JPH0611706B2 - フィブリン溶解 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、フィブリンの沈殿に関連する病理症状の治療
のための、フィブリンの分解又は崩壊（これはフィブリ
ン溶解ともいう）、並びに組成物及び方法に関する。

フィブリンは止血及び傷を治すことにおいて大きな役割
を果たし、そして生化学反応の複雑な系の結果としてヒ
ト及び動物の体内に貯臓される。フィブリンのこのよう
な大きな機能にもかかわらず、フィブリンの形成はま
た、多くの病理症状及び炎症障害の原因となる。例え
ば、フィブリン沈殿はアテローム硬化症、リウマチ様関
節炎、糸球体腎炎、全身性エリテマトーデス、心筋梗
塞、肺間栓症、静脈血栓症、自己免疫神経症害、肉芽腫
性疾病、寄生虫感染及び同種移植拒絶反応に関連する。
転移、またの名を「続発性」腫瘍は血栓塞栓症につなが
る。支質中のある固化した腫瘍を囲む多量のフィブリン
沈殿物はまゆ様のものとして寄与し、白血球、マクロフ
ァージ及びその他の炎症性の細胞が腫瘍に到達すること
を妨げる。

フィブリン沈殿物は腎疾病並びに過形成性瘢痕及びケロ
イドにも関連しうる。フィブリンの付着は術後性の手術
においても重大な問題である。

ウロキナーゼ及びｔＰＡ（組織プラスミノーゲン活性
体）はプラスミノーゲン活性体（ＰＡ′ｓ）であって、
現在、フィブリン溶解を及ぼすために、さらに詳しく
は、フィブリン凝集体の溶解又は崩壊を及ぼすために実
験的及び臨床的の両方に用いられている。フィブリン崩
壊に効果的ながらも、これらの物質は更なる欠点を有す
る。ウロキナーゼは、フィブリンの存在とは無関係にプ
ラスミノーゲンを活性化させてプラスミンを付与し（ｔ
ＰＡとは異なる）、そしてそれ故フィブリン溶解を及ぼ
すためには大量の投与せねばならず、これは高額となり
且つ不必要な出血をもたらす。ｔＰＡは生体内では半減
期が短く、そしてそれ故長時間にわたって大量の投与を
せねばならず、これも不必要な出血及び高額をもたら
す。

驚くべきことに、リンホカイン、インターロイキン−４
（ＩＬ−４）は、フィブリン分解をもたらすプラスミノ
ーゲン活性体を生成するためにヒト及び動物細胞を活性
化させることがこの度発見された。また、ＩＬ−４はヒ
トモノサイトの凝血促進活性（ｐｒｏｃｏａｇｕｌａｎ
ｔ ａｃｔｉｖｉｔｙ）を阻害し、これによってモノサ
イト表面のフィブリン形成は低められる。

ＩＬ−４はリンホカインであってＢセル及びＴセル成長
因子活性を示すものである（豪州特許出願番号67334/87
公開）。このリンホカインはまた、ヒトモノサイトのサ
イトカインＩＬ−１，ＴＮＦの生産の制御活性及びＰＧ
Ｅ_２の制御を示す。

ＩＬ−４は単体として精製され、そしてこのタンパク質
の遺伝情報はクローンされて組換ＤＮＡ工学による大量
のＩＬ−４の生産が可能となっている（Schering-Biote
ch Cotporation；豪州特許出願No.67334/87の公開文に
記載）。ＩＬ−４（ヒト）は多数のメーカーからの商業
的入手が可能である。

サイトカインの生産の制御におけるＩＬ−４の活性に基
づき、もっとも驚くべきことは、ＩＬ−４は適当な標的
細胞によるプラスミノーゲン活性体（ＰＡ）、特にｔ−
ＰＡ及びウロキナーゼの生産を促進するのに硬化的であ
ったことである。

