−２０１１（１９８５）；ベビラクア等 （Ｂｅｖｉｌａｃｑｕａ、Ｍ、Ｐ−ｅｔ　ａｌ、）、　Ａｍ、Ｊ、Ｐａｔｈ。

＋、１２１　：３９３−４０３（１９８５）；ベビラクア等（Ｂｅｖｉｌａｃｑ ｕａ、Ｍ、Ｐ、　ｅｔ　ａｌ、）、　Ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ　Ｅｍｉｇｒａｔｉｏ ｎ　ａｎｄ　Ｉｔｓ　５ｅｑｕｅｌａｅ、　Ｍｏｖａｔ、　Ｈ，Ｚ、（ｅｄ、） 、Ｋａｒｇｅｒ。

Ｎ、Ｙ、、ｐｐ、７９−９３（１９８７）；ギャンブル等（Ｇａｍｂｌｅ、Ｊ、 Ｒ，ｅｔ　ａｌ、）、　Ｐｒｏｃ、ＮＣ，Ｊ、　ｅｔ　ａｌ、）、　Ｔｈｅ　Ｐ ｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃ、　Ｍｅｔａｂｏｌｉｃ　ａｎｄ　Ｉｎ＋ｍｕｎｏｌｏｇ ｉｃ　ＡＣＬｉｏｎｓ　ｏｆ　Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−１，Ｋｌｕｇｅｒ、Ｍ 、Ｊ、　ｅｔ　ａｌ６．　（ｅｄｓ−）、Ｌｉ５ｓ、Ｎ、Ｙ。

ｐｐ、４５−５４（１９８５）；カベンダー等（Ｃａｖｅｎｄｅｒ、Ｄ、Ｅ、　 ｅｔ　ａｌ、）、　Ｊ、Ｉｍｍｕｎｏｌ。

５４８−４５５３（１９８６）。

多数の、白血球および内皮細胞表面の蛋白が、内皮細胞−白血球の付着に関係が ある。１例であるＩ　ＣＡＭ−１は、血管内皮を包含する種々の造血細胞および 非造血細胞上で発現される。ＩＣＡＭ−１は、ある種のサイトカインによって内 皮細胞上に誘導される９０ｋＤの糖タンパクである。ＩＣＡＭ−１の発現は、タ ンパク−およびｍＲＮＡ合成−依存性であり、その誘導は可逆的である。ダステ ィ７（１９８６））。

白血球細胞表面の糖タンパク、ＬＦＡ−１は、リンパ球、顆粒球、単球、食細胞 およびＢ細胞上で発現される。ＬＦＡ−１も、白血球−内皮細胞の付着において 役割を果たしている。ＬＦＡ−１は１７７ｋＤ（アルファまたは重）サブユニッ トおよび９５ｋＤ（ベータまたは軽）サブユニットを有するダイマー分子である 。Ｆ　（ａｂ’）２　Ｍａｂは、内皮細胞に対する白血球の付着を効果的に阻害 するアルファおよびベータサブユニットに展開された。メンツアー等（Ｍｅｎｔ ｚｅｒ、Ｓ、Ｊ、　ｅｔ本発明は、ＥＬＡＭ−１またはそのフラグメントをコー ドしているクローンされた遺伝子またはその縮重変異体に関するものである。

本発明のクローンされた遺伝子は、以下のＤＮＡ配列を含有している。

１　ＣＣＴＣＡ（ｉＡｃＡｏ　ＡＣ（ｉｃＡｃｃＡｏτＱＡＴＡＣＣＣＡＣＣＴ 口ＬｆＪＣＡＴＣＣＴＣＴＣＴＴＴＣＡＡｌｌｏｌ　Ｔ（ＡＴ（（ＴＧＣＡ　Ａ ＣＩＴＣＡＣ（ＴＣＴＣＡＣＣＡＡＣＣ（ｎｃＡＴｃＴｒｃｃ　ＡＣＣＣＡＣＣ ＡＩ：Ｃ１１５１ＣＣＡＣＣｎＣＡＡ　ＴＣＣＡＣＣＡＣτ（ＡＡＣＣＣＣＡＣ ＴＣＣＡＣＡＣＡＣＣＡＡ　ＡＴＣ（（ＡＣ’口］゛１２０１　ＧＴＧＡＪＣ（ ｎゴｃｃ＾ｃｖｃｃＡＣＡｃｃｃｎｃｙｃｃ＾＾ＣＣ（ＣＣＡＣＣＣＡＣＣＣＴ Ａ（ＡＴＣ１２５１ＡＡｎＣＴＣｎ（（ＴＡＣＴＣＣＴｒ（ＴＣＣＣＡＣｍ（Ｃ ＣＴｒＡＴＣＣＣＴ　（ＣＡ（ｉｃＴにＴＯ＾１３０１　ＣＴＴＣＴＣＣＴＣＴ 　０ＡＣＣ＾ＣＣＣＴＴ　ＴＴＣＴＣＴＴＣＡＡ　ＣＣＣＡＴＣＣＡＡ＾ＡＧＣ ＣＴＣＣＡＡＴ１３５１　ＣＴＣＣＣ（（ＣＡ〔＾ＣＧＣＣＡＣＴにＣＣＡＣＡ Ａ（ＣＡＣ＾＾Ｃ（ＣＣＡＣＡＴＣＴＣ＾＾Ｃ（ＴＣＴＣ１４０１ＡＵＴＣＣＧ ＡＴＧ　ＣＴＣＴＣＣＡ（ＣＡ　ＣＣ（ＣＣＣＣＡＡ（ｉ　に＋：ＴｒＴＧＣＴ ＣＡ　ＣＣＴＧＴＧＣＴＣＡ２５０１　ＣＣＴＡＣＴＣＡＡＴ　ＣＣＴ（ＴＧＴ ＣＣＣＡＣＣｆｌ：ＴＴＡ（ＴＡ　Ｔｌｌ；（ＡＣＪＪＴｒＴ　ＡＡＴＣＡ（丁 口′Ｃ２５５１ＡＴＣＣＣＴＡＴＣＣＣＡＴＴＣＡＣ丁ＣＣＴｒＣＴＴＡＡＡＣ Ａ　ＣＴｒＣＴｒＡＡＣＣＡＴｒＣＴＣＡＴＡＴ２６０１　ＴＴＴｒＡＣＴＴＣ （ＡＴＴＣＡＡＴＡＴＡ　ＴｒＡＴＡＡＴ（Ｔｒ　（ＣＡＴＡＣＴｒＣＴ　ＴＣ ＡＴｒ（ＡＡＴＡ２６５！　（ＡＡにＴにＴＯＯＴ　ＡＣＣＣＡＣＴｒＡＡ　Ａ ＡＡＡＣＴＴＣＴＡ　ＡＡＴＥ丁ＣＴ（Ａ　ＡＣＴＡＴＣＡ丁ＡＴ３７５１　Ｔ ｒＴＴＡＡＡＧＴＡ　ＴＡＴＡＴｒｒＡＴＴ　ＴＡＡＣＣＴＴＡＴＧ　ＴＣＡＧ ＡＣＣＴＡＴ　ＴＴＣＡＣＡＴＡＡＣ３ｆｌＯＩ　ＡＣＴＡＴＡＡＡＧＣｎｃＡ ｃＡＡＴＡＡ　ＡＴＣＴＧＣｎＡＴ　ＣｍＡＡＡＡＡＡ　ＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡ ３８５］　＾Ａ＾＾ 本発明はま！：、以下のＤＮＡ配列を有する、ＥＬＡＭ−１をコードしている配 列を含有しているクローンされた遺伝子に関するもの８５１　ＣＡＣＡＡＡＴＣ ＣＡ　ＣＣＣＡＡＴＣＣＣ丁Ｔ（ＣＴＣＣＡＡＴＣＴＴＴ（ＣＡＡＡＡＣＣＣＴ Ｃ（、ＡＡＣ（ＴｅＯ２Ｔ（（（Ａ丁ＣにＡＡ　（Ａ（ＡＡＣＣＴＣＴ　Ａ（Ａ 丁ＴｒＣＡ（Ｔ　ＣＴＣＡＡＣＡＡＣＣＡＴｒｒＣＡＡＣＴＡ９５１　ＡＴＣＣ ＣＡ（：（（（ＡＣＡＣＣＣ丁Ｔ（Ａ　ＣＴＣ丁＾〔（Ｔ〔＾　Ｔ〔了ＣＣＣＡ ＾Ｔｒ　（：ＣＣＡＣＭ（ＧＡｌｏｏｌ　ＣＡＡＣ（ＣＡＡ（（：　Ｔ（：ＴＡ ＡＡＣＣＴＣＴＣＡＣＡＴＣＣＡｃＣＣＣ（ＣＴＣＣＣＣＣＡＣ（（ＴＣＡ（： Ａ１０５１　ＡＴＣＣＣＴＣＴＣＴ　ＣＡＣＣＴＣＣＡＣ：ＣＣＡＴｒ（（ＣＣ ＴＣＣＴＣＣＡＣＡＣＴｒ　ＣＡＣＣＴＴＣＡＡＡｌｌｏｌ　ＴＣＡＴ（ＣＴＣ ＣＡ　Ａ（ＴｒＣ＾（ＣＴＣｙｃＡｃｃＡＡｃｃｃ　ｒｒｃＡｙｃｒｒｃ〔ＡＣ ＣＣＡ（（ＡＣＣ１１５１ＣＣＡＣＣＴＴ（：ＡＡ　ＴＣＣＡＣＣＡＣＴＣＡＡ （ｆ：Ｃ（＾ＣＴＣＣＡＣＡＣＡＣＣＡＡ　ＡＴＣＣＣＡｔ１：ｍ１２０ｓ　Ｃ ＴＣＡＡＣ（Ｔｒｒ　ＣＣＡにＴＣＣＡ（＾ｃｃｃｒｒｃｉｃｃｘ＾ｃｃｃｃｃ ｘｃｃｃ　＾ｃｃｃ’ｒ＾ｃｘＴｃ本発明は更に、以下のアミノ酸配列を含有し ている、本発明のクローンされた遺伝子を発現させることによって得られるＥＬ ＡＭ−１に関するものである。

