JPH05501357A - 特異的結合物質 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 １７、外来遺伝子が添付の図１１の全アミノ酸配列をコードしていることを特徴 とする請求項１１に記載の安定な宿主細胞系。

１８、プラスミドｐＳＶｇｐｔＨｕ２ＶＨＰＬＡＰ−ＨｕＩｇＧｌ。

１９、プラスミドｐＳＶｎｅｏＨｕＶｋＰＬＡＰ−ＨｕＣｋ。

２０、合成特異的結合物質、改造ヒト抗体または改造ヒト抗体フラグメント産生 において請求項１８または１９に記載のプラスミドを使用する方法。

２１、大腸菌ＮＣＴＣ１２３８９゜ ２２、大腸菌ＮＣＴＣ１２３９０゜ ２３、大腸菌ＮＣＴＣ１２３８９に含まれヒト胎盤アルカリホスファターゼに特 異性を有する改造ヒト抗体Ｈ鎖可変領域をコードするＤＮＡ配列。

２４、大腸菌ＮＣＴＣ１２３９０に含まれヒト胎盤アルカリホスファターゼに特 異性を有する改造ヒト抗体り鎖可変領域をコードするＤＮＡ配列。

２５、大腸菌ＮＣＴＣ１２３８９に含まれている発現ベクターを介して産生され 得るヒト胎盤アルカリホスファターゼに特異性を有する改造ヒト抗体Ｈ鎖可変領 域。

２６、大腸菌ＮＣＴＣ１２３９０に含まれている発現ベクターによって産生され 得るヒトアルカリホスファターゼに特異性を有する改造ヒト抗体ＬＨ可変領域。

２７、請求項２５または２６に記載の少なくとも１つの可変領域を含む改造ヒト 抗体または改造ヒト抗体フラグメント。

２８、癌細胞の増殖を抑制または停止させ得る物質に結合もしくは組込まれるか またはヒト体内で検出され得る物質に結合した請求項１から１０または請求項２ ７のいずれか一項に記載の合成特異的結合物質、改造ヒト抗体または改造ヒト抗 体フラグメント。

２９、請求項２８に記載の合成特異的結合物質、改造しト抗体または改造ヒト抗 体フラグメントを製薬上許容される担体中に含む注射可能組成物。

３０、ヒト癌の軽減または除去に使用される治療用医薬を製造するためまたはヒ トの１ｎ−ｖｉｖｏｉＱ断に使用されは請求項２７のいずれか一項に記載の合成 特異的結合物質、改造ヒト抗体または改造ヒト抗体フラグメントを使用する方法 。

３１、ヒト癌のセラピーまたはイメージングの方法において請求項２８に記載の 合成結合物質、改造ヒト抗体または改造ヒト抗体フラグメントを使用する方法。

明細書 社！宜１ 本発明は、特異的結合物質、より特定的には、タンパク質性まなは非タンパク質 性の別の物質に特異的に結合するアミノ酸配列を含有するポリペプチドに係る。

極めて特定的には本発明は、かかる特異的結合物質の遺伝子工学による産生に係 る。

１生璽】 天然抗体分子は、等しい２つのＨｆｉポリペプチドと等しい２つのＬ［ポリペプ チドとから構成されており、これらのポリペプチドはジスルフィド結合によって 共有結合している。添付の［！１１３はＩｇＧクラスの抗体の典型的構造を概略 的に示している。各鎖が複数の不連続ドメインに折り込まれている。全部の鎖の Ｎ末端ドメインは配列可変であり、従って、可変領域（Ｖ領域）と呼ばれている 。１つのＨ鎖のＶ領域（ＶＨ）と１つのＬ鎖のＶ領域（ＶＬ）との組み合わせが 抗原結合部位を形成する。ｖＨドメインとＶＬドメインとの組み合わせによって 形成されたモジュールの双方のＣ末端では配列がより高度に保存され、従って定 常領域と呼ばれている。Ｈ鎖の定常領域は複数のドメインから構成されており、 例えばγイソタイプ（Ｉ　ｇＧ）のＨ鎖は３つのドメイン（ＣＨＩ、ＣＨ２、Ｃ Ｈ３）と、ＣＨ１ドメインとＣＨ２ドメインとを接続するヒンジ領域とから構成 されている。２つのＨ鎖のヒンジは、ジスルフィド結合によって互いに共有結合 している。ＬＨは、ＣＨＩドメインに対立して配置された１つの定常領域を有し ている。

抗体分子の定常領域は、補体溶菌及び抗体依存性細胞障害（ＡＤＣＣ）による清 浄化のようなエフェクター機能に関与する。従来の手順でプロテアーゼパパイン によって抗体を消化すると、３つのフラグメントが生じる。１つのフラグメント は、ＣＨ２ドメイン及びＣＨ３ドメインを含んでおり、極めて容易に結晶化する のでＦｃフラグメントと呼ばれている。残りの２つのフラグメントはＦａｂ　（ 抗原結合性）フラグメントと命名され、互いに等しく、ＶＨドメイン及びＣＨＩ ドメインと完全り鎖との組み合わせを含んでいる。ペプシンを使用したときは、 タンパク質分解による開裂後の２つのＦａｂがヒンジを介して結合状態に維持さ れ、（Ｆａｂ）ｚフラグメントが形成される。各ドメインは遺伝的レベルで別々 のエキランによって示される。

可変領域の各々は、より保存性の高い配列から成る外郭構造中に超可変残基の３ つのクラスターを含む、これらの超可文頭域は抗原と相互作用し、相補性決定領 域（ＣＤＲ）と呼ばれる。より高度に保存性の配列は外郭構造領域（ＦＲ）と呼 ばれる。Ｋａｂａｔ他（１９８７）参照。抗体のＸ線検査によれば、ＣＤＲは分 子の頂部から突出するループを形成し、ＰＲは構造的β−シート外郭構造を与え ている。

１鼠五差 １つの実施例によれば、本発明は、いわゆる「改造（ｒｅｓｈａｐｅｄ）Ｊまた は「変容」ヒト抗体、即ち、本質的にヒトの定常領域及び外郭構造領域を有する が、非ヒトイムノグロブリンの相補性決定領域（ＣＤＲ）に相当するＣＤＲを有 するイムノグロブリン、及び対応する改造抗体フラグメントに係る。

このような改造ヒト抗体及びフラグメントを製造するための一般理論はもはやよ く知られており、参考文献としては、Ｊｏｎｅｓ等、（１９８６）、Ｒｉｅｃｈ ｍａｎｎ等（１９８８）、Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎ等（１９８８）及び欧州特許出願 公開第２３９４００号（Ｗｉｎｔｅｒ）などがある、関連参考文献の一覧を明細 書末尾に添付した。

