JPH087187B2 - 低電気浸透アガロース - Google Patents
低電気浸透アガロースInfo
- Publication number
- JPH087187B2 JPH087187B2 JP2512066A JP51206690A JPH087187B2 JP H087187 B2 JPH087187 B2 JP H087187B2 JP 2512066 A JP2512066 A JP 2512066A JP 51206690 A JP51206690 A JP 51206690A JP H087187 B2 JPH087187 B2 JP H087187B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- agarose
- composition
- agar
- weight
- gel
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Lifetime
Links
Classifications
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01D—SEPARATION
- B01D57/00—Separation, other than separation of solids, not fully covered by a single other group or subclass, e.g. B03C
- B01D57/02—Separation, other than separation of solids, not fully covered by a single other group or subclass, e.g. B03C by electrophoresis
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
- C07K1/14—Extraction; Separation; Purification
- C07K1/24—Extraction; Separation; Purification by electrochemical means
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
- C07K1/14—Extraction; Separation; Purification
- C07K1/24—Extraction; Separation; Purification by electrochemical means
- C07K1/26—Electrophoresis
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
- C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
- C08B37/0006—Homoglycans, i.e. polysaccharides having a main chain consisting of one single sugar, e.g. colominic acid
- C08B37/0036—Galactans; Derivatives thereof
- C08B37/0039—Agar; Agarose, i.e. D-galactose, 3,6-anhydro-D-galactose, methylated, sulfated, e.g. from the red algae Gelidium and Gracilaria; Agaropectin; Derivatives thereof, e.g. Sepharose, i.e. crosslinked agarose
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N27/00—Investigating or analysing materials by the use of electric, electrochemical, or magnetic means
- G01N27/26—Investigating or analysing materials by the use of electric, electrochemical, or magnetic means by investigating electrochemical variables; by using electrolysis or electrophoresis
- G01N27/416—Systems
- G01N27/447—Systems using electrophoresis
- G01N27/44704—Details; Accessories
- G01N27/44752—Controlling the zeta potential, e.g. by wall coatings
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Electrochemistry (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Environmental & Geological Engineering (AREA)
- Immunology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Materials Engineering (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
- Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
- Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)
- Colloid Chemistry (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
Description
【発明の詳細な説明】 技術分野 本発明は、電気泳動及び他の拡散法又は相互作用に用
いられる改良された性質特に低電気浸透（Electroendsm
osis即ちEEO）を有するアガロース組成物に関する。本
発明は、さらにそれらの電気泳動的性質を改善するため
にアガロースを精製する方法に関し、そして電気泳動及
び他の応用にアガロースを用いる方法に関する。
いられる改良された性質特に低電気浸透（Electroendsm
osis即ちEEO）を有するアガロース組成物に関する。本
発明は、さらにそれらの電気泳動的性質を改善するため
にアガロースを精製する方法に関し、そして電気泳動及
び他の応用にアガロースを用いる方法に関する。
背景技術 生体分子例えば蛋白及び核酸の精製及び分離、遺伝子
のマッピング及びDNA配列に関する急速な進歩は、分離
媒体としてのアガロースについて需要を増大させてい
る。アガロースは、Polsonのポリエチレングリコール法
（米国特許第3335127号）、Barteling,Clin.Chem.15,10
02−1005（1969）の水酸化アルミニウム吸着法並びにBl
