JPH06184133A - コレステロールエステラーゼ阻害剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 （修正有） 〔構成〕 下記一般式で表わされる化合物。 【化１】 （式中、Ａ及びＢはそれぞれ異なって、「−Ｃ（Ｒ₃ ）
（Ｒ₄ ）−ＮＸＹ」基又は「−ＣＯＺ」基を表し、Ｒ₁
及びＲ₂ は、同一又は異なってそれぞれ水素原子、水酸
基、炭素数１〜３のアルコキシ基を表し、Ｒ₃ 及びＲ₄
は、同時に水素原子若しくは一緒になってオキソ基、又
は一方が炭素数１〜３のアルコキシ基を、他方が水素原
子を表し、Ｘが水素の場合にＹとＺは一緒になって単結
合を表し、Ｘが水素でない場合にはＺは水酸基を、Ｘと
Ｙは一緒になって「−（ＣＨ₂ ）_n ＣＯ−」基を表し、
ｎは２〜４の整数を表す。） 〔効果〕コレステロールエステラーゼ阻害活性を有し、
高コレステロール血症に対して有用である。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、コレステロールエステ
ラーゼ阻害物質、コレステロールエステラーゼ阻害物質
生産能を有する微生物、コレステロールエステラーゼ阻
害物質の製造法及びコレステロールエステラーゼ阻害剤
に関する。

【０００２】

【従来の技術】高脂血症は、動脈硬化症の主要原因であ
り、特に高コレステロール血症は心疾患による死亡率と
の因果関係から危険視されている。

【０００３】高コレステロール血症治療剤としては、近
年、コレステロールの生合成の律速酵素である３−ヒド
ロキシ−３−メチルグルタリル−補酵素Ａ（ＨＭＧ−Ｃ
ｏＡ）の阻害物質が注目を集めている。

【０００４】しかしながら、高コレステロール血症患者
に対しては、コレステロールの生合成を抑えるだけでは
不十分で、コレステロールの吸収を阻害する必要がある
ところから、有効なコレステロール吸収阻害剤の開発が
望まれていた。

【０００５】食餌性コレステロールの吸収過程は、腸管
腔におけるミセル形成、腸管腔でのコレステロールエス
テルの遊離型コレステロールへの加水分解、及び腸壁に
おける遊離型コレステロールのエステル化の三段階から
なるといわれている。コレステロールエステルの加水分
解と遊離型コレステロールのエステル化は、コレステロ
ールエステラーゼにより制御されており、膵臓由来のコ
レステロールエステラーゼを外科的に除去したり、免疫
学的に不活化した場合に、コレステロールの腸管吸収が
著しく抑制されることが、既に知られている（Ｇａｌｌ
ｏ，Ｌ．Ｌ．，Ｃｌａｒｋ，Ｓ．Ｂ．，Ｍｙｅｒｓ，
Ｓ．，Ｖａｈｏｕｎｙ，Ｇ．Ｖ．；Ｊ．Ｌｉｐｉｄ Ｒ
ｅｓ．２５，６０４−６１２， １９８４）。

【０００６】しかし、コレステロールエステラーゼ活性
阻害作用を有する物質については、わずかにカルバミン
酸フェノキシフェニルエステル（特開平３−２０６０７
１号）が知られているにすぎない。

【０００７】

【発明が解決しようとする課題】そこで、本発明者ら
は、鋭意、コレステロール吸収阻害作用を有する化合物
について、研究を行ってきたところ、土壌分離菌である
スタキボトリス属に属する微生物が、コレステロールエ
ステラーゼ阻害物質を産生することを見いだし、本発明
を完成させた。

【０００８】

【課題を解決するための手段】本発明によれば、下記の
一般式で示されるコレステロールエステラーゼ阻害物質
が提供される。

【０００９】

【化１２】

【００１０】（式中、Ａ及びＢはそれぞれ異なって、
「−Ｃ（Ｒ₃ ）（Ｒ₄ ）−ＮＸＹ」基又は「−ＣＯＺ」
基を表し、Ｒ₁ 及びＲ₂ は、同一又は異なってそれぞれ
水素原子、水酸基、炭素数１〜３のアルコキシ基を表
し、Ｒ₃ 及びＲ₄ は、同時に水素原子若しくは一緒にな
ってオキソ基、又は一方が炭素数１〜３のアルコキシ基
を、他方が水素原子を表し、Ｘが水素の場合にＹとＺは
一緒になって単結合を表し、Ｘが水素でない場合にはＺ
は水酸基を、ＸとＹは一緒になって「−（ＣＨ₂ ）_n Ｃ
Ｏ−」基を表し、ｎは２〜４の整数を表す。）以下に、
本発明化合物の具体例及びその理化学的性質を併せて記
載する。

【００１１】（Ｆ１８３９−Ａ）。

【００１２】イ）分子量 ：４０１。

【００１３】ロ）分子式 ：Ｃ₂₃Ｈ₃₁Ｏ₅
Ｎ。

【００１４】ハ）質量分析スペクトル ：ＨＲＦＡＢ−
ＭＳ（ｍ／ｚ）（Ｍ＋Ｈ）+ ：４０２．２２７２（理論
値は分子式をＣ₂₃Ｈ₃₂Ｏ₅ Ｎとして４０２．２２８
０）。

【００１５】ニ）紫外線吸収スペクトル：ＵＶλｍａｘ
（ＣＨ₃ ＯＨ）：２１８，２６２，３０１。

【００１６】ホ）赤外線吸収スペクトル：ＩＲνｍａｘ
（ＫＢｒ）：３４０５，２９６０，２９３８，２８７
５，１６８６，１６２５，１４６６，１３８９，１３４
８，１３３２，１２５９，１０８７，１０４５，９６
０，９４５，８７８，７７２，６７１。

