JPH0529436B2 - - Google Patents
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- JPH0529436B2 JPH0529436B2 JP57041411A JP4141182A JPH0529436B2 JP H0529436 B2 JPH0529436 B2 JP H0529436B2 JP 57041411 A JP57041411 A JP 57041411A JP 4141182 A JP4141182 A JP 4141182A JP H0529436 B2 JPH0529436 B2 JP H0529436B2
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/0004—Oxidoreductases (1.)
- C12N9/0089—Oxidoreductases (1.) acting on superoxide as acceptor (1.15)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P13/00—Preparation of nitrogen-containing organic compounds
- C12P13/04—Alpha- or beta- amino acids
- C12P13/14—Glutamic acid; Glutamine
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- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
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- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/8215—Microorganisms
- Y10S435/822—Microorganisms using bacteria or actinomycetales
- Y10S435/84—Brevibacterium
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
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- Medicinal Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Description
本発明は特定の酵素活性が強化された微生物を
用いてＬ−グルタミン酸を製造する方法に関す
る。 Ｌ−グルタミン酸は現在ではその大部分が発酵
法で生産されている。そして、この発酵生産にお
ける中心的存在であるＬ−グルタミン酸生産菌に
ついて、発酵収率を１％でも高めるべく熾烈な企
業競争が続けられ、各種薬剤耐性あるいは栄養要
求性の付与などの菌改良研究が盛んに行なわれて
いる。本発明者らも菌改良によつて発酵収率を高
めるべく種々検討の結果、たまたまＬ−グルタミ
ン酸生産菌のスーパーオキシドジスムターゼ活性
を高めることによつてこの菌のＬ−グルタミン酸
生産能を大巾に高めうることを見出し、これを基
いて本発明を完成するに至つた。 すなわち本発明は、ブレビバクテリウム属また
はコリネバクテリウム属に属し、強化されたスー
パーオキシドジムスターゼ活性を有し、かつＬ−
グルタミン酸生産能を有する変異株を培養して培
養液中にＬ−グルタミン酸を生成、蓄積せしめ、
これを採取することを特徴とする発酵法によるＬ
−グルタミン酸の製造方法に関するものである。 本発明に使用する微生物は、ブレビバクテリウ
ム属またはコリネバクテリウム属に属しＬ−グル
タミン酸生産能を有するものを変異処理し、得ら
れた変異株のうちからスーパーオキシド増産剤、
スーパーオキシドジムスターゼ誘導抑制剤、スー
パーオキシドラジカル反応促進剤またはスーパー
オキシドを形成する酸素を供給する酸化剤に耐性
を有する株を選別することによつて取得できる。 ブレビバクテリウム属またはコリネバクテリウ
ム属に属しＬ−グルタミン酸生産能を有する微生
物は数多く知られ各種公的機関に寄託されてい
る。このような微生物の例として、ブレビバクテ
リウム・ラクトフエルメンタムATCC 13869、同
フラバムATCC14067、同デイバリカタム
ATCC14020、同サツカロリテイカム
ATCC14066、コリネバクテリウム・グルタミカ
ムATCC13032、同アセトアシドフイラム
ATCC13870などを挙げることができる。本発明
の微生物は、これらの例によらず、Ｌ−グルタミ
ン酸生産能を有するものであればいずれからも誘
導取得しうることはいうまでもない。 変異誘導方法としては、紫外線照射、Ｘ線照
射、変異誘起剤処理等の一般に微生物を変異誘導
