JPH0535128B2

JPH0535128B2 -

Info

Publication number: JPH0535128B2
Application number: JP24805785A
Authority: JP
Inventors: Yasuhiro Morinaka; Katsuhiko Izeki; Hiroyoshi Nishi; Toshiaki Watanabe; Toshuki Yuki; Yoko Sakurai
Original assignee: Mitsubishi Chemical Industries Ltd
Current assignee: Mitsubishi Chemical Corp
Priority date: 1985-11-07
Filing date: 1985-11-07
Publication date: 1993-05-25
Also published as: JPS62108814A

Description

【発明の詳細な説明】

［産業上の利用分野］本発明は、過酸化脂質生成抑制剤に関し、更に
詳しくは、諸種虚血性疾患並びにそれに伴う諸種
脳疾患、心疾患及び末梢循環障害の予防・治療剤
として有用な過酸化脂質生成抑制剤に関するもの
である。［従来技術及びその問題点］脳、心臓又は末梢における循環障害疾患におい
て、虚血（組織に血液が供給されない状態）によ
り、細胞膜から遊離されたアラキドン酸を始めと
する不飽和脂肪酸に対し、その周辺組織において
生じた活性酸素（OH・ラジカルスーパーオキ
サイド等）が作用して過酸化脂質が生成する。こ
のような変化は虚血中のみならず、虚血再開通後
の血液を介する再酸素化により更に加速度的に進
展し、不飽和脂肪酸に富む生体膜細胞の傷害、周
辺組織の破壊、血管内皮の破壊、血管攣縮又は浮
腫等を引き起こし、これら一連の反応の悪循環に
より病態が進展することが知られている。（「脳虚
血と細胞障害」浅野孝雄編集にゆーろん社、
1980；「脳虚血とフリーラジカル」浅野孝雄編集
にゆーろん社、1983）。従つて、活性酸素による過酸化脂質生成を抑制
すれば、組織の破壊、血管内皮の破壊、血管攣
縮、浮腫等を防ぐことが可能となり、従来の血流
を増加することにより循環改善をする薬物と全く
異なり、疾患の原因に対して作用する新しいタイ
プの循環障害予防・治療剤となる。特に近年、梗
塞部において血流を増加することの有効性が疑問
視され、急性期脳血管障害ではむしろ逆効果とさ
え言われており、このような薬剤は更に重要性を
増してきている。活性酸素により脂質過酸化を抑制する薬剤とし
ては、ビタミンＥ、次式：で示されるイデベノン（バイオケミカル・アン
ド・バイオフイジカル・リサーチ・コミユニケー
シヨンズ（Biochemical and Biophysical
Research Communications）125、1046
（1984）；武田研究所報44、30（1985））及び次式：で示されるニゾフエノン（ジヤーナル・オブ・ニ
ユーロケミストリー（Journal of Neuro−
chemistry）37、934（1981））が知られている。しかしながら、ビタミンＥは作用が不充分であ
り、イデベノン及びニゾフエノンは合成経路が長
く、またイデベノンは水への可溶化が困難なため
注射製剤化に問題が考えられ、ニゾフエノンは中
枢神経系の抑制作用が強い（医薬品研究16、１
（1985））という欠点を有する。ピラゾロン誘導体としては、種々のものが知ら
れている。特開昭51−13766号公報には、次式(A)：で示されるピラゾリン−５−オン誘導体及びその
抗血栓剤としての用途が；特開昭59−141517号公報には、同化合物の心筋
性虚血後の梗塞、炎症、喘息等に対する治療薬と
しての用途が；特開昭59−175469号公報には、次式：（式中、Ｘは基−CH₂CH₂O−、−CH₂CH₂S−等
を表わし、Ｒはアリール基を表わす。）で示されるピラゾリン−５−オン誘導体及びその
リポキシゲナーゼ阻害剤としての用途が；特開昭59−512号公報には、次式：（式中、R₁は水素原子又はアミノ基を表わし、
R₂はアリール基を表わし、Ｘは基−CH₂CH₂−
