JPH0587519B2 - - Google Patents
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- JPH0587519B2 JPH0587519B2 JP58038124A JP3812483A JPH0587519B2 JP H0587519 B2 JPH0587519 B2 JP H0587519B2 JP 58038124 A JP58038124 A JP 58038124A JP 3812483 A JP3812483 A JP 3812483A JP H0587519 B2 JPH0587519 B2 JP H0587519B2
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- proteoglycan
- proteoglycans
- gram
- hexose
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/195—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria
- C07K14/24—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria from Enterobacteriaceae (F), e.g. Citrobacter, Serratia, Proteus, Providencia, Morganella, Yersinia
- C07K14/26—Klebsiella (G)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/04—Immunostimulants
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P21/00—Preparation of peptides or proteins
- C12P21/005—Glycopeptides, glycoproteins
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
- Y10S530/82—Proteins from microorganisms
- Y10S530/825—Bacteria
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- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は菌体膜から分離したプロテオグリカン
フラクシヨンならびにその製造法および特に腫瘍
細胞に対する細胞毒性が知られているN.K.（ナチ
ユラルキラー）細胞の活性化等、免疫刺激剤とし
てのその使用に関する。
フラクシヨンならびにその製造法および特に腫瘍
細胞に対する細胞毒性が知られているN.K.（ナチ
ユラルキラー）細胞の活性化等、免疫刺激剤とし
てのその使用に関する。
本発明者名義の特開昭55−85525号公報にはグ
ラム陰性菌を原料とする解毒した膜プロテオグリ
カンの製造法およびそのワクチン補助薬としての
使用が開示されている。
ラム陰性菌を原料とする解毒した膜プロテオグリ
カンの製造法およびそのワクチン補助薬としての
使用が開示されている。
本発明は、特にKlebsiella pneumoniae菌株に
由来する膜プロテオグリカンを原料とし、免疫刺
激特性（最も顕著な特性はN.K.細胞を強力に活
性化することである）を有するプロテオグリカン
フラクシヨンを分離することを記載するものであ
る。
由来する膜プロテオグリカンを原料とし、免疫刺
激特性（最も顕著な特性はN.K.細胞を強力に活
性化することである）を有するプロテオグリカン
フラクシヨンを分離することを記載するものであ
る。
本発明による、グラム陰性菌株の可溶性膜プロ
テオグリカンを原料とする、特にインターフエロ
ン誘発性等の免疫刺激活性を有する菌体膜プロテ
オグリカンの製造法は： ・ グラム陰性菌株の可溶性膜プロテオグリカン
をリゾチームにより加水分解し、 ・ 分子量200000〜400000を有するプロテオグリ
カンを加水分解生成物から分離すること を特徴とする。
テオグリカンを原料とする、特にインターフエロ
ン誘発性等の免疫刺激活性を有する菌体膜プロテ
オグリカンの製造法は： ・ グラム陰性菌株の可溶性膜プロテオグリカン
をリゾチームにより加水分解し、 ・ 分子量200000〜400000を有するプロテオグリ
カンを加水分解生成物から分離すること を特徴とする。
本発明による方法において出発物質として用い
る可溶性膜プロテオグリカンは好ましくは、特開
昭55−85525号公報記載の方法により製造する。
特開昭55−85525号公報の方法において、本質的
な工程は、塩基または次亜臭素酸塩のいずれかを
用いる公知の方法で分離した粗膜プロテオグリカ
ンを水性媒質中で処理し、可溶性プロテオグリカ
ンを含有する水相を回収することから成る。