する通常の方法を用いればよい。変異誘起剤処理
の例としては、250μｇ／mlのＮ−ニトロ−N′−
メチル−Ｎ−ニトロソグアニジンによつて30℃で
20分間処理する方法がある。 このようにして得られた変異株からスーパーオ
キシド増産剤、スーパーオキシドジムスターゼ誘
導抑制剤、スーパーオキシドラジカル反応促進
剤、またはスーパーオキシドを形成する酸素を供
給する酸化剤に対する耐性株を選別取得する。 これらの薬剤はいずれもスーパーオキシド
（O2 -）と不飽和脂肪酸の反応による過酸化脂質
の形成をしやすくするものである。すなわち、こ
れらの薬剤耐性株は細胞活性が低下しやすい環境
下で増殖する細胞活性の強い菌株である筈であ
り、本発明者らはこのような菌株がＬ−グルタミ
ン酸生産用の菌株として極めてすぐれていること
を見出したのである。 スーパーオキシド増産剤とは生体内においてス
ーパーオキシドを増す作用を有するものであり、
例えばメチルビオロゲン、ニトロフラントイン、
ビタミンK1、モルフイン、ストレプトニグリン、
アドリアマイシン、マイトマイシンＣ、ダウノマ
イシン、ブレオマイシン、β−ラパコン、cis−
プラチナム()ジアミノジクロライドの如きもの
である。 スーパーオキシドジムスターゼ誘導抑制剤とは
スーパーオキシドを過酸化水素に変える酵素であ
るスーパーオキシドジムスターゼの生体内におけ
る誘導生成を抑制するもので、例としてはピユー
ロマイシンを挙げることができる。 スーパーオキシドラジカル反応促進剤とは、ス
ーパーオキシドが不飽和脂肪酸と反応して過酸化
脂質を生成する反応を促進するものであり、例と
してフエニルヒドラジンを挙げることができる。 酸化剤は生体内でスーパーオキシドを形成する
酸素を供給するものであり、例えば過酸化ベンゾ
イル、過硫酸アンモニウムの如きものである。 これらの薬剤に対する耐性株の取得は通常の薬
剤耐性株取得方法に準じて行なえばよく、例えば
前記薬剤のいずれかを親株が生育しないような濃
度で含有する寒天培地に変異株を撤いて培養し、
生育したコロニーを採取すればよい。培地中の薬
剤の濃度は薬剤の種類によつて異なり、例えばダ
ウノマイシンおよびメチルビオロゲンの場合には
3μ／ml程度、ピユーロマイシンの場合には1μ／
ml程度、フエニルヒドラジンの場合には40μ／ml
程度、過酸化ベンゾイルおよび過硫酸アンモニウ
ムの場合には20μ／ml程度が適当である。その他
の薬剤を用いる場合には予め培養試験を行なつて
適切な濃度を定めればよいことはいうまでもな
い。 本発明に使用しうる微生物の例としては、スー
パーオキシド増産剤については、ダウノマイシン
に耐性を有するブレビバクテリウム・ラクトフエ
ルメンタムAJ11796（FERM−BP251）およびコ
リネバクテリウム・グルタミカムAJ11798
（FERM−P6396）、とメチルビオロゲンに耐性を
有するブレビバクテリウム・フラバムAJ11800
（FERM−P6397）およびコリネバクテリウム・
グルタミカムAJ11801（FERM−P6398）を、そ
してスーパーオキシドジムスターゼ誘導抑制剤に
ついては、ピユーロマイシンに耐性を有するブレ
ビバクテリウム・フラバムAJ11803（FERM−
P6399）およびコリネバクテリウム・グルタミカ
ムAJ11804（FERM−P6400）を挙げることがで
きる。また、スーパーオキシドラジカル反応促進
剤については、フエニルヒドラジンに耐性を有す
るブレビバクテリウム・ラクトフエルメンタム
AJ11805（FERM−P6401）およびコリネバクテ
リウム・グルタミカムAJ11807（FERM−P6403）
を、そしてスーパーオキシドを形成する酸素を供
給する酸化剤については、過酸化ベンゾイルに耐
性を有するブレビバクテリウム・フラバム
AJ11808（FERM−P6404）および過硫酸アンモ
ニウムに耐性を有するブレビバクテリウム・ラク
トフエルメンタムAJ11810（FERM−P6405）を
挙げることができる。 このような微生物を用いてＬ−グルタミン酸を
生成蓄積させるにはＬ−グルタミン酸発酵に用い
られる常法を用いて行なえばよい。 すなわち、使用する培地としては、通常の炭素
源、窒素源、無機イオンその他の栄養素の含有す
る通常の培地を用いる。炭素源としては、例えば
サトウキビ、甜菜からの糖汁あるいは廃糖蜜、澱
粉、加水分解物等の糖質原料等または酢酸等の有
機酸等を用いればよい。 窒素源も通常のＬ−グルタミン酸発酵に用いら
れるアンモニウム塩、アンモニア水、尿素等を用
いればよく、その他リン酸、イオン、マグネシウ
ムイオン等の無機イオンを必要に応じて適宜使用
する。ビチオンまたはビチオン活性物質は生育の
適量以下の制限条件下において発酵を行なうのが
よく、廃糖蜜等のビチオン過剰原料を炭素源とし
て使用するときにはペニシリンＧ、Ｆ、Ｋ、Ｏ、
Ｖ、Ｘ等のペニシリン類あるいはシユークロース
モノパルミテート、ポリオキシエチレンソルビタ
ン−モノパルミテート、パルミチン酸等の高級脂
