JPH04504664A

JPH04504664A - 化学反応速度を増進する自己抗体

Info

Publication number: JPH04504664A
Application number: JP2507523A
Authority: JP
Inventors: サッドハー，ポール
Original assignee: イゲン，インコーポレイテッド
Priority date: 1989-04-25
Filing date: 1990-04-25
Publication date: 1992-08-20
Also published as: WO1990013661A1; CA2015377A1; EP0469060A1; IL94201A0; US5236836A; DK0469060T3; AU5646890A; CA2015377C; ES2092508T3; DE69027988D1; ZA903109B; EP0469060B1; IL94201A; EP0469060A4; AU643437B2; DE69027988T2; ATE140958T1

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】

化学反応速度を増進する自己抗体本発明は、一般的には抗体に関し、更に詳細には化学反応の速度を増進することができる天然に見出される抗体に関する。本出願は１９８９年４月２５日出願の米国連続番号第０７／３４３．０８１号の部分継続出願であり、その開示内容は参照により本明細書に包含される。本明細書には括弧内のアラビア数字で幾つかの出版物が挙げられており、本発明か関する技術の状態を更に詳細に記載すると同時にその発明自身を一層詳細に記載している。これらの文献についての全引用を、請求の範囲の直前の明、１［嘗の終わりに示している。これらの出版物は、参照により本明細書に包含される。発明の背景抗体による配位結合および酵素による基質結合に包含れるエネルギーを具現化して基質に電子的歪みを生じさせ、遷移状態の形成を促進することができる。基底状態よりも酵素か触媒する反応の遷移状態に酵素が一層良好に結合して、反応の活性化の自由エネルギーを減少させるという理論についての強力な証拠がある（１）。これは、酵素触媒作用の遷移状態理論として知られるに至っている。酵素触媒作用を促進することができる他の要因は、近接及び配向効果、すなわち酵素の活性部位内に精確に配向された反応体を並置すると、生産力のある反応体の相互作用の前に多数の無作為な衝突の必要性が減少することになる。原則としては、抗体は同様にして化学反応を触媒することができる。抗体による配位子の化学的変換の最初の報告は１９８０年になされているが（２）、この報告に記載されているウサギの多クローン性抗血清によるステロイドエステルの加水分解は、触媒反応というよりは化学量論的なものである。それに続いて、抗体がアシル移動（３）、ベリ環状（４）およびレドックス反応（５）のような化学反応を触媒または促進することが示された。これらの抗体は、酵素と同様に、配位子の規定状態よる抗体は、配位子の特異的で高効率な触媒化学変換の可能性を提供する。多くの生物学的媒体は、病原生物の抗原、ホルモン、神経伝達物質および腫瘍特異抗原のようなペプチドまたはタンパク質である。免疫系が包含する広範囲の特異性を用いて天然に見出される酵素の範囲内にない化学反応を触媒することか可能である。抗体の特例えば病気に関連するキーウィルスコートタンパク質、腫瘍特異タンパク質または内因性タンパク質を特異的に加水分解することかできる触媒的抗体を生成させることかできる。今日までのところ、抗体によって媒介されるペプチド結合の開裂は示されておらず、したがって特異的なペプチド結合を開裂することができる抗体の探究はかなり興味深いものである。これまでに達成された抗体によって媒介される化学変換の種類に比較して、ペプチド結合の開裂は一層エネルギーを必要とするものである。天然に見出される抗体、すなわち、動物自身の細胞成分（自己抗原）に対する動物の免疫系によって産生される抗体が、免疫感作によって導入される抗原とは対照的に化学反応、例えばペプチド結合の開裂の速度を増進することができることも知られていなかった。これらの自己免疫疾患にみられるようないわゆる自己抗体は、多くの治療戦略において重要である。発明の目的それ故、本発明の一般的目的は、化学反応の速度を増進する自己抗体を提供することである。本発明のもう一つの目的は、化学反応の速度を触媒的に増進する自己抗体を提供することである。本発明のもう一つの目的は、ペプチド結合の開裂の速度を増進する自己抗体を提供することである。本発明の更にもう一つの目的は、化学反応の速度を増進する自己抗体を調製する方法を提供することである。本発明のもう一つの目的は、癌および微生物感染症の治療に治療薬として用いることかできる自己抗体を提供することである。更にもう一つの本発明の目的は、自己抗体に関連した自己免疫疾患を診断し且つ治療する方法を提供することである。これらおよび他の本発明の目的、特徴および利点は下記の説明から容易に明らかになるであろうし、新規な特徴は添付した請求の範囲において具体的に指摘されるで本発明は、広い意味では基質の化学反応の速度を増進する自己抗体を含んで成る血清の抽出物に関する。この自己抗体は、動物の自己抗原に対する自己抗体を有する動物を同定し、自己抗体を単離し、この自己抗体をスクリーニングして、化学反応の速度を増進する自己抗体を同定することによって調製される。速度の増進は触媒的であることもまたは化学量論的であることもできる。一つの態様では、化学反応は基質におけるペプチド結合の開裂である。本発明は、神経ペプチドバソアクティブインテスティナルペプチド（Ｖ　Ｉ　Ｐ）の１以上のペプチド結合の加水分解速度を増進する自己抗体を含んで成る血清の抽出物にも関する。更にもう一つの態様ては、本発明は動物の自己抗原に対する自己抗体を有する動物を同定し、自己抗体を単離し、この自己抗体をスクリーニングして、化学反応の速度を増進する自己抗体を同定することによって基質の化学反応の速度を増進する自己抗体を調製する方法に関する。この自己抗体は多クローン性抗体である。単クローン性抗体は、このようにして同定した動物からリンパ球を単離し、このリンパ球から複数のハイブリドーマを産生させ、ハイプリドーマによって産生された単クローン性抗体をスクリーニングして、化学反応の速度を増進する単クローン性抗体を同定することによって調製される。更にもう一つの態様では、本発明は、前記のような抽出物と不活性キャリヤーとを含んで成る組成物であって、前記の抽出物が基質の化学反応の速度を増進するのに有効な量で存在するものに関する。更にもう一つの態様では、本発明は、基質を化学反応の速度を増進し且つ化学反応を起こすのに十分な条件下で前記の方法によって調製される自己抗体と接触させることを特徴とする基質の化学反応の速度を増進させる方法に関する。もう一つの態様では、本発明は、バソアクティブインテスティナルペプチドのアミノ酸残基７および８．１４って形成されるペプチド結合の加水分解の速度を増進する方法であって、バソアクティブインテスティナルペプチドに対する自己抗体を有する動物を同定し、この自己抗体を単離し、自己抗体をスクリーニングして加水分解の速度を増進する自己抗体を同定し、加水分解を起こすのに十分な条件下でこのようにして同定した自己抗体をバソアクティブインテスティナルペプチドと接触させる各工程を含んで成る方法に関する。もう一つの態様では、本発明は、基質の化学反応の速度を増進する自己抗体であって、動物の自己抗原に対する自己抗体を有する動物を同定し、この自己抗体を単離し、自己抗体をスクリーニングして化学反応の速度を増進する自己抗体を同定することによって調製される自己抗体に関する。一つの具体例では、化学反応はペプチド結合の開裂である。もう一つの態様では、本発明は、基質の化学反応の速度を増進する自己抗体を調製する方法である。この方法は、動物の自己抗原に対する自己抗体を有する動物を同定し、この自己抗体を単離し、この自己抗体を限外濾過して化学反応の速度を増進する自己抗体を同定することから成る。更にもう一つの態様では、本発明は、ペプチド結合の開裂の速度を増進する方法であって、開裂を起こすのに十分な条件下で基質を自己抗体と接触させ、この自己抗体は前記の方法によって調製されたものであることを特徴とする方法に関する。もう一つの態様では、本発明は、動物の自己抗原の化学反応の速度を増進する自己抗体によって引き起こされる動物における疾患状態を治療する方法である。この方法は、自己抗体に結合することができる阻害剤を調製し、前記の化学反応の速度を減少させるのに有効な阻害剤の量を動物に投与することから成る。更にもう一つの態様では、本発明は、動物の自己抗原の自己抗体によって増進された化学変換によって引き起こされる動物における自己免疫疾患を診断する方法に関する。この方法は、自己抗原を動物からの血清の抽出物と接触させ、自己抗体をスクリーニングして、化学変換の速度を増進する自己抗体を同定することから成る。もう一つの態様では、本発明は、基質によって引き起こされる動物における疾患状態を治療する方法であって、基質中のペプチドまたは他の結合の開裂の速度を増進することができる自己抗体を標的結合の開裂の速度を増進するのに有効な量で動物に投与することから成る方法で添付の図面に関して下記の詳細な説明を読むことにより、本発明は一層明瞭且つ完全に理解されるであろう。第１図は、ＩｇＧによるモノ（１１８１，ＴｙｒＩＧ）−ＶＩＰの加水分解、すなわちＶＩＰの濃度を増加させることによる飽和を示している。このデーターはエンズフィッター（ＥＮＺＦＩＴＴＥＲ）（−［−ルセヴイーア（Ｅｌｓｅｖｉ ’ｅｒ））を用いるミカエリス−メンテン式となるように合わせた。第２図は、ＩｇＧによるＶＩＰ結合のスキャッチャードプロット（Ａ）およびヒルプロット（Ｂ）を示し、第３図は逆相ＨＰＬＣによるモノ（＋２５１．　Ｔ　ｙｒＩＱ）−ＶＩＰおよびジ（１２ｓＩ、Ｔｙｒ”、Ｔｙｒ２２）−ＶＩＰの分離を示し、第４図は、抗−ＶＩＰ抗体画分（ム）４２．５μｇで処理したモノ（”’Ｉ、　Ｔｙ　ｒ　Ｉｏ）　−Ｖ　Ｉ　Ｐの沈澱が非免疫抗体画分（・）の等量濃度の場合と比較して減少することを示しくそれぞれの管における出発放射能は１５，０４０　ＣＰＭであった）、第５図は、完全なＩｇＧまたは１０分間煮沸したＩｇＧで処理したモノ（１２’ １．　Ｔｙ　ｒ　１０）　−Ｖ　Ｉ　Ｐ（７）逆相ＨＰＬＣを示し、第６図、第７図および第８図は、抗−ＶＩＰ抗体画分で処理することによって製造されたＶＩＰフラグメントの逆相ＨＰＬＣによる精製を示し、第７図および第８図は、エドマン減成法によって決定したＶＩＰフラグメントのアミノ酸配列を示し、第９図は、第８図において精製したＶＩＰフラグメント（２）の部分陽イオン高速原子衝撃マススペクトル（ｍ／ｚ　１２００〜１５００）を示し、第１０図は、８〜２５％グラディエンドポリアクリルアミドゲル（Ａ）上で電気泳動を行ったコーマシーブルーで染色した加水分解性１ｇＧ（レーンｌ）、ＩｇＧのＦａｂ部分（レーン２）および分子量マーカー（レーン３）およびＦａｂによりＴＣＡ可溶とされた放射能の百分率として表わしたＦａｂの増加濃度（値は３回の測定値の平均であり、標準偏差値は０．６％〜３．１％であった）に対する加水分解された”’Ｉ−ＶＩＰの％のプロットを示し、第１１図は、プロティンＧ−セファロース上でのアフィニティークロマトグラフィによるＶＴＰ−加水分解活性のより一層の精製およびＶＩＰ−加水分解活性についての検定の結果（差し込み図）を示し、第１２図は、（ｉ）限外濾過を受けなかったＩｇＧ（・）および限外濾過を受けたＩｇＣ；（０）の濃度に対する分解したＶＩＰ％のプロットであり、第１３　（Ａ）図は、被験体第８０号から抗体でＶＩＰを処理することによって製造したペプチドの逆相ＨＰＬＣによる分離であり、ピーク１〜９か順に配列され、第１３（Ｂ）図は被験体５９８０号からの抗体（ＩｇＧ）（下段）および非免疫１ｇＧ（上段）で処理した後のＶＩＰの逆相ＨＰＬＣ曲線であり、第１３（Ｃ）図は、完全な（Ｔ　ｙ　ｒ　２２−　” Ｓ［）　Ｖ　Ｉ　Ｐ（１５〜２８）（下段）および被験体５９６０号からの抗体（Ｉ　ｇＧ）　テ（Ｔｙ　ｒ２２−”Ｊ）　Ｖ　Ｉ　Ｐ　（１５〜２８）　ヲ処理し、逆相ＨＰＬＣによって分離した後に回収される開裂生成物（Ｔ　ｙ　ｒ　 ”　−＋２’［）　Ｖ　Ｉ　Ｐ　（２２〜２８）の放射能配列であり、（Ｔ　ｙ　ｒ　２２−　”５ｒ）　Ｖ　Ｉ　Ｐ　（１５〜２８）と（Ｔ　ｙ　ｒ　２２− １２Ｊ）　Ｖ　Ｉ　Ｐ　（２２〜２８）との保持時間は３７．５分および４３分てあり、第１４図は、ＩｇＧによるＶＩＰ結合のスキャッチャードプロットてあり、第１５図は、ＶＩＰ−セファロースカラム上てのヒトＩｇＧのアフィニティークロマトグラフィであって、矢印は低ｐＨ緩衝液への移行を示し、差し込み図は酸溶出抗体濃度の濃度によって変化する（ＴｙｒＩｏ　１２５１　）ＶＩＰの加水分解を示し、第１６図は、抗し一鎖抗体（レーン１）、抗−Ｈ−鎖抗体（レーン２）および銀（レーン３）で染色した親和性によって分画したＶＩＰ自己抗体の還元５ＤＳ− ポリアクリルアミドゲル電気泳動を示し、第１７図は、未分画ＩｇＧ（上段）、親和性によって分画したＶＩＰ抗体（中段）および検定希釈液（下段）で処理した（Ｔｙ　ｒ　”−”Ｊ）　Ｖ　Ｉ　Ｐの逆相ＨＰＬＣであって、矢印は合成（”’Ｉ）（ＶＩＰ　（１−１６）　）および未加水分解（Ｔ　ｙ　ｒ　１０−　”’Ｉ）　Ｖ　Ｉ　Ｐの保持時間を示し、第１８図は、親和性によって分画したＶＩＰ抗体（上段）および未分画ｒｇＧ（下段）によるＶＩＰの加水分解のラインライ−バー−パークプロットを示す。発明の詳細な説明本発明は、広い意味では基質の化学反応の速度を増進する自己抗体を含んで成る血清の抽出物に関する。