等を表わす。）で示されるピラゾリン−５−オン誘導体及びその
利尿剤、抗高血圧剤、抗血栓剤としての用途が；西独特許願第2836891号公報には、次式：（式中、R₁及びR₂は、水素原子又は置換基を表
わす。）で示されるピラゾリン−５−オン誘導体及びその
抗炎症剤としての用途が記載されているが、活性
酸素による脂質過酸化を抑制する作用に関する記
載はない。また、式(A)で示される化合物はラツ
ト、ウサギ及びイヌを用いた虚血性心疾患のモデ
ルでは有効とされるが、ヒト心臓の循環動態に近
似のブタを用いたモデルでは無効であり、この結
果はヒトにおける虚血性心疾患に無効であるとの
報告に良く一致している（ヨーロピアン・ジヤー
ナル・オブ・フアルマコロジイ（European
Journal of Pharmacology）114、189（1985））。
また脳虚血再開通後の保護に関する具体的な作用
についての記載もない。そこで、本発明者等は、活性酸素による脂質過
酸化を抑制する作用を有する薬剤を提供すること
を目的として鋭意研究を重ねた結果、次式（）：（式中、R₁は、水素原子、アリール基、炭素数
１〜５のアルキル基又は総炭素数３〜６のアルコ
キシカルボニルアルキル基を表わし；R₂は、水
素原子、アリールオキシ基、アリールメルカプト
基、炭素数１〜５のアルキル基又は炭素数１〜３
のヒドロキシアルキル基を表わし；あるいは、
R₁及びR₂は、共同してい炭素数３〜５のアルキ
レン基を表わし；R₃は、水素原子、炭素数１〜
５のアルキル基、炭素数５〜７のシクロアルキル
基、炭素数１〜３のヒドロキシアルキル基、ベン
ジル基、ナフチル基又は非置換の、又は炭素数１
〜５のアルキル基、炭素数１〜５のアルコキシ
基、炭素数１〜３のヒドロキシアルキル基、総炭
素数２〜５のアルコキシカルボニル基、炭素数１
〜３のアルキルメルカプト基、炭素数１〜４のア
ルキルアミノ基、総炭素数２〜８のジアルキルア
ミノ基、ハロゲン原子、トリフルオロメチル基、
カルボキシル基、シアノ基、水酸基、ニトロ基、
アミノ基及びアセトアミド基からなる群から選ば
れる同一若しくは異なる１〜３個の置換基で置換
されたフエニル基を表わす。）で示されるピラゾロン誘導体が強力な脂質過酸化
抑制作用を有し、実際の病態に近い脳虚血再開通
状態の動物モデルにおいて、脳波の回復等の保護
作用を有することを見出し、本発明を完成するに
至つた。［発明の構成］本発明の過酸化脂質生成抑制剤は、前記式
（）で示されるピラゾロン誘導体又はその薬学
的に許容される塩を有効成分とすることを特徴と
するものである。本発明に用いる化合物（）は、次式（′）
又は（″）：

【式】

【式】で示される構造をもとりうる。従つて、前記式
（′）又は（″）の構造をとる化合物も本発明
の有効成分に含まれる。前記式（）において、R₁の定義におけるア
リール基としては、フエニル基並びにメチル基、
ブチル基、メトキシ基、ブトキシ基、塩素原子及
び水酸基等の置換基で置換されたフエニル基等が
挙げられる。R₁、R₂及びR₃の定義における炭素
数１〜５のアルキル基としては、メチル基、エチ
ル基、プロピル基、イソプロピル基、ブチル基、
イソブチル基、sec−ブチル基、tert−ブチル基、
ペンチル基等が挙げられる。R₁の定義における
総炭素数３〜６のアルコキシカルボニルアルキル
基としては、メトキシカルボニルメチル基、エト
キシカルボニルメチル基、プロポキシカルボニル
メチル基、メトキシカルボニルエチル基、メトキ
シカルボニルプロピル基等が挙げられる。R₂の
定義におけるアリールオキシ基としては、フエノ
キシ基、ｐ−メチルフエノキシ基、ｐ−メトキシ
フエノキシ基、ｐ−クロロフエノキシ基、ｐ−ヒ
ドロキシフエノキシ基等が挙げられ、アリールメ
ルカプト基としては、フエニルメルカプト基、ｐ
−メチルフエニルメルカプト基、ｐ−メトキシフ
エニルメルカプト基、ｐ−クロロフエニルメルカ
プト基、ｐ−ヒドロキシフエニルメルカプト基等
が挙げられる。R₂及びR₃の定義における炭素数
１〜３のヒドロキシアルキル基としては、ヒドロ
キシメチル基、２−ヒドロキシエチル基、３−ヒ
ドロキシプロピル基等が挙げられる。R₃の定義
