JPH05306295A - アンジオテンシンｉ変換酵素阻害トリぺプチドとその製造方法 - Google Patents
アンジオテンシンｉ変換酵素阻害トリぺプチドとその製造方法Info
- Publication number
- JPH05306295A JPH05306295A JP4129816A JP12981692A JPH05306295A JP H05306295 A JPH05306295 A JP H05306295A JP 4129816 A JP4129816 A JP 4129816A JP 12981692 A JP12981692 A JP 12981692A JP H05306295 A JPH05306295 A JP H05306295A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- angiotensin
- converting enzyme
- peptide
- solution
- hplc condition
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Landscapes
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【目的】 高血圧を抑制するためにレニン・アンジオテ
ンンシン系で昇圧作用を有するアンジオテンシンＩ変換
酵素を阻害するペプチドを開発する。 【構成】 ペプチドの化学合成法である固相法または液
相法を用いてＩｌｅ−Ａｒｇ−Ｐｒｏの構造を有するペ
プチドを合成した。このペプチドは１．８μＭの濃度で
アンジオテンシンＩ変換酵素を５０％阻害する。 【効果】 血圧を下げる効果を有するペプチドを簡単に
提供する事が出来る。
ンンシン系で昇圧作用を有するアンジオテンシンＩ変換
酵素を阻害するペプチドを開発する。 【構成】 ペプチドの化学合成法である固相法または液
相法を用いてＩｌｅ−Ａｒｇ−Ｐｒｏの構造を有するペ
プチドを合成した。このペプチドは１．８μＭの濃度で
アンジオテンシンＩ変換酵素を５０％阻害する。 【効果】 血圧を下げる効果を有するペプチドを簡単に
提供する事が出来る。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、アンジオテンシンＩ変
換酵素阻害ペプチドとその製造方法に関する。より詳し
くは、血圧を上昇させる働きのあるアンジオテンシンＩ
ＩをアンジオテンシンＩから変換する酵素であるアンジ
オテンシンＩ変換酵素阻害ペプチドとその製造方法に関
する。
換酵素阻害ペプチドとその製造方法に関する。より詳し
くは、血圧を上昇させる働きのあるアンジオテンシンＩ
ＩをアンジオテンシンＩから変換する酵素であるアンジ
オテンシンＩ変換酵素阻害ペプチドとその製造方法に関
する。
【０００２】
【従来の技術】高血圧症は、最大血圧が160mmHg 以上
か、最小血圧が95mmHg以上または両者がそれ以上の状態
である。わが国では患者数が約2000万人であるといわ
れ、り患率の高い疾病である。高血圧症は、脳出血、脳
梗塞、クモ膜下出血、狭心症、心筋梗塞、腎硬化症、腎
不全、網膜静膜閉息症など広範囲の臓器にわたってさま
ざまな合併症を生じることが知られており、有効な治療
薬が望まれている。
か、最小血圧が95mmHg以上または両者がそれ以上の状態
である。わが国では患者数が約2000万人であるといわ
れ、り患率の高い疾病である。高血圧症は、脳出血、脳
梗塞、クモ膜下出血、狭心症、心筋梗塞、腎硬化症、腎
不全、網膜静膜閉息症など広範囲の臓器にわたってさま
ざまな合併症を生じることが知られており、有効な治療
薬が望まれている。
【０００３】生体内において血圧を調節するメカニズム
の一つとして、昇圧系であるレニン、アンジオテンシン
系と、降圧系であるカリクレイン、キニン系がある。レ
ニン、アンジオテンシン系では酵素レニンが腎臓の旁糸
球体細胞（Ｊ．Ｇ細胞）で生成され、血管でレニン基質
