JPH0470565A - ラテックス凝集試験方法及びこれに用いる試薬 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ［産業上の利用分野］ 本発明は、ラテックス凝集試験方法に関し、さらに詳細
には、血液中に存在するホルモン、酵素、タンパク質等
や抗体等を測定するに当り、血清分離を必要としないラ
テックス凝集試験方法に関する。

［従来の技術及びその課題］ ラテックス凝集試験は、ラテックス粒子を被検物質に対
する抗体あるいは抗原で被覆し、被検試料、例えば、血
清、尿、培養液、抽出液等と混合、接触させ、生じたラ
テックス粒子の凝集を肉眼で判断することにより被検試
料中の抗体あるいは抗原量（被検物質量）を測定する方
法である。

しかしながら、従来ラテックス凝集試験法において全血
は被検試料として用いることはできないとされており、
また、全血を試料として用いた試験結果が報告された例
もない。

その理由は、■全血を試料とした場合、ラテックスの凝
集塊が赤血球の下に沈み、その生成が確認できない、■
赤血球の下に沈み込んだ凝集塊を観察しようとして、例
えば試験平板を傾けても自然沈澱のものと凝集によるも
のとが判別できない点にあっ力。

このような理由により、全血を試験試料として使用する
ことはなく、血清を利用しているのであるが、血清を得
るためには、血液を遠心分離等にかけなければならず、
例えばこのような装置のない屋外において緊急に試験を
行う必要がある場合にはラテックス凝集法は使用するこ
とはできなかった。

［課題を解決するための手段］ 本発明者らは、ラテックス凝集法の適用を全血試料に対
しても広げるべく鋭意研究をおこなった結果、ラテック
ス粒子の比重を適切に選択し、反応により生じたラテッ
クス凝集塊が反応系の表面に浮上するようにすれば、全
血試料に対してもラテックス凝集法が適用し得ることを
見いだした。

すなわち本発明は、試料中の抗原または抗体と、これに
対する抗体または抗原を結合したラテックスを反応させ
、生じたラテックス凝集により試料中の抗原または抗体
の存在を測定するラテックス凝集試験方法において、試
験試料として赤血球を含む全血試料を用い、反応により
生じたラテックス凝集を反応溶液表面上に浮上させるこ
とを特徴とするラテックス凝集試験方法を提供するもの
である。

本発明方法においては、ラテックス凝集を反応溶液表面
に浮上させるため、試験に使用する抗体または抗原を結
合したラテックス（以下、　「試験ラテックス」という
）の比重及び反応系の液性、例えば塩類やタンパク質等
の種類及び濃度が重要である。　具体的には、試験ラテ
ックスの比重が全血試料とラテックス懸濁液からなる反
応系の非血球画分の比重とほぼ同一かまたはわずかに高
く、がっ、血球画分の比重より低いことが必要である。

このような試験ラテックスを調製するためには、原料ラ
テックスとしてその比重が０．９９０−１．０８０程度
の低比重ラテックスを使用し、抗体または抗原での被覆
を上記条件の比重範囲に入るようにすれば良い。なお、
この試験ラテックスの好ましい比重範囲は、測定系の比
重等によって異なってくるので数字で限定することはで
きないが、−Ｇには１．０１５〜１．０８０程度である
。

抗体、抗原での原料ラテックスの被覆は、常法にしたが
って行えばよく、特に制限はない。

本発明は、後でも示すように、試験ラテックスとこれが
凝集したラテックスの比重、反応系の液性および血球画
分の比重が重要であ本発明のラテックス凝集試験におい
ては、被測定物質により、添加される試薬、塩類及び蛋
白濃度が異なるので、使用すべき試験ラテックス及び凝
集したラテックスの比重や反応系の液性を試験的に定め
ることが必要である。

そして、試験ラテックスの比重の調製は、原料ラテック
スの比重と原料ラテックスに対する抗原または抗体の被
覆量を調製することにより行うことができる。

本発明は、試験に用いるラテックスとして上記した試験
ラテックスを用い、被検試料として全血試料を用いる以
外は、公知のラテックス凝集法と同様実施することがで
きる。

すなわち、全血試料に試験ラテックスを添加し、反応さ
せた後、反応系表面に浮上してくる凝集ラテックスから
被測定物質の存在を判断すれば良い。

［作　　　用　］ ラテックス凝集反応は、ラテックス粒子表面に抗原ある
いは抗体を被覆し、その抗原あるいは抗体に反応性のあ
る抗体あるいは抗原をそのラテックスの凝集により測定
するものである。　本発明は、種々の反応液性における
凝集用ラテックス粒子の比重が血球成分の比重に比べ低
く、血清成分よりも高いか同等の比重を有することに着
目した反応系である。