自己抗体は、動物の自己抗原に対する自己抗体を有する動物を同定し、これらの自己抗体を単離し、これらの自己抗体をスクリーニングして、化学反応の速度を増進する自己抗体を同定することによって調製される。抽出物は、血漿、精製免疫グロブリン（ＴｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤまたはＩｇＥ）または免疫グロブリンの抗体フラグメント、例えばＦａｂ、Ｆ　（ａｂ ’　：Ｌ、Ｆｖ等であることかてきる。化学反応は、少なくとも１個の反応体か少なくとも１個の生成物に転換される反応をいう。この様な化学反応には、たとえば、オキソレダクターゼ、トランスフェラーセ、ヒドロラーゼ、リアーゼ、イソメラーゼおよびリガーゼのような酵素が触媒することができる化学反応並びに触媒作用を行う酵素か知られていない化学反応、例えば酸化、還元、付加、縮合、脱離、置換、開裂および転移が挙げられる。本明細書で用いられる「動物」という用語は、免疫系を存する任意の生物を表わし、哺乳類および非哺乳動物が挙げられる。「基質」という用語は化学反応における反応体と同義語であり、多数の分子およびタンパク質、リン脂質、炭水化物（例えば、グリコーゲン、グルコースなと）薬物（例えば、乱用物質および外来起源の薬物）を包含するかこれらに限定されない生体分子の如何なるものであることもてきる。本発明による自己抗体は、動物自身の細胞成分に結合し且つ標的抗原に対する特異的免疫感作によって引き出されない動物の免疫系によって生産される天然にみられる抗体である。自己抗体は、自己抗原すなわち身体かそれ自身の遺伝コードを用いて作成する任意の抗原を認識する。したがって、自己抗体は異種抗原（例えば、細菌性、ウィルス性抗原）とは識別される。本明細書において定義される「基質」という用語は、自己抗原と同じでもまたは異なるものであることもてきる。一つの態様では、化学反応はペプチド結合の開裂である。本明細書で用いられるペプチド結合とは、２つの隣接するアミノ酸残基を結合するアミド結合を指し、一般的には下記の式（式中、ペプチド結合は箱内に示される）によって表わされる。アミノ酸は、アミノ基、カルボキシル基、水素原子および「側鎖」　（前記の式におけるＲ、およびＲ２）で表わされる特有な基が結合している炭素原子から成っている。本明細書において用いられるアミノ酸とは、タンパク質の構成ブロックを含んで成る２０種類の天然にみられるアミノ酸を包含する。隣接アミノ酸のいずれかかプロリンであるときには、それぞれの側鎖ＲＩ　゛およびＲ２は隣接窒素原子に結合して特徴的な５員ブロリン環を形成することか当業者によって理解されるであろう。ペプチド結合または開裂される結合を含む物質は、例えば調節タンパク質または構造タンパク質のような任意のタンパク質性分子であることができ、ペプチドホルモン（例えば、インシュリン、成長ホルモン、セクレチンなと）、ペプチド神経伝達物質および神経モジュレータ−（例えば、バソアクティブインテステイナルペプチド、エンドルフィン、エンケフリン、ブラジキニン、物質Ｐなど）、腫瘍ペプチド（例えば腫瘍遺伝子生成物、癌胎児性抗原なと）、細菌性タンパク質およびウィルス性タンパク質（例えば、ヒト免疫欠損ウィルス（ＨＩＶ）ｇｐ１２０、インフルエンザ糖タンパク質なと）を包含するか、これらに限定されない。動物の標的自己抗原に対する自己抗体を有する動物を、血漿試料または動物から精製したＴｇＧにおいて動物自身の自己抗原に対する、動物の自己抗原と同一または実質的に同一な異なる動物種の自己抗原に対する、または動物の自己抗原に同一であるかまたは実質的に同一な合成自己抗原に対する自己抗体の飽和可能な結合を、当該技術分野に周知の方法を用いて測定することによって同定される。自己抗原に結合する自己抗体は、標準的な方法によって単離される。触媒活性は、自己抗体を有するものとして同定された動物の血清から誘導される γ−グロブリン画分からγ−グロブリン画分に結合する分子（複数の場合もある）を分離することによって、精製された自己抗体に誘導することができる。これらの分子（複数の場合もある）の分離は、限外濾過、透析、非特異的タンパク質支持体上での免疫感作後の洗浄または特異的タンパク質支持体上でのアフィニティークロマトグラフィによって行うことができる。本明細書において用いられる「限外濾過」という用語は、平均遮断分子量がｉ、、　ｏ　ｏ　ｏ〜１０，０００ダルトンである細孔を有する膜を用いる濾過法を言う。したがって、例えば平均遮断分子量が１０，０００ダルトンの細孔を有する膜上て分子量が１５０，０００ダルトンの免疫グロブリンを限外濾過すると、分子量が１０，０００ダルトンより小さな分子が膜を通過するが免疫グロブリンは膜上に残ることになる。本明細書に用いられる「透析」という用語は、タンパク質分子を保持し且つ小さな溶質分子および水を通過させるための半透性膜を用いる低分子量の溶質から溶液状で球状タンパク質を分離する方法を表わす。分子量遮断か１２，０００〜１５．０００ダルトンである透析膜が有利に用いられる。次に、単離した自己抗体を速度増進活性についてスクリーニングする。スクリーニングは、反応体／基質の標準化溶液を自己抗体を含む媒質の一部で処理し、通常の機械的方法によって所望な生成物の存在を測定することによって好都合に行うことかできる。この測定は、例えば分光光度法によってまたは気−液または高圧液体グロによって、反応の速度を定量することがてきる。本発明による抗体によって達成される速度の増進は、触媒的または化学量論的である。したがって、反応の速度を触媒的に増進する本発明による抗体は「触媒的抗体」てあり、化学反応の速度を化学量論的に増進する抗体は「化学量論的抗体」である。本発明による触媒的抗体は、化学反応の速度を変化させることかでき、他の総ての条件（例えば、温度、反応体／基質濃度など）は同じであり且つ化学反応の中には入らないので、反応において消費されない基質である。これはまた触媒的抗体１モル当たり反応体／基質の複数モル数を変化させることができ、且つメカニズム的観点からは反応体／基質に結合し、反応体／基質の生成物への転換を増進し、次いで生成物を放出し、且つ平衡の位置を移動させることなく化学反応の速度を変化させる物質でもある。前記の定義は、理想的触媒の特徴である。しかしなから、実際には最良の触媒てあっても、反応系における混入物によりまたは反応工程中の化学的または物理的破壊の結果として効果が減少しまたは失活する。当該技術分野に周知の理由により、触媒の真の作用は反応系の成分によってまたは反応環境の条件によって不明瞭になることかある。本発明による化学量論的抗体は、化学反応の速度を化学量論的に増進する。換言すれば、化学量論的抗体は反応の速度を増進するか、触媒的抗体とは異なり、反応中に化学量論的に消費される。したがって、「化学量論的増進」という用語は、見掛けの速度増進を引き起こす抗体か反応体として反応に加わり、その工程中に消費されることを意味する。当該技術は、触媒活性を表現する上である種の実用的な定義を採用している。これらの表現は、［１）ｋ、、、、。すなわち「ターンオーバー」および（２）ｋｃ、、／ｋｏｆｉ。１、すなわち「速度増進因子」である。ターンオーバーとは、触媒的抗体１モル当たり単位時間当たり生成物へ変換することができる反応体／基質の分子数を指す。例えば、ある分子が１分光たり基質１０２の分子数のターンオーバーを示し、その分子が室温および最適ｐＨで２４時間その触媒活性を保持すれば、それぞれの触媒分子は総数で１．４ＸｌＯ’の転換を行うことになり、その触媒的な挙動を示している。この総転換は、化学量論的反応における総転換とは区別されるべきであり、後者は反応が幾ら長く行われても１．０を超過することはないのである。速度増進因子は無次元数であり、触媒の不存在下における反応の速度に対する触媒の存在下における反応の速度であって、他の総ての反応条件（例えば、反応体濃度、温度など）を等しくした場合のものを表わす。本発明は、基質の化学反応の速度を増進する自己抗体を調製する方法にも関する。この方法は、動物の自己抗原に対する自己抗体を有する動物を同定し、これらの自己抗体を単離し、自己抗体をスクリーニングして化学反応の速度を増進する１種類以上の抗体を同定することを特徴とする。本発明の一つの態様では、自己抗体は動物から集めた血清からガンマ−グロブリン画分を分離し、このガンマ− グロブリンからこのガンマ−グロブリン画分に結合する両分分子（複数の場合もある）を分離することによって単離される。上記のように、これらの分子は限外濾過、透析、非特異的タンパク質支持体上での免疫感作後の洗浄または特異タンパク質支持体上でのアフィニティークロマトグラフィによって分離することができる。所望な速度増進活性を有する抗体を検出するためのスクリーニングは、例えば高性能液体クロマトグラフィ（ＨＰＬＣ）　、免疫検定法（例えば、ラジオイムノアッセイおよび非同位体イムノアッセイ）または電気泳動によって行うことかできる。本発明による抗体は単クローン性抗体または多クローン性抗体であることができる。単クローン性抗体が所望ならば、それらは特定の自己抗原に対する自己抗体を有するものとして同定された動物からのリンパ球を単離し、この単離したリンパ球から複数のハイブリドーマを産生させた後、これらのハイブリドーマによって生産される単クローン性抗体をスクリーニングして、化学反応の速度を増進する単クローン性抗体を同定することによって調製することかできる。抗体を産生ずるリンパ球は、例えばＳ　Ｐ　２１０またはＮＳＩ細胞のようなミエローマ細胞とハイブリッド形成して、ハイブリドーマ細胞を生産する。次に、これらのハイブリドーマ細胞をマイクロタイタープレートのウェル中で培養する。ハイブリドーマ細胞によって生産される一連の単クローン性抗体を適当な条件下でスクリーニングして、適当な条件下で反応の速度を増進する単クローン性抗体を同定する。この同定は、反応体／基質の標準化溶液をマイクロタイターウェルから抜き取った一部分で処理し、前記の様に所望な生成物の存在についてスクリーニングすることによって行うことができる。所望な生成物または反応体／基質の標準化試料と比較することによって、反応の速度を定量することができる。この方法で、速度を増進する単クローン性抗体を生産するハイブリドーマ細胞を含むウェルを同定する。次に、選択したハイブリドーマ細胞を培養して、コロニーを生成させる。これらのコロニーを、試験管内または生体内の系で更に増殖させることができる。後者の場合には、マウス、例えば先天性のＢＡＬＢ／Ｃマウスの腹膜内に選択されたハイブリドーマ細胞を接種して、一般的には２または３週間内に腫瘍を生産する。これらの腫瘍は、所望な単クローン性抗体を含む腹水の産生を伴う。次にこれらの単クローン性抗体を、限外濾過、超遠心分離、透析および免疫親和性クロマトグラフィのような通常の方法によって腹水から別個に回収する。特定の基質に対する速度を増進する自己抗体を有するものと同定された動物の末梢血のリンパ球を刺激して培地中で成長させることかてきるので、当該技術分野に周知の方法を用いて培養し続けることがてきる。例えば、リンパ球を、ウィルス、化学薬品または核酸（例えば、腫瘍遺伝子）を用いて刺激することかできる。不死化に特に有利なウィルスは、ニブシュタイン・バールウィルス（ＥＢＶ）である。したかつて、速度を増進する自己抗体を形質転換細胞によって産生させることがてきる。次いで、このような形質転換細胞を既知の方法を用いてクローニングして、所定の基質に対する速度増進活性を育する単クローン性抗体を多量に得る確実な供給源を提供することができる。当業者は、様々な領域の自己抗体をコードする遺伝子またはそのフラグメントを当該技術分野に周知の組換えＤＮＡ法を用いて原核および真核細胞中で発現させることかできることを理解するであろう。したかって、原核および真核細胞を用いて、各種の領域の自己抗体を増殖させるのである。本発明の一つの態様によれば、別個に回収された抗体を、抗体と分子（例えば、基質、自己抗原など）との間て錯体を形成することかできる好適な条件下でこの分子と接触させ、分子の化学反応の速度を増進させるのである。化学量論的速度増進の場合には、化学量論的抗体の濃度は標的分子の濃度に等しい。熟練者であれば、錯体の形成に好適な条件は特定の分子および考慮中の抗体によって変化することができることを理解するであろう。したがって、本発明の方法は、抗体が分子と錯体を形成することを妨げられないかぎりまたは不活性化されないかぎり、生体内および試験管内の各種の反応条件下で実施することができる。更に具体的には、錯体形成に好適な条件は溶液相および乳化反応系であってｐＨ値が約６．０〜約９．０、好ましくは約６．０〜約８．５に、温度が約り℃〜約５０°Ｃ１好ましくは約２０’Ｃ〜約４５°Ｃに保持された溶媒および溶媒系を含むものを包含する。当業者であれば、溶媒の選択は反応の種類によって変化することを理解するであろう。例えば、ペプチド結合の開裂には水性溶媒が望ましいが、ペプチド結合を形成するには非水性溶媒を用いることができる。イオン強度、ン性溶質の電荷である）は約２．０（イオン強度単位）を下回る値、好ましくは０．１〜１．５に保持すべきである。本発明の方法は減圧または高圧で行うことかできるが、周囲圧て実施するのが有利である。溶液相および乳化反応系の外に好適な条件には抗体を付着させる固形支持体材料の使用もある。この様な固形支持体材料は、それら