改造ヒト抗体及びフラグメントは、ヒト疾患の１ｎ−ｖｉｖｏ診断及び治療に特 に有用である。その理由は、本質的にヒトのタンパク質は、ヒト患者に投与され たときに好ましくない副作用を誘発し難いためである。ＣＤＲによって与えられ る所望の特異性は、選択された特異性を有する抗体をより容易に産生ずるマウス （ｍｕｒｉｎｅ）のような宿主動物中で生起・増長される。可変領域遺伝子は非 ヒト抗体からクローニングでき、ＣＤＲは遺伝子工学的方法によってヒト可変領 域外郭構造に移植されて改造ヒト抗体またはフラグメントを与え得る。このよう な所望結果を得るためには、潜在的に重要なＣＤＲ−外郭構造相互作用が同定で きるように、選択された非ヒト抗体中の少なくともＣＤＲ１好ましくは非ヒト可 変領域配列全体を同定し配列決定する必要がある。

免肌五】１ 本発明の１つの目的は、ヒト胎盤アルカリホスファターゼ（ＰＬＡＰ）に特異性 を有する合成特異的結合ポリペプチドを提供することである。合成なる用語は特 に、ポリペプチドを組換えＤＮＡ技術によって産生ずることを意味しており、等 しい特異性を有する天然産生または天然由来の特異的結合物質とは少なくともこ の点で異なっている。合成ポリペプチドはまた、新規な分子もしくは天然の同じ 分子を産生ずるためにアミノ酸配列を人為的に構成することによって産生できる 。合成ポリペプチドは、従来の完全形（ｉｎｔａｃｔ）抗体と等価であってもよ く、またはかかる抗体の多数鋼フラグメントまたは単鎖フラグメントと等価であ ってもよく、あるいは単に所望の特異的結合能力を与える１つ以上の配列を含む 物質であってもよい。

本発明の重要な目的の１つは、抗ヒト胎盤アルカリホスファターゼ（ＰＬＡＰ） 特異性を有する改造ヒト抗体または改造ヒト抗体フラグメントを提供することで ある。

より特定的には本発明は、添付の図１及び図２に示すＣＤＲを１つ以上含み、抗 ヒト胎盤アルカリホスファターゼ特異性を有する改造ヒト抗体または改造ヒト抗 体フラグメントを提供する。好ましくは、本発明の改造抗体またはフラグメント は、ヒトＨ鎖可変領域外郭構造中に、添付の図１に示す３つのＣＤＲをすべて含 んでいる。その代わりにまたは付加的に、本発明の改造抗体またはフラグメント は、ヒトＬＭ可変領域外郭構造中に、添付の図２に示す３つのＣＤＲをすべて含 んでいる。

本発明の別の目的は、添付の図１０及び／または図１１に示すタンパク質配列を 含む改造抗体または改造抗体フラグメントを提供することである。

本発明の別の重要な目的は、添付の図１０及び／または図１１に示すＤＮＡ配列 を組込んだ発現ベクター、及び、添付の図１及び／または図２にＣＤＲと指定さ れたタンパク質配列の少なくとも１つをコードするＤＮＡ配列を組込んだ発現ベ クターを提供することである。

本発明の重要な目的は、外来遺伝子を含んでおり、該外来遺伝子によって本発明 の特異的結合物質を産生し得るような安定な宿主細胞系を提供することである。

この安定な宿主細胞系はまた、添付の図１及び／または図２でＣＤＲと指定され たアミノ酸配列の少なくとも１つをコードしている外来遺伝子と、コードされた アミノ酸配列が発現されたときに該アミノ酸配列をＰＬＡＰ特異性を有するＣＤ Ｒとして機能させ得るタンパク質外郭構造との双方を含む細胞系であり得る。

本発明は特に、本発明による改造抗体またはフラグメントを産生する不死性を獲 得した哺乳類細胞系、または酵母、またはその他の真核細胞、または細菌のよう な原核細胞を提供する。

本発明の別の重要な目的は、マウスハイブリドーマ細胞系Ｈ１７Ｅ２によって分 泌されるγ−１、に抗ＰＬＡＰモノクローナル抗体と等価の特異性を有する合成 特異的結合物質、改造ヒト抗体または改造ヒト抗体フラグメントを提供すること である。

本発明はまた、２つの新規なプラスミドｐＳＶｇｐｔＨｕ２ＶＨＰＬＡＰ−Ｈｕ 　Ｉ　ｇＧｌ及びｐＳＶｎｅｏＨｕＶｋＰＬＡＰ−ＨｕＣｋを提供する。これら のプラスミドは、合成特異的結合物質、改造ヒト抗体または改造ヒト抗体フラグ メントの製造に使用できる。

これらのプラスミドは、新規な大腸菌ＮＣＴＣ１２３８９株及びＮＣＴＣ１２３ ９０株に夫々含まれている。

本発明のその他の目的は： （ａ）大腸菌ＮＣＴＣ１２３８９株に含まれているようなヒト胎盤アルカリホス ファターゼに特異性を有する改造ヒト抗体Ｈ鎖可変領域をコードするＤＮＡ配列 、（ｂ）大腸菌ＮＣＴＣ１２３９０株に含まれているようなヒト胎盤アルカリホ スファターゼに特異性を有する改造ヒト抗体ＬＨ可変領域をコードするＤＮＡ配 列、（ｃ）大腸菌ＮＣＴＣ１２３８９株に含まれている発現ベクターを介して産 生され得るヒト胎盤アルカリホスファターゼに特異性を有する改造ヒト抗体ＨＭ 可変領域、（ｄ）大腸＠ＮＣＴＣ１２３９０株に含まれている発現ベクターを介 して産生され得るヒト胎盤アルカリホスファターゼに特異性を有する改造ヒト抗 体り鎖可変領域、（ｅ）上記（ｃ）または（ｄ）の可変領域の少なくとも１つを 含む改造ヒト抗体または改造ヒト抗体フラグメント、を夫々提供することである 。

従って本発明のより特定の態様は、添付の図１及び図２で夫々ＣＤＲ１＝　ＣＤ Ｒ２及びＣＤＲ３と指定したアミノ酸配列を有する一連のＣＤＲ（これは例えば マウスの抗ＰＬＡＰイムノグロブリンからクローニングされ得る）を組込んだ抗 ＰＬＡＰ特異性を有する改造ヒト抗体またはフラグメントである０図１及び図２ は夫々、出願人がクローニングし配列決定したマウス抗ＰＬＡＰモノクローナル 抗体のＨ鎖可変領域（ＶＨ）及びＬＭ可変領域（Ｖｋ）を示す。

完全形抗体、または少なくとも１つのＨ鎖可変領域と少なくとも１つのＬ鎖可変 領域とを含むフラグメントの場合、改造抗体またはフラグメントは好ましくは、 非ヒトソースに由来の６つのＣＤＲ全部を含む、極めて有効に結合するためには 、ＣＤＲがオリジナルな非ヒト抗体中の配Ｉと同じ相対配置で存在すること、例 えば、ヒトＶＨ外郭構造中のＶＨＣＤＲが非ヒト抗体中に天然に発生する順序で 存在するのが好ましい。