＾５ＱＦＬＳＡＬＴＬＶＬＬＩＫ、ＥＳＣＡＩＳＹＮＴＳＴＥＡＭＴＹＤＥＡＳ ＡＹＣＱＱＲＹＴＨＬＶＡＩＱＮＫＥＥＩＥＹＬＮＳＩＬＳＹＳＰＳＹ　Ｙ　Ｗ ＩＣＩＲＫＶＮＮＶＩＩＶＷＶＣＴＱＫＰＬＴＥＥＡＫＮＷＡＰＣＥ、ＰＮＮＲ ＱＫＤＥＤＣＶＥＩＹＩＫＲＥＫＤＶＣ似　ＷＮＤＥＲＣ５ＫＫＫＬＡＬＣＹＴ 　＾　＾ＣＴＮ　τ　５Ｃ５ＣＨＣＥ（ＶＥＴＩＮＮＹＴＣＫＣＤＰＣＦＳＣＬ ＫＣＥＱＩＶＮＣＴｋＬＥＳＰＥＨＣ５ＬＶ（ＳＨＰＬＧＮＦＳＹ＠　ＳＳＣ５ ＩＳＣＤＲＣＹＬＰＳＳＭＥＴＭＱＣＭＳＳＣＥＶＳＡＰＩＰＡＣＮＶＶＥＣＤ ＡＶＴＮＰＡＮにＦＶＥ（ＦＱＮＰＣ５ＦＰＷＮＴＴ（ＴＦＤＣＥＥＣＦＥＬ＆ ｌにＡＱＳＬＱ（ＴＳＳＣＮＷＤＮ［ＫＰＴＣＫＡＶτ　ＣＲＡＶＲＱＰＱＮＣ ５ＶＲＣ５Ｈ５ＰＡＣＥＦＴＦＫＳＳ（ＮＦＴＣＥＥＣＦＭＬＱＧＰＡＱＶＥ（ ＴＴＱＣＱＷＴＱＱＩＰＶＣＥＡＦＱＣＴＡＬＳＮＰＥＲＣＹＭＮＣＬＰＳ＾５ Ｃ５ＦＲ−ＹＣ５ＳＣＥＦＳＣＥＱＣＦＶＬＫＣ５ＫＲＬＱ（ＣＰＴＣＥＷｔ） ＮＥＫＰＴ（ＥＡＶＲＣＤＡＶＨＱＰＰＫＣＬＶＲ（ＡＨ５ＰＩＣＥＦＴＹＫＳ Ｓ（ＡＦＳＣＥＥ　ＣＦ　Ｅ　Ｌ　Ｙ　ＣＳ　Ｔ　（ｊ、Ｌ　Ｅ　ＣＴ　Ｓ　Ｑ 　ＣＱ　Ｗ　ＴＥＥＶＰＳＣＱＶＶＫ（ＳＳＬＡＶＰＣＫＩＮＭＳ（ＳＣＥＰＶ ＦＣＴＶＣＫＦＡＣＰＥＣＷＴＬＮにＳ　＾　＾　ＲＴＣ（２ＡＴＣＨＷＳＣＬ ＬＰＴＣＥＡＰＴＥＳＮＩＰＬＶＡＣＬＳ＾　＾　Ｇ　Ｌ　Ｓ　Ｌ　Ｌ　Ｔ　Ｌ 　Ａ　Ｐ　Ｆ　Ｌ　Ｌ　ｗ　Ｌ　Ｒ′Ｋ　ＣＬＲＫＡＫＫＦＶＰＡＳＳＣＱＳＬ ＥＳＤＣ５ＹＱＫＰＳＹＩＬ 本発明は更に、ＥＬＡＭ−１またはそのフラグメント、およびジフテリアトキシ ン、リシン、まｊ；はその他の細胞毒性蛋白であってよい第２の蛋白からなる融 合蛋白をコードしている、クローンされｔ；遺伝子まｔ；はその縮重変異体に関 するものである。

本発明はまた、本発明のクローンされｔ；遺伝子を含有しているプラスミド、本 発明のプラスミドで形質転換された宿主、および本発明の形質転換宿主によって 発現されたＥＬＡＭ−１まｔ；はその７ラグメントに関するものである。

本発明は更に、ＥＬＡＭ−１またはその７ラグメント、およびジフテリアトキシ ン、リジンまたはその他の細胞毒性蛋白であってよい第２の蛋白からなる融合蛋 白に関するものである。

本発明はまた、ＥＬＡＭ−１またはそのフラグメント、および薬学的に許容し得 る担体を含有してなる医薬組成物に関するものである。

本発明は更に、ＥＬＡＭ−１またはそのフラグメント、およびジフテリアトキシ ンまたはりシンであってよい第２の蛋白からなる融合蛋白を含有する医薬組成物 に関するものである。

本発明はまた、ＥＬＡＭ−１またはその７ラグメントを含有する医薬組成物を患 者に投与することからなる炎症の治療法に関するものである。

本発明はまた、ＥＬＡＭ−１またはその７ラグメントを含有する医薬組成物を患 者に投与することからなる再潅流後の損傷の予防まｔ；は治療の方法に関するも のである。

本発明はまた、ＥＬＡＭ−１またはその７ラグメントを含有する医薬組成物を患 者に投与することからなる白血病またはリンパ腫の治療のための方法に関するも のである。

本発明はまた、ＥＬＡＭ−１またはその７ラグメントを含有する医薬組成物を患 者に投与することからなる感染症（例えば、細菌性、ウィルス性まｌ；は寄生生 物性）の治療法に関するものである。

本発明はまた、ＥＬＡＭ−１またはそのフラグメントを含有する医薬組成物を患 者に投与することからなる脈管炎の治療法に関するものである。

本発明はまた、ＥＬＡＭ−１またはそのフラグメント、および薬学的に許容し得 る担体を含有してなる医薬組成物を患者に投与することからなる、腫瘍細胞の転 移的伝播を阻害するための方法に関するものである。

本発明はまた、治療的有効量のＥＬＡＭ−１特異抗体またはその抗体フラグメン ト、および薬学的に許容し得る担体を含有する医薬組成物を患者に投与すること による炎症の治療法に関するものである。

本発明はまた、治療的有効量のＥＬＡＭ−１特異抗体またはその抗体フラグメン ト、および薬学的に許容し得る担体を含有する医薬組成物を患者に投与すること からなる感染症（例えば、細菌性、ウィルス性または寄生生物性）の治療法に関 するものである。

図面の説明 第１図は、ＥＬＡＭ−１ｃＤＮＡの酵素制限地図を示す。

第２図は、ＩＬ−１で処理後の種々の時間について、ＨＥＣ単順に対するＨ１８ ／７の特異的結合を示すグラフである。

好ましい態様の説明 ＥＬＡＭ−１は、内皮−白血球の付着に関与する内皮細胞表面糖蛋白である。こ の付着蛋白は、ある種のサイトカインによって誘導される。ＥＬＡＭ−１は、刺 激された内皮細胞に対するネズミＭａｂ（Ｈ４／１８およびＨ１８／７）の特異 的結合によって確認される。

Ｈ４／１８およびＨ１８／７の抗原結合によって認識される、抗原の誘導の時間 的順序および代謝阻害剤に対するその発現の感受性は、白血球の付着について観 察されたそれと同様であった。ベビラクア等（Ｂｅｖｉｌａｃｑｕａ、Ｍ、Ｐ、 、　ｅｔ　ａｌ、、　４ｔｈ　Ｉｎｔ’ｌ　Ｓｙｍｐ、Ｂｉｏｌ、Ｖａｓｃ、Ｅ ｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ　Ｃｅ１１：１３（ＡｂｓｔｒＸ１９８６））；ポーバー 等（Ｐｏｂｅｒ、Ｊ、Ｓ、、　ｅｔ　ａｌ、、　Ｊ。

ア等（Ｂｅｖｉｌａｃｑｕａ、Ｍ、Ｐ、、　ｅｔ　ａｌ、、　ｉｎ：Ｌｅｕｋｏ ｃｙｔｅ　Ｉｍｍｉｇｒａｔｉｏｎ　ａｎｄ　Ｉｔｓ　５ｅｑｕｅｌａｅ、　５ ａｔｅｌｌｉｔｅ　Ｓｙｍｐ、（Ｈｅｎｒｙ　Ｚ、　Ｍｏｖａｔ、　ｅｄ、）、 ｐｐ、７９−９３゜ｐｕｂｌｉｓｈｅｄ　ｂｙ　Ｓ、Ｋａｒｇｅｒ、　Ｂａ５ｉ ｌ、　Ｓｗｅｔｚｅｒｌａｎｄ　（１９８７））。これらの内皮細胞表面構成物 と推定される物質は、゛′内皮−白血球付着分子”（ＥＬＡＭｓ）と命名された 。刺激された内皮細胞によるＥＬＡＭ−１の発現は、蛋白およびＲＮＡ合成阻害 剤によってブロックされｔ；が、シクロオキシゲナーゼ阻害剤によってはブロッ クされなかった。