【；抗体を付着させる方法と同様に当業者に周知である。本発明の特定の態様は、バソアクティブインテステイナルペプチド（Ｖ　Ｉ　Ｐ）に対する自己抗体を含んで成る血清の抽出物に関する。ＶＩＰは腸から最初に単離された２８アミノ酸のペプチドであるが、現在では中枢および末梢神経系に広く分布した神経ペプチドであることが認められている。ＶＩＰはそれだけで神経伝達物質であることの証拠がある。更に、ＶＩＰは古典的伝達物質によって神経伝達を調節することかでき、血圧、気管支の緊張、神経内分泌活性および外分泌の調節に関与していた。ＶＩＰはヒトの主要な神経気管支拡張薬であると考えられ、気道に対するＶＩＰの影響が少なくなると括約筋の影響が主となり喘息における気道の過敏を生じることがある。ＶＩＰは構造的に関連したペプチドの一群に属し、他の主要なものはベブチドヒスアミンイソルシン（ＰＨＩ）、成長ホルモン放出因子（ＧＲＦ）およびセクレチンである。ペプチド自身と同様に、ＶＩＰ、ＧＲＦ、ＰＨＩおよびセクレチンのレセプターは関連していることの証拠かある。ＶＩＰのレセプターは肺、血管平滑筋、脳、膵臓、皮膚、腸および他の組織に見出される。ＶＩＰのアミノ酸配列は、下記の通りである。ＨＳＤＡＶＦＴＤＮＹＴＲＬＲＫＱＭＡＶＫＹＷＬＮＳ　ＩＬＮ−ＮＨ。ＶＩＰに特異的な抗体は、ヒト被験者において検索された。これらの被験者は、研究の妨げとなるような病歴がないと見られる９８名の健常人であり、喘息を有するものと診断された群と喘息を持たない群とに分割された。これらの被験者はコード番号によって識別し、これらの被験者の血液から精製した関心のある特異抗体は、抗体を精製した被験者のコード番号によって識別する（例えば、被験者３９、被験者５９６０など）。ＶＩＰ結合抗体はヒト循環に存在することを見出した（６〜８）。抗ヒトＩｇＧによる免疫沈澱並びにＤＥＡＥ−セルロース上でのクロマトグラフィ、ゲル濾過カラム及び固定化したプロティン−〇は、血！ＶＩＰ結合活性は主としてＩｇＧ抗体によるものであることを示している。ＶＩＰに対する抗体は、喘息患者の１８％および筋肉運動の習慣の履歴のある健常人の３０％の血中に存在するが、そのような履歴のない健常人の２％しか血中に存在しない。これらの抗体は、ＶＩＰに関連したペプチド（すなわち、ブタペプチドヒスチジンイソロイシン（ＰＨ１）　、ラット成長ホルモン放出因子（ＧＲＦ）およびセクレチン）とほとんど反応しないことから判断して、ＶＩＰに対して極めて特異的である。喘息患者からの抗体のＶＩＰ結合親和性（平均Ｋ　ｂ　ｌｓ　ｍ　”０．１３ｎ）と健常人からの親和性（平均Ｋｂ、、、＝７．７ｎ）には、明瞭な差異が見られ、喘息患者からの抗体は６０倍大きな結合親和性を示す。喘息患者の抗体のＫ。値の範囲（０，２５〜２６．２ｎ　Ｍ−’）は、肺におけるＶＩＰレセプターのに、値の範囲に類似している。喘息患者からの免疫ＩｇＧは、肺レセプターによるＶＩＰの結合並びに肺膜におけるサイクリックＡＭＰのＶＩＰ応答性の合成を減少する。したがって、これらの抗体はレセプターに結合しまたは活性な配座におけるレセプター結合エピトープを保持するエピトープ（複数の場合もある）に向けることかできる。・　これらの抗体は、ブタ　＋２’１−ＶＩＰに対するその結合性を測定することによって検出される。ヒトおよびブタＶＩＰは構造的には同一である（９）。したがって、喘息患者に見出されるブタＶＩＰ反応性抗体は自己抗体である。血漿ＶＩＰ−抗体に陽性な糖尿病患者をＶＩＰを混入したインシュリンで治療したところ、抗体の形成はＶＩＰ混入物に関連している°ことを示すことが見られた（１０）。しかしながら、本発明によるＶＩＰ抗体は天然にみられるものであり、すなわち標的抗原に対する特異免疫感作によっては生じない。これらの自己抗体を形成させる抗原性の刺激は確実には同定することができない。候補となる刺激には配列がＶＩＰに類似しているウィルス性決定要素〔例えば、ペプチド−Ｔ１ヒト免疫不全ウィルスに見出されるエピトープ（２１））への暴露およびヒトＶＩＰとは構造的に異なることが知られているトリ、サカナおよびカメＶＩＰの食餌摂取が挙げられる（２２）。血漿ＶＩＰの免疫反応性を増加する筋肉運動（７，２３）も、ＶＩＰ自己抗体形成の強力な刺激となる。実際に、喘息および筋肉運動はＶＩＰに対する自己抗体の発生の増加と関連しているものと思われる。ＶＩＰ−自己抗体の形成へと導く抗原の刺激の種類とは関係なく、これらの抗体は重大な生物学的変化を生じることがある。喘息患者の自己抗体に対して見られるに１値の範囲は肺および他の組織に見られるＶＩＰレセプターに対して報告されたものと同じてあり（１１）、これらの抗体はＶＩＰレセプター結合性を中和する。喘息患者に見られるＶＩＰ−自己抗体は、気道におけるＶＩＰの効果を中和する。ヒト被験者（「被験者番号３９」）から誘導されるＶＩＰ−自己抗体は、アミノ酸残基１６および１７、すなわちグルタミンおよびメチオニンの間のＶＩＰの加水分解を触媒する。未標識ＶＩＰの濃度増加の関数としてモノ（”’Ｉ−Ｔｙｒ ”）　−ＶＩＰの抗体によって媒介される分解を測定することによって得られる速度論的データー（第１図）は、（ｉ）分解はミカエリス−メンテンの速度論に一致し、（ｉｉ）Ｋ、はナノモルの範囲（３７，９ｎＭ）であることを示している。０．２６秒−１のターンオーバー（すなわち、ＶＩＰ約１約１干分子によって加水分解される）を計算した。この計算は、ＶＩＰに結合することかできる抗体の総数に基づいている。しかしながら、実際には、ＶＩＰに結合することができる総ての抗体が必ずしもＶＩＰの触媒的加水分解が可能であるとは限らない。それ故、実際のターンオーバー数は、計算した数よりも大きくなるであろう。ラジオイムノアッセイ緩衝液中で４℃でＩｇＧによるモノ（”’Ｉ　− Ｔｙ　ｒ　”）　−Ｖ　Ｉ　Ｐ結合の研究では、これらの条件下ではペプチドの加水分解は検出されないことか示された。線形のスキャッチャードプロット（第２Ａ図）およびｌに近いヒル勾配（第２Ｂ図）は、単一種類の抗体かに、０．４ｎＭてあって濃度が７３．４ｆモル／ｍｇＩｇＧであるか、または（抗体か２価であると仮定した）総ＩｇＧが約０．００１％であることを示した。加水分解のｋｃａｌ及びｋｃ、、　／　ｋ、値は０．２６秒″１および６．９Ｘ１０−’　Ｍ−’・秒−１であり、抗−ＶＩＰは触媒的に作用して、ＶＩＰを加水分解することを示している。ＩｇＧ画分におけるＶＩＰの加水分解活性は硫酸アンモニウムによって沈澱し、ヒトＩｇＧに対する抗血清によって阻害され、ＤＥＡＥ−セルロース、固定化プロティン−〇および高性能ゲル濾過カラム上でクロマトグラフィを行なうと実際のＩｇＧの特徴を示す。ＶＩＰの加水分解が混入しているプロテアーゼによってではなく、抗−ＶＩＰ自己抗体によって生じることは、（ｉ）ＩｇＧは非免疫グロブリン材料を含まなかった、（ｉｉ）　Ｉ　ｇ　ＧのＦａｂフラグメントは５０キロダルトンに近い分子質量を示し、これはＶＩＰを加水分解した、（ｉｉｉ）完全なＩｇＧの加水分解活性は固定化されたプロティンＧ上で保持され、次いで低ｐＨ処理によって放出された、（ｉｖ）　Ｉ　ｇ　Ｇは分子質量か１５０キロダルトン付近の加水分解活性の単独ピークを示した、（ｖ）ＤＥＡＥ−セルロースクロマトグラフィによって精製したＩｇＧに含まれる最初のＶＩＰ加水分解活性のうち、７８％および８０％はそれぞれ１００キロダルトンの遮断フィルター上での限外濾過の後に保持物質（ｒｅｔｅｎｔａｔｅ）中および硫酸アンモニウム沈澱画分中に保存された、（ｖｉ）　Ｉ　ｇ　Ｇ調製物を抗−ヒトＩｇＧで処理し、免疫沈澱を除去すると、加水分解活性が７５％だけ減少した、（ｖｉｊ）　６種類の免疫ＩｇＧ調製物の２種類だけが加水分解活性を示し、非免疫１ｇＧは活性がなかった、（ｖｉｉｉ）実測したに、値はＶＩＰが比較的しっかり結合する薬剤、例えば抗体によって加水分解されることを示唆しており、（ｉｘ）抗体によって加水分解されるＧｌｎ−Ｍｅｔ結合は酵素（ペブチターゼ）加水分解の標的として記載されたことはなかった、（Ｘ）プロテアーゼとＩｇＧとのきつい結合は記載されたことはなかったと考えられ、（ｘｉ）文献中のＩｇＧ結合因子のみが免疫グロブリンの細胞表面レセプター（２４）およびＩｇＧ分泌の細胞内調整剤（２５）であること、から明らかである。抗−ＶＩＰ触媒的自己抗体３９の加水分解活性は、きつく結合した比較的小さなサイズの分子か存在するため潜在性である。この潜在性は、固定化されたプロティンＧ上で精製した直後にＩｇＧの加水分解活性を試験したところ、抗−ＶＩＰ触媒的自己抗体を有する個体から単離される血清のＩｇＧ画分にはＶＩＰ加水分解活性はほとんどまたは全くないことを見出したことに基づいている（２７）。しかしなから、ＩｇＧに記載の処理のいずれかを施すと、ＶＩＰ加水分解活性が観察された。（ａ）広範囲の透析、（ｂ）限外濾過２サイクル、（Ｃ）プロティンＧ−セファロース上に結合したときの中性ｐＨてのＩｇＧの長時間の洗浄、または（ｄ）　Ｖ　Ｉ　Ｐ−セファロースカラム上での親和性クロマトグラフィ。抗原（または阻害剤）の抗体への結合は、下記のような平衡反応である。処理（ａ）〜（ｄ）は未結合阻害剤を除去して平衡を左へ移動させ（ｋ未結合）、更に阻害材の除去を促進することによって、加水分解活性を有する抗体を残すのである。第二のヒト被験者（「被験者５９６０号」）は、７つの異なるＶＩＰペプチド結合を開裂することかできる触媒的抗−ＶＩＰ自己抗体を生産することができるものとして同定された。５９６０号の触媒的自己抗体を、３９番目の触媒的自己抗体について前記した方法によって精製した。５９６０号の触媒的自己抗体によって開裂される結合は、第１３Ｂ図に示されるような残基Ａｒｇ＋４−Ｌ　ｙ　ｓ　＋　５、Ｇ　Ｉ　ｎ　”−Ｍｅ　ｔ　”、Ｍｅ　ｔ　＋７−Ａ　１　ａ　”、Ａｌａ”−Ｖａ１口、Ｌｙｓ２０−Ｌｙｓ２】、Ｌ　ｙ　ｓ　２ｌ−Ｔｙｒ２２およびＴｈｒ７−Ａｓｐ’の間にある。第三のヒト被験者（「被験者８０号」）は、５つの異なる結合を開裂することかできる触媒的自己抗体を生産するものとして同定された。８０号の触媒的自己抗体によって開裂される結合は、第１３図に示されるような残基Ｇ　１　ｎ　”− Ｍｅ　ｔ　”、Ｍｅ　ｔ　１７−Ａ　１　ａ　”、Ａｌａ”−Ｖａ　Ｉｔｓ、　Ｌｙｓ２０−１．ｙｓ２１、およびＬｙｓ”−ＴｙＲ２２の間にある。加水分解性の抗−ＶＩＰ抗体に対して陽性の被験者からの末梢血リンパ球は、ニブシュタイン−バールウィルス（ＥＢＶ）で形質転換することができる。これらのＥＢＶで形質転換したリンパ芽球様細胞の培養上澄液によって、コントロール細胞ラインから得られる上澄液によるよりも大きなＶＩＰの加水分解が起こる。したがって、加水分解性ＶＩＰ抗体は形質転換細胞によって製造することができるものと考えられる。ある種の疾患はホルモンおよび細胞表面抗原に対する自己抗体と関連していることは周知である。これらの疾患および関連した自己抗体の例は、下記の通りである。疾患　自己抗体糖尿病　インシュリン、インシュリンレセプター重症筋無力症　アセチルコリンレセプター、グレーヴズ病　チロイド刺激ホルモンレセプター全身性エリテマトー　小桟ＲＮＡ５ＤＮＡ、ヒストンデス悪性貧血　キャッスル内因子、胃壁細胞抗体触媒的自己抗体は非触媒的抗体よりも害を生しやすいのて、核酸、鍵調節ペプチドおよびタンパク質（例えば、インシュリン、グルカゴン、プロラクチン、ＶＩＰ、物質Ｐ、血液凝固因子）、およびこれらの化合物に対する細胞表面レセプターに対する触媒的自己抗体によって自己免疫疾患が引き起こされる可能性がある。したがって、本発明の方法は、自己免疫疾患が特異タンパク質に対する触媒的自己抗体と関連しているかどうか評価するのに用いることができる診断試験を提供する。例えば、喘息はＶＩＰの欠損によって生じることがある。触媒的抗−ＶＩＰ抗体はこの欠損をもたらすものである。個々の喘息被験者において本明細書に記載されている方法を用いて触媒的抗−ＶＩＰ抗体の存在が検出され且つ確かめられると、これは被験者における喘息を治療する最良の方法を決定するのに役立つ。自己免疫疾患は、本発明によれば、罹患している動物に自己抗体に結合することができる阻害剤を投与することによって、自己抗体が自己抗原の化学反応、特にペプチド結合の開裂を触媒するのを防止することによって治療することができる。阻害剤は、自己抗原、自己抗原の類似体、自己抗原のエピトープであって、このエピトープで化学反応か起きるものを含む小ペプチド、エピトープを含む小ペプチドの類似体、またはエピトープの類似体を含む小ペプチドであることかできる。この阻害剤は、好適な薬学的キャリヤーと組み合わせて、経口てまたは注射によって（静脈内または筋肉内）投与される。また、自己抗体によって触媒されるペプチド結合の開裂は標的タンパク質の基質を不活性化しやすいので、ペプチド結合の開裂は特異性が高く、且つ定義によれば、単一の触媒的自己抗体分子が多数の基質分子を不活性化する。癌、感染症およびホルモンまたは神経異常に重要なタンパク質の触媒的自己抗体による不活性化は、本発明による触媒的自己抗体に基づいた療法の基礎を形成する。例えば、これらの標的タンパク質は、癌細胞（腫瘍遺伝子生成物、成長因子、癌胎児性抗原）の成長において見出されまたはこれを促進する分子を包含する。多くの腫瘍はＶＩＰを生成し、このペプチドはある種の腫瘍の成長を刺激する。触媒的抗− ＶＩＰ自己抗体はこれらの腫瘍の療法を提供することができる。ＨＩＶのｇｐ１２０コートタンパク質のセグメントはＶＩＰ（７〜１１）と構造状の類似性を有する（ペプチド−Ｔ）。ペプチド−Ｔに対する触媒的抗−ＶＩＰ抗体はＨＩＶ感染症の治療において有効であることがある。本発明は、例示のために挙げている下記の実施例に関して更に十分に記載され、理解されるであろう。精製したブタＶＩＰ　（ビーチャム（Ｂａｃｈｅｍ））をクロラミン−Ｔ法によって１２５Ｉで標識した（２１）。得られたモノ（”Ｊ−Ｔｙｒ”）−ＶＩＰをセパツク（Ｓｅｔ）ｌｅａｋ）Ｃ１８カートリッジ上で精製した後、トリフルオロ酢酸中アセトニトリルの勾配を有する逆相ＨＰＬＣで精製した（１２）。ラジオイムノアッセイにおいてウサギ抗−ＶＩＰ抗血清と反応した化合物に対応する放射能の２つの主要なピークを得た（第３図）。配列決定に十分なペプチドを得るために、ＶＩＰを１２７■て希釈して比活性を減少させた１２５１でヨウ素化し、前記と同様に精製した。オンラインのフェニルチオヒダントインアミノ酸検出を行うアプライドバイオシステム（Ａｐｐｌｉｅｄ　Ｂｉｏｓｙｓ−ｔｅｍｓ）シークエネーターで保持時間が２５．