【００１７】ヘ）溶剤に対する溶解性 ：メタノール、
ｎ−ブタノール、ピリジン、ジメチルスルホキシドに可
溶。

【００１８】ト）物質の性状 ：白色無定形粉
末。

【００１９】チ）薄層クロマトグラフィー分析値（キー
ゼルゲル６０Ｆ₂₅₄ （商標；メルク製））： Ｒｆ＝０．４８（酢酸エチル：メタノール／５：１，Ｖ
／Ｖ）， Ｒｆ＝０．２３（クロロホルム：メタノール：酢酸／８
８：１０：２，Ｖ／Ｖ）。

【００２０】リ）呈色反応（上記ＴＬＣ上で行っ
た。）：アニスアルデヒド硫酸、１０％燐モリブデン酸
−エタノール、沃素蒸気、４０％硫酸−メタノールで陽
性。

【００２１】ヌ）核磁気共鳴スペクトル：¹ Ｈ−ＮＭＲ（Ｐｙｒｉｄｉｎｅ−ｄ₅ ）：０．８４
（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．０），０．９１（３Ｈ，ｓ），
１．０３（３Ｈ，ｓ），１．２２（３Ｈ，ｓ），１．４
２（１Ｈ，ｍ＊），１．５９（２Ｈ，ｍ＊），１．６８
（１Ｈ，ｍ＊），１．７６（１Ｈ，ｍ＊），１．７６
（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１２．０，Ｊ＝４．０），２．３８
（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝１２．０），２．４８（１Ｈ，ｄｄ，
Ｊ＝１２．６，Ｊ＝１．８），３．１３（１Ｈ，ｄ，Ｊ
＝１６．６），３．６０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１６．６），
３．７９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．４），４．１４（１Ｈ，
ｄ，Ｊ＝１７．０），４．２４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１７．
０），４．３４（１Ｈ，ｄｄｄ，Ｊ＝１２．０，Ｊ＝
４．０，Ｊ＝２．４），７．５４（１Ｈ，ｓ），９．２
２（１Ｈ，ｂｒｓ）［ｍ＊：ｏｖｅｒｌａｐｐｉｎｇ
ｍｕｌｔｉｐｌｅｔ］。

【００２２】¹³Ｃ−ＮＭＲ（Ｐｙｒｉｄｉｎｅ−
ｄ₅ ）：１５．５（ｑ），１６．８（ｑ），２０．８
（ｔ），２２．１（ｑ），２９．１（ｑ），３１．２
（ｔ），３２．７（ｔ），３３．５（ｔ），３６．８
（ｄ），３８．５（ｓ），３９．６（ｄ），４２．９
（ｔ），４３．５（ｓ），６６．１（ｄ），７８．７
（ｄ），９８．２（ｓ），１０１．９（ｄ），１１５．
１（ｓ），１１７．５（ｓ），１３５．０（ｓ），１５
５．１（ｓ），１５６．７（ｓ），１７２．２（ｓ）。

【００２３】ル）以上の理化学的性質から、化合物Ｆ１
８３９−Ａの化学構造式及び化学名は、次の通りであ
る。

【００２４】

【化１３】

【００２５】４−ヒドロキシ−６−オキソ−３，６，
７，８−テトラヒドロ−２Ｈ−フロ［２，３−ｅ］イソ
インドール−２−スピロ−５’−（２’，３’−ジヒド
ロキシ−１’，１’，４’ａ，６’−テトラメチル−
１’，２’，３’，４’，４’ａ，５’，６’，７’，
８’，８’ａ−デカヒドロナフタレン）。

【００２６】（Ｆ１８３９−Ｂ）。

【００２７】イ）分子量 ：４３１。

【００２８】ロ）分子式 ：Ｃ₂₄Ｈ₃₃Ｏ₆
Ｎ。

【００２９】ハ）質量分析スペクトル ：ＨＲＦＡＢ−
ＭＳ（ｍ／ｚ）（Ｍ＋Ｈ）+ ：４３２．２３８１（理論
値は分子式をＣ₂₄Ｈ₃₄Ｏ₆ Ｎとして４３２．２３８
６）。

【００３０】ニ）紫外線吸収スペクトル：ＵＶλｍａｘ
（ＣＨ₃ ＯＨ）：２１８，２７１，３０８。

【００３１】ホ）赤外線吸収スペクトル：ＩＲνｍａｘ
（ＫＢｒ）：３３８４，２９６０，２９３７，２８７
５，１６９４，１６３０，１４６４，１３８９，１３４
８，１３３１，１２５９，１０９４，１０４４，９６
０，９４５，８８２，８５７，７７６，６８１，５９
５。

【００３２】ヘ）溶剤に対する溶解性 ：メタノール、
ｎ−ブタノール、ピリジン、ジメチルスルホキシドに可
溶。

【００３３】ト）物質の性状 ：白色無定形粉
末。

【００３４】チ）薄層クロマトグラフィー分析値（キー
ゼルゲル６０Ｆ₂₅₄ （商標；メルク製））： Ｒｆ＝０．５３（酢酸エチル：メタノール／５：１，Ｖ
／Ｖ）， Ｒｆ＝０．２５（クロロホルム：メタノール：酢酸／８
８：１０：２，Ｖ／Ｖ）。

【００３５】リ）呈色反応（上記ＴＬＣ上で行っ
た。）：アニスアルデヒド硫酸、１０％燐モリブデン酸
−エタノール、沃素蒸気、４０％硫酸−メタノールで陽
性。

【００３６】ヌ）核磁気共鳴スペクトル：¹ Ｈ−ＮＭＲ（Ｐｙｒｉｄｉｎｅ−ｄ₅ ）：０．８９
（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．０），０．９１（３Ｈ，ｓ），
１．０３（３Ｈ，ｓ），１．２０（３Ｈ，ｓ），１．３
８（１Ｈ，ｍ＊），１．５４（１Ｈ，ｍ＊），１．５７
（１Ｈ，ｍ＊），１．６８（１Ｈ，ｍ＊），１．７６
（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１２．２，Ｊ＝４．２），１．７６
（１Ｈ，ｍ＊），２．４２（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝１２．
２），２．５４（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１２．６，Ｊ＝２．
３），３．１１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１７．２），３．３２
（３Ｈ，ｓ），３．５９（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝１７．２），
３．７３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．４），４．３２（１Ｈ，
ｄｄｄ，Ｊ＝１２．２，Ｊ＝４．２，Ｊ＝２．４），
６．０２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１．２），７．３０（１Ｈ，
ｓ），９．６１（１Ｈ，ｂｒｓ）［ｍ＊：ｏｖｅｒｌａ
ｐｐｉｎｇ ｍｕｌｔｉｐｌｅｔ］。

