JPH05281189A

JPH05281189A - スラブ型電気泳動装置

Info

Publication number: JPH05281189A
Application number: JP4340967A
Authority: JP
Inventors: Tomoaki Fukushige; 朋昭福重; Hiroko Toda; 博子戸田; Hirofumi Akano; 裕文赤野; Emiko Ito; 恵美子伊藤; Tomohiko Fukuda; 知彦福田; Masahiro Fujimori; 正宏藤森; Kichiya Kawamura; 吉也川村
Original assignee: Nakano Vinegar Co Ltd
Current assignee: Nakano Vinegar Co Ltd
Priority date: 1992-02-03
Filing date: 1992-11-30
Publication date: 1993-10-29

Abstract

(57)【要約】【目的】予め泳動条件を設定しなくとも、自動的に試
料の泳動状態を検知して最適な条件で泳動を自動的に終
了させ、かつ、緩衝液の温度測定を継続して測定する。【構成】スラブ型電気泳動装置に、泳動マーカの終点
を光学的に検出する終点識別手段と、この終点識別手段
からの情報に基きゲル泳動手段への電流供給を停止する
手段と、を配設した。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】この発明は、縦型のスラブ型電気
泳動装置に係り、特に、試料の電気泳動における正確な
分画を自動的、かつ、高精度に行うことができるスラブ
型電気泳動装置に関する。

【０００２】

【従来技術とその課題】周知のように、電気泳動法は、
微量の試料でも優れた分離能でタンパク分画を行うこと
ができ、この中でも、スラブ型電気泳動法（ゲルを垂直
または縦にして泳動する電気泳動法をいう。以下同
じ。）は、ディスク型電気泳動法に比べ、操作性・解像
力等において優れ、蛋白質や酵素、ペプタイトの大量分
取に特に優れているとともに、一部核酸や熱処理の難し
い生理活性物質の分離に適していることから生化学分野
の各種研究においても汎用されている。

【０００３】ところで、このような電気泳動法におい
て、泳動時間は、泳動する試料の種類・量或は泳動条件
によって大きく異なることから、従来では、泳動の様子
を研究者が逐次観察しながら電流の供給・停止を行わな
ければならず、かかる作業が非常に煩雑であると共に、
泳動マーカが試料からはみ出てしまった場合には、試料
中のタンパク質の移動量を算出できなくなるため、上記
電流の供給・停止作業が非常に煩雑であり、熟練性を要
する、という問題を有していた。

【０００４】このような問題を解決する手段としては、
泳動用の電源にタイマーを接続し、このタイマーによっ
て電流供給を停止させることが考えられるが、このよう
な解決手段では、既知の試料を同一条件で何回も泳動す
る場合には有効であるが、初めての試料の泳動を行う場
合やゲル組成を変える等、泳動条件を少しでも変更する
場合にはこの方法を用いることができない、という問題
を有していた。

【０００５】また、上記泳動条件中、泳動槽内の緩衝液
の温度条件は、酵素機能を失活させない泳動条件を求め
る上で重要な条件であることから、例えば、従来では、
白金製の金属温度センサーによって緩衝液の温度測定を
行うと、該白金は泳動中に電気分解を起して緩衝液中に
溶け易いことから、正確な温度測定を継続して行なうこ
とができない、という問題も有していた。

【０００６】さらに、上記従来のスラブ型電気泳動法で
は、厚さが１ｃｍを越えるゲルは、その自重によって落
下し易く、これを防止するためには、ゲルの下端部を、
例えば、網体などで支持するなどの手段が考えられる
が、分子量が数十万単位の蛋白質や核酸を電気泳動する
場合、適切なゲル濃度は、例えば、ゲル調整溶液１００
ｍｌに含まれる単体（アクリルアミドとＢｉｓアクリル
アミド）の総グラム数（以下、単にＴ％という。）が、
ポリアクリルアミドの電気泳動では５％以下、アガロー
ス電気泳動では０．４％以下となる。

【０００７】しかし、このようなゲル強度が低い軟弱な
ゲルや、ＳＤＳ（sodium dodecylsulfate ）等の界面活
性剤を含む滑り易いゲルの場合には、泳動終了前にゲル
が滑落下して、形状を一定に保持することができなかっ
たり、或は、泳動ゲルにたるみが生じて泳動バンドがス
マイリングしたり、ゲルが上部から剥離して試料が漏れ
て電気泳動ができなくなるため、目的物質の精製・分取
が困難である、という問題を有していた。