であるところのアンジオテシノ−ゲンに作用してアンジ
オテンシンＩを生成する。このアンジオテンシンＩをア
ンジオテンシンＩＩに変換する酵素がアンンジオテンシ
ンＩ変換酵素であり、生じたアンジオテンシンＩＩは細
動脈に作用して収縮を起こさせる。
の一つとして、昇圧系であるレニン、アンジオテンシン
系と、降圧系であるカリクレイン、キニン系がある。レ
ニン、アンジオテンシン系では酵素レニンが腎臓の旁糸
球体細胞（Ｊ．Ｇ細胞）で生成され、血管でレニン基質
であるところのアンジオテシノ−ゲンに作用してアンジ
オテンシンＩを生成する。このアンジオテンシンＩをア
ンジオテンシンＩＩに変換する酵素がアンンジオテンシ
ンＩ変換酵素であり、生じたアンジオテンシンＩＩは細
動脈に作用して収縮を起こさせる。
【０００４】また、アンジオテンシンＩＩは副腎皮質に
も作用してアルドステロンの合成と分泌を促し、腎臓で
のナトリウムの再吸収を促進し、体液量を保持する働き
もある。このようにしてアンジオテンシンＩＩによって
血圧が上昇する。一方、カリクレイン・キニン系では、
蛋白分解酵素であるカリクレインが、基質であるところ
のキニノ−ゲンに作用してキニンを生じる。キニンは血
管を拡張させ、血圧を下げる働きを有するが、キニナ−
ゼＩＩによって分解を受ける。キニナ−ゼＩＩはアンジ
オテンシンＩ変換酵素と同一物質であることが知られて
いる。
も作用してアルドステロンの合成と分泌を促し、腎臓で
のナトリウムの再吸収を促進し、体液量を保持する働き
もある。このようにしてアンジオテンシンＩＩによって
血圧が上昇する。一方、カリクレイン・キニン系では、
蛋白分解酵素であるカリクレインが、基質であるところ
のキニノ−ゲンに作用してキニンを生じる。キニンは血
管を拡張させ、血圧を下げる働きを有するが、キニナ−
ゼＩＩによって分解を受ける。キニナ−ゼＩＩはアンジ
オテンシンＩ変換酵素と同一物質であることが知られて
いる。
【０００５】以上のことから、アンジオテンシンＩ変換
酵素を阻害することによる高血圧の治療が考えられ、現
在までにカプトプリル、エナラプリル、アラセプリル、
デラプリル等が開発されている。また、カゼインやツエ
イン、ゼラチン、魚肉などに由来するペプチドも、アン
ジオテンシンＩ変換酵素を阻害する働きがあることが知
られている。（特開昭５９−４４３２４号、特開昭６４
−５４９７号、特開平０１−３１３４９８号）。
酵素を阻害することによる高血圧の治療が考えられ、現
在までにカプトプリル、エナラプリル、アラセプリル、
デラプリル等が開発されている。また、カゼインやツエ
イン、ゼラチン、魚肉などに由来するペプチドも、アン
ジオテンシンＩ変換酵素を阻害する働きがあることが知
られている。（特開昭５９−４４３２４号、特開昭６４
−５４９７号、特開平０１−３１３４９８号）。
【０００６】しかし、カプトプリルは強力な血圧降下作
用を有するが、高価であり、安易に入手することは難し
い。その上、用量が不適当であると腎機能障害や低血圧
をもたらす。また、分子内に存在するＳＨ基のため、発
疹や、味覚異常を引き起こすともいわれている。カゼイ
ンやツエイン、魚肉などに由来するペプチドは、天然物
を原料とするものであり、製造工程で多くの未利用物を
生成し、その処理に莫大な費用がかかるだけでなく、廃
棄による環境汚染の心配がある。例えば、魚肉のみを原
料に使った場合、内臓が未利用物として残る。一方、水
産加工業では魚介類の肉部を主に加工しており、大量に
生成する内臓は未利用物として廃棄されることが多く、
環境汚染の原因となる可能性もあり、新たな有効利用法
が求められている。また、他のアンジオテンシンＩ変換
酵素阻害ペプチドが求められている。
用を有するが、高価であり、安易に入手することは難し
い。その上、用量が不適当であると腎機能障害や低血圧
をもたらす。また、分子内に存在するＳＨ基のため、発
疹や、味覚異常を引き起こすともいわれている。カゼイ
ンやツエイン、魚肉などに由来するペプチドは、天然物
を原料とするものであり、製造工程で多くの未利用物を