【００３７】¹³Ｃ−ＮＭＲ（Ｐｙｒｉｄｉｎｅ−
ｄ₅ ）：１５．６（ｑ），１６．９（ｑ），２０．９
（ｔ），２２．２（ｑ），２９．１（ｑ），３１．３
（ｔ），３２．４（ｔ），３３．６（ｔ），３６．９
（ｄ），３８．６（ｓ），３９．７（ｄ），４３．７
（ｓ），５１．４（ｑ），６６．２（ｄ），７８．８
（ｄ），８３．４（ｄ），９８．７（ｓ），１０２．４
（ｄ），１１４．３（ｓ），１１８．３（ｓ），１３
５．８（ｓ），１５６．５（ｓ），１５７．７（ｓ），
１７０．９（ｓ）。

【００３８】ル）以上の理化学的性質から、化合物Ｆ１
８３９−Ｂの化学構造式及び化学名は、次の通りであ
る。

【００３９】

【化１４】

【００４０】４−ヒドロキシ−８−メトキシ−６−オキ
ソ−３，６，７，８−テトラヒドロ−２Ｈ−フロ［２，
３−ｅ］イソインドール−２−スピロ−５’−（２’，
３’−ジヒドロキシ−１’，１’，４’ａ，６’−テト
ラメチル−１’，２’，３’，４’，４’ａ，５’，
６’，７’，８’，８’ａ−デカヒドロナフタレン）。

【００４１】（Ｆ１８３９−Ｃ）。

【００４２】イ）分子量 ：４３１。

【００４３】ロ）分子式 ：Ｃ₂₄Ｈ₃₃Ｏ₆
Ｎ。

【００４４】ハ）質量分析スペクトル ：ＨＲＦＡＢ−
ＭＳ（ｍ／ｚ）（Ｍ＋Ｈ）+ ：４３２．２３８４（理論
値は分子式をＣ₂₄Ｈ₃₄Ｏ₆ Ｎとして４３２．２３８
６）。

【００４５】ニ）紫外線吸収スペクトル：ＵＶλｍａｘ
（ＣＨ₃ ＯＨ）：２１７，２６７，３０２。

【００４６】ホ）赤外線吸収スペクトル：ＩＲνｍａｘ
（ＫＢｒ）：３４０４，２９６０，２９３８，２８７
５，１７０２，１６２９，１４５９，１３８９，１３４
８，１３３０，１２６０，１０９３，１０４４，９６
０，９４４，８８１，７７５，６８４。

【００４７】ヘ）溶剤に対する溶解性 ：メタノール、
ｎ−ブタノール、ピリジン、ジメチルスルホキシドに可
溶。

【００４８】ト）物質の性状 ：白色無定形粉
末。

【００４９】チ）薄層クロマトグラフィー分析値（キー
ゼルゲル６０Ｆ₂₅₄ （商標；メルク製））： Ｒｆ＝０．５７（酢酸エチル：メタノール／５：１，Ｖ
／Ｖ）， Ｒｆ＝０．２８（クロロホルム：メタノール：酢酸／８
８：１０：２，Ｖ／Ｖ）。

【００５０】リ）呈色反応（上記ＴＬＣ上で行っ
た。）：アニスアルデヒド硫酸、１０％燐モリブデン酸
−エタノール、沃素蒸気、４０％硫酸−メタノールで陽
性。

【００５１】ヌ）核磁気共鳴スペクトル：¹ Ｈ−ＮＭＲ（Ｐｙｒｉｄｉｎｅ−ｄ₅ ）：０．８８
（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．１），０．９０（３Ｈ，ｓ），
１．０２（３Ｈ，ｓ），１．２０（３Ｈ，ｓ），１．３
８（１Ｈ，ｍ＊），１．５５（１Ｈ，ｍ＊），１．５５
（１Ｈ，ｍ＊），１．６７（１Ｈ，ｍ＊），１．７６
（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１２．０，Ｊ＝４．２），１．７７
（１Ｈ，ｍ＊），２．３８（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝１２．
０），２．５１（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１２．６，Ｊ＝２．
６），３．１１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１６．３），３．５４
（３Ｈ，ｓ），３．５７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１６．３），
３．７０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．４），４．３０（１Ｈ，
ｄｄｄ，Ｊ＝１２．０，Ｊ＝４．２，Ｊ＝２．４），
６．２４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１．８），７．３２（１Ｈ，
ｓ），９．５５（１Ｈ，ｂｒｓ）［ｍ＊：ｏｖｅｒｌａ
ｐｐｉｎｇ ｍｕｌｔｉｐｌｅｔ］。

【００５２】¹³Ｃ−ＮＭＲ（Ｐｙｒｉｄｉｎｅ−
ｄ₅ ）：１５．５（ｑ），１６．９（ｑ），２０．９
（ｔ），２２．１（ｑ），２９．０（ｑ），３１．１
（ｔ），３２．４（ｔ），３３．６（ｔ），３６．７
（ｄ），３８．４（ｓ），３９．５（ｄ），４３．６
（ｓ），５１．９（ｑ），６６．１（ｄ），７８．７
（ｄ），８３．６（ｄ），９８．６（ｓ），１０２．６
（ｄ），１１４．３（ｓ），１１８．３（ｓ），１３
５．５（ｓ），１５６．５（ｓ），１５７．６（ｓ），
１７０．７（ｓ）。