における炭素数５〜７のシクロアルキル基として
は、シクロペンチル基、シクロヘキシル基、シク
ロヘプチル基等が挙げられる。R₃の定義におい
て、フエニル基の置換基における炭素数１〜５の
アルコキシ基としては、メトキシ基、エトキシ
基、プロポキシ基、イソプロポキシ基、ブトキシ
基、ペンチルオキシ基等が挙げられ、総炭素数２
〜５のアルコキシカルボニル基としては、メトキ
シカルボニル基、エトキシカルボニル基、プロポ
キシカルボニル基、ブトキシカルボニル基等が挙
げられ、炭素数１〜３のアルキルメルカプト基と
しては、メチルメルカプト基、エチルメルカプト
基、プロピルメルカプト基等が挙げられ、炭素数
１〜４のアルキルアミノ基としては、メチルアミ
ノ基、エチルアミノ基、プロピルアミノ基、ブチ
ルアミノ基等が挙げられ、総炭素数２〜８のジア
ルキルアミノ基としては、ジメチルアミノ基、ジ
エチルアミノ基、ジプロピルアミノ基、ジブチル
アミノ基等が挙げられる。本発明に用いる化合物（）の具体例として
は、例えば、以下に示す化合物が挙げられる。 Γ３−メチル−１−フエニル−２−ピラゾリン−
５−オン Γ３−メチル−１−（２−メチルフエニル）−２−
ピラゾリン−５−オン Γ３−メチル−１−（３−メチルフエニル）−２−
ピラゾリン−５−オン Γ３−メチル−１−（４−メチルフエニル）−２−
ピラゾリン−５−オン Γ３−メチル−１−（３，４−ジメチルフエニル）
−２−ピラゾリン−５−オン Γ１−（４−エチルフエニル）−３−メチル−２−
ピラゾリン−５−オン Γ３−メチル−１−（４−プロピルフエニル）−２
−ピラゾリン−５−オン Γ１−（４−ブチルフエニル）−３−メチル−２−
ピラゾリン−５−オン Γ１−（３−トリフルオロメチルフエニル）−３−
メチル−２−ピラゾリン−５−オン Γ１−（４−トリフルオロメチルフエニル）−３−
メチル−２−ピラゾリン−５−オン Γ１−（２−メトキシフエニル）−３−メチル−２
−ピラゾリン−５−オン Γ１−（３−メトキシフエニル）−３−メチル−２
−ピラゾリン−５−オン Γ１−（４−メトキシフエニル）−３−メチル−２
−ピラゾリン−５−オン Γ１−（３，４−ジメトキシフエニル）−３−メチ
ル−２−ピラゾリン−５−オン Γ１−（４−エトキシフエニル）−３−メチル−２
−ピラゾリン−５−オン Γ３−メチル−１−（４−プロポキシフエニル）−
２−ピラゾリン−５−オン Γ１−（４−ブトキシフエニル）−３−メチル−２
−ピラゾリン−５−オン Γ１−（２−クロロフエニル）−３−メチル−２−
ピラゾリン−５−オン Γ１−（３−クロロフエニル）−３−メチル−２−
ピラゾリン−５−オン Γ１−（４−クロロフエニル）−３−メチル−２−
ピラゾリン−５−オン Γ１−（３，４−ジクロロフエニル）−３−メチル
−２−ピラゾリン−５−オン Γ１−（４−ブロモフエニル）−３−メチル−２−
ピラゾリン−５−オン Γ１−（４−フルオロフエニル）−３−メチル−２
−ピラゾリン−５−オン Γ１−（３−クロロ−４−メチルフエニル）−３−
メチル−２−ピラゾリン−５−オン Γ１−（３−メチルメルカプトフエニル）−３−メ
チル−２−ピラゾリン−５−オン Γ１−（４−メチルメルカプトフエニル）−３−メ
チル−２−ピラゾリン−５−オン Γ４−（３−メチル−５−オキソ−２−ピラゾリ
ン−１−イル）安息香酸 Γ１−（４−エトキシカルボニルフエニル）−３−
メチル−２−ピラゾリン−５−オン Γ１−（４−ニトロフエニル）−３−メチル−２−
ピラゾリン−５−オン Γ３−エチル−１−フエニル−２−ピラゾリン−
５−オン Γ１−フエニル−３−プロピル−２−ピラゾリン
−５−オン Γ１，３−ジフエニル−２−ピラゾリン−５−オ
ン Γ３−フエニル−１−（ｐ−トリル）−２−ピラゾ
リン−５−オン Γ１−（４−メトキシフエニル）−３−フエニル−
２−ピラゾリン−５−オン Γ１−（４−クロロフエニル）−３−フエニル−２
−ピラゾリン−５−オン Γ３，４−ジメチル−１−フエニル−２−ピラゾ
リン−５−オン Γ４−イソブチル−３−メチル−１−フエニル−
２−ピラゾリン−５−オン Γ４−（２−ヒドロキシエチル）−３−メチル−１