【０００８】本発明者は、かかる従来の諸問題を解決す
るために種々実験を行なった結果、泳動用ゲルとしてポ
リアクリルアミドゲルを用いて酵素等のタンパク質の電
気泳動を行なう場合、泳動の先行マーカとしてブロモフ
ェノールブルー（Bromophenol Blue。以下、単にＢＰＢ
という。) を用いることで、該先行マーカのＢＰＢの移
動を色識別センサーによって容易に検知することができ
ることを発見した。

【０００９】この発明は、かかる知見に基づき創案され
たものであって、その目的とするところは、予め泳動条
件を設定しなくとも、自動的に試料の泳動状態を検知し
て、最適な条件で泳動を自動的に終了させることができ
ると共に、酵素機能を失活させない泳動条件を求める上
で重要な緩衝液の温度測定を継続して測定することがで
きるスラブ型電気泳動装置を提供しようとするものであ
る。

【００１０】また、この発明にあっては、上記軟弱なゲ
ルや滑り易いゲルであっても、形状を一定に保つことが
できると共に、ゲルのたるみを確実に防止することがで
き、以って、目的物質の精製・分取を極めて容易に行な
うことができるゲル保持体を用いたスラブ型電気泳動装
置を提供しようとするものである。

【００１１】

【課題を解決するための構成】上記目的を達成するた
め、この発明にあっては、スラブ型電気泳動装置に、泳
動マーカの終点を光学的に検出する終点識別手段と、こ
の終点識別手段からの情報に基きゲル泳動手段への電流
供給を停止する手段と、を配設して構成したことを特徴
とするものである。

【００１２】また、この発明にあっては、緩衝液の温度
を継続して測定するため、スラブ型電気泳動装置に、ゲ
ル保持体が浸漬される泳動槽内の緩衝液の温度を検知
し、この検知された温度推移を自動的に記録する手段を
配設したことを特徴とするものである。尚、本発明にあ
っては、上記温度を検知する温度センサーは、ゲルの上
部が最も高温となる点及び操作が容易な点等を考慮した
場合、ゲルの上部の緩衝液中に浸漬するように配設する
のが望ましい。

【００１３】さらに、この発明において、前記ゲルは、
垂直に配置されるゲルの自重落下を防止する見地から、
該ゲルを挟持する板体間に形成されてなるゲル収納部内
の下部に突起体を配設し、該ゲル収納部内に上記ゲルを
収納することで、上記目的を達成しようとするものであ
る。このようなゲル突起体を配設した電気泳動装置とし
ては、例えば、本出願人が先に出願した特願平２ー２６
７５９８号に詳細に示されている。

【００１４】またさらに、本発明にあっては、上記軟弱
なゲルや滑り易いゲルであっても、形状を一定に保つこ
とができるように、ゲル収納部内の下部には、複数個の
小孔或は複数条のスリットが開設されたゲル落下防止用
のストッパ板体を着脱自在に装着したことを特徴とする
ものである。

【００１５】

【実施例】以下、添付図面に示す一実施例に基き、この
発明を詳細に説明する。

【００１６】図１に示すように、この実施例に係るスラ
ブ型電気泳動装置２０は、ゲル支持体１このゲル保持体
１を固定支持するストッパ２１と、泳動槽２２と、この
泳動槽２２の上部に形成された上部緩衝液槽２３と、上
記泳動槽２２の下部に形成された下部緩衝液槽２４と、
上記上部緩衝液槽２３内に配設されたアノード電極２５
と、上記下部緩衝液槽２４内に配設されたカソード電極
２６と、上記上部緩衝液槽２３内に収容された上側泳動
用緩衝液２７と、上記下部緩衝液槽２４内に収容された
下側泳動用緩衝液２８と、泳動用電源２９と、上記上部
緩衝液槽２３内に配設された温度センサー３０と、この
温度センサー３０で検知された温度の推移を記録する記
録計３１と、上記下部緩衝液槽２４に配設された光源３
２と、この光源３２から照射された光を受光する色識別
センサー３３と、この色識別センサー３３に受光された
光量変換電圧の変化或は特定波長を認識して電流の供給
を停止するスイッチ（図示せず）と、から構成されてい
る。尚、図中符号３４はシールパッキンを、３５は泳動
用ゲルを、３６は電流の供給・停止や温度制御などを行
なう制御装置を夫々示している。尚、本発明にあって
は、上記光源３２は、通常の照度が確保できる室内では
必ずしも配設する必要はないが、暗室や照度が変化し易
い場所では安定した検知ができないため、配設するのが
望ましい。