ethenの第四級アンモニウム塩／硫酸化多糖類法（米国
特許第3281409号）により工業的に製造されている。こ
れらの方法のすべてにおいて、大きなしかも最低に電荷
されたアガロース分子が、さらに高く電荷されたアガロ
ペクチン分子から分離される。
のマッピング及びDNA配列に関する急速な進歩は、分離
媒体としてのアガロースについて需要を増大させてい
る。アガロースは、Polsonのポリエチレングリコール法
（米国特許第3335127号）、Barteling,Clin.Chem.15,10
02−1005（1969）の水酸化アルミニウム吸着法並びにBl
ethenの第四級アンモニウム塩／硫酸化多糖類法（米国
特許第3281409号）により工業的に製造されている。こ
れらの方法のすべてにおいて、大きなしかも最低に電荷
されたアガロース分子が、さらに高く電荷されたアガロ
ペクチン分子から分離される。
これらの方法により製造されたアガロースは、多くの
電気泳動、免疫拡散及びクロマトグラフィーの応用に満
足できるが、大きなゲルの強さ（低い濃度での使用を可
能にし、大きな孔が大きな分子の分離を可能にする）ば
かりでなく、より速いさらに信頼できしかも正確な分離
を可能にしそして材料の小さい量の検出を可能にするア
ガロースが現在要求されている。
電気泳動、免疫拡散及びクロマトグラフィーの応用に満
足できるが、大きなゲルの強さ（低い濃度での使用を可
能にし、大きな孔が大きな分子の分離を可能にする）ば
かりでなく、より速いさらに信頼できしかも正確な分離
を可能にしそして材料の小さい量の検出を可能にするア
ガロースが現在要求されている。
種々の精製技術が、Zabin（米国特許第3423396号）及
びDuckworth及びYaphe（米国特許第3753972号）のイオ
ン交換法から始まり、そしてアルカリ性脱イオウ次にア
ルコール沈殿及び水素化リチウムアルミニウムによる還
元に関するLaas及び協同研究者（J.Chromatogr,60（197
1）167−177及び66（1972）3476−355、Anal.Biochem.7
2（1976）527−532）の方法に続く、改良されたアガロ
ースを製造する努力のために開発された。しかしなが
ら、これらの方法は、信頼できる品質を有しないか又は
高価及び／又は安全でない方法を必要とする材料を生じ
させる。アルカリによる徹底的な処理は、多くのサルフ
ェートを除くが、又アガー及びアガロースのゲルの強さ
を劣化させる。
びDuckworth及びYaphe（米国特許第3753972号）のイオ
ン交換法から始まり、そしてアルカリ性脱イオウ次にア
ルコール沈殿及び水素化リチウムアルミニウムによる還
元に関するLaas及び協同研究者（J.Chromatogr,60（197
1）167−177及び66（1972）3476−355、Anal.Biochem.7
2（1976）527−532）の方法に続く、改良されたアガロ
ースを製造する努力のために開発された。しかしなが
ら、これらの方法は、信頼できる品質を有しないか又は
高価及び／又は安全でない方法を必要とする材料を生じ
させる。アルカリによる徹底的な処理は、多くのサルフ
ェートを除くが、又アガー及びアガロースのゲルの強さ
を劣化させる。
等電点電気泳動におけるような低い本質的に零のEEO
が重要な用途に関するアガロースの製造では、残存する
EEOは、ガム例えば精製されたローカストビーン又はグ
アーガムの添加により抑制されるか（Cook及びWittの米
国特許第4290911号）、又は正に電荷された基のアガロ
ースへの導入により電荷がバランスされる（Hansson及
びKagedalの米国特許第4312739号）。しかし電気泳動に
用いられたとき、これらの媒体は、加えられた材料又は
基のために、生体分子例えばDNAと結合（不動化）し勝
ちである。媒体は、又低いゲル強さを有し、そして修飾
は、それらのゲル化及び融点に悪影響を与える。
が重要な用途に関するアガロースの製造では、残存する
EEOは、ガム例えば精製されたローカストビーン又はグ
アーガムの添加により抑制されるか（Cook及びWittの米
国特許第4290911号）、又は正に電荷された基のアガロ
ースへの導入により電荷がバランスされる（Hansson及
びKagedalの米国特許第4312739号）。しかし電気泳動に
用いられたとき、これらの媒体は、加えられた材料又は
基のために、生体分子例えばDNAと結合（不動化）し勝
ちである。媒体は、又低いゲル強さを有し、そして修飾
は、それらのゲル化及び融点に悪影響を与える。
Lai,Birren及び協同研究者は、パルスされたフィール
ドゲル電気泳動の種々の形を研究し、DNAは低いEEOのア
ガロースから製造されたゲル中で最も早く移動し、それ
故EEOに対する分離の速度に関することを明らかにした
（BioTechniques 7,No.1（1989）34−42、39におい
て）。この関係は、従って最新の電気泳動法に関するア
ガロースの有用性の部分的な目安となっている。
ドゲル電気泳動の種々の形を研究し、DNAは低いEEOのア
ガロースから製造されたゲル中で最も早く移動し、それ
故EEOに対する分離の速度に関することを明らかにした
（BioTechniques 7,No.1（1989）34−42、39におい
て）。この関係は、従って最新の電気泳動法に関するア
ガロースの有用性の部分的な目安となっている。
発明の開示 本発明は、早い使用時間（時間で50％以上の縮少のオ
ーダー）、非常に少量の材料の検出、明確且つ信頼でき
る分離を促進するが又高いゲル強さを示す電気泳動法の
媒体への需要を満足させる一群のアガロースを提供す
る。これらの利点の組合わせは、広い範囲のサイズの生
体分子の電気泳動的精製及び分離に非常に有用である
と、これらのアガロースをする。
ーダー）、非常に少量の材料の検出、明確且つ信頼でき
る分離を促進するが又高いゲル強さを示す電気泳動法の
媒体への需要を満足させる一群のアガロースを提供す
る。これらの利点の組合わせは、広い範囲のサイズの生
体分子の電気泳動的精製及び分離に非常に有用である
と、これらのアガロースをする。
本発明の一つの態様では、急速な電気泳動に有用な水
性ゲルを形成できる乾燥固体組成物が提供される。アガ
ロース組成物は、0.2重量％より低いが零より大きいサ
ルフェート含量、０−0.1重量％のピルベート含量及び
０−0.4重量％のキエルダール窒素含量を有する精製さ
れたアガロースより本質的になる。アガロースから形成
されたゲルは、少なくとも1500g/cm2（1.0重量％の濃
度）のゲル強さ、0.07M以下のトリスアセテート緩衝液
中のDNA結合の実質的な不存在並びに1.0重量％のアガロ
ース濃度における0.05以下のEEOを示す。
性ゲルを形成できる乾燥固体組成物が提供される。アガ
ロース組成物は、0.2重量％より低いが零より大きいサ
ルフェート含量、０−0.1重量％のピルベート含量及び
０−0.4重量％のキエルダール窒素含量を有する精製さ
れたアガロースより本質的になる。アガロースから形成
されたゲルは、少なくとも1500g/cm2（1.0重量％の濃
度）のゲル強さ、0.07M以下のトリスアセテート緩衝液
中のDNA結合の実質的な不存在並びに1.0重量％のアガロ
ース濃度における0.05以下のEEOを示す。
