JPH056665B2 - - Google Patents
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- JPH056665B2 JPH056665B2 JP14358983A JP14358983A JPH056665B2 JP H056665 B2 JPH056665 B2 JP H056665B2 JP 14358983 A JP14358983 A JP 14358983A JP 14358983 A JP14358983 A JP 14358983A JP H056665 B2 JPH056665 B2 JP H056665B2
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-
- G—PHYSICS
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Description
本発明は多種抗体を同時に検出することができ
る改良されたマイクロカプセル試薬並びにこのよ
うなマイクロカプセル試薬の製造方法に関する。 病原性の細菌やウイルスなどの抗原とこれによ
り生起した抗体との間の反応性は極めて特異性が
高いことが知られている。この血清型特異性が極
めて高いことを利用して血清型の判別を行なうた
め、特開昭58−21565において血清型の異なる二
種以上の抗原を感作したマイクロカプセルが使用
された。この方法によれば血清型と厳密に対応す
る抗原抗体反応により診断を行なうので、診断の
精度は非常に高い。問題は感作に際してそれぞれ
異なる抗原成分の感度レベルをいかにして同じ程
度にそろえるかにある。感度レベルが同じである
ことは再現性をよくするための重要な条件である
が、異種抗原を感作するのであるから一般的には
各感度レベルにばらつきがあるのがむしろ当然で
ある。これは菌自身の成長の遅速や成長条件など
により菌数や活性に違いがあるためであろう。実
際問題としては感作されたマイクロカプセルにお
ける抗原成分それぞれが同じ感度レベルにあるも
のだけを選別して使用するので、感作にばらつき
のあるマイクロカプセルは製造上の損失として扱
われていた。 本発明者らは感度レベルが不均一であるマイク
ロカプセルであつても、これに感度レベルが不足
している抗原を単独感作したマイクロカプセルを
補助的に混合すると感度の均一性がよくなりさら
に凝集パターンが明瞭になるという知見を得た。 本発明の多種抗体検出用混合マイクロカプセル
は、抗体に対して不均一な感度レベルを示す２以
上の異種抗原で感作され各抗原の抗体に対する凝
集感度が異なる主マイクロカプセルと、前記異種
抗原のうち抗体に対し低い感度レベルを示す抗原
で単独感作されている補助マイクロカプセルとを
含有することを特徴とする。 また本発明の多種抗体検査用混合マイクロカプ
セルの製造方法は、抗体に対して不均一な感度レ
ベルを示す二以上の異種抗原を混合した後感作し
た主マイクロカプセルを使用して抗原抗体反応を
行つた後、感度レベルが不足していた抗原で単独
感作して補助マイクロカプセルを調製し、これら
前記主マイクロカプセルと前記補助マイクロカプ
セルとを混合して混合系マイクロカプセルを調製
することを特徴とする。 例えばＡの抗原成分が所望の感度レベルをもち
Ｂの抗原成分の感度レベルが前者のレベルに達し
ていないとする場合、Ａ及びＢを混合した後同時
感作した主マイクロカプセルに対し抗原成分Ｂの
みを単独感作したマイクロカプセルを補助マイク
ロカプセルとして混合するのである。この混合系
マイクロカプセルにおいて、抗原成分Ｂの感度上
昇は達成されるが一方、抗原成分Ａからみるとノ
イズが増えたのと同じことであり、抗原成分Ａの
感度は下ると思われた。ところが意外にも抗原成
分Ａの減感は起らず当初の感度が実質上維持され
ていた。このような効果は前記とは逆に抗原成分
