JPH04503328A - 低電気浸透アガロース - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 低電気浸透アガロース 技術分野 本発明は、電気泳動及び他の拡散法又は相互作用に朋いられる改良された性質特 に低電気浸透（ＥＥＯ）を有するアガロース組成物に関する。本発明は、さらに それらの電気泳動的性質を改善するためにアガロースを精製する方法に関し、そ して電気泳動及び他の応用にアガロースを用いる方法に関する。

背景技術 生体分子例えば蛋白及び核酸の精製及び分離、遺伝子のマツピング及びＤＮＡ配 列に関する急速な進歩は、分離媒体としてのアガロースについて需要を増大させ ている。アガロースは、Ｐｏ　１　ｓ　ｏｎのポリエチレングリコール法（米国 特許第３３３５１２７号Ｌ　Ｂａｒｔｅｌｉｎｇ。

Ｃｌ１ｎ、Ｃｈｅｍ、１５．１００２−１００５　（１９６９）の水酸化アルミ ニウム吸着法並びに　Ｂｌｅｔｈｅｎの第四級アンモニウム塩／硫酸化多糖類法 （米国特許第３２８１４０９号）により工業的に製造されている。これらの方法 のすべてにおいて、大きなしかも最低に電荷されたアガロース分子が、さらに高 く電荷されたアガロペクチン分子から分離される。

これらの方法により製造されたアガロースは、多くの電気泳動、免疫拡散及びク ロマトグラフィーの応用に満足できるが、大きなゲルの強さく低い濃度での使用 を可能にし、大きな孔が大きな分子の分離を可能にする）ばかりでなく、より速 いさらに信頼できしかも正確な分離を可能（′ニジそして材料の小さい量の検出 を可能にするアガロースが現在要求されている。

種々の精製技術が、Ｚａｂｉｎ（米国特許第３４２３３９６号）及びＤｕｃｋｗ ｏｒｔｈ及びＹａｐｈｅ　（米国特許第３７５３９７２号）のイオン交換法から 始まり、そしてアルカリ性膜イオウ法にアルコール沈殿及び水素化リチウムアル ミニウムによる還元に関するＬａａｓ及び協同研究者（Ｊ、Ｃｈｒｏｍａ、ｔｏ ｇｒ、６０　（＋　９７１）！６７−１７７及び６６　（１９７２）３４７６− ３５５．Ａｎａｌ、Ｂｉｏｃｈｅｍ、７２（１９７６）５２７−５３２）の方法 に続く、改良されたアガロースを製造する努力のために開発された。しかしなが ら、これらの方法は、信頼できる品質を有しないか又は高価及び／又は安全でな い方法を必要とする材料を生じさせる。アルカリによる徹底的な処理は、多くの サルフェートを除くが、又アガー及びアガロースのゲルの強さを劣化させる。

等電点電気泳動におけるような低い本質的に零のＥＥＯが重要な用途に関するア ガロースの製造では、残存するＥＥＯは、ガム例えば精製されたローカストビー ン又はグアーガムの添加により抑制されるか（Ｃｏｏｋ及びＷｉｔｔの米国特許 第４２９０９１１号）、又は正に電荷された基のアガロースへの導入により電荷 がバランスされる（Ｈａｎｓｓｏｎ及びＫａｇｅｄａ　１の米国特許第４３１２ ７３９号）。しかし電気泳動に用いられたとき、これらの媒体は、加えられた材 料又は基のために、生体分子例えばＤＮＡと結合（不動化）し勝ちである。媒体 は、又低いゲル強さを有し、そして修飾は、それらのゲル化及び融点に悪影響を 与える。

Ｌａｉ、Ｂｉｒｒｅｎ及び協同研究者は、パルスされたフィールドゲル電気泳動 の種々の形を研究して、ＤＮＡは低いＥＥＯのアガロースから製造されたゲル中 で最も早く移動し、それ故ＥＥＯに対する分離の速度に関することを明らかにし た（ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ　７．Ｎｏ、１（１９８９）３４−４２．３９ において）。この関係は、従って最新の電気泳動法に関するアガロースの有用性 の部分的な目安となっている。

