JPH0545237B2 - - Google Patents
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- Publication number
- JPH0545237B2 JPH0545237B2 JP59230360A JP23036084A JPH0545237B2 JP H0545237 B2 JPH0545237 B2 JP H0545237B2 JP 59230360 A JP59230360 A JP 59230360A JP 23036084 A JP23036084 A JP 23036084A JP H0545237 B2 JPH0545237 B2 JP H0545237B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- tryptophan
- methanol
- culture
- reaction
- indole
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Lifetime
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- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Description
【発明の詳細な説明】
（産業上の利用分野）
本発明は高収率にトリプトフアンを酵素的生合
成する方法に関するものである。
成する方法に関するものである。
更に詳細には、本発明は、グリシン、メタノー
ルおよびインドールを原料として、セリン経路を
有し、プロタミノバクター（Protaminobacter）
属に属するメタノール資化性菌の培養物または培
養物から分離した培養菌体または培養菌体の処理
物およびトリプトフアン・シンターゼの生産菌の
存在下で、酵素作用によりＬ−トリプトフアンを
高収率に製造する方法に関するものである。
ルおよびインドールを原料として、セリン経路を
有し、プロタミノバクター（Protaminobacter）
属に属するメタノール資化性菌の培養物または培
養物から分離した培養菌体または培養菌体の処理
物およびトリプトフアン・シンターゼの生産菌の
存在下で、酵素作用によりＬ−トリプトフアンを
高収率に製造する方法に関するものである。
（従来の技術）
近年、Ｌ−トリプトフアンは医薬用のみならず
飼料添加物としての効果が世の注目を集めるに至
り、工業的規模による安価な本物質生産の期待が
高まつてきている。
飼料添加物としての効果が世の注目を集めるに至
り、工業的規模による安価な本物質生産の期待が
高まつてきている。
トリプトフアンの製造法に関しては、合成法、
発酵法または酵素法などの方法が知られている。
しかし、工業的実施においては原料面、収率面、
工程面などで尚幾多の欠点が指摘されているが、
なかでも酵素的生合成における収率の低さは重大
な欠点となつている。
発酵法または酵素法などの方法が知られている。
しかし、工業的実施においては原料面、収率面、
工程面などで尚幾多の欠点が指摘されているが、
なかでも酵素的生合成における収率の低さは重大
な欠点となつている。
（発明が解決しようとする問題点）
本発明者らは、収率を高めた酵素的生合成によ
るＬ−トリプトフアンの新しい製造法に関して鋭
意研究を重ねた結果、セリン経路を有するメタノ
ール資化性菌の培養物または培養菌体または培養
菌体の処理物およびトリプトフアン・シンターゼ
生産菌の存在下で、グリシン、メタノールおよび
インドールを反応させるとＬ−トリプトフアンが
高収率で生成することを見出し、この知見に基づ
いて本発明を完成した。
るＬ−トリプトフアンの新しい製造法に関して鋭
意研究を重ねた結果、セリン経路を有するメタノ
ール資化性菌の培養物または培養菌体または培養
菌体の処理物およびトリプトフアン・シンターゼ
生産菌の存在下で、グリシン、メタノールおよび
インドールを反応させるとＬ−トリプトフアンが
高収率で生成することを見出し、この知見に基づ
いて本発明を完成した。
（問題点を解決するための手段）
本発明に使用するセリン経路を有するメタノー
ル資化性菌としては、例えばプロタミノバクタ
ー・ルバー（Protaminobacter ruber）Pr NR
−１（FERMP−7878）が用いられ、トリプトフ
