JPH0484892A - エイコサペンタエン酸の製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （イ）産業上の利用分野 本発明は、微生物からエイコサペンタエン酸（以下、Ｅ
ＰＡという）を製造する方法に関するものである。該Ｅ
ＰＡは食品、化粧品、医薬品、農業、水産、化成品など
の分野において有用である。

（ロ）従来の技術 ＥＰＡに代表される高度不飽和脂肪酸は、高等動物に不
可欠な脂肪酸であり、生体内で重要な役割を担っている
。また、高度不飽和脂肪酸の有する天理作用も知られて
おり、特にＥＰＡの血清脂質改善作用や抗血栓作用等の
薬理作用により、血栓治療薬等の医薬品としてＥＰＡが
検討されており、ＥＰＡＯ高純度精製品の需要が拡大す
ることが予想される。

従来の高純度ＥＰＡの製造方法としては、魚油またはあ
る種の微生物より抽出、精製する方法が用いられている
。ＥＰＡの精製には、低温分別結晶法、尿素付加法、減
圧蒸留法、クロマト法等があるが、角油から得られるＥ
ＰＡは、魚油中にＥＰＡ、アラキドン酸、ドコサヘキサ
エン酸笠が含まれており、精製過程において煩雑な操作
、高価な装置を必要とする。

一方本発明者らは、先に微生物からＥＰＡを生産させる
方法を提案した（特開昭６３−２１６４８８、６３−２
１６４８９．６４−２５８７．特開平１−１９１６９４
．２−２３８７７）が、大量生産を行う場合にはコスト
的に問題があった。

（ハ）発明が解決しようとする課題 本発明の目的は、ＥＰＡを工業的に効率良く、短時間で
、容易に得ることのできる製造方法を提供することにあ
る。

（＝）課題を解決するための手段 本発明者らは、上記の目的に合った製造法を見出すため
に鋭意研究の結果、培地中にピルビン酸及び／又は乳酸
を添加して培養した微生物について、次のような知見を
得た。

即ち、■微生物が代謝産物として出し、かつ該微生物の
増殖を抑制するアンモニアの産生を抑え、■菌の増殖が
高まり、■ＥＰＡ含有脂質の生産量が増大した。

本発明は、以上の知見に基づいて完成されたもので、培
地中にピルビン酸及び／又は乳酸を添加して培養した微
生物からＥＰＡを抽出するＥＰＡの製造法である。

本発明で用いるピルビン酸及び／又は乳酸は高純度のも
のでも良く、また、それらを含有する組成物を使用して
も良い、好ましくは１０％以上含有する組成物が良く、
さらに好ましくは５０％以上含有する組成物が例として
あげられる。このような組成物をふつう培地中に０．１
〜５％、より好ましくは０．２〜１．０％添加する。

本発明で使用できる微生物は、特に属、種あるいは株な
どを限定するものではないが、通常は、シュードモナス
（Ｐｓｅｕｄｏ層ｏｎａｓ）属、アルテロモナス（Ａ　
ｌ　ｔｅｒｏｓｏｎａｓ）　Ｉｆ又はシーワネラ（Ｓｈ
ｅｗａｎｅｌｌａ）属などに分類される海洋微生物を用
いる。これらの微生物については本発明者らがＥＰＡ生
産用微生物として先に提案したヨーロッパ特許出願番号
８７３１１３７２．４号にその性質等について詳細に記
載されている。上記のシュードモナスに属する微生物の
例として、シュードモナス・ピユートリファシェンス（
Ｐｅｕｄｏｍａｎａｓ　　ｕｔｒｅｆａｃｉｅｎｓ）Ｓ
ＣＲＣ−２１８１（ＦＥＲＭＢＰ−２９１７）、５ＣＲ
Ｃ−２２０１（ＦＥＲ阿ＢＰ−２９１６）、５ＣＲＣ−
２２７１（ＦＥＲ阿ＢＰ−２９１５）、ＳＣＲＣ−２３
４１（ＦＥＲＭＢＰ−２９１８）、５ＣＲＣ−２４５１
（ＦＥＲＭＢＰ−２９１９）ＳＣＲＣ−２６４２（ＦＥ
Ｒ１’１ＢＰ−２９２０）、５ＣＲＣ−２７９２（ＦＥ
ＲＭＢＰ−２９２１）、ＳＣＩ？Ｃ−２８７８（ＦＥＲ
ＭＢＰ−１６２３）、ＳＣＲＣ−３０１１（ＦＥＲＭＢ
Ｐ−２９１３＞、５ＣＲＣ−３０２２（ＦＥＩＩＭＢＰ
−２９１４）を挙げることができる。

アルテロモナスに属する微生物の例として、アルテロモ
ナス・ピユートリファシェンス（Ａｌｔｅｒｏｍｏｎａ
ｓ　　ｕｔｒｅｆａｃｉｅｎｓ）ＳＣＲＣ−２８７１（
ＦＥＲＭＢＰ１６２４）及びアルテロモナス・ピユート
リファシェンス・サブスピーシズ・サガミファシエンス
（Ａｌｔｅｒｏｍｏｎａｓ　　ｕｔｒｅｆａｃｌｅｎｓ
　５ｕｂｓ　ｅｃｉｅｓｓａ　ａｍｉｆａｃｉｅｎｓ）
ＳＣＲＣ−１１６２（ＦＥＲＭＢＰ−１６２６）等を挙
げることができる。