【００５３】ル）以上の理化学的性質から、化合物Ｆ１
８３９−Ｃの化学構造式及び化学名は、次の通りであ
る。

【００５４】

【化１５】

【００５５】４−ヒドロキシ−８−メトキシ−６−オキ
ソ−３，６，７，８−テトラヒドロ−２Ｈ−フロ［２，
３−ｅ］イソインドール−２−スピロ−５’−（２’，
３’−ジヒドロキシ−１’，１’，４’ａ，６’−テト
ラメチル−１’，２’，３’，４’，４’ａ，５’，
６’，７’，８’，８’ａ−デカヒドロナフタレン）。

【００５６】（Ｆ１８３９−Ｄ）。

【００５７】イ）分子量 ：４０１。

【００５８】ロ）分子式 ：Ｃ₂₃Ｈ₃₁Ｏ₅
Ｎ。

【００５９】ハ）質量分析スペクトル ：ＨＲＦＡＢ−
ＭＳ（ｍ／ｚ）（Ｍ＋Ｈ）+ ：４０２．２２８９（理論
値は分子式をＣ₂₃Ｈ₃₂Ｏ₅ Ｎとして４０２．２２８
１）。

【００６０】ニ）紫外線吸収スペクトル：ＵＶλｍａｘ
（ＣＨ₃ ＯＨ）：２２５，２５５，２９８。

【００６１】ホ）赤外線吸収スペクトル：ＩＲνｍａｘ
（ＫＢｒ）：３３５６，２９５８，２９３９，２８７
６，１６５５，１６２９，１４５８，１３１４，１２４
３，１０９３，１０４４，８８３。

【００６２】ヘ）溶剤に対する溶解性 ：メタノール、
ｎ−ブタノール、ピリジン、ジメチルスルホキシドに可
溶。

【００６３】ト）物質の性状 ：白色無定形粉
末。

【００６４】チ）薄層クロマトグラフィー分析値（キー
ゼルゲル６０Ｆ₂₅₄ （商標；メルク製））： Ｒｆ＝０．３３（酢酸エチル：メタノール／５：１，Ｖ
／Ｖ）， Ｒｆ＝０．１８（クロロホルム：メタノール：酢酸／８
８：１０：２，Ｖ／Ｖ）。

【００６５】リ）呈色反応（上記ＴＬＣ上で行っ
た。）：アニスアルデヒド硫酸、１０％燐モリブデン酸
−エタノール、沃素蒸気、４０％硫酸−メタノールで陽
性。

【００６６】ヌ）核磁気共鳴スペクトル：¹ Ｈ−ＮＭＲ（Ｐｙｒｉｄｉｎｅ−ｄ₅ ）：０．８４
（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．３），０．９１（３Ｈ，ｓ），
１．０３（３Ｈ，ｓ），１．３０（３Ｈ，ｓ），１．３
７（１Ｈ，ｍ＊），１．５０（１Ｈ，ｍ＊），１．６２
（１Ｈ，ｍ＊），１．７１（１Ｈ，ｍ＊），１．７８
（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１２．２，Ｊ＝４．０），１．８３
（１Ｈ，ｍ＊），２．４２（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝１２．
２），２．６９（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１２．６，Ｊ＝２．
２），３．０２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１６．１），３．５１
（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１６．１），３．７８（１Ｈ，ｄ，Ｊ
＝２．８），４．２４（１Ｈ，ｓ），４．３２（１Ｈ，
ｄｄｄ，Ｊ＝１２．２，Ｊ＝４．０，Ｊ＝２．８），
６．７３（１Ｈ，ｓ），８．５８（１Ｈ，ｂｒｓ）［ｍ
＊：ｏｖｅｒｌａｐｐｉｎｇ ｍｕｌｔｉｐｌｅｔ］。

【００６７】¹³Ｃ−ＮＭＲ（Ｐｙｒｉｄｉｎｅ−
ｄ₅ ）：１５．６（ｑ），１７．１（ｑ），２１．１
（ｔ），２２．４（ｑ），２９．０（ｑ），３０．４
（ｔ），３２．０（ｔ），３３．９（ｔ），３７．３
（ｄ），３８．７（ｓ），３９．６（ｄ），４３．５
（ｓ），４５．７（ｔ），６６．３（ｄ），７９．２
（ｄ），９９．１（ｓ），１０２．３（ｄ），１０６．
７（ｓ），１１３．５（ｓ），１４７．６（ｓ），１５
８．３（ｓ），１５９．４（ｓ），１７１．２（ｓ）。

【００６８】ル）以上の理化学的性質から、化合物Ｆ１
８３９−Ｄの化学構造式及び化学名は、次の通りであ
る。

【００６９】

【化１６】

【００７０】４−ヒドロキシ−８−オキソ−３，６，
７，８−テトラヒドロ−２Ｈ−フロ［２，３−ｅ］イソ
インドール−２−スピロ−５’−（２’，３’−ジヒド
ロキシ−１’，１’，４’ａ，６’−テトラメチル−
１’，２’，３’，４’，４’ａ，５’，６’，７’，
８’，８’ａ−デカヒドロナフタレン）。

【００７１】（Ｆ１８３９−Ｅ）。

【００７２】イ）分子量 ：４４５。

【００７３】ロ）分子式 ：Ｃ₂₅Ｈ₃₅Ｏ₆
Ｎ。

【００７４】ハ）質量分析スペクトル ：ＨＲＦＡＢ−
ＭＳ（ｍ／ｚ）（Ｍ＋Ｈ）+ ：４４６．２５５０（理論
値は分子式をＣ₂₅Ｈ₃₆Ｏ₆ Ｎとして４４６．２５４
２）。

【００７５】ニ）紫外線吸収スペクトル：ＵＶλｍａｘ
（ＣＨ₃ ＯＨ）：２１７，２６２，３０２。

【００７６】ホ）赤外線吸収スペクトル：ＩＲνｍａｘ
（ＫＢｒ）：３３８５，２９６１，２９３７，２８７
５，１６５５，１６２８，１４６６，１３４８，１３３
１，１２６１，１０７５，１０４５，９４５，７５８。 ヘ）溶剤に対する溶解性 ：メタノール、ｎ−ブタノー
ル、クロロホルム、酢酸エチル、ピリジン、ジメチルス
ルホキシドに可溶。