Ｈ４／　ｌ　８　Ｍａｂは、１ｏｏｋＤおよび１２０ｋＤの分子量を有する２種 類の生合成的にラベルされたポリペプチドを免疫沈降させた。

Ｈ４／１８およびＦ　（ａｂ’　）２７ラグメントは、活性化されたＨＥＣに対 するＨＬ−６０細胞（前骨髄球セルライン）の付着を一部分阻害したが、正常血 球の付着には影響しなかったことがわかった。対照的に、Ｍａｂ　Ｈｌ　８／７ は正常な血液ＰＭＮの付着をブロックし、それによってＥＬＡＭ−１の指定を可 能にした（ベビラクア等（Ｂｅｖｉｌａｃｑｕａ　ｅｔ　ａｌ、、　Ｐｒｏｃ、 Ｎａｔｌ、Ａｃａｄ、Ｓｃｉ、（ＵＳＡ）８４：９２３８−９２４２（１９８７ ））。

炎症の部位の内皮細胞におけるＥＬＡＭ−１の発現の誘導は、ヒトの皮膚の微小 血管内皮においてＭａｂ　Ｈ４／１８を使用し、炎症の部位で検出された。コト ラン等（Ｃｏｔｒａｎ、Ｒ，Ｓ、、　ｅｔ　ａｌ、、　Ｊ、Ｅｘｐ。

Ｍｅｄ、１６４：６６１−６６６（１９８６））。

本発明は、クローンされたＥＬＡＭ−１遺伝子に関するものである。ＥＬＡＭ− １をコードしているｃＤＮＡは、培養されたヒト内皮細胞を刺激し、ｍ　ＲＮ　 Ａを単離し、次いで、例えば当該技術分野既知の方法に従って逆転写酵素を使用 してｃＤＮＡを製造することによって得ることができる。また、エビソームＤＮ Ａを回収してもよい。次に、ｃＤＮＡまたはエピソームＤＮＡをシ１ットガンク ローニングし、得られたクローンを、ＥＬＡＭ−１を認識する抗体でスクリーニ ングする。別法として、相補的な、ラベルされたプローブでクローンをスクリー ニングしてもよい。

ＥＬＡＭ−１を認識する抗体は、例えばモノカインであるインターロイキン１（ ＩＬ　ｌ）によって活性化された、培養されたヒト内皮細胞（ＨＥＣ）でマウス を免疫することによって製造することができる。牌細胞と骨髄腫細胞を融合させ 、次にＩＬＩ−処理した対照ＨＥＣでこのハイブリドーマをスクリーニングする と、ＥＬＡＭ−１に特異的なモノクローナル抗体を選別することができる。ベビ ラクア等（Ｂｅｖｉｌａｃｑｕａ、Ｍ、Ｐ、、　ｅｔ　ａｌ、、　４ｔｈ　Ｉｎ ｔ’ｌ　Ｓｙｍｐ、Ｂｉｏｌ、Ｖａｓｃ、Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ　Ｃｅ１１： １３（ＡｂｓｔｒＸ１９８６））；ポーバー等（Ｐｏｂｅｒ、Ｊ、Ｓ、、　ｅｔ 　ａｌ、、　Ｊ、Ｉｍｍｕｎｏｌ、１３６：１６８０−１６８７（１９８６）） ；ベビラクア等（Ｂｅｖ　ｉ　Ｉａｃｑｕａ　、　Ｍ。

Ｐ、、ｅｔ　ａｌ、、ｉｎ：Ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ　Ｉｍｍｉｇｒａｔｉｏｎ　ａ ｎｄ　Ｉｔｓ　５ｅｑｕｅｌａａ、５ａｔｅ１１ｉｔｅ　Ｓｙｍｐ、（Ｈｅｎｒ ｙ　Ｚ、　Ｍｏｖａｔ、　ｅｄ、）、　ｐｐ、７９−９３．　ｐｕｂｌｉｓｈｅ ｄ　ｂｙ　Ｓ、Ｋａｒｇｅｒ、Ｂａ５ｉｌ、　５ｗ１ｔｚｅｒｌａｎｄ（１９８ ７））；ベビラクア等（Ｂｅｖｉｌａｃｑｕａ　ｅｔ　ａｌ、、　Ｐｒｏｃ、Ｎ ａｔｌ、Ａｃａｄ、Ｓｃｉ、（ＵＳＡ）　８４：９２３８−９２４２（１９８７ ））参照。この目的のためにとりわけ有用なモノクローナル抗体には、Ｈ４／１ ８およびＨ１８／７がある。

ＥＬＡＭ−１に対する抗体は、組換ＥＬＡＭ−１またはＥＬＡＭ−１フラグメン トでマウスを免疫することによっても製造することができる。”ＥＬＡＭ−１７ ラグメント”とは、分子のポリペプチドサブセットを意味する。とりわけ好まし いＥＬＡＭ−１７ラグメントは、白血球−結合フラグメントおよび補体−結合フ ラグメントを包含する。白血球−結合または補体−結合フラグメントは、種々の 制限酵素またはエキソヌクレアーゼでＥＬＡＭ−１遺伝子を切断し、得られた７ ラグメントをクローニングし、当該技術分野既知の方法によって白血球または補 体結合活性についてスクリーニングすることによって入手することができる。別 法として、適当なコンピュータープログラムによってＥＬＡＭ−１の構造を分析 し、抗原性領域を確認し、当業者既知の蛋白合成法によってＥＬＡＭ−１７ラグ メントを製造することも可能である。従って、本発明は更に、ＥＬＡＭ−１７ラ グメントによる動物の免疫によって得た規定された特異性を有する抗体に関する ものである。

ライゲーシヨンのための平滑末端または付着末端を使用し、適当な末端を得るた めに制限酵素消化し、望ましくない結合を回避するために適当なアルカリおよび ホスファターゼ処理のようにして付着末端を充填し、適当なりガーゼでライゲー トする常法に従って、種々のＤＮＡ７ラグメントを結合させる。遺伝子構築物は 、組換蛋白の効率よい発現を可能にするためのリーダー配列をコードしていても よい。

組換ＥＬＡＭ−１を発現させるために、適当な宿主エレメントによって認識され る転写および翻訳シグナルが必要である。哺乳動物細胞は組換蛋白分子に正しい ホールディングおよび適当な部位でのグリコジル化という翻訳後修飾を与える。

本発明の方法で使用し得る哺乳動物細胞は、ＣＯ５細胞、チャイニーズハムスタ ー卵巣（ＣＨＯ）細胞、白血球、骨髄腫細胞、または例えばＥＢＶ−形質転換細 胞の様なその他の形質転換されたかまたは腫瘍形成性の白血球、ＶＥＲＯの様な 繊維芽細胞起源の細胞まＩ；はハイブリドーマ５Ｐ２１０−ＡＧ　ｌ　４または ミエローマＰ３Ｘ６３Ｓｇｈのような類リンパ球起源の細胞、およびその誘導体 を包含する。その他の宿主には、ＢＨＫ細胞およびヘパドーム（肝癌）細胞があ る。

通常、宿主細胞と適合し得る種由来のレプリコンおよびコントロール配列を含有 しているベクターを、宿主について使用する。ベクターは通常、レプリコン部位 、および形質転換細胞において表現型の選択を提供し得る特定の遺伝子を担持し ている。ＥＬＡＭ−１をコードしている遺伝子の発現は、その形質転換されてい ない状態のセルラインにホモローガスである得るその他の調節配列によるコント ロール下に位置させることもできる。例えば、ラクトース依存性Ｅ、ｃｏｌｉ染 色体ＤＮＡは、酵素、ベーターガラクトシダーゼを合成することによってラクト ースの利用を媒介するラクトースオペロン、即ちｌａｃオペロンを含有している 。Ｉａｃコントロールエレメントは、］ＩＩ：、ｃｏｌｉに感染性のバクテリオ ファージ、ラムダｐｌａｃ５から入手することができる。ｌａｃプロモーター− オペレーター系は、ＩＰＴＧによって誘導することができる。

他のプロモーター／オペレーター系またはその一部分も、同様に使用することが できる。例えば、コリシンＥ１、ガラクトース、アルカリホスファターゼ、トリ プトファン、キシロース等を使用することができる。

哺乳動物宿主のためには、幾つかの可能なベクター系を発現のために利用し得る 。ある種のベクターは、ウシパピローマウィルス、ポリオーマウィルス、アデノ ウィルス、ワタシニアウイルス、バキュロウィルス、レトロウィルス（Ｒ３Ｖ、 ＭＭＴＶまたはＭＯＭＬＶ）またはＳＶ４０ウィルスの様な動物のウィルス由来 のＤＮＡエレメントを利用する。ＤＮＡがその染色体に安定に組み込まれた細胞 は、トランスフェクトされＩ；宿主細胞の選択を可能にする１またはそれ以上の マーカーを導入することによって選択し得る。マーカーは原栄養菌に代わる栄養 素要求株宿主に、例えば抗生物質、銅等の重金属のような生物致死物質に対する 耐性を付与し得る。選択可能なマーカー遺伝子を、発現させようとするＤＮＡ配 列に直接結合させてもよいし、同時形質転換によって同一細胞に導入してもよい 。ｍＲＮＡの最適合成のために、更にエレメントが必要であるかもしれない。こ れらのエレメントは、スプライスシグナル、および転写プロモーター、エンハン サ−１および終止シグナルを包含し得る。この様なエレメントを組み込んでいる ｃＤＮＡ発現ベクターは、オヵヤマ（Ｏｋａｙａｍａ、Ｈ，、Ｍｏ１．Ｃｅ１． Ｂｉｏｌ、、　３：２８０（１９８３））およびその他によって記載されたベク ターを包含する。

構築物を含有しているベクターまたはＤＮＡ配列を発現のために製造したら、Ｄ ＮＡ構築物を適当な宿主に導入することができる。

プロトプラスト融合、リン酸カルシウム沈澱、電気穿孔法またはその他の常法の 様な、種々の方法を使用することができる。トランスフェクション後、細胞を培 地で増殖させ、例えば前記の抗体を使用して、適当な活性についてスクリーニン グする。遺伝子が発現すると、ＥＬＡＭ−１が産生される。

