JPH0466872A

JPH0466872A - アフィニティークロマトグラフィー担体を用いた検体の測定方法及びその測定キット

Info

Publication number: JPH0466872A
Application number: JP17974990A
Authority: JP
Inventors: Kazuyoshi Chiba; 千葉　主喜; Masashi Funayama; 船山　政志
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 1990-07-07
Filing date: 1990-07-07
Publication date: 1992-03-03

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】〔産業上の利用分野〕本発明は、アフィニティークロマトグラフィー担体を用
いた、検体の測定方法及びその測定キットに関する。

従来技術二Ｊ１９５９年にＢｃｒｓｏｎらにより、放射イムノアッセ
イ法が考案され、その高い検出感度、特異性、簡単な測
定操作の為、血中、尿中の微量生体物質の測定に応用さ
れ、特に、医療領域での診断、検査に汎用されつつある
。しかしながら、放射性同位元素を用いるこれらの方法
は、（１）標識試薬に使用期限（半減期）がある。

（２）一定基準の実験施設がなければ取り扱いできない
。

（３）放射性廃棄物は簡単に廃棄できない。

等の問題があり、すべての検査施設で利用することはで
きない。

放射イムノアッセイ法は標識抗原を用いるＲＩＡ法（Ｒ
ａｄｉｏｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ法）と標識抗体を用い
るＩＲＭＡ法（Ｉｍｍｕｎｏｒａｄｉｏｍｅｔｒｉｃ　
Ａｓ５ａｙ法）に大別される。ＲＩＡ法は、（１）純度の高い標識抗原が必要であること。

（２）放射性同位元素による標識で抗原が変性し、それ
により抗体との反応性が低下する可能性がある。

等の難点があるが、以下に記したＩ　ＲＭＡ法で測定が
困難なハプテン等の多くの生体微量物質の測定に汎用さ
れている。Ｉ　ＲＭＡ法には、競合法によるものと、２
−ｓｉシｅ　ＩＲＭＡ法の２種類がある。２−ｓｉｔｅ
　ＩＲＭＡ法は抗原を固相抗体と標識抗体ではさむ形と
なる為、サンドイツチ法と呼ばれている。同法は、２つ
の抗体で１つの抗原をはさむ為、抗原上には、複数個の
抗体認識部位が存在する必要がある。従って、分子量が
小さいハプテンの測定は不能である。Ｉ　ＲＭＡ法では
、３〜４オーター〇測定が可能であるという利点がある
が、抗原が高濃度になると、固相抗体の量が相対的に不
足し、抗原の同相抗体への結合量が頭打ちとなってしま
う為、固相抗体が多量に固相化できる器材、固相化方法
を選択する必要がある。

酵素免疫測定法は放射イムノアッセイ法に代わるものと
して開発された。酵素免疫法の測定原理のうち、１分子
内に２つの抗原決定部位を持つ高分子の測定には、２種
類の抗体を使ったサンドイツチ法（非競合法）が使用さ
れ、低分子のハプテンでは、抗体または抗原を固相化す
る、不均一系の競合法が使用される。更に、コルチゾー
ル等の一部のハプテンでは、抗原抗体複合体と遊離抗原
とを分離する必要のない、均−系の競合法が使用される
。酵素免疫測定法で容易に測定することが困難なハプテ
ンの測定の為に工夫された方法、例えば（１）一定量の
抗体に酵素標識したハプテンを反応させ、その抗原抗体
複合体を二抗体法または、固相抗体法で分離後、標識酵
素の活性を測定する方法。

（２）ハプテンと蛋白質の結合物を固相化抗原にし、抗
原と結合した抗体を酵素標識第二抗体で検出する方法。

を用いればハプテンの測定は可能であるが、放射性同位
元素を用いることを回避する為に、測定操作が複雑とな
り、汎用されることは困難である。

〔課題を解決する為の手段〕

本発明の主旨である、（１）アフィニティークロマトグラフィー担体に被検検
体を吸着、結合させ、残余の活性基をブロックした後、
既知の放射イムノアッセイ法または非放射イムノアッセ
イ法により、検体量を求める方法。

（２）アフィニティークロマトグラフィー担体に被検検
体（被検抗原）と一定量の標識検体（標識抗原）とを同
時に吸着させた後、既知の放射イムノアッセイ法、また
は、非放射イムノアッセイ法により、検体量を求める方
法。