本発明により、病理症状に関連する、又はそのような症
状を導きうる、フィブリン沈殿物を分解するための、そ
してフィブリンの沈殿を防ぐ方法が提供され、これは、
このような処置を必要とする対象者に、治療的有効量の
ＩＬ−４又はＩＬ−４活性を有すその誘導体であって、
任意的に１もしくは複数の医薬として許容されるキャリ
アー又は賦形剤と一体となったものを投与することを含
んで成る。

本発明により処置できる病理症状は、フィブリン沈殿に
より完全に、又は少なくともある程度引き起こされた症
状である。これらには、静脈血栓症、肺塞栓症、腎臓障
害、過形成性瘢痕、冠状動脈梗塞、転移、炎症、散在性
脈管内凝血、アテローム硬化症、リウマチ様関節炎、糸
球体腎炎、全身性エリテマトーデス、自己免疫神経障
害、肉芽腫性疾病、寄生虫感染、同種移動拒絶反応及び
のフィブリン沈殿に関連するその他の症状が挙げられ
る。このような症状に苦しむ対象者にＩＬ−４を投与す
ることは、プラスミノーゲン活性体、特に標的細胞によ
る、プラスミノーゲンの活性化を引き起こし、そして逐
次フィブリン分解を引き起こすｔＰＡ及びウロキナーゼ
（プロウロキナーゼ）の増大をもたらしうる。また、こ
のような患者におけるフィブリンの形成は減少しうる。

ＩＬ−４により刺激されたときにｔＰＡを生産する顕著
なセルタイプはモノサイト／マクロファージセルタイプ
である。重要なこととして、これらのセルタイプはしば
しばトロンビ（ｔｈｒｏｍｂｉ）、及びその他のフィブ
リン沈殿物に密着し、そしてそれ故、ＩＬ−４との接触
により刺激されてプラスミノーゲン活性体を生産した場
合、効率の高い局部的フィブリン分解を引き起こしう
る。このことは患者への大量のプラスミノーゲン活性体
の投与の必要性を回避し、それ故、不必要な出血の副作
用を少なくし、且つプラスミノーゲン活性体の大量投与
に起因する高い価格を引き下げる。

内皮細胞もＩＬ−４によって刺激されてウロキナーゼ
（プロウロキナーゼ）を生産することができる。このこ
とも重要であり、なぜならフィブリン沈殿物は一般に内
皮細胞に付着しているからである。

その他のヒト又は動物の対象体における標的細胞もま
た、ＩＬ−４の刺激によってフィブリンの低下を及ぼす
ことができる。モノサイト以外のその他の多くの標的細
胞もＩＬ−４の作用の結果として血液凝固活性を失うこ
とがある。

好ましくは、本発明において用いられたＩＬ−４は組換
えＤＮＡ工学によって作られる。ヒト対象者を処置する
場合、ＩＬ−４はヒト由来であることがもちろん望まし
い。動物を処置する場合、動物ＩＬ−４が好ましい。

公開された豪州特許出願No.67334/87において記載され
たＩＬ−４のＢセル、Ｔセル及びマスト細胞を刺激する
作用、並びにその他のＩＬ−４の固有活性を有するすべ
てのＩＬ−４誘導体又は類似体を本発明に用いることが
できる。ＩＬ−４誘導体又は類似体の正確な性質は重要
ではない。むろん、この誘導体又は類似体は定義された
ＩＬ−４生物学活性を有せねばならず、そして、標的細
胞、例えばマクロファージ／モノサイトを刺激してプラ
スミノーゲン活性体を生産させるための活性を有せねば
ならない。前述の出願No.67334/87はＩＬ−４誘導体及
び類似体の製造のための方法を教示する。本明細書にお
いて用いられる語ＩＬ−４はヒトＩＬ−４、動物由来の
ＩＬ−４であって例えばネズミ、ヒツジ又はウシＩＬ−
４、並びにそれらの誘導体又は類似体であって固有ＩＬ
−４活性を有するものを含む。便宜上これらの物質は以
降「活性物質」と称することがある。

