JPH0481440B2 - - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 ［発明の分野］ 本発明は、液体試料中のγ−グルタミルトラン
スフエラーゼ活性を測定するための一体型多層分
析要素に関するものである。さらに詳しくは本発
明は、水性液体試料の分析、特に体液を試料とす
る臨床検査の有用なγ−グルタミルトランスフエ
ラーゼ活性測定用一体型層分析要素に関するもの
である。 ［発明の背景］ 臨床検査上、人の体液中のγ−グルタミルトラ
ンスフエラーゼの活性を測定することは極めて重
要である。すなわち肝臓癌、胆道癌あるいは膵臓
癌に関連する酵素活性として、それらの診断に体
液中のγ−グルタミルトランスフエラーゼ（以下
GGTと略す場合もある）活性の測定が高頻度で
なさている。 GGT活性の測定法としては、1960年にエイ・
セウツーク（A.Szewczuk）、エム・オルロウス
キ（M.Orlowski）によつて合成基質を用いた
GGT活性測定法が発表（クリニカ・キミカ・ア
クタ［Clin.Chim.Acta］、５；680〜688、1980参
照）されて以来、特開昭54−133191号、同53−
11793号、同54−132533号、同56−148298号、同
56−148299号、同56−164796号、同56−23897号、
同56−92845号、同56−158745号、同56−169597
号、同56−30956号、同53−147034号、同54−
28195号および同55−26870号公報等に記載されて
いる各種のGGT活性測定用合成基質が合成され、
かつ他の発色反応系と共役される反応系が開発さ
れ、現在は多種多様な方法が幅広く使用されてい
る。 しかし前記の方法の大部分は呈色の為に反応系
のPHを変換させたり、それ自身または中間生成物
が酵素反応を阻害する恐れのある呈色試薬を添加
する等の逐次反応を採用している。これに対し、
今日においてもまだ数が少ないが、酵素反応その
ものを直接観察することができる基質、すなわち
速度法適性のある自己顕色性基質がいくつか合成
されている。 GGT活性測定用自己顕色性基質としては、
1965年、エム・オルロウスキによつて開発された
（アルキヴム・イムノロキエ・テオ・テラピエ・
エクスペリメンタリス［Arch.Immunol.Ther.
Exp.］13、538（1965）参照）γ−グルタミル−
ｐ−ニトロアニリド、特公昭54−7781号記載のγ
−グルタミル−３−カルボキシ−４−ニトロアニ
リド等が知られている。 後者は、溶解性に優れ、IFCCの標準法基質と
して採用されている。一方、前者は溶解性が悪い
が、製造コストが低くかつ開発時期が早く臨床的
知見が多いためその使用法が最も多く研究された
基質であり、今日において最も広範囲に用いられ
ている。自己顕色性基質としてγ−グルタミル−
ｐ−ニトロアニリドを用いる分析方法においは、
難溶性である上記γ−グルタミル−ｐ−ニトロア
ニリドを溶解させるために界面活性剤が用いられ
ている。しかし溶解性の高いカチオン性またはア
ニオン性界面活性剤の単独使用は、GGT活性を
阻害することが知られている。よつて、従来の分
析方法においては、上記GGT活性阻害を起こさ
ずに、いかしてγ−グルタミル−ｐ−ニトロアニ
リドを溶解させるかが重要な問題となつていた。 GGT活性阻害を起こさないγ−グルタミル−
ｐ−ニトロアニリドの溶解方法の例として、特公
昭57−24759号公報に、γ−グルタミル−ｐ−ニ
トロアニリドをカチオン性界面活性剤および非イ
オン性界面活性剤を含む水溶液に溶解する方法が
開示されている。また特開昭55−153600号公報
は、γ−グルタミル−ｐ−ニトロアニリドの塩基
当量に対して、化学量論的量あるいは過剰量を加
えて、プロトン化塩基を生成し、次に凍結乾燥す
ることにより、試験緩衝溶液中に20〜25℃におい
て、ほとんど即時に溶解させることができる凍結
乾燥剤が開示されている。 一方、臨床検査の領域においては診断に関与す
る医師等の医療関係者からの、簡便で操作性がよ
く、迅速に測定でき、かつ精度のよい分析方法の
開発が求める強く求められている。これに答える
方向として近年において、従来用いられてきた湿
式分析方法に代る鑑識分析方法、特に取り扱いの
簡便な一体型多層分析要素を用いるGGT活性測
定方法が開発され、さらにその改良が進められて
いる。 上記の一体型多層分析要素としては、エイチ・
ジー・キユーム（H.G.Curme）等によるクラニ
カル・ケミストリー（Clim.Chem.）241335〜
1350（1978）に報告されている。また、ビー・ウ