発明の開示 本発明は、早い使用時間（時間で５０％以上の縮少のオーダー）、非常に少量の 材料の検出、明確且つ信頼できる分離を促進するが又高いゲル強さを示す電気泳 動法の媒体への需要を満足させる一群のアガロースを提供する。これらの利点の 組合わせは、広い範囲のサイズの生体分子の電気泳動的精製及び分離に非常に有 用であると、これらのアガロースをする。

本発明の一つの態様では、急速な電気泳動に有用な水性ゲルを形成できる乾燥固 体組成物が提供される。アガロース組成物は、０．　２重量％より低いが零より 大きいサルフェート含量、０−０．１重量％のピルベート含量及びＯ−０，０４ 重量％のキエルダール窒素含量を有する精製されたアガロースより本質的になる 。アガロースから形成されたゲルは、少なくとも１２００ｇ／ｃｍ２　（１，０ 重量％の濃度）のゲル強さ、０．０７Ｍ以下のトリスアセテート緩衝液中のＤＮ Ａ結合の実質的な不存在並びに１、　０１１量％のアガロース濃度における０、 ０５以下のＥＥＯを示す。

本発明の他の態様では、プレカーサーアガロースの精製による低ＥＥＯアガロー スの製造について種々の方法が提供され、それは、イオン交換、低分子量ポリオ ールによる分別、修飾したシリカ基体上のクロマトグラフィー分離、コントロー ルされた塩の条件下の低級（Ｃ，−Ｃ，）アルコールによる分別並びにこれらの 方法の任意の組合わせを含む他の技術を含む。

本発明は、さらに精製の方法により生成されるアガロースを含む。

本発明の他の態様において、分離／精製媒体が前記の改善された早く移動するア ガロースである分離及び精製の電気泳動法が提供される。

電気浸透（ＥＥＯ）は、電気泳動中電極に向って水性ゲルを通る流体のドリフト として記述できる。電気的に中性又は殆ど中性の分子が、電気泳動されるべきサ ンプル中に存在しそしてゲル媒体が電荷を育するとき、ドリフトが生ずる。アガ ロースが媒体のとき、アニオン性残基例えばエステルサルフェート及びピルベー ト基が存在しそしてゲルに全陰電荷を与える。

ゲルそれ自体は陽極に移動できないが、その回りの水球は、結合したアニオンと 結合した水和されたカチオンにより陰極に向って引き出されるか又は乱される。

その結果、サンプル中の中性の分子は、水により次第に陰極に向って引かれる。

ＥＥＯは、相対的移動度（−ｍｒ）として数学的に表示され、そして０．０５Ｍ ％１）８８．　６のバルビタール緩衝液中のアガロースの１重量％溶液を調製す ることにより測定される。３ｍ】の溶液を清潔な顕微鏡スライドにそそぎそして 室温でゲルにする。皮下注射筒につけられた角をとったＮｏ、Ｉ３の針を用いて 、ただ一つの孔が、ゲルの中心から吸引される。

標準のテスト溶液は調製され、それは０．０５Ｍ、ｐＨ８，６のバルビタール緩 衝液中のｌ０ｍｇ／ｍｌのＤｅｘｔｒａｎ　５００　（Ｐｈａｒ−ｍａｃｉａ） 及び２ｍｇ／ｍｌの結晶性（４Ｘ）ヒトアルブミンよりなる。

小さいボアドロッパーを用いて、吸引された孔を殆ど充たすのに十分な溶液を加 える。これらのスライドを次に紙芯を用いて電気泳動のための位置に置く。ｌＯ ボルト／　ｃ　ｍの電圧を一定の電圧装置を用いてかける。