当業者に明らかなごとく、本質的な特異的結合能力を有意に低下させることなく 、ＣＤＲ配列及びその周囲の外郭構造配列に多少の修飾及び変異を与えることが 可能である。

このような多少の修飾及び変異は遺伝子レベルに存在してもよくまたはアミノ酸 配列に存在してもよく、その双方に存在してもよい、従って本発明は、正確に確 定された遺伝子配列またはアミノ酸配列を有する本文中に記載の抗体及びフラグ メントと機能的に等価の合成（改造）抗体及びフラグメントを包含する。

本発明はまた、異なる特異性の２つのＦａｂ部分を有しており、特異性の１つが 、添付の図１及び図２に示すＣＤＲを１つ以上組込んだ改造ヒト可変鎖領域によ って与えられる二特異性抗体の製造に使用され得る。

本発明はまた、（例えばＧｅｎｅｘ　ＥＰ−Ａ−２８１６０４に開示された抗体 のような）いわゆる１本鎖抗体の産生に使用され、また、多糖結合抗体（Ｈｙｂ ｒｉｔｅｃｈ　ＥＰ−Ａ−３１５４５６参照）及びその他の修飾抗体の産生に使 用される。

任意のヒト定常領域（例えば、γ１．２．３または４型）を使用し得る。

有用な特異的結合特性を維持している抗体フラグメントは、（Ｆａｂ）ｚ、Ｆａ ｂ、Ｆｖ、ＶＨまたはＶｋフラグメントである。これらのフラグメントは、例え ばプロテアーゼ消化によって完全形の改造抗体から得られてもよく、または遺伝 子工学によってフラグメントの形態で産生されてもよい。

日　の　・ 本発明の重要な１つの態様は、前記のごとき改造ヒト抗ＰＬＡＰ抗体またはフラ グメントを、癌細胞の増殖を抑制または停止させ得る物質と結合させるかもしく は該物質を組込むかまたはヒト体内で検出され得るイメージング剤に結合させて 使用し得ることである０本発明はまた、生理的塩類溶液、血漿増量剤またはリポ ソームのような医薬的に許容される担体中に上記の組み合わせのいずれかを含む 注射可能組成物を提供する。本発明はまた、ヒト癌のセラビーまたはイメージン グの方法において、上記のごとき改造ヒト抗ＰＬＡＰ−抗体またはフラグメント を使用することを提案する。本発明は更に、ヒト癌の軽減・除去に使用される治 療用医薬を製造するためにこのような抗体もしくはフラグメントを使用すること 、または、ヒトの１ｎ−ｖｉｖｏ診断に使用される診断用組成物を製造するため にこのような抗体もしくはフラグメントを使用することを提案する。

それ自体が補体溶菌及び抗体依存性細胞障害のような体内の有効な経路及びメカ ニズムを利用する抗体のＦｃ領域は、癌細胞の増殖に対抗するために使用され得 る。この場合には、改造抗体に追加の試薬を結合させる必要はない。

癌細胞の増殖に対抗し得る物質の例としては、イツトリウム９０及びヨウ素１３ １のような放射性同位体、メトトレキセートのような薬剤、リジンまたはその一 部のような毒素、不活性薬剤を抗体結合部位で活性薬剤に変換し得る酵素などが ある。

イメージング剤の例としては、インジウム１１１及びテクネチウム９９のような γ線発生放射性同位体、銅６４のようなポジトロン発生放射性同位体、Ｘ線造影 剤として作用するバリウム及びｎ　ｍ　ｒ　／　ｅ　ｓ　ｒスキャンにおけるガ ドリニウムのような受動物質がある。

放射性同位体のような金属性物質を本発明の特異的結合物質に結合させるために は、カップリング剤またはキレート化剤を使用する必要があろう。多くの適当な キレート化剤が開発されている。これらに関しては、例えばＵＳ４８２４９８６ 、ＵＳ４８３１１７５、ＵＳ４９２３９８５及びＵＳ４６２２４２０を参照する とよい、キレート化剤の使用に関する技術は、例えばＵＳ４４５４１０６及びＵ Ｓ４７２２８９２、Ｍｏｉ他（１９８８＞　、ＭｃＣａｌ　１他（１９９０）、 Ｄｅｓｈｐａｎｄｅ他（１９９０）及びＭｅａｒｅｓ他（１９９０）に記載され ている。

ヒト癌のイメージング及びセラビーにおける放射性標識抗体及びフラグメントの 使用は例えばＥＰ３５２６５に記載されている。いわゆるサブトラクションイメ ージングに対する対比パックグラウンドを与えるためには、放射性標識した癌特 異的抗体またはフラグメントを、別の同位体で放射性標識した非特異的物質と共 に使用するのが有利であろう。

本発明の抗体試薬は、例えば血清検査またはイメージングによってＰＬＡＰ産生 癌を同定し及び／または治療するために使用され得る。このような癌は例えば、 乳癌、卵巣癌及び直腸癌として発生するものでもよく、または胸膜滲出液のよう な液体として発生するものでもよい。

１腹五左五１ユ 非ヒトモノクローナル抗体から転写されるのが必要な構造（ｆｅａｔｕｒｅ）は 、協定（Ｋａｂａｔ、１９８７）によってＣＤＲと命名された領域ＶＨ及びＶＬ の部分だけではないと考えられる０時には、改造ヒト抗体中にある種の非ヒト外 郭構造配列が維持されている場合に、改造ヒト抗体中で特異性及び／または親和 性に関する抗体性能の増進が得られる。ＣＤＲ関連の重要な三次元タンパク質構 造を保存することがその目的であり、該構造は外郭構造残基との接触によって支 持される。

通常は、ヒトＰＬＡＰに特異性を有する抗体を発現する非ヒト宿主細胞（例えば マウス）由来の細胞（好ましくは不死性を獲得した細胞系）が、本発明の改造抗 体を調製するための出発点となる。このような細胞系は例えば、従来のモノクロ ーナル抗体技術によって調製されたハイブリドーマ細胞系でよい０本発明の手順 によるヒト抗体またはフラグメントへの転写中に抗体の親和性及び／または特異 性がある程度低下することが予想されるので、発現された抗体がＰＬＡＰに高い 親和性及び高い特異性を有しているのが好ましい、高い親和性及び高い特異性を 有する抗体を親杭体として選択することによって、最終的な改造抗体またはフラ グメントが有効な結合特性を示す可能性が増す。

次の段階では、選択された非ヒト抗体を発現する細胞からｃＤＮＡをクローニン グし、ＣＤＲをコードする配列を含む可変領域の遺伝子の配列決定及び同定を行 なう、この手順は面倒な手順ではあるが当業界ではもはや常用の手順である。