肪酸又はその誘導体よりなる界面活性剤をビオチ
ン抑制物質として添加するのがよい。培養条件に
ついても、温度30〜40℃、PH６〜８の範囲内で好
気的条件で実施する等常法によつて実施すればよ
い。また、発酵液からＬ−グルタミン酸を取得す
る方法も常法に従つて行なえばよいことはいうま
でもない。 本発明はＬ−グルタミン酸生産菌にそのスーパ
ーオキシドジムターゼ活性を強化することによつ
てＬ−グルタミン酸生産能を高めるという全く新
規な知見に係るものであり、本発明の方法によつ
てＬ−グルタミン酸を簡便な手段で安価に取得で
きる。 次に、本発明の方法に使用する微生物の取得例
を示す。 ブレビバクテリウム・ラクトフエルメンタム
ATCC13869、同フラバムATCC14067およびコリ
ネバクテリウム・グルタミカムATCC13032をい
ずれもブイヨンスラントで24時間培養し、得られ
た各菌株をいずれも250μｇ／mlのＮ−ニトロ−
N′−メチル−Ｎ−ニトロソグアニジンによつて
30℃で20分間処理して変異株を得た。 イーストエキス１ｇ／dl、ペプトン１ｇ／dl、
食塩0.5ｇ／dlおよび寒天２ｇ／dlよりなる培地
に、ダウノマイシン3μｇ／ml、メチルビオロゲ
ン3μｇ／ml、ピユーロマイシン1μｇ／ml、フエ
ニルヒドラジン40μｇ／ml、過酸化ベンゾイル
20μｇ／ml、または過硫酸アンモニウム20μｇ／
mlを添加し、いずれもPH7.0に調整後120℃で15分
間殺菌して寒天培地を調製した。 前記変異株をこの寒天培地に撤いて31.5℃で48
時間培養し、生成したコロニーを採取して各薬剤
耐性株を取得し、表１に記載された各AJ番号付
与した。 このようにして得られた各薬剤耐性株および親
株について各薬剤の濃度を変えて生育試験を行な
つた結果を次に示す。 試験方法としては、いずれの菌株もブイヨンス
ラントで24時間培養し、イーストエキス１ｇ／
dl、ペプトン１ｇ／dl、食塩0.5ｇ／dlおよび寒
天２ｇ／dlを含有するPH7.0の培地を直径８cmの
シヤーレに入れて調製した寒天プレート上に菌数
がプレート当り105〜106個になるように撤いた。
そして、その上に表１に示す濃度の各薬剤を含有
するペーパーデイスクをおいて16〜48時間培養
後、形成される生育阻止円の存在の有無によつて
生育度を求めた。 得られた結果を表１に示す。なお、表中＋＋
＋、＋＋、＋は菌の生育度を表わし、−は生育が観
察されなかつたものを表わしている。
用いてＬ−グルタミン酸を製造する方法に関す
る。 Ｌ−グルタミン酸は現在ではその大部分が発酵
法で生産されている。そして、この発酵生産にお
ける中心的存在であるＬ−グルタミン酸生産菌に
ついて、発酵収率を１％でも高めるべく熾烈な企
業競争が続けられ、各種薬剤耐性あるいは栄養要
求性の付与などの菌改良研究が盛んに行なわれて
いる。本発明者らも菌改良によつて発酵収率を高
めるべく種々検討の結果、たまたまＬ−グルタミ
ン酸生産菌のスーパーオキシドジスムターゼ活性
を高めることによつてこの菌のＬ−グルタミン酸
生産能を大巾に高めうることを見出し、これを基
いて本発明を完成するに至つた。 すなわち本発明は、ブレビバクテリウム属また
はコリネバクテリウム属に属し、強化されたスー
パーオキシドジムスターゼ活性を有し、かつＬ−
グルタミン酸生産能を有する変異株を培養して培
養液中にＬ−グルタミン酸を生成、蓄積せしめ、
これを採取することを特徴とする発酵法によるＬ
−グルタミン酸の製造方法に関するものである。 本発明に使用する微生物は、ブレビバクテリウ
ム属またはコリネバクテリウム属に属しＬ−グル
タミン酸生産能を有するものを変異処理し、得ら
れた変異株のうちからスーパーオキシド増産剤、
スーパーオキシドジムスターゼ誘導抑制剤、スー
パーオキシドラジカル反応促進剤またはスーパー
オキシドを形成する酸素を供給する酸化剤に耐性
を有する株を選別することによつて取得できる。 ブレビバクテリウム属またはコリネバクテリウ
ム属に属しＬ−グルタミン酸生産能を有する微生
物は数多く知られ各種公的機関に寄託されてい
る。このような微生物の例として、ブレビバクテ
リウム・ラクトフエルメンタムATCC 13869、同
フラバムATCC14067、同デイバリカタム
ATCC14020、同サツカロリテイカム
ATCC14066、コリネバクテリウム・グルタミカ
ムATCC13032、同アセトアシドフイラム
ATCC13870などを挙げることができる。本発明
の微生物は、これらの例によらず、Ｌ−グルタミ
ン酸生産能を有するものであればいずれからも誘
導取得しうることはいうまでもない。 変異誘導方法としては、紫外線照射、Ｘ線照
射、変異誘起剤処理等の一般に微生物を変異誘導
する通常の方法を用いればよい。変異誘起剤処理
の例としては、250μｇ／mlのＮ−ニトロ−N′−
メチル−Ｎ−ニトロソグアニジンによつて30℃で
20分間処理する方法がある。 このようにして得られた変異株からスーパーオ