電気泳動を３時間続け、次にスライドを取り出す。肉眼観察は、２段階で達成さ れる。スライドを先ず１５分間変性（３Ａ）エタノールに置き、次にデキストラ ンの位置を原点に関して測定する（ＯＤ＝原点の位置からデキストランへ中心か ら中心の距離）。測定後、スライドを蛋白染色溶液（５０ｍｌの氷酢酸中の０． ５ｇのアミドブラックから調製し、次にエタノールにより５００ｍ１とする）に 移す。１５分後、スライドをｌ：ｌ酢酸（５％）：エタノール溶液中で洗って過 剰の染色を除く。アルブミンの位置は通常１５分後にめられるが、１時間あれば 十分である。スポットの中心から原点の中心の距離が測定される（ＯＡ＝原点か らアルブミンへの距離）。電気浸透の度（−ｍｒ）は、式％式％） を用いて計算される。

ここで用いられるゲルの強さく又「破壊強さ」として知られている）は、Ｆｏｓ ｔｅｒらの米国特許第３３４２６１２号（１９６７年９月１９日）に記載された 方法及び装置を用いることにより測定でき、その記述はここに参考として引用さ れ、さらに１６．８３ｃｍ／分の一定速度でプランジャーを進める自動ドライブ を設けることにより測定できる。ゲル化は、２時間ｌＯ℃で水浴中で溶液を冷却 することにより、テストの目的について達成される。ゲルは、次に水浴から取り 出され、そして１　ａｍ”の面積を育する円形のプランジャーを用いてゲルの強 さが測定される。

本発明のアガロースの特徴であるＤＮＡ結合化の実質的な不存在は、二、三のや り方で測定可能であるが、一般に０．０１Ｍ以下のトリスアセテート緩衝液によ り緩衝された１、０重量％のアガロースゲル中の４Ｖ／ｃｍの電圧勾配及び２２ ℃の２．０３ｋｂ　ＤＮＡの移動の測定可能な遅れが実質的にないことを特徴と する。好ましいトリスアセテート緩衝液の濃度は、０．０６２Ｍである。「トリ スアセテート緩衝液」は、代表的にはそれぞれ０．０４Ｍ、０．０２Ｍ及び０． ００２Ｍの濃度の、ｐＨ７，８に調節された、トリス（ヒドロキシメチル）アミ ノメタン、酢酸ナトリウム及びナトリウムＥＤＴＡ　（エチレンジアミン四酢酸 （ナトリウム塩）〕の混合物である。

本発明のアガロースを調製するのに好適なアガー源は、好ましくは必要なレベル にサルフェート及びピルベートを低下させるのに要求される処理が少ないように 、サルフェート及びピルベート（カルボキシレート）含量の低いものである。従 って、好ましいアガーは、Ｇｅｌｉｄｉｕｍ。

Ｇｒａｃｆｌａｒｉａ及びＰｔｅｒＯＣＩａｄｉａの藻の種又はこれらの任意の 混合物から誘導されたものであるが、もし要求されるサルフェート及びピルベー ト含量への処理が経済的であるならば、他のものも有用である。

本発明の方法は、アガーばかりでなく、アルカリ処理アガー、本発明の組成物を 規定する性質が不当に高いアガロースについて実施できる。

本発明の組成物は、上記で規定された範囲の性質により規定されたものを含むが 、好ましい組成物は、サルフェート含量がＯ−０，１５重量％であり、ピルベー ト含量が０−０．１重量％であり、キエルダール窒素含量が０．００１−０．０ ２重量％であり、ゲルの強さが少なくとも１６００ｇ／ａｍ”であるものであり 、そして組成物は、１重量％のアガロース濃度で０．０４以下のＥＥＯを示す。