−フエニル−２−ピラゾリン−５−オン Γ３−メチル−４−フエノキシ−１−フエニル−
２−ピラゾリン−５−オン Γ３−メチル−４−フエニルメルカプト−１−フ
エニル−２−ピラゾリン−５−オン Γ３，3′，４，５，６，７−ヘキサヒドロ−２−
フエニル−2H−インダゾール−３−オン Γ３−（エトキシキカルボニルメチル）−１−フエ
ニル−２−ピラゾリン−５−オン Γ１−フエニル−２−ピラゾリン−５−オン Γ３−メチル−２−ピラゾリン−５−オン Γ１，３−ジメチル−２−ピラゾリン−５−オン Γ１−エチル−３−メチル−２−ピラゾリン−５
−オン Γ１−ブチル−３−メチル−２−ピラゾリン−５
−オン Γ１−（２−ヒドロキエチル）−３−メチル−２−
ピラゾリン−５−オン Γ１−シクロヘキシル−３−メチル−２−ピラゾ
リン−５−オン Γ１−ベンジル−３−メチル−２−ピラゾリン−
５−オン Γ１−（α−ナフチル）−３−メチル−２−ピラゾ
リン−５−オン Γ１−メチル−３−フエニル−２−ピラゾリン−
５−オン Γ３−メチル−１−（４−メチルフエニル）−２−
ピラゾリン−５−オン Γ１−（４−ブチルフエニル）−３−メチル−２−
ピラゾリン−５−オン Γ１−（４−メトキシフエニル）−３−メチル−２
−ピラゾリン−５−オン Γ１−（４−ブトキシフエニル）−３−メチル−２
−ピラゾリン−５−オン Γ１−（４−クロロフエニル）−３−メチル−２−
ピラゾリン−５−オン Γ１−（４−ヒドロキシフエニル）−３−メチル−
２−ピラゾリン−５−オン Γ１−（３，４−ジヒドロキシフエニル）−３−メ
チル−２−ピラゾリン−５−オン Γ１−（２−ヒドロキシフエニル）−３−メチル−
２−ピラゾリン−５−オン Γ１−（３−ヒドロキシフエニル）−３−メチル−
２−ピラゾリン−５−オン Γ１−（４−ヒドロキシフエニル）−３−メチル−
２−ピラゾリン−５−オン Γ１−（３，４−ヒドロキシフエニル）−３−メチ
ル−２−ピラゾリン−５−オン Γ１−（４−ヒドロキシフエニル）−３−フエニル
−２−ピラゾリン−５−オン Γ１−（４−ヒドロキシメチルフエニル）−３−メ
チル−２−ピラゾリン−５−オン Γ１−（４−アミノフエニル）−３−メチル−２−
ピラゾリン−５−オン Γ１−（４−メチルアミノフエニル）−３−メチル
−２−ピラゾリン−５−オン Γ１−（４−エチルアミノフエニル）−３−メチル
−２−ピラゾリン−５−オン Γ１−（４−ブチルアミノフエニル）−３−メチル
−２−ピラゾリン−５−オン Γ１−（４−ジメチルアミノフエニル）−３−メチ
ル−２−ピラゾリン−５−オン Γ１−（アセトアミドフエニル）−３−メチル−２
−ピラゾリン−５−オン Γ１−（４−シアノフエニル）−３−メチル−２−
ピラゾリン−５−オン本発明に用いる化合物の一部は、染料等の中間
原料として用いられる既知化合物であるが、医薬
としての用途は知られていない。本発明に用いる化合物（）の塩のうち、薬学
的に許容される塩としては、塩酸、硫酸、臭化水
素塩、リン酸等の鉱酸との塩；メタンスルホン
酸、ｐ−トルエンスルホン酸、ベンゼンスルホン
酸、酢酸、グリコール酸、グルクロン酸、マレイ
ン酸、フマル酸、シユウ酸、アスコルビン酸、ク
エン酸、サリチル酸、ニコチン酸、酒石酸等の有
機酸との塩；ナトリウム、カリウム等のアルカリ
金属との塩；マグネシウム、カルシウム等のアル
カリ土類金属との塩；アンモニア、トリス（ヒド
ロキシメチル）アミノメタン、Ｎ，Ｎ−ビス（ヒ
ドロキシエチル）ピペラジン、２−アミノ−２−
メチル−１−プロパノール、エタノールアミン、
Ｎ−メチルグルカミン、Ｌ−グルカミン等のアミ
ンとの塩が挙げられる。本発明に用いる化合物は、合目的的な任意の方
法で合成することができるが、好ましい方法の１
例を次に示す。（式中、R₁、R₂及びR₃は前記と同義であり、
R′は炭素数１〜５のアルキル基を表わす。）即ち、式（）で示されるβ−ケト酸誘導体と
式（）で示されるヒドラジン誘導体を、例えば
メタノール、エタノール等のアルコール類若しく
はベンゼン、トルエン等芳香族類のような溶媒の
存在下又は無溶媒で、必要に応じて、炭酸カリウ
ム、ナトリウムエトキシド、水酸化ナトリウム、
水酸化カリウム、酢酸ナトリウム等の塩基、塩