（３）予め、被検検体に対する抗体を吸着、結合させ、
残余の活性基をブロックしたアフィニティークロマトグ
ラフィー担体を用い、既知の放射イムノアッセイ法、ま
たは、非放射イム／７ノセイ法により、検体量を求める
方法。

（４）請求項１、請求項２及び請求項３の実施の為に構
成された測定キット。

（５）請求項１、請求項２及び請求項３の実施の為に用
いる、アフィニティークロマトグラフィー担体を実験器
具に固相化しｊコもの。

は、前記の既知の放射イムノアッセイ法及び非放射イム
ノアッセイ法の欠点を補うものである。すなわち、請求
項１の方法を用いれば、サンドイツチ法における固相化
抗体が不要になる為、測定操作が簡略化され、測定費用
の低減化が可能になる。

まｔこ、検体がハプテンであっても、サンドイツチ法で
容易に測定が行なえる。請求項２の方法によれば、直ち
にＢ／Ｆ分離が行なえる。請求項３の方法では、被検検
体に対する抗体の固相化が短縮でき、充分量の抗体が固
相化できる。

本発明は、本来、非放射イムノアッセイの測定操作の簡
略化の為に考案されたものであるが、その手法はすべて
、放射イムノアッセイに応用することが可能である。更
に本発明は、市販のアフィニティークロマトグラフィー
担体をそのまま用いる方法の他に、アフィニティークロ
マトグラフィー担体を固相化したものを使用すること（
請求項５）をも含んでいる。固相化アフィニティークロ
マトグラフィー担体は、本発明を更に便利にしている。

すなわち、磁性ビーズ、磁性粒子、マイクロパーティク
ル等の表面にアフィニティークロマトグラフィー担体を
固相化することにより、全自動分析装置への応用も可能
である。また、試験管、マイクロプレート、ビーズ、ス
トリップ等に、アフィニティークロマトグラフィー担体
を固相化することにより、用手法での使用も可能となる
。

以下に実施例を挙げて、本発明を更に詳細に説明する。

実施例１．　　ＨＢｓ抗原の測定ＨＢｓ抗原測定用キットＡ、キット内容（１）ＣＮＢｒ−活性化セファロース　　固相化マイク
ロプレート（２）ペルオキシダーゼ標識抗ＨＢζモノクローナル抗
体（３）緩衝液（４）ＯＰＤ基質錠（５）基質溶解液（６）反応停止液（７）洗浄液（８）ＨＢｓ抗原陽性コントロール血清（不活化処理済
）（９）ＨＢｓ抗原陰性コントロール血清００）ブロッ
ク用試薬Ｂ、測定操作（１）ＣＮＢｒ−活性化セファロース　　固相化マイク
ロプレートの各ウェルに検体５０ｕｌを分注し、混合、
攪拌し、室温で３０分間インキュベートし、検体中のＨ
Ｂｓ抗原をＣＮＢｒ−活性化セファロースに吸着、結合
させた。

（２）（１）の操作を行なったマイクロプレートを洗浄
液で３回洗浄した。

（３）（２）の操作を行なったマイクロプレートに０．
２Ｍグリシン溶液（ｐＨ８，０）を添加、混和し、室温
で１時間インキュベートした。

（４）　（３）の操作を行な２つだマイクロプレートを
洗浄液で３回洗浄した。

（５）　（４）の操作を行なったマイクロプレートに酵
素標識抗体液釜５０μｌを添加し、混合、攪拌し、室温
で４５分間インキュベートし、ＣＮＢｒ−活性化セファ
ロース・ＨＢｓ抗原・酵素標識抗体複合体を形成させた
。

（６）　（５）の操作を行なったマイクロプレートを洗
浄液で３回洗浄した。

（７）　（６）の操作を行なったマイクロプレートにＯ
ＰＤ基質液各１００μｌを分注し、室温で４５分間イン
キュベートした。

（８）　（７）の操作を行なったマイクロプレートに反
応停止液、各１００　ｕ／を分注した後、４９２　ｎｍ
　　の吸光度を測定した。被検検体にかえて、ＨＢｓ抗
原陽性コントロール血清および　ＨＢｓ抗原陰性コント
ロール血清を用いて同様の操作を行ない、ＣＵＴ　ＯＦ
Ｆ　Ｉｎｄｅｘを計算し、陽性、陰性の判定を行なった
。