本発明の他の態様では、プレカーサーアガロースの精
製による低EEOアガロースの製造について種々の方法が
提供され、それは、イオン交換、低分子量ポリオールに
よる分別、修飾したシリカ基体上のクロマトグラフィー
分離、コントロールされた塩の条件下の低級（C1−C4）
アルコールによる分別並びにこれらの方法の任意の組合
わせを含む他の技術を含む。本発明は、さらに精製の方
法により生成されるアガロースを含む。
製による低EEOアガロースの製造について種々の方法が
提供され、それは、イオン交換、低分子量ポリオールに
よる分別、修飾したシリカ基体上のクロマトグラフィー
分離、コントロールされた塩の条件下の低級（C1−C4）
アルコールによる分別並びにこれらの方法の任意の組合
わせを含む他の技術を含む。本発明は、さらに精製の方
法により生成されるアガロースを含む。
本発明の他の態様において、分離／精製媒体が前記の
改善された早く移動するアガロースである分離及び精製
の電気泳動法が提供される。
改善された早く移動するアガロースである分離及び精製
の電気泳動法が提供される。
電気浸透（EEO）は、電気泳動中電極に向って水性ゲ
ルを通る流体のドリフトとして記述できる。電気的に中
性又は殆ど中性の分子が、電気泳動されるべきサンプル
中に存在しそしてゲル媒体が電荷を有するとき、ドリフ
トが生ずる。アガロースが媒体のとき、アニオン性残基
例えばエステルサルフェート及びピルベート基が存在し
そしてゲルに全陰電荷を与える。ゲルそれ自体は陽極に
移動できないが、その回りの水球は、結合したアニオン
と結合した水和されたカチオンにより陰極に向って引き
出されるか又は乱される。その結果、サンプル中の中性
の分子は、水により次第に陰極に向って引かれる。
ルを通る流体のドリフトとして記述できる。電気的に中
性又は殆ど中性の分子が、電気泳動されるべきサンプル
中に存在しそしてゲル媒体が電荷を有するとき、ドリフ
トが生ずる。アガロースが媒体のとき、アニオン性残基
例えばエステルサルフェート及びピルベート基が存在し
そしてゲルに全陰電荷を与える。ゲルそれ自体は陽極に
移動できないが、その回りの水球は、結合したアニオン
と結合した水和されたカチオンにより陰極に向って引き
出されるか又は乱される。その結果、サンプル中の中性
の分子は、水により次第に陰極に向って引かれる。
EEOは、相対的移動度（−mr）として数字的に表示さ
れ、そして0.05M、pH8.6のバルビタール緩衝液中のアガ
ロースの１重量％溶液を調製することにより測定され
る。3mlの溶液を清潔な顕微鏡スライドにそそぎそして
室温でゲルにする。皮下注射筒につけられた角をとった
No.13の針を用いて、ただ一つの孔が、ゲル中心から吸
引される。標準のテスト溶液は調製され、それは0.05
M、pH8.6のバルビタール緩衝液中の10mg/mlのDextran
500（Phar−macia）及び2mg/mlの結晶性（4x）ヒトアル
ブミンよりなる。小さいボアドロッパーを用いて、吸引
された孔を殆ど充たすのに十分な溶液を加える。これら
のスライドを次に紙芯を用いて電気泳動のための位置に
置く。10ボルト/cmの電圧を一定の電圧装置を用いてか
ける。
れ、そして0.05M、pH8.6のバルビタール緩衝液中のアガ
ロースの１重量％溶液を調製することにより測定され
る。3mlの溶液を清潔な顕微鏡スライドにそそぎそして
室温でゲルにする。皮下注射筒につけられた角をとった
No.13の針を用いて、ただ一つの孔が、ゲル中心から吸
引される。標準のテスト溶液は調製され、それは0.05
M、pH8.6のバルビタール緩衝液中の10mg/mlのDextran
500（Phar−macia）及び2mg/mlの結晶性（4x）ヒトアル
ブミンよりなる。小さいボアドロッパーを用いて、吸引
された孔を殆ど充たすのに十分な溶液を加える。これら
のスライドを次に紙芯を用いて電気泳動のための位置に
置く。10ボルト/cmの電圧を一定の電圧装置を用いてか
ける。
電気泳動を３時間続け、次にスライドを取り出す。肉
眼観察は、２段階で達成される。スライドを先ず15分間
変性（3A）エタノールに置き、次にデキストランの位置
を原点に関して測定する（OD＝原点の位置からデキスト
ランへ中心から中心の距離）。測定後、スライドを蛋白
染色溶液（50mlの氷酢酸中の0.5gのアミドブラックから
調製し、次にエタノールにより500mlとする）に移す。1
5分後、スライドを1:1酢酸（５％）：エタノール溶液中
で洗って過剰の染色を除く。アルブミンの位置は通常15
分後に求められるが、１時間あれば十分である。スポッ
トの中心から原点の中心の距離が測定される（OA＝原点
からアルブミンへの距離）。電気浸透の度（−mr）は、
式 −mr＝（OD/OA＋OD） を用いて計算される。
眼観察は、２段階で達成される。スライドを先ず15分間
変性（3A）エタノールに置き、次にデキストランの位置
を原点に関して測定する（OD＝原点の位置からデキスト
ランへ中心から中心の距離）。測定後、スライドを蛋白
染色溶液（50mlの氷酢酸中の0.5gのアミドブラックから
調製し、次にエタノールにより500mlとする）に移す。1
5分後、スライドを1:1酢酸（５％）：エタノール溶液中
で洗って過剰の染色を除く。アルブミンの位置は通常15
分後に求められるが、１時間あれば十分である。スポッ
トの中心から原点の中心の距離が測定される（OA＝原点
からアルブミンへの距離）。電気浸透の度（−mr）は、
式 −mr＝（OD/OA＋OD） を用いて計算される。
ここで用いられるゲルの強さ（又「破壊強さ」として
知られている）は、Fosterらの米国特許第3342612号（1
967年９月19日）に記載された方法及び装置を用いるこ
とにより測定でき、その記述はここに参考として引用さ
れ、さらに16.83cm/分の一定速度でプランジャーを進め
る自動ドライブを設けることにより測定できる。ゲル化
は、２時間10℃で水浴中で溶液を冷却することにより、
テストの目的について達成される。ゲルは、次に水浴か
ら取り出され、そして１cm2の面積を有する円形のプラ
ンジャーを用いてゲルの強さが測定される。
知られている）は、Fosterらの米国特許第3342612号（1
967年９月19日）に記載された方法及び装置を用いるこ
とにより測定でき、その記述はここに参考として引用さ
れ、さらに16.83cm/分の一定速度でプランジャーを進め
る自動ドライブを設けることにより測定できる。ゲル化
は、２時間10℃で水浴中で溶液を冷却することにより、
テストの目的について達成される。ゲルは、次に水浴か
ら取り出され、そして１cm2の面積を有する円形のプラ
ンジャーを用いてゲルの強さが測定される。
本発明のアガロースの特徴であるDNA結合の実質的な
不存在は、二、三のやり方で測定可能であるが、一般に
0.01M以下のトリスアセテート緩衝液により緩衝された
1.0重量％のアガロースゲル中の4V/cmの電圧勾配及び22
℃の2.03kb DNAの移動の測定可能な遅れが実質的にな
いことを特徴とする。好ましいトリスアセテート緩衝液
の濃度は、0.062Mである。「トリスアセテート緩衝液」
は、代表的にはそれぞれ0.04M、0.02M及び0.002Mの濃度
の、pH7.8に調節された、トリス（ヒドロキシメチル）