生成し、その処理に莫大な費用がかかるだけでなく、廃
棄による環境汚染の心配がある。例えば、魚肉のみを原
料に使った場合、内臓が未利用物として残る。一方、水
産加工業では魚介類の肉部を主に加工しており、大量に
生成する内臓は未利用物として廃棄されることが多く、
環境汚染の原因となる可能性もあり、新たな有効利用法
が求められている。また、他のアンジオテンシンＩ変換
酵素阻害ペプチドが求められている。
【０００７】
【発明が解決しようとする課題】したがって、安価に入
手でき、副作用が少ないアンジオテンシンＩ変換酵素の
阻害剤が求められている。また、未利用物である魚介類
の内臓を有効に利用する方法も望まれている。
手でき、副作用が少ないアンジオテンシンＩ変換酵素の
阻害剤が求められている。また、未利用物である魚介類
の内臓を有効に利用する方法も望まれている。
【０００８】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、上記課題
を解決するために種々検討した結果、本発明を完成する
に至った。すなわち、本発明は、安価で簡単に合成でき
るアンジオテンシンＩ変換酵素阻害ペプチドとその製造
方法に関する。
を解決するために種々検討した結果、本発明を完成する
に至った。すなわち、本発明は、安価で簡単に合成でき
るアンジオテンシンＩ変換酵素阻害ペプチドとその製造
方法に関する。
【０００９】本発明で言うアンジオテンシンＩ変換酵素
阻害ペプチドＩｌｅ−Ａｒｇ−Ｐｒｏは、魚介類の頭や
内臓を自己消化し、分離精製するか、または化学合成法
で得られる。すなわち、水産加工業などで生成する魚介
類の内臓をクラッシャーで粉砕し、２０〜７０℃で自己
消化を行わせる。反応時間は１〜６時間が適当である。
しかる後，９０℃以上で加熱し、酵素を失活させ、遠心
分離または濾過により、固形物を除去する。そして逆相
系分配・吸着クロマトグラフィーの充填剤であるＯＤＳ
充填剤（シリカゲルにオクタデシル基を化学結合させた
もの）に吸着させて水洗後、アセトニトリル１５％液で
溶出したものを陽イオン交換体ＳＰ（担体にスルホプロ
ピル基を結合させたもの）に吸着させ、ｐＨ６．０のバ
ッファーで洗浄した後、ｐＨ９．０の溶液で溶出する。
その後、逆相系液体クロマトグラフィー、ゲル濾過クロ
マトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィーにより
精製する。本発明で使用できる魚種は、鰹節工業で大量
に内臓が生成するカツオが利用しやすいが、イワシやマ
グロなどの他の魚種も使用できる。
阻害ペプチドＩｌｅ−Ａｒｇ−Ｐｒｏは、魚介類の頭や
内臓を自己消化し、分離精製するか、または化学合成法
で得られる。すなわち、水産加工業などで生成する魚介
類の内臓をクラッシャーで粉砕し、２０〜７０℃で自己
消化を行わせる。反応時間は１〜６時間が適当である。
しかる後，９０℃以上で加熱し、酵素を失活させ、遠心
分離または濾過により、固形物を除去する。そして逆相
系分配・吸着クロマトグラフィーの充填剤であるＯＤＳ
充填剤（シリカゲルにオクタデシル基を化学結合させた
もの）に吸着させて水洗後、アセトニトリル１５％液で
溶出したものを陽イオン交換体ＳＰ（担体にスルホプロ
ピル基を結合させたもの）に吸着させ、ｐＨ６．０のバ
ッファーで洗浄した後、ｐＨ９．０の溶液で溶出する。
その後、逆相系液体クロマトグラフィー、ゲル濾過クロ
マトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィーにより
精製する。本発明で使用できる魚種は、鰹節工業で大量
に内臓が生成するカツオが利用しやすいが、イワシやマ
グロなどの他の魚種も使用できる。
【００１０】また、本ペプチドは各種化学合成法、例え
ば、固相法、液相法を使用して製造することができる。
すなわち、Ｂｏｃ（ターシャリーブチルオキシカルボ
ニル）−アミノ酸をＤＣＣ（ジシクロヘキシルカルボジ
イミド）、ＨｏＢｔ（１−ヒドロキシベンゾトリアゾー
ル）とともにＤＭＦ（ジメチルホルムアミド）中で反応
