JPH0468918B2

JPH0468918B2 -

Info

Publication number: JPH0468918B2
Application number: JP8320985A
Authority: JP
Inventors: Akira Sugisawa; Masanori Yamamoto; Yukihiro Nomura; Osamu Fujii; Sayuri Ashida
Original assignee: House Food Industrial Co Ltd
Current assignee: House Foods Corp
Priority date: 1985-04-16
Filing date: 1985-04-16
Publication date: 1992-11-04
Also published as: JPS61239897A

Description

【発明の詳細な説明】

本発明は、常温でゲルを形成する新規な多糖類
の製造法に関する。（従来の技術）微生物の生産する多糖類に関しては、これまで
アルカリゲネス属、キサントモナス属、アースロ
バクター属あるいはバチルス属に属する細菌、ハ
ンゼヌラ属の酵母類、ブルラリア属等のカビ類の
生産するものが知られている。しかし、これら多糖類のうち、常温で高い粘度
を示しゲルを形成するようなものは以外に少かつ
た。（発明が解決しようとする問題）本発明者等は、特に粘度の高い多糖類を得る目
的で広く土壌菌を採取し、その多糖類生産能を検
索した。その結果、本発明者等がSP−１と仮に
表示したバチルス属に属する細菌が、培養物中に
極めて粘度の高い多糖類様物質を蓄積することを
見出した。（問題点を解決するための手段）本発明は、かかる知見に基づき完成されたもの
で、その要旨は、バチルス属に属し、主要構成成
分がマンノース、グルコース、キシロース、グル
クロン酸からなる常温でゲルを形成する多糖類生
産能を有する細菌を培地に培養して上記多糖類を
生成せしめ、これを採取することを特徴とする多
糖類の製造法である。以下、本発明について詳しく述べる。本発明においては、主要構成成分がマンノー
ス、グルコース、キシロース、グルクロン酸から
なる常温でゲルを形成する多糖類生産能を有する
細菌を培養する。このような菌としては、本発明
者等が土壌より採取したSP−１菌があり、その
菌学的諸性質は次のとおりである。〈１〉形態的性質顕微鏡による観察栄養細胞形態：桿菌動物性：あり大きさ：0.8〜１×２〜5μm 胞子：中央からやや端にかけて胞子を形成す
る。胞子嚢ははつきりとふくらむ。染色グラム染色：陽性抗酸性染色：陰性培地における育成状況 (1) 肉汁寒天平板培養白色でしわがあり、光沢なし。 (2) グルコース寒天平板培養黄色がかつた白色で光沢があり、べつとりし
ている。 (3) 肉汁液体培養上部に被膜をつくり濁る。 (4) グルコース肉汁液体培養肉汁より生育良好で、上部に被膜をつくる。 (5) 肉汁ゼラチン穿刺培養液化遅い。 (6) リトマスミルクにおける生育凝固しペプトン化する。リトマスを還元す
る。〈２〉生理的性質１生育温度：15〜45℃ ２生育最適温度：30℃ ３生育PH：5.5〜9.5 ４生育最適PH：7.0 ５酸素要求性：好気性６硝酸塩の還元性：あり７脱窒反応：なし８メチルレツド反応：陽性９インドールの生成：なし 10 硫化水素の生成：なし 11 澱粉の加水分解能：あり 12 クエン酸の利用性：あり 13 色素の生成：なし 14 ウレアーゼの生成：あり 15 オキシダーゼの生成：あり 16 カタラーゼの生成：あり 17 Ｏ−Ｆテスト：酸化醗酵〈３〉炭水化物の醗酵性第１表に示したような結果が得られた。