その上、アガロースは、藻の種からの処理中水素化ホウ素ナトリウム処理に付随 して生ずる還元されたアルデヒド残基を除いて、人工的な置換基又は他の化学的 修飾を実質的に含まないだろう。好ましくは、精製されたアガロースは、灰残基 を含まないが、しかし約０．５重量％の灰分（さらに好ましくは０．３重量％ま で）は認めることができる。

組成物は、微細な粒状物又は他の存用な形の乾燥した状態であるが、又は水和さ れた形のアガロースを電気泳動的に有効な量（例えば全ゲル重量に基づいて約０ ．０３−約１０重量％のアガロース（乾燥））含む水性ゲルとして何れかのアガ ロースよりなる。

結合化の不存在及びＥＥＯのパラメーターは、実施例に説明された改良された実 施時間をもたらすアガロースを予言するのに信頼できることが分かったので、種 々の精製法が、アガロースを得るのに適用できる。それ故、アニオン交換樹脂が 用いられ、樹脂による生成物の汚染を避けるために注意を払う。好適なイオン交 換樹脂法は、文献並びにＺａｂｉｎの米国特許第３４２３３９６号及びＤｕｃｋ ｗｏｒｔｈ及びＹａｐｈｅの米国特許第３７５３９７２号に記述されている。他 の方法は、１９８９年２月２２日に公開されたＲ、Ｂ、Ｐｒｏｖｅｎｃｈｅｅの ヨーロッパ特許出願第３０４０２４号に記載された低分子量ポリオールによる分 別、Ｇｏｌｄ−ｂｅｒｇの米国特許第３８６２０３０号及びＧｏｌｄｂｅｒｇ及 びＣｈｅｎの米国特許第４６８９３０２号に記載された修飾シリカ支持体上の分 離、コントロールされた塩濃度の条件下のアルコールによる分別並びに方法の組 合わせを含む。前記の文献、特許及び特許出願は、ここに参考として引用される 。

コントロールされた塩／アルコール分別法において、原料アガロースは、蒸留水 にスラリイーとされ、伝導性の測定が、塩の含量が経済的に好適な低いレベル例 えばＮａＣ１として約３ｍＭ以下に相当するレベルに低下したことを示すまで、 繰返し濾過及び再懸濁される。得られた懸濁物は、次に煮沸してアガロースを溶 解させ、約７０−７５℃に冷却し、低級（Ｃ。

−０４）アルコール例えばイソプロピルアルコール（約４０℃に加熱）により沈 殿させ、沈殿を洗い、乾燥しそして砕く（もし所望ならば）。アルコールの量及 び沈殿の他の条件（温度、ｐＨ，アガロース及びアルコールの混合方法）は、得 られるアガロースのイオン強度及び物理的性質をコントロールし、従って変化で きる。例えば、ｐＨ６，５以下では、アガロースは一般に細い塊として沈殿し、 ｐＨ７，５より高いと、それはひも状になり勝ちであり取扱いが難しくなる。従 って、約６−８のｐＨが沈殿段階では好ましく、さらに好ましくは約７．２であ る。その上、もしアガロースが、その逆よりむしろ、アガロースゾル（水性相） にアルコールを加えることにより沈殿するならば、さらに高い塩含量も許容でき る。しかし、一般に、水性相の塩含量は、ＮａＣ１として２．０ｍＭを超えては ならない。好ましい塩の濃度は、同じ基礎で０．　００３−０．　８ｍＭ、さら に好ましくは０．４ｍＭを超えないことである。

生成アガロースは、アガロース媒体が従来通りに用いられる多くの電気泳動的又 は拡散法の任意のものに用いられ、そして周知のプロトコールに従って用いられ る。例えば、電気泳動に加えて、アガロースは、等電点泳動、クロマトグラフィ ー分離並びに分離、アッセイ、支持、変換（培養、クリーニング、クローニング など）又は生物学的材料の処理に関する他の方法に有用である。