させる方法や、Ｍｅｒｒｉｆｉｅｄ法で不溶性担体上に
アミノ酸を縮合させる方法が使用できる。
ば、固相法、液相法を使用して製造することができる。
すなわち、Ｂｏｃ（ターシャリーブチルオキシカルボ
ニル）−アミノ酸をＤＣＣ（ジシクロヘキシルカルボジ
イミド）、ＨｏＢｔ（１−ヒドロキシベンゾトリアゾー
ル）とともにＤＭＦ（ジメチルホルムアミド）中で反応
させる方法や、Ｍｅｒｒｉｆｉｅｄ法で不溶性担体上に
アミノ酸を縮合させる方法が使用できる。
【００１１】本ペプチドの使用にあたっては、経口投
与、静脈注射のいずれも使用でき、ペプチドは塩酸やト
リフルオロ酢酸などの各種塩の形でも使用できる。
与、静脈注射のいずれも使用でき、ペプチドは塩酸やト
リフルオロ酢酸などの各種塩の形でも使用できる。
【実施例】以下、実施例により本発明を具体的に説明す
る。
る。
【００１２】実施例１ カツオの内臓１Ｋｇをクラッシャーで粉砕し、５００ｇ
の水を加え、緩やかに攪拌しながら５０℃で３時間自己
消化反応を行わせた。その後、２０分間煮沸し、遠心分
離により固形物を除去し、旭化成工業（株）のラボモジ
ュールＳＩＰ−１０１３を用い、限外濾過を行なった。
濾液のペプチドを逆相系前処理カートリッジセップパッ
クＣ18ＥＮＶ（ウォ−ターズ製）に吸着させ、蒸留水８
ｍｌで洗浄後、アセトニトリル１５％液８ｍｌで溶出し
た。この処理を４回繰り返し、１３６ｍｇのペプチドを
処理した。アセトニトリル１５％液で溶出したものは、
溶媒を減圧下で除去した後、１０ｍＭリン酸バッファー
（ｐＨ６．０）で平衡化したイオン交換系前処理カート
リッジ、トヨパックＩＣ−ＳＰ（Ｍ）（東ソー製）に吸
着させた後、１０ｍＭリン酸バッファー（ｐＨ６．０）
４ｍｌで洗浄し、１０ｍＭリン酸第一水素カリウム液４
ｍｌで溶出し、ＨＰＬＣ条件１で示した条件で逆相系高
速液体クロマトグラフィーで分離した。この時の結果を
図１に示した。図１のピーク１をさらに逆相系高速液体
クロマトグラフィーで、ＨＰＬＣ条件２の条件で分離し
た。その結果を図２に示した。図２のピーク２をさらに
ゲル濾過系高速液体クロマトグラフィーで、ＨＰＬＣ条
件３で分離した。結果を図３に示した。図３のピーク３
をさらにゲル濾過高速液体クロマトグラフィーを用い
て、ＨＰＬＣ条件４の条件で分離した。その結果が図４
で、図４のピーク４はさらにＨＰＬＣ条件５でイオン交
換分離し、図５ピーク５を得た。最後にピーク５をＨＰ
ＬＣ条件６で逆相系分離を行い、図６を得た。図６には
ピーク６に強いアンジオテンシンＩ変換酵素阻害能が認
められたので、脱塩後、アプライドバイオシステム社気
相プロテインシーケンサ４７０Ａで構造解析をしたとこ
ろ、Ｉｌｅ−Ａｒｇ−Ｐｒｏの構造であることが分かっ
た。
の水を加え、緩やかに攪拌しながら５０℃で３時間自己
消化反応を行わせた。その後、２０分間煮沸し、遠心分
離により固形物を除去し、旭化成工業（株）のラボモジ
ュールＳＩＰ−１０１３を用い、限外濾過を行なった。
濾液のペプチドを逆相系前処理カートリッジセップパッ
クＣ18ＥＮＶ（ウォ−ターズ製）に吸着させ、蒸留水８
ｍｌで洗浄後、アセトニトリル１５％液８ｍｌで溶出し
た。この処理を４回繰り返し、１３６ｍｇのペプチドを
処理した。アセトニトリル１５％液で溶出したものは、
溶媒を減圧下で除去した後、１０ｍＭリン酸バッファー
（ｐＨ６．０）で平衡化したイオン交換系前処理カート
リッジ、トヨパックＩＣ−ＳＰ（Ｍ）（東ソー製）に吸
着させた後、１０ｍＭリン酸バッファー（ｐＨ６．０）
４ｍｌで洗浄し、１０ｍＭリン酸第一水素カリウム液４
ｍｌで溶出し、ＨＰＬＣ条件１で示した条件で逆相系高
速液体クロマトグラフィーで分離した。この時の結果を
図１に示した。図１のピーク１をさらに逆相系高速液体
クロマトグラフィーで、ＨＰＬＣ条件２の条件で分離し
た。その結果を図２に示した。図２のピーク２をさらに
ゲル濾過系高速液体クロマトグラフィーで、ＨＰＬＣ条
件３で分離した。結果を図３に示した。図３のピーク３
をさらにゲル濾過高速液体クロマトグラフィーを用い