オルター（B.Walter）によるアナリテイカル・
ケミストリー（Analytical Chemstry）（1983）
55493Aに上記各種の方法が報告されている。 これらの一体型多層分析要素のうちGGT活性
測定用であるものは、γ−グルタミルトランスフ
エラーゼに感応して自己顕色性を示す基質を含有
する多孔性展開層および支持体層、あるいはその
他必要に応じて設けられる吸水層等の機能層を積
層、一体化してなるものである。 しかし、これらの一体型多層分析要素を用いて
γ−グルタミルトランスフエラーゼの活性を測定
する場合、上記従来の湿式分析方法における諸問
題に加えて、新たな問題が生じている。すなわ
ち、湿式分析方法と異り、一体型多層分析要素中
の基質およびその他の試薬類は乾燥状態で保存さ
れている。ゆえに、GGT活性測定用分析要素の
精度を向上させ、かつ広い測定域を得るために
は、展開層中に乾燥状態で保存されている基質が
液体試料中の少量の水分に接触した時の基質の再
溶解性をさらに向上させる必要がある。 また一般に一体型多層分析要素を用いる分析に
おいては、液体試料を希釈せずに、液体試料（特
に体液）を高濃度（特に高蛋白濃度）のままで分
析する。このため、展開層中に含有させる基質お
よびその他の試薬類が、蛋白質等の液体試料中の
成分の干渉を受け展開層中に充分に拡散しないこ
とにより、分析精度が低下する恐れがある。よつ
て、上記基質およびその他の試薬類の展開層中に
おける展開性を向上させる必要がある。 ［発明の目的］ 本発明の目的は、従来の一体型多層分析要素を
用いた乾式分析方法における上記の問題点が改良
されたγグルタミルトランスフエラーゼ活性測定
用一体型多層分析要素を提供することにある。 本発明の他の目的は、簡便及び迅速な操作が可
能で、医師、看護婦等の臨床検査の非熟練者であ
つても容易に試料液体中のγ−グルタミルトラン
スフエラーゼ活性を測定することのできる一体型
多層分析要素を提供することである。 ［発明の要旨］ 本発明は、γ−グルタミルトランスフエラーゼ
に感応して自己顕色性を示す基質を含有する多孔
性展開層、吸水層および支持体層を積層してなる
一体型多層分析要素において、上記多孔性展開層
が、第四級アンモニウム塩型カチオン性界面活性
剤、HLB値10以上のノニオン性界面活性剤およ
び親水性セルロース誘導体ポリマーを含有するこ
とを特徴とするγ−グルタミルトランスフエラー
ゼ活性測定用一体型多層分析要素を提供するもの
である。 ［発明の効果］ 本発明のγ−グルタミルトランスフエラーゼ活
性測定用一体型多層分析要素では、多孔性展開層
（以下、展開層と略す）が、自己顕色性基質を第
四級アンモニウム塩型カチオン性界面活性剤、
HLB値10以上のノニオン性界面活性剤および親
水性セルロース誘導体ポリマーと共に含有する構
成からなるものである。上記界面活性剤（特に第
四級アンモニウム塩型カチオン性界面活性剤）
は、自己顕色性基質を展開層中に安定的に分散
し、溶解速度の早い非晶質状態で均一に含有する
作用を有するものである。また、上記界面活性剤
（特にHLB値10以上ノニオン性界面活性剤）は、
展開層の展開性を大幅に向上させる作用を有する
ものである。さらに、親水性セルロース誘導体ポ
リマーは、点着された試料液中の微少量の水分を
有効に保水し、アナライトである酵素の触媒反応
を効率よく促進させる作用を有する。 上記展開層の特徴的構成によつて、上記の各成
分が作用する相乗的に働く結果として、本発明の
γ−グルタミルトランスフエラーゼ活性測定用一
体型多層分析要素は、巾広い定量域を示し、かつ
簡易な操作で高精度の測定結果を保証する。 また本発明のγ−グルタミルトランスフエラー
ゼ活性測定用一体型多層分析要素は、測定時に界
面活性剤がGGT活性を阻害することもない。よ
つて、この点からも本発明のGGT活性測定用分
析要素は、高い分析精度を示す。 ［発明の詳細な記述］ 本発明のγ−グルタミルトランスフエラーゼ活
性測定用一体型多層分析要素の支持体層を構成す
るものとしては、光透過性でかつ水不透過性であ
る支持体が好ましい。光透過性・水不透過性支持
体の例としては、ポリエチレンテレフタレータ、
ビスフエノールＡのポリカルバネート、ポリスチ
レン、セルロースエステル（例、セルロースジア
セテート、セルローストリアセテート、セルロー
スアセテートプロピオネート等）等のポリマーか
らなる厚さ約50μｍから約１mm、好ましくは約
80μｍから約300μｍの範囲のフイルムもしくはシ
ート状の透明支持体を挙げることができる。 支持体の表面には必要により下塗層を設けて、
支持体の上に設けられる吸水層と支持体との接着