Ａが感度レベルにおいて不足している場合でも、
補助マイクロカプセルとしてＡ成分を単独感作し
たマイクロカプセルを混合することによつて同様
に得ることができる。また、主マイクロカプセル
のＡ成分のみが所望感度レベルであつてＢ成分及
びＣ成分のそれが不足しているならば、Ｂ成分を
単独感作したもの、Ｃ成分のみを単独感作したも
のを補助マイクロカプセルとして混じればよい。 補助マイクロカプセルは主マイクロカプセルに
対して50容量％以下、好ましくは15〜45容量％の
範囲の混合するのが望ましい。補助マイクロカプ
セルの量が上限を越えると感度低下が生じ、あま
り少量であると主マイクロカプセル自体の欠点が
表出する。 本発明において感作抗原として使用できるもの
は、ホルモン、薬物代謝産物、特異蛋白質、ビー
ルス、細菌、細胞および人起源の抗原等広範囲に
わたる抗原から選択される。具体的には例えば、
梅毒トレポネーマ抗原、HBs抗原、トキソプラズ
マ抗原、マイコプラズマ抗原、赤痢菌、レプトス
ピラ菌、、コレラ菌、等がある。これらの中で血
清型の異なる抗原成分であるレプトスピラ菌を感
作抗原とした本発明の試薬は特に価値が高い。こ
れら感作用抗原の量は、その種類や目的とする測
定の精度等種々の条件により、適宜選択される
が、一般的にはマイクロカプセルの固型分に対し
て、0.01〜10重量％の範囲内である。 抗原をマイクロカプセルに感作する方法は特開
昭58−21565に詳細に記載されている。 本発明において担体として使用するマイクロカ
プセルは油性物質の芯とこれを包囲する壁材とか
らなる。その一般的な製法は例えば近藤朝士著
「マイクロカプセル」日刊工業新聞社刊（昭和45
年）に詳説されている。また具体的な油性物質や
壁材、各種添加剤等については特開昭57−
196621、同57−19662等に詳細な記載がある。 抗原又は抗体をマイクロカプセルに感作するに
は周知の方法が用いられ、特に架橋剤を用いる方
法が好都合である（千畑一郎著「固定化酵素」講
談社（昭和50年）等参照）。 担体として用いられるマイクロカプセルは0.85
−1.25の範囲内の比重をもち、0.5〜20μm程度、
好ましくは１〜10μmの範囲の平均粒子サイズを
もつものが好適である。 マイクロカプセル担体は固型分として通常１〜
３重量％程度の範囲内で使用するのが望ましい。 本発明の試薬はマイクロタイター法に適用して
凝集像を観察し抗体を検出する免疫検査に用いら
れる。本発明によれば一種の試薬で多種抗体の検
出が可能であり、さらに本発明の試薬に特徴的な
免疫学的交叉反応性をも併せ観察すると、複数個
の血清型特異性をもつ菌の感染症も唯一回の操作
で適確に診断できる。本発明においては主／補助
マイクロカプセル混合系とすることによつて製造
上の得率を上げることができ、工業上非常に有用
である。 以下実施例により本発明をさらに詳細に説明す
る。 実施例 １ 二種菌株感作マイクロカプセルＡの作成： ジイソプロピルナフタレン11.8ｇと塩素化パラ
フイン（塩素化度50％、トヨパラツクス150）
13.2ｇとの混合油（比重約1.10）に油溶性赤色染
料オレオゾール・レツドBB（住友化学製）0.25ｇ
を溶解した。得られた油性物質液を、無水マレイ
ン酸−メチルビニルエーテル共重合体
（GANTREZ AN−149、ゼネラルアニリンアン
ドフイルム社製）2.5ｇを水75mlに溶解した溶液
に加えた。攪拌、乳化し、コールターカウンター
TA−型で油滴のサイズを測定し平均サイズが
約5μmとなるように調製した。これに尿素2.5ｇ
とレゾルシン0.25ｇと塩化アンモニウム0.3ｇと
を水25mlに溶解した溶液を加えた。さらに水50ml
を加えて希釈し、37％ホルムアルデヒド水溶液７
mlを加えた後、60℃で２時間反応させてマイクロ
カプセル化を行なつた。その後1N水酸化ナトリ
ウム水溶液を加えPHを9.0に調整してマイクロカ
プセルを作成した。 このようにして作成したマイクロカプセルを生