すなわち本願発明の凝集試薬は、全血試料に加えられた
場合、均一な反応系を形成し、反応により生じたラテッ
クス凝集塊は浮力により反応溶液表面上に浮遊し、陰性
と陽性との判定を可能とするという新しい技術思想に基
づくものである。

［発明の効果］ 従来ラテックス凝集法は、全血試料に対しては適用する
ことができず、血清分離を行って初めて実施することが
できた。　しかし本発明方法によれば、血清分離するこ
となく、血液中に存在するホルモン、酵素、抗体等を検
出することが可能になった。

従って、本発明によれば血液中の上記成分の検圧が容易
になったのみならず、例えば、畜産等の現場で血清分離
が困難な状況であっても、例えば、授精卵移植のときに
必要な、血中のプロゲステロン量を測定を迅速に行うこ
とが可能となり、極めて有利に使用できる。

［実施例　］ 以下実施例をもって本発明をさらに詳しく説明する。　
以下の実Ｆｊ、ｆＮでは、マウスモノクローナル抗体に
対する抗体（以下、　ｒＨＡＭＡ」という）について本
発明方法で試験した結果を示すが、本発明方法は当然の
ことながらこれらの物質に適用が限定されるものではな
い。

なお、実施例におけるＨＡＭＡおよびＨＡＭＡ様物Ｎ（
マウスモノクローナル抗体と交差反応性を示す物質）の
測定は、マウスモノクローナル抗体を利用するイムノシ
ンチおよびイムノセラフイーにおいて重要な意義のある
ものである。

すなわち、イムノシンチやイムノセラフイーは同一人に
対し、複数回適用される医療技術であるが、マウスモノ
クローナル抗体を人体に適用した場合に、これに対する
抗体（ＨＡＭＡ）が産生され、この結果、イムノコンプ
レックスが生じ本来の薬剤投与の効果を期待てきなくな
る。

また、人体中に一部のリュウマチ因子や、扶植（ｓｓＤ
ＮＡ）抗体が存在するとこれがマウスモノクローナル抗
体と交差反応性を示しＨＡＭＡ様物質同様に本来の医療
効果を期待できなくなる。

従って、イムノシンチ剤やイムノセラフイー剤を投与す
る前に、体内に存在するＨＡＭＡおよびＨＡＭＡ様物質
置物質量することは医療技術上重要である。

実施例　１ 低比重ラテックス凝集試薬（本願発明 品）の調製： ５０ｍ１容遠心管にラテックス浮遊液（＃Ｉ水化学工業
（株）製Ｎ−１０００（粒径１、ＯＯミ７［１：／　　
固形分１（Ｈ比重１．００３）　　１　ｍ　ｌと０．０
５Ｍグリシン緩衝液（ｐＨ８，５，０，１５Ｍ塩化ナト
リウムを含む）９ｍｌに、マウスモノクローナル抗体を
１ｍｇ／ｍ］となるように加えた。　　この混合物をポ
ルテックスにて撹拌後、５０　’Ｃにて３０分間靜装し
た。　高速遠心機（ＫＵＢＯＴＡ　　ＲＲ／２００００
）にて４０００回転／分で１５分間遠心した。　上澄み
を除去後、０．０１Ｍグリシン緩衝液（ｐＨ８，６、１
％ＢＳＡ、０．１５Ｍ塩化ナトリウムを含む）１０ｍｌ
にてラテックスを再浮遊させた。　パラフィルムにて遠
心管の口を閉じ、４℃にて一晩装置シタ。４０００回転
／分で１５分間遠心し、上澄みを除去した。　０．０５
Ｍグリシン緩衝液（ｐＨ８，６，０，０５％ＢＳＡ、　
０．０１％アジ化ナトリウム、０．１５Ｍ塩化ナトリウ
ムを含む）　　１０ｍ１にてラテックスを再浮遊させた
。　　４０００回転／分で１５分間遠心し、上澄みを除
去した。　この操作を３回ｍ逐した。　０．０５　Ｍグ
リシン緩衝液（ｐＨ８，６，０，０５％ＢＳＡ、０．０
１％アジ化ナトリウム、０．１５Ｍ塩化ナトリウムを含
む）５ｍｌに再浮遊させ、低比重ラテックス凝集試薬（
ラテックス分２％）溶液を得た。