目的が、改造された完全ヒト抗体またはかかる抗体のＨ鎖可変ドメイン及びＬＭ 可変ドメインの双方を含む少なくとも１つのフラグメントを産生することである 場合、これらのドメインの双方に関連するｃＤＮＡの配列を決定する必要があろ う。

１つまたは複数の該当ｃＤＮＡ配列を分析した後で、抗体の少なくとも１つの可 変ドメインをコードするＤＮＡ配列を含む１つ以上の複製可能な発現ベクターを 調製することが必要である。該可変ドメインは、選択された非ヒト抗ＰＬＡＰ抗 体に由来の１つ以上のＣＤＲと共に、ヒト外郭構造領域を含んでいる。各ベクタ ー中のＤＮＡ配列は、遺伝子の有効な転写及び翻訳を確保するために必要な適当 な規則的配列、特に可変ドメイン配列に作用可能に結合したプロモーター及びリ ーダー配列を含んでいなければならない１本発明の改造抗体またはフラグメント を製造するための典型的な手順では、一方が改造しトし鎖のＤＮＡ配列を含み他 方が改造ヒトＨＭのＤＮＡ配列を含むような２つの発現ベクターを製造する必要 があろう０発現ベクターは、改造抗体またはフラグメントを産生する選択された 細胞系を形質転換させ得るものでなければならない、このような細胞系としては 、例えば安定な非産生性ミエローマ細胞系があり、そのいくつかは（ＮＳＯ及び ５ｐ２−０のように）商品として容易に入手できる。または、改造抗体またはフ ラグメントの発現ビヒクルとして大腸菌のような細菌系を使用してもよい、この 場合、処理手順の最終段階では、選択された細胞系または生物を１つまたは複数 の発現ベクターを介して形質転換させ、その後で、形質転換した細胞系または生 物を培養して改造ヒト抗体またはフラグメントを産生させる。

適当な発現ベクターの調製方法の詳細な手順を明細書中に非限定例として後述す る。適当な設備を備えた実験室でＤＮＡ材料を操作することはいまや十分に発達 した技術であり、必要な手順に関しても当業者は十分な知識を有している。多く の適当なゲノム及びｃＤＮＡライブラリィ、プラスミド、制限酵素、及びこのよ うな操作を行なうために必要な種々の試薬及び培地は、実験材料供給業者によっ て市販されている。例えばゲノム及びｃＤＮＡライブラリィは、Ｃ１ｏｎｔｅｃ ｈ　ＬａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓＩ　ｎｃ、から購入できる。以下の実施例に示す 諸段階は、明細書の読者に対する単なる指針であり、本発明が１種または複数の 特定の出発材料の入手可能性によって決定的に左右されることはない。実際に、 当業者は材料の広い選択範囲を有しており、その獲得した経験と科学界で極めて 容易に入手できる材料とを用い、公表された技術を使用及び応用することができ よう。例えば、多くのプラスミドをこの種の材料に含ませることができる。即ち 、対応する科学的分野では多くのプラスミドが広く使用され流通しているので、 これらのプラスミドはいまやありふれた材料であると考えられている。

Ｘ電ｊ 改造抗ＰＬＡＰヒト抗体の調製手順の１例を添付図面に基づいて以下に詳細に説 明する。

図１は、抗ＰＬＡＰ特異性を有するマウスＨｉｍ可変領域をコードするｃＤＮＡ 配列を示す。ｃＤＮＡコードに対応するアミノ酸配列と共に３つの従来の古典的 ＣＤＲが示されている。

図２は、抗ＰＬＡＰ特異性を有するマウスＬｊｌ可変領域をコードするｃＤＮＡ 配列を示す。

図３ａ及び図３ｂは、図１のＣＤＲを組込んだ改造ヒトＨ１！ｉをコードする発 現ベクターの調製手順を示す。

図４ａ及び図４ｂは、図２のＣＤＲを組み込んだ改造しトＬｉ１ｉをコードする 発現ベクターを得るための同様の形質転換手順を示す。

図５は、図４ａ及び図４ｂの手順で使用されるエンハンサ−配列を含むプラスミ ドｐＵ１２−ＩｇＥｎｈを示す。

図６は、図３ｂの手順で使用されるプラスミドｐＢＧＳ１８−ＨｕＩｇＧ１のソ ースを示す。

図７は、図４ｂの手順で使用されるプラスミドｐ　ＢＧＳ１８−ＨｕＣｋのソー スを示す。

図８は、図１及び図２のｃＤＮＡ配列をクローニングするために使用された２つ の合成オリゴヌクレオチド配列■及びＩＩを示す。

図９は、図３ａ〜図４ｂの手順で使用される６つの合成オリゴヌクレオチド配列 ＩＩＩ〜ＶＩＩＩを示す。

図１０及び図１１は、得られた改造ヒトＨｉＩ及びＬ鎖の可変領域のｃＤＮＡ及 びアミノ酸配列を夫々示す。

図１２は、得られた改造ヒト抗体の抗ＰＬＡＰ結合活性の変化を示すグラフであ る。

図１３は、典型的な抗体くイムノグロブリン）分子の構造の概略図である。

本発明を実施するために必要な実験手順自体は、特別な技術ではなく、例えばＶ ｅｒｈｏｅｙｅｎ他（１９８８）；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ他（１９８８）及びＥＰ −Ａ−２３９４００（Ｗｉｎｔｅｒ）などに概説されている簡単なりローニング 及び突然変異誘発技術を用いる。または、適当なりＮＡ配列の細部が既知である ときはくこの明細書に添付の図は抗ＰＬＡＰ特異性と関連する配列を含む）、改 造ヒト可変領域遺伝子をｉｎ　ｖｉｔｒｏで合成できる（Ｊｏｎｅｓ他、１９８ ６参照）、長いオリゴヌクレオチドを合成するための実験装置及び試薬は容易に 入手でき、この分野の技術の発達によって、配列の長さを漸増させる合成が実用 化されている。

組換えＤＮＡ方法の基本面をすべてカバーする詳細な実験マニュアルは、例えば Ｓａｍｂｒｏｏｋ他の“Ｍｏ１ｅｃｕｌａｒ　Ｃｌｏｎｉｎｇ”　（１９８９） から得られる。

本発明によれば、マウスの抗ＰＬＡＰ抗体の抗原結合領域をヒト外郭構造領域に 移植した。得られた改造ヒト抗体（Ｈｕ２ＰＬＡＰと命名）は出発マウス抗体と 同様の結合特性を有している。

このような改造抗体は、ヒトの癌、例えば卵巣癌及びセミノーマのｉｎ　ｖｉｖ ｏ診断及び治療のために使用でき、非ヒト抗体の投与でしばしば生じた患者の免 疫応答の問題を少なくとも軽減すると期待される。Ｈａｌｅ他（１９８８）の改 造ＣＡＭＰＡＴＨ−１抗体で同様の利点が証明された。