理食塩水で遠沈洗浄することにより、未反応残存
物を除去した。マイクロカプセル粒子濃度が10％
になるように生理食塩水に分散し、これをマイク
ロカプセルＡとした。 二種菌株感作マイクロカプセル試薬Ａの作成： 得られたマイクロカプセルA1.5mlをとり、8.5
mlの生理食塩水を加え分散した。 次に、25％グルタルアルデヒド水溶液100μ
を混合し、室温で１時間反応させ、遠沈洗浄後、
10mlの生理食塩水に再分散した。レプトスピラ菌
オータムナリス・秋疫Ａ株をコルトフ培地（10％
正常ウサギ血清を含む）で増殖させ、培養６〜10
日目の培養菌液を9000rpmで20分（５℃）遠心分
離して得られた沈澱菌体を、生理食塩水で２回洗
浄した。次いで生理食塩水に浮遊させ、20kHzの
音波破砕器（大岳製作所製）で10分破砕処理を行
なつた。この音波破砕処理溶液を分光光度計を用
いて280nmの波長で測定し、光学濃度を0.1に調
製したものを抗原液１とした。 レプトスピラ菌ヘブドマデイス・ヘブドマデイ
ス株をコルトフ培地で秋疫Ａ株と同様に増殖させ
た。洗浄後、音波破砕処理を行なつた。得られた
遠心上清を280nmの波長で測定した時の光学濃度
が0.1になるように調製し、これを抗原液２とし
た。 抗原液１および２の各２mlを混合し、これを前
記グルタルアルデヒド処理したマイクロカプセル
２mlと混合した。37℃で１時間インキユベートし
た後、４℃の冷蔵庫に18時間静置した。 次に、0.2％グリシン含有生理食塩水で２回洗
浄後、２mlの３％ウシ血清アルブミン含有の
0.15Mリン酸緩衝生理食塩水（PBSPH＝7.2）に
再分散し、試薬Ａを得た。 性能試験： この試薬Ａの性能を、後述する方法で調製した
オータムナリス秋疫Ａ株及びヘブドマデイス・ヘ
ブドマデイス株の各抗血清を用いてマイクロタイ
ター法により予備テストを行なつた。 得られた結果を第１表、「試薬Ａ」の欄に示す。
る改良されたマイクロカプセル試薬並びにこのよ
うなマイクロカプセル試薬の製造方法に関する。 病原性の細菌やウイルスなどの抗原とこれによ
り生起した抗体との間の反応性は極めて特異性が
高いことが知られている。この血清型特異性が極
めて高いことを利用して血清型の判別を行なうた
め、特開昭58−21565において血清型の異なる二
種以上の抗原を感作したマイクロカプセルが使用
された。この方法によれば血清型と厳密に対応す
る抗原抗体反応により診断を行なうので、診断の
精度は非常に高い。問題は感作に際してそれぞれ
異なる抗原成分の感度レベルをいかにして同じ程
度にそろえるかにある。感度レベルが同じである
ことは再現性をよくするための重要な条件である
が、異種抗原を感作するのであるから一般的には
各感度レベルにばらつきがあるのがむしろ当然で
ある。これは菌自身の成長の遅速や成長条件など
により菌数や活性に違いがあるためであろう。実
際問題としては感作されたマイクロカプセルにお
ける抗原成分それぞれが同じ感度レベルにあるも
のだけを選別して使用するので、感作にばらつき
のあるマイクロカプセルは製造上の損失として扱
われていた。 本発明者らは感度レベルが不均一であるマイク
ロカプセルであつても、これに感度レベルが不足
している抗原を単独感作したマイクロカプセルを
補助的に混合すると感度の均一性がよくなりさら
に凝集パターンが明瞭になるという知見を得た。 本発明の多種抗体検出用混合マイクロカプセル
は、抗体に対して不均一な感度レベルを示す２以
上の異種抗原で感作され各抗原の抗体に対する凝
集感度が異なる主マイクロカプセルと、前記異種
抗原のうち抗体に対し低い感度レベルを示す抗原
で単独感作されている補助マイクロカプセルとを
含有することを特徴とする。 また本発明の多種抗体検査用混合マイクロカプ
セルの製造方法は、抗体に対して不均一な感度レ
ベルを示す二以上の異種抗原を混合した後感作し
た主マイクロカプセルを使用して抗原抗体反応を