酸、硫酸、臭化水素酸等の鉱酸、酢酸、パラトル
エンスルホン酸等の有機酸等の触媒の存在下、10
〜200℃の温度で反応させることにより、化合物
（）を得ることができる。また、R₃のアリール基の置換基によつては次
に示すようにして目的物を合成することができ
る。（式中、R₁、R₂及びR₃は前記と同義であり、
R″は水素原子、炭素数１〜５のアルキル基又は
総炭素数２〜６のアルコキシカルボニル基を表わ
す。）該置換基が水酸基である目的物は、例えば適当
なアルコキシ基を臭化水素酸又はルイス酸で分解
することにより得ることができる。該置換基がヒ
ドロキシメチル基である目的物は、例えばカルボ
ン酸又はその誘導体を適当な還元剤、例えば水素
化アルミニウムリチウム、水素化ホウ素ナトリウ
ム、ジボランで還元することにより得ることがで
きる。該置換基がアミノ基である目的物は、例え
ば、ニトロ基を適当な条件、例えば水素−Pd／
Ｃ、塩酸−塩化第二スズで還元することにより得
ることができる。化合物（）を臨床に応用するに際し、経口的
に用いる場合は、成人に対し１回化合物（）と
して１〜100mgを１日１〜３回投与するのが好ま
しく、静脈注射の場合は、成人に対し１回化合物
（）として0.01〜10mgを１日２〜５回投与又は
これらの用量を点滴持続注入するのが好ましく、
また直腸内投与の場合は、１回化合物（）とし
て、１〜100mgを１日１〜３回投与するのが好ま
しい。また、以上の投与量は、年齢、病態、症状
により適宜増減することが更に好ましい。また、経口又は直腸内投与の場合は、徐放化製
剤として用いてもよい。製剤化に際しては、化合物（）又はその薬学
的に許容される塩の一種又は二種以上を、通常用
いられる製薬用担体、賦形剤その他の添加物を含
む組成物として使用するのふつうである。医薬担
体は固体でも液体でもよく、固体担体の例として
は乳糖、白陶土（カオリン）、シヨ糖、結晶セル
ロース、コーンスターチ、タルク、寒天、ペクチ
ン、アカシア、ステアリン酸、ステアリン酸マグ
ネシウム、レシチン、塩化ナトリウム等が挙げら
れる。液状の担体の例としては、シロツプ、グリセリ
ン、落花生油、ポリビニルピロリドン、オリーブ
湯、エタノール、ベンジルアルコール、プロピレ
ングリコール、水等が挙げられる。種々の剤形をとることができ、固体担体を用い
る場合は、錠剤、散剤、顆粒剤、硬ゼラチンカプ
セル剤、坐剤又はトローチ剤とすることができ
る。固体担体の量は広範に変えることができるが
好ましくは約１mg〜約１ｇとする。液状の担体を用いる場合は、シロツプ、乳液、
軟ゼラチンカプセル、更にアンプル入りのような
滅菌注射液又は水性若しくは非水性の懸濁液とす
ることができる。また、化合物（）をシクロデキストリン包接
体又はリポソーム中に入れる等の操作をして、用
いることもできる。［発明の効果］本発明の過酸化脂質生成抑制剤は、優れた作用
を有し、諸種虚血性疾患若しくはそれに基づく諸
種疾患、即ち、脳梗塞、脳卒中等の脳血管障害、
又はそれらに起因する脳機能低下、血管性痴呆、
加齢に伴う脳血管組織病変等の諸種脳疾患、心筋
梗塞、心不全等心筋虚血に基づく諸種心疾患及び
諸種末梢循環障害等の予防・治療剤として有用で
ある。［発明の実施例］以下、合成例及び実施例に基づいて本発明を更
に詳細に説明するが、これらは、本発明の範囲を
何ら制限するものではない。合成例１エタノール50ml中にアセト酢酸エチル13.0ｇ及
びフエニルヒドラジン10.8ｇを加え、３時間還流
撹拌した。放冷後、析出した結晶を取し、エタ
ノールより再結晶して３−メチル−１−フエニル
−２−ピラゾリン−５−オン（化合物No.１）11.3
ｇを無色結晶として得た。収率 65％融点 127.5〜128.5℃ 合成例２〜43 合成例１と同様にして表１に化合物No.２〜43と
して示す化合物を合成した。合成例 44 １−（２−メトキシフエニル）−３−メチル−２
−ピラゾリン−５−オン1.80ｇを47％臭化水素酸
18ml及び酢酸18mlの混合液中に加え、6.5時間還
流撹拌した。溶媒留去後、NaHCO₃水溶液を加
えてPH４とした後、酢酸エチルで抽出した。有機