アン・シンターゼを生産する微生物としては、例
えばエシエリヒア・コリ（Escherichia coli）
ATCC 27325、ノイロスポラ・クラツサ
（Neurospora crassa）ATCC14692などが用いら
れる。
ル資化性菌としては、例えばプロタミノバクタ
ー・ルバー（Protaminobacter ruber）Pr NR
−１（FERMP−7878）が用いられ、トリプトフ
アン・シンターゼを生産する微生物としては、例
えばエシエリヒア・コリ（Escherichia coli）
ATCC 27325、ノイロスポラ・クラツサ
（Neurospora crassa）ATCC14692などが用いら
れる。
これらの微生物を培養するための培地組成とし
ては、炭素源、窒素源、無機物およびその他の微
量栄養素が用いられる。プロタミノバクター属に
属する微生物を培養するための炭素源としては、
メタノールが0.5〜３％の濃度で用いられる。ト
リプトフアン・シンターゼを生産する微生物の場
合は、炭素源としてグルコース、グリセロール、
フラクトース、シユクロース、マルトース、マン
ノース、澱粉、澱粉加水分解液、糖蜜などの種々
の炭水化物が使用できる。また培地に少量のトリ
プトフアンを添加するのが好都合でその添加量は
おゝよそ、培地中に0.1〜0.5重量％になるような
量である。
ては、炭素源、窒素源、無機物およびその他の微
量栄養素が用いられる。プロタミノバクター属に
属する微生物を培養するための炭素源としては、
メタノールが0.5〜３％の濃度で用いられる。ト
リプトフアン・シンターゼを生産する微生物の場
合は、炭素源としてグルコース、グリセロール、
フラクトース、シユクロース、マルトース、マン
ノース、澱粉、澱粉加水分解液、糖蜜などの種々
の炭水化物が使用できる。また培地に少量のトリ
プトフアンを添加するのが好都合でその添加量は
おゝよそ、培地中に0.1〜0.5重量％になるような
量である。
窒素源としては、アンモニア、塩化アンモニウ
ム、硫酸アンモニウム、炭酸アンモニウム、酢酸
アンモニウムなどの各種の無機および有機アンモ
ニウム塩類あるいは肉エキス、酵母エキス、コー
ン・スチープ・リカー、カゼイン加水分解物、フ
イツシユミー“あるいはその消化物、脱脂大豆粕
あるいはその消化物などの天然有機窒素源が使用
可能である。
ム、硫酸アンモニウム、炭酸アンモニウム、酢酸
アンモニウムなどの各種の無機および有機アンモ
ニウム塩類あるいは肉エキス、酵母エキス、コー
ン・スチープ・リカー、カゼイン加水分解物、フ
イツシユミー“あるいはその消化物、脱脂大豆粕
あるいはその消化物などの天然有機窒素源が使用
可能である。
更に無機物として、燐酸第一水素カリウム、燐
酸第二水素カリウム、硫酸マグネシウム、塩化ナ
トリウム、硫酸第一鉄なども必要に応じて使用す
ると好都合である。
酸第二水素カリウム、硫酸マグネシウム、塩化ナ
トリウム、硫酸第一鉄なども必要に応じて使用す
ると好都合である。
培養は振盪培養あるいは通気攪拌深部培養など
の好気的条件下で行なう。培養温度は20〜50℃で
あり、培養中のPHは中性附近に維持することが望
ましい。培養期間は通常１〜５日間である。
の好気的条件下で行なう。培養温度は20〜50℃で
あり、培養中のPHは中性附近に維持することが望
ましい。培養期間は通常１〜５日間である。
かくして得られた２種の微生物の培養液を混合
したものは、グリシン、メタノールおよびインド
ールからＬ−トリプトフアンを生成する酵素系を
含有するものであり、従つて菌体を除去すること
なく、これにグリシン、メタノールおよびインド
ールを加えて反応せしめてもよく、また、培養液
から遠心分離等により採取した生菌体、その乾燥
菌体または生菌体を磨砕、自己消化、音波処理等
により得た菌体処理物またはこれらの菌体の抽出
物より得られる酵素区分または菌体もしくは酵素
区分を固定化した菌体処理物を、グリシン、メタ
ノールおよびインドールを溶解もしくは懸濁せし
めた水性溶媒中に加えて反応せしめてもよい。
したものは、グリシン、メタノールおよびインド
ールからＬ−トリプトフアンを生成する酵素系を
含有するものであり、従つて菌体を除去すること
なく、これにグリシン、メタノールおよびインド
ールを加えて反応せしめてもよく、また、培養液
から遠心分離等により採取した生菌体、その乾燥
菌体または生菌体を磨砕、自己消化、音波処理等