て、ＨＰＬＣ条件４の条件で分離した。その結果が図４
で、図４のピーク４はさらにＨＰＬＣ条件５でイオン交
換分離し、図５ピーク５を得た。最後にピーク５をＨＰ
ＬＣ条件６で逆相系分離を行い、図６を得た。図６には
ピーク６に強いアンジオテンシンＩ変換酵素阻害能が認
められたので、脱塩後、アプライドバイオシステム社気
相プロテインシーケンサ４７０Ａで構造解析をしたとこ
ろ、Ｉｌｅ−Ａｒｇ−Ｐｒｏの構造であることが分かっ
た。
【００１３】アンジオテンシンＩ変換酵素阻害の測定
は、カッシュマンらの方法（バイオケミカル・ファ−マ
コロジ−２０巻１６３７〜１６４８頁（１９７１））を
改良した丸山らの方法（アグリカリチュアル・バイオロ
ジカル・ケミストリー４６巻５号１３９３〜１３９４頁
（１９８２））にしたがった。
は、カッシュマンらの方法（バイオケミカル・ファ−マ
コロジ−２０巻１６３７〜１６４８頁（１９７１））を
改良した丸山らの方法（アグリカリチュアル・バイオロ
ジカル・ケミストリー４６巻５号１３９３〜１３９４頁
（１９８２））にしたがった。
【００１４】すなわち、試験管に本発明ペプチド水溶液
３０μｌと酵素基質としてＬ−ヒプリルヒスチジルロイ
シン（シグマ製）と塩化ナトリウムを含有したｐＨ８．
３のホウ酸バッファ−２５０μｌを加え、３７℃で１０
分間プレインキュベ−ションした。その後、アンジオテ
ンシンＩ変換酵素含有液１００μｌを加え、酵素反応を
開始した。この時ホウ酸バッファ−の濃度は０．１Ｍ、
Ｌ−ヒプリルヒスチジルロイシン濃度は５ｍＭ、塩化ナ
トリウム３００ｍＭであり、阻害がかからない場合の酵
素活性は８ｍＵである。３７℃、ｐＨ８．３で３０分間
振動しつつ反応せしめた後、１Ｎ塩酸２５０μｌを加
え、反応を停止させた。酢酸エチル１．５ｍｌを加え、
１５秒間振とうさせて酵素反応で生じた馬尿酸を抽出
し、２０００ｒｐｍ、１０分間遠心分離して酢酸エチル
層１．０ｍｌを試験管に採取した。酢酸エチルをホット
ドライバスの中で１２０℃，３０分間加温して完全に除
去した後、室温で５分間放置した。そして、蒸留水を加
え、生成した馬尿酸の量を２２８ｎｍの吸光度を測定し
て求めた。酵素反応に使用したアンジオテンシンＩ変換
酵素含有液は、ラビットアセトンパウダ−（シグマ製）
１ｇを０．１Ｍホウ酸バッファ−（ｐＨ８．３）１０ml
に溶かし、よく攪拌した後、４℃、４００００ｇで４０
分間遠心分離した上清を０．１Ｍホウ酸バッファ−で希
釈して作成した。
３０μｌと酵素基質としてＬ−ヒプリルヒスチジルロイ
シン（シグマ製）と塩化ナトリウムを含有したｐＨ８．
３のホウ酸バッファ−２５０μｌを加え、３７℃で１０
分間プレインキュベ−ションした。その後、アンジオテ
ンシンＩ変換酵素含有液１００μｌを加え、酵素反応を
開始した。この時ホウ酸バッファ−の濃度は０．１Ｍ、
Ｌ−ヒプリルヒスチジルロイシン濃度は５ｍＭ、塩化ナ
トリウム３００ｍＭであり、阻害がかからない場合の酵
素活性は８ｍＵである。３７℃、ｐＨ８．３で３０分間
振動しつつ反応せしめた後、１Ｎ塩酸２５０μｌを加
え、反応を停止させた。酢酸エチル１．５ｍｌを加え、
１５秒間振とうさせて酵素反応で生じた馬尿酸を抽出
し、２０００ｒｐｍ、１０分間遠心分離して酢酸エチル
層１．０ｍｌを試験管に採取した。酢酸エチルをホット
ドライバスの中で１２０℃，３０分間加温して完全に除
去した後、室温で５分間放置した。そして、蒸留水を加
え、生成した馬尿酸の量を２２８ｎｍの吸光度を測定し
て求めた。酵素反応に使用したアンジオテンシンＩ変換
酵素含有液は、ラビットアセトンパウダ−（シグマ製）
１ｇを０．１Ｍホウ酸バッファ−（ｐＨ８．３）１０ml
に溶かし、よく攪拌した後、４℃、４００００ｇで４０
分間遠心分離した上清を０．１Ｍホウ酸バッファ−で希
釈して作成した。
【００１５】また、酵素反応後の代わりに酵素反応前に
塩酸を添加して同様な操作を行なったものをブランクと
して作成した。
塩酸を添加して同様な操作を行なったものをブランクと
して作成した。