キシド増産剤、スーパーオキシドジムスターゼ誘
導抑制剤、スーパーオキシドラジカル反応促進
剤、またはスーパーオキシドを形成する酸素を供
給する酸化剤に対する耐性株を選別取得する。 これらの薬剤はいずれもスーパーオキシド
（O2 -）と不飽和脂肪酸の反応による過酸化脂質
の形成をしやすくするものである。すなわち、こ
れらの薬剤耐性株は細胞活性が低下しやすい環境
下で増殖する細胞活性の強い菌株である筈であ
り、本発明者らはこのような菌株がＬ−グルタミ
ン酸生産用の菌株として極めてすぐれていること
を見出したのである。 スーパーオキシド増産剤とは生体内においてス
ーパーオキシドを増す作用を有するものであり、
例えばメチルビオロゲン、ニトロフラントイン、
ビタミンK1、モルフイン、ストレプトニグリン、
アドリアマイシン、マイトマイシンＣ、ダウノマ
イシン、ブレオマイシン、β−ラパコン、cis−
プラチナム()ジアミノジクロライドの如きもの
である。 スーパーオキシドジムスターゼ誘導抑制剤とは
スーパーオキシドを過酸化水素に変える酵素であ
るスーパーオキシドジムスターゼの生体内におけ
る誘導生成を抑制するもので、例としてはピユー
ロマイシンを挙げることができる。 スーパーオキシドラジカル反応促進剤とは、ス
ーパーオキシドが不飽和脂肪酸と反応して過酸化
脂質を生成する反応を促進するものであり、例と
してフエニルヒドラジンを挙げることができる。 酸化剤は生体内でスーパーオキシドを形成する
酸素を供給するものであり、例えば過酸化ベンゾ
イル、過硫酸アンモニウムの如きものである。 これらの薬剤に対する耐性株の取得は通常の薬
剤耐性株取得方法に準じて行なえばよく、例えば
前記薬剤のいずれかを親株が生育しないような濃
度で含有する寒天培地に変異株を撤いて培養し、
生育したコロニーを採取すればよい。培地中の薬
剤の濃度は薬剤の種類によつて異なり、例えばダ
ウノマイシンおよびメチルビオロゲンの場合には
3μ／ml程度、ピユーロマイシンの場合には1μ／
ml程度、フエニルヒドラジンの場合には40μ／ml
程度、過酸化ベンゾイルおよび過硫酸アンモニウ
ムの場合には20μ／ml程度が適当である。その他
の薬剤を用いる場合には予め培養試験を行なつて
適切な濃度を定めればよいことはいうまでもな
い。 本発明に使用しうる微生物の例としては、スー
パーオキシド増産剤については、ダウノマイシン
に耐性を有するブレビバクテリウム・ラクトフエ
ルメンタムAJ11796（FERM−BP251）およびコ
リネバクテリウム・グルタミカムAJ11798
（FERM−P6396）、とメチルビオロゲンに耐性を
有するブレビバクテリウム・フラバムAJ11800
（FERM−P6397）およびコリネバクテリウム・
グルタミカムAJ11801（FERM−P6398）を、そ
してスーパーオキシドジムスターゼ誘導抑制剤に
ついては、ピユーロマイシンに耐性を有するブレ
ビバクテリウム・フラバムAJ11803（FERM−
P6399）およびコリネバクテリウム・グルタミカ
ムAJ11804（FERM−P6400）を挙げることがで
きる。また、スーパーオキシドラジカル反応促進
剤については、フエニルヒドラジンに耐性を有す
るブレビバクテリウム・ラクトフエルメンタム
AJ11805（FERM−P6401）およびコリネバクテ
リウム・グルタミカムAJ11807（FERM−P6403）
を、そしてスーパーオキシドを形成する酸素を供
給する酸化剤については、過酸化ベンゾイルに耐
性を有するブレビバクテリウム・フラバム
AJ11808（FERM−P6404）および過硫酸アンモ
ニウムに耐性を有するブレビバクテリウム・ラク
トフエルメンタムAJ11810（FERM−P6405）を
挙げることができる。 このような微生物を用いてＬ−グルタミン酸を
生成蓄積させるにはＬ−グルタミン酸発酵に用い
られる常法を用いて行なえばよい。 すなわち、使用する培地としては、通常の炭素
源、窒素源、無機イオンその他の栄養素の含有す
る通常の培地を用いる。炭素源としては、例えば
サトウキビ、甜菜からの糖汁あるいは廃糖蜜、澱
粉、加水分解物等の糖質原料等または酢酸等の有
機酸等を用いればよい。 窒素源も通常のＬ−グルタミン酸発酵に用いら
れるアンモニウム塩、アンモニア水、尿素等を用
いればよく、その他リン酸、イオン、マグネシウ
ムイオン等の無機イオンを必要に応じて適宜使用
する。ビチオンまたはビチオン活性物質は生育の
適量以下の制限条件下において発酵を行なうのが
よく、廃糖蜜等のビチオン過剰原料を炭素源とし
て使用するときにはペニシリンＧ、Ｆ、Ｋ、Ｏ、
Ｖ、Ｘ等のペニシリン類あるいはシユークロース
モノパルミテート、ポリオキシエチレンソルビタ
ン−モノパルミテート、パルミチン酸等の高級脂
肪酸又はその誘導体よりなる界面活性剤をビオチ
ン抑制物質として添加するのがよい。培養条件に
ついても、温度30〜40℃、PH６〜８の範囲内で好
気的条件で実施する等常法によつて実施すればよ
い。また、発酵液からＬ−グルタミン酸を取得す