形質転換されｔ；細胞を、培養フラスコ中、適当な栄養培地で増殖させるか、ま たは同系宿主、例えばマウスまたはラット、または免疫欠損宿主または宿主部位 、例えばヌードマウスまたはハムスターの体腔に注射することができる。具体的 には、動物の腹腔に細胞を導入し、ＥＬＡＭ−１またはその７ラグメントを含有 している腹水を産生させることができる。また、細胞を皮下注射し、宿主の血液 からＥＬＡＭ−１を集めることができる。ハイブリドーマ細胞と同様にして、細 胞を使用することができる。

発現されたＥＬＡＭ−１またはその７ラグメントを、発酵培地または細胞培養か ら分離し、抽出、沈澱、クロマトグラフィー、アフイニティクロマトグラフィー 、電気泳動等のような通常の条件によって精製することができる。

例えば、表面蛋白を含有している溶液を、ＥＬＡＭ−１に特異的な固定化抗体、 例えば前記抗体Ｈ１８／７およびＨ４／１ｇを含有しているカラムに通すことに よって、ＥＬＡＭ−１を精製することができる。次いで、溶離剤のｐＨを上昇さ せることによって、所望の蛋白を溶離させることができる。

ＥＬＡＭ−１またはそのフラグメントを患者に投与し、炎症を治療することがで きる。可溶性形態のＥＬＡＭ−１は、炎症の部位で、内皮に対する白血球の付着 をブロックすることができる。また、アＭ−１が補体系の蛋白に結合することを 示唆している。従って、ＥＬＡＭ−１，またはその補体または白血球−結合フラ グメントを投与すると、補体の活性化を調節し、その病態生理学的結果を阻害す る。

ＥＬＡＭ−１に対するモノクローナル抗体を患者に投与することによって、炎症 をブロックすることもできる。この様なモノクローナル抗体は、前記抗体Ｈ１８ ／７およびＨ４／１８を包含する。モノクローナル抗体は、例えば、免疫グロブ リンのＦｃ部分によって免疫学的反応を最小にするＦ　（ａｂ’　）２フラグメ ントのような抗体フラグメントをも包含することができる。

潅流後の損傷の予防のためにも、ＥＬＡＭ−１またはその７ラグメントの投与を 使用することができる。動脈血栓症を治療する時、組織プラスミノーゲン活性化 因子（ｔ　−ＰＡ）の様な血餅溶解剤によって再潅流を誘導するとしばしば、組 織の損傷を随伴する。この様な組織の損傷は、少なくとも１部分、多形核白血球 （ＰＭＮ）によって媒介されると教示されている。従って、ＥＬＡＭ−１、また はその７ラグメント、好ましくは白血球−結合フラグメントを投与すると、ＰＭ Ｎ−内皮相互作用をブロックし、それによって再潅流後の損傷を低減するか、ま たは予防する。

また、ＥＬＡＭ−１に対する抗体を患者に投与して、ＰＭＮ−内皮相互作用をブ ロックし、それによって炎症を予防または治療することもできる。この目的に好 適な抗体は、Ｈ１８／７およびＨ４／１８またはその抗体フラグメントを包含す る。

ＥＬＡＭ−１に対する抗体を使用し、病気の進行に伴うＥＬＡＭ−１の発現の指 標として、血液、血清、脳を髄液等のような生物学的液中のＥＬＡＭ−１の存在 を検出することもできる。即ち、本発明は更に、ＥＬＡＭ−１に対する検出可能 にラベルされた抗体を、ＥＬＡＭ−１を含有していると推測される試料、または その表面にＥＬＡＭ−１を発現する細胞と接触させ、複合体が形成されたか否か を検出することからなる、ＥＬＡＭ−１についての検定によって、患者における ＥＬＡＭ−１の内皮細胞発現を検出する方法に関するものである。

体厚性物質および生物学的試料の検出および定量はしばしば、免疫検定法を利用 する。これらの方法は、検定しようとする体厚性物質、例えばＥＬＡＭ−１と、 １またはその他のメンバーの複合体を検出可能にラベルし得る抗体または抗体群 の間の複合体の生成に基づく。本発明では、ＥＬＡＭ−１特異的体体を通常のラ ベルで標識することができる。

即ち、本発明のこの態様では、生物学的試料を、細胞、細胞粒子または可溶性蛋 白を固定化し得るニトロセルロースまたはその他の固形支持体で処理することが できる。次いで、この支持体を適当な緩衝液で洗浄し、次に検出可能にラベルさ れたＥＬＡＭ−１特異的体体で処理することができる。次いで、固相支持体を緩 衝液で２回洗浄し、結合しなかった抗体を除去することができる。結合した抗体 上のラベルの量を、常法によって検出することができる。

ＥＬＡＭ−１、またはその表面にＥＬＡＭ−１を発現している細胞を含有してい る試料に対して本発明の検定を行う場合、本方法は＝（ａ）ＥＬＡＭ−１または その表面にＥＬＡＭ−１を発現している細胞を含有していると予想される試料と 固体支持体を接触させて、ＥＬＡＭ−１またはその表面にＥＬＡＭ−１を発現す る細胞を固定化し； （ｂ）該固体支持体と、検出可能にラベルされたＥＬＡＭ−１％異異的体を接触 させ； （ｃ）該検出可能にラベルされたＥＬＡＭ−１特異的体体と該支持体を、固定化 されたＥＬＡＭ−１またはその表面にＥＬＡＭ−１を発現する細胞にＥＬＡＭ− １特異的体体を結合させるのに十分な時間、インキュベートし； （ｄ）工程（ｃ）で得たインキュベーション混合物から固相支持体を分離し； （ｅ）結合したラベルを検出し、それによって、ＥＬＡＭ−１まｌ；はその表面 にＥＬＡＭ−１を発現する細胞を検出および定量することからなる。

別法として、試料中のラベルされたＥＬＡＭ−１特異的体体／ＥＬＡＭ−１複合 体を、複合体を、免疫グロブリン、例えばプロティンＡ１プロティンＧ１抗−１ ｇＭまたは抗−ＩｇＧ抗体に特異的な固定化された抗体または蛋白と接触させる ことによって反応混合物から分離することができる。この様な抗−免疫グロブリ ン抗体は、モノクローナルまたはポリクローナルとすることができる。次いで、 固体支持体を適当な緩衝液で洗浄し、固定化ＥＬＡＭ−１／ラベルされたＥＬＡ Ｍ−１特異的体体の複合体を得ることができる。次に、融合蛋白上のラベルを検 出して、内在しているＥＬＡＭ−１の測定値を得、それによって、刺激された内 皮細胞の程度を得る。

本発明のこの態様は、 （ａ）ＥＬＡＭ−１を含有していると予測される試料と、ＥＬＡＭ−１に結合す るＥＬＡＭ−１特異的体体またはそのフラグメントを接触させ： （ｂ）複合体が生成されるか否かを検出することからなる、試料中のＥＬＡＭ− １またはその白血球−結合７ラグメントを検出するための方法に関するものであ る。

本発明は更に、 （ｃ）工程（ａ）で得た混合物と、固相支持体に固定化され、ＥＬＡＭ−１特異 的体体に特異的な抗体、プロティンＡまたはプロティンＧの様なＦｃ結合分子を 接触させて、ＥＬＡＭ−１／ＥＬＡＭ−１特異的体体である固定化抗体複合体を 得；（ｄ）工程（ｃ）で得た固相支持体を洗浄して、結合しなかったＥＬＡＭ− １／ＥＬＡＭ−１特異的体体複合体を除去し：（ｅ）ＥＬＡＭ−１特異的体体上 のラベルを検出することを含む、試料中のＥＬＡＭ−１またはその白血球−結合 フラグメントの検出法に関するものである。

もちろん、検出可能にラベルされた抗体およびＥＬＡＭ−１の各濃度、インキュ ベーションの温度および時間、およびその他の検定条件は、試料中のＥＬＡＭ− １の濃度、試料の性質等を包含する種々の因子によって、異なり得る。当業者な ら、通常の実験法による各試験のための効果的かつ最適の検定条件を決定し得る であろう。

個々の状況に通例であるように、または必要に応じ、洗浄、撹拌、振とう、濾過 等のようなその他の工程をこの検定に加えてもよい。

ＥＬＡＭ−１特異的体体を検出可能にラベルし得る方法の１つは、これを酵素に 結合させることである。この酵素は、後にその基質に接触させると基質と反応し て、例えば分光測光法、蛍光測定法、または視覚的方法によって検出し得る化学 的部分を形成するであろう。

ＥＬＡＭ−１特異的体体を検出可能にラベルするために使用し得る酵素は、マレ イン酸デヒドロゲナーゼ、ブドウ球菌性ヌクレアーゼ、デルタ−Ｖ−ステロイド イソメラーゼ、イーストアルコールデヒドロゲナーゼ、アルファーグリセロホス フェートデヒドロゲナーゼ、トリオースホスフェートイソメラーゼ、ホースラデ ィツシュペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、アスパラギナーゼ、グル コースオキシダーゼ、ベーターガラクトシダーゼ、リボヌクレアーゼ、ウレアー ゼ、カタラーゼ、グルコース〜■−ホスフェートデヒドロゲナーゼ、グルコアミ ラーゼおよびアセチルコリンエステラーゼを包含するがこれに限定されない。

ＥＬＡＭ−１特異的体体は、ガンマカウンターまたはシンチレーションカウンタ ーまたはオーディオラジオグラフィーの使用の様な手段によって調べ得る放射活 性なアイソトープでもラベルすることができる。本発明の目的にとりわけ有用な アイソトープは、３Ｈ１１２５１％＋３１１　、３！ｐ、　３６Ｓ、目Ｃｓ　” Ｃｒ　％　”ＣＩ　１”ＣＯ％ｈ　＊　（ｏ、５ｅＦｅおよび７　ａ　５　ｅで ある。