ＩＬ−４は好都合な手段、例えば経口、静脈内、筋肉
内、皮下、腹腔内、鼻腔内、皮内又は座薬のルートにお
いて投与できる。

ＩＬ−４はまた、ヒト又は動物対象体に、ある予定時間
間隔、例えば３０分から２４時間にわたる持続注入によ
って投与されうる。投与は、適当なポンプに連結した、
又は重力による、静脈内カテーテルを介しての方法で行
われうる。

フィブリン分解を及ぼすために対象体に投与されるＩＬ
−４の量及び摂取量は、多数の要因、例えば投与の方
法、処置すべき症状の性質、処置すべき対象体の体重及
び処置を行う医師の判断に依存するであろう。一般に
は、ＩＬ−４は１キログラムの体重当りに、１日当り
０．１μｇから２，０００mgの間の量において投与され
うる。単位投与量、例えば錠剤又はカプセルにおける活
性成分の量は約０．１μｇから１００mgへと変更でき
る。

ＩＬ−４は失活を防ぐための物質により被覆されうるか
又はそれと一緒に投与されうる。例えば、この活性物質
はアジュバント中にて、酵素阻害剤を同時投与すること
によって、又はリポソーム中にて投与される。ここで考
えられるアジュバントには、レソルシノール、非イオン
性界面活性剤、例えばポリオキシエチレンオレイル及び
ｎ−ヘキサデシルポリエチレンエーテルが含まれる。酵
素阻害剤には、膵臓トリプシンインヒビター、ジイソプ
ロピルフルオロホスフェート（ＤＦＰ）及びトラジオー
ルが含まれる。リポソームには、水中油中水型Ｐ４０乳
剤及び常用のリポソームが含まれる。

分散体は、グリセロール中、液状ポリエチレングリコー
ル及びそれらの混合物中、並びに油中にて調製されるこ
とができる。通常の保存及び使用条件のもとで、これら
の調製物は微生物の増殖を防ぐために防腐剤を含む。

注射利用のために適切な医薬製剤は、無菌の注射可能な
溶液又は分散体の即時調製品のため無菌水性溶液（水溶
性の）又は分散体及び無菌のパウダーを含む。すべての
ケースにおいて、この製剤は除菌すべきであり、そして
ある程度容易に注射可能な状態の流体にすべきである。
これは製造及び保存の条件のもとで安定でなくてはなら
ず、また微生物、例えば殺菌及びカビの汚染を防がなく
てはならない。キャリアーは、例えば無菌水、エタノー
ル、ポリオール（例えばグリセロール、プロピレングリ
コール及び液状ポリエチレングリコール等）、それらの
適当な混合物、並びに植物油を含む溶剤又は分散媒体で
あることができる。適当な流体は、例えばレシチンのよ
うな被覆剤の利用により、分散体のケースにおける目的
の粒径の維持により、そして界面活性剤の利用により維
持できる。微生物の作用を防ぐことは、種々の抗菌剤及
び抗カビ剤、例えばパラベン、クロロブタノール、フェ
ノール、ソルビン酸、及びサーメロザール等によりもた
らされうる。多くのケースにおいて、等張剤、例えば糖
又は塩化ナトリウムを含ませることが好ましいであろ
う。注射可能な組成物の延長吸収は、吸収を遅らせる試
薬の組成物、例えばモノステアリン酸アルミニウム及び
ゼラチンの利用により引き起こされることができる。

無菌の注射可能な溶液は、必要量の活性物質を前記に掲
げた種々のその他の成分を有する適当な溶剤に混入させ
ることで調整され、そして必要ならばその後無菌濾過す
る。一般に、分散体は、種々の無菌した活性成分を、無
菌媒体であって塩基性分散媒体及び前記に掲げたもの中
から必要なその他の成分を含むもの中に混入させること
によって調製される。無菌の注射可能な溶液の調製のた
めの無菌パウダーのケースにおける好ましい調製方法
は、活性成分に任意の望ましい成分が加ったパウダー
を、あらかじめ無菌濾過したそれらの溶液から作る真空
乾燥及び凍結乾燥技術である。