実施例２　血清フェリチンの測定血清フェリチン測定用キットＡ、キット内容（１）ＣＮＢｒ活性化セファロース固相化ビーズ（２）
ベルオキシダーセ標識抗ヒト牌フェリチンウサギ抗体３）緩衝液４）ＯＰＤ基質錠５）基質溶解液６）反応停止液７）洗浄液８）検量線作成用標準フェリチン９）プロ、り用試薬Ｂ　測定操作（１）各小試験管に緩衝液各１　　ａｔと検体５０　Ｂ
、１を添加、混和した。次に保存液をよく切ったＣＮＢ
ｒＮＢｒ活性化セファロース同相化ビーズ全１個、混合
、攪拌し、室温で３０分間インキュベートした。

（２）（１）の操作を行なった各小試験管を洗浄液台２
ｍ、Ｌで　３回洗浄した。

（３）（２）の操作を行なった各小試験管に０．２　Ｍ
グリシン溶液（ｐＨ８，０）を添加、混和し、室温で１
時間インキュベートした。

（４）　（３）の操作を行なった各小試験管を洗浄液で
３回洗浄した。

（５）（４）の操作を行なった各小試験管に、緩衝液各
２　　ｍｌ　　と酵素標識抗体各５０μｌを添加、混和
し、室温で４５分間インキュベートし、ＣＮＢｒ−活性
化セファロース・フェリチン・酵素標識抗体複合体を形
成させた。

（６）（５）の操作を行なった各小試験管を洗浄液で各
２　　ｍｌで３回洗浄した。

（７）＋６）の操作を行なった各小試験管にＯＰＤ　基
質各　２　　ｍｌ　を分注し、室温で４５分間インキュ
ベートした。

（８）　（７）の操作を行なった各小試験管に反応停止
波谷　１．　　ｍｌ　を分注した後、４９２　ｎｍの吸
光度を測定した。被検検体にかえて、各濃度の検量線作
成用標準フェリチンを用いて同様の操作を行ない、作成
した検量線から、被検検体中のフェリチノ量を求めた。

実施例３　トロンボキサンＢ２の測定Ａ、キット内容ｌ非固相化エポキシ活性化セファロース　６Ｂ２）　Ｃ
”Ｉ〕標識トロンボキサンＢ２抗体３）検量線作成用標
準トロンボキサン４）コントロール血清５緩衝液６）洗浄液７）ブロック試薬Ｂ、測定操作（１）緩衝液に懸濁した非固相化エポキシ活性化セファ
ロース６Ｂを５０　μｌづつ小試験管に分取した。次に
、ＰＯ〜ｖｅｌｌの方法により抽出したプロスタグラン
ジン類粗抽出溶液５０μｌを添加し、非固相化エポキシ
活性化セファロース６Ｂと混合、攪拌し、室温で１時間
インキュベートし、溶液中のトロンボキサンＢ２を非固
相化エポキシ活性化セファロースに吸着、結合させｊこ
。

（２）（１）の操作を行な−）だ各々の試験管の、トロ
ンボキサンＢ２結合非固相化活性化セファロース６Ｂに
、洗浄液５００　ｕ／を添加、混和した後、２．０００
　ｒｐｍで５分間遠心分離し、アスピレータ−で上清を
吸引、除去することにより、トロンボキサンＢ２結合、
非固相化エポキシ活性化セファ０−ス６Ｂの洗浄を行な
った。

（３）１Ｍエタノールアミンで非固相化エポキシ活性化
セファロース６Ｂの残余の活性基をブロックした。

（４Ｈ３）の操作を行なった各小試験管にＣＩ２ａ工１
１標識トロンボキサンＢｔ抗体各２００μｌを添加、混
和し、３７℃の水浴中で１時間インキュベートし、非固
相化エポキシ活性化セファロース６Ｂ・トロンボキサン
Ｂ２・Ｃｌ２５Ｉ〕標識トロンボキサンＢ２抗体複合体
を作製した。