行つた後、感度レベルが不足していた抗原で単独
感作して補助マイクロカプセルを調製し、これら
前記主マイクロカプセルと前記補助マイクロカプ
セルとを混合して混合系マイクロカプセルを調製
することを特徴とする。 例えばＡの抗原成分が所望の感度レベルをもち
Ｂの抗原成分の感度レベルが前者のレベルに達し
ていないとする場合、Ａ及びＢを混合した後同時
感作した主マイクロカプセルに対し抗原成分Ｂの
みを単独感作したマイクロカプセルを補助マイク
ロカプセルとして混合するのである。この混合系
マイクロカプセルにおいて、抗原成分Ｂの感度上
昇は達成されるが一方、抗原成分Ａからみるとノ
イズが増えたのと同じことであり、抗原成分Ａの
感度は下ると思われた。ところが意外にも抗原成
分Ａの減感は起らず当初の感度が実質上維持され
ていた。このような効果は前記とは逆に抗原成分
Ａが感度レベルにおいて不足している場合でも、
補助マイクロカプセルとしてＡ成分を単独感作し
たマイクロカプセルを混合することによつて同様
に得ることができる。また、主マイクロカプセル
のＡ成分のみが所望感度レベルであつてＢ成分及
びＣ成分のそれが不足しているならば、Ｂ成分を
単独感作したもの、Ｃ成分のみを単独感作したも
のを補助マイクロカプセルとして混じればよい。 補助マイクロカプセルは主マイクロカプセルに
対して50容量％以下、好ましくは15〜45容量％の
範囲の混合するのが望ましい。補助マイクロカプ
セルの量が上限を越えると感度低下が生じ、あま
り少量であると主マイクロカプセル自体の欠点が
表出する。 本発明において感作抗原として使用できるもの
は、ホルモン、薬物代謝産物、特異蛋白質、ビー
ルス、細菌、細胞および人起源の抗原等広範囲に
わたる抗原から選択される。具体的には例えば、
梅毒トレポネーマ抗原、HBs抗原、トキソプラズ
マ抗原、マイコプラズマ抗原、赤痢菌、レプトス
ピラ菌、、コレラ菌、等がある。これらの中で血
清型の異なる抗原成分であるレプトスピラ菌を感
作抗原とした本発明の試薬は特に価値が高い。こ
れら感作用抗原の量は、その種類や目的とする測
定の精度等種々の条件により、適宜選択される
が、一般的にはマイクロカプセルの固型分に対し
て、0.01〜10重量％の範囲内である。 抗原をマイクロカプセルに感作する方法は特開
昭58−21565に詳細に記載されている。 本発明において担体として使用するマイクロカ
プセルは油性物質の芯とこれを包囲する壁材とか
らなる。その一般的な製法は例えば近藤朝士著
「マイクロカプセル」日刊工業新聞社刊（昭和45
年）に詳説されている。また具体的な油性物質や
壁材、各種添加剤等については特開昭57−
196621、同57−19662等に詳細な記載がある。 抗原又は抗体をマイクロカプセルに感作するに
は周知の方法が用いられ、特に架橋剤を用いる方
法が好都合である（千畑一郎著「固定化酵素」講
談社（昭和50年）等参照）。 担体として用いられるマイクロカプセルは0.85
−1.25の範囲内の比重をもち、0.5〜20μm程度、
好ましくは１〜10μmの範囲の平均粒子サイズを
もつものが好適である。 マイクロカプセル担体は固型分として通常１〜
３重量％程度の範囲内で使用するのが望ましい。 本発明の試薬はマイクロタイター法に適用して
凝集像を観察し抗体を検出する免疫検査に用いら
れる。本発明によれば一種の試薬で多種抗体の検
出が可能であり、さらに本発明の試薬に特徴的な
免疫学的交叉反応性をも併せ観察すると、複数個
の血清型特異性をもつ菌の感染症も唯一回の操作
で適確に診断できる。本発明においては主／補助
マイクロカプセル混合系とすることによつて製造
上の得率を上げることができ、工業上非常に有用
である。 以下実施例により本発明をさらに詳細に説明す
る。 実施例 １ 二種菌株感作マイクロカプセルＡの作成： ジイソプロピルナフタレン11.8ｇと塩素化パラ
フイン（塩素化度50％、トヨパラツクス150）