アミノメタン、酢酸ナトリウム及びナトリウムEDTA〔エ
チレンジアミン四酢酸（ナトリウム塩）〕の混合物であ
る。
不存在は、二、三のやり方で測定可能であるが、一般に
0.01M以下のトリスアセテート緩衝液により緩衝された
1.0重量％のアガロースゲル中の4V/cmの電圧勾配及び22
℃の2.03kb DNAの移動の測定可能な遅れが実質的にな
いことを特徴とする。好ましいトリスアセテート緩衝液
の濃度は、0.062Mである。「トリスアセテート緩衝液」
は、代表的にはそれぞれ0.04M、0.02M及び0.002Mの濃度
の、pH7.8に調節された、トリス（ヒドロキシメチル）
アミノメタン、酢酸ナトリウム及びナトリウムEDTA〔エ
チレンジアミン四酢酸（ナトリウム塩）〕の混合物であ
る。
本発明のアガロースを調製するのに公的なアガー源
は、好ましくは必要なレベルにサルフェート及びピルベ
ートを低下させるのに要求される処理が少ないように、
サルフェート及びピルベート（カルボキシレート）含量
の低いものである。従って、好ましいアガーは、てんぐ
さ（Gelidium）、おごのり（Gracilaria）及びおばくさ
（Pterocladia）の藻の種又はこれらの任意の混合物か
ら誘導されたものであるが、もし要求されるサルフェー
ト及びピルベート含量への処理が経済的であるならば、
他のものも有用である。
は、好ましくは必要なレベルにサルフェート及びピルベ
ートを低下させるのに要求される処理が少ないように、
サルフェート及びピルベート（カルボキシレート）含量
の低いものである。従って、好ましいアガーは、てんぐ
さ（Gelidium）、おごのり（Gracilaria）及びおばくさ
（Pterocladia）の藻の種又はこれらの任意の混合物か
ら誘導されたものであるが、もし要求されるサルフェー
ト及びピルベート含量への処理が経済的であるならば、
他のものも有用である。
本発明の方法は、アガーばかりでなく、アルカリ処理
アガー、本発明の組成物を規定する性質が不当に高いア
ガロースについて実施できる。
アガー、本発明の組成物を規定する性質が不当に高いア
ガロースについて実施できる。
本発明の組成物は、上記で規定された範囲の性質によ
り規定されたものを含むが、好ましい組成物は、サルフ
ェート含量が０−0.15重量％であり、ピルベート含量が
０−0.1重量％であり、キエルダール窒素含量が0.001−
0.02重量％であり、ゲルの強さが少なくとも1600g/cm2
であるものであり、そして組成物は、１重量％のアガロ
ース濃度で0.04以下のEEOを示す。その上、アガロース
は、藻の種からの処理中水素化ホウ素ナトリウム処理に
付随して生ずる還元されたアルデヒド残基を除いて、人
工的な置換基又は他の化学的修飾を実質的に含まないだ
ろう。好ましくは、精製されたアガロースは、灰残基を
含まないが、しかし約0.5重量％の灰分（さらに好まし
くは0.3重量％まで）は認めることができる。
り規定されたものを含むが、好ましい組成物は、サルフ
ェート含量が０−0.15重量％であり、ピルベート含量が
０−0.1重量％であり、キエルダール窒素含量が0.001−
0.02重量％であり、ゲルの強さが少なくとも1600g/cm2
であるものであり、そして組成物は、１重量％のアガロ
ース濃度で0.04以下のEEOを示す。その上、アガロース
は、藻の種からの処理中水素化ホウ素ナトリウム処理に
付随して生ずる還元されたアルデヒド残基を除いて、人
工的な置換基又は他の化学的修飾を実質的に含まないだ
ろう。好ましくは、精製されたアガロースは、灰残基を
含まないが、しかし約0.5重量％の灰分（さらに好まし
くは0.3重量％まで）は認めることができる。
組成物は、微細な粒状物又は他の有用な形の乾燥した
状態であるが、又は水和された形のアガロースを電気泳
動的に有効な量（例えば全ゲル重量に基づいて約0.03−
約10重量％のアガロース（乾燥））含む水性ゲルとして
何れかのアガロースよりなる。
状態であるが、又は水和された形のアガロースを電気泳
動的に有効な量（例えば全ゲル重量に基づいて約0.03−
約10重量％のアガロース（乾燥））含む水性ゲルとして
何れかのアガロースよりなる。
上記のサルフェート、ピルベート及び窒素の含量、ゲ
ルの強さ、DNA結合化の不存在及びEEOのパラメーター
は、実施例に説明された改良された実施時間をもたらす
アガロースを予言するのに信頼できることが分かったの
で、種々の精製法が、アガロースを得るのに適用でき
る。それ故、アニオン交換樹脂が用いられ、樹脂による
生成物の汚染を避けるために注意を払う。好適なイオン
交換樹脂法は、文献並びにZabinの米国特許第3423396号
及びDuckworth及びYapheの米国特許第3753972号に記述
されている。他の方法は、1989年２月22日も公開された
R.B.Provencheeのヨーロッパ特許出願第304024号に記載
された低分子量ポリオールによる分別、Gold−bergの米
国特許第3862030号及びGoldberg及びChenの米国特許第4
689302号に記載された修飾シリカ支持体上の分離、コン
トロールされた塩濃度の条件下のアルコールによる分別
並びに方法の組合わせを含む。前記の文献、特許及び特
許出願は、ここに参考として引用される。
ルの強さ、DNA結合化の不存在及びEEOのパラメーター
は、実施例に説明された改良された実施時間をもたらす
アガロースを予言するのに信頼できることが分かったの
で、種々の精製法が、アガロースを得るのに適用でき
る。それ故、アニオン交換樹脂が用いられ、樹脂による
生成物の汚染を避けるために注意を払う。好適なイオン
交換樹脂法は、文献並びにZabinの米国特許第3423396号
及びDuckworth及びYapheの米国特許第3753972号に記述
されている。他の方法は、1989年２月22日も公開された
R.B.Provencheeのヨーロッパ特許出願第304024号に記載
された低分子量ポリオールによる分別、Gold−bergの米
国特許第3862030号及びGoldberg及びChenの米国特許第4
689302号に記載された修飾シリカ支持体上の分離、コン
トロールされた塩濃度の条件下のアルコールによる分別
並びに方法の組合わせを含む。前記の文献、特許及び特
許出願は、ここに参考として引用される。
コントロールされた塩／アルコール分別法において、
原料アガロースは、蒸留水にスラリィーとされ、伝導性
の測定が、塩の含量が経済的に好適な低いレベル例えば
NaClとして約3mM以下に相当するレベルに低下したこと
を示すまで、繰返し濾過及び再懸濁される。得られた懸
濁物は、次に煮沸してアガロースを溶解させ、約70−75
℃に冷却し、低級（C1−C4）アルコール例えばイソプロ
ピルアルコール（約40℃に加熱）により沈殿させ、沈殿
を洗い、乾燥しそして砕く（もし所望ならば）。アルコ
ールの量及び沈殿の他の条件（温度、pH、アガロース及
びアルコールの混合方法）は、得られるアガロースのイ
オン強度及び物理的性質をコントロールし、従って変化
できる。例えば、pH6.5以下では、アガロースは一般に
細い塊として沈殿し、pH7.5より高いと、それはひも状
になり勝ちであり取扱いが難しくなる。従って、約６−
８のpHが沈殿段階では好ましく、さらに好ましくは約7.