ＥＬＡＭ−１特異的体体を蛍光性化合物でラベルすることもできる。蛍光的にラ ベルされた抗体を適当な波長の光にさらすと、染料の蛍光によってその存在を検 出することができる。最も一般に使用される蛍光ラベル化合物には、イソチオシ アン酸フルオレセイン、ローダミン、フィコエリセリン、フィコシアニン、アロ フィコシア二ン、０−７タルデヒドおよびフルオレスカミンがある。

１ｓ！Ｈｕ又はその他のランタニド系列のような蛍光放射金属を使用して、ＥＬ ＡＭ−１特異的体体を検出可能にラベルすることもできる。ジエチレントリアミ ン五酢酸（ＤＴＰＡ）またはエチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）のような金属 キレート基を使用し、これらの金属をＥＬＡＭ−１特異的体体に結合させること ができる。

ＥＬＡＭ−１特異的体体は、これを化学発光化合物にカップリングさせることに よっても検出可能にラベルすることができる。次いで、化学反応の間に生じる発 光の存在を検出することによって、化学発光で標識されたＥＬＡＭ−１特異的体 体の存在を調べる。とりわけを用な化学発光ラベル用化合物の例は、ルミノール 、イソルミノール、七ロマティックアクリジニウムエステル、イミダゾール、ア クリジニウム塩およびシュウ酸エステルである。

同様に、本発明のＥＬＡＭ−１特異的体体をラベルするために、生物発光化合物 を使用することができる。生物発光は、触媒性蛋白が化学発光反応の効率を上昇 させる生物学的系で見いだされる化学発光のタイプである。発光の存在を検出す ることによって、生物発光蛋白の存在を調べる。ラベルの目的に重要な生物発光 化合物は、ルシフェリン、ルシフェラーゼおよびエクオリンである。

例えば、検出可能なラベルが放射活性なガンマ線（６ｍｉｔｔｅｒ）である場合 はシンチレーションカウンターによって、例えば、ラベルが蛍光物質である場合 は蛍光計によって、ＥＬＡＭ−１特異的体体を検出することができる。酵素ラベ ルの場合、酵素のための基質を使用し、比色分析法によって、検出することがで きる。基質の酵素的反応の程度を同様に調製した対照に比較し、視覚的に比較す ることによっても、検出を行うことができる。

ＥＬＡＭ−１またはその白血球−結合フラクシヨンを患者に投与し、内皮組織に 対する白血球腫瘍細胞または非白血球腫瘍細胞の付着を予防することもできる。

即ち、ＥＬＡＭ−１またはその白血球−結合フラグメントの投与は、腫瘍細胞の 転移的伝播を予防するであろう。また、ＥＬＡＭ−１に対する抗体、または抗体 フラグメントを投与し、内皮組織に対する腫瘍細胞の付着をブロックし、それに よって、転移的伝播を阻害することができる。

また、ＥＬＡＭ−１！ｊ：はその白血球−結合７ラグメントを、ＥＬＡＭ−１の ためのレセプターを発現している腫瘍細胞に結合してＩＩＩ瘍細脳細胞生し得る 化学原注薬物とカップリングさせることができる。従って、本発明はまた、例え ば、抗−腫瘍剤とカンブリングされたＥＬＡＭ−１またはその白血球−結合フラ グメントを患者に投与することからなる白血病の治療法に関するものである。こ の様な抗腫瘍剤は、例えばジフテリアトキシンまたはりシン、毒性レクチンの様 な細菌毒素を包含することができる。

従って、本発明は更に、ジフテリアトキシンまたはりシンからなる第２の蛋白に カップリングされたＥＬＡＭ−１またはその白血球−結合７ラグメントを含有し てなる融合蛋白に関するものである。

組換手段によって、シフテリアトキノンの７ラグメント、’ｌ含有する融合蛋白 を製造するＩ；めの方法は、米国特許第４，６７５，３８２号（１９８７）に教 示されている。ジフテリアトキシンは、２本のポリペプチド鎖を含有している。

Ｂ鎖は細胞表面のレセプターに毒素を結合させる。Ａ鎖は事実上、細胞質に入り 、ＡＴＰの加水分解を伴ないながらリポソームをｍＲＮＡに沿って転位させる因 子である伸長因子２、を不活化することによって蛋白合成を阻害する。ダーネル 等（Ｄａｒｎｅｌｌ、Ｊ、、　ｅｔ　ａｌ、、　ｉｎ　Ｍｏ１ｅｃｕｌａｒ　Ｃ ｅ１ｌ　Ｂｉｏｌｏｇｙ、　５ｃｉｅｎｔｉｆｉｃ　Ａｍｅｒｉｃａｎ　Ｂｏｏ ｋｓ、　Ｉｎｃ、、　ｐａｇｅ　６６２（１９８６））を参照されたい。好まし い態様では、本発明の融合蛋白は、ＥＬＡＭ−１またはその白血球−結合フラグ メント、およびジフテリアトキシンのＡ鎖を含有する。

ＥＬＡＭ−１は、微生物感染症の治療にも宵月である。種々の微生物（細菌、リ ケッチア、ボレリア、種々の寄生生物、およびウィルス）は、おそら＜ＥＬＡＭ −１依存性のメカニズムによって血管内皮に結合することがある。従って、ＥＬ ＡＭ−１またはその白血球−結合７ラグメントを患者に投与し、結合標的分子と してＥＬＡＭ−１を認識する微生物の結合を予防し、それによって、微生物感染 症を治療することができる。

また、ＥＬＡＭ−１に対する抗体または抗体フラグメントを投与し、内皮組織の 微生物レセプターをブロックすることもできる。従って、本発明は更に、ＥＬＡ Ｍ−１に対する抗体または抗体７ラグメントを患者に投与することからなる微生 物感染症の治療法に関するものである。

本発明は更に、抗菌系にカップリングさせたＥＬＡＭ−１またはそのフラグメン トを含有する医薬組成物を投与することからなる微生物感染症の治療法に関する ものである。このようなコンジュゲートは、抗菌系を血管感染の部位に特異的に 輸送し、局在させる。

このような抗菌系は前記のようなりシンまたはジフテリアトキシンを包含し、自 滅酵素阻害剤としてはたらくハロゲン化アミノ酸を含有することができる。ソー パー等（Ｓｏｐｅｒ、Ｔ、Ｓ、、　ｅｔ　ａｌ、、　Ｊ、Ｂｉｏｌ。

Ｃｈｅｍ、２５２：３１７０−３１７５（１９７７Ｘβ−クロロアラニン））： コロニツチュ等（Ｋｏｌｌｏｎｉｔｓｃｈ、Ｊ、、　ｅｔ　ａｌ、、　Ｊ、Ａｍ ｅｒ、Ｃｈｅｍ、Ｓｏｃ、９８：５５９１−５５９３（１９７６Ｘ３−フルオロ アラニン））：ワン等（Ｗａｎｇ、Ｅ、、　ｅｔ　ａｌ、、　Ｂｉｏｃｈｅｍｉ ｓＬｒｙ　１７：１３１３−１３２１（１９７８Ｘβ、β−ジフルオロアラニン およびβ、β、β−トリフルオロアラニン））参照。

本発明はまた、ＥＬＡＭ−１またはそのフラグメントを患者に投与することによ る脈管炎の治療法に関するものである。最近の証拠は、ある種の形態の脈管炎に おける組織の損傷は、誘導された内皮表面蛋白に関連していることを示唆してい る。従って、ＥＬＡＭ−１は、血管壁の抗体−媒介性または細胞−媒介性損傷の ための標的となり得る。

ＥＬＡＭ−１またはそれに構造的にホモローガスな分子は、胚形成／器官発達； 新形成（腫瘍細胞による発現があり得る場合）；創傷／組織再生；および関連す る過程における、細胞−細胞相互作用の媒介に関与しているかもしれない。従っ て、ＥＬＡＭ−１まｔ；はそのフラグメントの投与は、これらの過程の研究のた めの治療用介入物および／または診断用手段として有用である。

ＥＬＡＭ−１分子またはそのフラグメント、まｔ；はＥＬＡＭ−１に対する抗体 および抗体フラグメントを、薬学的に許容し得る担体ビヒクルと混合する様な既 知の方法によって、医薬的に有用な組成物に製剤化することができる。好適なビ ヒクルおよびその製剤は、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ　Ｐｈａｒｍａｃｅ ｕｔｉｃａｌ　５ｃｉｅｎｃｅｓ　（１６ｔｈ　ｅｄ、）、　０ｓｏｌ。

Ａ、（ｅｄ、）、Ｍａｃｋ　Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ、　Ｅａｓｔｏｎ　（１９８ ０）に記載されている。有効な投与のために好適な薬学的に許容し得る組成物を 製造するためには、このような組成物に治療的有効量のＥＬＡＭ−１、ＥＬＡＭ −１のフラグメント、またはＥＬＡＭ−１に対する抗体または抗体フラグメント を単独でまたは好適量の担体ビヒクルと一緒に含有させる。

炎症、再潅流後の損傷、白血病、リンパ腫、微生物／寄生生物感染、脈管炎の治 療、または腫瘍細胞の転移的伝播の阻害のために使用する場合、医薬組成物は、 ｌｐｇ／ｋｇ〜１０ｍｇ／ｋｇ患者の本発明のＥＬＡＭ−１、ＥＬＡＭ−１の７ ラグメント、または融合蛋白を含有することができるが、より高いかまたはより 低い投与量も可能である。炎症、微生物／寄生生物感染、再潅流後の損傷、白血 病、リンパ腫、脈管炎の治療、または腫瘍細胞の転移的伝播の阻害のために使用 する場合、医薬組成物は、ｌ　ｐｇ／　ｋｇ−１０ｍｇ／　ｋｇのＥＬＡＭ−特 異的抗体またはその抗体フラグメントを含有し得るが、より高いかまたはより低 い投与量も可能である。