層を乾燥し、濃縮後、残渣をエタノールから再結
晶して１−（２−ヒドロキシフエニル）−３−メチ
ル−２−ピラゾリン−５−オン（化合物No.44）
1.19ｇを無色結晶として得た。収率 67％融点 212.5〜214℃ 合成例 45〜48 合成例44と同様にして表１に化合物No.45〜48と
して示す化合物を合成した。合成例 49 無水クロロホルム250ml中に４−（３−メチル−
５−オキソ−２−ピラゾリン−１−イル）安息香
酸5.0ｇ及びトリエチルアミン25mlを加え、更に
氷冷下、クロル炭酸エチル12.5mlを滴下した。溶
媒留渠後、残渣をTHF200mlに溶解させ、不溶物
を去後、液に、NaBH₄2.08ｇを水60mlに溶
解した溶液を滴下し、室温で２時間撹拌した。溶
媒留去後、残渣に水を加え、希塩酸でPH４〜５に
調節した後、クロロホルムで抽出した。有機層を
乾燥し、濃縮後、シリカゲルカラムクロマト上で
展開溶媒としてクロロホルム−エタノール
（100：１）を用いて精製し、クロロホルム−エチ
ルエーテルで再結晶して１−（４−ヒドロキシメ
チルフエニル）−３−メチル−２−ピラゾリン−
５−オン（化合物No.49）1.16ｇを無色結晶として
得た。収率 35％融点 139〜140℃ 合成例 50 メタノール310ml中に３−メチル−１−（４−ニ
トロフエニル）−２−ピラゾリン−５−オン500mg
を溶解し、５％Pd／C50mg及び濃塩酸0.6mlを加
え、水素雰囲気下で撹拌し、計算量の水素を消費
させた後、触媒を去し、液を濃縮した。残渣
をメタノール−エチルエーテルで再結晶して１−
（４−アミノフエニル）−３−メチル−２−ピラゾ
リン−５−オン二塩酸塩（化合物No.50）409mgを
淡褐色結晶として得た。収率 68％融点 196〜200℃ 合成例 51 合成例１と同様にして表１に化合物No.51として
示す化合物を合成した。実施例１ (1) 脂質過酸化抑制作用 (a) 脳ホモジエネートの作製ウイスター（Wistar）系雄性ラツトを用
い、以下の操作手順に従つて脳ホモジエネー
トを作製した。ペントバルビタールナトリウ
ム45mg／Kgの腹腔内投与で麻酔下に開胸し、
左心室からポリエチレンチユーブを大動脈内
に挿入し固定した。次いで、このチユーブを
介して氷冷した50ｍＭリン酸塩緩衝生理食塩
水（PH7.4）（以下「PBS」という。）で脳潅
流を行い。全脳を摘出した。小脳を除去後、
大脳の湿重量を測定し、その９倍量のPBS
を加え、氷水中においてテフロンホモジエナ
イザーで破砕し均質化した。この脳ホネジエ
ネートを４℃において2200rpmで10分間遠心
分離後、上清部0.3mlを共栓付遮光試験管に
分取し、薬物評価用脳ホネジエネートとし
た。 (b) 被験薬の評価 (a)で調整した脳ホモジエネートにPBS0.6
ml及び被験薬のエタノール溶液10μ（終濃
度500μM又は0.3〜100μMの公比３での濃度）
を添加し、37℃の温浴中で30分間加温した。
次いで、35％過塩素酸水溶液200μを添加
後、４℃において2600rpmで10分間遠心分離
し、上清を得た。また、ブランク測定用とし
て被験薬のエタノール溶液10μの代りにエ
タノール10μを添加し（ブランク）、同様
に操作した。 (c) 過酸化脂質の定量 (b)で得た上清部0.1mlに8.1％ドデシル硫酸
ナトリウム水溶液0.2ml、20％酢酸緩衝液
（PH3.5）1.5ml、0.67％２−チオバルビツール
酸水溶液1.5ml及び蒸留水0.7mlを加えて混和
した。次いで、この混液を沸騰水浴中で60分
間加熱後、氷水で急速に冷却し、蒸留水1.0
ml及びピリジン−ブタノール混液（１：15）
5.0mlを加え、約30秒間振盪後、3000rpmで
10分間遠心分離し、その上清部を過酸化脂質
測定用試料とした。なお、リポパーオキシド
−テスト（Lipoperoxide−test）（和光純薬
(株)製；１，１，３，３−テトラエトキシプロ
パン5nmol／ml含有）0.1mlを(b)で得た脳ホ
モジエネートの代りに添加し、標準液とし
た。過酸化脂質は蛍光分光光度計（(株)日立製作
所製204型）を用い、励起波長515nｍ、蛍光