（５）＋４）の操作を行なった各小試験管に洗浄波谷５
００μｌを添加、混和した後、４°Ｃ３，５０Ｏｒｐｍ
で３０分間遠心分離し、アスピレータ−を用いて、上清
を吸引、除去することにより、遊離２５■１標識トロン
ボキサンＢ２を分離した。

（６）ウェル型ンノチレーションカウンターヲ用いて、
非固相化エポキシ活性化セファ０−ス６Ｂ・トロンボキ
サンＢ２・（”Ｉ）標識トロンボキサンＢ２の放射活性
を測定した。被検検体にかえて、各濃度の検量線作成用
標準トロンボキサンＢ２を用いて同様の操作を行ない、
作成し１こ検量線から被検検体中のトロンボキサンＢ２
　　量を求めた。

実施例４゜葉酸の測定葉酸測定〔３Ｈ〕キツトＡ、キット内容（１）　ＥＡＨ−セファロース４Ｂ同相化小試験管（２
）〔″Ｈ〕標識葉酸抗体（３）検量線作成用標準葉酸（４）コントロール血清（５）緩衝液（６）洗浄液Ｂ　測定操作（１）緩衝液各　１　　ｒｎＬ　　を、ＥＡＨ−セファ
ロース４Ｂ固相化小試験管に分取した。次に、被検検体
各５０μｌを添加、混和した後、室温で３０分間インキ
−ベートし、検体中の葉酸をＥＡＨ−セファロース４Ｂ
に吸着、結合させた。

（２）（１）の操作を行なった各小試験管の緩衝液を除
去した後、洗浄液各　１　　ｍＬ　　を添加、混和し、
再びその洗浄液を除去した。

（３）　（２）の操作を行なった各小試験管に〔３Ｈ〕
標識葉酸抗体溶液各５００μｌを添加、混和し、３７°
Ｃの水浴中で１時間インキュベートし、ＥＡＨ−セファ
ロース４Ｂ・葉酸・〔３Ｈ〕標識葉酸抗体複合体を作製
した。

（４）　（３）の操作を行なった各小試験管を洗浄し、
遊離の〔°Ｈ〕標識葉酸抗体溶液を除去した。

（５）ウェル型シンチレーションカウンターを用いて、
ＥＡＨセファロース４Ｂ・葉酸・（ＳＨ）標識葉酸抗体
複合体の放射活性を測定した。被検検体にかえて、各濃
度の検量線作成用標準葉酸を用いて同様の操作を行ない
、作成した検量線から、被検検体中の葉酸量を求めた。

実施例５ジゴキシン量定（、＋２５　’ｆ、　’１キットＡ、キ
ット内容（１）エポキシ活性化セファロース６Ｂ（２）　（”　
Ｉ　）標識ジゴキシン抗体３）検量線作成用標準ジゴキ
シン４）緩衝液５）コントロール血清６）洗浄液７）ブロック試薬Ｂ、測定操作（１）緩衝液に懸濁したエポキシ活性化セファロース６
Ｂ各５０　ｕｌを各小試験管に分取した。次に被検検体
各５０μｌを添加、混和した後、室温で３０分間インキ
ュベートし、検体中のジゴキシン等ＯＨを持つ物質をエ
ポキシ活性化セファロースに吸着、結合させｔこ。

（２）（１）の操作を行なった各々の小試験管に、洗浄
液　０．５　　ｍｌ　を添加、混和した後、２．００Ｏ
ｒｐｍで５分間遠心分離し、アスピレータ−を用いて−
に清を吸引除去することにより、エポキシ活性化セファ
ロース６Ｂの洗浄を行なった。

（３）（２）の操作を行なった各小試験管にブロック試
薬釜　２　　ｍｌ　　を添加し、室温で４時間反応させ
た後、ブロック試薬を除去しｔこ。

（４）　（８）の操作を行なった各小試験管に（１２５
Ｉ）標識ジゴキシン抗体各２００μｌを添加、混和し、
３７０Ｇの水浴中で１時間インキュベートし、エポキシ
活性化セファロース６Ｂ　・ジゴキシン・（＋２ｓＪ）
標識ジゴキシン抗体複合体を作製した。

（５）（４）の操作を行なった各小試験管を４°Ｃ１３
，５００ｒＰｍで３０分間遠心分離し、アスピレータ−
を用いて、上清を吸引除去することにより、遊離の（＋
２５工〕標識ジゴキシン抗体を除去した。