13.2ｇとの混合油（比重約1.10）に油溶性赤色染
料オレオゾール・レツドBB（住友化学製）0.25ｇ
を溶解した。得られた油性物質液を、無水マレイ
ン酸−メチルビニルエーテル共重合体
（GANTREZ AN−149、ゼネラルアニリンアン
ドフイルム社製）2.5ｇを水75mlに溶解した溶液
に加えた。攪拌、乳化し、コールターカウンター
TA−型で油滴のサイズを測定し平均サイズが
約5μmとなるように調製した。これに尿素2.5ｇ
とレゾルシン0.25ｇと塩化アンモニウム0.3ｇと
を水25mlに溶解した溶液を加えた。さらに水50ml
を加えて希釈し、37％ホルムアルデヒド水溶液７
mlを加えた後、60℃で２時間反応させてマイクロ
カプセル化を行なつた。その後1N水酸化ナトリ
ウム水溶液を加えPHを9.0に調整してマイクロカ
プセルを作成した。 このようにして作成したマイクロカプセルを生
理食塩水で遠沈洗浄することにより、未反応残存
物を除去した。マイクロカプセル粒子濃度が10％
になるように生理食塩水に分散し、これをマイク
ロカプセルＡとした。 二種菌株感作マイクロカプセル試薬Ａの作成： 得られたマイクロカプセルA1.5mlをとり、8.5
mlの生理食塩水を加え分散した。 次に、25％グルタルアルデヒド水溶液100μ
を混合し、室温で１時間反応させ、遠沈洗浄後、
10mlの生理食塩水に再分散した。レプトスピラ菌
オータムナリス・秋疫Ａ株をコルトフ培地（10％
正常ウサギ血清を含む）で増殖させ、培養６〜10
日目の培養菌液を9000rpmで20分（５℃）遠心分
離して得られた沈澱菌体を、生理食塩水で２回洗
浄した。次いで生理食塩水に浮遊させ、20kHzの
音波破砕器（大岳製作所製）で10分破砕処理を行
なつた。この音波破砕処理溶液を分光光度計を用
いて280nmの波長で測定し、光学濃度を0.1に調
製したものを抗原液１とした。 レプトスピラ菌ヘブドマデイス・ヘブドマデイ
ス株をコルトフ培地で秋疫Ａ株と同様に増殖させ
た。洗浄後、音波破砕処理を行なつた。得られた
遠心上清を280nmの波長で測定した時の光学濃度
が0.1になるように調製し、これを抗原液２とし
た。 抗原液１および２の各２mlを混合し、これを前
記グルタルアルデヒド処理したマイクロカプセル
２mlと混合した。37℃で１時間インキユベートし
た後、４℃の冷蔵庫に18時間静置した。 次に、0.2％グリシン含有生理食塩水で２回洗
浄後、２mlの３％ウシ血清アルブミン含有の
0.15Mリン酸緩衝生理食塩水（PBSPH＝7.2）に
再分散し、試薬Ａを得た。 性能試験： この試薬Ａの性能を、後述する方法で調製した
オータムナリス秋疫Ａ株及びヘブドマデイス・ヘ
ブドマデイス株の各抗血清を用いてマイクロタイ
ター法により予備テストを行なつた。 得られた結果を第１表、「試薬Ａ」の欄に示す。
【表】
以上の予備試験から抗ヘブドマデイス・ヘブド
マデイス抗体に対しては、目的の感度（10240）
を得ることができたが、抗オータムナリス・秋疫
Ａ抗体に対する感度は、目的とする感度（10240）
に達していないことがわかつた。 そこで、あらかじめ、オータムナリス・秋疫Ａ
を単独で感作し、目的の感度（10240）を有する
一種株感作試薬を準備した。このものを試薬Ａに
容量比で、試薬Ａ：オータムナリス・秋疫Ａ単独
感作試薬＝３：１となるように混合し、試薬
A′を得た。 試薬Ａと同様に、対応する２つの抗血清を用い
てマイクロタイターテストを行なつた。得られた
結果を第１表、「試薬A′」の欄に示した。 試薬Ａ（オータムナリス・秋疫Ａ及びヘブドマ
デイス・ヘブドマデイス株２種感作試薬）にオー
タムナリス・秋疫Ａ単独感作試薬を混合して得ら
れる本発明の試薬A′においては、予備テストで
目的とする感度に達していなかつた抗オータムナ
リス・秋疫Ａ抗体に対する感度が目的感度にまで
上昇した。従つて各抗体に対して感度レベルを同
一にそろえることができ、その結果、ノイズが増