により得た菌体処理物またはこれらの菌体の抽出
物より得られる酵素区分または菌体もしくは酵素
区分を固定化した菌体処理物を、グリシン、メタ
ノールおよびインドールを溶解もしくは懸濁せし
めた水性溶媒中に加えて反応せしめてもよい。
反応における反応原料および基質等の使用量に
は特に制限はなく、またこの種の反応において通
常採用される温度、PHなどの条件をそのまゝ採用
することができる。
は特に制限はなく、またこの種の反応において通
常採用される温度、PHなどの条件をそのまゝ採用
することができる。
反応液中に生成したＬ−トリプトフアンを単離
するには、イオン交換樹脂、活性炭等による吸脱
着処理等の常法により行なう。その他公知の濃縮
法、沈澱法によつてもＬ−トリプトフアンを回収
することができる。
するには、イオン交換樹脂、活性炭等による吸脱
着処理等の常法により行なう。その他公知の濃縮
法、沈澱法によつてもＬ−トリプトフアンを回収
することができる。
本発明に使用する原料であるグリシン、メタノ
ールおよびインドールはいづれも工業上安価に製
造される原料であり、これらの原料を用いて酵素
作用によりＬ−トリプトフアンを製造する本発明
は産業上極めて有利なＬ−トリプトフアンの製造
方法を提供するものである。
ールおよびインドールはいづれも工業上安価に製
造される原料であり、これらの原料を用いて酵素
作用によりＬ−トリプトフアンを製造する本発明
は産業上極めて有利なＬ−トリプトフアンの製造
方法を提供するものである。
（実施例）
次に実施例により本発明を更に詳細に説明する
が、実施例における生成したＬ−トリプトフアン
の定性確認は、ペーパークロマトグラム上のＬ−
トリプトフアンのRf値、紫外部吸収値、エール
リツヒ試薬による発色により行ない、また、定量
は液体クロマトグラフイーで行なつた。
が、実施例における生成したＬ−トリプトフアン
の定性確認は、ペーパークロマトグラム上のＬ−
トリプトフアンのRf値、紫外部吸収値、エール
リツヒ試薬による発色により行ない、また、定量
は液体クロマトグラフイーで行なつた。
実施例 １
プロタミノバクター・ルバーPr NR−１
（FERMP−7878）を500mlの坂口フラスコ中の第
１表に示す組成の培地100mlに接種し、30℃で48
時間振盪培養を行なつた。
（FERMP−7878）を500mlの坂口フラスコ中の第
１表に示す組成の培地100mlに接種し、30℃で48
時間振盪培養を行なつた。
第１表
NH4H2PO4 4g／
KH2PO4 2g／
Na2HPO4・12H2O 3g／
MgSO4・7H2O 0.2g／
CaCl2・2H2O 10mg／
FeSO4・7H2O ５mg／
MnSO4・nH2O ５mg／
CoSO4・7H2O １mg／
ZnSO4・7H2O 0.18mg／
Na2MoO4・2H2O 0.23mg／
H3BO3 0.28mg／
CuSO4・5H2O 0.016mg／
Methanol 10ml
PH7.0
培養終了後、遠心分離して湿菌体を得た。
一方、トリプトフアン・シンターゼ生産菌株で
あるエシエリヒア・コリATCC27325を500mlの坂
口フラスコ中の第２表に示す組成の培地100mlに
接種し、30℃で24時間振盪培養を行なつた。
あるエシエリヒア・コリATCC27325を500mlの坂
口フラスコ中の第２表に示す組成の培地100mlに
接種し、30℃で24時間振盪培養を行なつた。
第２表
肉エキス 10ｇ／
ペプトン ５ｇ／
酵母エキス １ｇ／
KH2PO4 ２ｇ／
PH7.0
培養終了後、遠心分離して湿菌体を得た。
次に第３表に示す組成の反応液を用いて、30
℃、PH7.0で24時間反応を行なつた。
℃、PH7.0で24時間反応を行なつた。
第３表
グリシン １％
メタノール １％
インドール 0.1％
プロタミノバクター湿菌体 ４％
エシエリヒア湿菌体 ４％
燐酸バツフアーでPH7.0に調整
反応終了後、液体クロマトグラフイーでＬ−ト
リプロフアンの生成量を測定したところ0.8ｇ／
であつた。また、第３表に示す組成の反応液か
らメタノールを除外して、同様の反応を行なつた
場合のＬ−トリプトフアンの生成量は0.1g／と
非常に僅かな量であつた。
リプロフアンの生成量を測定したところ0.8ｇ／
であつた。また、第３表に示す組成の反応液か
らメタノールを除外して、同様の反応を行なつた
場合のＬ−トリプトフアンの生成量は0.1g／と
非常に僅かな量であつた。