【００７７】ト）物質の性状 ：白色無定形粉
末。

【００７８】チ）薄層クロマトグラフィー分析値（キー
ゼルゲル６０Ｆ₂₅₄ （商標；メルク製））： Ｒｆ＝０．４０（酢酸エチル：メタノール／５：１，Ｖ
／Ｖ）， Ｒｆ＝０．１５（クロロホルム：メタノール：酢酸／８
８：１０：２，Ｖ／Ｖ）。

【００７９】リ）呈色反応（上記ＴＬＣ上で行っ
た。）：アニスアルデヒド硫酸、１０％燐モリブデン酸
−エタノール、沃素蒸気、４０％硫酸−メタノールで陽
性。

【００８０】ヌ）核磁気共鳴スペクトル：¹ Ｈ−ＮＭＲ（Ｐｙｒｉｄｉｎｅ−ｄ₅ ）：０．８３
（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．０），０．９３（３Ｈ，ｓ），
１．０４（３Ｈ，ｓ），１．２５（３Ｈ，ｓ），１．４
１（１Ｈ，ｍ＊），１．５９（２Ｈ，ｍ＊），１．６７
（１Ｈ，ｍ＊），１．７４（１Ｈ，ｍ＊），１．７６
（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１２．６，Ｊ＝４．３），２．３９
（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝１２．６），２．５４（１Ｈ，ｄｄ，
Ｊ＝１２．９，Ｊ＝２．４），３．１１（１Ｈ，ｄ，Ｊ
＝１７．０），３．６０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１７．０），
３．６９（１Ｈ，ｍ＊），３．７４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝
２．０），３．９０（１Ｈ，ｍ＊），３．９５（２Ｈ，
ｍ＊），４．１５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１６．５），４．３
３（１Ｈ，ｄｄｄ，Ｊ＝１２．０，Ｊ＝４．３，Ｊ＝
２．０），４．３９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１６．５），７．
２９（１Ｈ，ｓ）［ｍ＊：ｏｖｅｒｌａｐｐｉｎｇ ｍ
ｕｌｔｉｐｌｅｔ］。

【００８１】¹³Ｃ−ＮＭＲ（Ｐｙｒｉｄｉｎｅ−
ｄ₅ ）：１５．８（ｑ），１７．２（ｑ），２１．２
（ｔ），２２．４（ｑ），２９．４（ｑ），３１．６
（ｔ），３３．０（ｔ），３３．９（ｔ），３７．１
（ｄ），３８．８（ｓ），３９．９（ｄ），４３．９
（ｓ），４６．０（ｔ），４８．５（ｔ），６０．５
（ｔ），６６．３（ｄ），７９．１（ｄ），９８．５
（ｓ），１０１．９（ｄ），１１３．２（ｓ），１１
７．５（ｓ），１３５．９（ｓ），１５５．４（ｓ），
１５６．７（ｓ），１６９．１（ｓ）。

【００８２】ル）以上の理化学的性質から、化合物Ｆ１
８３９−Ｅの化学構造式及び化学名は、次の通りであ
る。

【００８３】

【化１７】

【００８４】４−ヒドロキシ−７−（２−ヒドロキシエ
チル）−６−オキソ−３，６，７，８−テトラヒドロ−
２Ｈ−フロ［２，３−ｅ］イソインドール−２−スピロ
−５’−（２’，３’−ジヒドロキシ−１’，１’，
４’ａ，６’−テトラメチル−１’，２’，３’，
４’，４’ａ，５’，６’，７’，８’，８’ａ−デカ
ヒドロナフタレン）。

【００８５】（Ｆ１８３９−Ｆ）。

【００８６】イ）分子量 ：５０１。

【００８７】ロ）分子式 ：Ｃ₂₈Ｈ₃₉Ｏ₇
Ｎ。 ハ）質量分析スペクトル ：ＨＲＥＩ−ＭＳ（ｍ／ｚ）
Ｍ+ ：５０１．２７２５（理論値は分子式をＣ₂₈Ｈ₃₉Ｏ
₇ Ｎとして５０１．２７２６）。

【００８８】ニ）紫外線吸収スペクトル：ＵＶλｍａｘ
（ＣＨ₃ ＯＨ）：２１７，２６７，３００。

【００８９】ホ）赤外線吸収スペクトル：ＩＲνｍａｘ
（ＫＢｒ）：３４１０，２９６０，２９４０，２８８
０，１６６０，１４６４，１３５０，１３３０，１２６
０，１１８０，１０８５，１０８０，１０４２，９４
０，７７５。

【００９０】ヘ）溶剤に対する溶解性 ：メタノール、
ｎ−ブタノール、クロロホルム、酢酸エチル、ピリジ
ン、ジメチルスルホキシドに可溶。

【００９１】ト）物質の性状 ：白色無定形粉
末。

【００９２】チ）薄層クロマトグラフィー分析値（キー
ゼルゲル６０Ｆ₂₅₄ （商標；メルク製））： Ｒｆ＝０．６０（酢酸エチル：メタノール／５：１，Ｖ
／Ｖ）， Ｒｆ＝０．４９（クロロホルム：メタノール：酢酸／８
８：１０：２，Ｖ／Ｖ）。

【００９３】リ）呈色反応（上記ＴＬＣ上で行っ
た。）：アニスアルデヒド硫酸、１０％燐モリブデン酸
−エタノール、沃素蒸気、４０％硫酸−メタノールで陽
性。

【００９４】ヌ）核磁気共鳴スペクトル：¹ Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃ ）：０．６２（３Ｈ，ｄ，Ｊ
＝６．２），０．７８（３Ｈ，ｓ），０．８９（３Ｈ，
ｓ），０．９８（３Ｈ，ｓ），１．２６（１Ｈ，ｍ
＊），１．２６（２Ｈ，ｍ＊），１．３０（１Ｈ，ｍ
＊），１．４３（１Ｈ，ｍ＊），１．６５（１Ｈ，ｂｒ
ｔ，Ｊ＝１１．８），１．６７（１Ｈ，ｍ＊），１．８
９（２Ｈ，ｍ＊），１．９８（１Ｈ，ｂｒｄ，Ｊ＝１
２．２），２．２９（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．４），２．７
６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１６．４），３．１６（１Ｈ，ｄ，
Ｊ＝１６．４），３．３３（１Ｈ，ｂｒｓ），３．５３
（２Ｈ，ｍ＊），３．５３（３Ｈ，ｓ），３．９０（１
Ｈ，ｂｒｄ，ｄ＝１１．８），４．１７（１Ｈ，ｄ，Ｊ
＝１７．０），４．２０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１７．０），
６．８２（１Ｈ，ｓ）［ｍ＊：ｏｖｅｒｌａｐｐｉｎｇ
ｍｕｌｔｉｐｌｅｔ］。