【００１７】ゲル保持体１は、図２に示すように、一辺
が約１９ｃｍ程度の寸法を有し、厚さが１．０ｃｍ程度
の透明なアクリル樹脂板２と、該アクリル樹脂板２と同
程度の寸法を有し、その上端部にＵ字状の切り込み４を
有する透明なアクリル樹脂板３と、を備え、アクリル樹
脂板２の両側部には側板６，７を突設して、上記アクリ
ル樹脂板２，３の間に約２．０ｃｍの幅寸法が形成され
るように構成されている。尚、上記アクリル樹脂板２，
３は、図２に示すように、ビスＢをアクリル樹脂板２の
側板６，７に形成されたビス孔６ａ，７ａに螺装し、こ
れを緊締することで一体化される。

【００１８】また、上記ゲル保持体１のアクリル樹脂板
２，３間に形成されたゲル収納部１０の下端部８は、一
側面にパッキンが配設されてなる着脱自在なアクリル製
の底板５で密閉自在に構成されている。

【００１９】この底板５には、図２と図３に示すよう
に、公知のコーナーキャッチクリップ等で構成されてな
る係止具１１が上下に２個づつ並設されており、各係止
具１１は、リング１１ａを上記アクリル樹脂板２，３の
表面側に突設されたフック２ａ，３ａに係止させた後、
該リング１１ａに連結された作動体１１ｂを回動するこ
とで、上記係止状態がロックされるように構成されてい
る。尚、フック２ａ，３ａおよびビスＢは、セラミック
コーティングされるか、或は、下側泳動用緩衝液２８に
浸漬しない位置に配設されている。

【００２０】そして、上記両側部６，７の内側下方に
は、ゲルを係止し保持するための突起であるゲルストッ
パ１５，１６，１７，１８が形成されている。

【００２１】これらの各ゲルストッパ１５乃至１８は、
図１において断面略三角形状に示しているが、この発明
にあってはこれに限定されるものではなく、ゲルの下方
への落下を防止することができる形状、例えば、断面コ
字状・断面半円形状・連続する波状または網目状その他
適宜の形状を適用することができる。また、これらの各
ゲルストッパ１５乃至１８の張出寸法は、底板５の幅寸
法で決定される分離用ゲルの総量に応じて適宜設定変更
するのが望ましい。このとき、ゲルストッパの数も分離
用ゲルの総量に応じて適数とすることもできる。

【００２２】尚、図２で示したように、このゲル保持体
１によれば１．５ｃｍ（最大５ｃｍ以上も可能である
が、２ｃｍ以上の場合には、ゲル保持体を複数枚重ねて
ユニット化して実施することもできる。）のゲルを調製
することが可能であり、また、使用する緩衝液やゲル溶
液の組成は、所謂Ｄａｖｉｓ法に従って調製されるもの
とする。

【００２３】温度センサー３０は、泳動時に緩衝液に浸
漬しても電気分解を受けない材質で形成されたものが用
いられ、例えば、温度検知部をガラス等で被覆して形成
するのが望ましい。

【００２４】この温度センサー３０で検知された温度
は、記録計３１に数値或は折れ線グラフ態様で自動的に
記録される。尚、この記録計３１は、公知の記録計と同
様に構成されているので、その詳細な説明をここでは省
略する。

【００２５】光源３２と色識別センサー３３は、透光性
材質で形成された前記下部緩衝液槽２４の対向する壁面
に取り付けられており、途中で光が遮断されない位置に
対設されている。