加することなしに抗体の検出感度が上昇した。 実施例 ２ 三種菌株感作マイクロカプセル試薬Ｂの作成： 実施例１と同様にして、レプトスピラ菌オータ
ムナリス・秋疫Ａ株、ヘブドマデイス・ヘブドマ
デイス株、イクテロヘモラギエ、RGA株の三種
の菌株をそれぞれコルトフ培地で増殖させた。洗
浄後、それぞれ音波破砕処理を行なつた。280nm
の波長で光学濃度が0.1を示すように調製したそ
れぞれの音波破砕処理溶液を抗原液とした。三種
の菌株の抗原液２mlを混合し、実施例１と同様に
マイクロカプセルに混合して反応させ、試薬Ｂに
得た。 実施例１と同様に、三種の菌株に対応する抗血
清を用いてマイクロタイター法により、予備テス
トを行なつた。 得られた結果を第２表、「試薬Ｂ」の欄に示す。
マデイス抗体に対しては、目的の感度（10240）
を得ることができたが、抗オータムナリス・秋疫
Ａ抗体に対する感度は、目的とする感度（10240）
に達していないことがわかつた。 そこで、あらかじめ、オータムナリス・秋疫Ａ
を単独で感作し、目的の感度（10240）を有する
一種株感作試薬を準備した。このものを試薬Ａに
容量比で、試薬Ａ：オータムナリス・秋疫Ａ単独
感作試薬＝３：１となるように混合し、試薬
A′を得た。 試薬Ａと同様に、対応する２つの抗血清を用い
てマイクロタイターテストを行なつた。得られた
結果を第１表、「試薬A′」の欄に示した。 試薬Ａ（オータムナリス・秋疫Ａ及びヘブドマ
デイス・ヘブドマデイス株２種感作試薬）にオー
タムナリス・秋疫Ａ単独感作試薬を混合して得ら
れる本発明の試薬A′においては、予備テストで
目的とする感度に達していなかつた抗オータムナ
リス・秋疫Ａ抗体に対する感度が目的感度にまで
上昇した。従つて各抗体に対して感度レベルを同
一にそろえることができ、その結果、ノイズが増
加することなしに抗体の検出感度が上昇した。 実施例 ２ 三種菌株感作マイクロカプセル試薬Ｂの作成： 実施例１と同様にして、レプトスピラ菌オータ
ムナリス・秋疫Ａ株、ヘブドマデイス・ヘブドマ
デイス株、イクテロヘモラギエ、RGA株の三種
の菌株をそれぞれコルトフ培地で増殖させた。洗
浄後、それぞれ音波破砕処理を行なつた。280nm
の波長で光学濃度が0.1を示すように調製したそ
れぞれの音波破砕処理溶液を抗原液とした。三種
の菌株の抗原液２mlを混合し、実施例１と同様に
マイクロカプセルに混合して反応させ、試薬Ｂに
得た。 実施例１と同様に、三種の菌株に対応する抗血
清を用いてマイクロタイター法により、予備テス
トを行なつた。 得られた結果を第２表、「試薬Ｂ」の欄に示す。
【表】
予備テストの結果、抗オータムナリス・秋疫Ａ
抗体に対しては、目的の感度（10240）を得るこ
とができたが、抗イクテロヘモラギエ・RGA抗
体および抗ヘブドマデイス・ヘブドマデイス抗体
に対する感度は目的とする感度（10240）に達し
ていないことがわかつた。 そこで、あらかじめ、イクテロヘモラギエ・
RGAおよびヘブドマデイス・ヘブドマデイスを
各々単独で感作し、目的の感度（10240）を有し
ている一種株感作試薬を準備しておいた。このも
のを試薬Ｂに、容量比で試薬Ｂ：イクテロヘモラ
ギエ・RGA単独試薬：ヘブドマデイス・ヘブド
マデイス株単独試薬＝３：１：１となるように混
合し、試薬B′を得た。 試薬Ｂと同様に３つの抗血清を用いてマイクロ
タイターテストを行なつた。 得られた結果を第２表、「試薬B′」の欄に示し
た。 予備テストにおいて目的の感度（10240）に達
していなかつた抗イクテロヘモラギエ・RGA抗
体及びヘブドマデイス・ヘブドマデイス抗体に対
する感度は本発明の試薬B′においては目的とす
る感度に高められた。従つて各抗体に対する感度
レベルが同一となり、その結果、ノイズが増加す
ることなしに三種の抗体が同時に再現性よく高い
精度で検出できた。 抗血清を用いるマイクロプレートテスト： 実施例１および２で調製した試薬Ａ，A′、Ｂ，