【００９５】¹³Ｃ−ＮＭＲ（Ｐｙｒｉｄｉｎｅ−
ｄ₅ ）：１５．９（ｑ），１７．３（ｑ），２１．１
（ｔ），２２．４（ｑ），２４．２（ｔ），２９．０
（ｑ），３１．４（ｔ），３１．８（ｔ），３２．５
（ｔ），３３．３（ｔ），３７．１（ｄ），３８．７
（ｓ），３９．６（ｄ），４２．５（ｔ），４３．９
（ｓ），４８．２（ｄ），５２．１（ｑ），６７．１
（ｄ），７９．１（ｄ），９８．５（ｓ），１０２．８
（ｄ），１１３．３（ｓ），１１７．９（ｓ），１３
４．２（ｓ），１５３．９（ｓ），１５６．４（ｓ），
１７０．０（ｓ），１７３．９（ｓ）。

【００９６】ル）以上の理化学的性質から、化合物Ｆ１
８３９−Ｆの化学構造式及び化学名は、次の通りであ
る。

【００９７】

【化１８】

【００９８】４−ヒドロキシ−７−（２−オキソ−ピロ
リジン−１−イルメチル）−２，３−ジヒドロベンゾフ
ラン−２−スピロ−５’−（３’−ヒドロキシ−２’−
メトキシ−１’，１’，４’ａ，６’−テトラメチル−
１’，２’，３’，４’，４’ａ，５’，６’，７’，
８’，８’ａ−デカヒドロナフタレン）−６−カルボン
酸。

【００９９】（Ｆ１８３９−Ｉ）。

【０１００】イ）分子量 ：３７２。

【０１０１】ロ）分子式 ：Ｃ₂₃Ｈ
₃₂Ｏ₄ 。

【０１０２】ハ）質量分析スペクトル ：ＨＲＥＩ−Ｍ
Ｓ（ｍ／ｚ）Ｍ+ ：３７２．２３０３（理論値は分子式
をＣ₂₃Ｈ₃₂Ｏ₄ として３７２．２２９９）。

【０１０３】ニ）紫外線吸収スペクトル：ＵＶλｍａｘ
（ＣＨ₃ ＯＨ）：２２９，２８２，３２５。

【０１０４】ホ）赤外線吸収スペクトル：ＩＲνｍａｘ
（ＫＢｒ）：３４４７，３１２５，２９６５，２９３
６，２８９０，１６６９，１６１１，１５０２，１４５
６，１４３３，１４０６，１３８８，１３２０，１２５
２，１１１２，１０７９，１０６０，１００４， ９８
７， ９６２，８４３，７８６，５９２，５６６，５２
０。

【０１０５】ヘ）溶剤に対する溶解性 ：アセトン、ア
セトニトリル、ピリジン、ジメチルスルホキシドに可
溶。

【０１０６】ト）物質の性状 ：白色無定形粉
末。

【０１０７】チ）薄層クロマトグラフィー分析値（キー
ゼルゲル６０Ｆ₂₅₄ （商標；メルク製））： Ｒｆ＝０．７３（酢酸エチル：メタノール／５：１，Ｖ
／Ｖ）， Ｒｆ＝０．５６（クロロホルム：メタノール：酢酸／８
８：１０：２，Ｖ／Ｖ）， Ｒｆ＝０．４８（酢酸エチル：ヘキサン／２：１，Ｖ／
Ｖ）。

【０１０８】リ）呈色反応（上記ＴＬＣ上で行っ
た。）：アニスアルデヒド硫酸、１０％燐モリブデン酸
−エタノール、沃素蒸気、４０％硫酸−メタノールで陽
性。

【０１０９】ヌ）核磁気共鳴スペクトル：¹ Ｈ−ＮＭＲ（Ｐｙｒｉｄｉｎｅ−ｄ₅ ）：０．８７
（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．１），０．９３（３Ｈ，ｓ），
１．００（３Ｈ，ｓ），１．１７（１Ｈ，ｔｄｄ，Ｊ＝
１３．０，Ｊ＝３．７），１．２３（３Ｈ，ｓ），１．
４６（１Ｈ，ｍ＊），１．６３（２Ｈ，ｍ＊），１．６
９（１Ｈ，ｍ＊），１．８８（１Ｈ，ｍ＊），１．８８
（１Ｈ，ｍ＊），２．０１（１Ｈ，ｔｄｄ，Ｊ＝１３．
０，Ｊ＝３．７，Ｊ＝２．２），２．４０（１Ｈ，ｔ
ｄ，Ｊ＝１３．０，Ｊ＝３．７），２．６２（１Ｈ，ｄ
ｄ，Ｊ＝１２．７，Ｊ＝２．２），２．６９（３Ｈ，
ｓ），３．０２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１２．５），３．４２
（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１２．５），３．６４（１Ｈ，ｄ，Ｊ
＝２．２），５．６３（１Ｈ，ｂｒｓ），６．５８（１
Ｈ，ｓ），１０．８８（１Ｈ，ｓ），１２．１７（１
Ｈ，ｂｒｓ）［ｍ＊：ｏｖｅｒｌａｐｐｉｎｇ ｍｕｌ
ｔｉｐｌｅｔ］。