【００２６】色識別センサー３３は、泳動用マーカとし
て用いられる材質に対応する公知の受光素子が用いられ
る。

【００２７】上記制御装置３６は、公知のマイクロプロ
セッサ装置（ＭＰＵ）で構成されており、上記色識別セ
ンサー３３で受光された光量変換電圧の変化或は特定波
長を認識し、測定値が予め設定された電圧値或は波長値
となったタイミングを検知して電源２９からの電流供給
を停止するように構成されている。また、この制御装置
３６は、温度センサー３０で測定された温度情報に基い
て図示しない加熱手段を自動的に発熱制御させ、泳動を
予め設定された温度で経時行なうように構成することも
できる。この場合、泳動は、酵素の失活を防止するため
に０℃〜４℃の低温で行う。

【００２８】尚、上記で説明した以外の各構成について
は、特に言及する場合を除き、各構成の詳細および作用
は公知のスラブ型電気泳動装置を構成する対応の構成部
材と同様であるので、その詳細な説明をここでは省略す
る。

【００２９】次に、上記のように構成されてなるゲル保
持体１を用いて、脱水素酵素の分離精製を行う場合に
は、先ず、ゲル製造台に前記ゲル保持体１をセットす
る。このとき、分離用ゲルの保存溶液は所定の割合で混
合される。

【００３０】この混合液をアスピレータで脱気した後、
気泡が発生しないようにゲル収納部１０に注ぎ込む。こ
のとき、ゲルの高さは約１３ｃｍである。水を静かに重
層後（高さ約２ｍｍ）、３０℃の温水中で約６０分浸漬
させてゲル化させる。

【００３１】そして、水を除いた後、濃縮ゲル溶液を分
離用ゲルの上に流し込み、完全にゲル化した後、ゲル保
持体１の下側部分の係止具１１を緩めて底板５を外し、
図１に示すように泳動槽２２にストッパ２１を介して取
り付ける。

【００３２】次に、泳動用緩衝液２７，２８を上下部の
緩衝液槽２３，２４に充填する。酵素試料液に約１０％
グリセリンと濃縮ゲル用緩衝液と数滴の泳動マーカであ
るＢＰＢを適量加え混合する。勿論、この発明では、酸
性領域で電気泳動を行なう場合には、泳動マーカとして
メチルグリーン(Methyl Green)等の公知のマーカを適宜
用いることができる。尚、酸性領域で電気泳動を行なう
場合には、アノード電極２５とカソード電極２６は逆に
なる。

【００３３】このようにして得られた試料液を、ピペッ
ト或は無動脈ポンプを用いて濃縮用ゲル上に静かに重層
する。一度に添加できる試料は３０〜１２０ｍｌで、そ
の試料液槽の高さは約３ｃｍである。試料の量が多いと
きには一定時間泳動させ、試料がある程度濃縮ゲル中に
入ったときに試料液を２０〜５０ｍｌくり返し追加する
こともできる。

【００３４】マーカＢＰＢが分離ゲル内に入るまでには
約５０ｍＡの電流で、それ以後は６０〜１００ｍＡの電
流で数時間泳動する。

【００３５】泳動後、マーカＢＰＢが分離用ゲルの下端
から３０ｍｍの位置まで達すると、光源３２からの波長
が該マーカＢＰＢによって変化し、色識別センサー３３
には変化した光が受光される。このときの電圧変化は、
５００ｍＶ程度であるので、制御装置３６は、この変化
状態を明確に判別してアノード電極２５とカソード電極
２６への電源２９からの電流供給を自動的に停止させる
ことができるので、泳動が最適な状態で自動的に止めら
れる。勿論、この発明にあっては、電源２９からの電流
供給を停止させる手段として、上記光量変換電圧の量的
な変化を識別するのではなく、例えば、マーカＢＰＢに
よって変化する波長バランスによって電流供給を停止す
るように構成しても同様の効果が得られる。尚、電流の
供給が自動的に停止されたときには、例えば、ランプを
点滅させたりブザーを鳴らすように構成することもでき
る。

【００３６】一方、本実施例にかかるスラブ型電気泳動
装置２０にあっては、温度センサー３０で泳動温度を経
時測定し、この温度センサー３０で測定された温度情報
に基いて図示しない加熱手段を自動的に発熱制御させる
こともできる。