【００１６】阻害率は下記数１を使用して求めた。
【数１】 阻害率＝｛１−（Ｂ−Ｄ）÷（Ａ−Ｃ）｝×１００ （％） Ａ：蒸留水添加時の吸光度 （２２８ｎｍ） Ｂ：阻害剤添加時の吸光度 （２２８ｎｍ） Ｃ：蒸留水添加時の吸光度ブランク （２２８ｎｍ） Ｄ：阻害剤添加時の吸光度ブランク （２２８ｎｍ） この方法で、上記ペプチドは１．８μＭの濃度でアンジ
オテンシンＩ変換酵素の活性を５０％阻害した。
オテンシンＩ変換酵素の活性を５０％阻害した。
【００１７】ＨＰＬＣ条件１ カラム：ＲＰ−１８（ｅ） １．０×２５ｃｍ （メル
ク社製） 移動相：Ａ ０．０５％トリフルオロ酢酸液 Ｂ ０．０５％トリフルオロ酢酸、３０％アセトニトリ
ル液 グラジエント条件はＡ液１００％から１２０分後にＢ液
１００％になる直線グラジエント 流速：４．０ｍｌ／分 検出：２１０ｎｍ
ク社製） 移動相：Ａ ０．０５％トリフルオロ酢酸液 Ｂ ０．０５％トリフルオロ酢酸、３０％アセトニトリ
ル液 グラジエント条件はＡ液１００％から１２０分後にＢ液
１００％になる直線グラジエント 流速：４．０ｍｌ／分 検出：２１０ｎｍ
【００１８】ＨＰＬＣ条件２ カラム：ＲＰ−１８（ｅ） ０．４６×２５ｃｍ （メ
ルク社製） 移動相：Ａ ０．０５％トリフルオロ酢酸液 Ｂ ０．０５％トリフルオロ酢酸、３０％アセトニトリ
ル液 グラジエント条件はＡ液１００％から１２０分後にＢ液
１００％になる直線グラジエント 流速：１．０ｍｌ／分 検出：２１０ｎｍ
ルク社製） 移動相：Ａ ０．０５％トリフルオロ酢酸液 Ｂ ０．０５％トリフルオロ酢酸、３０％アセトニトリ
ル液 グラジエント条件はＡ液１００％から１２０分後にＢ液
１００％になる直線グラジエント 流速：１．０ｍｌ／分 検出：２１０ｎｍ
【００１９】ＨＰＬＣ条件３ カラム：ＧＳ−２２０ ０．７６×５０ｃｍ （旭化成
工業（株）製） 移動相：５０ｍＭ酢酸アンモニウム液 流速：１．０ｍｌ／分 検出：２１０ｎｍ
工業（株）製） 移動相：５０ｍＭ酢酸アンモニウム液 流速：１．０ｍｌ／分 検出：２１０ｎｍ
【００２０】ＨＰＬＣ条件４ カラム：ＧＳ−３２０ ０．７６×５０ｃｍ （旭化成
工業（株）製） 移動相：５０ｍＭ酢酸アンモニウム液 流速：１．０ｍｌ／分 検出：２１０ｎｍ
工業（株）製） 移動相：５０ｍＭ酢酸アンモニウム液 流速：１．０ｍｌ／分 検出：２１０ｎｍ
【００２１】ＨＰＬＣ条件５ カラム：ＴＳＫｇｅｌ ＳＰ−２ＳＷ ０．４６×２５
ｃｍ （東ソー製） 移動相：Ａ ２０ｍＭリン酸ナトリウムバッファー（ｐ
Ｈ６．０） Ｂ ２０ｍＭリン酸ナトリウムバッファー＋０．５Ｍ塩
化ナトリウム（ｐＨ６．０） Ａ１００％で１０分流した後４０分後にＢ液１００％に
なるような直線グラジエント 流速：０．８ｍｌ／分 検出：２１０ｎｍ
ｃｍ （東ソー製） 移動相：Ａ ２０ｍＭリン酸ナトリウムバッファー（ｐ
Ｈ６．０） Ｂ ２０ｍＭリン酸ナトリウムバッファー＋０．５Ｍ塩
化ナトリウム（ｐＨ６．０） Ａ１００％で１０分流した後４０分後にＢ液１００％に
なるような直線グラジエント 流速：０．８ｍｌ／分 検出：２１０ｎｍ
【００２２】ＨＰＬＣ条件６ カラム：ＲＰ−１８（ｅ） ０．４６×２５ｃｍ （メ
ルク社製） 移動相：０．０５％トリフルオロ酢酸、７％アセトニト
リル液 流速：１．０ｍｌ／分 検出：２１０ｎｍ
ルク社製） 移動相：０．０５％トリフルオロ酢酸、７％アセトニト
リル液 流速：１．０ｍｌ／分 検出：２１０ｎｍ
【００２３】実施例２ Ｂｏｃ−Ｉｌｅ、Ｂｏｃ−Ａｒｇ、Ｂｏｃ−Ｐｒｏを用
いて、アプライドバイオシステム社のモデル４３０Ａペ
プチドシーケンサをにより、Ｉｌｅ−Ａｒｇ−Ｐｒｏの
構造のペプチドを合成した。合成したペプチドは、ワイ
エムシイ社のＹＭＣ−ＯＤＳ−Ｒ５カラムにより、０．
１％トリフルオロ酢酸液１００％から５０分後に０．１
％トリフルオロ酢酸含有７０％アセトニトリル液１００
％になるような直線グラジエントで、流速１．０ｍｌで
精製した。なお、検出は波長２１０ｎｍの吸収で行っ
た。
いて、アプライドバイオシステム社のモデル４３０Ａペ