前述の通りにＩＬ−４が適切に保護される場合、活性成
分は例えば不活性の希釈剤もしくは食品キャリアーと共
に経口投与でき、又はそれらは硬いもしくは軟い外皮カ
プセル中に閉入することができ、又はそれらは錠剤へと
圧縮されることができ、又はそれらは食品の中に混入さ
せることができる。経口治療投与のためには、活性物質
は賦形剤と一体化されることができ、そして消化性の錠
剤、口内錠剤、トローチ、カプセル、エリクサー（ｅｌ
ｉｘｉｒ）、懸濁物、シロップ、ウェーハー等の形で用
いられる。

錠剤、トローチ、ピル、カプセル等は以下のものも含
む：バインダー、例えばガムトラガカンス、アカシア、
コーンスターチもしくはゼラチン；賦形剤、例えばリン
酸二カルシウム；分解剤、例えばコーンスターチ、ポテ
トスターチ、アルギン酸等；潤滑剤、例えばステアリン
酸マグネシウム；並びに甘味料、例えばスクロース、ラ
クトースもしくはサッカリン、又は風味料、例えばペパ
ーミント、シラタマノキの油もしくはサクロンボ風味を
加えることができる。その他の種々の材料、被覆剤とし
て、又は投与量の単位の物理的形態を整えるために存在
しうる。例えば、錠剤、ピル又はカプセルはシェラッ
ク、砂糖又は両方によって被覆されうる。シロップ又は
エリクサーは、活性成分、甘味料としてスクロース、防
腐剤としてメチル及びプロピルパラベン、着色剤及び風
味料、例えばサクロンボ又はオレンジ風味を含むことが
ある。もちろん、いずれの投与単位形態の調製において
用いられるすべての材料は、医薬として純粋でなくては
ならず、そして用いた量において実質的に無毒なもので
なくてはならない。更に、この活性物質は持効性の調製
物及び製剤の中に混入される。

本明細書で用いた語「医薬として許容されるキャリア
ー」及び「賦形剤」は前述した任意、且つ全ての溶剤、
分散媒体、被覆剤、抗菌剤及び抗カビ剤、等張及び吸収
遅延剤、等を含む。このようなキャリアー及び賦形剤は
当業界においてよく知られ、例えばRemingtonのPharmac
eutical Science and U.S.Pharmacopeia(1984);Mack Pu
dlishing Company,Easton,PAを参照のこと。

この活性物質はまた、一又は複数の抗−トロンボ溶解
剤、例えばｔＰＡ、プロウロキナーゼ、ウロキナーゼ又
はストレプトキナーゼから選ばれたものと組合せて投与
されうる。ＩＬ−４をこのような試薬と投与する場合、
フィブリン溶解活性が強化される。

活性物質はまた、一もしくは複数の抗凝血剤、例えばヘ
パリン、ワルファリン、アスピリン、アニシンジオン、
フェニンドン、及びビスヒドロキシクマリン；並びに／
又は一もしくは複数の血管拡張剤、例えばニトリル（例
えばアミルニトリル、ニトログリセリン、ナトリウムニ
トリル、イソソルビドジニトレート）、パパベリン、ニ
コチン酸及びシリランデラーテと組合わせて投与されう
る。抗凝血剤、及び血管拡張剤は、血栓症及びその他フ
ィブリン沈殿物への到達を高め、それ故フイブリン分解
を促進する。

本発明はまた、血栓溶解組成物を有するその他の見地で
あって、一もしくは複数の医薬として許容されるキャリ
ア一又は賦形剤を有する組合せにおけるＩＬ−４を含ん
で成るものに関連し、そして前述の一もしくは複数の抗
−血栓溶解剤、及び／又は一もしくは複数の抗凝血剤、
及び／又は一もしくは複数の血管拡張剤を任意的に含
む。