比較例 ラテックス浮遊液として、高比重ラテックス（武田薬品
工業（株）ＷＳＤＬ−５９粒径０．９０ミクａｙ　　固
形分５χ　比重１．１２）　２　ｍ　ｌを用いる以外は
実施例１と同様にして高比重ラテックス凝集試薬（ラテ
ックス分２％）溶液（比較品）を得た。

実施例２ 低比重ラテックス凝集試薬と高比重 ラテックス凝集試薬の比較： 実施例１と比較例で調製したラテックス凝集試薬をもち
い、以下に示す方法によりＨＡＭＡの検出について試験
した。　　この結果を第１表に示す。

（１）測定方法 ラテックス凝集判定プレート（覆水化学工業（株）製　
Ｃ−ＨＰＩＯ）のＮ、１．２及び３の反応区域枠内に低
比重ラテックス凝集試薬（本発明品）あるいは高比重ラ
テックス凝集試薬（比較品）をそれぞれ５０μｌずつ滴
下する。　Ｎ０８１の反応区域枠内には、正常兎よりヘ
パリン採血した新鮮血を用いてアフィニティーｍ製され
た抗マウス　エｇＧ（Ｈ＋Ｌ）ウサギ抗体（カッペル社
製１０６１１−００８２）を１０００倍希釈したもの５
０μｍを加え撹拌した。　Ｎ　ｏ　、　２の反応区域枠
内には、正常兎よりヘパリン採血した新鮮血を５０μｍ
滴下し、撹拌棒で混ぜ合わせ、反応区域枠内に広げた。

　Ｎ　ｏ　、　３の反応区域枠内には、Ｎ　ｏ　、　１
に加えた試料と４．３ｍｇ／ｍｌのマウスモノクローナ
ル抗体溶液（０，ＯＩＭリン酸緩１ｉｉｉ液）２５μｍ
を滴下し、撹拌棒で混ぜ合わせ、反応区域枠内に広げた
。　それぞれ１分間ゆるやかに判定板を動かし、１０分
間靜１し、凝集像を観察し判定した。

（２）測定結果 第１表 Ｎｏ、Ｉ　　　　Ｎｏ、２　　　　Ｎｏ、３低比重ラテ
ックス凝集試薬　　陽　性　　　陰　性　　　陰　性（
本発明品） 高比重ラテックス凝集試薬　　判定不可　　判定不可　
　判定不可（比較品） これに比べ、低比重ラテックス凝集試薬のＮｏ、２と３
は未凝集のラテックス粒子が赤血球の上に未凝集の状態
で確認でき、陰性判定も容易に出来た。

なお、上記の各状態を示す写真を参考写真として示す。

以　　　上 二の結果から明らかなように、低比重ラテックス凝集試
薬を用いた場合、Ｎｏ、１のラテックス凝集塊は反応溶
液表面上に浮かび上がり、凝集が明瞭に判定できた。　
これに対し、高比重ラテックス試薬のＮｏ、１の凝集塊
は赤血球の下に沈み込及　その凝集塊を確認できなかっ
た。　そればかりか１０分間靜１しておくことによりラ
テックス粒子は赤血球の下に沈み込み、Ｎｏ、２と３の
判定が不可能であっ出願人　株式会社第一ラジオアイソ

Claims (3)

【特許請求の範囲】
1. （１）試料中の抗原または抗体と、これに対する抗体ま
   たは抗原を結合したラテックスを反応させ、生じたラテ
   ックス凝集により試料中の抗原または抗体の存在を測定
   するラテックス凝集試験方法において、 試験試料として赤血球を含む全血試料を用い、反応によ
   り生じたラテックス凝集を反応溶液表面上に浮上させる
   ことを特徴とするラテックス凝集試験方法。
2. （２）抗体または抗原を結合したラテックスの比重が全
   血試料とラテックス懸濁液からなる反応系の非血球画分
   の比重とほぼ同一かまたはわずかに高く、かつ、血球画
   分の比重より低いことを特徴とする請求項第１項記載の
   ラテックス凝集試験方法。
3. （３）比重が全血試料を含む反応系の非血球画分の比重
   とほぼ同一かまたはわずかに高く、かつ、血球画分の比
   重より低くなるように、被検試料に対する抗体または抗
   原を結合させたラテックスを含有するラテックス凝集試
   験用試薬。