左韮 （ａ）マウスロ亦　の　ローニン 汲淀 Ｔｒａｖｅｒｓ他（１９８４）に記載の７−１、に抗ＰＬＡＰ抗体を分泌するマ ウスハイブリドーマ系“Ｈ１７Ｅ２”からメツセンジャーＲＮＡを単離した。エ キランＣＨ１及びＣｋの夫々の５°端に相補的なオリゴヌクレオチドＩ及びＩＩ をプライマーとして第１のｃＤＮＡｇを合成した。

第２のｃＤＮＡ鎖は、Ｇｕｂｌｅｒ　＆　Ｈｏｆｆｍａｎｎ　（１９８３）に記 載の方法で得られた。

キナーゼ処理した（ｋｉｎａｓｅｄ）ＥｃｏＲＩリンカ−を、（可能な内部Ｅｃ ｏＲＩ部位を保護するために、まずＥｃｏＲＩメチラーゼで処理した）二重鎖ｃ ＤＮＡに結合し、次いで、ＥｃｏＲＩ切断ｐＵＣ９（Ｖｉ　ｅ　ｉ　ｒａ他、１ ９８２）にクローニングし、大腸菌ＴＧ２株（Ｇｉｂ−ｓｏｎ、１９８４）を形 質転換した。

マウス抗ＰＬＡＰ　ＶＨ（ＭｏＶＨＰＬＡＰ）及びマウス抗ＰＬＡＰ　Ｖｋ（Ｍ ｏＶｋＰＬＡＰ＞をコートする遺伝子を含むコロニーを、抗ＰＬＡＰ　ＶＨ及び Ｖｋの夫々の３２Ｐ標識した第１ｃＤＮＡ［から成る２つのプローブとのコロニ ーハイブリダイゼーションによって同定した。

プラスミド調製、ＥｃｏＲＩ消化及び１．５％アガロースゲル分析を順次行なっ て陽性クローンを特性決定した。’１通サイズのインサート（約４５０ｂｐ）を Ｍ１３ｍｐ１８（Ｎｏｒｒａｎｄｅｒ他、１９８３）のＥｏＲＩ部位にサブクロ ーニングした。この結果、両方向インサートを有し、ジデオキシチェーンターミ ネーション法（Ｓａｎｇｅｒ他、１９７７）によって全インサートのヌクレオチ ド配列を容易に決定できるクローンが得られた。

成熟可変領域遺伝子ＭｏＶＨＰＬＡＰ及びＭｏＶｋＰＬＡＰのヌクレオチド配列 及びその翻訳アミノ酸配列を図１及び図２に示す。その４５０ｂｐのインサート は、図示しないシグナル配列と５°未翻訳配列とリンカ−とを含んで蔓ｊ この処理を行なうために必要な技術の概要は、ＪｏｎｅＳ他（１９８６）、Ｖｅ ｒｈｏｅｙｅｎ他（１９８８）、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ他（１９８８）及びＥＰ− Ａ−２３９４００（Ｗｉｎｔｅｒ）に極めて適切に記載されている。

改造に使用した基本的構築物は、Ｍ１３ｍｐ９ＨｕＶＨＬＹＳ　（Ｖｅｒｈｏｅ ｙｅｎ他、１９８８）及びＭ１３ｍｐ９ＨｕＶｋＬＹＳ　（Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ 他、１９８８）であった、これらは夫々、ヒト“ＮＥＷ”のＨＭ可変領域及びヒ ト“ＲＥＩ”のＬｔｉｉｌ可変領域の外郭構造領域を含む。

これらの２つのヒト抗体は双方とも完全に特性決定されその結果が報告されてい る（夫々、５ａｕｌ他、１９７８；Ｅｐｐ他、１９７４）。

特定部位の突然変異誘発によって、これらの構築物中のＣＤＲ（図３ａ及び図４ ａ）を、抗ＰＬＡＰ　ＣＤＲをコードするオリゴヌクレオチドで置換した。但し 、その抗ＰＬＡＰ　ＣＤＲは各末端に、対応するヒト外郭構造残基をコードする 少なくとも１２個のヌクレオチドがフランキング配置したものである。これらの オリゴヌクレオチドを図９に示し、ＣＤＲに対応する配列にアンダーラインを付 ける。

この実施例によればまた、改造ヒト抗ＰＬＡＰ抗体の■Ｈトドメイン中マウスＶ ＨＰＬＡＰのアミノ酸Ｐｈｅ２７及びＴｈｒ３０を保存するのが有用であること も判明した。

図９のオリゴヌクレオチドＩＩＩでは、ＣＤＲＩの５″末端にフランキング配置 した２４個のヌクレオチドを有するマウスのコドンＰｈｅ２７及びＴｈｒ３０を イタリックで示している。

Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ他（１９８８）に記載の手順で突然変異誘発を行なった。得 られた可変領域を、Ｈｕ２ＶＨＰＬＡＰ及びＨｕＶｋＰＬＡＰと命名し、図１０ 及び図１１に夫々示す。

（ｃ）発現ベクターへの改造ヒト抗体遺伝子の組込み次の段階では、Ｎｅｕｂｅ ｒｇｅｒ他（１９８３）に記載されたマウスＨ鎖エンハンサ−１ｇＥｎｈを使用 した。

エンハンサ−はプラスミドｐｓｖ−ｖμｍのｌｋｂのｘｂａＩフラグメントに含 まれていた。このｌｋｂのＸｂａＩフラグメントの７００ｂｐのＸ　ｂ　ａ　Ｉ 　／　Ｅ　ｃ　ｏ　ＲＩサブフラグメントがエンハンサ−活性を与えるために十 分である。

前記（ｂ）項で調製した改造ヒト遺伝子を、Ｍ１３ベクターからＨｉ　ｎ　ｄｌ ｌｉＢ　ａｍＨＩフラグメントとして切取った。そのＨＨ可変領域遺伝子をＰｓ Ｖ２ｇｐｔ　（Ｍｕ　１１Ｌ　ｇａｎ他、１９８１）ベースのベクターにクロー ニングし、そのＬ鎖可変領域遺伝子をｐＳＶｎｅｏ中ｔｈｅｒｎ他、１９８１） ベースのベクターにクローニングした。双方が、イムノグロブリンＨ鎖エンハン サ−ＩｇＥｎｈを含んでいた。ｐＳＶ２ｇｐｔベースの抗体発現ベクター（図４ ｂ〜図４０参照）中で、Ｘ　ｂ　ａ　Ｉ　／　Ｅ　ｃ　ｏ　ＲＩエンハンサ−含 有フラグメントを、（フラグメントのＸｂａＩ末端を埋め戻すためにＥｃｏＲＩ リンカ−に結合した後で）、ｐＳＶ２ｇｐｔベクターの非反復ＥｃｏＲＩ部位に クローニングした。ＩｇＥｎｈエンハンサ−を含有するｐＳＶｇｐｔベースのベ クターのソースとしては、ベクターｐＳＶｇｐｔＭｏＶＨＬＹＳ−ＭｏＩｇＧ１ 　（Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎ他、１９８８）を使用した。