を強固なものにすることができる。また、下塗層
の代りに、支持体の表面を物理的あるいは化学的
な活性化処理を施して接着力の向上を図つてもよ
い。 支持体の上には（場合によつては下塗層等の他
の層を介して）吸水層が設けられる。本発明の
GGT活性測定用分析要素に備えられる吸水層は
親水性結合剤よりなる層、すなわち水を吸収して
膨潤する親水性ポリマーを層形成成分として利用
している層であることが好ましい。 吸水層の製造に用いることができる親水性ポリ
マーは、一般には水吸収時の膨潤率が30℃で約
150％から約2000％、好ましくは約250％から約
1500％の範囲の天然または合成親水性ポリマーで
ある。そのような親水性ポリマーの例としては、
特開昭58−171864号公報および特願昭58−217428
号明細書等に開示されているゼラチン（例、酸処
理ゼラチン、脱イオンゼラチン等）、ゼラチン誘
導体（例、フタル化ゼラチン、ヒドロキシアクリ
レートグラフトゼラチン等）、アガロース、プル
ラン、プルラン誘導体、ポリアクリルアミド、ポ
リビニルアルコール、ポリビニルピロリドン等を
あげることができる。 吸水層の乾燥時の厚さは約1μｍから約100μｍ
の範囲であることが好ましく、より好ましくは約
3μｍから約30μｍの範囲である。また吸水層は実
質的に透明であることが好ましい。 吸水層には必要に応じて緩衝剤を含有させるこ
とができる。本発明のGGT活性測定用分析要素
の吸水層に含有させることができる緩衝剤の例と
しては、炭酸塩、ホウ酸塩、燐酸塩およびグツド
（Good）の緩衝剤などの公知の緩衝剤を挙げるこ
とができる。これらの緩衝剤は『蛋白質・酵素の
基礎実験法』（掘尾武一他、南江堂、1981）等の
公知文献を参考にして選択し、使用することがで
きる。 上記吸水層の上に必要に応じて光遮蔽層を設け
ることができる。光遮蔽光は、光遮蔽性、または
光遮蔽性と光反射性とを兼ね備えた微粒子または
微粉末（以下、単に微粒子という）が少量の被膜
形成能を有する親水性ポリマーバインダーに分散
保持されている水透過性または水浸透性の層であ
る。光遮蔽層は吸水層にて発生した検出可能な変
化（色変化、発色等）を光透過性を有する支持体
側から反射側光する際に、後述する展開層に点着
供給された水性液体の色、特に試料が全血である
場合のヘモグロビンの赤色等、を遮蔽するととも
に光反射層または背景層としても機能する。 光遮蔽性と光反射性とを兼ね備えた微粒子の例
としては、二酸化チタン微粒子（ルチル型、アナ
ターゼ型またはブルカイト型の粒子径が約0.1μｍ
から約1.2μｍの微結晶粒子等）、硫酸バリウム微
粒子、アルミニウム微粒子または微小フレーク等
を挙げることができ、光遮蔽性微粒子の例として
は、カーボンブラツク、ガスブラツク、カーボン
ミクロビーズ等を挙げることができ、これらのう
ちでは二酸化チタン微粒子、硫酸バリウム微粒子
が好ましい。特に好ましいのは、アナターゼ型二
酸化チタン微粒子である。 被膜形成能を有する親水性ポリマーバインダー
の例としては、前述の吸水層の製造に用いられる
親水性ポリマーと同様の親水性ポリマーのほか
に、弱親水性の再生セルロース、セルロースアス
テート等を挙げることができ、これらのうちでは
ゼラチン、ゼラチン誘導体、ポリアクリルアミド
等が好ましい。なお、ゼラチン、ゼラチン誘導体
は公知の硬化剤（架橋剤）を混合して用いること
ができる。 光遮蔽層は、光遮蔽層微粒子と親水性ポリマー
との水性分散液を公知の方法により吸水層の上に
塗布し乾燥することにより設けることができる。
また光遮蔽層を設ける代りに、後述する展開層中
に光遮蔽層微粒子を含有させてもよい。 なお、吸水層の上に、場合によつては光遮蔽層
等の層を介して、後述する展開層を接着し積層す
るために接着層を設けてもよい。 接着層は水で湿潤しているとき、または水を含
んで膨潤しているときに展開層を接着することが
でき、これにより各層を一体化できるような親水
性ポリマーからなることが好ましい。接着層の製
造に用いることができる親水性ポリマーの例とし
ては、吸水層の製造に用いられる親水性ポリマー
と同様な親水性ポリマーがあげられる。これらの
うちではゼラチン、ゼラチン誘導体、ポリアクリ
ルアミド等が好ましい。接着層の乾燥膜厚は一般
に約0.5μｍから約20μｍ、好ましくは約1μｍから
約10μｍの範囲である。 なお、接着層は吸水層上以外にも、他の層間の
接着力を向上させるため所望の層上に設けてもよ
い。接着層は親水性ポリマーと、必要によつて加
えられる界面活性剤等を含む水溶液を公知の方法
で、支持体や吸水層等の上に塗布する方法などに
より設けることができる。 これらの層の上には、多孔性展開層が設けられ