フィブリン分解を引き起こし、そしてフィブリン及びト
ロンビ形成を防ぐことにおけるＩＬ−４の作用は、出願
人の知る従来技術に基づき、驚くべき、且つ予想しえな
かったものであり、フィブリン形成に関連する疾病のた
めの新規の治療方法を提供する。

以下の実施例は更に本発明の実列を示す。本発明の範囲
はこれらの実施例により限定されるものではない。

実施例１ 材料及び方法 モノサイトの単離及び培養 モノサイトを、Hart et al.(1988)J.lmmunol.141:1516
に記載の通り、向流遠心清浄(countcurrent centrifuga
l elutriation)により末梢静脈血から単離した。形態学
基準、非特異性エステラーゼ染色及び食作用性により同
定された＞９５％のモノサイトを含む細胞画分をプール
し、そして先の文献に記載の通りに１８ｈ培養した（１
％の仔牛血清を含むα−モディファイイーグル培地（α
−Ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｅａｇｌｅ’ｓ Ｍｅｄｉｕｍ）
中において０．８〜１．０×１０^６）。培養を停止する
ために、上清液を遠心して非吸着性細胞を除去した；Ｐ
ＢＳで２回洗浄後、吸着性細胞及び非吸着性細胞をプー
ルし、そしてＰＢＳ中の０．２％のトリトンＸ−１００
により溶解させた。

ＰＡ活性の測定： １００μｌの０．１Ｍのトリス−ＨＣ１，pH８．１中に
溶解したモノサイトの上清液又は溶解物（５０μｌ）及
びヒトプラスミノーゲン（０．８μｇ）を、Hamilton(1
981)L.lmmunol.126:851の方法に従い、予め^１２５Ｉ−
フィブリンで被覆した０．２８cm²のウェルに加えた。
２〜３時間後、溶解した^１２５Ｉ−フィブリン分解生成
物を測定した。ＰＡ活性はｕ−ＰＡ標準品(Leo,Pharmac
eutical Products,Denmark)の活性に従って表した。モ
ノサイト由来のプラスミノーゲン固有のフィブリン溶解
活性は、常にプラスミノーゲン依存活性の＜５％であっ
た。

抗体分析： ＩｇＧ（イムノグロブリン）を、プロティンＡセファロ
ーズＣＬ−４Ｂ(Pharmacia,Uppsala,Sweden)を用いた標
準方法により、ヒトｕ−ＰＡ及びヒトｔ−ＰＡに対する
ウサギ抗血清（ロット１００及び１５３；それぞれはD
r.W-D.Schleuning,CHUV,Lausanne,Switzerlandより供
給）から単離した。

マウスミエローマＩｇＧ，ＨＯＰＣＹ(Dr,A.Burgess,Lu
dwig lnstitute for Cancer Research,Melbourne,Austr
alia)を無関係な抗体として用いた。前記の培養上清
液、細胞溶解液又はＰＡ標準品（ｕ−ＰＡ）、ＭＭ１３
８メラノーマ細胞系(Dr.R.Whitehead,Ludwig lnstitute
for Cancer Research,Melbourne)、０．２IU／ml）か
らの培養上清液としてのｔＰＡを、残留ＰＡ活性の測定
前にｌｇＧ（最終濃度１μｇ／ml）と共に３７℃で１時
間インキュベートした。免疫沈殿実験において、プロテ
ィンＡセファローズＣＬ−４Ｂ及び最終濃度が０．２５
％となるようトリトンＸ−１００を加えた。一定間隔の
攪拌を伴った室温で３０分間の更なるインキュベートの
後、Vassalli,J.D.,et al.(1984)J.Exp.Med.159:1643に
記載の通りにペレットを洗浄したが、ただし洗浄バッフ
ァーにＳＤＳは含ませなかった。