る可溶性膜プロテオグリカンは好ましくは、特開
昭55−85525号公報記載の方法により製造する。
特開昭55−85525号公報の方法において、本質的
な工程は、塩基または次亜臭素酸塩のいずれかを
用いる公知の方法で分離した粗膜プロテオグリカ
ンを水性媒質中で処理し、可溶性プロテオグリカ
ンを含有する水相を回収することから成る。
この方法の他の特徴は前記公報中に見出すこと
ができ、その教示は本明細書中に参照して記載す
る。
ができ、その教示は本明細書中に参照して記載す
る。
本発明による、活性フラクシヨンを構成し、分
子量200000〜400000を有するプロテオグリカンの
分離は公知のいずれかの方法、特に、例えばセフ
フアロースゲルCL2Bカラムによる、分子ふるい
クロマトグラフイーを用いて行なうことができ
る。
子量200000〜400000を有するプロテオグリカンの
分離は公知のいずれかの方法、特に、例えばセフ
フアロースゲルCL2Bカラムによる、分子ふるい
クロマトグラフイーを用いて行なうことができ
る。
リゾチーム処理により、プロテオグリカンのＮ
−アセチルムラミル−β−（１−４）−Ｎ−アセチ
ルグルコサミン結合が加水分解され、当該フラク
シヨンの分子量は減少する。この加水分解に要す
る時間は好ましくは10分間〜１時間、一般には30
分程度である。加水分解生成物をクロマトグラフ
イー分別にかける前にリゾチームおよび存在する
異種の塩もしくは化合物を除去することが望まし
い。
−アセチルムラミル−β−（１−４）−Ｎ−アセチ
ルグルコサミン結合が加水分解され、当該フラク
シヨンの分子量は減少する。この加水分解に要す
る時間は好ましくは10分間〜１時間、一般には30
分程度である。加水分解生成物をクロマトグラフ
イー分別にかける前にリゾチームおよび存在する
異種の塩もしくは化合物を除去することが望まし
い。
可溶性プロテオグリカンは、好ましくは、例え
ば１種もしくは数種の脂肪溶媒を用いて脱脂した
後にリゾチームと反応させる。
ば１種もしくは数種の脂肪溶媒を用いて脱脂した
後にリゾチームと反応させる。
使用可能なグラム陰性菌の中で特にKlebsiella
pneumoniae、Serratia marcescensおよび
Escherichia coliの名を挙げる必要があるが、中
でも特に重要なものは、le
Centred′Immunologie et de Biologie PIERRE
FABREで分離され、1981年１月19日にla
Collection Nationale de Culture de
Microorganismes（CNCM）においてＩ−145と
登録された後、ブダペスト条約に基づいて国際寄
託されている無莢膜菌株Klebsiella pneumoniae
である。
pneumoniae、Serratia marcescensおよび
Escherichia coliの名を挙げる必要があるが、中
でも特に重要なものは、le
Centred′Immunologie et de Biologie PIERRE
FABREで分離され、1981年１月19日にla
Collection Nationale de Culture de
Microorganismes（CNCM）においてＩ−145と
登録された後、ブダペスト条約に基づいて国際寄
託されている無莢膜菌株Klebsiella pneumoniae
である。
このようにして得たプロテオグリカンは以下の
物理化学特性： 分子量 ……200000〜400000 ヘキソース含量 …… ８〜10％ ガラクトース含量 ……22〜28％ ヘキソースアミン含量 …… ３〜 ６％ ウロン酸含量 …… ４〜 ６％ 蛋白質含量 ……35〜50％ を有している。
物理化学特性： 分子量 ……200000〜400000 ヘキソース含量 …… ８〜10％ ガラクトース含量 ……22〜28％ ヘキソースアミン含量 …… ３〜 ６％ ウロン酸含量 …… ４〜 ６％ 蛋白質含量 ……35〜50％ を有している。
同様に本発明は薬剤としてのプロテオグリカン
の使用に関する。実際にこれらのプロテオグリカ
ンは重要な免疫刺激特性を発現する。
の使用に関する。実際にこれらのプロテオグリカ
ンは重要な免疫刺激特性を発現する。
これらの免疫刺激特性はマウスにおける注射投
与および経口投与から明白であつた。
与および経口投与から明白であつた。
すなわち、マウスにおいてMoloneyウイルス
が誘発したリンパ腺腫に対し、これらの生成物が
N.K.細胞を有意（Ｐ＞0.01）に活性化することが
認められた。この作用は抗インターフエロン（α
−IF）により阻害されるため、このフラクシヨ
ンによるN.K.細胞の活性化はインターフエロン
誘発作用によるものと考えられる。
が誘発したリンパ腺腫に対し、これらの生成物が
N.K.細胞を有意（Ｐ＞0.01）に活性化することが
認められた。この作用は抗インターフエロン（α
−IF）により阻害されるため、このフラクシヨ
ンによるN.K.細胞の活性化はインターフエロン
誘発作用によるものと考えられる。
幼動物においては、プロテオグリカンはN.K.