る。 本発明の多孔性展開層は液体試料計量作用を有
していることが好ましい。液体試料計量作用を有
する展開層とは、その上側の表面（支持体から遠
い側の表面）に点着供給された水性液体試料を、
その中に含有している成分を実質的に偏在させる
ことなしに、横（水平）方向に広げ、単位面積当
りほぼ一定容量の割合で吸水層に供給する作用を
有する層である。また本発明の多孔性展開層は、
アナライトであるγ−グルタミルトランスフエラ
ーゼが容易に通過・拡散しうる空間を有する多孔
性展開層であることが好ましい。 以上の点から本発明のGGT活性測定用一体型
多層分析要素に備えられる多孔性展開層のマトリ
ツクスを構成する材料としては、濾紙、不織布、
織物生地、編物生地、ガラス繊維、濾紙、ブラツ
シユポリマーより形成されるメンブランフイルタ
ー、あるいはポリマーミクロビーズ等からなる三
次元格子状構造物等を用いることが好ましい。 展開層のマトリツクスは、これらの材料から分
析条件等に応じて選択するが、試料として全血の
ような分析を阻害する非溶解性物質（全血の場合
は血球）を含む試料を用いる場合には、阻害物質
を除去する作用を有する繊維生地または編物生地
を用いることが好ましい。 上記展開層に用いることができる織物生地（織
布）としては特開昭55−164356号および特開昭57
−66359号の各公報に開示の広範囲の種類の織物
生地があげられる。織物生地のうちでは、たて
（経）糸とよこ（緯）糸とで織つた平織物が好ま
しく、平織物のうちでは細布生地、金巾生地、ブ
ロード生地、ポプリン生地等が好ましい。織物生
地を構成する糸としては後述する編物生地を構成
する糸と同様の素材からなる糸があげられ、糸の
形態としてはフイラメント糸、紡績糸（加捻糸）
のいずれをも用いることができ、これらのうちで
は紡績糸が好ましい。織物生地の糸の太さは綿紡
績糸番手で表して約20Sから約150S、好ましくは
約40Sから約120S相当の範囲または絹糸デニール
で表して約35Dから約300D、好ましくは約45Dか
ら約130D相当の範囲、織物生地の厚さは約100μ
ｍから約500μｍ、好ましくは約120μｍから約
350μｍの範囲、織物生地を有する空隙率は約40
％から約90％、好ましくは約50％から約85％の範
囲である。 また、上記展開層に用いることができる編物生
地（編布、すなわち編んだ布状物）としては、広
範囲の種類の編物生地があげられ、それらのうち
ではたて（経）メリヤスとよこ（緯）メリヤスが
好ましい。たてメリヤスとしては、一重アトラス
編生地、トリコツト編生地、ダブルトリコツト編
生地、ミラニーズ編生地、ラツシエル編生地等を
用いることができ、よこメリヤスとしては、平編
生地、パール編生地、ゴム編生地、両面編生地等
を用いることができる。編物生地を編成する糸と
しては、綿、絹、羊毛等の天然繊維の糸、ビスコ
ースレーヨン、キユプラ等の再生セルロース、セ
ルロースジアセレート、セルローストリアセテー
ト等の半合成有機ポリマー、ポリアミド（各種の
ナイロン種）、アセタール化ポリビニルアルコー
ル（ビニロン等）、ポリアクリロニトリル、ポリ
エチレンテレフタレート、ポリエチレン、ポリプ
ロピレン、ポリウレタン等の合成有機ポリマーの
細繊維からなる糸または単繊維からなる糸、天然
繊維と再生セルロース、半合成または合成有機ポ
リマー繊維との混合繊維からなる糸があげられ
る。糸の形態としては、フイラメント糸、紡績糸
（加捻糸）のいずれをも用いることができ、これ
らのうちでは紡績糸が好ましい。編物生地の糸の
太さは、綿紡績糸番手で表わして約40Sから約
150S、好ましくは約60Sから約120S相当の範囲ま
たは絹糸デニールで表わして約35Dから約130D、
好ましくは約45Dから約90D相当の範囲である。
編物生地の編成工程時のゲージ数としては約20か
ら約50の範囲、編物生地の厚さは約100μｍから
約600μｍ、好ましくは約150μｍから約400μｍの
範囲、編物生地の有する空隙率は約40％から約90
％、好ましくは約50％から約85％の範囲である。
たてメリヤスのうちでは縦方向の伸縮が少なく、
また編物展開層のラミネーシヨン工程における操
作のしやすさ、裁断時の編目ほどけのなさ等の観
点でトリコツト編生地、ラツセル編生地、ミラニ
ーズ編生地、ダブルトリコツト編生地が好まし
い。 多孔性展開層に用いられる織物または編物生地
は水洗等の脱脂処理による少なくとも糸製造時、
織物製造時あるいは編物編成時に供給または付着
した油脂類を実質的に除去した織物または編物生
地であるが、さらにその織物または編物生地は特
開昭57−66359号公報に開示の物理的活性化処理