（６）ウェル型シンチレーションカウンターヲ用いて、
エポキシ活性化セファロース６Ｂ同相化ビーズ・ジゴキ
シン・（：　＋２５１　〕標識ジゴキシン複合体の放射
活性を測定した。被検検体にかえて、各濃度の検量線作
成用標準ジゴキシンを用いて、同様の操作を行ない、作
成した検量線から被検検体中のジゴキシン量を求めた。

実施例６ヒトＩｇＥの定量ヒトＩｇＥ測定〔３Ｈ〕キツトＡ、キット内容（１）ＣＮＢｒ活性化セファ０−ス同相化ろ紙（２）（
”Ｈ）標識抗ヒトＩｇＥ抗体（３検量線作成用標準ヒトＩｇＥ（４）コントロール血清（５緩衝液（６）洗浄液（７ブロノク試薬Ｂ、測定操作（１）各小試験管に緩衝液１　ｍＬを分取した。次に被
検検体各５０　ｕｌを添加、混和しｊコ。次に、ＣＮＢ
ｒ活性化セファロース固相化ろ紙（０，３ｃｍＸ０３ｍ
）各１枚を入れ、静かに攪拌した後、室温で３０分間イ
ンキュベートした。

（２）（１）の操作を行なった各小試験管の緩衝液およ
び被検検体の混液を除去した。次に、各小試験管に洗浄
液各１　ｍｌを添加、静かに攪拌した後、固液を除去す
ることにより、ＣＮＢｒ活性化セファロース固相化ろ紙
の洗浄を行なった。

（３）（２）の操作を行なった各小試験管にブロック試
薬各２　ｍｌを添加し、室温で２時間反応させた後、ブ
ロック試薬を除去した。

（４）（３）の操作を行なった各小試験管に〔３Ｈ〕標
識ヒト抗ＩｇＥ抗体溶液各１　ｍｌを添加、攪拌した後
、３７℃の水浴中で１時間インキュベートし、ＣＮＢｒ
活性化セファ０−スｌｌヒトＩｇＥ　、　（”Ｈ）標識
ヒトＩｇＥ抗体複合体を作製した。

（５）　（４）の操作を行なった各小試験管から遊離の
〔３Ｈ〕標識抗ヒト工ｇＥ抗体を吸引除去した。

（６）ウェル型シンチレーションカウンターを用いて、
ＣＮＢｒ活性化セファロース・ヒトＩｇＥ・ｒ″Ｈ〕標
識抗ヒトＩｇＥ抗体複合体の放射活性を測定した。被検
検体にかえて、各濃度の検量線作成用標準ヒトＩｇＥを
用いて同様の操作を行ない、作成した検量線から被検検
体中のヒトＩｇＥ量を求めた。

実施例７　プラスタグランジンＥ２の測定プロスタグラ
ンジンＥ２測定キットＡ、キット内容（１）エポキシ活性化セファロース６Ｂ固相化磁性粒子
懸濁液（２）ペルオキシダーゼ標識プロスタグランジンＥ２（
メチルオキシメ化済）（３）緩衝液（４０ＰＤ基質錠（５）基質溶解液（６）反応停止液（７）洗浄液（８）検量線作成用標準プロスタグランジンＥ２（メチ
ルオキシメ化済）（９）ブロック試薬Ｂ、測定操作（１）一定量のエポキシ活性化セファロース６Ｂ同相化
磁性粒子懸濁液の入った試験管にＰ　ｏｗｅ　ｌ　Ｉの
方法により抽出した粗抽出溶波谷５０μｌを分取、混合
、攪拌した。直ちに、ペルオキシダーゼ標識プロスタグ
ランジンＥ２溶液、各５０μｌを添加、混合、攪拌した
。室温で３０分間インキユヘートシ、フロスタグランジ
ンＥ２及び、ベルオキシダーセ標識プロスタグランジン
Ｅ２　をエポキシ活性化セファロース６Ｂ固相化磁性粒
子に吸着、結合させた。