【０１１０】¹³Ｃ−ＮＭＲ（Ｐｙｒｉｄｉｎｅ−
ｄ₅ ）：１５．８（ｑ），１６．１（ｑ），２１．３
（ｔ），２１．８（ｑ），２２．６（ｑ），２４．７
（ｔ），２５．９（ｔ），２９．１（ｑ），３１．４
（ｔ），３１．５（ｔ），３７．２（ｄ），３８．１
（ｓ），４０．４（ｄ），４２．７（ｓ），７４．６
（ｄ），９９．４（ｓ），１１１．２（ｓ），１１１．
６（ｓ），１１１．８（ｄ），１４１．８（ｓ），１５
９．９（ｓ），１６８．９（ｓ），１８７．８（ｄ）。

【０１１１】ル）以上の理化学的性質から、化合物Ｆ１
８３９−Ｉの化学構造式及び化学名は、次の通りであ
る。

【０１１２】

【化１９】

【０１１３】７−ホルミル−４−ヒドロキシ−２，３−
ジヒドロベンゾフラン−２−スピロ−５’−（２’−ヒ
ドロキシ−１’，１’，４’ａ，６’−テトラメチル−
１’，２’，３’，４’，４’ａ，５’，６’，７’，
８’，８’ａ−デカヒドロナフタレン）。

【０１１４】（Ｆ１８３９−Ｊ）。

【０１１５】イ）分子量 ：４９９。

【０１１６】ロ）分子式 ：Ｃ₂₉Ｈ₄₁Ｏ₆
Ｎ。

【０１１７】ハ）質量分析スペクトル ：ＨＲＥＩ−Ｍ
Ｓ（ｍ／ｚ）Ｍ+ ：４９９．２９５５（理論値は分子式
をＣ₂₉Ｈ₄₁Ｏ₆ Ｎとして４９９．２９３１）。

【０１１８】ニ）紫外線吸収スペクトル：ＵＶλｍａｘ
（ＣＨ₃ ＯＨ）：２１８，２６１，３０１。

【０１１９】ホ）赤外線吸収スペクトル：ＩＲνｍａｘ
（ＫＢｒ）：３１９８，２９３７，２８７１，１７３
６，１６７０，１６２４，１４６６，１３８８，１３４
８，１３３２，１２５８，１０７８，９８９，９３８，
９０３，７７０，５３３。

【０１２０】ヘ）溶剤に対する溶解性 ：メタノール、
アセトン、アセトニトリル、ピリジン、ジメチルスルホ
キシドに可溶。

【０１２１】ト）物質の性状 ：白色無定形粉
末。

【０１２２】チ）薄層クロマトグラフィー分析値（キー
ゼルゲル６０Ｆ₂₅₄ （商標；メルク製））： Ｒｆ＝０．６８（酢酸エチル：メタノール／５：１，Ｖ
／Ｖ）， Ｒｆ＝０．５８（クロロホルム：メタノール：酢酸／８
８：１０：２，Ｖ／Ｖ）， Ｒｆ＝０．０７（酢酸エチル：ヘキサン／２：１，Ｖ／
Ｖ）。

【０１２３】リ）呈色反応（上記ＴＬＣ上で行っ
た。）：アニスアルデヒド硫酸、１０％燐モリブデン酸
−エタノール、沃素蒸気、４０％硫酸−メタノールで陽
性。

【０１２４】ヌ）核磁気共鳴スペクトル：¹ Ｈ−ＮＭＲ（Ｐｙｒｉｄｉｎｅ−ｄ₅ ）：０．９２
（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．４），０．９５（３Ｈ，ｓ），
１．０４（３Ｈ，ｓ），１．２０（１Ｈ，ｄｔ，Ｊ＝１
２．２，Ｊ＝３．３），１．２８（３Ｈ，ｓ），１．４
４（１Ｈ，ｍ＊），１．４５（２Ｈ，ｍ＊），１．５８
（２Ｈ，ｍ＊），１．６２（１Ｈ，ｍ＊），１．７１
（１Ｈ，ｍ＊），１．７７（１Ｈ，ｍ＊），２．００
（１Ｈ，ｍ＊），２．００（１Ｈ，ｍ＊），２．０７
（１Ｈ，ｍ＊），２．３５（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．１），
２．３６（１Ｈ，ｍ），２．５４（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１
２．９，Ｊ＝２．１），２．９２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１
７．１），３．３４（１Ｈ，ｍ），３．５８（１Ｈ，
ｄ，Ｊ＝１７．１），３．５８（１Ｈ，ｍ），３．６３
（１Ｈ，ｍ），３．６５（３Ｈ，ｓ），３．８４（１
Ｈ，ｄ，Ｊ＝１６．６），４．０８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１
６．６），７．４０（１Ｈ，ｓ），１２．１７（１Ｈ，
ｂｒｓ）［ｍ＊：ｏｖｅｒｌａｐｐｉｎｇ ｍｕｌｔｉ
ｐｌｅｔ］。

【０１２５】¹³Ｃ−ＮＭＲ（Ｐｙｒｉｄｉｎｅ−
ｄ₅ ）：１５．９ （ｑ），１６．２（ｑ），２１．４
（ｔ），２２．４（ｔ），２２．７（ｑ），２４．８
（ｔ），２６．１（ｔ），２７．９（ｔ），２９．１
（ｑ），３１．７（ｔ），３２．８（ｔ），３３．５
（ｔ），３７．４（ｄ），３８．２（ｓ），４０．５
（ｄ），４２．０（ｔ），４２．８（ｓ），４７．２
（ｔ），５１．２（ｑ），７４．９（ｄ），９８．８
（ｓ），１０１．９（ｄ），１１２．８（ｓ），１１
７．７（ｓ），１３５．５（ｓ），１５５．５（ｓ），
１５７．０（ｓ），１６８．７（ｓ），１７３．５
（ｓ）。