３分のピークを分析したところ、主にサイクル１０で放射能を示し、ＨＰＬＣの特徴はモノヨードチロシン（カルビオケム（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ）から購入）の特徴と類似しており、この物質はモノＣ２’　Ｉ　−Ｔｙ　ｒ　”）　−Ｖ　Ｉ　Ｐ　テアルコトヲ示していた。放射能の第二のピーク（保持時間２７゜８分）は、同様の方法によってジ（”Ｊ−Ｔｙｒ”＋　Ｔｙｒ２２）−ＶＩＰと同定した。ジ（１２’Ｉ−Ｔｙｒ”＋　Ｔｙｒ２り）−ＶＩＰと−Ｅ／　（”’１−Ｔｙｒ”）−ＶＩＰとｌ；！、ラジオイムノアッセイ試験ではほぼ同じ挙動を示した。本来のＶＩＰ、Ｎａ　”’Ｉ　（ＣＴ−ＶＩＰ）なしのクロラミン−Ｔで酸化したＶＩＰ及びモノ（＋２Ｊ−Ｔｙｒ”）−ＶＩＰは良好に分離したので、　Ｉｌｌ　ＶＩＰは未標識ペプチドは含まないものと結論した。喘息患者および健常人被験者であって高運動（Ｈｘ）および低運動（Ｌｘ）サブグループへと再分割したものからの血漿試料中で抗体を測定した（７）。喘息は、病歴と典型的な臨床指示薬に基づいて診断した。健康なＨｘ被験者は習慣的な筋肉運動歴を持ち、健康なＬｘ被験者は習慣的な筋肉運動歴を持たなかった。ヒト血液試料をペプチドヒドロラーゼ阻害剤（アプロチニン、フェニルメチルスルホニルフルオリド、ペプスタチン、エチレンジアミン四酢酸）の混合物中に集めた（７．８）。血液からの免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）画分を、ＤＥＡＥ−セルロース（ワットマン、インコーポレーテド（Ｗｈａｔｍａｎ。Ｉｎｃ、）　、クリフトン、ニューシャーシー）およびプロティンＣ−セファロース（ファルマシア、ファイン・ケミカルス（Ｐｈａｒｍａｃｉａ、　Ｆｉｎｅ　Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ）　、ビス力タウエイ、ニューシャーシー）で逐次クロマトグラフィにより調製した。Ｉ　ｇ　Ｇ　（４ｍｇ／ｍｌ）を、アミコン・モデル（Ａｍｉｃｏｎ　Ｍｏｄｅｌ）　８　Ｍ　Ｃ装置を用いて、平均遮断分子量が１０、０００ダルトンであるＹＭ−１０膜上で限外濾過を行って２７ｍｇ／ｍｌとして、再度０．８ｍｇ／ｍｌまで希釈した後、第二サイクルの限外濾過を施した。この方法で調製したＩｇＧの最終濃度は約２０ｍｇ／ｍｌであった。電気泳動分析およびペルオキシダーゼに包合した抗ヒトＩｇＧを用いたニトロセルロースプロットの染色では、この調製物には非免疫グロブリン物質の存在は見られなかった（例８）。ＶＩＰ−抗体の存在は、血漿試料または精製ＩｇＧ中におけるモノ（１２’Ｉ−Ｔｙｒ”）−ＶＩＰの飽和可能な結合性（過剰の未標識ＶＩＰによって阻害される結合性）を測定することによって確かめた（７．８）。ＶＩＰのモノヨウ素化形は、本来のＶＩＰと抗体との相互作用を再生しやすいので、この形を用いた。％５（約１５００ｃｐｍ）より大きな％Ｂ／Ｔ値（但し、ＢおよびＴはそれぞれＣｐｍでの飽和可能な結合性および総　１２５Ｉ−ＶＩＰである）の血漿試料は、ＶＩＰ−結合抗体に就いて陽性と考えた。結合および遊離ＶＩＰは、ポリエチレングリコール（７）またはヒトＩｇＧに対する特異ヒツジ抗体（８）で沈澱させることによって分離した。織入かの喘息患者と健康な被験者からの血漿試料は、飽和可能な”’Ｉ−ＶＩＰ結合活性（総”Ｉ−ＶＩＰの６７．５％まで）を示すことが観察された（８）。ＶＩＰ−抗体は、喘息患者（Ｎ＝７４）の１８％、健康なＨｘ被験者（Ｎ＝５１）の３０％、および健康なＬｘ被験者（Ｎ＝４４）の２％に見出された。Ｆ・一体陽性の喘息およびＨｘ被験者における平均１２’Ｉ　−Ｖ　Ｉ　Ｐ結合性の値（％Ｂ／Ｔであり、括弧内はＳＥＭである）は、２３，４（５，３）および２０．４（３，２）てあった。Ｌｘ群における唯一の抗体陽性被験者の％Ｂ／Ｔ値は１２．１９６であった。例３ＶＩＰ−抗体か主としてＴｇＧクラスのものであることの例示特異的なりギ抗−ヒトＴｇＧ血清は、１３名の喘息および１６名の非喘息被験者に存在するＶＩＰ結合活性の８３．７％＋５．１％（平均±ＳＥＭ）および７９．０％±４．５％をそれぞれ沈澱させた（７）。ヤギ抗−ヒトＩｇＭ抗体は試験した血漿試料（Ｎ＝１６）のいずれにおいてもＶＩＰ−結合活性を沈澱させなかった。血漿ＶＩＰ結合活性はＤＥＡＥ−セルロースおよびゲル濾過カラムから真正のヒトＩｇＧと同時に溶出し、ペプシン処理を行うと、ＶＩＰ−結合活性を有するＦ（ａｂ）ｚフラグメントを生成した。結合活性は固定化されたプロティンＧ、すなわち分子のＦＣ部分を介してＩｇＧに結合する化合物によって結合され、低ｐＨで処理することによって放出された。例４喘息患者の自己抗体は健常者の自己抗体よりも高いＶＩＰ結合親和性を有する７名の喘息患者および８名の非喘息被験者に存在する抗体の結合親和性を決定した（７．８）。抗体の見掛けのに、（親和性定数）および結合容量を、未標識ＶＩＰ濃度を増加させることによって（Ｔｙｒｌｏ　＋ｚｓ■）ＶＩＰ結合の移動をコンピューターを補助として分析することによって得た。スキャッチャードプロットは線形であり、または２つの線形成分に分割され、それぞれｌまたは２群の抗体か存在することを示していた。喘息（ｎ＝７）および非喘息被験者（ｎ＝８）の高親和性自己抗体の平均に、値は７．８Ｘ１０”Ｍ−’および０．１３　Ｘｌ　０’　Ｍ−’　（Ｐ＜、００５．を−検定）であり、それらのＶＩＰ結合容量の値（ピコモルＶＩＰ／ｍｌ血漿）は、それぞれ０．５８±０．０５および５５．７±３９．２であった。喘、＠、　（ｎ　＝　５　）および非喘息（ｎ＝３）被験者の低親和性抗体に対する平均に、の値は同してあった（それぞれ、０．０４　Ｘ　１０’　Ｍ−’および０．０８　Ｘ　ｌ　Ｏ”　Ｍ−’、Ｐ〉０．０５）。喘息および非喘息被験者の低親和性抗体に対するＶＩＰ−結合容量（平均）は、それぞれ２４．７および１５２．６　ｐｍｏＩ／　ｍｌであった。これらのデーターは喘息患者に存在するＶＩＰ−抗体の親和性（平均に、７．８Ｘ１０’Ｍ−’）は、健常被験者における抗体の親和性よりも実質的に大きかった（６０倍）。例５ＶＩＰに対する自己抗体特異性の決定ブタペプチドヒスチジンイソロイシン（ＰＨ１）、ラット成長ホルモン放出因子（ＧＲＦ）およびセクレチンアミノ酸配列がＶＩＰと部分的に同じペプチドを用いて、抗体の特異性を検討した（７．　８）。これらのペプチド（１μＭ）は、６名の喘息患者および４名の非喘息被験者からの血漿による　”Ｊ−ＶＩＰ結合を有意には置換しなかった（８）。１名の喘息患者と１名の非喘息被験者における血漿抗体は、ＰＨＩ、ＧＲＦおよびセクレチンと部分的に反応性を示した（　２１．９％〜３３．４％）。この抗体とＰＨ１，ＧＲＦおよびセクレチンとか余り反応しないことは、ＶＩＰに対するそれらの高水準の特異性を示している。抗−ＶＴＰ自己抗体によるＶＩＰの加水分解抗体によって媒介される加水分解とペプチドＶＩＰの自発的な加水分解を比較するために、モノ（１２５７−Ｔｙｒ ”）−ＶＩＰを（ｉ）免疫および（ＩＩ）非免疫ＩｇＧと長時間インキュベーションした。非免疫ヒト被験者からのＩｇＧとＶＩＰ抗体陽性の被験者を、ＤＥＡＥセルロース上でクロマトグラフィを行った後側２に記載した方法で限外濾過することによって調製した。ＩｇＧまたは検定希釈液（５０ｍＭ）リスーＭＣＩ、１００ｍＭグリシン、０．０２５％ツイーン−２０および０．１％ウシ血清アルブミン、ｐＨ８，０中で最終容積が２００μｌ）をモノ（＋２ｓ１．７　ｙ　ｒ”）　Ｖ　Ｉ　Ｐ　（約３０ｐ）と共に３８°Ｃで長時間インキュベーションした。ウシ血清アルブミンとツイーン−２０をこれらのインキュベーションに包含させて、ガラスおよびプラスチック表面上でのモノ（”Ｓｌ、Ｔｙｒ”）−Ｖ、Ｉ　Ｐの吸着による損失を防止した。トリクロロ酢酸（ＴＣＡ）による沈澱（１３）を、モノ（”５１．Ｔｙｒ”）−ＶＩＰ減成の初期基準として用いた。したがって、ＴＣＡ　（最終濃度ｌＯ％ｖ／ｖ）１ｍｌを反応混合物に加えた後、３０００Ｘｇで遠心分離した。上澄液を吸引して、放射能をベレットて測定した（ベックマン（Ｂｅｃｋｍａｎ）　５５００型分光計）。コのＴＣＡ濃度では、完全なモノ（＋２５ｉ、　ＴｙｒｌＧ）−ＶＩＰの９０％を上回る量が沈澱した（すなわち、ＴＣＡ−不溶性ベレットで現れることが見出された）。ＶＩＰ加水分解の値は、ＴＣＡ−沈澱可能な両分における１分光たりのカウント数（ＣＰＭ）として観察される放射能から計算した。（ＣＰＭ　−ＣＰＭ　）Ｘ　１００　／ＣＰＭ検定緩衝液　抗体　検定緩衝液非免疫ＩｇＧでインキュベーションしたモノ（１２Ｊ。ＴｙｒＩｏ）−ＶＩＰの加水分解が８％であったことと比較して、ペプチドの７３％が免疫ＩｇＧで処理することによって加水分解した。モノ（＋２５１．Ｔｙｒ”）−ＶＩＰを加水分解するＩｇＧの能力は、５０％飽和硫酸アンモニウムで沈澱してもまたはｌ　００　ｋＤａの膜フィルター上で限外濾過することによっても失われながった。ＩｇＧをウサギ抗−ヒト１ｇＧで処理しまたは１００″Ｃ（１０分間）処理した後、モ／　（”’Ｉ　、　Ｔｙ　ｒ　”）　−Ｖ　Ｉ　Ｐティンｔ−ユヘーションしたところ、ＲＴ力ｑｏ分のピークにおける放射能の量か減少することによって示されるようにＩｇＧ加水分解活性を破壊した。モノ（１２’Ｉ−Ｔｙｒ”）−ＶＩＰを免疫ＩｇＧで長時間処理すると、第４図に示されるように、１０％ＴＣＡによって沈澱される放射能の量が減少した。免疫ＩｇＧで６時間インキュベーションしたところ、出発モノ（Ｉ２５１．Ｔｙｒ ”）−ＶＩＰの７３％は最早ＴＣＡによって沈澱しなかったか、非免疫１ｇＧでインキュベーションしたモノ（”’１．Ｔｙｒ”）−ＶＩＰでは８％でしかなかった。モノ（１６■−１−ｙｒＩＧ）−ＶＩＰの減少はｐＨによって変化し、最適ｐＨは８．０〜９．０であった。痕跡量としてのモノ（１２’Ｉ、ＴｙｒＩｏ）−ＶＩＰの固定濃度と混合した未標識ＶＩＰの濃度を増加させながらＩｇＧを３８℃で２時間インキュベーションすることによって速度論データーを得た。加水分解はＶＩＰ濃度を増加させると飽和し、Ｉ／速度対ｌ／基質濃度のプロットは第１図に示すように線形であり、反応はミカエリス−メンテンの速度論に一致することを示している。第１図の線形プロットの勾配から決定した反応に対するに、３７．９ｎＭは、比較的安定な抗体−ＶＩＰ結合を示している。ＶＩＰ加水分解には導かない条件下で（実施例９を参照）抗体によるＶＩＰ結合のスキャッチャードプロットは、第２Ａ図に示されるように、線形であった。第２Ｂ図に示されるヒルプロットの勾配は１に近かった（１．０２）。これらのデーターは、単一の抗体のクラスがＫ　ａ　Ｏ，４ｎＭであり、濃度は７３．４　ｆｍｏｌ／ｍｇ　Ｉ　ｇ　Ｇ（抗体を２価と仮定した）であった。結合データーがら得られた加水分解の速度論と抗体濃度とに基づいて計算した加水分解についてのｋ　ｅａｔおよびｋｃ、、／に、値は、０．２６秒−１および６．９ｘｌＯ＠Ｍ−’秒″１てあった。これらの値は、抗−ＶＩＰが触媒的に作用してＶＩＰを加水分解することを示した。ターンオーバーは０．２６秒相（すなわち、１分光たり抗体１分子によってＶＩＰ約１約１干は、ＶＩＰに結合することができる抗体の総数に基づくものであった。しかしなから、ＶＩＰに結合することができる総ての抗体が必ずしもＶＩＰの触媒的加水分解が可能であるとは限らない。それ故、実際のターンオーバー数は計算値より大きくなるものと考えられる。例７被験者３９号からの抗−ＶＩＰ自己抗体によって触媒されるＶＩＰの加水分解から生成するペプチドフラグメントの同定被験者３９号からの免疫１ｇＧで処理したモノ（　１２５Ｉ　Ｔｙｒｌｏ）　ＶＩＰの逆相ＨＰＬＣでは、完全なモノ（　”５１．Ｔｙｒ”）−ＶＩ　Ｐ　（保持時間（ＲＴ）、２５分）の量が減少し、完全なモノ（＋２Ｊ−Ｔｙ　ｒ　１０）　−Ｖ　Ｉ　Ｐおよび遊離の”’Ｉ　（ＲＴ、６５−７．０分）から良好に分離した放射能の初期に溶出するピーク（ＲＴ、１０．０分）が出現した（第５図）。モノ（Ｔｙｒ”、”り−ＶＩＰと共にインキュベーションする前にＩｇＧを熱処理すると、ＲＴが１０分のピークにおける放射能の量が減少した。モノ（１２Ｂ■。Ｔｙｒｌｏ）−ＶＩＰをＩｇＧの代わりに緩衝液中でインキュベーションすると、多量の放射能か完全なペプチドの形態で回収され、ＲＴが１０分のピークは１３．９％しかなかった。ＶＩＰのフラグメントを精製するために、未標識ＶＩＰ（５０℃ｇ）を、ウシ血清アルブミンを反応混合物から除いたこと以外は前記と同様にして５２５μｇの免疫ｒｇＧまたは非免疫１ｇＧで処理した。反応混合物をイクストラクト・クリーン（Ｅｘｔｒａｃｔ　Ｃ１ｅａ口）Ｃ１８カートリッジ（アルチック（Ａｌｌｔｅｃｈ））で抽出した後ノヴアパック（Ｎｏｖａｐａｋ）　−　Ｃ　Ｉ　８カラム（Ｗａｔｅｒｓ）で逆相ＨＰＬＣに付し、トリフルオロ酢酸中アセトニトリルの勾配で溶出した。溶出液の吸光度を２１４ｎＭて観察した。ＶＩＰを免疫ＩｇＧで処理した後にみられる２つのＡ１４１ｍ吸収ピーク（第６図において標識したｌおよび２）は、非免疫ＩｇＧまたは検定緩衝液で処理したペプチド調製物では見られなかった。これらのピークを、一層少ない溶出のための勾配を用いて（第７図および第８図）逆相ＨＰＬＣの第２回によって精製した。逆相ＨＰＬＣによって精製したペプチド画分を乾燥して、オンラインのフェニルチオヒダントインアミノ酸検出を行うアブライドバイオシステムス（Ａｐｐｌｉｅｄ　Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）の脈動液相シークエネーター（４　７　７Ａ型）を用いて配列決定した。この方法では、第７図および第８図においてそれぞれｌおよび２と同定された主要なＡ２，４吸収ピークは、明らかにＶＩＰ．（１−１６３およびＶＩＰ　（１７−２８〕であった。第８図におけるペプチド２と完全なＶＩＰ　（１−２８）の高速原子衝撃（ｆ．ａ．ｂ．）　