シーワネラに属する微生物の例として、シーワネラ・ビ
ニ−トリファシェンス（Ｓｈｅｉ＋ａｎｅｌ　１ａｕｔ
ｒｅｆａｃｉｅｎｓ）　５ＣＲＣ２８７４（ＦＥＲＭＢ
Ｐ−１６２５）を挙げることができる。

本発明の実施に当っては、先に提案した方法（特開昭６
３−２１６４８８．６３−２１６４８９．６４−２５８
７．特開平１−１９１６９４゜２−２３８７７＞に従え
ば良い、この際の培地組成としては表１に示す培地を調
製することができる。

表　　１ ペプトン　　　　　　　　　　　　　１．０％酵母エキ
ス　　　　　　　　　　　　０．５％ピルビン酸及び／
又は乳酸　　　　　０．５％他の代表的な炭素源ではこ
のような効果は見られなかった。

表２ 実施例１ 海洋微生物（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　　ｕｔｒｅｆａ
ｃｉｅｎｓ　５ＣＲＣ２８７８（ＦＥ闘ＢＰ−１６２３
）　）を酵母エキス０．５％、ペプトン１％、に表２中
に示す各種炭素源及びピルビン酸とＤＬ−乳酸を０．５
％添加し、ＰＨ７に調整した海水培地にて２５℃好気培
養を行った。

２４時間培養後菌体を遠心分離し、凍結乾燥して菌体重
量を比較した。また培養液中におけるアンモニア蓄積量
を不スラー法を用いて測定した。さらに菌体中のＥＰＡ
含量をガスイロマトグラフィー法にて測定した。

表２に明らかなようにピルビン酸又はＤＬ−乳酸を添加
する事により、アンモニアの産生が抑制され菌体収量及
びＥＰＡ産生量が増大した。一方クエン酸 グルコース ガラクトース 乳糖 ソルビトール エリスリトール リンゴ酸 こはく酸 ピルビン酸 ＤＬ−乳酸 実施例２ 海洋微生物（ＡＩｔｅｒｏｍｏｎａｓ　　ｕｔｒｅｆａ
ｃｉｅｎｓ　５ＣＲＣ２Ｂ７１　（ＦＥＲ，’１ＢＰ−
１６２４））を上記実施例Ｊと同様の培地中でＤ−乳酸
又はＬ−乳酸を添加して培養して菌体を得、遠心集菌、
洗浄、乾燥して海洋微性物粉末を得た。

乾燥歯体はその重量とＥＰＡ蓄積量を測定し、培養液中
のアンモニア濃度を測定した。その結果を表３に示す。

（幻発明の効果 本発明の効果は次のようである。

ピルビン酸及び／又は乳酸を添加した培地中で培養した
微生物により、ＥＰＡを効率良く、短時間で製造するこ
とが可能となった。

Claims (5)

【特許請求の範囲】
1. （１）エイコサペンタエン酸産生能を有する海洋微生物
   を培養し、エイコサペンタエン酸を産生するにあたり、
   培地中にピルビン酸及び／又は乳酸を添加して培養した
   微生物を用いることを特徴とするエイコサペンタエン酸
   の製造法
2. （２）海洋微生物がシュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏ
   ｎａｓ）属、アルテロモナス（Ａｌｔｅｒｏｍｏｎａｓ
   ）属又はシーワネラ（Ｓｈｅｗａｎｅｌｌａ）属である
   特許請求の範囲第（１）項記載の製造法。
3. （３）前記シュードモナス属微生物がシュードモナス・
   ピュートリフアシエンス（￥Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ￥
   ￥ｐｕｔｒｅｆａｃｉｅｎｓ￥）ＳＣＲＣ−２１８１、
   ＳＣＲＣ−２２０１、ＳＣＲＣ−２２７１、ＳＣＲＣ−
   ２３４１、ＳＣＲＣ−２４５１、ＳＣＲＣ−２６４２、
   ＳＣＲＣ−２７９２、ＳＣＲＣ−２８７８、ＳＣＲＣ−
   ３０１１又はＳＣＲＣ−３０２２である特許請求の範囲
   第（２）項に記載の製造法。
4. （４）前記アルテロモナス属微生物がアルテロモナス・
   ピュートリファシエンス（￥Ａｌｔｅｒｏｍｏｎａｓ￥
   ￥ｐｕｔｒｅｆａｃｉｅｎｓ￥）ＳＣＲＣ−２８７１又
   はアルテロモナス・ピュートリファシエンス・サブスピ
   ーシズ・サガミファシエンス（￥Ａｌｔｅｒｏｍｏｎａ
   ｓ　ｐｕｔｒｅｆａｃｉｅｎｓ￥￥ｓｕｂｓｐｅｃｉｅ
   ｓ　ｓａｇａｍｉｆａｃｉｅｎｓ￥）ＳＣＲＣ−１１６
   ２である特許請求の範囲第（２）項に記載の製造法。
5. （５）前記シーワネラ属微生物がシーワネラ・ピュート
   リファシエンス（￥Ｓｈｅｗａｎｅｌｌａ　ｐｕｔｒｅ
   ｆａｃｉｅｎｓ￥）ＳＣＲＣ−２８７４である特許請求
   の範囲第（２）項に記載の製造法。