【表】以上の諸性質に従い、バージイズ・マニユア
ル・オブ・デターミネーテイブ・バクテオロジー
（Bergeys Manual of Determinative
Bacteriology）第８版により検索したところ、
本菌はバチルス属（Bacillus）と同定された。更
に、胞子嚢がはつきりとふくらみ、胞子が楕円形
であること、中央からやや端にかけて胞子を形成
すること、グルコースから酸を生成しガスを生産
しないことを考慮すると、バチルス・サーキユラ
ンス（Bacillus circulans）に近い。しかし、そ
の特徴を厳密に比較すると、バチルス・サーキユ
ランスとは、グラム染色性が陽性、アセトインを
生成、MRテスト陽性、ウレアーゼを生成、とい
う点で異なる。従つて、本菌はバチルス属に属す
る新菌種と認定し、バチルス・SP−１と命名す
ると共に工業技術院微生物工業技術研究所に微工
研菌寄第8017号として寄託している。本発明においては、かかるバチルス属に属する
多糖類生産能を培地で培養する。該培養に当つて
は、使用する微生物が資化できる炭素源、窒素
源、生育に必要な各種無機塩等の栄養源を含む培
地が用いられる。具体的には、炭素源としてはデ
ンプン、ブドウ等、蔗糖などがあり、窒素源とし
ては尿素、肉エキス、ペプトン、コーンステイー
プリカー、酵母エキス、硫酸アンモニウム、硝酸
アンモニウム、その他の有機物あるいは無機物が
用いられ、無機物としては塩化ナトリウムまたは
マグネシウム、マンガン、カリウム、鉄、カルシ
ウムなどの燐酸塩、硫酸塩、炭酸塩などがあげら
れる。培養はPH5.5〜9.5好ましくは6.5〜7.0、温度15
℃〜45℃好ましくは25℃〜35℃で実施され、通常
数日程度の培養でよい。このようにして得られた培養物中には、本発明
の目的とする多糖類が含まれている。従つて、該
培養物中から多糖類を抽出、精製する必要があ
る。該多糖類の精製に当つては、予め培養物中の
菌体その他の固形分を除去した後多糖類を回収す
る方が好ましい。精製には、加熱、遠心分離、洗浄、乾燥、溶媒
による分別沈澱や抽出など、多糖類を不純物から
回収するために通常使用される手段を単独に、あ
るいは適宜組み合わせることによつて実施すれば
よい。その一例を示すと、上記固形分を除去して
得られた溶液に、アセトン等の溶媒を添加して多
糖類を折出せしめ、よつて得られた多糖類を水に
溶解させ、再びアセトン等の溶媒により多糖類を
折出させる。この処理を繰り返し行なつた後、透
析、凍結乾燥することにより精製された多糖類を
得ることができる。このようにして得られた多糖類の性質を以下に
示す。 (1) 構成成分本発明の多糖類の加水分解物（加水分解条件：
５％（Ｖ／Ｖ）硫酸100℃12時間）を濃縮し、薄
層クロマトグラフイー、液体クロマトグラフイ
ー、ガスクロマトグラフイー、カルバゾール硫酸
比色法により分析定量した。その結果、マンノー
ス、グルコース、キシロース、グルクロン酸が主
要構成成分であることがわかつた。そして、それ
ぞれの成分はモル比７：２：２：１で構成されて
いる。一方、本多糖類の加水分解物をエルソン−
モルガン法により比色定量したが、ヘキソサミン
は検出されなかつた。 (2) 一般組成分析（乾物当り）粗蛋白質（6.25×Ｎ）：2.6％灰分：12.5％
粗脂肪：0.0％炭水化物：84.9％ (3) 分子量 750000以上（Sephacryl Ｃ−300（フアルマシ
アフアインケミカル製）によるゲル濾過法で
測定） (4) 融点融点は認められない。 (5) 赤外線吸収スペクトル第１図のとおりである。 (6) 溶剤に対する溶解性水に可溶、メタノール、エタノール、アセトン
等有機溶媒に不溶。 (7) 呈色反応アンスロン反応、硫酸カルバゾール反応に陽
性、エルソン−モルガン反応に陰性。 (8) 塩基性、酸性、中性の区別セチリトリメチルアンモニウムブロマイドによ
り沈澱を生ずることから酸性多糖である。 (9) 物質の色白色。 (10) 粘度常温で水に溶け、粘度の高い溶液になる。粘度
と濃度との関係は第２図に示すとおりである。 (11) 酸およびアルカリに対する安定度 PH５で最高粘度を示し、PH６〜10の範囲で比較
的安定した粘度を示す。 (12) 塩に対する安定度カルシウムなどの二価の金属塩の存在下で粘度
の低下は認められず、高粘性を示す。本多糖類は以上のような特徴を有するほかに以
下に示すようにな特徴的性質を有している。即ち、比較的低濃度（0.7％Ｗ／Ｖ）で加熱溶
解、冷却凝固の性質を有することはもちろんのこ
と、室温で水と接触させるだけで流動性を全く失
い、ゼリー状になる。こうした特徴的性質を有する本多糖類は、増粘
剤、ゲル化剤、賦形剤等として広い分野で利用す
ることができる。また、サイジング剤、凝集剤等
としても利用することができ、更には土壌改良
剤、肥料粒化剤等として農業の分野においても利
用することができる。実施例 500ml容坂口フラスコの次の組成の培地を100ml
入れて滅菌した。（培地組成）グルコース５％、ポリペプトン0.5％、酵母エ
キス0.5％、リン酸−カリウム0.1％、硫酸マグネ
シウ（７水塩）0.1％、炭酸カルシウム0.75％、
PH7.0。この培地にバチルスSP−１（微工研菌寄第8017
号）を接種し、30℃、９日間振盪培養した。培養
液100mlに蒸溜水を添加して５倍希釈し、80℃、
10分間加熱した後、直ちに遠心分離（14000G、
20分間）を施して菌体をその他の不要成分を除
き、上澄液に倍量のアセトンを攪拌しながら注加
して多糖を繊維状に折出させる。この粗多糖を再
び蒸溜水に溶解後、上記アセトン沈澱処理操作を
２回繰り返した後、多糖溶液をセルロースチユー
ブ（分画分子量１万）に入れ、流水で２日、蒸溜
水で１日透析した後、凍結乾燥し、綿状の精製多
糖4.4ｇを得た。これは前記した諸性質を有して
いた。

【図面の簡単な説明】

第１図はバチルスSP−１菌多糖類の赤外線吸
収スペクトルのパターンを示し、第２図は本多糖
類の濃度と粘度との関係を示すグラフである。

Claims

【特許請求の範囲】

１バチルス属に属し、主要構成成分がマンノー
ス、グルコース、キシロース、グルクロン酸から
なる常温でゲルを形成する多糖類生産能を有する
細菌を培地に培養して上記多糖類を生成せしめ、
これを採取することを特徴とする多糖類の製造
法。