細胞およびプレーN.K.を同時に刺激する。
細胞およびプレーN.K.を同時に刺激する。
同様に、マウスの脾臓細胞における in vitro
での投与量に比例するDNA合成活性化、さらに
牛血清アルブミン（BSA）に対する早発的抗体
反応の相乗が認められる。
での投与量に比例するDNA合成活性化、さらに
牛血清アルブミン（BSA）に対する早発的抗体
反応の相乗が認められる。
その他に、以下の５系統：
・ in vitroにおけるヒト顆粒細胞の化学ルミネ
センス、 ・ 125I標識Ａ蛋白質のin vitroにおける食細胞
現象、 ・ 活性大食細胞（Ia+もしくはIa-）の性質に関
する研究、 ・ in vivoにおけるコロイド炭素の除去試験、 ・ Candida albicansに対する防御試験 において大食細胞を強力に刺激することが認めら
れる。
センス、 ・ 125I標識Ａ蛋白質のin vitroにおける食細胞
現象、 ・ 活性大食細胞（Ia+もしくはIa-）の性質に関
する研究、 ・ in vivoにおけるコロイド炭素の除去試験、 ・ Candida albicansに対する防御試験 において大食細胞を強力に刺激することが認めら
れる。
研究されたすべての系において、細胞活性の有
意な変化が認められる。これらはin vivoにおい
て、炭素除去の顕著な増大およびCandida
albicans感染に対する抵抗力の増加により説明さ
れる。化学ルミネサンス試験により、ヒト顆粒細
胞の食細胞現象の初期段階における顕著な衝撃が
認められた。in vivoにおいて活性化した後のin
vitroにおける大食細胞の測定では、より原始的
表現型を同時に誘発する食細胞特性の増大が認め
られた。
意な変化が認められる。これらはin vivoにおい
て、炭素除去の顕著な増大およびCandida
albicans感染に対する抵抗力の増加により説明さ
れる。化学ルミネサンス試験により、ヒト顆粒細
胞の食細胞現象の初期段階における顕著な衝撃が
認められた。in vivoにおいて活性化した後のin
vitroにおける大食細胞の測定では、より原始的
表現型を同時に誘発する食細胞特性の増大が認め
られた。
以下の例は本発明によるプロテオグリカンの製
造法を詳述するものである。
造法を詳述するものである。
例 １
可溶性膜プロテオグリカンの製造
ａ 粗膜プロテオグリカンの分離
Klebsiella pneumoniaeI−145菌株の生物量
を、凍結NaCl0.15Mを含有する0.01M、PH7.0の
Tris−HCl緩衝液中に分散させた後、機械粉砕し
て細胞壁を破壊する。
を、凍結NaCl0.15Mを含有する0.01M、PH7.0の
Tris−HCl緩衝液中に分散させた後、機械粉砕し
て細胞壁を破壊する。
菌体溶解物を7500ｇ、10分間の遠心分離で清澄
した後、上澄み液を30000ｇで45分間遠心分離す
る。
した後、上澄み液を30000ｇで45分間遠心分離す
る。
沈澱物を0.15MのNaCl水溶液中に分散する。
懸濁液を新たに7500ｇで10分間清澄化した後、
30000ｇで45分間遠心分離する。
懸濁液を新たに7500ｇで10分間清澄化した後、
30000ｇで45分間遠心分離する。
沈澱物を蒸留水中に再分散した後、新たに7500
ｇ、ついで30000ｇで遠心分離する。
ｇ、ついで30000ｇで遠心分離する。
そして粗膜プロテオグリカンの沈澱を最初の容
量の1/4の蒸留水に再分散し、懸濁液を7500ｇで
10分間清澄し、上澄み液を凍結乾燥する。
量の1/4の蒸留水に再分散し、懸濁液を7500ｇで
10分間清澄し、上澄み液を凍結乾燥する。
ｂ 可溶性膜プロテオグリカンの抽出