【００３７】この後、素早くゲル保持体１を、この実施
例に係るスラブ型電気泳動装置２０から取り外し、次
に、泳動プレートの片方のアクリル樹脂板３を取り外
し、分離用ゲルの一端を約５ｍｍの幅で切り取る。そし
て、このゲル断片を、ガラストレイに入れた０．１Ｍ
トリス塩酸緩衝液（ｐＨ８．０）、０．３ｍＭＮＡＤ
（Nicotinamido Adenin Dinucleotide）、０．８ｍＭ
基質、０．２ｍＭフェナジンメトサルフェート（Phen
azine methosulfate）、０．８ｍＭＭＴＴ（Dimethyt
hiazol tetrazolium）を含む反応液５０ｍｌに浸し、３
７℃乃至５０℃で数分間活性染色を行う。赤紫色の活性
バンドが現われたら、該ゲル片を取り出し、元のゲルの
位置に戻した後、該活性バンドの位置のゲルを水平にバ
ンド幅よりやや広く切り取り、このゲル片を、先程と同
様に活性染色し、現われた直線状の活性バンドの部分の
みを残して他の部分を取り除く。

【００３８】次に、活性染色されたゲルを細かく切り
（約５ｍｍ幅の長方体状）、緩衝液（ｐＨ７．２）とと
もにポッター型テフロンホモジナイザー（容量５０ｍ
ｌ）を用いて氷冷しながら磨砕する。そして、このゲル
磨砕液を遠心分離（20,000xg, １０分間，４℃）して上
清みに酵素抽出液を得る。また、沈殿したゲルに少量の
緩衝液を加えて懸濁後、再度遠心分離を行い、２回目の
酵素抽出液を得る。かかる調製法によれば、脱水素酵素
だけでなく、ＮＡＤ，ＮＡＤＰ等、活性染色が可能な他
の多くの酵素の精製に適用することができる。また、活
性染色しなくても同様にＲｆ値を求めて精製に適用する
ことができる。特に、好熱菌の酵素のように熱安定性の
高い酵素の精製には良好な分離手段となる。

【００３９】図４と図５は、上記実施例に係るスラブ型
電気泳動装置に用いられるゲル保持体１の他例を示して
いる。尚、本実施例に係るゲル保持体１Ａの構成におい
て、図２と図３に示すゲル保持体１と同様の構成部分に
ついては、図２と図３で用いた符合と同一の符号を付し
て、その詳細な説明をここでは省略する。

【００４０】即ち、この実施例に係るゲル保持体１Ａ
は、図２と図３に示すゲル保持体１と同様、厚さが１．
０ｃｍ程度の透明なアクリル樹脂板２と、その上端部に
Ｕ字状の切り込み４を有する透明なアクリル樹脂板３
と、を備え、アクリル樹脂板２の両側部には側板６，７
を突設して、上記アクリル樹脂板２，３の間に約２．０
ｃｍの幅寸法が形成されるように構成されていると共
に、上記アクリル樹脂板２，３間に形成されたゲル収納
部１０の下端部８を、一側面にパッキンが配設されてな
る着脱自在なアクリル製の底板５で密閉できるように構
成されており、更には、上記底板５より上方には、複数
個の小孔１９ａが貫設されたストッパ板体１９がビス１
９ｂを介して着脱自在に取り付けられている。勿論、ス
トッパ板体１９の止着手段としては、上記ビス１９ｂで
行なう場合に限定されるものではなく、上記側板６，７
の対向面部にスリットを所要間隔ごとに開設し、該スリ
ットにストッパ板体１９を差し込んで止着するように構
成してもよい。

【００４１】このストッパ板体１９は、例えば、アクリ
ル，テフロン，ジュラコン等で形成されており、ゲルに
電流を流すために、上記底板５に対して空隙を持たせな
ければならないため、該ストッパ板体１９の面積は、上
記底板５で閉塞される開口面積の１０〜９５％以下とす
るのが望ましい。尚、このストッパ板体１９には、電気
分解するような金属材は用いることができない。

【００４２】また、上記小孔１９ａの開設数は、図示の
６個に限定されるものではなく、適数開設することがで
き、さらに、その形状も円形に限定されるものではな
く、ゲル厚に対応させて、例えば、図６に示すように、
複数条のスリット１９ｃとしてもよく、或は、ストッパ
板体１９の両端部に切り欠きを形成して構成することも
できる。