2である。その上、もしアガロースが、その逆よりむし
ろ、アガロースゾル（水性相）にアルコールを加えるこ
とにより沈殿するならば、さらに高い塩含量も許容でき
る。しかし、一般に、水性相の塩含量は、NaClとして2.
0mMを超えてはならない。好ましい塩の濃度は、同じ基
礎で0.003−0.8mM、さらに好ましくは0.4mMを超えない
ことである。
原料アガロースは、蒸留水にスラリィーとされ、伝導性
の測定が、塩の含量が経済的に好適な低いレベル例えば
NaClとして約3mM以下に相当するレベルに低下したこと
を示すまで、繰返し濾過及び再懸濁される。得られた懸
濁物は、次に煮沸してアガロースを溶解させ、約70−75
℃に冷却し、低級（C1−C4）アルコール例えばイソプロ
ピルアルコール（約40℃に加熱）により沈殿させ、沈殿
を洗い、乾燥しそして砕く（もし所望ならば）。アルコ
ールの量及び沈殿の他の条件（温度、pH、アガロース及
びアルコールの混合方法）は、得られるアガロースのイ
オン強度及び物理的性質をコントロールし、従って変化
できる。例えば、pH6.5以下では、アガロースは一般に
細い塊として沈殿し、pH7.5より高いと、それはひも状
になり勝ちであり取扱いが難しくなる。従って、約６−
８のpHが沈殿段階では好ましく、さらに好ましくは約7.
2である。その上、もしアガロースが、その逆よりむし
ろ、アガロースゾル（水性相）にアルコールを加えるこ
とにより沈殿するならば、さらに高い塩含量も許容でき
る。しかし、一般に、水性相の塩含量は、NaClとして2.
0mMを超えてはならない。好ましい塩の濃度は、同じ基
礎で0.003−0.8mM、さらに好ましくは0.4mMを超えない
ことである。
生成アガロースは、アガロース媒体が従来通りに用い
られる多くの電気泳動的又は拡散法の任意のものに用い
られ、そして周知のプロトコールに従って用いられる。
例えば、電気泳動に加えて、アガロースは、等電点泳
動、クロマトグラフィー分離並びに分離、アッセイ、支
持、変換（培養、クリーニング、クローニングなど）又
は生物学的材料の処理に関する他の方法に有用である。
られる多くの電気泳動的又は拡散法の任意のものに用い
られ、そして周知のプロトコールに従って用いられる。
例えば、電気泳動に加えて、アガロースは、等電点泳
動、クロマトグラフィー分離並びに分離、アッセイ、支
持、変換（培養、クリーニング、クローニングなど）又
は生物学的材料の処理に関する他の方法に有用である。
発明を実施するための最良の形態 以下の実施例は、本発明をさらに説明する。
実施例１ 海藻のてんぐさから誘導されたアガロース（Seakem
（商標）LEアガロース、FMC BioProducts）20gを、室
温で蒸留水11中で攪拌した。15分後、スラリーの伝導度
を測定し、50.0μモーであることが分り、それは先に調
製した標準曲線に基づいて0.427mM即ち約0.025gの塩化
ナトリウムに相当する。アガロースは、ブッフナー漏斗
上のワットマンNo.54ペーパーを通る濾過により液体か
ら分離し、86.3gのウェットケートを得た。これは、93
3.7mlの蒸留水に再懸濁し、前記のように攪拌した。伝
導度の平衡値は、34μモーであり、それは３μＭ即ち約
0.18mg/lの塩化ナトリウム濃度に相当する。
（商標）LEアガロース、FMC BioProducts）20gを、室
温で蒸留水11中で攪拌した。15分後、スラリーの伝導度
を測定し、50.0μモーであることが分り、それは先に調
製した標準曲線に基づいて0.427mM即ち約0.025gの塩化
ナトリウムに相当する。アガロースは、ブッフナー漏斗
上のワットマンNo.54ペーパーを通る濾過により液体か
ら分離し、86.3gのウェットケートを得た。これは、93
3.7mlの蒸留水に再懸濁し、前記のように攪拌した。伝
導度の平衡値は、34μモーであり、それは３μＭ即ち約
0.18mg/lの塩化ナトリウム濃度に相当する。
アガロースをさらに濾過し、次に水に再懸濁して全重
量を1000gとし、煮沸により溶解し、２％溶液を形成し
た。それを74℃に冷却し、再方の液体を同時に第三の容
器に注いで均一な混合を最大にすることにより、42℃に
加熱した共沸イソプロピルアルコール（IPA）（87.7重
量％のIPA）21と混合した。混合物を32℃に冷却し、そ
して得られた沈殿は、全混合物を120メッシュのスクリ
ーンを通して注ぐことにより白濁した上澄液から分離し
た。沈殿をスクイズ瓶からの60％IPAの流れによりスク
リーン上で２回洗い、次にゴムスパチュラにより押し、
55℃で通風オーブン中で乾燥した。
量を1000gとし、煮沸により溶解し、２％溶液を形成し
た。それを74℃に冷却し、再方の液体を同時に第三の容
器に注いで均一な混合を最大にすることにより、42℃に
加熱した共沸イソプロピルアルコール（IPA）（87.7重
量％のIPA）21と混合した。混合物を32℃に冷却し、そ
して得られた沈殿は、全混合物を120メッシュのスクリ
ーンを通して注ぐことにより白濁した上澄液から分離し
た。沈殿をスクイズ瓶からの60％IPAの流れによりスク
リーン上で２回洗い、次にゴムスパチュラにより押し、
55℃で通風オーブン中で乾燥した。
乾燥した生成物を、実験室用破砕ミル（Wileyミル）
中で20メッシュ（US）スクリーンを通して砕き、次に分
析しそしてテストした。ピルベート分析は、Duckworth
及びYapheの方法（乳酸脱水素酵素）、Chem.Ind.747−7
48（1970）によった。ゲル強さは、1.0重量％のサンプ
ルについて測定された。窒素は、キエルダール法によっ
た。原料アガロースとの比較の結果は、表１に示され
る。
中で20メッシュ（US）スクリーンを通して砕き、次に分
析しそしてテストした。ピルベート分析は、Duckworth
及びYapheの方法（乳酸脱水素酵素）、Chem.Ind.747−7
48（1970）によった。ゲル強さは、1.0重量％のサンプ
ルについて測定された。窒素は、キエルダール法によっ
た。原料アガロースとの比較の結果は、表１に示され
る。
さらに、DNAが、以下の条件下でpH7.8でトリスアセテ
ート緩衝液中で1.0重量％の精製アガロース中で電気泳
動したとき、結合は観測されなかった。
ート緩衝液中で1.0重量％の精製アガロース中で電気泳
動したとき、結合は観測されなかった。
DNA:ランダファージのHin dIII分解物、172ng。
緩衝液:40mMトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタ
ン 20mM酢酸ナトリウム 2mMナトリウムEDTA 電気泳動:22℃で３時間４ボルト/cm勾配 非結合のための標準：第６番バンド 20分間1mg/lでエチジウムブロミドにより染色しそし
て少なくとも5cm移動したとき、（2.03kb DNA）が認め
られる。
ン 20mM酢酸ナトリウム 2mMナトリウムEDTA 電気泳動:22℃で３時間４ボルト/cm勾配 非結合のための標準：第６番バンド 20分間1mg/lでエチジウムブロミドにより染色しそし
て少なくとも5cm移動したとき、（2.03kb DNA）が認め
られる。
比較実施例１ おばくさアガーから単離されたアガロース20gを蒸留
水11でスラリー化し、数滴の希水酸化ナトリウム溶液を
加えてpHを7.2に上げた。スラリーを加熱して煮沸し、
次に54℃に冷却し、それに54℃で21の共沸イソプロピル
アルコールを加えた。得られた沈殿を実施例１における
ように処理し、分析した。実施例１におけるように測定
した結果は、表２に示される。精製アガロースは、実施
例１におけるようにテストしたとき、DNAに対して非結
合性であった。
水11でスラリー化し、数滴の希水酸化ナトリウム溶液を
加えてpHを7.2に上げた。スラリーを加熱して煮沸し、