発明を実施するための最良の形態 以下の実施例は、本発明をさらに説明する。

実施例１ Ｇｅｌｉｄｉｕｍ海草から誘導されたアガロース（３ｅａｋｅｍ（商標）ＬＥア ガロース、ＦＭＣＢｉｏＰｒｏｄｕｃｔｓ）２０ｇを、室温で蒸留水ｌｌ中で攪 拌した。１５分後、スラリーの伝導度を測定し、５０．０μモーであることが分 り、それは先に調製した標準曲線に基づいて０．４２７ｍＭ即ち約０．０２５ｇ の塩化ナトリウムに相当する。アガロースは、グツフナ−漏斗上のワットマンＮ ｏ、５４ペーパーを通る濾過により液体から分離し、８６．３ｇのウェットケー トを得た。これは、９３３．７ｍｌの蒸留水に再懸濁し、前記のように攪拌した 。伝導度の平衡値は、３４μモーであり、それは３μＭ即ち約０．１８ｍｇ／ｌ の塩化ナトリウム濃度に相当する。

アガロースをさらに濾過し、次に水に再懸濁して全重量を１０００ｇとし、煮沸 により溶解し、２％溶液を形成した。それを７４℃に冷却し、再方の液体を同時 に第三の容器に注いで均一な混合を最大にすることにより、４２°Ｃに加熱した 共沸イソプロピルアルコール（ＩＰＡ）（８７，７重量％のＩＰＡ）２１と混合 した。混合物を３２℃に冷却し、そして得られた沈殿は、全混合物を１２０メツ シユのスクリーンを通して注ぐことにより白濁した上澄液から分離した。沈殿を スクイズ瓶からの６０％ＩＰＡの流れによりスクリーン上で２回洗い、次にゴム スパチュラにより押し、５５℃で通風オープン中で乾燥した。

乾燥した生成物を、実験室用破砕ミル（Ｗｉｌｅ）’ミル）中で２０メツシユ（ ＵＳ）スクリーンを通して砕き、次に分析しそしてテストした。ピルベート分析 は、Ｄｕｃｋｗｏｒｔｈ及びＹａｐｈｅの方法（乳酸脱水素酵素）、Ｃｈｅｍ、 Ｉｎｄ、７４７−７４８　（１９７０）によった。ゲル強さは、１．０重量％の サンプルについて測定された。窒素は、キエルダール法によった。原料アガロー スとの比較の結果は、表１に示される。

収率、重量％　５３．９ ゲル強さ、ｇ／ｃｍ”　１４０６　１８１４灰分、重量％　０．６２　０．１８ サルフエート、重量％　０．１４　０．０７ＥＥＯ（−ｍｒ）　Ｏ，ｌ　１　０ ．．０５窒素、重量％　０．０１　０．０１ ピルベート、重量％　０．　１８５　０．　０７２さらに、ＤＮＡが、以下の条 件下でｐＨ７，８でトリスアセテート緩衝液中で１．０重量％の精製アガロース 中で電気泳動したとき、結合は観測されなかった。

ＤＮＡニラムダファージのＨｉｎ　ｄｌｌＩ分解物、１７２ｎｇ。

緩衝液：４０ｍＭ）リス（ヒドロキシメチル）アミノメタン２０ｍＭ酢酸ナトリ ウム ２ｍＭナトリウムＥＤＴＡ 電気泳動：２２℃で３時間４ボルト／ｃｍ勾配非結合のための標準：第６番バン ド ２０分間１ｍｇ／Ｉでエチジウムプロミドにより染色しそして少なくとも５ｃｍ 移動したとき、（２，０３ｋｂ　ＤＮＡ）が認められる。

実施例２ Ｐｔｅｒｏｃｌａｄｔａアガーから単離されたアガロース２０ｇを蒸留水１１で スラリー化し、数滴の希水酸化ナトリウム溶液を加えてｐＨを７．２に上げた。

スラリーを加熱して煮沸し、次に５４°Ｃに冷却し、それに５４°Ｃで２１の共 沸イソプロピルアルコールを加えた。得られた沈殿を実施例１におけるように処 理し、分析した。実施例１におけるように測定した結果は、表２に示される。精 製アガロースは、実施例１におけるようにテストしたとき、ＤＮＡに対して非結 合性であった。