（好ましくはグロー放電処理またはコロナ放電処
理等）を生地の少なくとも片面に施すか、あるい
は特開昭55−164356号、特開昭57−66359号公報
等に開示の親水性ポリマー含浸処理等の親水化処
理、またはこれらの処理工程を逐次実施すること
により織物または編物を親水化し、下側（支持体
に近い側）の層との接着力を強化することができ
る。 織物または編物生地からなる展開層を吸水層ま
たは接着層に接着、積層するには、特開昭55−
164356号および特開昭55−66359号各公報等に開
示の方法に従つて作成することができる。すなわ
ち、吸水層または接着層の塗布後未乾燥のうち
に、または乾燥後の層に水（または界面活性剤を
少量含む水）を実質的に均一に供給して層を膨潤
させ、ついで織物または編物生地を湿潤または膨
潤している層の上に実質的に均一に軽く圧力をか
けながら接着、積層し一体化する。 また展開層がブランシユポリマーまたはメンブ
ランフイルターからなる場合には特公昭53−
21677号公報等、ポリマーミクロビーズからなる
三次元格子状構造物層である場合には特開昭55−
90859号公報等、濾紙または不織布からなる場合
には特開昭57−148250号公報等にそれぞれ記載の
方法に従つて設けることができる。 吸水層または接着層の親水性ポリマーバインダ
ーがゼラチンまたはゼラチン誘導体の場合には、
層の塗布後ゼラチン（誘導体）が未乾燥のゲル状
態の間に上記多孔性展開層を構成する材料（織物
または編物生地等）を接着、積層し一体化する方
法を採用することができる。 本発明のγ−グルタミルトランスフエラーゼ活
性測定用一体型多層分析要素では、自己顕色性基
質は展開層に含有させる。本発明において、自己
顕色性基質とはγ−グルタミルトランスフエラー
ゼの基質として、γ−グルタミル基の転移反応を
受け検出可能な発色または変色を示す物質のこと
である。上記自己顕色性基質の具体例としては、
γ−グルタミル−ｐ−ニトロアニリドおよびγ−
グルタミル−3′−カルボキシ−4′−ニトロアニリ
ド等を挙げることができ、特に本発明において
は、γ−グルタミル−ｐ−ニトロアニリドを基質
として用いることが有効である。 本発明のγ−グルタミルトランスフエラーゼ活
性測定用一体型多層分析要素は、展開層が第四級
アンモニウム塩型カチオン性界面活性剤を含有す
る。上記第四級アンモニウム塩型カチオン性界面
活性剤の例としては、下記一般式によつて表され
る界面活性剤を挙げることができる。 ［上記一般式において、 ｎは、１または２であり； R¹は、炭素原子数12以上のアルキル基であ
り； R⁵は、単結合または−CONHR⁶−であり（R⁶
は、メチレン基またはエチレン基である）； R²、R³およびR⁴は、メチル基、エチル基また
はベンジル基であるか（R²、R³およびR⁴は、同
一であつても異なつていてもよい）、 R²、R³とR⁴は、隣接する窒素原子と共にピペ
リジウム基を形成し；そして、 Ｘは、ハロゲンイオン、硫酸イオンまたはメタ
ンスルホン酸イオンである］ 上記一般式によつて表される界面活性剤の具体
例としては、上記一般式におけるR⁵が単結合で
あるものとして、ラウリルトリメチルアンモニウ
ム・クロライド、ステアリルトリメチルアンモニ
ウム・ブロマイド、セチルトリメチルアンモニウ
ム・クロライド、ラウリルトリメチルアンモニウ
ム・スルフエート、セチルジメチルベンジルアン
モニウム・ブロマイド、ラウリルジメチルベンジ
ルアンモニウム・クロライド、ミリスチルジメチ
ルベンジルアンモニウム・クロライド、セチルピ
リジウム・ブロマイドおよびラルイルピリジニウ
ム・クロライド等を挙げることができる。 また上記一般式によつて表される界面活性剤の
他の具体例としては、上記一般式におけるR⁵が
−CONHR⁶−であるものとして、ステアラミド
メチルピリジニウム・クロライド、およびサパミ
ンMS、サパミンBCH、キヤタナツクSN等の商
品名で市販されているものを挙げることができ
る。 上記のカチオン性界面活性剤は、本発明の
GGT活性測定用分析要素の展開層に約0.2ｇ／m²
から約５ｇ／m²の範囲で含有させることが好まし
い。上記含有量のうち特に好ましいのは、約0.5
ｇ／m²から３ｇ／m²の範囲である。 本発明のγ−グルタミルトランスフエラーゼ活
性測定用一体型多層分析要素は、展開層がさらに
HLB値10以上のノニオン性界面活性剤も含有す
る。本発明に用いることができるノニオン界面活
性剤はHLB（Hydrophile−Lipophile−
Balance；ジヤーナル・オブ・ソサエテイ・オ
ブ・コスメテイク・ケミスツ［J.Soc.Cosmet.