【００４３】このように構成されたストッパ板体１９
は、ゲル保持体１Ａの下端部から中間高さ位置までの間
にセットするのが望ましい。

【００４４】尚、上記実施例では、ゲル収納部１０の間
隔を２．０ｃｍ以上とした場合を例にとり説明したが、
この発明にあっては、ゲル収納部１０の間隔を５ｍｍ以
上としても、十分な効果を得ることができる。

【００４５】次に、上記構成からなるゲル保持体１及び
１Ａを用いて、以下のような実験を行なった。

【００４６】

【実験例１】試料としては、ナガセ生化学工業株式会社
製のCatalase(Micrococcus Iysodeikticus) を用いた。
試料酵素液に０．１％ＢＰＢを含む６０％グリセロール
液を加え、混合したものを、常法に従いスラブ型ポリア
クリルアミドゲル電気泳動に供した。厚さ２０ｍｍのゲ
ルで、ゲル落下防止処置を施さないもの（以下、Ａ方法
という。）と、図２と図３に示すゲル保持体１で保持し
たもの（以下、Ｂ方法という。）、ゲル保持体１Ａで保
持したもの（以下、Ｃ方法という。）およびゲル保持体
１Ａの替わりに網目サイズ１ｃｍのタコ糸製網を用いて
ゲルを保持したもの（以下、Ｄ方法という。）、の４通
りの実験を平行して行なった。このときのゲル濃度は、
分離ゲルがＴ％＝４．８％、使用した単体の総グラム数
に対するＢｉｓアクリルアミドのグラム数比であるＣ％
が２．７％、濃縮ゲルがＴ％＝３．１％でＣ％＝２０．
０％とした。泳動は、室温摂氏５度の冷蔵室で、電流３
０ｍＡで２時間、電流３５ｍＡで１２時間、電流５０ｍ
Ａで２５時間の合計３９時間行なった。泳動終了後、ゲ
ルの一部を切り出し、０．１Ｍりん酸緩衝液（ｐＨ７．
０）で抽出し、吸引濾過によりゲルを除去した。得られ
た抽出液について、３０％過酸化水素を基質にし、ＯＤ
（波長）２４０ｎｍでの過酸化水素の変化を測定するこ
とにより、酵素活性を測定した。これにより得られた
「泳動時におけるゲル流下状況」を表１に示すと共に、
「ストッパ板体による酵素の回収率」を表２に示す。

【表１】

【表２】以上の結果からも明らかなように、上記Ｃ方法による泳
動の分離パターンは、分析用泳動装置による分離パター
ンと遜色のないものであった。

【００４７】

【実験例２】試料としては、オリエンタル酵母社製のAl
cohol Dehydrogenase を用いた。試料酵素液を調整し、
常法に従いスラブ型Ｎーメチロールアクリルアミドゲル
電気泳動に供した。厚さ２０ｍｍのゲルで、ゲル落下防
止処置を施さないもの（以下、Ｅ方法という。）と、図
２と図３に示すゲル保持体１で保持したもの（以下、Ｆ
方法という。）、ゲル保持体１Ａで保持したもの（以
下、Ｇ方法という。）およびゲル保持体１Ａの替わりに
網目サイズ１ｃｍのナイロン製網を用いてゲルを保持し
たもの（以下、Ｈ方法という。）、の４通りの実験を平
行して行なった。このときのゲル濃度は、分離ゲルがＴ
％＝４．５％、使用した単体の総グラム数に対するＢｉ
ｓアクリルアミドのグラム数比であるＣ％が２．７％、
濃縮ゲルがＴ％＝３．１％でＣ％＝２０．０％とした。
分離ゲルは、表３に示した量のＡ液１３５ｍｌと、Ｃ液
８１ｍｌと、水３０６ｍｌとポリエチレングリコール
０．５４ｇと、重合剤であるＥ液１８．０ｍｌと、N,N,
N',N'-テトラメチルエチレンアミン（以下、ＴＥＭＥＤ
と略す）を０．２７ｍｌ添加して生成した。