プチドシーケンサをにより、Ｉｌｅ−Ａｒｇ−Ｐｒｏの
構造のペプチドを合成した。合成したペプチドは、ワイ
エムシイ社のＹＭＣ−ＯＤＳ−Ｒ５カラムにより、０．
１％トリフルオロ酢酸液１００％から５０分後に０．１
％トリフルオロ酢酸含有７０％アセトニトリル液１００
％になるような直線グラジエントで、流速１．０ｍｌで
精製した。なお、検出は波長２１０ｎｍの吸収で行っ
た。
【００２４】
【発明の効果】以上説明したとおり、本発明によれば、
血圧上昇を抑える作用を有するアンジオテンシンＩ変換
酵素阻害ペプチドを、未利用物である魚介類の内臓から
安価に得ることができる。
血圧上昇を抑える作用を有するアンジオテンシンＩ変換
酵素阻害ペプチドを、未利用物である魚介類の内臓から
安価に得ることができる。
配列番号：１ 配列の長さ：３ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状（ｌｉｎｅａｒ） 配列の種類：ペプチド（peptide) 起源：生物名 カツオナス ペラミス（katsuwonas pel
amis)
amis)
【図１】実施例１においてＨＰＬＣ条件１で分離したチ
ャートを示す。
ャートを示す。
【図２】図１のピーク１をＨＰＬＣ条件２で分離したチ
ャートを示す。
ャートを示す。
【図３】図２のピーク２をＨＰＬＣ条件３で分離したチ
ャートを示す。
ャートを示す。
【図４】図３のピーク３をＨＰＬＣ条件４で分離したチ
ャートを示す。
ャートを示す。
【図５】図４のピーク４をＨＰＬＣ条件５で分離したチ
ャートを示す。
ャートを示す。
【図６】図５のピーク５をＨＰＬＣ条件６で分離したチ
ャートを示す。
ャートを示す。
Claims (3)
- 【請求項１】 Ｉｌｅ−Ａｒｇ−Ｐｒｏの構造を持つア
ンジオテンシンＩ変換酵素阻害ペプチド。ただし、Ｉｌ
ｅはイソロイシン、Ａｒｇはアルギニン、Ｐｒｏはプロ
リンを示す。 - 【請求項２】 魚介類を自己消化し、精製することを特
徴とする請求項１記載のアンジオテンシンＩ変換酵素阻
害ペプチドの製造方法。 - 【請求項３】 化学的合成法により合成することを特徴
とする請求項１記載のアンジオテンシンＩ変換酵素阻害
ペプチドの製造方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP4129816A JPH05306295A (ja) | 1992-04-24 | 1992-04-24 | アンジオテンシンｉ変換酵素阻害トリぺプチドとその製造方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP4129816A JPH05306295A (ja) | 1992-04-24 | 1992-04-24 | アンジオテンシンｉ変換酵素阻害トリぺプチドとその製造方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH05306295A true JPH05306295A (ja) | 1993-11-19 |
Family
ID=15018936
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP4129816A Pending JPH05306295A (ja) | 1992-04-24 | 1992-04-24 | アンジオテンシンｉ変換酵素阻害トリぺプチドとその製造方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH05306295A (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2003037912A3 (en) * | 2001-10-31 | 2004-01-29 | Abbott Lab | Tri-, tetra-, and penta-peptides having antiangiogenic activity |