次に54℃に冷却し、それに54℃で21の共沸イソプロピル
アルコールを加えた。得られた沈殿を実施例１における
ように処理し、分析した。実施例１におけるように測定
した結果は、表２に示される。精製アガロースは、実施
例１におけるようにテストしたとき、DNAに対して非結
合性であった。
比較実施例２ 比較実施例１を、高い灰分を有するてんぐさアガロー
スを用いて繰返した。表３が示すように、回収アガロー
スのEEOは、本発明のアガロースを規定する性質を有し
なかった。データは、実施例１におけるように得られ
た。（「NA」は、アッセイされなかったことを意味す
る。） 実施例２ てんぐさアガロース30gをプロピレングリコール1000m
l及びpH7、塩化物含量2.0mM以下の水50mlの混合物に分
散し、135℃に加熱することにより溶解した。冷却し
て、沈殿が形成し、それを集めイソプロピルアルコール
により洗った。分別したアガロースの性質は、実施例１
におけるように測定して、表４に示される。精製したア
ガロースは、実施例１におけるようにテストされたと
き、DNAと結合しなかった。
スを用いて繰返した。表３が示すように、回収アガロー
スのEEOは、本発明のアガロースを規定する性質を有し
なかった。データは、実施例１におけるように得られ
た。（「NA」は、アッセイされなかったことを意味す
る。） 実施例２ てんぐさアガロース30gをプロピレングリコール1000m
l及びpH7、塩化物含量2.0mM以下の水50mlの混合物に分
散し、135℃に加熱することにより溶解した。冷却し
て、沈殿が形成し、それを集めイソプロピルアルコール
により洗った。分別したアガロースの性質は、実施例１
におけるように測定して、表４に示される。精製したア
ガロースは、実施例１におけるようにテストされたと
き、DNAと結合しなかった。
実施例３ おごのりアガロースをてんぐさアガロースの代りにし
た以外は、実施例２をすべての本質的な点で繰返した。
性質を表５に示す。精製したアガロースは、実施例１に
おけるようにテストされたとき、DNAを結合しなかっ
た。
た以外は、実施例２をすべての本質的な点で繰返した。
性質を表５に示す。精製したアガロースは、実施例１に
おけるようにテストされたとき、DNAを結合しなかっ
た。
比較実施例３ アガロースは、Barteling〔Clinical Chemi−stry,1
5,1002−1005（1969）〕の水酸化アルミニウム吸着法に
よりGracilaria海草から製造し、実施例１におけるよう
に分析した。生成物は、以下の性質を有した。
5,1002−1005（1969）〕の水酸化アルミニウム吸着法に
よりGracilaria海草から製造し、実施例１におけるよう
に分析した。生成物は、以下の性質を有した。
表６ ゲル強さ、g/cm2 1340 サルフェート、重量％ 0.12 EEO（−mr） 0.05 窒素及びピルベートの分析は、行われなかった。窒素
については、含窒素置換基は導入されず、ピルベートに
ついては、おごのりアガーはピルベートを含まないから
である。生成物の伝導度は、40μモーであることが分
り、それは0.336mMの塩濃度（NaClとして）に相当す
る。
については、含窒素置換基は導入されず、ピルベートに
ついては、おごのりアガーはピルベートを含まないから
である。生成物の伝導度は、40μモーであることが分
り、それは0.336mMの塩濃度（NaClとして）に相当す
る。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ１２Ｍ 1/00 Ａ (72)発明者 ノーチャムソン，サミュエル アメリカ合衆国ニュージャージー州 07869 ランドルフ オーバーロック ア ベニュー ６ (56)参考文献 欧州特許出願公開304024（ＥＰ，Ａ１)
Claims (23)
- 【請求項１】精製したアガロースの急速電気泳動に有用
な水性ゲルを形成できる乾燥固体組成物において、0.2
重量％より少ないが零より多いサルフェート含量、０−
0.1重量％のピルベート含量並びに０−0.02重量％の窒
素含量をもち、水性ゲルにしたときゲルが1.0重量％の
濃度で少なくとも1500g/cm2のゲル強さ、0.07M以下のト
リスアセテート緩衝液中でDNA結合が実質上存在せず、
1.0重量％濃度で0.05以下の電気浸透を示すことを特徴
とする組成物。 - 【請求項２】アガロースが、てんぐさアガー、おごのり
アガー又はおばくさアガー、又はその２種以上の混合物
から誘導される請求項１の組成物。 - 【請求項３】サルフェート含量が0.15重量％以下であ
り、窒素含量が0.001−0.02重量％であり、そしてゲル
強さが少なくとも1600g/cm2である請求項１の組成物。 - 【請求項４】電気浸透が約0.04以下である請求項１の組
成物。 - 【請求項５】DNA結合が実質上存在しないことが、0.07M
以下の濃度のトリスアセテートにより緩衝された1.0重
量％のゲル中で4V/cmの電圧勾配並びに22℃で2.03kb D
NAの移動度の遅れを測定したときその遅れが実質的にな
いことによって確認される請求項１の組成物。 - 【請求項６】アガロースが、てんぐさアガー、おごのり
アガー又はおばくさアガー、又はその２種以上の混合物
から誘導され、サルフェート含量が0.15重量％以下であ
り、窒素含量が0.001−0.02重量％であり、そしてゲル
強さが少なくとも1600g/cm2である請求項１の組成物。 - 【請求項７】粒状の形である請求項１の組成物。
- 【請求項８】請求項１の組成物の水中のゲル化した溶液
を特徴とする水性ゲル。 - 【請求項９】組成物が、ゲルの全重量に基づいて約0.1
−5.0重量％の量で存在する請求項８の水性ゲル。 - 【請求項１０】請求項２の組成物の水中のゲル化した溶
液を特徴とする水性ゲル。 - 【請求項１１】請求項３の組成物の水中のゲル化した溶
液を特徴とする水性ゲル。 - 【請求項１２】請求項５の組成物の水中のゲル化した溶
液を特徴とする水性ゲル。 - 【請求項１３】請求項６の組成物の水中のゲル化した溶
液を特徴とする水性ゲル。 - 【請求項１４】請求項１の組成物を提供するためにアガ
ロースを精製する方法において、6.8−8.0のpHに緩衝さ
れそして塩化物として2.0mM以下の塩を含む水性媒体中
にアガロース又はアルカリ修飾アガーを溶解し、さらに
低級アルカノールとの接触によりアガロースを沈澱する
ことを特徴とする方法。 - 【請求項１５】低級アルカノールがイソプロパノールで
ある請求項14の方法。 - 【請求項１６】pHが7.2であり、塩含量が0.003−0.8mM
の範囲にある請求項14の方法。 - 【請求項１７】低級アルカノールがイソプロパノールで
あり、pHが7.2であり、塩含量が0.003−0.4mMの範囲に
ある請求項14の方法。 - 【請求項１８】アルカノールが水性媒体に加えられる請
求項14の方法。 - 【請求項１９】請求項14の方法により製造される精製ア
ガロース。 - 【請求項２０】請求項15の方法により製造される精製ア
ガロース。 - 【請求項２１】請求項17の方法により製造される精製ア
ガロース。 - 【請求項２２】請求項18の方法により製造される精製ア
ガロース。 - 【請求項２３】分離媒体中で生物学的材料を電気泳動的
に分離する方法において、請求項８の水性ゲルを分離媒
体として用いることを特徴とする方法。
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US389,141 | 1989-08-03 | ||
| US07/389,141 US4983268A (en) | 1989-08-03 | 1989-08-03 | High gel strength low electroendosmosis agarose |