収率、重量％　４４．４ ゲル強さ、ｇ／ｃｍ”　＋０４６　’　＋４２０灰分、重量％　０．６４　０． １１ サルフエート、重量％　０．１！、　０．０７ＥＥＯ（−ｍｒ）　Ｏ，Ｉ　０　 ０．　０４窒素、重量％　０．０１　０．０＋ ピルベ一ト重量％　０．　００８　０．　００３実施例３ 実施例２を、高い灰分を存するＧｅｌｉｄｉｕｍアガロースを用いて繰返した。

表３が示すように、回収アガロースのＥＥＯは、本発明のアガロースを規定する 性質を存しなかった。データは、実施例１におけるように得られた。（ｒＮＡＪ は、アッセイされなかったことを意味する。）表　３ 収率、重量％　３７．９ ゲル強さ、ｇ／ｃｍ’　＋０２０　１５００灰分、重量％　０．７４　ＮＡ サルフェート、重量％　０．１４　０．１６ＥＥＯ（−ｍｒ）　Ｏ，＋　３　０ ．　０７窒素、重量％　ＮＡ　ＮＡ ピルベート、重量％　０．１４７　０．０９０実施例４ Ｇｅｌｉｄｉｕｍアガロース３０ｇをプロピレングリコール１０１００Ｏ及び水 ５０ｍ１の混合物に分散し、１３５℃に加熱することにより溶、解した。冷却し て、沈殿が形成し、それを集めイソプロピルアルコールにより洗った。分別した アガロースの性質は、実施例１におけるように測定して、表４に示される。精製 したアガロースは、実施例１におけるようにテストされたとき、ＤＮＡと結合し なかった。

ゲル強さ、ｇ／ｃｍ”　１４４０　１６８０灰分、重量％　０．　３７　０．　 ０２サルフエート、重量％　０．　０３　０．　０３ＥＥＯ（−ｍｒ）　０．１ ０　０．０４窒素、重量％　０．　０１　０．　００４ピルベート、重量％　０ ．１８７　０．０６９実施例５ Ｇｒａｃ　ｉ　ｊａｒ　ｉａアガロースをＧｅｌｉｄｉｕｍアガロースの代りに した以外は、実施例４をすべての本質的な点で繰返した。性質を表５１；示す。

精製したアガロースは、実施例１におけるようにテストされたとき、ＤＮＡを結 合しなかった。

ゲル強さ、ｇ／ａｍ２　１０３４　１５＋４灰分、重量％　０．　５２　０．　 ２０サルフエート、重量％　０．１３　０．１０ＥＥＯ（−ｍｒ）　０．０９　 ０．０５窒素、重量％　０．　０＋３　０．　００７ピルベート、重量％　０． 　０１　０．　００３実施例６ アガロースは、Ｂａｒｔｅｒｉｎｇ　（Ｃ１ｉｎｉｃａｌ　Ｃｈｅｍｉ−ｓｔｒ ｙ、１５．１００２−１００５　（１９６９））の水酸化アルミニウム吸着法に よりＧｒａｃｉｌａｒｉａ海草から製造し、実施例１におけるように分析した。

生成物は、以下の性質を有した。

表　６ ゲル強さ、ｇ／ｃｍ”　＋３４０ サルフエート、重量％　０，１２ ＥＥＯＣ−ｍｒ’）　０．０５ 窒素及びピルベートの分析は、行われなかった。窒素については、含窒素置換基 は導入されず、ピルベートについては、Ｇｒａｃｉｌａｒｉａアガーはピルベー トを含まないからである。生成物の伝導度は、４０μモーであることが分り、そ れは０．３３６ｍＭの塩濃度（ＮａＣ］として）に相当する。