る方法も常法に従つて行なえばよいことはいうま
でもない。 本発明はＬ−グルタミン酸生産菌にそのスーパ
ーオキシドジムターゼ活性を強化することによつ
てＬ−グルタミン酸生産能を高めるという全く新
規な知見に係るものであり、本発明の方法によつ
てＬ−グルタミン酸を簡便な手段で安価に取得で
きる。 次に、本発明の方法に使用する微生物の取得例
を示す。 ブレビバクテリウム・ラクトフエルメンタム
ATCC13869、同フラバムATCC14067およびコリ
ネバクテリウム・グルタミカムATCC13032をい
ずれもブイヨンスラントで24時間培養し、得られ
た各菌株をいずれも250μｇ／mlのＮ−ニトロ−
N′−メチル−Ｎ−ニトロソグアニジンによつて
30℃で20分間処理して変異株を得た。 イーストエキス１ｇ／dl、ペプトン１ｇ／dl、
食塩0.5ｇ／dlおよび寒天２ｇ／dlよりなる培地
に、ダウノマイシン3μｇ／ml、メチルビオロゲ
ン3μｇ／ml、ピユーロマイシン1μｇ／ml、フエ
ニルヒドラジン40μｇ／ml、過酸化ベンゾイル
20μｇ／ml、または過硫酸アンモニウム20μｇ／
mlを添加し、いずれもPH7.0に調整後120℃で15分
間殺菌して寒天培地を調製した。 前記変異株をこの寒天培地に撤いて31.5℃で48
時間培養し、生成したコロニーを採取して各薬剤
耐性株を取得し、表１に記載された各AJ番号付
与した。 このようにして得られた各薬剤耐性株および親
株について各薬剤の濃度を変えて生育試験を行な
つた結果を次に示す。 試験方法としては、いずれの菌株もブイヨンス
ラントで24時間培養し、イーストエキス１ｇ／
dl、ペプトン１ｇ／dl、食塩0.5ｇ／dlおよび寒
天２ｇ／dlを含有するPH7.0の培地を直径８cmの
シヤーレに入れて調製した寒天プレート上に菌数
がプレート当り105〜106個になるように撤いた。
そして、その上に表１に示す濃度の各薬剤を含有
するペーパーデイスクをおいて16〜48時間培養
後、形成される生育阻止円の存在の有無によつて
生育度を求めた。 得られた結果を表１に示す。なお、表中＋＋
＋、＋＋、＋は菌の生育度を表わし、−は生育が観
察されなかつたものを表わしている。
【表】
前述の各薬剤耐性株および各親株のスーパーオ
キシドジムスターゼ活性を測定した結果を表２に
示す。 測定は次のようにして行なつた。まず、各菌株
の培養液を20mlを10000rpmで10分間遠心して沈
澱物を集め、PH７の0.1Mリン酸緩衝液で２回洗
浄した。洗浄した沈澱物に前記リン酸緩衝液を20
ml加えて懸濁し、超音波処理を５分間行なつてか
ら10000rmpで10分間遠心し、得られた上清液を
試料とした。 試験管にPH10.2の0.05M炭酸ナトリウム緩衝液
2.4mlをとり、3mMキサンチン、3mMEDTA、
0.15％ウシアルブミン、および0.75mMニトロブ
ルーテトラゾリウムを各々0.1ml添加した。これ
に前記試料0.1mlを加えて25℃で10分間放置し、
後述するキサンチンオキシダーゼ溶液0.1mlを加
えすばやく撹拌して25℃でインキユベートした。
20分後に6mM CuCl20.1mlを添加して反応を停止
させ、560nmにおける吸光度を測定した。一方、
試料のかわりに蒸溜水を用いて同様の操作を行な
い、得られた吸光度をブランクとした。 活性単位は、このような測定条件でキサンチン
オキシダーゼ反応を1/2阻害するスーパーオキシ
ドジムスターゼ活性を１単位とした。 なお、前記キサンチンオキシダーゼ溶液は、ブ
ランク試験における吸光度が0.23前後になるよう
にキサンチンオキシダーゼを2M（NH4）2SO4で希
釈したものであり、キサンチンオキシダーゼ濃度
は約2.1×10-7Mであつた。
キシドジムスターゼ活性を測定した結果を表２に
示す。 測定は次のようにして行なつた。まず、各菌株
の培養液を20mlを10000rpmで10分間遠心して沈
澱物を集め、PH７の0.1Mリン酸緩衝液で２回洗
浄した。洗浄した沈澱物に前記リン酸緩衝液を20
ml加えて懸濁し、超音波処理を５分間行なつてか
ら10000rmpで10分間遠心し、得られた上清液を
試料とした。 試験管にPH10.2の0.05M炭酸ナトリウム緩衝液
2.4mlをとり、3mMキサンチン、3mMEDTA、
0.15％ウシアルブミン、および0.75mMニトロブ
ルーテトラゾリウムを各々0.1ml添加した。これ
に前記試料0.1mlを加えて25℃で10分間放置し、
後述するキサンチンオキシダーゼ溶液0.1mlを加
えすばやく撹拌して25℃でインキユベートした。
20分後に6mM CuCl20.1mlを添加して反応を停止
させ、560nmにおける吸光度を測定した。一方、
試料のかわりに蒸溜水を用いて同様の操作を行な
い、得られた吸光度をブランクとした。 活性単位は、このような測定条件でキサンチン
オキシダーゼ反応を1/2阻害するスーパーオキシ
ドジムスターゼ活性を１単位とした。 なお、前記キサンチンオキシダーゼ溶液は、ブ