ｐＳＶｎｅｏベースの抗体発現ベクター中（図５ａ〜図５ｂｌ照）では、ｌｋｂ のＸｂａＩエンハンサ−含有フラグメントを、まずｐＵｃ１２　（Ｖｉｅ　ｉ　 Ｔａ他、１９８２）にクローニングしてプラスミドｐＵｃ１２−ＩｇＥｎｈを得 た（図５舎照）０次に、（エンハンサ−が双方向で作用する）７００ｂｐのＥｃ ｏＲＩ／Ｈｉ　ｎｄｌｌｌフラグメントとしてエンハンサ−を切取り、ｐＳＶｎ ｅｏ中のＨｉｎｄ１１１部位の除去によって得られたｐＳＶｎｅｏ由来のベクタ ー（図４ａに示すｐｓＶｎｅｏＭｓＮ４０９）中でクローニングした。実際には 、ｎｅｏｉ！択が不要なので、Ｌ鎖発現用の代替ベクターとしてｐＳＶ２ｇｐｔ を使用することも可能である。

Ｈｕ２ＶＨＰＬＡＰ遺伝子をヒトγ１定常領域（Ｔａ−ｋａｈａｓｈｉ他、１９ ８２）に結合し、まず８ｋｂのＨｉｎｄＴＩＩフラグメントとしてｐＢＧＳ１８ 　（Ｓｐｒａｔｔ他、１９８６）のＨｉｎｄｌｌｌにクローニングし、次いでＢ ａｍＨＩフラグメントとしてｐＳＶ２ｇＰｔ発現ベクターにクローニングした（ 図３ｂ及び図６参照）、Ｔａ−ｋａｈａｓｈｉ他（１９８２＞の文献では図１に 誤りがあることに注意されたい。即ち、最終（３″）の２つの部位の順序は先ず ＢａｍＨＩ部位、次にＨｉｎｄ１１１部位の順であり、逆の順序ではない。これ はＦｌａｎａｇａｎ他（１９８２）によって確認された。

ＨｕＶｋＰＬＡＰ遺伝子を、同じ（ＢａｍＨＩフラグメントとしてクローニング されたヒトＣに定常領域（Ｈｉｅｔｅｒ他、１９８０）に結合した（図４ｂ及び 図７参照）。

図７で使用したヒトＣｋのソースは、Ｈｉｅｔｅｒ他（１９８０）によって与え られたものである。（γＣｈ２８ベクター系でクローニングした）胎児性ＤＮＡ に由来の１２ｋｂのＢａｍＨＩフラグメントをプラスミドｐＢＲ３２２のＢａｍ Ｈ１部位にサブクローニングした。

（ｄ）ミエローマ細胞中の発現 発現プラスミドｐＳＶｇｐｔＨｕ２ＶＨＰＬＡＰ−ＨｕＩｇＧｌ及びｐＳＶｎｅ ｏＨｕＶｋＰＬＡＰ−ＨｕＣｋ　（図３ｂ及び図４ｂ）を、Ｐｖｕ　Ｉで直鎖状 にした後で、エレクトロボレーション（Ｐｏｔｔｅｒ他、１９８４＞によってＮ Ｓ○ミエローマ細胞に対し同時トランスフェクションした。ｇｐｔ遺伝子産物を 発現する細胞を選択するために、マイコフェノール酸含有培地でトランスフエフ トーマを選択し、ＥＬ　Ｉ　ＳＡアッセイによって抗体産生及び抗ＰＬＡＰ活性 をスクリーニングした。

陽性クローンを限界希釈法によってサブクローニングし、純粋クローンを抗ＰＬ ＡＰ活性に基づいて再度検定し、最大の抗体産生性を有するクローンを抗体産土 用の無血清培地中で増殖させた。

（ｅ）改造ヒト抗体の結合能力 得られた改造ヒト抗体を実用化するためには、十分な結合効率が必要である。親 抗体が極めて高い効率を有している場合には、改造処理中に生じるある程度の効 率低下は許容される。結合効率は多くの要因によって左右され、その要因の１つ は、抗原、この場合には胎盤アルカリホスファターゼに対する抗体親和性である 。改造抗体の結合能力の有効な証明方法としては、該抗体が、プラスチックウェ ル表面に吸着させた抗原に結合させたときと同様の抗体希釈曲線を有することを 示す方法がある。かかる曲線は親マウス抗ＰＬＡＰ抗体及び前記手顆で調製され た改造ヒト抗体を使用して以下の手順で作成される。

マルチウェルプレート（Ｃｏｓｔａｒ　６５９５、ＰＥＴＧ）に胎盤アルカリホ スファターゼ（ｐＨ７，４のリン酸塩緩衝生理的塩類溶液中に５μｇ／ｍｌ、３ ７℃、２時間）をコートした。プレートをリン酸塩ｖＬ衝生理的塩類溶液中で洗 ってから室温のゼラチン（リン酸塩緩衝生理的塩類溶液中に０．０２％）で１時 間ブロックし、次いでＴｗｅｅｎ２０　（０，１５％）を添加したリン酸塩緩衝 生理的塩類溶液で４回洗浄してから使用した。

Ｔｗｅｅｎ２０を加えたリン酸塩［［ｒ生理的塩類溶液中で室温で１時間抗体を 結合させ、バッファ中で４回洗浄した。

結合抗体を、西洋ワサビペルオキシダーゼ結合抗グロブリン（改造抗体に対して は抗ヒトＩｇＧ、親分子に対しては抗マウスＩ　ｇＧ）で可視化した。バッファ 中の複合体（Ｓｉｇｍａ）＜１　：　１０００）を室温で１時間インキュベート し、次いで前記のごとく４回洗浄した。クエン酸塩バッファｐＨ６，５中のテト ラメチルベンズイデン（０，０１％）及び過酸化水素（１：　２００または１０ ０容量）で発色させた（４５分間）。２Ｍの塩酸で反応を停止させた。

対照は、複合体が非特異的結合したことまたは胎盤アルカリホスファターゼ非含 有ウェルに抗体が結合したことに起因する微弱な発色を生じた。図１２では、観 察された発色（結合）の最大値のパーセンテージとして結果を示している。２つ の曲線は同様の形状を有しており、これは、本発明の改造抗体の結合効率が有意 且つ有用なレベルであることを示す。

（ｆ）　寄託プラスミド ブダペスト条約に従って、前記手順で使用したプラスミドを含有する大腸菌を以 下の受託番号で１９９０年４月１９日にＮａｔｉｏｎａｌ　Ｃｏ１１ｅｃｔｉｏ ｎ　ｏｆＴｙｐｅ　Ｃｕ１ｔｕｒｅｓに寄託した：ＮＣＴＣ１２３８９：に１２ ，７５スミ）：ｐＳＶｇｐｔＨｕ２ＶＨＰＬＡＰ−Ｈｕ　ＩｇＧ １を含有する大腸菌ＴＧＩ ＮＣＴＣ１２３９０：に１２．プラスミドｐＳＶｎｅ。