（２）（１）の操作をした各試験管を洗浄液で２回洗浄
した。

（３）（２）の操作をした各試験管にＯＰＤ基質液各波
谷ｌを添加し、室温で３０分間インキュベートした。

（４）（３）の操作を行なった各試験管に反応停止波谷
１　ｍｌを添加、混和し、４９２　ｎｍの吸光度を測定
した。検量線作成用標準プロスタグランジンＥ２を用い
て同様の操作を行ない、作成した検量線から検体中のプ
ロスタグランジンＥ２　量を求めた。

実施例８　インターフェロンγのｆｆ１Ｕ定インターフ
エロンγ測定用キツトＡ、キット内容（１）Ｂ　ｌｕｒ　Ｓｔ：ｐｂａｒ＋＋ｓ＋・ＣＬ　−
６Ｂ固相化ビーズ（２）ペルオキシダーゼ標識インター
フェロンγ抗体（Ｆａｈ’）３）緩衝液４）ＯＰＤ基質錠５基質溶解液６）反応停止液７洗浄液８検量線作成用標準インターフェロンｒＢ、測定操作（１）各小試験管に緩衝波谷１　ｍｌと検体５０μｌを
添加、混和した。次に保存液をよく切ったＢｌｕｅＳｅ
ｐｈａｒｏｓｅ　Ｃ１、６Ｂ固相化ビ一ズ各１個を取り
、混合、攪拌し、室温で３０分間インキュベートしｔこ
。

（２）（１）の操作を行なった各小試験管を洗浄波谷２
　ｍｌで３回洗浄した。

（３）（２）の操作を行なった各小試験管にペルオキシ
ダーゼ標識インターフェロンｒ抗体（Ｆａｂ’）を添加
、混和し、室温で１時間インキュベートし、Ｂｌｕｅ　
Ｓ（ｌ市ａｒｕｓｒ　ＣＬ−６８・インターフェロンｒ
ＩＩ酵素標識抗体複合体を形成させた。

（４）（３）の操作を行なった各小試験管を洗浄液各２
ｍｌで２回洗浄し、遊離の酵素標識抗体を分離し　ｔこ
　。

（５）（４）の操作を行なった各小試験管にＯＰＤ　基
質釜２　ｍＬを添加し、室温で１時間インキュベートし
た。

（６）　（５）の操作を行なった各小試験管に反応停止
液各１　ｍｌを添加、混和した後、４９２　ｎｍの吸光
度を測定した。

被検検体にかえて、各濃度の検量線作成用インターフェ
ロンγを用いて同様の操作を行ない、作成した検量線か
ら被検検体中のインターフェロンγ量を求めた。

実施例９　可溶性肝特異的リポ蛋白（ＬＳＰ）抗体の測
定ＬＳＰ抗体測定キットＡ、キット内容（１）ＣＮＢｒ　＠性化セファロース固相化試験管（２
）ベルオキシダーセ標識プロティンＡ３）緩衝液４）ＯＰＤ基質錠５）基質溶解液６）反応停止液７）洗浄液８）検量線作成用標準ＬＳＰ抗体９）ブロック試薬Ｂ、測定操作ｍｃＮｇｒ活性化セファロース固相化試験管に緩衝液各
１．　ａＬとＬＳＰ溶液各波谷μｌを添加、混和し、室
温で１時間インキュベートし、ＬＳＰをＣＮＢｒ活性化
セファロースに吸着、結合させｔこ。

（２）（１）の操作を行なった各試験管の緩衝液を除去
し、洗浄液各１　ｍＬで２回洗浄した。

（３）　（２）の操作を行なった各試験管にブロック試
薬１　ｍｌを添加し、室温で２時間インキュベートし　
ｔこ。

（４）（３）の操作を行なった各試験管を洗浄液各１ｒ
ｔｄで２回洗浄した。

（５）　（４）の操作を行なった各試験管に緩衝液各１
ｍｌと被検検体５０μｌ　を添加し、３７°Ｃで１時間
インキュベートした。

（６）　（５）の操作を行なった各試験管にペルオキシ
ダーゼ標識プロティンＡ溶波谷１　ｍｌを添加、混和し
、３７°Ｃで１時間インキュベートした。

（７）（６）の操作を行なった各試験管にＯＰＤ基質溶
液各波谷ｍｌを添加、混和し、室温で３０分間インキュ
ベートした。

（８）　（７）の操作を行なった各試験管に反応停止液
各１　ｍｌを添加、混和し、４９２　ｎｍの吸光度を測
定した。検量線作成用標準ＬＳＰ抗体を用いて同様の操
作を行ない、作成した検量線から検体中のＬＳＰ抗体量
を求めた。