【表３】また、濃縮ゲルは、上記表３に示すＢ液５．０ｍｌとＤ
液１０．０ｍｌと水２４．０ｍｌと、ポリエチレングリ
コール０．０４ｇとＥ液１．０ｍｌと前記ＴＥＭＥＤ
０．００７ｍｌを添加して生成した。泳動は、室温摂氏
５度の冷蔵室で、電流５０ｍＡで１．３時間、電流２０
ｍＡで１４．８時間、電流３０ｍＡで４．７時間の合計
２０．８時間行なった。泳動終了後のゲルの一部から、
目的酵素を０．１Ｍりん酸緩衝液（ｐＨ７．０）で抽出
し、ＮＡＤＨの生成速度をＯＤ（波長）３４０ｎｍで測
定することにより、酵素活性を測定した。これにより得
られた「泳動時におけるゲル流下状況」を表４に示すと
共に、「ストッパ板体による酵素の回収率」を表５に示
す。

【表４】

【表５】以上の結果からも明らかなように、上記Ｇ方法による泳
動の分離パターンは、分析用泳動装置による分離パター
ンと遜色のないものであった。

【００４８】それ故、この実施例に係るゲル保持体１Ａ
を用いた場合には、蛋白変性させて電荷を一様化し、蛋
白質の分子量の大きさのみによって易道度を決め、分子
量と易道度との関係から分子量を推定するために、前記
ＳＤＳ等の界面活性剤を含む滑り易いゲルを用いたり、
或は、前記軟弱なゲルを用いた場合であっても、ゲルの
形状を一定に保つことができるので、目的物質の精製・
分取を容易に行なうことができる。

【００４９】また、本実施例によれば、ゲルが脱落する
前の短時間で泳動を終了させるために、電流を上げて泳
動を行なう必要が全くないため、ゲルが発熱して目的物
質が変性する虞れもなく、目的物質の分取に好適であ
る、という効果も得られる。

【００５０】

【発明の効果】以上説明したように、この発明に係るス
ラブ型電気泳動装置によれば、予め測定条件を設定しな
くとも、自動的に試料の泳動状態を検知して、最適な条
件で泳動を自動的に終了させることができると共に、酵
素機能を失活させない泳動条件を求める上で重要な緩衝
液の温度測定を継続して測定することができる他、非常
に簡便な操作で酵素等の生理活性物質が一度に大量に分
取・精製することができる。

【００５１】また、ゲル保持体にストッパ板体を取り付
けることで、軟弱なゲルや滑り易いゲルであっても、ゲ
ルの形状を一定に保持することができるので、目的物質
を変性させることなく確実に精製・分取することができ
る等、幾多の優れた効果を奏する。

【図面の簡単な説明】

【図１】この発明の一実施例に係るスラブ型電気泳動装
置の構成を概略的に示す断面図である。

【図２】ゲル保持体の構成を示す分解斜視図である。

【図３】同ゲル保持体の側面断面図である。

【図４】ゲル保持体の他の構成例を示す分解斜視図であ
る。

【図５】同ゲル保持体の側面断面図である。

【図６】ストッパ板体の他の構成例を示す斜視図であ
る。

【符号の説明】

１，１Ａゲル保持体１９ストッパ板体１９ａ小孔２０スラブ型電気泳動装置３０温度センサー３１記録計３２光源３３色識別センサー３６制御装置

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者福田知彦愛知県半田市青山町７−90 青山コーポＥ号 (72)発明者藤森正宏愛知県半田市堀崎町２−17 コープ野村半田２−304号 (72)発明者川村吉也愛知県江南市古知野町古渡132

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】泳動マーカの終点を光学的に検出する終
点識別手段と、この終点識別手段からの情報に基きゲル
泳動手段への電流供給を停止する手段と、を有して構成
されてなるスラブ型電気泳動装置。
【請求項２】ゲル保持体が浸漬される泳動槽内の緩衝
液の温度を検知し、この検知された温度推移を自動的に
記録するように構成されてなるスラブ型電気泳動装置。
【請求項３】前記ゲルは、該ゲルを挟持する板体間に
形成されたゲル収納部に収納され、該ゲル収納部内の下
部には、上記ゲルの落下を防止する突起体が形成されて
いることを特徴とする請求項１または請求項２のいずれ
かに記載のスラブ型電気泳動装置。
【請求項４】前記ゲルは、該ゲルを挟持する板体間に
形成されたゲル収納部に収納され、該ゲル収納部内の下
部には、複数個の小孔或は複数条のスリットが開設され
たゲル落下防止用ストッパ板体が着脱自在に装着されて
いることを特徴とする請求項１乃至請求項３のいずれか
に記載のスラブ型電気泳動装置。