波長550nｍで測定し、次式に従つて過酸化
脂質量（TBA値）を求めた。 TAB値＝0.5×ｆ／Ｆ×1.1／0.3×10（nmol／ml）Ｆ；標準液の蛍光強度ｆ；被験薬の蛍光強度次いで、(b)のブランクのTAB値に対する
被験薬各濃度の抑制率を求め、最小二乗法に
従つてIC₅₀値を算出した。結果を表１に示
す。 (2) 脳虚血再開通モデルにおける保護作用体重約400ｇのウイスター（Wistar）系雄性
ラツトにｄ−ツボクラリン0.6mgを筋肉内投与
して不動化し、気管カニユーレ装置後、人工呼
吸下に頭部を脳定位固定装置に保定した。頭皮
を切開し、頭蓋骨を穿孔後、硬膜下左大脳皮質
前頭葉表面上に脳波導出用の電極を存置した。
電極を歯科用セメントを用いて頭蓋骨に固定
後、動物を背位に保持した。次いで、全身圧測
定用のカニユーレを左大腿動脈内に、ｄ−ツボ
クラリン追加投与用のカニユーレを左大腿静脈
内にそれぞれ留置した。心拍数は動脈波によつ
て心拍数計を駆動し測定記録した。血圧、心拍数及び脳波の諸パラメーターの安
定後に、１％トラガカントゴム溶液で１ml／Kg
となるように懸濁調製した本発明の有効成分10
mg／Kgを脳虚血負荷30分前に十二脂腸内に直接
投与した。対照群には、同容量の１％トラガカ
ントゴム溶液のみを同様に投与した。薬物投与10〜20分後に脳波、血圧及び心拍数
を多用途監視記録装置（日本光電(株)製、RM−
85型）上で監視しながら、脳虚血負荷のために
以下の術式に従つて操作を行つた。先ず、左肋軟骨端部で肋骨を遊離し、開胸し
た。次いで、大動脈起始部で露出した左総頚動
脈と左椎骨動脈を同時に、続いて腕頭動脈を、
動脈クリツプを用いて薬物投与30分後に閉塞す
ることによつて、10分間の頭部血流の遮断を行
つた。頭部血流の再開通は、前記各部位に装着した
２本の動脈クリツプを同時に解除することによ
つて行つた。薬物の脳虚血負荷再開通後の障害に対する保
護作用は、脳波の回復の有無によつて検討し
た。なお、実験中は保温マツトを用い、動物の直
腸温を37〜38℃に保持した。また、直腸温は脳
波、大腿動脈圧及び心拍数と共にレコーダー上
に連続描記した。脳虚血を10分間負荷したところ、虚血直後か
ら脳波の電圧は低下し、約15秒も経過すると脳
波は消失、平坦化した。このような虚血負荷中
の脳波の平坦化は対照群及び本発明の有効成分
投与群の双方に共通して認められた。 10分間の脳虚血を解除し、再開通しても、対
照群では全例脳波の出現は全く認められず、虚
血負荷中と同様に平坦化されたままに推移し
た。このような平坦脳波の持続によつて、動物
は再開通後平均75分には死亡した。しかしながら、本発明の有効成分投与群で
は、再開通中に脳波が回復出現し、いわゆる脳
機能の回復と共に心脈管系の機能が賦活、正常
化された。これらの総合的な結果として、動物
の生存時間は明らかに延長された。結果を表２
に示す。実施例２心筋虚血保護作用心筋を栄養する冠血流が何らかの原因で途絶
（血流障害）し、もしくは再開通（再開通障害）
されると心筋は傷害される（心筋虚血障害）。こ
のような心筋障害の程度は虚血時間の延長ととも
に進展し、いわゆる心筋梗塞や心不全等の諸種虚
血性心疾患の原因となる。そこで、代表化合物として化合物（）の虚血
心筋保護効果を以下のようにして検討した。実験には体重300−400ｇの雄性Wistarラツト
を使用した。ペントバルビタールナトリウム50
mg／Kg腹腔内投与による麻酔下、心臓を95％O₂
−５％CO₂で酸素化したKrebs−Henseleit
bicarbonate（KH）液中に摘出し、直ちに大動脈
カニユーレを上行大動脈に挿入固定し、
Langendorff法（75cmH₂O）による潅流を開始し
た。続いて、左心房カニユーレを左心房に挿入固
定した。この後、更にLangendorff法による潅流
を10分間続けた後、左心房カニユーレを開放し
working heart法（前負荷10cmH₂O、後負荷80cm
H₂O）による潅流（American Journal of
Physiology、212、804（1967））に切り換え15分
間潅流した後、市原らの方法（Journal of