B′の性能は以下の抗血清を用い、マイクロタイ
ター法により抗体価で評価した。 （抗血清の調製） (a) レプトスピラ菌イクテロヘモラギエ・RGA
株、 (b) オータムナリス・秋疫Ａ株、 (c) ヘブドマデイス・ヘブドマデイス株、 上記(a)，(b)，(c)それぞれの菌株でウサギを高度
免疫して、抗血清を作成した。 それぞれの菌株のコルトフ培地培養菌液を遠心
分離し、沈澱した菌体を生理食塩水に浮遊させ、
これを４〜５日間隔で２回ウサギに皮下注射し、
更に４〜５日間隔で９回静脈注射を行なつた。最
初の皮下注射から７〜８週経過し、所定の抗体価
をもつたことを確認した後、全採血を行ない、
各々の菌株の抗血清を作成した。 （マイクロタイター法によるテスト） レプトスピラ菌体成分を感作した試薬Ａ，A′，
Ｂ及びB′については、マイクロタイター法に用
いて抗原抗体反応を進めた。明らかな凝集を認め
た管を陽性とし、前記３種の菌株に対する抗血清
の最高希釈倍数を求め、それをもつて抗体価とし
た。３種の菌体の抗血清について、マイクロプレ
ートの各管孔に、25μの被検血清を0.15Mリン
酸緩衝生理食塩水（PBSPH7.2）を用いて２倍間
隔に希釈し、倍数希釈列を作成した。 次に、前記レプトスピラ菌体成分を感作したマ
イクロカプセル試薬Ａ，A′，Ｂ及びB′各25μを
ドロツパーで採取し、マイクロプレートの抗血清
の希釈列の管孔に順次滴下した。マイクロプレー
トを５分間振動して抗原抗体反応を進めて後、４
℃の冷蔵庫に18時間静置した。その後とり出し、
ライトテーブル上にマイクロプレートを置いて管
底の凝集像を観察し、凝集を示した血清の最高希
釈倍数をもつて抗体価とした。
抗体に対しては、目的の感度（10240）を得るこ
とができたが、抗イクテロヘモラギエ・RGA抗
体および抗ヘブドマデイス・ヘブドマデイス抗体
に対する感度は目的とする感度（10240）に達し
ていないことがわかつた。 そこで、あらかじめ、イクテロヘモラギエ・
RGAおよびヘブドマデイス・ヘブドマデイスを
各々単独で感作し、目的の感度（10240）を有し
ている一種株感作試薬を準備しておいた。このも
のを試薬Ｂに、容量比で試薬Ｂ：イクテロヘモラ
ギエ・RGA単独試薬：ヘブドマデイス・ヘブド
マデイス株単独試薬＝３：１：１となるように混
合し、試薬B′を得た。 試薬Ｂと同様に３つの抗血清を用いてマイクロ
タイターテストを行なつた。 得られた結果を第２表、「試薬B′」の欄に示し
た。 予備テストにおいて目的の感度（10240）に達
していなかつた抗イクテロヘモラギエ・RGA抗
体及びヘブドマデイス・ヘブドマデイス抗体に対
する感度は本発明の試薬B′においては目的とす
る感度に高められた。従つて各抗体に対する感度
レベルが同一となり、その結果、ノイズが増加す
ることなしに三種の抗体が同時に再現性よく高い
精度で検出できた。 抗血清を用いるマイクロプレートテスト： 実施例１および２で調製した試薬Ａ，A′、Ｂ，
B′の性能は以下の抗血清を用い、マイクロタイ
ター法により抗体価で評価した。 （抗血清の調製） (a) レプトスピラ菌イクテロヘモラギエ・RGA
株、 (b) オータムナリス・秋疫Ａ株、 (c) ヘブドマデイス・ヘブドマデイス株、 上記(a)，(b)，(c)それぞれの菌株でウサギを高度
免疫して、抗血清を作成した。 それぞれの菌株のコルトフ培地培養菌液を遠心
分離し、沈澱した菌体を生理食塩水に浮遊させ、
これを４〜５日間隔で２回ウサギに皮下注射し、
更に４〜５日間隔で９回静脈注射を行なつた。最
初の皮下注射から７〜８週経過し、所定の抗体価
をもつたことを確認した後、全採血を行ない、
各々の菌株の抗血清を作成した。 （マイクロタイター法によるテスト） レプトスピラ菌体成分を感作した試薬Ａ，A′，
Ｂ及びB′については、マイクロタイター法に用
いて抗原抗体反応を進めた。明らかな凝集を認め
た管を陽性とし、前記３種の菌株に対する抗血清