Chem.］１、311（1949）および「科学」23546
（1953）に記載の定義に従う）値が10以上のノニ
オン性界面活性剤である。HFB値10以上のノニ
オン性界面活性剤としては、多価アルコールエス
テルエチレンオキシド付加物（縮合物）、ポリエ
チレングリコールモノエステル、ポリエチレング
リコールジエステル、高級アルコールエチレンオ
キシド付加物物（縮合物）、アルキルフエノール
エチレンオキシド付加物（縮合物）および高級脂
肪酸アルカノールアミド等の中から、HLB値が
10以上のものを選択して用いることができる。 HLB値10以上のノニオン性界面活性剤は、二
種類以上を組合せて用いることができる。また二
種類以上の組合せ（HLB値10未満のノニオン性
界面活性剤を含んでもよい）によりHLB値を適
宜に調整して用いることもできる。 HLB値10以上のノニオン性界面活性剤の具体
例とそのHLB値を以下に挙げる。ただし、本発
明に用いることができるノニオン性界面活性剤は
これらの化合物に限定されるものではない。界面活性剤の化学構造 HLB値 POE（20）ソルビタンモノオレエート 15.0 POE(10)ソルビタンモノオレエート 13.5 POE(4)ソルビタントリステアレート 10.5 POE(4)トリオレエート 11.0 POE（30）ステアレート 16.0 POE（40）ステアレート 16.9 POE（100）ステアレート 18.8 PEG（400）モノステアレート 11.6 PEG（400）モノラウレート 13.1 PEG（1000）ジラウレート 14.1 PEG（1540）ジステアレート 14.8 ラルリルアルコールEO6モル縮合物 11.8 ラルリルアルコールEO10モル縮合物 14.1 ラルリルアルコールEO30モル縮合物 17.4 ラルリルアルコールEO20モル縮合物 15.3 セチルアルコールEO20モル縮合物 15.7 POE（９〜10）オクチルフエニルエーテル 13.5 POE（15）オクチルフエニルエーテル 15.1 POE（30）オクチルフエニルエーテル 17.4 POE（40）オクチルフエニルエーテル 18.7 POE(10)ノニルフエニルエーテル 11.7 POE（12）ノニルフエニルエーテル 14.1 POE（20）ノニルフエニルエーテル 16.0 POE（50）ノニルフエニルエーテル 19.5 トリエタノールアミンオレエート 12.0 （註）POE：ポリエチレンオキシド PEG：ポリエチレングリコール EO：エチレンオキシド （ ）内の数字はエチレンオキシド単位の縮合
数である。 上記のHLB値10以上のノニオン性界面活性剤
は、本発明のGGT活性測定用分析要素の展開層
に約0.1ｇ／m²から約３ｇ／m²の範囲で含有させ
ることが好ましい。上記含有量のうち特に好まし
いのは、約0.2ｇ／m²から約２ｇ／m²の範囲であ
る。 さらに本発明のγ−グルタミルトランスフエラ
ーゼ活性測定用一体型多層分析要素は、展開層が
親水性セルロース誘導体ポリマーも含有する。 上記親水性セルロース誘導体ポリマーとして
は、炭素原子数１から３の低級アルキル基、また
は炭素原子数１から４のヒドロキシル基置換低級
アルキル基により水酸基の一部または全部がエー
テル化されたセルロースエーテル類が特に好まし
い。セルロースエーテルの例としては、メチルセ
ルロース、エチルセルロース、ヒドロキシエチル
セルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロー
スおよびヒドロキシブチルメチルセルロース等を
挙げることができる。 上記親水性セルロース誘導体ポリマーを、本発
明のGGT活性測定用分析要素の展開層に含有さ
せる量としては、約0.5ｇ／m²から約15ｇ／m²の
範囲で含有させることが好ましい。上記含有量の
うち特に好ましいのは、約0.7ｇ／m²から約10
ｇ／m²の範囲である。 本発明のGGT活性測定用分析要素の展開層に
は、上記自己顕色性基質、第四級アンモニウム塩
型カチオン性界面活性剤、HLB値10以上のノニ
オン性界面活性剤および親水性セルロース誘導体
ポリマー以外にも、光遮蔽性微粒子や酵素賦活
剤、緩衝剤等の試薬を必要に応じて含有させるこ