実施例１０固相化アフィニティー担体の作製（Ａ）ＣＮＢｒ活性化セファロース固相化試験管小試験
管の内側に水に不溶の合成糊を薄く均一に塗布し、乾燥
したＣＮＢｒ活性化セファロースを散布し、ＣＮＢ　ｒ
活性化セファロースの薄層を形成させた。２４時間室温
で乾燥した後、ＣＮＢｒ活性化セファロース層を整形し
各試験に供した。

（Ｂ）　ＥＡＨ−セファロース４Ｂ固相化ビーズ直径８
２順のポリスチレンボールに水及び有機溶媒に不溶の合
成糊を薄く均一に塗布し、乾燥したＥＡＨ−セファロー
ス４Ｂ粉末の上に置き、ポリスチレンボール上にＥＡＨ
−セファロース４Ｂの薄層を形成させた。２４時間室温
で乾燥させた後、５０　ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７，２
、０，１％ＮａＨ。

含有）に浸し、保存した。

（Ｃ）　Ｂｌｕｅ　５ｅｐｈａｒｏｓｅ　ＣＬ−６Ｂ固
相化プレートＥＬＩＳＡ　用セパレート・ストリップウ
ェル（８ウエル）の内側に水及び有機溶媒に不溶の合成
糊を薄く均一に塗布した後、乾燥したＢｌｕｅ　５ｅｐ
ｈａｒｏｓｅ　ＣＬ−６Ｂ粉末でウェルを満たし、２４
時間、乾燥させ、余分のＢ　ｌｕｅ　Ｓ　ｅｐｌ＋ａｒ
ｏｓｅ　ＣＬ　−６Ｂ粉末を除去し、固相化したＢｌｕ
ｅ　５ｒｐｌ＋ａｒｏｓｅ　ＣＬ−６Ｂ層を整形し、各
試験に供した。

Ｑ））　ＡＧ　ＰＯＬＹ　（Ｉ）、　ＰＯＬＹ（Ｃ）　
Ｔ、ＹＰ（！　６　　固相化ストリップ０．３　ｃｍ　Ｘ　Ｏ，３ｃｍのストリップの表面にニ
カワを薄く塗布し、その上に乾燥したＡＧ　ＰＯＬＹ（
Ｉ）。

ＰＯＬＹ（Ｃ）　　Ｔｙｐｅ　６粉末を散布、接着し・
２４時間乾燥させた。裏面も同様の処理をし、各試験に
供した。

（５）ＣＮＢｒ活性化セファロース固相化中空円筒ＥＬ
ＩＳＡ　用マイクロプレートのウェル中挿入可能な大き
さ（直径６咽長さ８票）の中空円筒の中側面及び外側面
に水及び有機溶媒に不溶の合成糊を薄く均一に塗布し、
乾燥したＣＮＢｒ活性化セファロース粉末で満たした箱
に埋め、２４時間後に取り出し、中空円筒を整形し、各
試験に供した。

（以下余白）

Claims

【特許請求の範囲】

（１）アフィニティークロマトグラフィー担体に被検検
体を吸着、結合させ、残余の活性基をブロックした後、
既知の放射イムノアッセイ法または非放射イムノアッセ
イ法により、検体量を求める方法。
（２）アフィニティークロマトグラフィー担体に被検検
体（被検抗原）と一定量の標識検体（標識抗原）とを同
時に吸着させた後、既知の放射イムノアッセイ法または
、非放射イムノアッセイ法により、検体量を求める方法
。
（３）予め、被検検体に対する抗体を吸着、結合させ、
残余の活性基をブロックしたアフィニティークロマトグ
ラフィー担体を用い、既知の放射イムノアッセイ法、ま
たは、非放射イムノアッセイ法により、検体量を求める
方法。
（４）請求項１、請求項２および請求項３の実施の為に
構成された測定キット
（５）請求項１、請求項２および請求項３の実施の為に
用いる、アフィニティークロマトグラフィー担体を実験
器具に固相化したもの。