−７ススベクトル分析法を、５％酢酸およびチオグリセロール／グリセロールまたはｍ− ニトロベンジルアルコールマトリックス中に溶解したペプチドを用いてヴイジー・アナリティカル（ＶＧ　Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ）　Ｚ　Ａ　Ｂ　−２Ｓ　Ｅ分光計（加速ポテンシャル：８ｋｖ）（Ｍスキャン）で陽イオンモードで行った。質量の較正は、ヨウ化セシウムまたはヨウ化セシウム／グリセロールを用いて行った。ｆ、ａ、ｂ、−マススペクトル分析（第９図）は、ペプチド２の分子質量はＶＩＰ　（１７−２８）の分子イオンに対応する１３９３ダルトンであった。質量が１４１５ダルトンで観察される追加のピークはＶＩＰ　（１７−２８）のナトリウム付加物を表すものと考えられる。ＶＩＰ　（１−２８〕の分析から、ペプチドの分子イオンに良好に対応した３３２５ダルトンにおける信号を得た。例８抗−ＶＩＰ自己抗体（ＴｇＧ）によって引き起こされ、過負荷１ｇＧ（５０μｇ）を１２〜２０％のポリアクリルアミドゲル中で電気泳動に付した。銀染色を行ったところ、一つの主要なＩｇＧバンドと小さな軽鎖バンドてそれぞれ分子質量が１５０　ｋＤａおよび２５ｋＤａのものが現れた。ゲルのニトロセルロースブロツＩ□をペルオキシダーゼ（アキュレート（Ａｃｃｕｒａｔｅ）に包合したウサギ抗−ヒトＩｇＧで処理し、ジアミノベンジジンおよび過酸化水素で染色した、両バンドは抗−ヒトＩｇＧと反応性を有し、ＩｇＧは非免疫グロブリン材料を含まないことＩｇＧ（０，５ｍｌ中ｔｏｍｇ）をアガロース（ピアス（Ｐｉｅｒｃｅ））に包合したパパイン（２０ｍＭリン酸ナトリウム、ｐＨ７，０，１０ｍＭ　ＥＤＴＡおよび２０ｍＭシスティン中１．５　ｍｌ）で３８°Ｃで激しく振盪しながら５時間処理した。混合物を遠心分離し、上澄液におけるＦａｂをアガロース（２，２ｍｌゲル、ピアス（Ｐｉｅｒｃｅ））に包合したプロティンＡ上でクロマトグラフィによって精製した。カラムを１０ｍＭのトリス−１（ＣＩ　、　ｐＨ７，５で洗浄して、保持されないＦａｂを回収した。この画分をアミコン（Ａｍｉｃｏｎ）ＹＭ−１０フイルター上で限外濾過を行うことによって濃縮した。この方法で調製したＦａｂフラグメントは、分子質量が５０ｋＤａであった。保持物質、親ＩｇＧ画分およびマーカータンパク質（右レーン）をファスト（Ｐｈａｓｔ）システムを用いて８〜２５％勾配のポリアクリルアミドゲル上で電気泳動を行い、ゲルを第１０Ａ図に示すようにコマ−シーブルーで染色した。Ｆａｂ調製物の濃度を増加させたものを０．０２５％ツイーン２０（検定希釈液）を含む０．０５Ｍトリス−ＨＣｌ、Ｏ，１Ｍグリシン、ｐ）１８．０中でモノ　（”’Ｉ、Ｔｙｒ”）−ＶＩＰと共に３８°Ｃで３時間インキュベーションした。トリクロロ酢酸（ＴＣＡ）を１０％（Ｖ／Ｖ）まで加え、試験管を遠心分離（５８００ｘｇ；２０分）し、上澄液を吸引し、ペレットの放射能を前記の実施例５に記載した方法で測定した。第１０Ｂ図は、Ｆａｂフラグメントが投与量によって変わるＶＩＰの開裂を引き起こすことを示していた。したがって、触媒活性はＦａｂフラグメントにあった。ＤＥＡＥ−セルロースカラム上で精製したＩｇＧを、５０ｍＭ）リス−ＨＣｌ　、　ｐＨ７，３中のセファロース（ファルマシア）に包合したプロティンＧ上でクロマトグラフィを行った。フロティンＧはＦｃ領域で免疫グロブリンと結合する化合物である。Ａ　２１゜の総ではプロティンＧによって保持され、次いで低ｐＨ緩衝液（０，１Ｍグリシン−ＨＣｌ　、ｐＨ２，７’）を適用することによって放出された。溶出物画分を１Ｍトリス−ＨＣｌ　、　ｐＨ９でｐＨ８にして、保管し、第１１図におけるのと同様にＶＩＰ加水分解活性を（差し込み図）について分析した。加水分解か抗体の単一部位で起こることを決定するために、プロティンＧで精製したＩｇＧを５０ｍトリス−ＨＣｌ　、　ｐＨ８緩衝液中で０．５　ｍｌ／分の速度でスーパーローズ（Ｓｕｐｅｒｏｓｅ）　−１２カラム（ファルマシア）上でゲル濾過した。比較のための分子質量の決定に用いたマーカータンパク質はフェリチン、カイロース、ウシ血清アルブミンおよびキモトリプシノーゲンであった。ゲル濾過クロマトグラフィでは、マーカータンパク質との比較によって決定された分子質量か１５０　ｋＤａ付近である加水分解活性の単一ピークを示した。ｒｇＧをＯ，１ｍｇ／ｍｌまで希釈して、アミコンＹＭ−１００フィルター上で限外濾過して２．２ｍｇ／ｍｌとした。５０％飽和硫酸アンモニウムで沈澱したＩｇＧを遠心分離して、検定希釈液中に再溶解し、透析した後、例５に記載の方法で加水分解活性について分析した。ＤＥＡＥ−セルロースクロマトグラフィによって精製したＩｇＧに含まれる最初のＶＩＰ加水分解活性のうち、１００ｋＤａ遮断フイルター上での限外濾過の後に保持物質中におよび硫酸アンモニウム沈澱画分中にそれぞれ７８％および８０％が保存された。ヤギ抗−ヒトｊｇＧ（アンティボディーズ・インコーポレーテド（Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ　Ｉｎｃ、乃を、前記と同じ方法で固定化したプロティンＧ上でクロマトグラフィによって更に精製した。ヒトＴｇＧ（４５０μｇ；１００μＩ）を抗 −ヒトＩｇＧ（１３，５倍に希釈したもの）または検定希釈液の７００μｌと共に４℃で４５分間インキュベーションし、沈澱を遠心分離によって除去し、上澄液をＶＩＰ加水分解活性について試験した。ＩｇＧ調製物を抗−ヒトＩｇＧで処理し、免疫沈澱を除去したところ、加水分解活性は７５％減少した。上澄液における出発ＶＩＰの加水分解活性の小部分（２５％）の保持は不完全なＩｇＧ沈澱によるものと思われた。ＩｇＧを、（ｉ）セファロースに包合したプロティンＧ上または（ｉｉ）ＤＥＡＥ−セルロース上でクロマトグラフィによって調製した。Ｉ　ｇ　Ｇ　（４ｍｇ／ｍｌ）を、アミコンモデル８ＭＣ装置を用いて平均遮断分子量がｌ　Ｏ，０００ダルトンであるＹＭ−１０膜上で限外濾過して、２７ｍｇ／ｍｌとし、再度０．８　ｍｇ／ｍｌまで希釈した後、第二サイクルの限外濾過に付した。この方法で調製したＩｇＧの最終濃度は２０ｍｇ／ｍｌであった。限外濾過を行わなかったこと以外は前記と同様の方法で精製したＩｇＧおよび前記の様な限外濾過によって精製したＩｇＧを、それぞれラジオイムノアッセイ緩衝液中でモノ（１２６Ｉ−Ｔｙｒ”）　−ＶＩＰと共に未標識ＶＩＰ濃度を増加させなから４°Ｃで２時間インキュベーションし、ＴＣＡ可溶性の放射能を例７に記載の方法で計測した。第１２図はモノ（１２５Ｔ、Ｔｙｒ”）−ＶＩＰを限外濾過に付さなかったＩｇＧで処理すると、検定緩衝液で得られる値より大きなＴＣＡ可溶性の放射能の増加によって判断される、用量に依存するか低水準のペプチドの減成を生じることを示している。限外濾過を施したＩｇＧは、限外濾過を施さなかったＴｇＧよりも良好にＶＩＰを分解した。Ｂ、透析前記のＡに記載のクロマトグラフィによって調製したＩ　ｇ　Ｇ　（２ｍｇ／ｍｌ）を、緩衝液（５０ｍＭトリス−ＨＣｌ、］０００ｍＭグリシンｐＨ８，０，０，０２５％ツイーン−２０を含有）１０００容量に対して、カットオフが１２．０００〜１５．０００ダルトンである透析膜を用いて４日間透析し、毎日緩衝液を取り替えた（全部で３回）。限外濾過の場合と同様に、透析を施したＩｇＧは、透析を施さなかったＩｇＧよりも良好にＶＩＰを分解した。Ｃ８プロティン−Ｇ上に固定化した後の洗浄前記のＡに記載のクロマトグラフィによって調製したＩｇＧ　（緩衝液（５０ｍＭトリス−ＨＣｌ　、１００ｍ１Ｊグリシン、ｐＨ８，０，０，０２５％ツイーン−２０を含有）０．５ｍｌ中１　ｍｇ）をプロティンＧ−セファロースカラム（沈降容積、３．３　ｍｌ）に適用してプロティンＧ上でＩｇＧを固定化した。次いで、固定化したＩｇＧを中性のｐＨ緩衝液（５０ｍＭトリス−ＨＣｌ　、　ｐＨ７，３）　１３５ｍｌで洗浄した後、低ｐＨ緩衝液（１００ｍＭグリシン−ＨＣｌ　、ｐＨ２，７）で溶出した。次いで産生溶出液を直ちに中和してＩｇＧを単離した。限外濾過の場合と同様に、中性の緩衝液で洗浄したＩｇＧはかかる処理を施さなかったＩｇＧよりも良好にＶＩＰを分解した。ＶＩＰ加水分解性自己抗体を含むＩｇＧ画分はＶＩＰを比較的きつく結合している。この特性を用いてＶＴＰ−セファロースカラム上で特異触媒的ＶＩＰ加水分解性自己抗体を精製した。ＴｇＧはヒト被験者の血漿から硫酸アンモニウム沈澱およびＤＥＡＥ−セルロースクロマトグラフィによって精製した（８）。ＩｇＧは、検出可能な非免疫グロブリン材料を含まなかった（２７）。アフィニティークロマトグラフィマトリックスを調製するため、約２０ｐｇの（Ｔｙ　ｒ　”　 −”５Ｉ）　−Ｖ　Ｉ　Ｐと混合しｔコ合成ＶＩＰ　（１〜２８）　（１０ｍｇ）を、０．５　Ｍ　ＮａＣ１中で０、１　Ｍ　ＮａＨＣＯ３、ｐＨ７中の５ｇのＣＮＢｒ−セファロース（５ｇ、ファルマシア）に４°Ｃで２時間共存績合的にカップリングさせ、ゲル上の未反応グループを力・ノブリング緩衝液中で０．２Ｍグリシンてクエンチングした（２６）。カップリング効率は、（Ｔｙｒ”−１２５１）−ＶＩＰの取り込みに基づいて９０％を上回った。約９０ｍｇのＩｇＧを、４°ＣのＶＩＰ−セファ０−スゲル４．５　ｍｌおよび０．５　Ｍ　）リス−ＨＣ１，ｐＨ８，０と共に２時間振盪した。混合物をカラム中に投入し、ゲルを緩衝液で洗浄して、流出液のＡ２８゜（感度０．０５ＡＵＦＳ）をヘースラインに戻し、結合したＴｇＧを０．１Ｍグリシン −ＨＣｌ、ｐＨ２，７で溶出し、直ちに１Ｍトリス−ＨＣｌ　、　ｐＨ９，０て中和した。抗体濃度は、標準として真正のＩｇＧを用いて、銀染色した、非還元性５ＤＳ−ゲルの走査（Ａ５６□）（こよって計測した（ギルフォードレスポンス（ＧｉｌｆｏｒｄＲｅｓｐｏｎｓｅ）　ＩＩ分光光度計）。真正のＩｇＧの濃度を増加すると（レーン当たり２〜２０ｎｇ）　、Ａｓａ□値か直線的に増加した。限外濾過の場合と同様に、アフィニティークロマトグラフィに付したＩｇＧはアフィニティークロマトグラフィに付さなかったＩｇＧよりも良好にＶＩＰを分解した。例１０ＥＢＶによって形質転換されたリンノく球からの上澄液のＶＩＰ加水分解活性加水分解性ＶＩＰ抗体に陽性の個体の末消血すンノ々球を、確立された手法によってエブシュタインーノく−ルウイルスを用いて形質転換した（１４〜１９）。これらの細胞からの培養上澄液は、ＴＣＡ沈澱法によって判断したところ、モノ（”Ｊ−ＴｙｒＩｏ）−ＶＩＰの５３％が加水分解していると思われた。対照流体（１０％胎児性ウシ血清を含むＲＰＭＩ）では、有為な加水分解はみられず不適切なＥＢＶで形質転換した細胞ラインの培養と澄液では２１％の加水分解が起こっていると思われた。飽和ＶＩＰ結合活性の低水準であること（約ＣＰＭ／１００μｍ）は、ＶＩＰ抗体陽性被験者のＥＢＶで形質転換した細胞からの上澄液に検出されたか、不適切な細胞ラインからは検出されなかった。例１１触媒的抗−ＶＩＰ抗体を生産するヒトハイブリドーマ細胞ラインの調製リンパ球をフィコール−ハイバク（Ｆｉｃｏｌｌ−Ｈｙｐａｑｕｅ）上で密度勾配遠心分離によって単離する。ＶＩＰに特異的なりリンパ球を、固定化した産生細胞ラインを含むペトリ皿に２時間付着させることによって濃縮し、洗浄した後、ｌＯ％胎児性ウシつ清Ｌ−グルタミンおよび抗生物質を追加したＲＰＭＩ−１６４０中でｌＸｌ０＠／ｍｌで培養する。形質転換細胞の培養物を毎日検査して、１週間に２回養分を供給する。約２週間の後、培養上澄液からの免疫グロブリンを、前記の方法によってＶＩＰ結合および加水分解活性について検査する。生成するＥＢＶ細胞ラインを、フィーダ一層の場所で１０％オリゲン（ＯＲＴ　ＧＥＮ）クローニング因子（ＩＧＥＮ）を存する０、５細胞／ウエルを用いて限定希釈によって９６ウエル細胞培養プレート中でクローニングする。陽性の成長性クローンを免疫グロブリンの産生について分析し、ＶＩＰ加水分解活性についてスクリーニングする。加水分解性抗体を生産する細胞を再度クローニングして、その単クローン性の地位を確保する。陽性の細胞培養物を拡張して、免疫グロブリンの生産およびヒトまたはマウスミエローマ細胞ラインとのハイブリッド形成を行う。ＥＢＶて形質転換した細胞ラインは免疫グロブリンの生産か少ないことがしばしばあるので、形質転換細胞をマウスミエローマまたはマウス−ヒトへテロミエローマとハイブリッド形成させて、独特の触媒的抗体を産生ずる安定なハイブリッドを得る。抗生物質Ｇ−４１８の存在下で成長させたマウスミエローマ：ＳＰ２１０−Ａｇ１４、ヒトプラズマサイトーマ：　５ＫＯ−００７およびマウス×ヒトへテロミエローマ：　ＳＨＭ−Ｄ３３の３種類の異なるパートナ−を用いて、ヒト染色体を安定化させる。融合は、マウス×マウス融合と同じ方法で行う増加濃度のＶＩＰと混合した（Ｔｙｒ　Ｉｏ　１２６　■）−ＶＩＰ　（約３０　ｐＭ）　ヲ、例８Ｄ（７）場合と同様＋：ＶＩＰ−セファロース上でアフィニティークロマトグラフィによって、０．０２５％のツイーン−２０およびｏ、ｉ％ＢＳＡを含む０．０５Ｍｌ−リス−ＨＣｌ、０．１Ｍグリシン、ｐＨ８の２００μ ｍ中で、ＩｇＧまたは抗体を用いて３８°Ｃで３時間処理した。加水分解分析を試験したＩｇＧおよび抗体を予め緩衝液５００容量に対して、４日間、毎日緩衝液を取り替えながら透析を行った。ＶＩＰの加水分解は、分析希釈液中でインキュベーションした後に観察される放射能について補正したＴＣＡに可溶性の放射能を測定することによって計算した（２７）。抗体による触媒作用（まＶＩＰ（２２〜２８〕の不存在下および存在下におしλで計測した。データーはエンツフイ・ツタ−（ＥＮＺＦＩＴＴＥＲ）プログラム（エルセヴイーア（Ｅｌｓｅｖｉｅｒ））によってミカエリス−メンテンの方程式に適合した。抗体で処理した反応混合物の逆相ＨＰＬＣは、Ｃ１８カラム上で行つｆこＤＥＡＥ−セルロースクロマトグラフィによって調製したＩｇＧを、飽和性（Ｔｙｒ”−１２’Ｉ）−ＶＩＰ結合（８）について増加濃度の未標識ＶＩＰの不存在下および存在下において検定した。ＶＩＰにつｐｓでの見掛けのＫＤは、（ｉ）結合は平衡に達している、（ｉｉ）（Ｔｙ　ｒ　１０−　”’Ｉ　）　−Ｖ　Ｉ　Ｐおよび未標識ＶＩＰのＫＤは同一であると仮定して、ＥＢＤＡおよびＬＩＧＡＮＤプログラム（エルゼヴイーア（Ｅｌｓｅｖｉｅｒ））を用いて決定した。　