とができる。 上記の試薬のうち酵素賦活剤としては、γ−グ
ルタミルトランスフエラーゼの作用によつて基質
より転移されるγ−グルタミル基の受容体となる
ものを挙げることができる。γ−グルタミル基の
受容体としては、各種のアミノ酸またはオリゴペ
プチドを用いることができる。ただし試料液中に
これらの成分が豊富に含まれている場合等におい
ては、特に展開層中に含有させる必要はない。 上記γ−グルタミル基の受容体については、ク
リニカル・ケミストリー（Clincal Chemistry）
Vol24、No.６ 1978年905〜915、エル・エム・シ
ヨウ（L.M.Shaw）等の文献に記載されている。
好ましいγ−グルタミル基の受容体の具体例とし
ては、Ｄ−メチオニン、Ｌ−メチオニン、Ｌ−グ
ルタミン、Ｌ−ロイシン、Ｌ−ラアニン、Ｌ−リ
シン、Ｌ−システイン、グリシルグリシンおよび
グリシルグリシルグリシン等を挙げることができ
る。これらのうちでは特にグリシルグリシンが好
ましい。 展開層に自己の自己顕色性基質、第四級アンモ
ニウム塩型カチオン性界面活性剤、HLB値10以
上のノニオン性界面活性剤、親水性セルロース誘
導体ポリマーおよび光遮蔽性微粒子や酵素賦活
剤、緩衝剤等の試薬を含有させるに際しては、下
記のような様々な方法を用いることができる。 たとえば、上記試薬等を含有する塗布液を展開
層の上から塗布または噴霧し乾燥する方法を用い
ることができる。 また展開層がラミネートにより積層する展開層
材料、例えば、織物、編物、濾紙、不織布および
ガラス繊維濾紙等からなる場合には、上記試薬等
を含有する溶液に展開層を浸漬したのち乾燥また
は半乾燥体で多の層に積層し一体化する方法を用
いることができる。 塗布により形成される展開層、例えばブラツシ
ユポリマー層やミクロビーズ三次元格子状粒子構
造体等からなる展開層の場合には、展開層と試薬
等の塗布液を混合して塗布してもよい。 なお、これらの展開層に試薬等を含有させる方
法を用いる場合には、いくつかの試薬毎に異なる
方法を用いることができる。また、いくつかの試
薬毎に数回に分けて行なうこともできる。ただし
上記自己顕色性基質（特にγ−グルタミル−ｐ−
ニトロアニリドである場合）に対して上記第四級
アンモニウム塩型カチオン性界面活性剤を充分に
作用させるため、両者を同一の溶液中に調製する
ことが好ましい。 本発明のGGT活性測定用一体型多層分析要素
は以上のように、支持体、吸水層および展開層を
積層してなるものであり、これらの支持体、吸水
層および展開層はこの順で積層されていることが
好ましい。なお本発明のGGT活性測定用一体型
多層分析要素は、前述のように上記の必須の層以
外にも他の機能層を含んでいてもよいことは勿論
である。 本発明の一体型多層分析要素は、一辺約15mmか
ら約30mmの正方形またはほぼ同サイズの円形等の
小片に裁断し特開昭57−63452号、特開昭54−
156079号、実開昭56−142454号、実開昭58−
32350号および特開昭58−501144号各公報等に開
示のスライド枠等に納めて分析スライドとして用
いるのが製造、包装、輸送、保存および測定操作
等の全ての観点が好ましい。 本発明の一体型多層分析要素は、前述の諸公報
に開示の方法に従い約5μから約30μ、好まし
くは約8μから約15μの水性液体試料を多孔性
展開層に点着供給し、必要に応じて約20℃から約
45℃の範囲の実質的に一定の温度でインクベーシ
ヨンの後に、光透過性支持体側から一体型多層分
析要素内の色変化、発色等の検出可能な変化を反
射測光し比色法の原理により液体試料中の測定対
象成分を分析する。 以下に本発明の実施例及び比較例を示す。 実施例 １ 透明ポリエチレンテレフタレート支持体（厚
さ：180μｍ）の表面を親水化処理し、その処理
表面上に下記の組成の塗布液を塗布、乾燥して乾
燥膜厚15μｍの吸水層を形成した。 吸水層形成用塗布液： アルカリ処理脱イオンゼラチン 10ｇ オクチルフエノキシ・ポリエトキシエタノール
0.5ｇ 水 100ml １，２−ビス（ビニルスルホニルアセトアミド）
エタン 0.15ｇ 次に上記吸水層の上に、下記の塗布液を塗布、