ランク試験における吸光度が0.23前後になるよう
にキサンチンオキシダーゼを2M（NH4）2SO4で希
釈したものであり、キサンチンオキシダーゼ濃度
は約2.1×10-7Mであつた。
【表】
【表】
スムターゼ
以下、実施例を示す。 実施例 １ グルコース36mg／ml、尿素２mg／ml、
KH2PO41mg／ml、MgSO4・7aq0.4mg／ml、
FeSO4・7aq10μｇ／ml、MnSO4・4aq8μｇ／ml、
大豆蛋白酸加水分解物（「味液」）5μｇ／ml、サ
イアミン塩酸塩100μｇ／およびビオチン2.5μ
ｇ／を含有する培地を調製し、その20mlづつを
500ml容の振盪フラスコに入れて115℃で10分間加
熱殺菌した。この培地に表２に示す菌株を接種
し、往復振盪機により31.5℃で培養を行つた。培
養中、培養液をPH6.5ないし8.0に保つように450
mg／mlの濃度の尿素溶液を少量づつ添加した。30
時間で発酵を終了し発酵液中に窒積したＬ−グル
タミン酸の対糖収率を測定した。その結果、表３
に示すようにいずれの薬剤耐性株も良好なＬ−グ
ルタミン酸を蓄積していた。
以下、実施例を示す。 実施例 １ グルコース36mg／ml、尿素２mg／ml、
KH2PO41mg／ml、MgSO4・7aq0.4mg／ml、
FeSO4・7aq10μｇ／ml、MnSO4・4aq8μｇ／ml、
大豆蛋白酸加水分解物（「味液」）5μｇ／ml、サ
イアミン塩酸塩100μｇ／およびビオチン2.5μ
ｇ／を含有する培地を調製し、その20mlづつを
500ml容の振盪フラスコに入れて115℃で10分間加
熱殺菌した。この培地に表２に示す菌株を接種
し、往復振盪機により31.5℃で培養を行つた。培
養中、培養液をPH6.5ないし8.0に保つように450
mg／mlの濃度の尿素溶液を少量づつ添加した。30
時間で発酵を終了し発酵液中に窒積したＬ−グル
タミン酸の対糖収率を測定した。その結果、表３
に示すようにいずれの薬剤耐性株も良好なＬ−グ
ルタミン酸を蓄積していた。
【表】
【表】
実施例 ２
甘蔗糖蜜を糖として100mg／ml、KH2PO41mg／
ml、MgSO4・7aq1mg／ml、およびサイアミン塩
酸塩100μｇ／の組成を有する培地を調製し
（PH7.0）、その30mlづつを500ml振盪フラスコに分
注して加熱殺菌した。この培地に下記の菌株を接
種し、往復振盪機により31.5℃で培養を行つた。 培養中、培養液をPH6.5〜8.0に保つように400
mg／mlの濃度の尿素溶液を少量づつ添加した。培
地の26倍希釈液の562nmの吸光度が0.30に到達し
た時にポリオキシエチレンソルビタンモノパルミ
テートを添加した。36時間で発酵を終了し、発酵
液中に蓄積したＬ−グルタミン酸の対糖収率を測
定した。その結果、表４に示すようにいずれの薬
剤耐性株もＬ−グルタミン酸を良好に蓄積した。
ml、MgSO4・7aq1mg／ml、およびサイアミン塩
酸塩100μｇ／の組成を有する培地を調製し
（PH7.0）、その30mlづつを500ml振盪フラスコに分
注して加熱殺菌した。この培地に下記の菌株を接
種し、往復振盪機により31.5℃で培養を行つた。 培養中、培養液をPH6.5〜8.0に保つように400
mg／mlの濃度の尿素溶液を少量づつ添加した。培
地の26倍希釈液の562nmの吸光度が0.30に到達し
た時にポリオキシエチレンソルビタンモノパルミ
テートを添加した。36時間で発酵を終了し、発酵
液中に蓄積したＬ−グルタミン酸の対糖収率を測
定した。その結果、表４に示すようにいずれの薬
剤耐性株もＬ−グルタミン酸を良好に蓄積した。
【表】
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １ ブレビバクテリウム属またはコリネバクテリ
ウム属に属し、強化されたスーパーオキシドジス
ムターゼ活性を有し、かつＬ−グルタミン酸生産
能を有する変異株を培養して培養液中にＬ−グル
タミン酸を生成、蓄積せしめ、これを採取するこ
とを特徴とする発酵法によるＬ−グルタミン酸の
製造方法。 ２ 変異株がスーパーオキシド増産剤、スーパー
オキシドジムスターゼ誘導抑制剤、スーパーオキ
シドラジカル反応促進剤、またはスーパーオキシ
ドを形成する酸素を供給する酸化剤に耐性を有す
るものである特許請求の範囲第１項記載の製造方
法。
Priority Applications (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP57041411A JPS58158192A (ja) | 1982-03-15 | 1982-03-15 | 発酵法によるｌ−グルタミン酸の製造方法 |