Cardiovascular Pharmacology，５、745
（1983））に従い大動脈弁上にかかかる後負荷を除
去し20分間虚血にした。虚血５分前から被験薬を
含む潅流液に切り換え虚血中も被験薬を含む潅流
液で潅流した。再潅流は、後後負荷を80cmH₂O
にして被験薬を含まない潅流液で30分間行つた。
心機能として冠潅流量（CF）、心拍出量（CO）、
心拍数（HR）、大動脈圧（AP）及びレイト・プ
レツシヤー・プロダクト（rate pressure
product）（HR×AP）を測定した。CFは10mlの
メスシリンダーにより測定した。COは左心房カ
ニユーレの直前に設置した観血的血流測定プロー
ブ（日本光電FF−030γ 3φ）により電磁血流計
（日本光電MFV−2100）及び生体電気用アンプ
（日本光電 AB−621G）を用いて測定した。AP
は大動脈カニユーレに接続した圧トランスデユー
サー（日本光電MPU−0.5）によりひずみ圧力用
アンプ（日本光電AP−601G）を用いて測定し
た。HRは瞬時心拍計（日本光電AT−601G）に
より測定した。HR×APはHRに収縮期大動脈圧
を乗じて算出した。潅流液には95％O₂−５％CO₂で酸素化したKH
液を37℃に加温して使用した。KH液の組成（単
位ｍＭ）は以下の通りである。NaCl118、
KCl4.7、CaCl₂2.5、MgSO₄1.2、KH₂PO₄1.2、
NaHCO₃25、グルコース11。被験薬の化合物（）は、１当量の1N−
NaOH水溶液に溶かした後、KH液で希釈して用
いた。被験薬処置後の心機能の変化及び再潅流時の心
機能の回復は、被験薬処置前値に対する百分率で
示した。実験結果はすべて平均値±標準誤差で示
した。心筋虚血を20分間負荷し、再びKH液を潅流後
30分における心機能回復の程度を、心拍出量
（CO）を指標にすると化合物（）は平均で24％
の回復作用を示した。しかし化合物（）のかわ
りに同用量の生理食塩水を投与した陰性対照群の
それは平均３％と軽微な作用であつた（表３）。

【表】また虚血負荷再潅流30分後における心拍出量
（CO）が50％以上に達した例を、心機能回復例と
して表４に示した。

【表】以上の結果から、化合物（）は心筋虚血保護
作用を有すると言える。実施例３本発明の過酸化脂質生成抑制剤の製剤化 (1) 錠剤下記成分を常法に従つて混合し、慣用の装置
により打錠した。本発明の有効成分 10mg 結晶セルロース 21mg コンスターチ 33mg 乳糖 65mg ステアリン酸マグネシウム 1.3mg (2) 軟カプセル剤下記成分を常法に従つて混合し、軟カプセル
に充填した。本発明の有効成分 10mg オリーブ油 105mg レシチン 6.5mg (3) 注射用製剤下記成分を常法に従つて混合して１mlアンプ
ルを調製した。本発明の有効成分 0.7mg 塩化ナトリウム 3.5mg 注射用蒸留水 1.0mg

【表】

Claims

【特許請求の範囲】１次式：（式中、R₁は、水素原子、アリール基、炭素数
１〜５のアルキル基又は総炭素数３〜６のアルコ
キシカルボニルアルキル基を表わし；R₂は、水
素原子、アリールオキシ基、アリールメルカプト
基、炭素数１〜５のアルキル基又は炭素数１〜３
のヒドロキシアルキル基を表わし；あるいは、
R₁及びR₂は、共同して炭素数３〜５のアルキレ
ン基を表わし；R₃は、水素原子、炭素数１〜５
のアルキル基、炭素数５〜７のシクロアルキル
基、炭素数１〜３のヒドロキシアルキル基、ベン
ジル基、ナフチル基又は非置換の、又は炭素数１
〜５のアルキル基、炭素数１〜５のアルコキシ
基、炭素数１〜３のヒドロキシアルキル基、総炭
素数２〜５のアルコキシカルボニル基、炭素数１
〜３のアルキルメルカプト基、炭素数１〜４のア
ルキルアミノ基、総炭素数２〜８のジアルキルア
ミノ基、ハロゲン原子、トリフルオロメチル基、
カルボキシル基、シアノ基、水酸基、ニトロ基、
アミノ基及びアセトアミド基からなる群から選ば
れる同一若しくは異なる１〜３個の置換基で置換
されたフエニル基を表わす。）で示されるピラゾロン誘導体又はその薬学的に許
容される塩を有効成分とすることを特徴とする過
酸化脂質生成抑制剤。