国際調査報告

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １．精製したアガロースの急速電気泳動に有用な水性ゲルを形成できる乾燥固体 組成物において、０．２重量％より少ないが零より多いサルフェート含量、０− ０．１重量％のピルベート含量並びに０−０．０２重量％の窒素含量を特徴とし 、該ゲルは１．０重量％の濃度で少なくとも１２００ｇ／ｃｍ２のゲル強さ、０ ．０７Ｍ以下のトリスアセテート緩衝液中のＤＮＡ結合化の実質的な不存在並び に１．０重量％濃度で０．０５以下の電気浸透を特徴とする組成物。 ２．アガロースが、Ｇｅｌｉｄｉｕｍ、Ｇｒａｃｉｌａｒｉａ又はＰｔｅｒｏｃ ｌａｄｉａアガー、又はその２種以上の混合物から誘導される請求項１の組成物 。 ３．サルフェート含量が０．１５重量％以下であり、窒素含量が０．００１−０ ．０２重量％であり、そしてゲル強さが少なくとも１６００ｇ／ｃｍ２である請 求項１の組成物。 ４．電気浸透が約０．０４以下である請求項１の組成物。 ５．ＤＮＡ結合化の不存在が、０．０７Ｍ以下の濃度のトリスアセテートにより 緩衝された１．０重量％のゲル中で４Ｖ／ｃｍの電圧勾配並びに２２℃で２．０ ３ｋｂＤＮＡの移動度の遅れが実質的にないことを特徴とする請求項１の組成物 。 ６．アガロースが、Ｇｅｌｉｄｉｕｍ、Ｇｒａｃｉｌａｒｉａ又はＰｔｅｒｏｃ ｌａｄｉａアガー、又はこれらの２種以上の混合物から誘導され、サルフェート 含量が０．１５重量％以下であり、窒素含量が０．００１−０．０２重量％であ り、そしてゲル強さが少なくとも１６００ｇ／ｃｍ２である請求項１の組成物。 ７．粒状の形である請求項１の組成物。 ８．請求項１の組成物の水中のゲル化した溶液を特徴とする水性ゲル。 ９．組成物が、ゲルの全重量に基づいて約０．１−５．０重量％の量で存在する 請求項８の水性ゲル。 １０．請求項２の組成物の水中のゲル化した溶液を特徴とする水性ゲル。 １１．請求項３の組成物の水中のゲル化した溶液を特徴とする水性ゲル。 １２．請求項５の組成物の水中のゲル化した溶液を特徴とする水性ゲル。 １３．請求項６の組成物の水中のゲル化した溶液を特徴とする水性ゲル。 １４．請求項１の組成物を提供するためにアガロースを精製する方法において、 ６．８−８．０のｐＨに緩衝されそして塩化物として２．０ｍＭ以下の塩を含む 水性媒体中にアガロース又はアルカリ修飾アガーを溶解し、さらに低級アルカノ ールとの接触によりアガロースを沈殿することを特徴とする方法。 １５．低級アルカノールがイソプロパノールである請求項１４の方法。 １６．ｐＨが７．２であり、塩含量が０．００３−０．８ｍＭの範囲にある請求 項１４の方法。 １７．低級アルカノールがイソプロパノールであり、ｐＨが７．２であり、塩含 量が０．００３−０．４ｍＭの範囲にある請求項１４の方法。 １８．アルカノールが水性媒体に加えられる請求項１４の方法。 １９．請求項１４の方法により製造される精製アガロース。 ２０．請求項１５の方法により製造される精製アガロース。 ２１．請求項１７の方法により製造される精製アガロース。 ２２．請求項１８の方法により製造される精製アガロース。 ２３．分離媒体中で生物学的材料を電気泳動的に分離する方法において、請求項 ８の水性ゲルを分離媒体として用いることを特徴とする方法。