ＳＤＳ−カゼインチモグラフィー： Roche et al.(1983)B.B.A.745:82.の方法に従ってＳＤ
Ｓ−ＰＡＧＥチモグラフイーを行った。分離ゲル（１０
％）はカゼイン（２mg／ml,Sigma）及びヒトプラスミノ
ーゲン（６μｇ／ml）を含み、そしてそれを室温で１時
間、１５mAで予備電気泳動した。０．０６２５Ｍのトリ
ス−ＨＣｌ，pH６．８，１．２５％のＳＤＳ，１０％の
グリセロール中で平衡化したサンプル（２０μｌ）を、
重層ゲル（４％）に載せる前に７０℃で１０分間インキ
ュベートし、次いでLaemmli,Nature227:680(1970)のバ
ッファー系を用いて１２mAで２時間電気泳動させた。電
気泳動後、ゲルを２．５％のトリトンＸ−１００中で洗
浄し、次いで０．１Ｍのトリス、pH８．０中で１８時
間、３７℃でリンスした。ゲルを０．２５％の５０％の
メタノール／７％の酢酸中のクマジーブルーＲ−２５０
に６０分間浸して染色し、次いで３０％のメタノール／
１０％の酢酸中で２時間脱色した。

ｔ−ＰＡ．ｍＲＮＡの検出 全モノサイトＲＮＡをChirgwin et al.(1979)Biochemis
try18:5292の方法に従って調製し、そしてジーンスクリ
ーンプラスナイロン膜（Ｄｕｐｏｎｔ，Ｂｏｓｔｏｎ，
ＭＡ）へ移す前にホルムアルデヒド含有の１％アガロー
スゲル上で分画した（５μｇ／列）。このフィルターを
＞２×１０^６cpm／mlの^３２Ｐ−標識化ｔＰＡ．ｍＲＮ
Ａを含む標準ハイブリダイゼーションバッファー中で、
６０℃で１夜ハイブリダイズした。ｃＲＮＡプローブは
ベクターｐＧＥＭ−４ブル−（Ｐｒｏｇｅｍａ，Ｍａｄ
ｉｓｏｎ，ＭＡ）の中にクローンした、ｐＤＡｌｌ４Ｂ
(Fischer,R.et al.(1985)J.Biol.Chem.260:11223)由来
の２．３kbＢｇｌｌｌフラグメントを含むプラスミドか
ら調製され、そしてＴ７ＲＮＡポリメラーゼ(New Engla
nd Biolabs,Beverly,MA)による転写開始前にＸｂａｌに
より直鎖状にした。ハイブリダイゼーション後、このフ
ィルターを２×ＳＳＣにより３回洗浄し、次いで１μｇ
／mlのＲＮａｓｅＡ(Boehringer-Mannheim,West German
y)で、３７℃、２０分間処理した。

凝血促進活性の測定 モノサイト凝血促進活性は、細胞の血小板欠乏血漿の部
分的トロンボプラスチン（凝血）時間を短くする能力に
よって測定される。ヒトモノサイト（４×１０^６細胞／
ml）は糖脂質又は刺激されたリンパ球からの上清液にて
３７℃、１８時間により活性化され、その表面に凝血促
進活性が現れる。凍結融解され、そして超音波処理され
た細胞サンプルの活性を、クエン酸処理血小板欠乏ヒト
血漿を用いて、プロトロンビン測定における試験を行っ
た。この凝血活性は細胞懸濁物（０．８×１０^５細胞／
０．１ml）を０．１mlの血漿にて３７℃で１分間インキ
ュベートすることで簡単に行われる。次いでＣａＣｌ_２
（３０mM：０．１ml）を加え、そして凝血時間を手動で
測定した。結果はｍＵ活性／１０^６細胞として示した。
ヒト血漿の凝血時間に対するウサギ脳トロンボプラスチ
ンの希釈率の減少の標準曲線を用いてｍＵを計算した。