使用することができる。放出制御製剤は、本発明のＥＬＡＭ−１、ＥＬＡＭ−１ フラグメントまたはＥＬＡＭ−１に対する抗体または抗体フラグメントとコンプ レックス形成するか、または吸着させるためにポリマーを使用することによって 、得ることができる。コントロールされた輸送は、適尚な高分子（例えば、ポリ エステノ呟ポリアミノ酸、ポリビニルピロリドン、エチレンビニルアセテート、 メチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、プロタミンサルフェート、ま たはラクタイド／グリフライドコポリマー）を選択することによって達成するこ とができる。薬物放出の速度は、このような高分子の濃度を変えることによって もコントロールすることができる。作用の持続時間をコントロールするための他 の可能な方法は、ポリエステル、ポリアミノ酸、ヒドロゲル、ポリラクタイド／ グリフライドコポリマーまたはエチレンビニルアセテートコポリマーのようなポ リマー物質の粒子に治療薬を含有させることである。

または、例えばコアセルベーション法、まｔ；は界面内ポリマー化、例えばそれ ぞれ、ヒドロキシメチルセルロースまたはゼラチン−マイクロカプセルまたはポ リ（メチルメタクロレート）マイクロカプセルの使用によって製造されたマイク ロカプセル、またはコロイド薬物輸送系、例えばリポソーム、アルブミンマイク ロスフェア、？イクロエマルジョン、ナノパーティクル、ナノカプセル、または マクロエマルジョンに治療薬を封入することが可能である。このような方法は、 Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ　Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ　５ｃｉｅｎｃｅｓ　 （１９８０）に開示されている。

ＥＬＡＭ−１，ＥＬＡＭ−１の７ラグメント、またはＥＬＡＭ−１に対する抗体 または抗体７ラグメントを、当該技術分野周知の手段によって患者に提供するこ とができる。導入のためのこのような手段は、経口手段、鼻腔的手段、皮下手段 、筋肉内手段、静脈内手段、動脈内手段、または非経口的手段を包含する。

これまで本発明を一般的に記載したので、本明細書に含まれるある種の具体例を 参照するとよりよく理解されるであろう。これらの具体例は、特に断らない限り 、本発明の例示のみを目的とし、本発明の限定を意図するものではない。

実施例 ｒｌＬ−１β（５Ｕ／ｆｆ１ｌ）で２時間処理した、培養されたＨＥＣから得た ＲＮＡを使用し、ｃＤＮＡライブラリーを構築した。このライブラリーをＣＯＳ 細胞にトランスフェクトし、Ｍａｂｓ　Ｈ１８／　７およびＨ４／１８を使用し て、ＥＬＡＭ−１エピトープを発現している細胞を単離した。エピソームＤＮＡ を回収し、細菌（ｍｃ　１０６１ｐ３）中で増幅し、更に２回、発現−選択（ｅ ｘｐｒｅｓｓｉｏｎ−ｐａｎｎｉｎｇ）（シードおよびアル７ｔＣ５ｅｅｄ、Ｂ 、、　ａｎｄ　Ａｒｕｆｆｏ、Ａ、、　Ｐｒｏｃ、ＮａＬｌ、Ａｃａｄ、Ｓｃｉ 、（ＵＥＬＡＭ−１と呼称されるｃＤＮＡクローンを得た。間接免疫蛍光および 免疫ペルオキシダーゼによって検出した時、ｐＥＬＡＭ−１でトランスフＸり１ ・されたＣＯ５細胞はＭａｂＨ１８／７およびＨ４／１８の両者と反応するが、 対照のＭａｂと反応しない分子を発現する。

ＭａｂＨ１８／７は、生合成的にラベルされた、ｒ、ＩＬ　１で刺ａされｆ：Ｈ ＥＣからＭｒ　１１５．０００および９７．０００（７）２種のポリペプチドを 免疫沈降させたが、対照ＨＥＣがらは沈降させなかった。生合成的にラベルされ た。ｐＥＬＡＭ−１でトランスフェクトされたＣＯ５細胞から、同様の質量の２ 種の蛋白（Ｍｒ１０７゜０００および９７，０００）を得た。低い方の分子量の ｃｏｓ細胞産物は、前記の観察（シードおよびアル７オ（Ｓｅｅｄ、Ｂ、、　ａ ｎｄ　Ａｒｕｆｆｏ、Ａ、。

−８５７７（１９８７））と一致しており、これはグリコジル化の変化を反映し ているのかもしれない。ＣＯ５細胞およびＨＥＣ由来の免役沈降物の両者をＮ− グリコシダーゼＦ（Ｎ−グリカナーゼ）（Ｎ−Ｇｌｙｃａｎａｓｅ。

Ｇｅｎｚｙｍｅ　Ｉｎｃ、、　Ｂｏｓｔｏｎ、　ＭＡ））で旭理し、Ｎ一連結し た炭水化物を採取すると、電気泳動によってＭｒ７７．０００のポリペプチドに 対応する１つのバンドが得られた。これらのデータは、組換ｃｏｓ細胞由来のＥ ＬＡＭ−１のポリペプチドのバックボーンが天然の内皮細胞由来のＥＬＡＭ−１ のそれと同等であることを示唆している。

更に、これは、生合成的にラベルされた細胞から免疫沈降された２種は同一のポ リペプチドバックポーンを有し、翻訳後修飾が異なるという仮説と一致する。こ の仮説は更に、ｒｌＬ−１βで刺激されたＨＥＣおよびｐＥＬＡＭ−１でトラン スフェクトされたｃｏｓ細胞を使用する、パルス−チェイス生合成的ラベル実験 によって支持される。両者の場合、ラベルは最初、より低い分子量の蛋白（Ｍｒ ９７．０００）に関連して見られ、次いで、より高い分子量形態へのこのラベル の明らかな“チェイシング（追跡）°゛が見られる。要約すると、これらのデー タは、抗−ＥＬＡＭ−Ｉ　Ｍａｂで免疫沈降され／：２種が、前駆体および産物 として関係していることを強く示唆している。

第１図に示されるように、ｐＥＬＡＭ−１は３．８５ｋｂであって短い５′非翻 訳領域、１，８３０塩基の読み取り枠、および比較的長い（１、９ｋｂ）　３　 ’非翻訳領域を有することがわかった。ＥＬＡＭ−１および３′非翻訳領域をコ ードしているｃＤＮＡのヌクレオチド配列を以下に示す。