| PCT/US1990/004269 WO1991001995A1 (en) | 1989-08-03 | 1990-07-31 | High gel strength and low electroendosmosis agarose |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH04503328A JPH04503328A (ja) | 1992-06-18 |
| JPH087187B2 true JPH087187B2 (ja) | 1996-01-29 |
Family
ID=23537006
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2512066A Expired - Lifetime JPH087187B2 (ja) | 1989-08-03 | 1990-07-31 | 低電気浸透アガロース |
Country Status (5)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4983268A (ja) |
| EP (1) | EP0485510A4 (ja) |
| JP (1) | JPH087187B2 (ja) |
| CA (1) | CA2060314C (ja) |
| WO (1) | WO1991001995A1 (ja) |
Families Citing this family (21)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DK0454763T3 (da) * | 1989-01-13 | 1996-11-25 | Fmc Corp | Adskillelsesgeler og gelsystemer på polysaccharidbasis til stabelelektroforese og fremgangsmåde til støbning af en elektroforesegel |
| JPH0776242B2 (ja) * | 1990-06-13 | 1995-08-16 | エフ エム シー コーポレーション | 誘導体化されたアガロース生成物およびその製法 |
| DE69016014T2 (de) * | 1990-07-04 | 1995-08-31 | Marcin Krotkiewski | Blutdrucksenkendes Präparat. |
| US5230832A (en) * | 1991-01-24 | 1993-07-27 | Brandeis University | Galactomannan-agarose binary gel for nucleic acid electrophoresis |
| US5455344A (en) * | 1993-09-03 | 1995-10-03 | Fmc Corporation | Agarose compositions for nucleic acid sequencing |
| FR2722295B1 (fr) * | 1994-07-07 | 1996-10-04 | Roussy Inst Gustave | Methode d'analyse d'adn dite sscp et gel d'electro-phorene |
| US8071133B2 (en) * | 2001-08-20 | 2011-12-06 | Stiefel Laboratories, Inc. | Oral dosage forms of water insoluble drugs and methods of making the same |
| US20040115266A1 (en) * | 2002-02-01 | 2004-06-17 | Namburi Ranga Raju | Oral itraconazole formulations and methods of making the same |
| US20050267296A1 (en) * | 2004-06-01 | 2005-12-01 | Council Of Scientific & Industrial Research | Cost-effective process for preparing agarose from gracilaria spp. |
| RU2417090C2 (ru) * | 2005-09-26 | 2011-04-27 | Дзе Рогозин Инститьют, Инк. | Макрогранулы агарозы seakem gold, содержащие секреторные клетки, и их применение |
| EP2408482A1 (en) | 2009-03-19 | 2012-01-25 | Millipore Corporation | Removal of microorganisms from fluid samples using nanofiber filtration media |
| SG185659A1 (en) | 2010-08-10 | 2012-12-28 | Emd Millipore Corp | Method for retrovirus removal |
| CN105413480B (zh) | 2011-04-01 | 2019-03-29 | Emd密理博公司 | 含有纳米纤维的复合材料结构 |
| KR20190011838A (ko) | 2014-06-26 | 2019-02-07 | 이엠디 밀리포어 코포레이션 | 개선된 먼지 포집 능력을 갖는 필터 구조 |
| KR102206959B1 (ko) | 2015-04-17 | 2021-01-25 | 이엠디 밀리포어 코포레이션 | 접선방향 유동 여과 모드에서 작동되는 나노섬유 한외여과막을 사용하여 샘플에서 목적하는 생물학적 물질을 정제하는 방법 |
| EP3655142B1 (en) | 2017-07-21 | 2026-02-25 | Merck Millipore Ltd | Non-woven fiber membranes |
| CN108835612A (zh) * | 2018-06-20 | 2018-11-20 | 罗国球 | 一种高温低浓度碱制制取琼脂的方法 |
| US11691122B2 (en) | 2018-11-02 | 2023-07-04 | Advanced Aesthetic Technologies, Inc. | Irradiated agarose, compositions thereof, and related methods |
| CN112996551B (zh) * | 2018-11-02 | 2023-08-29 | 先进美学科技公司 | 辐照琼脂糖、其组合物及相关方法 |
| CN110698573B (zh) * | 2019-11-19 | 2021-07-30 | 中国科学院海洋研究所 | 一种高品质琼脂糖的制备方法 |
| CN115260341B (zh) * | 2022-07-29 | 2023-05-02 | 国药集团化学试剂有限公司 | 一种高质量琼脂糖及其制备方法 |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS58143261A (ja) * | 1982-02-19 | 1983-08-25 | エフ・エム・シ−・コ−ポレ−シヨン | 電気泳動ゲル材料としてのアクリルアミドと多糖類樹脂との共重合体 |