実施例２ ＩＬ−４により刺激されたヒトモノサイトによるｔ−Ｐ
Ａの生産 実施例１に従って調製したヒトモノサイト（１×１０^６
／ml）を０．２５Ｕ／mlのヒト組換えＩＬ−４（Ｇｅｎ
ｚｙｍｅ）とインキュベートした。

プラスミノーゲン活性体（ＰＡ）活性（実施例１に記載
の通りにプラスミノーゲン固有フィブリン溶解活性によ
り測定）は、ＩＬ−４に２時間さらした後のモノサイト
溶解物中に検出され、そして３時間で培養上清液中に分
泌された（ＰＡの最大生産は６時間のＩＬ−４刺激の後
に見い出された）。

モノサイト培養上清液に検出されたＰＡ活性の全ては、
抗ｔＰＡｉｇＧによりブロックされたが、しかし抗ウロ
キナーゼＩｇＧによってはされなかった。ＰＡの見かけ
上の分子量が測定できる技術であるＳＤＳ−カゼインチ
モグラフィーにより、ｔＰＡ標準品の特徴とする状態で
移動した７０kDのバンドが見い出せた。従ってＩＬ−４
はモトモノサイトを刺激してｔ−ＰＡを生産させる。

実施例３ ＩＬ−４により刺激された内皮細胞によるＰＡ活性の生
成： 牛大動脈内皮細胞（１０^５細胞）をＲＰＭｌ／１０％Ｆ
ＳＣ中で４８時間インキュベートし、等張の生理食塩水
中で洗浄し、その後２．５ユニット／mlの精製ヒトＩＬ
−４（Ｇｅｎｚｙｍｅ）存在下又は非存在下でα−ＭＥ
Ｍ（１ml）中で培養した。２４時間後、コンディショニ
ングした倍地を集め、そしてプラスミノーゲン固有フィ
ブリン溶解活性としてのＰＡ活性について測定した。Ｐ
Ａ活性は、ＩＬ−４によって刺激されたそれらの細胞に
おいて検出された。結果は以下の通りである： ＰＡ活性 Iu／ml 牛大動脈細胞（コントロール） 0.09±0.01 2.5ユニット／mlにより刺激 0.32±0.01 された牛大動脈細胞 ＩＬ−４ＳＤＳ−カゼインチモグラフィーにより、ウロ
キナーゼタイプにおける増大されたウロキナーゼタイプ
ＰＡ活性及びｔ−ＰＡ活性が認められた。

実施例４ ＩＬ−４によるヒトモノサイトの凝血促進活性の阻害： 実施例１に従って調製したヒトモノサイト（４×１０^６
細胞）を、１００ng／mlの糖脂質（ＬＰＳ）と共に、ヒ
ト組換えＩＬ−４（Ｓｃｈｅｒｉｎｇ Ｐｌｏｕｇｈ）
と共に、又は種々のＩＬ−４濃度の伴ったＬＰＳと一緒
にインキュベートした。

前記の反応液中に室温で１８時間さらした後のモノサイ
ト溶解物中における凝血促進活性（ＰＣＡ）（実施例１
において記載のクエン酸血漿の凝血時間の短縮により測
定）を測定した。

ＰＣＡ MU／10⁶細
胞 実験１
実験２ ヒトモノサイト（コントロール） Ｎ．Ｄ．
Ｎ．Ｄ． 25ユニット／mlのＩＬ−４に Ｎ．Ｄ． Ｎ．Ｄ． より処理したヒトモノサイト 以下のものにより処理した ヒトモノサイト ＬＰＳ（100ng／ml） 20.9±0.8 19.4±0.5 ＬＰＳ（100ng／ml） 4.6±0.1 1.4±0.1 ＋IL−４（2.5Ｕ／ml） ＬＰＳ（100ng／ml）＋0.5 4.2±0.2 5.1±0.2 ＬＰＳ（100ng／ml）＋0.1Ｕ／ml） 13.9±0.4 8.5±
0.7 Ｎ．Ｄ．＝未測定