乾燥して乾燥膜厚3μｍの接着層を形成した。 接着層形成用塗布液： ゼラチン 12ｇ 水 290ｇ ノニルフエノキシ・ポリグリシドール 1.3ｇ 次に上記接着層の上に、0.4％ノニルフエノキ
シポリグリシゾール水溶液を塗布し、次いでポリ
エチレンテレフタレート紡績糸（36ゲージ、50デ
ニール、厚さ約230μｍ）からなるトリコツト編
物を圧着して接着して展開層とした。 上記展開層に下記の基質塗布液を、塗布量が
120ml／m²になるように塗布したのち後、乾燥し
た。 基質塗布液の調製： 下記均一液に、γ−グルタミル−ｐ−ニトロア
ニリド2.28ｇを2N塩酸１mlおよびエタノール１
mlに溶解したものを添加し、次いで、6N塩酸約
1.3mlを用いてPH8.3に調整し、基質塗布液とし
た。 ［均一液］ トリス（ヒドロキシエチル）アミノメタン3.03ｇ グリシルグリシン 0.651ｇ セチルトリメチルアンモニウムブロマイド
0.500ｇ 水 20.0ｇ ポリアクリルアミド10重量％の水溶液（25℃の粘
度；2500cps） 25ｇ さらに上記展開層に下記の二酸化チタン塗布液
を塗布量が112ml／m²になるように塗布したのち
後、乾燥した。 二酸化チタン塗布液： アナターゼ型二酸化チタン 2.5ｇ 0.5％ヒドロキシエチルセルロース 50ml POE（50）ノニルフエニルエーテル（商品名；
NP50、HLB値；19.5） 2.5ｇ 以上の方法により、本発明に従うGGT活性測
定用一体化他多層分析要素を作成した。 比較例 １ 実施例１の二酸化チタン塗布液に含有させた
NP50の代りに 0.6ｇを用いた以外、実施例１と同様にして比
較用の分析要素を作成した。 実施例 ２ 実施例１の二酸化チタン塗布液に含有させた
0.5％ヒドロキシエチルセルロース50mlの代りに
0.5％ヒドロキシメチルセルロース50mlを用い、
そして同塗布液に含有させたPOE（50）ノニルフ
エニルエーテルの代りに下記第１表に示す様々な
ノニオン性界面活性剤を用いた以外は実施例１と
同様にして本発明に従う様々なGGT活性測定用
一体型多層分析要素を作成した。 【表】 以上の方法により得られた実施例１、比較例１
および実施例２の分析要素を一辺が15mmの正方形
に裁断し、プラスチツクマウント（特開昭57−
63452号公報に記載）に封入してGGT分析用スラ
イドを調製した。 上記各スライドに蛋白質濃度４および12％にな
るように調整した各々GGT活性580U／Ｌの検体
を用いて、各々のOD値の傾きの比を求めた。測
定結果を第２表に示す。 ただし第２表におけるΔODは、２分後および
５分後における測定値の差である。 【表】

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ γ−グルタミルトランスフエラーゼに感応し
   て自己顕色性を示す基質を含有する多孔性展開
   層、吸水層および支持体層を積層してなる一体型
   多層分析要素において、上記多孔性展開層が、第
   四級アンモニウム塩型カチオン性界面活性剤、
   HLB値10以上のノニオン性界面活性剤および親
   水性セルロース誘導体ポリマーを含有することを
   特徴とするγ−グルタミルトランスフエラーゼ活
   性測定用一体型多層分析要素。 ２ 上記自己顕色性基質がγ−グルタミル−ｐ−
   ニトロアニリドである特許請求の範囲第１項記載
   のγ−グルタミルトランスフエラーゼ活性測定用
   一体型多層分析要素。 ３ 上記多孔性展開層が第四級アンモニウム塩型
   カチオン性界面活性剤を0.2ｇ／m²から５ｇ／m²
   の範囲で含有する特許請求の範囲第１項記載のγ
   −グルタミルトランスフエラーゼ活性測定用一体
   型多層分析要素。 ４ 上記多孔性展開層がHLB値10以上のノニオ
   ン性界面活性剤を0.1ｇ／m²から３ｇ／m²の範囲
   で含有する特許請求の範囲第１項記載のγ−グル
   タミルトランスフエラーゼ活性測定用一体型多層
   分析要素。 ５ 上記多孔性展開層が親水性セルロース誘導体
   ポリマーを0.5ｇ／m²から15ｇ／m²の範囲で含有
   する特許請求の範囲第１項記載のγ−グルタミル
   トランスフエラーゼ活性測定用一体型多層分析要
   素。