| US06/475,648 US4529697A (en) | 1982-03-15 | 1983-03-15 | Process for producing L-glutamic acid by fermentation |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP57041411A JPS58158192A (ja) | 1982-03-15 | 1982-03-15 | 発酵法によるｌ−グルタミン酸の製造方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS58158192A JPS58158192A (ja) | 1983-09-20 |
| JPH0529436B2 true JPH0529436B2 (ja) | 1993-04-30 |
Family
ID=12607610
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP57041411A Granted JPS58158192A (ja) | 1982-03-15 | 1982-03-15 | 発酵法によるｌ−グルタミン酸の製造方法 |
Country Status (2)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4529697A (ja) |
| JP (1) | JPS58158192A (ja) |
Families Citing this family (28)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| IT1199180B (it) * | 1984-08-09 | 1988-12-30 | Serono Ist Farm | Riduzione degli effetti tossici cau sati da farmaci antrachinonici |
| US5179010A (en) * | 1985-06-10 | 1993-01-12 | Ajinomoto Co., Inc. | Fermentation process for producing L-lysine |
| CN1035727C (zh) * | 1991-04-02 | 1997-08-27 | 黄文涛 | L-谷氨酸发酵新工艺 |
| JP3301140B2 (ja) * | 1993-02-16 | 2002-07-15 | 味の素株式会社 | 発酵法によるｌ−グルタミン酸の製造法 |
| US6569650B1 (en) * | 1999-08-13 | 2003-05-27 | Degussa Ag | Process for the fermentative preparation of metabolic products and for the nucleotide sequences encoding for the sod gene |
| BRPI0519410B1 (pt) | 2004-12-28 | 2020-12-22 | Ajinomoto Co., Inc | método para produzir ácido l-glutâmico |
| JP2010017082A (ja) | 2006-10-10 | 2010-01-28 | Ajinomoto Co Inc | Ｌ−アミノ酸の製造法 |
| JP2010041920A (ja) | 2006-12-19 | 2010-02-25 | Ajinomoto Co Inc | Ｌ−アミノ酸の製造法 |
| JP2010110216A (ja) | 2007-02-20 | 2010-05-20 | Ajinomoto Co Inc | Ｌ−アミノ酸または核酸の製造方法 |
| JP2010130899A (ja) | 2007-03-14 | 2010-06-17 | Ajinomoto Co Inc | Ｌ−グルタミン酸系アミノ酸生産微生物及びアミノ酸の製造法 |
| JP2011067095A (ja) | 2008-01-10 | 2011-04-07 | Ajinomoto Co Inc | 発酵法による目的物質の製造法 |
| KR20100120663A (ko) | 2008-01-23 | 2010-11-16 | 아지노모토 가부시키가이샤 | Ｌ-아미노산의 제조법 |
| JPWO2011013707A1 (ja) | 2009-07-29 | 2013-01-10 | 味の素株式会社 | Ｌ−アミノ酸の製造法 |
| RU2496867C2 (ru) | 2011-04-25 | 2013-10-27 | Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" (ЗАО "АГРИ") | Способ получения l-аминокислоты семейства глутамата с использованием коринеформной бактерии |