ＨｕＶｋＰＬＡＰ−ＨｕＣｋを含 有する大腸菌ＴＧＩ 下前、の入球１コ明細ｔ＋　＋；引引用八代しりτ゛めつ御名！自〒士シー＝ｉ Ｄａｓｈｐａｎｄｅ　ａｔ　ａｌ　（１９９０）　−、Ｎｕ　、ｅｄ、、　３１ ．　ｐ−４７３−４７９Ｅｐｐ　ａｔ　ａｌ　（１９７４）　−Ｅｕｒ、　、　 ’ｏｃｈｅ　、４５．　ｐ、５１コ一５２４Ｆｌａｎａｇａｎ　ａｔ　ａｌ　（ １９８２）　−＄代毘１．３００．　ｐ−７０９−７１３Ｇｉｂｓｏｎ　Ｔ　（ １９８４）　−ＰｈＤ　ｔｈｅｓｉｓ、　ＬＭＢ　−ＭＲＣＣａｎ由ｒｉｄｇｅ Ｇｕｂｌｅｒ　ａｔ　ａｌ　（１９Ｂ：ｌ）　−Ｇａｎｇ、２５．　ｐ、２６： ｌ−２６９Ｈａｌｅ　ａｔ　ａｌ　（１９８Ｂ）−シｍン迄、２．ｐ、ｌ：１９ ４Ｈｉａｔｅｒ　ａｔ　ａｌ　（１９８０）−Ｃｇｌユ、２２．ｐ、１９７−２ ０７、ｒｏｎｅｓ　ａｔ　ａｌ　（１９８６）−出店堪１，３２１．ｐ、５２２ −５２５Ｋａｂａｔ　ａｔ　ａｌ　（１９８７）　−ｉｎ　Ｓｅ　ｕｅｎｃｅ　 ｏ　ｔｅ″ｎｓ　ｏｆ工ｍｍｕｎｏ　ｏ　’ｃａ　ｔｅ　ｅｓ　、ｐ、ｉｘ　− ＵＳ　Ｄｅｐｔｏｆ　Ｈｅａｌｔｈ　ａｎｄ　Ｈｕｍａｎ　ＳｅｒｖｉｃｅｓＭ ｃＣａｌｌ　ｅｔ　ａｌ　（１９９０）　−’ｏｃｏｎ’ｕ　ｔｅ　Ｃｈｅ　’ ｓｔ　、ｌ、　ｐ、２２２−２２６Ｍｅａｒｅｓ　ｅｔ　ａｌ　（１９９０）− 、、Ｃａ　ｃｅ　、６２，５ｕｐｐｌ−Ｘ、ｐ、２１−２６Ｍｏｉ　ａｔ　ａｌ 　（１９８Ｂ）−、Ａ　、Ｃｍ、ｏｃ、、１１０．ｐ−６２６６−６２６９Ｍｕ ｌｌｉｇａｎ　ａｔ　ａｌ　（１９８１）　−ｏｃ、　ｎａｔｎ、ｃａｄ、　Ｓ ｃ’、　Ｕ、Ｓ、Ａ、、　７８ｐ、２０７２−２０７６ Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒ　ｅｔ　ａｌ　（１９８３）−ｎゴ没、Ｌ曳コＥユ、２．ｐ 、１３７３−１３７８Ｎｏｒｒａｎｄｅｒ　ａｔ　ａｌ　（１９８：ｌ）−Ｑ五 組、２６．ｐ、１ｏ１−１０６ＰＯｔｔｅｒ　ａｔ　ａｌ　（１９８４１−［， ８１，ｐ、７１６１−７１６３Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ　ｅｔ　ａｌ　（１９８８） −区耐≧仄旦、３３２．Ｐ、：３２］−３２７Ｓａｍｂｒｏｏｋ　ａｔ　ａｌ　 （１９８９）−Ｍｏ　ｅｃｕ　ａ　Ｃｏｎ’ｎ　、２ｎｄ　Ｅｄｉｔｉｏｎ。

Ｃｏ１ｄ　Ｓｐｒｉｎｇ　Ｈａｒｂｏｕｒ　ＬａｂｏｒａｔｏｒｙＰｒｅｓｓ、 Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ Ｓａｎｇｅｒ　ｅｔ　ａｌ　（１９７７）　−ＰＮＡＳ　ＵＳ込、７４．　ｐ、 ５４６３−５４６７Ｓａｕｌ　ｅヒａｌ　（１９７８）−Ｊ、ｂｉｏｌ、Ｃｈｅ ｍ、２５３．ｐ、５８５−５９７Ｓｏｕｔｈｅｒｎ　ａｔ　ａｌ　（１９８１） −Ｊ、ｍｏ　ｅｃ、ａ　１．Ｇｅｎｅｔｉｃｓ、１ｐｊ２７−３４５ Ｓｐｒａｔｔ　ｅｔ　ａｌ　（１９８６）−Ｇｅｎｅ、４１．ｐ、３３７−３４ ２Ｔａｋａｈａｓｈｉ　ｅｔ　ａｌ　（１９Ｂ２）−Ｃｄユ、２９．ｐ−６７１ −６７９Ｔｒａｖｅｒｓｅｔａｌ　（１９８４）　−ｎｔ、　、Ｃｎｃｅ　、３ ３．　ｐ６コ３Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎ　ｅｔ　ａｌ　（１９８８）　−５ｃｉｅｎ ｃｅ、２３９．　ｐ、１５コ４−２５３６Ｖｉｅｉｒａ　ｅｔ　ａｌ　（１９８ ２１−Ω立ｎ且、１９．　ｐ、２５９−２６８Ｗｉｎｔｅｒ　（１９８７）−Ｅ Ｐ−Ａ−２３９４００ｇ８：８冒五＄挿＝呂わ２ｇ已よ （ｍＱ［ｊ　−■　Ｑ山−０Ｃ Ｉ　旨！　珍３　Ｅ茫　３？　旨と 菖？　目占　ごぎ　答ゴ　ｇ占　葺ぎ ０　０　０　０　０　０　ｍ ψ　〜　の　マ　０　ψ　ψ −−ヘ　−　Ｌ＋＋ＩＩ＋Ｉ ８　目　呂　Ｓ　呂　ｇ ｇ８＝８已８８８お呂６８ｇ乏＝ ＜ｍ　ＣＪＯｙ　（切　Ｑへ一〇〇 藍茹　受−速３　Ｆ是　に？　ジ劃 補正書の写しく翻訳力提出書（特許法第１８４条の７第１囮゛