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁵ 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ａ６１Ｋ 31/485 ＡＢＪ 9360−4Ｃ 31/60 ＡＢＥ 9360−4Ｃ 31/725 ＡＢＳ 8314−4Ｃ 37/465 ＡＣＶ 8314−4Ｃ 37/54 ＡＣＤ 8314−4Ｃ

Claims (14)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】病理症状又はそのような症状へと導きうる
   ことに関連するフィブリン沈殿物を分解、且つこのよう
   な沈殿物の形成を妨げるための方法であって、このよう
   な処置を必要とする人間を除く動物に、一又は複数種の
   医薬として許容されるキャリアー又は賦形剤と任意的に
   組合わせた治療上有効な量のＩＬ−４又はＩＬ−４活性
   を有するその誘導体を投与することを含んで成る方法。
2. 【請求項２】処置される前記の病理症状が、静脈血栓
   症、肺塞栓症、腎疾病、過形成性瘢痕、冠状動脈梗塞、
   転移、炎症、散在性脈管内凝血、アテローム硬化症、リ
   ウマチ様関節炎、糸球体腎炎、全身性エリテマトーデ
   ス、自己免疫神経障害、肉芽腫性疾病、寄生虫感染、同
   種移植拒絶反応及びその他のフィブリン沈殿に関連する
   症状である、請求項１に記載の方法。
3. 【請求項３】前記ＩＬ−４又はその誘導体を、フィブリ
   ン沈殿物の部分又はその近くに局部的に投与する、請求
   項１に記載の方法。
4. 【請求項４】前記ＩＬ−４又はその誘導体を、静脈内、
   筋肉内、鼻腔内、皮内、腹腔内、座薬又は経口により投
   与する、請求項１に記載の方法。
5. 【請求項５】前記ＩＬ−４又はその誘導体の治療上に有
   効な量が、処置すべき動物の体重１kg当り、約０．１μ
   ｇから約２００mgの間である、請求項１に記載の方法。
6. 【請求項６】前記ＩＬ−４又はその誘導体を、予め決め
   た時間にて動物に持続注入する、請求項１に記載の方
   法。
7. 【請求項７】前記ＩＬ−４又はその誘導体を、ｔＰＡ、
   ウロキナーゼ、ストレプトキナーゼ又はプロウロキナー
   ゼから選ばれる、一もしくは複数種の血栓溶解剤と共に
   投与する、請求項１に記載の方法。
8. 【請求項８】前記ＩＬ−４又はその誘導体を、血液凝固
   阻止剤、例えばヘパリン、ワルファリン、アスピリン、
   アニシンジオン、フェニンドン及びビスヒドロキシクマ
   リンと共に投与する、請求項１に記載の方法。
9. 【請求項９】医薬として許容されるキャリアー又は賦形
   剤と組合せた、ＩＬ−４又はＩＬ−４活性を有するその
   誘導体を含んで成る、血栓溶解組成物。
10. 【請求項１０】ｔＰＡ、ウロキナーゼ、プロウロキナー
    ゼ及びストレプトキナーゼより成るグループから選ばれ
    た１もしくは複数種の血栓溶解剤又はその活性体を含
    む、請求項９に記載の血栓溶解組成物。
11. 【請求項１１】１又は複数種の抗凝血剤を含んで成る、
    請求項９又は１０に記載の血栓溶解組成物。
12. 【請求項１２】前記の抗凝血剤がヘパリン、ワルファリ
    ン、アスピリン、アニシンドン、フェニンドン及びビス
    ヒドロキシクマリンより成るグループから選ばれたもの
    である、請求項１１に記載の血栓溶解組成物。
13. 【請求項１３】１又は複数種の血管拡張剤を更に含んで
    成る、請求項９から１１のいずれかの１項に記載の血栓
    溶解組成物。
14. 【請求項１４】前記の血管拡張剤が、ニトリル、パパベ
    リン、ニコチン酸及びシクランデラーテより成るグルー
    プから選ばれたものである、請求項１３に記載の組成
    物。