の最高希釈倍数を求め、それをもつて抗体価とし
た。３種の菌体の抗血清について、マイクロプレ
ートの各管孔に、25μの被検血清を0.15Mリン
酸緩衝生理食塩水（PBSPH7.2）を用いて２倍間
隔に希釈し、倍数希釈列を作成した。 次に、前記レプトスピラ菌体成分を感作したマ
イクロカプセル試薬Ａ，A′，Ｂ及びB′各25μを
ドロツパーで採取し、マイクロプレートの抗血清
の希釈列の管孔に順次滴下した。マイクロプレー
トを５分間振動して抗原抗体反応を進めて後、４
℃の冷蔵庫に18時間静置した。その後とり出し、
ライトテーブル上にマイクロプレートを置いて管
底の凝集像を観察し、凝集を示した血清の最高希
釈倍数をもつて抗体価とした。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １ 抗体に対して不均一な感度レベルを示す二以
上の異種抗原で感作され各抗原の抗体に対する凝
集感度が異なる主マイクロカプセルと、前記異種
抗原のうち抗体に対し低い感度レベルを示す抗原
で単独感作されている補助マイクロカプセルとを
含有することを特徴とする多種抗体検出用混合マ
イクロカプセル。 ２ 前記異種抗原が血清型の異なる抗原成分であ
る特許請求の範囲第１項に記載の混合マイクロカ
プセル。 ３ 前記抗原成分がレプトスピラ菌である特許請
求の範囲第２項に記載の混合マイクロカプセル。 ４ 抗体に対して不均一な感度レベルを示す二以
上の異種抗原を混合した後感作した主マイクロカ
プセルを使用して抗原抗体反応を行つた後、感度
レベルが不足していた抗原で単独感作して補助マ
イクロカプセルを調製し、これら前記主マイクロ
カプセルと前記補助マイクロカプセルとを混合し
て混合系マイクロカプセルを調製することを特徴
とする多種抗体検査用混合マイクロカプセルの製
造方法。 ５ 前記異種抗原が血清型の異なる抗原成分であ
る特許請求の範囲第４項に記載の製造方法。 ６ 前記抗原成分がレプトスピラ菌である特許請
求の範囲第５項に記載の製造方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP14358983A JPS6035266A (ja) | 1983-08-05 | 1983-08-05 | 多種抗体検出用混合マイクロカプセル及びその製造方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP14358983A JPS6035266A (ja) | 1983-08-05 | 1983-08-05 | 多種抗体検出用混合マイクロカプセル及びその製造方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6035266A JPS6035266A (ja) | 1985-02-23 |
| JPH056665B2 true JPH056665B2 (ja) | 1993-01-27 |
Family
ID=15342243
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP14358983A Granted JPS6035266A (ja) | 1983-08-05 | 1983-08-05 | 多種抗体検出用混合マイクロカプセル及びその製造方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS6035266A (ja) |
-
1983
- 1983-08-05 JP JP14358983A patent/JPS6035266A/ja active Granted
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS6035266A (ja) | 1985-02-23 |
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