凍結乾燥した粗膜プロテオグリカンをNaOH
（0.1M）中に分散した後、56℃において１時間加
水分解する。冷却後懸濁液を希HClで中和してか
ら、蒸留水に対して24時間透析を行なう。そして
懸濁液を30000ｇ、45分間の遠心分離で清澄化し
た後、上澄み液を0.22μ膜で過する。液は凍
結乾燥する。
（0.1M）中に分散した後、56℃において１時間加
水分解する。冷却後懸濁液を希HClで中和してか
ら、蒸留水に対して24時間透析を行なう。そして
懸濁液を30000ｇ、45分間の遠心分離で清澄化し
た後、上澄み液を0.22μ膜で過する。液は凍
結乾燥する。
例 ２
免疫刺激性フラクシヨンの製造
ａ 可溶性膜プロテオグリカンの脱脂
例１で得た可溶性膜プロテオグリカンの凍結乾
燥物を25℃、２時間、クロロホルム／メタノール
（２／１）混合液中において最初の抽出により脱
脂する。
燥物を25℃、２時間、クロロホルム／メタノール
（２／１）混合液中において最初の抽出により脱
脂する。
フリツトグラスNo.４上での脱水後、残渣を25℃
において２時間、エーテル／エタノール１／３混
合液中で抽出する。
において２時間、エーテル／エタノール１／３混
合液中で抽出する。
フリツトグラスNo.４上での脱水後、残渣は真空
乾燥する。
乾燥する。
ｂ リゾチーム処理
脱脂した可溶性膜プロテオグリカンの乾燥残渣
を、EDTA−Na2 0.008Mおよびリゾチーム
80mg／を含有する0.015M、PH8.0のTris−HCl
緩衝液中に溶解する。
を、EDTA−Na2 0.008Mおよびリゾチーム
80mg／を含有する0.015M、PH8.0のTris−HCl
緩衝液中に溶解する。
25℃、30分の保温後、蒸留水中でBiogel P30カ
ラムを用いて溶液をクロマトグラフイーにかけ
る。
ラムを用いて溶液をクロマトグラフイーにかけ
る。
排出容量から溶出する最初のピークを採集した
後、蒸留水に対して透析する。
後、蒸留水に対して透析する。
0.22μ膜で過した後、液を凍結乾燥する。
ｃ クロマトグラフイー分別
前記凍結乾燥物をPH7.0、0.01MのTris−HCl緩
衝液中に溶解した後、当該緩衝液で平衡したセフ
アロースゲルCL2Bカラムを用いる分子ふるいク
ロマトグラフイーにより分別する。
衝液中に溶解した後、当該緩衝液で平衡したセフ
アロースゲルCL2Bカラムを用いる分子ふるいク
ロマトグラフイーにより分別する。
ピークに対応し、免疫刺激活性を包含し、分子
量200000〜400000を有するフラクシヨンを再採集
した後、蒸留水に対して透析する。
量200000〜400000を有するフラクシヨンを再採集
した後、蒸留水に対して透析する。
透析物は0.22μ膜過により滅菌した後、無菌
的に凍結乾燥する。
的に凍結乾燥する。
凍結乾燥物は以下の例で使用される免疫刺激性
プロテオグリカンフラクシヨンを構成する。
プロテオグリカンフラクシヨンを構成する。
セフアロースCL2B上の均質ピークとして分離
されるプロテオグリカンフラクシヨンは以下の平
均的分析特性： ・ 分子量 （300000） ・ ヘキソース含量 9.3％ ・ ガラクトース含量 25.2％ ・ ヘキソースアミン含量 4.5％ ・ ウロン酸含量 5.3％ ・ 蛋白質含量 42.5％ ・ RNA含量 ＜0.05％ ・ DNA含量 ＜0.02％ ・ 脂肪酸含量 ≪１ ％ を示す。
されるプロテオグリカンフラクシヨンは以下の平
均的分析特性： ・ 分子量 （300000） ・ ヘキソース含量 9.3％ ・ ガラクトース含量 25.2％ ・ ヘキソースアミン含量 4.5％ ・ ウロン酸含量 5.3％ ・ 蛋白質含量 42.5％ ・ RNA含量 ＜0.05％ ・ DNA含量 ＜0.02％ ・ 脂肪酸含量 ≪１ ％ を示す。