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １．ヒト胎盤アルカリホスフアターゼに特異性を有する合成特異的結合物質。 ２．抗ＰＬＡＰ特異性が、アミノ酸配列：（１）【配列があります】 （２）【配列があります】 （３）【配列があります】 （４）【配列があります】 （５）【配列があります】 （６）【配列があります】 から選択された１つ以上のアミノ酸配列の存在によって与えられることを特徴と する請求項１に記載の合成特異的結合物質。 ３．ヒト胎盤アルカリホスファターゼに特異性を有する改造ヒト抗体または改造 ヒト抗体フラグメント。 ４．抗ＰＬＡＰ特異性が、アミノ酸配列：（１）【配列があります】 （２）【配列があります】 （３）【配列があります】 （４）【配列があります】 （５）【配列があります】 （６）【配列があります】 から選択された１つ以上のアミノ酸配列の存在によって与えられることを特徴と する請求項３に記載の改造ヒト抗体または改造ヒト抗体フラグメント。 ５．以下のＣＤＲ： ＣＤＲ１：【配列があります】 ＣＤＲ２：【配列があります】 ＣＤＲ３：【配列があります】 を組込んだ少なくとも１つのＨ鎖可変領域を有する請求項３に記載の改造ヒト抗 体または改造ヒト抗体フラグメント。 ６．以下のＣＤＲ： ＣＤＲ１：【配列があります】 ＣＤＲ２：【配列があります】 ＣＤＲ３：【配列があります】 を組込んだ少なくとも１つのＬ鎖可変領域を有する請求項３に記載の改造ヒト抗 体または改造ヒト抗体フラグメント。 ７．請求項５に記載の少なくとも１つのＨ鎖可変領域と請求項６に記載の少なく とも１つのＬ鎖可変領域とを有する請求項３に記載の改造ヒト抗体または改造ヒ ト抗体フラグメント。 ８．添付の図１０に示す全アミノ酸配列を含む少なくとも１つのＨ鎖可変領域を 組込んだ請求項３に記載の改造ヒト抗体または改造ヒト抗体フラグメント。 ９．添付の図１１に示す全アミノ酸配列を含む少なくとも１つのＬ鎖可変領域を 組込んだ請求項３に記載の改造ヒト抗体または改造ヒト抗体フラグメント。 １０．マウス（ｍｕｒｉｎｅ）ハイブリドーマ細胞系Ｈ１７Ｅ２によって分泌さ れるγ−１、κ抗ＰＬＡＰモノクローナル抗体の特異性と等価の特異性を有する ことを特徴とする合成特異的結合物質、改造ヒト抗体または改造ヒト抗体フラグ メント。 １１．合成特異的結合物質、改造ヒト抗体または改造ヒト抗体フラグメントをコ ードする外来遺伝子を細胞系に組込むことによって得られる請求項１から１０の いずれか一項に記載の合成特異的結合物質、改造ヒト抗体または改造ヒト抗体フ ラグメントを産生する安定な宿主細胞系。 １２．外来遺伝子が、ヌクレオチド配列：（１）【配列があります】 （２）【配列があります】 （３）【配列があります】 （４）【配列があります】 （５）【配列があります】 （６）【配列があります】 から選択された１つ以上のヌクレオチド配列を含むことを特徴とする請求項１１ に記載の安定な宿主細胞系。 １３．外来遺伝子が添付の図１０に示す全ヌクレオチド配列を含むことを特徴と する請求項１１に記載の安定な宿主細胞系。 １４．外来遺伝子が添付の図１１に示す全ヌクレオチド配列を含むことを特徴と する請求項１１に記載の安定な宿主細胞系。 １５．外来遺伝子が： （ａ）アミノ酸配列： （１）【配列があります】 （２）【配列があります】 （３）【配列があります】 （４）【配列があります】 （５）【配列があります】 （６）【配列があります】 から選択された少なくとも１つのアミノ酸配列と、（ｂ）タンパク質外郭構造と をコードしており、前記タンパク質外郭構造は、コードされたアミノ酸配列が発 現したときに該アミノ酸配列をヒト胎盤アルカリホスファターゼに特異性を有す るＣＤＲとして機能させ得ることを特徴とする請求項１１に記載の安定な宿主細 胞系。 １６．外来遺伝子が添付の図１０の全アミノ酸配列をコードしていることを特徴 とする請求項１１に記載の安定な宿主細胞系。 １７．外来遺伝子が添付の図１１の全アミノ酸配列をコードしていることを特徴 とする請求項１１に記載の安定な宿主細胞系。 １８．プラスミドｐＳＶｇｐｔＨｕ２ＶＨＰしＡＰ−ＨｕＩｇＧ１。 １９．プラスミドｐＳＶｎｅｏＨｕＶｋＰＬＡＰ−ＨｕＣｋ。 ２０．合成特異的結合物質、改造ヒト抗体または改造ヒト抗体フラグメント産生 において請求項１８または１９に記載のプラスミドを使用する方法。 ２１．大腸菌ＮＣＴＣ　１２３８９。 ２２．大腸菌ＮＣＴＣ　１２３９０。 ２３．大腸歯ＮＣＴＣ　１２３８９に含まれヒト胎盤アルカリホスファターゼに 特異性を有する改造ヒト抗体Ｈ鎖可変領域をコードするＤＮＡ配列。 ２４．大腸菌ＮＣＴＣ　１２３９０に含まれヒト胎盤アルカリホスファターゼに 特異性を有する改造ヒト抗体Ｌ鎖可変領域をコードするＤＮＡ配列。 ２５．大腸菌ＮＣＴＣ　１２３８９に含まれている発現ベクターを介して産生さ れ得るヒト胎盤アルカリホスファターゼに特異性を有する改造ヒト抗体Ｈ鎖可変 領域。 ２６．大腸菌ＮＣＴＣ　１２３９０に含まれている発現ベクターによって産生さ れ得るヒトアルカリホスファターゼに特異性を有する改造ヒト抗体Ｌ鎖可変領域 。 ２７．請求項２５または２６に記載の少なくとも１つの可変領域を含む改造ヒト 抗体または改造ヒト抗体フラグメント。 ２８．癌細胞の増殖を抑制または停止させ得る物質に結合もしくは組込まれるか またはヒト体内で検出され得る物質に結合した請求項１から１０または請求項２ ７のいずれか一項に記載の合成特異的結合物質、改造ヒト抗体または改造ヒト抗 体フラグメント。 ２９．請求項２８に記載の合成特異的結合物質、改造ヒト抗体または改造ヒト抗 体フラグメントを製薬上許容される担体中に含む注射可能組成物。 ３０．ヒト癌の軽減または除去に使用される治療用医薬を製造するためまたはヒ トのｉｎ−ｖｉｖｏ診断に使用される診断用組成物を製造するための、請求項１ から１０または請求項２７のいずれか一項に記載の合成特異的結合物質、改造ヒ ト抗体または改造ヒト抗体フラグメントを使用する方法。 ３１．ヒト癌のセラピーまたはイメージングの方法において請求項２８に記載の 合成結合物質、改造ヒト抗体または改造ヒト抗体フラグメントを使用する方法。