| BR112013027845A2 (pt) | 2011-05-18 | 2017-01-03 | Ajinomoto Kk | Imunoestimulante, ração, método para produzir um imunoestimulante, e, método para imunoestimulação |
| US9822387B2 (en) | 2011-07-29 | 2017-11-21 | Mitsui Chemicals, Inc. | Microorganism having carbon dioxide fixation pathway introduced thereinto |
| PH12014501063A1 (en) | 2011-11-11 | 2014-06-30 | Ajinomoto Kk | A method for producing a target substance by fermentation |
| EP2949751B1 (en) | 2013-01-24 | 2022-08-03 | Mitsui Chemicals, Inc. | Microorganism having carbon dioxide fixation cycle introduced thereinto |
| CN105008532B (zh) | 2013-05-13 | 2017-07-21 | 味之素株式会社 | L‑氨基酸的制造方法 |
| JP2016165225A (ja) | 2013-07-09 | 2016-09-15 | 味の素株式会社 | 有用物質の製造方法 |
| JP2016192903A (ja) | 2013-09-17 | 2016-11-17 | 味の素株式会社 | 海藻由来バイオマスからのｌ−アミノ酸の製造方法 |
| BR112016007286B1 (pt) | 2013-10-02 | 2021-07-20 | Ajinomoto Co., Inc | Métodos de controle de amônia e para produção de uma substância alvo, e, aparelho para controle de amônia |
| JP6519476B2 (ja) | 2013-10-23 | 2019-05-29 | 味の素株式会社 | 目的物質の製造法 |
| JP6623690B2 (ja) | 2015-10-30 | 2019-12-25 | 味の素株式会社 | グルタミン酸系ｌ−アミノ酸の製造法 |
| JP7066977B2 (ja) | 2017-04-03 | 2022-05-16 | 味の素株式会社 | Ｌ－アミノ酸の製造法 |
| WO2022092018A1 (ja) | 2020-10-28 | 2022-05-05 | 味の素株式会社 | Ｌ－アミノ酸の製造法 |
| JP7716166B1 (ja) | 2023-12-28 | 2025-07-31 | 味の素株式会社 | Ｌ－グルタミン酸生産菌およびｌ－グルタミン酸の製造方法 |
| JP7716823B1 (ja) | 2023-12-28 | 2025-08-01 | 味の素株式会社 | Ｌ－グルタミン酸生産菌およびｌ－グルタミン酸の製造方法 |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS561889A (en) * | 1979-06-20 | 1981-01-10 | Ajinomoto Co Inc | Preparation of l-glutamic acid by fermentation |
| JPS5832596B2 (ja) * | 1979-08-10 | 1983-07-14 | 味の素株式会社 | 発酵法によるｌ−グルタミン酸の製造方法 |
| JPS57115190A (en) * | 1980-12-29 | 1982-07-17 | Ajinomoto Co Inc | Preparation of l-glutamic acid by fermentation |
| JPS58141788A (ja) * | 1982-02-17 | 1983-08-23 | Ajinomoto Co Inc | 醗酵法によるｌ−グルタミン酸の製造法 |
-
1982
- 1982-03-15 JP JP57041411A patent/JPS58158192A/ja active Granted
-
1983
- 1983-03-15 US US06/475,648 patent/US4529697A/en not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS58158192A (ja) | 1983-09-20 |
| US4529697A (en) | 1985-07-16 |
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