| EP0304024A2 (en) * | 1987-08-17 | 1989-02-22 | FMC Corporation | Agarose purification method using glycol |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB639222A (en) * | 1941-06-15 | 1950-06-21 | Tjoa Sie Lian | Process for purifying agar-agar |
| US3753972A (en) * | 1970-04-28 | 1973-08-21 | Research Corp | Fractionation of agar |
| US4290911A (en) * | 1979-02-07 | 1981-09-22 | Fmc Corporation | Agarose composition, aqueous gel and method of making same |
-
1989
- 1989-08-03 US US07/389,141 patent/US4983268A/en not_active Expired - Fee Related
-
1990
- 1990-07-31 JP JP2512066A patent/JPH087187B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1990-07-31 EP EP19900912868 patent/EP0485510A4/en not_active Ceased
- 1990-07-31 CA CA002060314A patent/CA2060314C/en not_active Expired - Fee Related
- 1990-07-31 WO PCT/US1990/004269 patent/WO1991001995A1/en not_active Ceased
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS58143261A (ja) * | 1982-02-19 | 1983-08-25 | エフ・エム・シ−・コ−ポレ−シヨン | 電気泳動ゲル材料としてのアクリルアミドと多糖類樹脂との共重合体 |
| EP0304024A2 (en) * | 1987-08-17 | 1989-02-22 | FMC Corporation | Agarose purification method using glycol |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP0485510A4 (en) | 1992-11-04 |
| JPH04503328A (ja) | 1992-06-18 |
| WO1991001995A1 (en) | 1991-02-21 |
| CA2060314A1 (en) | 1991-02-04 |
| EP0485510A1 (en) | 1992-05-20 |
| US4983268A (en) | 1991-01-08 |
| CA2060314C (en) | 1994-09-06 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JPH087187B2 (ja) | 低電気浸透アガロース | |
| Hochstrasser et al. | Methods for increasing the resolution of two-dimensional protein electrophoresis | |
| JPH07501563A (ja) | 界面動電法およびクロマトグラフィー法におけるポリアクリルアミドマトリックスのための新規な配合物 | |
| EP0328579B1 (en) | High resolution electrophoretic gel and method for separating serum proteins | |
| Fogel et al. | Extraction and isolation of individual ribosomal proteins from Escherichia coli | |
| Jockusch et al. | Synthesis and some properties of an actin-like nuclear protein in the slime mold Physarum polycephalum | |
| JPS6129664B2 (ja) | ||
| Morse et al. | A new approach to the study of urinary macromolecules as a participant in calcium oxalate crystallization | |
| JPS6361318B2 (ja) | ||
| JP2654681B2 (ja) | ポリマー、および電気泳動のためのゲルとしてのその使用方法 | |
| Jones et al. | The characterization of soluble matrix proteins in selected human renal calculi using two-dimensional polyacrylamide gel electrophoresis | |
| Bloemendal et al. | On the subunits of α-crystallin | |
| US20040178073A1 (en) | Method and apparatus for recovering target molecules from a gel containing said target molecules | |
| JP3206111B2 (ja) | 液体クロマトグラフィー用充填剤 | |
| JP3359370B2 (ja) | 分離回収用電気泳動ゲルおよびそれを用いた分離回収法 | |
| Rogakou et al. | Rapid histone extraction for electrophoretic analysis | |
| JPS6352341B2 (ja) | ||
| EP1600767A1 (en) | Gel for electrophoresis and process for producing the same | |
| Torres et al. | Concentration of proteins using carboxymethyldextran | |
| WO1989011648A1 (en) | Process for separation and recovery of charged molecules | |
| Shehzad et al. | A comprehensive review on preparation of pure immunoglobulins | |
| Chiari et al. | Electrophoretic separation of biopolymers in a matrix of polyacrylamide covalently linked to agarose | |
| JPH0776242B2 (ja) | 誘導体化されたアガロース生成物およびその製法 | |
| CN121537502A (zh) | 一种长链烷烃弱阳离子层析填料在纯化胶原蛋白中的应用 | |
| CN108096878A (zh) | 用于葡聚糖凝胶脱盐柱再生的试剂盒及将使用过的葡聚糖凝胶脱盐柱再生的方法 |