以下の例は例２で得たプロテオグリカンの免疫
刺激特性を明らかにするものである。
刺激特性を明らかにするものである。
後述のN.K.試験群はKiessling R.および
Wigzell H.により「Immunol.Rev.」44165
（1979）に記載された例に従つて行なつた。
Wigzell H.により「Immunol.Rev.」44165
（1979）に記載された例に従つて行なつた。
例 ３
注射投与によるN.K.細胞の活性化
動物：４ケ月令のCBA／Ｊマウス（オス）
標的細胞：・N.K.感受性YAC−１（マウス由
来のMaloneyウイルスによりリン
パ腺腫を誘発）。
来のMaloneyウイルスによりリン
パ腺腫を誘発）。
試験例
PBS0.2ml中のプロテオグリカン15μgをマウス
に腹腔内投与する。
に腹腔内投与する。
24時間後に試験を行なう。
測定結果は第１図のグラフ上に集める。
当該グラフ上には、標的細胞に対する有効細胞
（いわゆるN.K.細胞）数の比を関数とする標的細
胞の溶菌百分率が表わされている。
（いわゆるN.K.細胞）数の比を関数とする標的細
胞の溶菌百分率が表わされている。
第１図上において曲線１は被験動物に対応し、
曲線２は対照群に対応する。
曲線２は対照群に対応する。
対照動物に対して被験動物ではN.K.細胞の強
力な活性化が認められる。
力な活性化が認められる。
この試験における反応は対照値に対して有意
（Ｐ＞0.01）である。
（Ｐ＞0.01）である。
例 ４
経口投与によるN.K.細胞の活性化
動物：CBA／Ｈマウス
標的細胞：・N.K.感受性YAC細胞
（Maloneyリンパ腺腫）
・N.K.非感受性P815細胞
（DBA／２肥満細胞腫）
試験例
毎日、１投与量15μgのプロテオグリカンフラ
クシヨンを14日間、マウスに経口投与し、続い
て、18日目にも同様に15μgを１回経口投与する。
クシヨンを14日間、マウスに経口投与し、続い
て、18日目にも同様に15μgを１回経口投与する。
結 果
ａ YAC細胞（感受性）
測定結果は第２図のグラフ上に表わされる。
グラフ上には異なる時間における有効細胞と標
的細胞の間の比を関数とする標的細胞の溶菌百分
率が表示される。そして、ｔには処置開始時を起
点とする経過時間が示され、各時間において４種
のそれぞれ異なる希釈率：200/1，100/1，50/1お
よび25/1に対する溶菌百分率を測定した。点は数
回の測定値の平均値を示し、３つの実験群におい
て観察された結果を表示しておいた。白点は被験
動物において観察された結果を示し、黒点は対照
動物の結果を示す。
的細胞の間の比を関数とする標的細胞の溶菌百分
率が表示される。そして、ｔには処置開始時を起
点とする経過時間が示され、各時間において４種
のそれぞれ異なる希釈率：200/1，100/1，50/1お
よび25/1に対する溶菌百分率を測定した。点は数
回の測定値の平均値を示し、３つの実験群におい
て観察された結果を表示しておいた。白点は被験
動物において観察された結果を示し、黒点は対照
動物の結果を示す。
結果は非常に明白であり、N.K.活性の有意な
著しい増大が証明される。３日目から検知できる
当該活性は６日目および９日目において非常に重
大になり、全実験期間中（21日間）を通じて非常
に高い水準を維持する。
著しい増大が証明される。３日目から検知できる
当該活性は６日目および９日目において非常に重
大になり、全実験期間中（21日間）を通じて非常
に高い水準を維持する。
ｂ P815細胞（非感受性）
観察結果はYAC細胞を標的として用いたN.K.