６５１　ＴＡ（ＡＴ（（ＴＣ（ＡにＴ（ｆｌ；（（ＡＣＣＣＴＣＡＡＴＣＴＧＴ 　ＡＣＡＣＡ（ＣＡＴ（ＭＴＡＡｎＡ（Ａ６０１　ｃｎｃｃ＾＾ｃｉｃ　ｉｃ＾ ｃｃｃｒｃｃｃττ（Ａ（ｉＴｃｃＡｃ　ＴＣＡＡＣＴＣＴＣＡ　ＣＣＡＡＡＴ ＴＣＴｃ６５１　ＡＡＣＴＣＴＡ（ＡＣＣＣ（τＧＣＡＡＴＣＣＣＣＴＣＡＣＣ ＡＴ　ＣＣＡＡＣ（（ＴＯＯｍｃｃＡｃＴ（Ａ７０１　ＣＣ（Ａ（Ｔｆｌ；ＣＣ Ａ　ＡＡＣｎＣＡＣＣＴ　ＡＣＡＡＴＴＣｎ（ＣＴＣ（Ｔ（ＴＡＴＣＡＣＣＴＣ ＴＣＡＴＡ７５１　ｃｃｃｃｎＡｃｃＴｃｃｃ＾＾ＧＣＡＧＣＡＴＣＧＡＣＡＣ ＣＡ　ＴにＣＡＧＴにＴＡＴ　ＣＴＣＣＴＣＴＧＣ＾８０１　ＣＡＡＴＧ（：Ａ ＣＴＣＣＴＣＣＴＡｎ（ＣＡＧ（ＣＴＣＣＡＡＴ　ＣＴＣＣｎＣＡＣＴ　ＣＴＣ ＡＴにＣＴＧＴ８５１　ＣＡＣＡＡＡＴＣＣＡ　ＣＣＣＡＡＴＩＩ：ＣＯＴ　Ｔ （ＣＴＣＣＡ＾ＴＣｍｃｃＡＡＡＡｃ　（ＣＴＣＧＡ＾ＣＣＴ９Ｃ１Ｉ　Ｔ（（ ＣＡＴＣＣＡＡ　（ＡＣＡＡ（ＣＴＣＴ　Ａ（ＡｍＣＡＣＴ　ＣＴｃＡＡＣＡＡ ＣＣＡｍＣＡＡＣＴＡ９５１　ＡＴＣＧＣＡＣＣＣ（ＡｃＡ（ｉｃｃＴｒｃＡ　 ＣＴＣＴＡＣＣＴＣＡ　ＴＣＴＣＣＣＡＡＴｒ　ＧＣＱＡＣＡＡＣＣＡ１００２ 　Ｃ入＾ＣＣＣＡＡ（ＣＴＣＴＡＡＡｆｌ；（丁ＣＴＣＡ（ＡＴＣ〔＾ｃ　ｃｃ ｃｃｃｔｃ（ｃｃ　ｃ＾Ｃ（：ＣＴ（＾Ｇ＾１６ｏｘ　ＣＣＴｃｃｃＡｃｎ　ｃ ｃｃｃｃＡＡＡｃＡＴ（ＡＡＣ＾ＴＣＡＣＣＴＣＣＡＣＴＣＣＣＣＡＣＣＣＣＣ ＴＧＴ１９５１ＴｒＣＭＧＡＡ　Ｔ（Ａ（：ＡＡＡ（Ａに　ＧＴＣＣＡＴＣＴＣ ＣＣＣＡＡ（ＴＡＣＡＧ　ＣＣＡＴＡ（ＡＣＴＧ２００１　Ａ＾ＣＴＴＡＡＣＡ ＣＡＣＡＣＡＧ＾Ｔ＾＾ｃｙｃｒｃｃＴｃｃｃ　ｃｙｃｒｃｙｃｃ〔ｃ　ｃ”口 ′Ｃ゛口’ｃＣＣＴ２０５１　ＡＣＴＡＴＣ（ＣＡ（：　ＡＴＣ（（ＴＴＴＡＴ 　ＣＧＣＴＣＡＡＡ（ＣＣＣＡＡＣＡＣＣＣＡ　ＴＣＡＣＣＡＣｎ（２１０１、 ＡＡＴＡＣＡＴＣＡＡ　Ａｆｌ：ＴＣＣＡＩＩ；ＣＡＧｉ　ＣＣＡＡＣＣＡＣＣ ＣＣＯＴ７（ＡＡＣＴＣＡＡＡＡＣＡＣＴ（Ａ２１５１　ＣＴ（ｉｎｃ（ＣＴｒ 　Ｔ（ＣＴＡＣＴ（ＴＣＡＣＣ＾τＣ＾＾Ｃ＾ＡＡＧＴＣＴＴＣＧ（ＴＡＡＴＣ ＾＾ＣＣＣ２２０１ＡＡＡＣＣＡτＡＴｒ　ＴＴ（：ＴｒＣＣＡＡＣＣＡＡＡＣ ＣＴＣ＾Ａ　ＣＡＣＡＣＣＡＡＣＡ　ＣＴＣＴＣＡＡＡＴＣ２２５１、ＴＣＡ（ ：ＡＡＴｒＣ（ＴｒＴＴ（ＴＡＡ（Ｔ　ＣＴＣ（ＣＴｒＣＣＴ　ＣＣＣＴＣＴＡ ＡＡＡ　ＴＣＴｒＣＣＣＡＣＡ２３０１　ＣＡＪ、ＡＣＡ（ＡＡＴ　ＡＴＴＴＴ ｆｌ：Ｔｆｌ：ＣＣＴｒＴＣＴｒＴＣＴＴ　ＴＴＣ（（ＣＴＴＣＡ　ＣＡＣＴＣ ＴＴＴ（Ｇ３３５１　ＡＴｒＣＴＣＡＧＴＣＡＣＴＡＡη’ｃｃｃ　ＡＡＡｃｃ ’ｒｃｃｖｃ　ｎｃｃｃｎｃＡｃ　ＣＡＧＴＧＴＣＡＣ＾３４０１　ＡＴ（ＡＡ ＡＡＣＴＣＴＣ（ＴＡ（ＡＣｎ　（ＣＡｎＡＡＣ’ｎ′＾ＣＣＡＴＣＴＣＴＴ　 ＣＡＡＡＡんＬＡＡＡ３４５１　ＣｍＣＡＣＡＣＡ　ＡＣ−口’ｃｙｃｃｃｙ　 ＣＡＡＣ＾ＣＴＣＣ（ＡＡＣＣＡＣＡＡＡＣＣＣＡＡＣＡＣＴ（Ａ３５０１　Ａ ＡＡＣＡＧＡＣＡＴ　ＣＴＣＡＴＡＡＧＣＡ　ＴＣＡＧＡＡＣＡＣＣＡＣＡＣＧ Ｔ丁ＣＴＴ　τＴＡＡＡＣＣＣＣＣ３５５１　ＡＣＡＡＡＡＡ（ＴＣＴ（：ＣＧ ＡＡＡＴＡＡ　ＣＡＩＩ：ＡＣ人ＡＣＡＡ　（ＴＡＣＴＣＴＣＡＴ　ＣＡＩＩ； Ｃ（ＴＡＴＣＴ３６０１　ＡＴｃｃＡＡＴＡＣＡ　ＣＴＣｎＡＴＴＴｒ　ＣＴｒ ＴＣＡＡＡＴｒ　ＣＴＴＴＡＡＣＴＣＴ　ＴＣＴＡＡＡＴＡＴＴ３６５１　ＴＡ ＴＣＴＡＡＡ（Ｔ　ＣＣＡＴｒＡＣＡＡＡ　ｍＡ（：ＣＴＣＴＧＴ　ＣＡＡＡＴ Ａ（（ＡＣＴＣＴＣＣＴｒＴＣＴ３７０１　ＣｍＣＡｌ：ｍ　ＴＡｎＣＡ（：Ａ ＡＴ　ｍＡＡＡＴＴＡτ　ＡＡＣ丁ＴＡＡＡＡＴ　ＡＴＴＴＴＡＴＡＡ丁３７５ １　ＴＩＴＴＡＡＡＣＴＡ　ＴＡＴＡｍＡＴｒ　ＴＡ＾に（ＴｒＡＴＣＴＣＡＩ ：Ａ（ＣＴＡＴ　ＴｒＣ：Ａ（ＡＴＡＡＣ３ＲＯＩ　ＡＣＴＡＴＡＡＡＧＣＴｒ ＣＡＣＡＡＴＡＡ　ＡＴＣＴＧ（ｎＡＴ　ＣＴＴＴＡＡＡＡＡＡ　ＡＡＡＪ、＆ ＡＡＡＡＡ３８５１　ＡＡＡ＾ ＥＬＡ’Ｍ−１をコードしているｃＤＮＡのヌクレオチド配列を以下に示す。

１１０１　丁ＣＡＴＣ（Ｔ（：Ｃ＾　＾（ＴｒＣＡＣＣＴＣＴＣＡＣＣＡＡＣＩ ：ＣＴｒＣＡＴＣＴｒＣ（ＡＣＣＣＡＣＣＡＣＣ１１５１（ＣＡＣＣＴＴＣＡＡ 　ＴＣＣＡＣＣＡ（ＴＣＡＡＣｆ：Ｃ（ＡにＴＣＣＡＣＡＣＡＣＣＡＡ　ＡＴ（ （ＣＡＣｍ１４０１　Ａ（ＪＴＣ（ＣＡＴＣＣＴＣＴＣＣＡＣＣＡ　ＣＣＣＣ（ ＣＣＡＡＣＣＣｍＣＣＴＣＡ　ＣＣＴＣＴＣ（ＴＣＡＥＬＡＭ−１の翻訳されｊ ；アミノ酸配列を以下に示す。

Ｉ ＡＳＱＦＬＳＡＬＴＬＶＬＬＸＫＥＳＣＡＷＳＹＮＴＳＴＥＡＭＴＹＤＥＡＳＡ ＹＣＱＱＲＹＴＨＬＶＡＩＱＮＫＥＥＩＥＹＬＮＳＩＬＳＹＳＰＳＹＹＷＩＣＩ ＲＫＶＮＮＶＷＶＷＶＣＴＱＫＰＬＴＥＥＡＫＮＷＡＰＣＥＰＮＮＲＱＫＤＥＤ ＣＶＥ！ＹＩＫＲＥＫＤＶＣＭＷＮＤＥＲＣ５ＫＫＫＬＡＬ（Ｙ　τ＾＾ＣＴＮ ＴＳＣ５ＣＨＣＥＣＶＥＴＩＮＮＹＴＣＫＣＤＰＣＦＳＣＬＫＣＥＱＩＶＮ（Ｔ ＡＬＥＳＰＥＨＣ５ＬＶ（Ｓ　ＨＰＬＧＮＦｓＹＮＳＳＣ５Ｉ　ＳＣＤＲＣＹＬ ＰＳＳＭＥＴ＆ｉＱＣＭＳＳＣＥＶＳＡＰＩＰＡＣＮＶＶＥＣＤＡＶＴＮＰＡＮ ＣＦＶＥＣＦＱＮＰＣＳＦｐ＊ｈＴＴｃＴＦＤｃＥＥｃＦＥＬｕｃＡＱＳＬＱＣ ＴＳＳＣＮＷＤＮＥＫＰＴＣＫＡＶＴＣＲＡＶＲＱＰＱＮＣ５ＶＲＣ５Ｈ５Ｐ　 ＾ＣＥＦＴＦＫＳＳＣＮＦＴＣＥＥＣＦＭＬＱｃＰＡＱＶＥ（ＴＴＱＣＱｖＴＱ ＱＩＰｖＣＥＡＦＱＣＴＡＬＳＮＰＥＲＣＹＭＮＣＬＰＳＡＳＣ５ＦｆｌＹＣ５ ＳＣＥＦＳ（ＥＱＣＦＶＬＫｃＳＫＲＬＱ（ＣＰＴＣＥＷＤＮＥＫＰＴ（ＥＡＶ ＲＣＤＡＶＨＱＰＰＫＧＬＶＲＣＡＨ５ＰＩＣＥＦ　τ　ＹＫＳＳ（ＡＦＳＣＥ ＥＣＦＥＬＹＣＳτＱＬＥ（τＳＱＣＱＷＴＥＥＶＰＳ（ＱＶＶＫ（ＳＳＬＡＶ ＰＣＫＩＮＭＳ（ＳＣＥＰＶＦＣＴＶＣＫＦＡＣＰＥＣＷＴＬＮＣ５ＡＡＲτ　 ＣＣ＾　τ　ＣＨＷＳＣＬＬＰＴＣＥＡＰＴＥＳＮＩＰＬＶＡＣＬＳＡＡＣＬＳ ＬＬＴＬＡＰＦＬＬＷＬＲＫＣＬＲＫＡＫＫＦＶＰＡＳＳＣＱＳＬＥＳＤＣ５Ｙ ＱＫＰＳＹＩＬ ｐＥＬ’ＡＭ−１の翻訳されたアミノ酸配列は、トランスメンブラン蛋白の典型 的特徴を示唆している。例えば、細胞外ドメインは、１１個のＮ一連結可能なグ リコジル化部位を有している。