。Ｃ１ドデシル硫酸ナトリウム−ポリアクリルアミドゲル（１１已主込針づコＧＥ）　＄、μ傷１久（すに（ＴＥＦ）２０ｍＭの２−メルカプトエタノールと２．５％ＳＤＳで処理した（１００°Ｃ１５分間）抗体調製物の電気泳動をファスト５ＤＳ−グラディエンドゲル（８〜２５％）（ファルマソア）上で行った。ゲルを銀で染色しな（２８）。免疫染色については、タンパク質を拡散プロ・ノド（３０分）によってニトロセルロース（ＢＡ８５、シュライヒ＋　−（Ｓｃｈｌｅｉｃｈｅｒ）とシュエル（Ｓｃｈｕｅ　ｌ　ｌ）　）に移し、膜をブロック緩衝液（０，０２Ｍトリス−ＨＣｌ　ＳｐＨ？、　４．０．５Ｍ　ＮａＣ１、３％ＢＳＡ、０．０５％ツイーンー２０）で処理した後、ウサギ抗−ヒトＨ−鎖（ＩｇＧ）（１：１０００）または抗−ヒトＬ−鎖（１：２，５００）（アキュレット（Ａｃｃｕｒａｔｅ））で６０分間処理、緩衝液で洗浄し、ペルオキシダーゼ包合したヤギ抗−ウサギＩｇＧ（１：１０００、アキュレット）で処理し、再度洗浄し、最後に０．５ｍｇジアミノベンジジン／ｍｌ（シグマ（Ｓｉｇｍａ））および０．０３％過酸化水素を用いて１０〜３０分間インキュベーションした。ＩＥＦは、ファルマライト（Ｐｈａｒ −ｍａｌｙｔｅｓ）て構成した３〜１０のｐＨ勾配を用いて、ファストＩＥＦ上で行った。Ｄ、抗−ＶＩＰ触媒的自己抗体の特性決定（Ｔｙ　ｒ　ｌＱ−”’Ｉ）　−Ｖ　Ｉ　Ｐ結合対ＶＩＰ結合は、検定希釈液または免疫ｉｇＱ（８７，９％および９１．０％）で、インキュベーション後に１０％ＴＣＡ中に沈澱した放射能の量によって判断した測定可能なＶＩＰ加水分解活性を示さないＩｇＧ（すなわち、限外濾過、透析、プロティン−ＧクロマトグラフィまたはＶＩＰ−セファロース上でのアフィニティークロマトグラフィを施さなかったＩｇＧ）を用いて測定した。ＩｇＧによるＶＩＰ結合のスキャッチャードプロットから、単一結合成分（ｒ＝０．９９）でに、０．３ｎＭであり、ＶＩＰ抗体濃度は１８４　ｆｍｏｌ／ｍｇ　Ｉ　ｇ　Ｇ　（第１４図、第１４図に示される値はそれぞれ３回の測定値の平均である）であることかわかった。（Ｔｙｒ’°−”り−ＶＩＰ加水分解は、ＴＣＡに可溶性にした放射能の量によって判断したところ、親和性によって精製された抗体の増加濃度によって漸増した（第１５図）。還元条件下での５ＤＳ− ＰＡＧＥは、銀染色、および免疫プロットにおける抗−Ｈおよび抗−Ｌ鎖抗体との反応性によって判断したところ、６１ｋＤのＨ−鎖と２６ｋＤのＬ−鎖から成っていた（第１６図）。親和性によって分画した調製物のＩＥＦプロフィール（ｐｆ（範囲３．０−１０．５　）は、未分画ＩｇＧ（無数のバンドが主としてｐＨ７，１〜９．５に集中した）と比較して、限定された範囲の抗体種（約１２個の近接したバンドがｐＨ６，９〜８．４に集中した）であることがわが本明細書で用いたＩｇＧ調製物は、ＶＩＰ中の０１　ｎ　”−Ｍｅ　ｔ　”結合を加水分解した（２９）　、したかって、（Ｔｙｒ”−”’Ｉ）−ＶＩＰを基質として用いるときには、一つの放射性フラグメントである（Ｔｙｒ”−”’Ｉ）ＶＩＰ　（１〜１６）か生成する。それらの加水分解特異性を比較するために、未分画ＩｇＧ１００μｇと親和性によって精製した抗体０．３ｕｇを（ＴｙｒＩＯ−１２５１）ＶＩＰ２１．０ｐｇとインキュベーションし、反応生成物を逆相ＨＰＬＣによって特性決定した（第１７図）。両種類の抗体調製物で処理したところ、保持時間か合成”５ｌ−ＶＩＰ　（１〜１６〕の保持時間（８，２分）と同じ保持時間を有する単一の放射性ペプチドを生じた。この放射性ペプチドは、未加水分解（Ｔｙｒ”−１２’Ｉ）ＶＩＰ　（保持時間２１．５分）から十分に分割されていた。これらのデーターは、親和性によって分画された抗体およびＴｇＧによって生成されたペプチドは（Ｔｙｒ”−１２５１）ＶＩＰ　（１−１６）であることを示しているので、親和性によって精製された抗体は、未分画ＩｇＧと同様に０１　ｎ　”−Ｍｅ　ｔ　”結合を開裂することが結論された。抗体が触媒であることの直接の証拠は、ＶＩＰの加水分解の飽和速度論から得られた。親和性によって分画される抗体調製物を増加ＶＩＰ濃度および固定（Ｔｙｒｌｏ−”’Ｉ）ＶＩＰ濃度（３０ｐＭ）と共にインキュさ−ションし、ＴＣＡに可溶性の放射能を測定した。親和性によって分画された抗体（６６ｎｇ）および未分画１ｇＧ（３００μｇ）についての往復速度対往復ＶＩＰ濃度のプロットは本質的に線形であり、ミカエリス−メンテンの速度論に一致した（第１８図）。親和性によって分画した抗体のに、値は１１０±３ｎＭであり、未分画１ｇＧについては１１２±６ｎＭであった。分析における総タンパク質の量に基づいて計算した抗体のターンオーバー数（ｋｃ、、）は、０．１１±０．０１分−１であった。親和性によって分画した抗体調製物と未分画１ｇＧの特異活性（Ｖ□、８／総タンパク質ｎｇ）を比較したところ、生成因子は２０７６倍で親和性によって生成された調製物によって示された飽和の速度論の研究では、ＶＩＰ−抗体か触媒であることの直接の証拠が得られた。抗体は、従来のペプチダーゼ（３０）およびに１値が通常はマイクロモル− ミリモルの範囲である抗−ハブテン触媒的抗体と比較して、ＶＩＰを比較的きつ＜　（Ｋ、　ｌ　１０ｎＭ）結合すると思われた。 ■ＩＰ抗体の見掛けの親和性基質結合特性が高いことはこれが厳格な基質特異性を付与しやすいので、望ましい特徴である。ペプチダーゼ結合の加水分解がエネルギーを必要とする化学反応であるとすれば、ＶＩＰ抗体のターンオーバー数（ｋｃ、、０．１１分−１）の計算値および速度効率Ｃｋｅｍｌ　／に、　、１．　ｌ　Ｘ　ｌ　Ｏ’　Ｍ−’分−１）が印象的である。親和性によって分画されたＶＩＰ抗体のＩＥＦプロフィールは抗体の範囲が限定されているが、この調製物は均質なものでないこともある。したがって、親和性によって分画された抗体調製物について測定したｋｅ、、（０，１１分−１）は最小値である。未分画ＩｇＧ中に存在するＶＩＰ抗体の理論的ｋ　ｃｍ、の値（Ｖ、、、／抗体の量、スキャッチャードプロットのＸ輪切片として計算）は　６．５分−１であった。対照的に、仮定された遷移状態類似物に対するアミダーゼ抗体について記録されたｋ　ｅ　ａ　ｌおよびｋｅ１／に、値は、それぞれ０．０８分−１および１．４　Ｘ　１０’　Ｍ−’分−１である（３２）。金属コファクターの助けによってｃｔｙ　Ｐｈｅ結合を開裂することかできる抗体は、ｋ　ｅ　ｍ　ｌが０．０４　ｍ１ｎ−’の真の触媒であることを意味するが、その飽和速度論は記載されてい被験者５９６０号および被験者８０号からの触媒的抗体によるＶＩＰペプチド結合の開裂Ａ、　ヨウ素化ペプチドヒトＶＩＰ　（１〜２８）（ビーチャム）　を”’Ｉで標識し、（Ｔｙｒ”−” ’Ｔ）ＶＩＰを逆相ＨＰＬＣによって精製し、アミノ酸配列決定によって同定した（２７）。フラグメントＶＩＰ　（１５〜２８）を固相合成によって調製しくフロリダコーアファッシリティー大学、ゲインズヴイル）、その同一性をアミノ酸分析によって確かめた。ＣＩ８カラム上で逆相ＨＰＬＣを行ったところ、この調製物ではＡ２．４吸収ペプチドが単一であることが判った。（Ｉ２’Ｉ）ＶＩＰ（１５〜２８）　のヨ’ｙ素化お、及び精製は、ＨＰＬＣ工程で０，１％トリフルオロ酢酸中で１６〜４０％のアセトニトリルの勾配（６０分）を用いたこと以外は、（Ｔｙ、ｒ　”　−１２５１）　Ｖ　Ｉ　Ｐの調製に用いた方法によって行った。（Ｉ２’Ｉ）ＶＩＰ　（１５〜２８）は、保持時間が４１．４分の主要な放射性ピークで回収された。このペプチドを、オンラインＰＴＨ−アミノ酸検出を備えたアプライド・ハイ才システムズ４７７Ａシークエネーターを用いて、エドマン減成１５サイクルに付した。サイクル８において、多量の放射能が回収され、この放射能は真正のモノ　ＩｔｓＩ−チロシン（カルビオケム）のＰＴＨ誘導体と共に同時溶出した。したがって、ＶＩＰ　（１５〜２８）は’ｌ’　ｙ　ｒ　２２において１２５１で標識されていｆ：　（Ｔｙｒ”−”’Ｉ）ＶＩＰ　（１５− ＶＩＰに対する自己抗体を、飽和性（ＴｙｒＩＯ−”’Ｉ）ＶＩＰ結合の測定によって２名のヒト被験者（５９６０号および８０号）の血漿中で同定した（４）。ＩｇＧを、血漿から、硫酸アンモニウム沈澱およびプロティンＧ−セファロースクロマトグラフィによって精製した（２７．４）、Ｆａｂは、ＩｇＧを固定化パパインおよびプロティンＡ−アガロースクロマトグラフィで処理することによって調製した（２７）。ウサギ抗−ヒトＩｇＧ（アキュレット）を免疫沈澱の検討に使用する前に、プロティン−〇セファロースクロマトグラフィによって精製した。抗体濃度は、スタンダードとして真正のＩｇＧ（ギル７＋−ド・レスポンス（Ｇｉｌｆｏｒｄ　Ｒｅ５ｐｏｎｓｅ）ＩＩ分光光度計）を用いて、銀で染色した非還元性ＳＤＳ−ゲル（下記を参照されたい）の走査（Ａｓｓｚ）によって計算した。ＩｇＧ濃度か増加しく２〜２０ｎｇ／レーン）　、Ａｓｇ２の値が直線的に増加することを示していた。親和性クロマトグラフィマトリックスを調製するために、約２０ｐｇ（７）　（Ｔｙ　ｒ　”　−”’Ｉ）　Ｖ　Ｉ　Ｐと混合した１０ｍｇの合成ＶＩＰ（１〜２８）を、０．５　Ｍ　Ｎａ１ｌ中で０、１　Ｍ　ＮａＨＣＯ２、ｐＨ７、中ＣＮＢｒ−セフ　７　ロース（５ｇ；ファルマシア）に４℃で２時間共役結合的にカップリングし、ゲル上の未反応基を（前記実施例９、Ｄ部に記載の方法で）カップリング緩衝液中の０．２Ｍグリシンでクエンチングした。カップリング効率は、（ＴｙｒＩｌｌ−Ｉｔ’Ｉ）ＶＩＰの取り込み、によって判断したところ、〉９０％であった。約９０ｍｇのＩｇＧを、０．０５Ｍトリス−ＨＣｌ　、　ｐＨ８中で４℃で４．５　ｍｌのＶＩＰ−セファロースと２時間振盪し、ゲルをカラムへ投入し、溶出液Ａ　ｔ　ｓ。（感度０．０５ＡＵＦＳ）がベースラインに戻るまで洗浄し、結合抗体は０．１　Ｍグリシン−ＭＣＩ　、　ｐＨ２，７で溶出し、直ちに１Ｍトリス−ＨＣｌ　、　ｐＨ９で中和した。Ｄ、ＶＩＰ加水分解増加ＶＩＰ濃度と混合した一定濃度の（Ｔｙｒ’°−”’Ｉ）−ＶＩＰ　（約３０　ｐＭ＞　ｔ−１０，０２５％ツイー：／−２０および０．１％ＢＳＡを含む０．０５Ｍ）−リス−ＨＣｌ　。０．１Ｍグリシン、ｐＨ８，２００μｍ中で３８℃で３時間ＩｇＧ、Ｆａｂまたは親和性で精製した抗体で処理した。加水分解活性を試験したＩｇＧおよび親和性によって精製した抗体は、予め５００容量の緩衝液に対して、４日間、毎日緩衝液を取り替えながら透析した。ＶＩＰの加水分解は、ＴＣＡに可溶性の放射能を測定することによって計測し、検定希釈液中でインキュベーションした後に観察される放射能について補正した（２７）。データーはエンツフィッター（ＥＮＺＦＩＴＴＥＲ）プログラム（エルセヴイーア（Ｅｌｓｅｖｉｅｒ））によってミカエリス−メンテン式に適合した。ＨＣＩまたはＮａＯＨを添加することによってｐＨを４〜１１の範囲で変化させることによって決定した最適ｐＨは両ヒト被験者からの加水分解性１ｇＧ調製物については８．０〜８．５であった。Ｅ、ＶＩＰのフラグメントの同定ＢＳＡが反応混合物には含まれなかったことを除き、ＶＩＰ　（５０μｇ）ｔ− ＩｇＧ　（５８８μｇ　；被験者５９６０号）またはＶＩＰ−セファロース上でアフィニティークロマトグラフィによって精製した抗体（８８μｇ：被験者８０号）で処理した。対照インキュベーションは、ＩｇＧなしの検定希釈液中でインキュベーションしたＶＩＰ、非免疫１ｇＧでインキュベーションしたＶＩＰおよびＶＩＰなしてインキュベーションしたＩｇＧから成っていた。反応混合物をＣ１８カートリッジ（イクストラクトクリーン、オールチク）で抽出し、前記の様にＴＦＡ中アゼアセトニトリル配を用いてツバパックＣＩ８カラム上で逆相ＨＰＬＣにより分析した（２７）。抗体で処理したＶＩＰ調製物には見られ且つ対照反応混合物には見られないペプチドピークを、オンラインＰＴＨ−アミノ検出を備えたパルス付液相シークエネーター（アプライド・バイオシステムズ、モデル４７７Ａ）を用いて配列決定した。（Ｔｙ　ｒ　１０．　”り　−Ｖ　Ｉ　Ｐ（１５〜２８）を基質として用いたときには、反応生成物は前記と同様に逆相ＨＰＬＣによって精製し、１５個のアミノ配列決定サイクルのそれぞれにおいて放射能の存在を決定した。ＶＩＰ抗体画分は、ヒト被験者（５９６０号および８０号）の血液から、固定化したプロティンＧおよびＶＩＰ−セファロース上でのアフィニティークロマトグラフィによって精製した。両被験者からの増加量のＩｇＧ（０，５〜ＩＯμｇ）は、トリクロロ酢酸に可溶性にした放射能の量によって判定したところ、（ＴｙｒＩｏ−ＩｔｓＤ　−Ｖ　ｒ　ｐ）加水分解ハ漸増した（３〜４０％）（２７）。抗体の最適ｐＨは８．０および８．５であった。（図示せず）。逆相ＨＰＬＣプロフィールは、完全な（Ｔｙ　ｒ　Ｉｏ−”Ｊ）　−Ｖ　Ｉ　Ｐの保持時間（３４，６分）とは異なる保持時間を有するＶＩＰの多数の放射性フラグメントが反応混合物中に存在することを示していた。放射性ペプチドを単一の残基（Ｔｙｒ”）においてＩｔｓ　１で標識したので、これはＶＩＰの多数の開裂部位を示唆するものであった。開裂しやすい結合を同定するために、未標識ＶＩＰをＶＩＰ−セファロース（被験者８０号）またはプロティンＧ−セファロース（被験者５９６０号）上でクロマトグラフィによって精製した抗体で処理し、ペプチドフラグメントを分離して、配列決定した。対照インキュベーションでは、ＶＩＰを非免疫１ｇＧまたは検定希釈液て処理した。被験者８０号からの抗体で処理することによって生産された９種類のペプチドフラグメント（第１３Ａ図）は、対照インキュベーションには見られなかった。それぞれの場合に、９種類の画分にみられるペプチドの推定配列は、全長のＶＩＰにみられるサブ配列と一致することを見出した。開裂しやすい結合は、（ｉ）全長のＶＩＰのＮ−末端Ｈｉｓ以外のＮ−末端残基を含み、（ｉｉ）Ｖ　Ｉ　Ｐの内側のサブ配列と同じ長さの少なくとも５個の残基のアミノ酸配列を有し、（ｉｉｉ）１０ピコモル以上の水準で配列決定されるペプチドフラグメントの検出に基づいて同定した。