実施例 ２
トリプトフアン・シンターゼ生産菌株としてノ
イロスポラ・クラツサATCC14692を第４表に示
す組成の培地で培養した他は実施例１と同様の操
作を行なつた。
イロスポラ・クラツサATCC14692を第４表に示
す組成の培地で培養した他は実施例１と同様の操
作を行なつた。
第４表
ペプトン 5g／
酵母エキス ３
麦芽エキス ３
グルコース 10
PH6.5
反応終了後、Ｌ−トリプトフアンの生成量を測
定したところ、0.5g／であつた。
定したところ、0.5g／であつた。
（発明の効果）
本発明では、トリプトフアン・シンターゼによ
るグリシンとインドールからのＬ−トリプトフア
ン生合成系にメタノールとセリン経路を有するメ
タノール資化性菌の酵素系を添加して酵素反応さ
せることによつて、Ｌ−トリプトフアンを収率を
顕著に高めたものである。
るグリシンとインドールからのＬ−トリプトフア
ン生合成系にメタノールとセリン経路を有するメ
タノール資化性菌の酵素系を添加して酵素反応さ
せることによつて、Ｌ−トリプトフアンを収率を
顕著に高めたものである。
Claims (1)
- １ セリン経路を有し、プロタミノバクター
（Protaminobacter）属に属するメタノール資化
性菌の培養物又は分離菌体もしくはこれらの処理
物、およびトリプトフアン・シンターゼ生産菌の
存在下でグリシン、メタノールおよびインドール
を反応せしめることを特徴とするＬ−トリプトフ
アンの製造方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP23036084A JPS61111698A (ja) | 1984-11-02 | 1984-11-02 | トリプトフアンの製造方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP23036084A JPS61111698A (ja) | 1984-11-02 | 1984-11-02 | トリプトフアンの製造方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS61111698A JPS61111698A (ja) | 1986-05-29 |
| JPH0545237B2 true JPH0545237B2 (ja) | 1993-07-08 |
Family
ID=16906635
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP23036084A Granted JPS61111698A (ja) | 1984-11-02 | 1984-11-02 | トリプトフアンの製造方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS61111698A (ja) |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5816878B2 (ja) * | 1975-12-27 | 1983-04-02 | 旭化成株式会社 | ハツコウホウニヨル ｌ− セリンノセイゾウホウ |
| JPS542397A (en) * | 1977-06-02 | 1979-01-09 | Yoshiki Tani | Llserine producing method |
| GB2034033A (en) * | 1978-09-05 | 1980-05-29 | Gen Electric | Temperature Indicator |
| JPS5939296A (ja) * | 1982-08-30 | 1984-03-03 | Mitsubishi Petrochem Co Ltd | 微生物を利用するｌ−トリプトフアンの製造法 |
-
1984
- 1984-11-02 JP JP23036084A patent/JPS61111698A/ja active Granted
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS61111698A (ja) | 1986-05-29 |
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| EXPY | Cancellation because of completion of term |