Ｍａｂ１８／７は、活性化されたＨＥＣ単層に対するＰＭＮ（）５０％）および ＨＬ−６０細胞（〉６０％）の付着を阻害する。ベビラクア等（Ｂｅｖｉｌａｃ ｑｕａ、Ｍ、Ｐ、、　ｅｔ　ａｌ、）、　Ｐｒｏｃ、Ｎａｔｌ、Ａｃａｄ、Ｓｃ ｉ、、　ＵＳＡ　８４：９２３８−９２４２（１９８７）。これらの研究から、 ＥＬＡＭ−１は、白血球表面レセプターのためのりガントとして作用することに よって白血球の付着を促進し得ると思われる。この仮説は更に、クローンされＩ ；ＥＬＡＭ−１を使用するこの研究によって支持される。ｐＥＬＡＭ−１でＣｏ Ｓ細胞をトランスフェクトすると、ＨＬ−６０細胞の付着を促進する。免疫ペル オキシダーゼ染色から、ＥＬＡＭ−１のＣＯ５細胞発現とＨＬ−６０細胞の付着 の直接的相互関係がわかった。

ＭａｂＨＩ８／７は、ｐＥＬＡＭでトランスフェクトされたＣＯ５細胞に対して 、増加された付着を低減（１００±３％阻害、平均値±ＳＥＭ、３回の実験）す ることがわかった。

これまでの研究は、非刺激ＨＥ　ＣはＥＬＡＭ−１をわずかしか、または全く発 現しないことを証明した。ベビラクア等（Ｂｅｖ　ｉ　Ｉａｃｑｕａ　。

Ｍ、Ｐ、、　ｅｔ　ａｌ、）、　Ｐｒｏｃ、Ｎａｔｌ、Ａｃａｄ、Ｓｃｉ、、　 ＵＳＡ　８４：９２３８−９２４２（１９８７）。

ＨＥＣ単層をｒ　Ｉ　Ｌ　−１（５Ｕ／ｍｌ）まｔ；はｒＴＮＦ（２００Ｕ／ｍ ｌ）で４時間処理すると、抗−ＥＬＡＭ−１沈降可能な種を産生じた。

リンフォトキシン（２００Ｕ／ｍｌ）および細菌性エンドトキシン（ｌＯｕｇ／ ｍｌ）で、同様の結果が得られた。ＨＥＣをＩＦＮ（２００Ｕ／ｍｌ）で処理し た後には、ＥＬＡＭ−１の誘導は観察されなかっＩ；。

ＲＮＡプロット分析は、ｒｌＬ−１またはｒＴＮＦで２時間処理したＨＥＣにお いて３．９ｋｂの主要な種を示し、これは、非刺激およびＩＦＮ−刺激されたＨ ＥＣには存在しなかった。ＨＥＣ単層をｒＩＬ−１に連続的に接触させると、Ｅ ＬＡＭ−１の発現は１−２時間で開始し、４−６時間でピークを有して急速に増 加し、次に、２４時間までに基準レベルに低下する。第２図に示されるように、 免疫結合検定で検出した時、ＥＬＡＭ−１の内皮細胞表面の発現は、ＥＬＡＭ− １ｍＲＮＡの発現と時間的に相関する。即ち、ＥＬＡＭ−１の内皮細胞発現は、 ｒＩＬ　１およびｒＴＮＦを包含する幾つかのメディエータ−によって誘導する ことができる。これらの効果は時間依存性であり、少なくとも一部分、転写レベ ルで現れる。

胎盤由来のゲノムＤＮＡのプロットハイブリダイゼーションは、シングル−コピ ーの遺伝子と一致するパターンを示した。

結論 ＥＬＡＭ−１は、補体レセプター１（ＣＲＩ）、補体レセプター２（ＣＲ２）、 補体因子ＨおよびＣ４結合蛋白、およびβ２−グリコプロティンＩのような幾つ かの補体−結合蛋白を包含する種々の補体結合蛋白に配列相同性を有する新規な 細胞表面糖蛋白である。これらの相同性は、類似した蛋白のファミリーの存在を 示唆している。

ＥＬＡＭ−１の翻訳されたアミノ酸配列は、リーダー配列を包含するトランスメ ンプラン蛋白の典型的特徴を示す。細胞外ドメインは１１個のＮ一連結可能なグ リコジル化部位を有し、エンドグリコシダーゼＨを用いる研究は、Ｎ一連結した 炭水化物が成熟内皮性ＥＬＡＭ−１の全分子量（Ｍｒ　１１５，０００）の約４ ０％の原因であることを示唆している。更に、これらの研究は、パルス−チェイ スラベル法と共に、抗−ＥＬＡＭ−Ｉ　Ｍａｂによって、活性化されたＨＥＣか ら免疫沈降された２種のポリペプチドは、同じポリペプチドバックポーンを構成 成分とじ；２種間の分子量の相違はおそらく炭水化物製造のレベルにおける翻訳 後修飾に関係するらしいという強い証拠を提供する。

ＥＬＡＭ−１の誘導可能な発現は、白血球−血管壁相互作用でのその役割におい て非常に重要であるかもしれない。データは、ＩＬ−１およびＴＮＦを包含する がＩＦＮ−を包含しないある種の炎症／免疫サイトカインが内皮細胞に作用し、 ＥＬＡＭ−１の生合成および発現を誘導することを示している。ＲＮＡプロット 分析は、ＥＬＡＭ−１の誘導は大部分、転写レベルで起こることを示唆している 。Ｍａｂ’　Ｈ４／　ｌ　８についてのこれまでの研究は、種々の病態生理学的 環境におけるＥＬＡＭ−１の病巣内皮発現を証明した。

本発明を十分説明したので、当業者には、本発明またはそのいずれかの態様の範 囲に影響することなく、広範かつ等価な範囲の条件、処方、およびその他のパラ メーターで本発明を行い得ることが理解されるであろう。

国際調査報告

Claims (28)

【特許請求の範囲】
1. １．ＥＬＡＭ−１またはそのフラグメントをコードしているクローンされた遺伝 子またはその縮重変異体。
2. ２．以下のＤＮＡ配列を含有する請求の範囲１に記載のクローンされた遺伝子。 【配列があります】 【配列があります】
3. ３．以下のＤＮＡ配列を含有する請求の範囲１に記載のクローンされた遺伝子。 【配列があります】
4. ４．ＥＬＡＭ−１またはそのフラグメント、およびジフテリアトキシンまたはリ シンである第２の蛋白をコードしているクローンされた遺伝子またはその縮重変 異体。
5. ５．以下のＤＮＡ配列を含有する請求の範囲４に記載のクローンされた遺伝子。 【配列があります】
6. ６．該フラグメントが白血球−結合している請求の範囲１−４のいずれかに記載 のクローンされた遺伝子。
7. ７．該フラグメントが補体−結合している請求の範囲１−４のいずれかに記載の クローンされた遺伝子。
8. ８．請求の範囲１に記載のクローンされた遺伝子を含有しているベクター。
9. ９．請求の範囲４に記載のクローンされた遺伝子を含有しているベクター。
10. １０．請求の範囲８に記載のベクターで形質転換された宿主。
11. １１．請求の範囲９に記載のベクターで形質転換された宿主。
12. １２．請求の範囲１に記載のクローンされた遺伝子の発現によって産生されたＥ ＬＡＭ−１またはそのフラグメント。
13. １３．以下のアミノ酸配列を含有する請求の範囲１２に記載のＥＬＡＭ−１。 【配列があります】 【配列があります】
14. １４．白血球−結合している請求の範囲１２に記載のＥＬＡＭ−フラグメント。
15. １５．補体−結合している請求の範囲１２に記載のＥＬＡＭ−１フラグメント。
16. １６．ＥＬＡＭ−１またはそのフラグメント、およびジフテリアトキシンまたは リシンである第２の蛋白からなる融合蛋白。
17. １７．以下のアミノ酸配列を含有している請求の範囲１６に記載の融合蛋白。 【配列があります】
18. １８．該ＥＬＡＭ−１フラグメントが白血球−結合している請求の範囲１６に記 載の融合蛋白。
19. １９．該ＥＬＡＭ−１フラグメントが補体−結合している請求の範囲１６に記載 の融合蛋白。
20. ２０．治療的有効量のＥＬＡＭ−１またはそのフラグメント、および薬学的に許 容し得る担体を含有してなる医薬組成物。
21. ２１．治療的有効量のＥＬＡＭ−１を含有してなる請求の範囲２０に記載の医薬 組成物。
22. ２２．治療的有効量の請求の範囲１６に記載の融合蛋白および薬学的に許容し得 る担体を含有してなる医薬組成物。
23. ２３．請求の範囲２０に記載の医薬組成物を患者に投与することからなる炎症の 治療法。
24. ２４．請求の範囲２０に記載の医薬組成物を患者に投与することからなる再濯流 後の損傷の予防または治療のための方法。
25. ２５．請求の範囲２０または２２に記載の医薬組成物を患者に投与することから なる白血病またはリンパ腫の治療法。
26. ２６．請求の範囲２０または２２に記載の医薬組成物を患者に投与することから なる患者における微生物感染の治療法。
27. ２７．請求の範囲２０に記載の医薬組成物を患者に投与することからなる脈管炎 の治療法。
28. ２８．請求の範囲２０または２２に記載の医薬組成物を患者に投与することから なる、腫瘍細胞の転移的伝播の阻害法。