前記に定義した基準を満足する５種類のＶＩＰフラグメントは、被験者８０号からの抗体によって生成した。これらのフラグメントのＮ −末端側に配置されたＶＩＰのペプチド結合を開裂しやすい結合として同定した（第１表）。幾つかの両分は、全長のＶＩＰのＮ−末端フラグメントを含んていた。配列決定サイクルを連続して行ううちにＰＴＨ−アミノ酸の収量が漸減するため、これらのペプチドのＣ−末端残基は一つの例外を除いて確実に同定することは出来なかった。この例外は画分３にみられるペプチドであり、そのＣ−末端のＡｒｇまでの残基当たり〉１００ｐ１００ｐて配列決定されるのでＶＩＰ　（１−１４）と同定された。これらのデーターに基づいて、被験者８０号からの抗体はＶＩＰを６か所の結合で開裂させることか決定された。同様な方法を用いて、第二の被験者（被験者５９６０号）からの抗体（ＩｇＧ）によって開裂される結合を同定した。これらの抗体でＶＩＰを処理した後にみられる多数のペプチドピークはコントロールインキュベーションでは見られなかった。（第１３Ｂ図）。保持時間か１．５分〜１０．５分および１１．５〜２２，５分の画分から成る２種類のペプチドブールを構成した。これらのプールを、ＴＦＡ中でアセトニトリルの勾配を用いて（それぞれ１２〜４０％および１６〜４８％）再クロマトグラフィを行った。１０種類のペプチドピークを配列決定した。開裂しやすい結合の配置について定義された基準と一致する７種類のフラグメントを同定した。（第２表）。これらのデーターは、残基１４〜２２にわたる領域における９個のペプチド結合の７個が抗体によって開裂され、１個は残基７〜８に見出されることを示して被験者８０号からの抗体によって開裂されるペプチドＬｙｓ”−Ｔｙｒ ”　Ｋ−Ｙ−Ｌ−Ｎ−３Ｌｙｓ２０−Ｌｙｓ２１３　Ｖ−に−に−Ｙ−ＬＭｅ　ｔ　＋７−Ａ　１　ａ　” ９　Ｍ−Ａ−Ｖ−に−ＫＧｌ　ｎ　Ｉ　＠　Ｍ　ｅ　１１　？ ”　第１３Ａ図から得られる。画分１．５．６．７および８は本明細書に定義された基準に適合するＶＩＰフラグメントを含まなかった。８“　データーは最初の５回の配列決定サイクル。Ｌｙｓ”−Ｌｙｓ”　Ｙ−Ｌ−Ｍ−３−１８Ｍ−Ａ−Ｖ−に−ＫＧ　１　ｎ”−Ｍｅ　ｔ　１７９　Ｍ−Ａ−Ｖ−に−ＫＧ　Ｉ　ｎ”−Ｍｅ　ｔ　”　Ｋ−Ｑ−Ｍ−Ａ−Ｖｌ　２回の逆相ＨＰＬＣによって得られ、その最初のものは第１３Ｂ図に示され、画分ｌ、２．５、および７は本明細書に定義された基準に適合するＶＩＰフラグメントを含まなかった。 “０　データーは最初の５回の配列決定サイクル。文献１、Ｐａｕｌｉｎｇ、　Ｌ、　Ｎａｔｕｒｅ　１６１ニア０７．１９４８゜２、Ｋｏｈｅｎ、Ｆ、、Ｋｉｍ、Ｊ、Ｂ、、Ｌｉｎｄｎｅｒ、Ｈ，Ｒ，、ε５ｈｈａｒ。Ｚ、、　Ｇｒｅｅｎ、　Ｂ、抗体によって増進されるステロイドエステルの加水分解、ＦＢＢＳ。３、Ｓ、　Ｊ、　Ｐｏ１ｌａｃｋ、　Ｊ、　Ｗ、　Ｊａｃｏｂｓ、　Ｐ、　Ｇ、　５ｃｈｕｌｔｚ。５ｃｉｅｎｃｅ　２３４．１５７０　（１９８６）；　Ａ、Ｔｒａｍｏｎｔａｎｏ、　Ａ、Ａ、　Ａｍｍａｎ。Ｒ，Ａ、Ｌｅｒｎｅｒ、Ｊ、Ａｍ、Ｃｈｅｍ　Ｓｏｃ、１１０．２２８２（１９８８）；　Ｋ、Ｄ。Ｊａｎｄａ、　Ｄ、　５ｃｈｌｏｅｄｅｒ、　Ｓ、　Ｊ、　Ｂｅｎｋｏｖｉｃ、　Ｒ，Ａ、　Ｌｅｒｎｅｒ。５ｃｉｅｎｃｅ　２４１．１１８８　（１９８８）：　Ｃ，Ｎ、　Ｄｕｒｆｏｒ、　Ｒ，Ｊ、　Ｂｏｌｉｎ。Ｒ，Ｊ、　Ｓｕｇａｓａｗａｒａ、　Ｒ，Ｊ、　Ｍａｓｓｅｙ、　Ｊ、　Ｗ、　Ｊａｃｏｂｓ、Ｐ、　Ｇ。５ｃｈｕｌｔｚ、Ｊ、Ａｍ、Ｃｈｅｍ、Ｓｏｃ、１１０．　８７１３　（１９８８）。４、Ｄ、Ｙ、　Ｊａｃｋｓｏｎ、　Ｊ、Ｗ、　Ｊａｃｏｂｓ、　Ｒ，Ｓｕｇａｓａｗａｒａ、　Ｓ、Ｈ。Ｒｅ１ｃｈ、　Ｐ、　Ａ、　Ｂａｒｔｌｅｔｔ、　Ｐ、　Ｇ、　５ｃｈｕｌｔｚ、　Ｊ、Ａｍ、　Ｃｈｅｍ。Ｓｏｃ、　１１０．４８４１　（１９８８）；　Ｄ、　Ｈｉｌｖｅｒｔ、　Ｓ、Ｈ，Ｃａｒｐｅｎｔｅｒ。Ｋ、Ｄ、Ｎａｒｅｄ、Ｎ、Ｔ、Ａｕｄｉｔｏｒ、Ｐｒｏｃ、Ｎａｔｌ、Ａｃａｄ、Ｓｃｉ、［ＪＳＡ８５．４９５３　（１９８８）。５、Ｋ、５ｈｏｋａｔ、Ｃ，Ｈ，Ｌｅｕｍａｎｎ、Ｒ，Ｓｕｇａｓａｗａｒａ、Ｐ、Ｇ。５ｃｈｕｌｔｚ、Ａｎｇｅｗ、Ｃｈｅｍ、［ｎｔ、Ｅｄ、Ｅｎｇｌ、２７．１１７２（１９８８）。６、Ｐａｕｌ、　Ｓ、、　Ｈ，Ｅｒ１ａｎ、　Ｐ、、　５ａｉｄ、　Ｓ、　１．　ヒト循環におけるバソアクティブインテスティナルペプチドに対する自己抗体、Ｂｉｏｃｈｅｍ、　Ｂｉｏｐｈｙｓ、　Ｒｅｓ、　Ｃｏｍｍｕｎ、　１３０：４７９−４８５．１９８５゜７、Ｐａｕｌ、　Ｓ、、　５ａｉｄ、　Ｓ、　［、バソアクタイブインテスティナルベブチドに対するヒト自己抗体二筋肉運動における発生の増加Ｌｉｆｅ　５ｃｉｅｎｃｅｓ　４３：１０７９−１０８４．１９８８゜８、Ｐａｕｌ、　Ｓ、、　５ａｉｄ、　Ｓ、［、、Ｔｈｏｍｐｓｏｎ、　Ａ、、　Ｖｏｌｌｅ、　Ｄ。Ｊ、、　Ａｇｒａｗａｌ、　Ｄ、　Ｋ、、　Ｆｏｄａ、　Ｈ，、Ｄｅ　Ｌａ　Ｒｏｃｈａ、　Ｓ、喘息におけるＶＩＰに対する自己抗体の特性決定、Ｊ、　Ｎｅｕｒｏｉｍｍｕｎｏ［、２３：ｌ３３−１４２．１９８９゜９、［ｔｏｈ、　Ｎ、、　０ｂａｔａ、　Ｋ、−１，Ｙａｎａｉｈａｒａ、　Ｎ、、Ｏｋａｍｏｔｏ。Ｈｌ　ヒトプレブロバソアクティブインテスティナルポリペプチドは新規なＰＨ１−２７様ペプチド、ＰＨＭ−２７を含む、Ｎａｔｕｒｅ　３０４：５４７−５４９．１９８３゜１０、　Ｂｌｏｏｍ、　Ｓ、Ｒ，、Ｂａｒｎｅｓ、　Ａ、Ｊ、、　Ａｄｒｉａｎ、　Ｔ、Ｅ、、　Ｐｏ１ａｋ。Ｊ、Ｍ、インシュリンのホルモン状混入物によって誘発される糖尿病における自己免疫、Ｌａｎｃｅｔ　ｉ：１４−１７．１９７９゜１１、　Ｐａｕｌ、　Ｓ、、　５ａｉｄ、　Ｓ、［、肺からのバソアクティブインテスティナルペプチドのレセプターの特性決定、Ｊ、Ｂｉｏｌ、Ｃｈｅｍ、、　２６２：１５８−１６２．　１９８７゜１２、　Ｐａｕｌ、　Ｓ、、　Ｗｏｏｄ、　Ｋ、、　５ａｉｄ、　Ｓ、［、逆相ＨＰＬＣによる（１２Ｓ［）−バソアクティブインテスティナルペプチドの精製、Ｐｅｐｔｉｄｅｓ　５：１０８５−１０８７．１９８４゜１３、　Ｔｕｒｎｅｒ、　Ｊ、Ｔ、　Ｂｙｌｕｎｄ、　Ｄ、Ｂ、ラット下顎腺におけるＶＩＰレセプターの特性決定・膜−製物における放射性配位子結合分析、Ｊ、　Ｐｈａｒｍａｃｏｌ、　Ｅｘｐ、Ｔｈｅｒａｐ、、　２４２：８７３−８８１．　１９８７゜１４、５ｔｅｉｎｉｔｚ、　Ｍ、、　Ｋｌｅｉｎ、　Ｇ、、　Ｋｏｓｋｉｍｉｅｓ、　Ｓ、、Ｍａｋｅｌａ。０、　特異抗体を産生ずるＥＢウィルスによって誘発されるＢリンパ球ライン、Ｎａｔｕｒｅ　２６９：４２０−４２２．１９７７゜１５、５ｔｅｉｎｉｔｚ、　Ｍ、、　５ｅｐｐａｌａ、　１．、　Ｅｉｃｈｍａｎｎ、　Ｋ、、Ｋｌｅｉｎ。Ｇ、グループＡの連鎖球菌性炭水化物に対する特異抗体を生産するヒトリンパ芽球様細胞ラインの確立、［ｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ　１５６：４１−４７．１９７９゜１６、５ｔｅｉｎｉｔｚ、　Ｍ、、　［ｚａｋ、　Ｇ、、　Ｃｏｈｅｎ、　Ｓ、、　Ｅｈｒｅｎｆｅｌｄ。Ｍ、　、　Ｆｌｅｃｈｎｅｒ、　ｒ、Ｅ　Ｂ　Ｖで形質転換したリンパ球による単クローン性リウマチ因子の連続生産、Ｎａｔｕｒｅ　２８７：４４３−４４５．１９８０゜１７、　Ｋｏｚｂｏｒ、　Ｄ、、　５ｔｅｉｎｉｔｚ、　Ｍ、、　Ｋｌｅｉｎ、　Ｇ、、　Ｋｏｓｋｉｍｉｅｓ。Ｓ、、　Ｍａｋｅｔａ、　０．　ハブテン結合の予備選定の後にＥＢＶによる形質転換を行うことによる抗−ＴＮＰ抗体産生ヒトリンパ様ラインの確立、５ｃａｎｄ、　Ｊ、’　［ｍｍｕｎｏｌ、　１０：１８７−１９４、　１９７９゜１８、　Ｋｏｚｂｏｒ、　Ｄ、、　Ｒｏｄｅｒ、　Ｊ、ヒトリンパ球からの単クローン性抗体の産生、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ　Ｔｏｄａｙ　４ニア２−７９．１９８３゜１９、　Ｒｏｄｅｒ、　Ｊ、、　Ｃｏ１ｅ、　Ｄ、　Ｋｏｚｂｏｒ、　Ｄ、ＥＢＶ−ハイブリドーマ技術Ｍｅｔｈｏｄｓ　ｉｎ　ＥｎｚｙｍｏｌｏｇＹ　、　１２１：１４０−１６７゜１９８６゜２０、Ｋｏｈｌｅｒ、　Ｇ、、　Ｍｉｌｓｔｅｉｎ、　Ｃ，予め設定した特異性を有する融合細胞を分泌する抗体の連続培養、Ｎａｔｕｒｅ　２５６：４４５− ４９７　（１９７５）２１、５ａｃｅｒｄｏｔｅ、　Ｐ、　ｅｔ　ａｌ、、　Ｊ、　ｏｆ　Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ　Ｒｅｓ、。１８、　１０２−１０７　（１９８７）；２２、　Ｄｉｍａｌｉｎｅ、　Ｒ，ｅｔ　ａｌ、、　Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａ　ｅｔ　ＢｉｏｐｈｙｓｉｃａＡｃｔａ、９３０．９７−１００　（１９８７）。２３、０ｐｓｔａｄ、　Ｋ、、　Ｐｅｐｔｉｄａｓｅｓ、　８．１７５−１７８　（１９８６）；２４、　Ｕｎｋｅｌｅｓｓ、　Ｊ、　Ｃ，ｅｔ　ａｌ、Ａｎｎ、、　Ｒｅｖ、　１ｍｍｕｎｏ１．　６゜２５１−８１　（１９８８）：２５、Ｈｅｎｄｅｒｓｈｏｔ、Ｌ、Ｍ、ｅｔ　ａｌ、、Ｍｏ１．ａｎｄ　Ｃｅ１ｌｕｌａｒ、Ｂｉｏ、。Ｐｈａｒｍａｃｉａ、　Ｕｐｐｓａｌａ　Ｓｗｅｄｅｎ　ｐｐ、　１２−１８　（１９８６）。２７、　Ｐａｕｌ、　Ｓ、、　Ｖｏｌｌｅ、　Ｄ、Ｊ、　Ｂｅａｃｈ、　Ｃ，Ｍ、、　Ｊｏｈｎｓｏｎ、　Ｄ。Ｒ，Ｐｏｗｅｌｌ、　Ｍ、Ｊ、　ａｎｄ　Ｍａｓｓｅｙ、Ｊ、Ｊ、　５ｃｉｅｎｃｅ、　２４４　：１１５８Ｐｈａｒｍａｃｉａ　（Ｕｐｐｓａｌａ、　Ｓｗｅｄｅｎ　１９８７）。２９、　Ｂａｌｄｗｉｎ、　Ｅ、、　５ｃｈｕｌｔｚ、　Ｐ、　Ｇ、部位指向性変異誘発３０、Ｄｉｘｏｎ、Ｍ、、Ｗｅｂｂ、Ｅ、Ｃ，ｅｔ　ａｌ、、Ｅｎｚｙｍｅｓ、３版。Ｌｏｎｇｍａｎ、　（Ｌｏｎｄｏｎ　１９７９）：　Ｆｉｓｈｅｒ、　Ｇ、、アシル基転位−アスパラギン酸プロティナーゼ、Ｅｎｚｙｍｅ　Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ、　Ｍ。１、　Ｐａｇｅ、　Ａ、　Ｗｉｌｌｉａｍ監修、Ｒｏｙａｌ　５ｏｃｉｅｔｙ　ｏｆＣｈｅｍｉｓｔｒｙ、　２３０　（Ｌｏｎｄｏｎ　１９８７）。３１、：　Ｊａｎｄａ、　Ｋ、Ｄ、　ｅｔ　ａｌｌ、上記文献３：５ｃｈｕｌｔｚ、　Ｐ、Ｇ、触媒的抗体、　Ａｃｃ、　Ｃｈｅｍ、　Ｒｅｓ、２２：２Ｂ？（１９８９）＋　Ｂｌａｃｋｂｕｒｎ、　Ｇ、Ｍ、、　Ｋａｎｇ、　Ａ、Ｓ、　ｅｔ　ａｌ、触媒的抗体、　Ｂｉｏｃｈｅｍ、　Ｊ、２６２：３８１　（１９８９）。３２、　Ｊａｎｄａ、　Ｋ、Ｄ、　ｅｔ　ａｌ、、上記文献３゜３３、Ｉｖｅｒｓｅｎ、Ｂ、Ｌ、、Ｌｅｒｎｅｒ、Ｒ，Ａ、、５ｃｉｅｎｃｅ　２４３：１１８４（１９８９）。［ＶＩＰｌ、　ｎＭ１／［ＶＩＰｌ、　Ｘ１０８Ｍ−１ＩＧｌＢ −１０，５９２−１０，０７８−９，５６５−９，０５１、−８，５３７１容媒Ｂ！％ＦＩＧ、’Ｌ回収ＣＰＭＡ２１４ン’ａ　ＩＸ　１３．　％ン＠　ブ」ミ　Ｂ、　％Ａ２８゜分解したＶＩＰ　％アセトニトリル　％ □ヒト自己抗体の影響を受け易いＶＩＰの多数の開裂部位ＦＩＧ／３Ｃ抗体によって開裂したベアチドフラグメン１への放射配列分析ＦＩＧ、１３ｃど下ノＦＩＧ、Ｉ４ＦＩＧ／６．．、　−、　％ｊＦ轟保持時ｍ’ｌｃ分）ＦＩＧ、１Ｂｔ下ノ国際調査報告１ｍ刺〒１＋１ｅｌＩａｌＡｌ１１１１ｅａｌｌｔＲＮｏｐｒＴハ’ｌｌ５１ｎ／ｎフク７ムｌ″”″””””　”””””’　Ｎ６’　ＰＣＴ／ＬＩＳ９０１０２２７４Ｐｃｒ／ＵＳ９０１０２２７４ＡＴＴＡＣＨＭＥＮＴ　５ＨＥＥＴＶＸ、０ＢＳｉＥＲＶＡＴＩＯＮＳ　ＷＨＥＲＥ　ＵＮＸＴＹ　ＯＦ　ＸＮＶＰ：ＨＴＸＯＮ　Ｉｓ　’ＬＡＣＫＸＮＧＧｒｏｕｐエエエ、　ｃｌａｉｍｓ　６２．　ｄｒａｗｎ　ｔｏ　ａ　ｍａｔｈｏｄ　ｏｆ　ｄｉａｇｎｏｓｉｓ。

Claims

【特許請求の範囲】

１．基質の化学反応の速度を増進する自己抗体を含んで成る血清の抽出物であって、前記の抗体が（ａ）動物の自己抗原に対する自己抗体を有する動物を同定し、（ｂ）前記の自己抗体を単離し、（ｃ）前記の自己抗体をスクリーニングして、前記の化学反応の速度を増進する自己抗体を同定する工程を含んで成る方法によって調製されたものであることを特徴とする抽出物。
２．前記の化学反応がペプチド結合の開裂である、請求の範囲第１項に記載の抽出物。
３．前記のペプチド結合が、ペプチドホルモン、ペプチド神経伝達物質、ペプチド神経調節剤、ウイルス性タンパク質、細菌性タンパク質および腫瘍タンパク質から成る群から選択される基質に含まれる、請求の範囲第２項に記載の抽出物。
４．前記の基質が前記の動物の自己抗原である、請求の範囲第１項に記載の抽出物。
５．前記のペプチドホルモンがインシュリンである、請求の範囲第３項に記載の抽出物。
６．前記の速度増進が触媒的である、請求の範囲第１項に記載の抽出物。
７．バソアクティブインテスティナルペプチドにおけるペプチド結合の開裂の速度を増進する自己抗体を含んで成る血清の抽出物。
８．前記の速度増進が触媒的である、請求の範囲第７項に記載の抽出物。
９．前記のペプチド結合がバソアクティブインテスティナルペプチドのアミノ酸残基１６および１７の間にある、請求の範囲第７項に記載の抽出物。
１０．バソアクティブインテスティナルペプチドにおけるペプチド結合の加水分解の速度を増進する自己抗体。
１１．前記の速度増進が触媒的である、請求の範囲第１０項に記載の自己抗体。
１２．前記のペプチド結合がバソアクティブインテスティナルペプチドのアミノ酸残基１６および１７の間にある、請求の範囲第１０項に記載の自己抗体。
１３．バソアクティブインテスティナルペプチドにおけるペプチド結合に開裂の速度を増進する自己抗体であって、前記の抗体がヒト血清から単離されたものである自己抗体。
１４．前記の速度増進が触媒的である、請求の範囲第１３項に記載の自己抗体。