陽性試験に反するものであり、実験のいかなる時
点においても有意な細胞毒性は認められない。
陽性試験に反するものであり、実験のいかなる時
点においても有意な細胞毒性は認められない。
例 ５
プロテオグリカンフラクシヨンによるインターフ
エロン産出の検定 動物：５ケ月令 CBA／Ｊマウス（オス） 標的細胞：・N.K.感受性YAC−１ ・N.K.感受性Nulli Teratoma 試験例 プロテオグリカンフラクシヨンを単体で、もし
くは抗インターフエロン（α−IF）と共に動物
に与え、通例に従つてN.K.試験を行なう。
エロン産出の検定 動物：５ケ月令 CBA／Ｊマウス（オス） 標的細胞：・N.K.感受性YAC−１ ・N.K.感受性Nulli Teratoma 試験例 プロテオグリカンフラクシヨンを単体で、もし
くは抗インターフエロン（α−IF）と共に動物
に与え、通例に従つてN.K.試験を行なう。
例３中に示したように描かれる第３図および第
４図のグラフに観察結果を集める。
４図のグラフに観察結果を集める。
第３図のグラフはYAC標的細胞における観察
結果を表示し、 ・ 曲線１は被験動物に対応し、 ・ 曲線２は対照動物に対応し、 ・ 曲線３はプロテオグリカンおよび抗インター
フエロンを同時に与えた被験動物に対応する。
結果を表示し、 ・ 曲線１は被験動物に対応し、 ・ 曲線２は対照動物に対応し、 ・ 曲線３はプロテオグリカンおよび抗インター
フエロンを同時に与えた被験動物に対応する。
第４図のグラフはNulli標的細胞に対する同様
の結果を示す。
の結果を示す。
これらの結果から、プロテオグリカンフラクシ
ヨンはインターフエロン産出を仲介としてN.K.
細胞を非常に強く活性化することが明白に示され
る。
ヨンはインターフエロン産出を仲介としてN.K.
細胞を非常に強く活性化することが明白に示され
る。
第１図、第３図および第４図は各種試験例にお
ける有効細胞：標的細胞の比と溶菌率との関係を
示すグラフ、第２図は溶菌率と上記比との関係を
回数を変えて示すグラフである。
ける有効細胞：標的細胞の比と溶菌率との関係を
示すグラフ、第２図は溶菌率と上記比との関係を
回数を変えて示すグラフである。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １ グラム陰性菌株の可溶性膜プロテオグリカン
のリゾチームによる加水分解生成物より分離さ
れ、 分子量 ……200000〜400000 ヘキソース含量 ……８〜10％ ガラクトース含量 ……22〜28％ ヘキソースアミン含量 ……３〜６％ ウロン酸含量 ……４〜６％ 蛋白質含量 ……35〜50％ からなることを特徴とする菌体膜由来免疫刺激性
プロテオグリカン。 ２ クレブシエラ ニユーモニア、セラチア マ
ルセセンズもしくはエスケリキア コリに由来す
ることを特徴とする特許請求の範囲第１項記載の
プロテオグリカン。 ３ クレブシエラ ニユーモニアに由来すること
を特徴とする特許請求の範囲第２項記載のプロテ
オグリカン。 ４ 以下の組成： 分子量 ……300000 ヘキソース含量 ……9.3％ ガラクトース含量 ……25.2％ ヘキソースアミン含量 ……4.5％ ウロン酸含量 ……5.3％ 蛋白質含量 ……42.5％ からなることを特徴とする特許請求の範囲第１〜
３項のいずれか１項に記載のプロテオグリカン。 ５ グラム陰性菌株の可溶性膜プロテオグリカン
をリゾチームで加水分解し、分子量200000〜
400000を有するプロテオグリカンを加水分解生成
物より分離することを特徴とする、 分子量 ……200000〜400000 ヘキソース含量 ……８〜10％ ガラクトース含量 ……22〜28％ ヘキソースアミン含量……３〜６％ ウロン酸含量 ……４〜６％ 蛋白質含量 ……35〜50％ からなる菌体膜由来免疫刺激性プロテオグリカン
の製造法。 ６ 分子ふるいクロマトグラフイーによりプロテ
オグリカンを分離することを特徴とする特許請求
の範囲第５項記載の方法。 ７ セフアロースゲルCL2Bを用いるクロマトグ
ラフイーによりプロテオグリカンを分離すること
を特徴とする特許請求の範囲第６項記載の方法。 ８ 可溶性膜プロテオグリカンをリゾチームによ
る加水分解前に脱脂することを特徴とする特許請
求の範囲第５〜７項のいずれか１項に記載の方
法。 ９ １種もしくは数種の脂肪溶媒を用いる抽出に
り脱脂を行なうことを特徴とする特許請求の範囲
第８項記載の方法。 １０ グラム陰性菌をクレブシエラ ニユーモニ
ア、セラチア マルセセンズ、エスケリキア コ
リの中から選択することを特徴とする特許請求の
範囲第５〜９項のいずれか１項に記載の方法。 １１ グラム陰性菌がクレブシエラ ニユーモニ
アであることを特徴とする特許請求の範囲第１０
項記載の方法。
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