| US7037897B2 (en) | 2001-10-31 | 2006-05-02 | Abbott Laboratories | TRI-, TETRA-, and penta-peptides having antiangiogenic activity |
-
1992
- 1992-04-24 JP JP4129816A patent/JPH05306295A/ja active Pending
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2003037912A3 (en) * | 2001-10-31 | 2004-01-29 | Abbott Lab | Tri-, tetra-, and penta-peptides having antiangiogenic activity |
| US7037897B2 (en) | 2001-10-31 | 2006-05-02 | Abbott Laboratories | TRI-, TETRA-, and penta-peptides having antiangiogenic activity |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP3318622B2 (ja) | プロリルエンドペプチダーゼ阻害剤 | |
| JPH05306296A (ja) | 魚類由来ペプチドとその製法 | |
| JPH05306295A (ja) | アンジオテンシンｉ変換酵素阻害トリぺプチドとその製造方法 | |
| JPH07313185A (ja) | ぺプチドの製造方法 | |
| JP3472801B2 (ja) | アンジオテンシンｉ変換酵素阻害剤およびその製造法 | |
| JPH06220088A (ja) | アンジオテンシンｉ変換酵素を阻害するトリペプチドおよびその製造法ならびにそれを含む食品 | |
| JP3119674B2 (ja) | 新規ペプチド、その製造法及び用途 | |
| JP2003024012A (ja) | アンジオテンシンｉ変換酵素阻害剤及び血圧降下性機能食品 | |
| US4784988A (en) | Peptides correlated to lysozyme | |
| JP3009718B2 (ja) | 新規ペプチド、その製造法及び用途 | |
| JP4485048B2 (ja) | プロリルエンドペプチダーゼ阻害ペプチド | |
| JPH0649096A (ja) | アンジオテンシンｉ変換酵素阻害ペプチドおよびその製造法ならびにそれを含む食品 | |
| JP3040389B2 (ja) | ペプチドの製造法 | |
| JPH051095A (ja) | アンジオテンシンｉ変換酵素阻害トリぺプチドとそれを製造する方法 | |
| JP3056543B2 (ja) | 新規ペプチド | |
| JPH0687886A (ja) | 新規オリゴペプチド、アンジオテンシン変換酵素阻害 剤及び血圧降下剤 | |
| NO168218B (no) | Elektrisk hengeisolator | |
| JP2001163896A (ja) | アンギオテンシン変換酵素阻害剤として用いられる新規ペプチド及びその製造方法 | |
| JP3118236B2 (ja) | アンジオテンシンｉ変換酵素阻害剤の製造方法 | |
| JPH051097A (ja) | アンジオテンシンｉ変換酵素阻害ペンタぺプチドとそれを製造する方法 | |
| JP3012291B2 (ja) | 新規ペプチド、その製造方法及び用途 | |
| JP3009719B2 (ja) | 新規ペプチド、その製造法及び用途 | |
| JPH07289283A (ja) | アンジオテンシンｉ変換酵素阻害ペプチド及びその製造方法 | |
| JP3115569B2 (ja) | 新規ペプチド | |
| JPH04159297A (ja) | アンジオテンシンｉ変換酵素を阻害するペプチドおよびその製造法 |