１５．前記のペプチド結合がバソアクティブインテスティナルペプチドのアミノ酸残基１６および１７の間にある、請求の範囲第１３項に記載の自己抗体。
１６．基質の化学反応の速度を増進する自己抗体を調製する方法であって、（ａ）動物の自己抗原に対する自己抗体を有する動物を同定し、（ｂ）前記の自己抗体を単離し、（ｃ）前記の自己抗体をスクリーニングして、前記の化学反応の速度を増進する自己抗体を同定する工程を含んで成る方法。
１７．（ａ）前記の動物の血清からのガンマーグロブリン画分を分離し、（ｂ）前記のガンマーグロブリン画分から、このガンマーグロブリン画分に結合する分子（複数の場合もある）を分離する工程を更に含んで成る、請求の範囲第１６項に記載の方法。
１８．前記のガンマーグロブリンに結合する前記の分子（複数の場合もある）を限外濾過によってこのガンマーグロブリンから分離する、請求の範囲第１７項に記載の方法。
１９．前記のガンマーグロブリンに結合する前記の分子（複数の場合もある）を透析によってこのガンマーグロブリンから分離する、請求の範囲第１７項に記載の方法。
２０．前記のガンマーグロブリンに結合する前記の分子（複数の場合もある）がプロテインＧ−セファロース上のクロマトグラフィである、請求の範囲第１７項に記載の方法。
２１．前記のガンマーグロブリンから前記の分子（複数の場合もある）がＶＩＰセファロース上でのアフイニティークロマトグラフィによって分離される、請求の範囲第１７項に記載の方法。
２２．前記自己抗体が単クローン性抗体であり、（ａ）前記の同定した動物からリンパ球を単離し、（ｂ）このリンパ球から複数のハイブリドーマを産生させ、（ｃ）前記のハイブリドーマによって産生された単クローン性抗体をスクリーニングして、前記の化学反応の速度を増進する単クローン性抗体を同定する工程を更に含んで成る、請求の範囲第１６項に記載の方法。
２３．（ａ）前記の同定した動物からリンパ球を単離し、（ｂ）前記のリンパ球をウイルスで形質転換し、（ｃ）前記のリンパ球を刺激して、培地で成長させ、（ｄ）この形質転換したリンパ球によって産生される抗体をスクリーニングして、記の化学反応の速度を増進する抗体を同定する工程を更に含んで成る、請求の範囲第１６項に記載の方法。
２４．前記のリンパ球をエプシュタイン−バールウイルスで形質転換することによって刺激する、請求の範囲第２３項に記載の方法。
２５．前記の速度増進が触媒的である、請求の範囲第１６項に記載の方法。
２６．前記の基質が前記の動物の自己抗原である、請求の範囲第１６項に記載の方法。
２７．前記の化学反応がペプチド結合の開裂である、請求の範囲第１６項に記載の方法。
２８．前記のペプチド結合が、ペプチドホルモン、ペプチド神経伝達物質、ペプチド神経調節剤、腫瘍タンパク質、細菌性タンパク質およびウイルス性タンパク質から成る群から選択される基質に含まれる、請求の範囲第２７項に記載の方法。
２９．前記の神経伝達物質がバソアクティブインテスティナルペプチドである、請求の範囲第２８項に記載の方法。
３０．前記のペプチド結合がバソアクティブインテスティナルペプチドのアミノ酸残基１６および１７の間にある、請求の範囲第２９項に記載の方法。
３１．前記ペプチドホルモンがインシュリンである、請求の範囲第２８項に記載の方法。
３２．基質の化学反応の速度を増進する方法であって、前記の基質を基質の化学反応の速度を増進する自己抗体を含む血清の抽出物と接触させ、前記の抗体は（ａ）動物の自己抗原に対する自己抗体を有する動物を同定し、（ｂ）前記の自己抗体を単離し、（ｃ）前記の自己抗体をスクリーニングして、前記の化学反応を起こすのに十分な条件下で、前記の化学反応の速度を増進する自己抗体を同定する工程を含んで成る方法によって調製されたものであることを特徴とする、方法。
３３．前記の速度増進が触媒的である、請求の範囲第３２項に記載の方法。
３４．前記の抗体が、更に（ａ）前記の動物の血清からガンマーグロブリン画分を分離し、（ｂ）前記のガンマーグロブリン画分から、前記のガンマーグロブリン画分に結合する分子（複数の場合もある）を分離する工程を含んで成る方法によって調製されたものである、請求の範囲第３２項に記載の方法。
３５．前記の化学反応が、前記の基質に含まれるペプチド結合の開裂である、請求の範囲第３２項に記載の方法。
３６．前記の基質がバソアクティブインテスティナルペプチドである、請求の範囲第３５項に記載の方法。
３７．バソアクティブインテスティナルペプチドのペプチド結合の開裂を増進する方法であって、（ａ）前記のバソアクティブインテスティナルペプチドに対する自己抗体を有する動物を同定し、（ｂ）前記の自己抗体を単離し、（ｃ）前記の自己抗体をスクリーニングして、前記の開裂の速度を増進する抗体を同定し、（ｄ）前記の開裂を起こすのに十分な条件下で、前記の同定した抗体をバソアクティブインテスティナルペプチドと接触させる工程を含んで成る方法。
３８．前記の速度増進が触媒的である、請求の範囲第３７項に記載の方法。
３９．（ａ）化学反応の速度を増進する自己抗体を含む血清の抽出物であって、前記の自己抗体が（ｉ）前記のバソアクティブインテスティナルペプチドに対する自己抗体を有する動物を同定し、（ｉｉ）前記の自己抗体を単離し、（ｉｉｉ）前記の自己抗体をスクリーニングして、前記の開裂の速度を増進する抗体を同定する工程を含んで成る方法によって調製されたものである抽出物と、（ｂ）不溶性キャリヤーとを、基質の化学反応の速度を増進するのに有効な量で含んで成る組成物。
４０．（ａ）自己抗体を含む血清の抽出物であって、前記の抗体が（ｉ）バソアクティブインテステ；ナルペプチドに対する自己抗体を有する動物を同定し、（ｉｉ）前記の自己抗体を単離し、（ｉｉｉ）前記の自己抗体をスクリーニングして、前記の開裂の速度を増進する抗体を同定する工程を含んで成る方法によって調製されたものである抽出物と、（ｂ）不活性キャリヤーとを、バソアクティブインテスティナルペプチド中のペプチド結合の開裂の速度を増進するのに有効な量で含んで成る組成物。
４１．基質の化学反応の速度を増進する自己抗体であって、前記の自己抗体が、（ａ）動物の自己抗原に対する自己抗体を有する前記の動物を同定し、（ｂ）前記の自己抗体を単離し、（ｃ）前記の自己抗体をスクリーニングして、化学反応の速度を増進する自己抗体を同定する工程を含んで成る方法によって調製される自己抗体。
４２．前記の基質が前記の自己抗原である、請求の範囲第４１項に記載の自己抗体。
４３．前記の速度増進が触媒的である、請求の範囲第４１項に記載の自己抗体。
４４．基質のペプチド結合の開裂の速度を増進することができる抗体。
４５．前記の速度増進が触媒的である、請求の範囲第４４項に記載の抗体。
４６．基質のペプチド結合の開裂の速度を増進することができる自己抗体。
４７．前記の基質が前記の自己抗原である、請求の範囲第４６項に記載の自己抗体。
４８．前記の速度増進が触媒的である、請求の範囲第４６項に記載の自己抗体。
４９．基質の化学反応の速度を増進する自己抗体を調製する方法であって、（ａ）動物の自己抗原に対する自己抗体を有する動物を同定し、（ｂ）前記の自己抗体を単離し、（ｃ）前記の自己抗体を限外濾過して、前記の化学反応の速度を増進する自己抗体を同定する工程を含んで成る方法。
５０．前記の基質が前記の動物の自己抗原である、請求の範囲第４９項に記載の方法。
５１．前記の速度増進が触媒的である、請求の範囲第４９項に記載の方法。
５２．基質のペプチド結合の開裂の速度を増進することができる自己抗体であって、（ａ）動物の自己抗原に対する自己抗体を有する前記の動物を同定し、（ｂ）前記の自己抗体を単離し、（ｃ）前記の自己抗体をスクリーニングして、前記の開裂の速度を増進する自己抗体を同定する工程を含んで成る方法によって調製される自己抗体。
５３．前記の基質が前記の動物の自己抗原である、請求の範囲第５２項に記載の抗体。
５４．前記の速度増進が触媒的である、請求の範囲第４６項に記載の自己抗体。
５５．基質のペプチド結合の開裂の速度を増進する方法であって、前記の開裂を起こすのに十分な条件下で前記の基質を自己抗体と接触させ、前記の自己抗体は、（ａ）動物の自己抗原に対する自己抗体を有する前記の動物を同定し、（ｂ）前記の自己抗体を単離し、（ｃ）前記の自己抗体をスクリーニングして、前記の開裂の速度を増進する自己抗体を同定する工程を含んで成る方法によって調製されることを特徴とする方法。
５６．前記の基質が前記の動物の自己抗原である、請求の範囲第５５項に記載の方法。
５７．前記の速度増進が触媒的である、請求の範囲第５５項に記載の方法。
５８．基質によって引き起こされる動物の疾患状態を治療する方法であって、前記の動物に、前記の基質のペプチド結合の開裂の速度を増進することができる自己抗体を、前記の開裂の速度を増進するのに有効な量で投与することからなり、前記の自己抗体が、（ａ）動物の自己抗原に対する自己抗体を有する前記の動物を同定し、（ｂ）前記の自己抗体を単離し、（ｃ）前記の自己抗体をスクリーニングして、前記のペプチド結合の開裂の速度を増進する自己抗体を同定する工程を含んで成る方法によって調製されることを特徴とする方法。
５９．前記の疾患状態が癌であり、前記の基質が癌細胞の成長を刺激する物質である、請求の範囲第５８項に記載の方法。
６０．前記の物質が、腫瘍遺伝子生成物、成長因子および癌胎児性抗原から成る群から選択される、請求の範囲第５９項に記載の方法。
６１．前記の疾患状態が細菌感染であり、前記の基質がウイルス性タンパク質、細菌性タンパク質および原生動物タンパク質から成る群から選択される、請求の範囲第５８項に記載の方法。
６２．動物の自己抗原の、自己抗体によって増進される化学変換によって生じる前記の動物の自己免疫疾患を診断する方法であって、（ａ）前記の自己抗原を前記の動物からの血液の抽出物と接触させ、（ｂ）前記の化学変換の速度を増進する自己抗体をスクリーニングする工程を含んで成る方法。
６３．前記のペプチド結合がバソアクティブインテスティナルペプチドのアミノ酸残基７および８の間にある、請求の範囲第７項に記載の抽出物。
６４．前記のペプチド結合がバソアクティブインテスティナルペプチドのアミノ酸残基１４および１５の間にある、請求の範囲第７項に記載の抽出物。
６５．前記のペプチド結合がバソアクティブインテスティナルペプチドのアミノ酸残基１７および１８の間にある、請求の範囲第７項に記載の抽出物。
６６．前記のペプチド結合がバソアクティブインテスティナルペプチドのアミノ酸残基１８および１９の間にある、請求の範囲第７項に記載の抽出物。
６７．前記のペプチド結合がバソアクティブインテスティナルペプチドのアミノ酸残基２０および２１の間にある、請求の範囲第７項に記載の抽出物。
６８．前記のペプチド結合がバソアクティブインテスティナルペプチドのアミノ酸残基２１および２２の間にある、請求の範囲第７項に記載の抽出物。
６９．前記のペプチド結合がバソアクティブインテスティナルペプチドのアミノ酸残基７および８の間にある、請求の範囲第１０項に記載の自己抗体。
７０．前記のペプチド結合がバソアクティブインテスティナルペプチドのアミノ酸残基１４および１５の間にある、請求の範囲第１０項に記載の自己抗体。
７１．前記のペプチド結合がバソアクティブインテスティナルペプチドのアミノ酸残基１７および１８の間にある、請求の範囲第１０項に記載の自己抗体。
７２．前記のペプチド結合がバソアクティブインテスティナルペプチドのアミノ酸残基１８および１９の間にある、請求の範囲第１０項に記載の自己抗体。
７３．前記のペプチド結合がバソアクティブインテスティナルペプチドのアミノ酸残基２０および２１の間にある、請求の範囲第１０項に記載の自己抗体。
７４．前記のペプチド結合がバソアクティブインテスティナルペプチドのアミノ酸残基２１および２２の間にある、請求の範囲第１０項に記載の自己抗体。
７５．前記のペプチド結合がバソアクティブインテスティナルペプチドのアミノ酸残基７および８の間にある、請求の範囲第２９項に記載の方法。
７６．前記のペプチド結合がバソアクティブインテスティナルペプチドのアミノ酸残基１４および１５の間にある、請求の範囲第２９項に記載の方法。
７７．前記のペプチド結合がバスアクティブインテスティナルペプチドのアミノ酸残基１７および１８の間にある、請求の範囲第２９項に記載の方法。
７８．前記のペプチド結合がバソアクティブインテスティナルペプチドのアミノ酸残基１８および１９の間にある、請求の範囲第２９項に記載の方法。
７９．前記のペプチド結合がバソアクティブインテスティナルペプチドのアミノ酸残基２０および２１の間にある、請求の範囲第２９項に記載の方法。
８０．前記のペプチド結合がバソアクティブインテスティナルペプチドのアミノ酸残基２１および２２の間にある、請求の範囲第２９項に記載の方法。
８１．前記のペプチド結合がバソアクティブインテスティナルペプチドのアミノ酸残基７および８の間にある、請求の範囲第３７項に記載の方法。
８２．前記のペプチド結合がバソアクティブインテスティナルペプチドのアミノ酸残基１４および１５の間にある、請求の範囲第３７項に記載の方法。
８３．前記のペプチド結合がバソアクティブインテスティナルペプチドのアミノ酸残基１６および１７の間にある、請求の範囲第３７項に記載の方法。
８４．前記のペプチド結合がバソアクティブインテスティナルペプチドのアミノ酸残基１７および１８の間にある、請求の範囲第３７項に記載の方法。
８５．前記のペプチド結合がバソアクティブインテスティナルペプチドのアミノ酸残基１８および１９の間にある、請求の範囲第３７項に記載の方法。
８６．前記のペプチド結合がバソアクティブインテスティナルペプチドのアミノ酸残基２０および２１の間にある、請求の範囲第３７項に記載の方法。
８７．前記のペプチド結合がバソアクティブインテスティナルペプチドのアミノ酸残基２１および２２の間にある、請求の範囲第３７項に記載の方法。