【０１２６】ル）以上の理化学的性質から、化合物Ｆ１
８３９−Ｊの化学構造式及び化学名は、次の通りであ
る。

【０１２７】

【化２０】

【０１２８】４−ヒドロキシ−７−（２−オキソ−ピペ
リジン−１−イルメチル）−２，３−ジヒドロベンゾフ
ラン−２−スピロ−５’−（２’−メトキシ−１’，
１’，４’ａ，６’−テトラメチル−１’，２’，
３’，４’，４’ａ，５’，６’，７’，８’，８’ａ
−デカヒドロナフタレン）−６−カルボン酸。

【０１２９】（Ｆ１８３９−Ｋ）。

【０１３０】イ）分子量 ：４４８。

【０１３１】ロ）分子式 ：Ｃ₂₅Ｈ
₃₆Ｏ₇ 。

【０１３２】ハ）質量分析スペクトル ：ＨＲＳＩ−Ｍ
Ｓ（ｍ／ｚ）（Ｍ−Ｈ）- ：４４７．２３８２（理論値
は分子式をＣ₂₅Ｈ₃₅Ｏ₇ として４４７．２３８１）。

【０１３３】ニ）紫外線吸収スペクトル：ＵＶλｍａｘ
（ＣＨ₃ ＯＨ）：２１１，２２８ ｓ＊，２３６ ｓ
＊，２８２［ｓ＊：ｓｈｏｕｌｄｅｒ ｐｅａｋ］。

【０１３４】ホ）赤外線吸収スペクトル：ＩＲνｍａｘ
（ＫＢｒ）：３３１８，２９６０，２９３８，２８７
７，１６３６，１４６６，１３８９，１３６５，１３１
９，１２７４，１１９６，１１２５，１１０５，１０８
６，１０４８，９８５，９７０，９４０，９１１，８３
５，７５８。

【０１３５】ヘ）溶剤に対する溶解性 ：メタノール、
アセトン、アセトニトリル、ピリジン、ジメチルスルホ
キシドに可溶。

【０１３６】ト）物質の性状 ：白色無定形粉
末。

【０１３７】チ）薄層クロマトグラフィー分析値（キー
ゼルゲル６０Ｆ₂₅₄ （商標；メルク製））： Ｒｆ＝０．６４（酢酸エチル：メタノール／５：１，Ｖ
／Ｖ）， Ｒｆ＝０．４８（クロロホルム：メタノール：酢酸／８
８：１０：２，Ｖ／Ｖ）， Ｒｆ＝０．１０（酢酸エチル：ヘキサン／２：１，Ｖ／
Ｖ）。

【０１３８】リ）呈色反応（上記ＴＬＣ上で行っ
た。）：アニスアルデヒド硫酸、１０％燐モリブデン酸
−エタノール、沃素蒸気、４０％硫酸−メタノールで陽
性。

【０１３９】ヌ）核磁気共鳴スペクトル：¹ Ｈ−ＮＭＲ（Ｐｙｒｉｄｉｎｅ−ｄ₅ ）：０．８９
（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．９），０．９５（３Ｈ，ｓ），
１．０７（３Ｈ，ｓ），１．２５（３Ｈ，ｓ），１．４
３（１Ｈ，ｍ＊），１．５５（１Ｈ，ｍ＊），１．６０
（１Ｈ，ｍ＊），１．７７（１Ｈ，ｍ＊），１．７９
（１Ｈ，ｍ＊），１．８２（１Ｈ，ｍ＊），２．４４
（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝１２．０），２．５７（１Ｈ，ｄｄ，
Ｊ＝１２．５，Ｊ＝３．１），３．１２（１Ｈ，ｄ，Ｊ
＝１６．５），３．４２（３Ｈ，ｓ），３．５３（３
Ｈ，ｓ），３．５６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１６．５），３．
７７（１Ｈ，ｂｒｄ，Ｊ＝３．８），４．３６（１Ｈ，
ｄｔ，Ｊ＝１２．０，Ｊ＝３．８），５．４５（１Ｈ，
ｂｒｓ），５．６６（１Ｈ，ｂｒｓ），６．４８（１
Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．２），６．８５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．
２），６．８６（１Ｈ，ｓ），６．９０（１Ｈ，ｄ，Ｊ
＝２．２），１１．９７（１Ｈ，ｂｒｓ）［ｍ＊：ｏｖ
ｅｒｌａｐｐｉｎｇ ｍｕｌｔｉｐｌｅｔ］。

【０１４０】¹³Ｃ−ＮＭＲ（Ｐｙｒｉｄｉｎｅ−
ｄ₅ ）：１５．８（ｑ），１７．２（ｑ），２１．１
（ｔ），２２．３（ｑ），２９．３（ｑ），３１．４
（ｔ），３２．５（ｔ），３４．０（ｔ），３６．９
（ｄ），３８．７（ｓ），３９．６（ｄ），４３．９
（ｓ），５１．７（ｑ），５３．６（ｑ），６６．２
（ｄ），７９．０（ｄ），９８．５（ｓ），１０１．６
（ｄ），１０５．５（ｄ），１０６．６（ｄ），１１
０．６（ｓ），１１５．１（ｓ），１４２．２（ｓ），
１５７．０（ｓ），１５７．５（ｓ）。

【０１４１】ル）以上の理化学的性質から、化合物Ｆ１
８３９−Ｋの化学構造式及び化学名は、次の通りであ
る。

【０１４２】

【化２１】

【０１４３】４−ヒドロキシ−６，８−ジメトキシ−
２，３，６，８−テトラヒドロ−２（８Ｈ）−ベンゾ
［２，１−ｂ：３，４−ｃ’］ジフラン−２−スピロ−
５’−（２’，３’−ジヒドロキシ−１’，１’，４’
ａ，６’−テトラメチル−１’，２’，３’，４’，
４’ａ，５’，６’，７’，８’，８’ａ−デカヒドロ
ナフタレン）。

【０１４４】本発明のコレステロールエステラーゼ阻害
物質生産能を有する微生物は、伊豆半島の土壌中から、
通常の方法で分離されたものであり、以下の性質を示
す。

【０１４５】（１）肉眼的観察による各種培地上での性
状 不完全菌スタキボトリス エスピー Ｆ−１８３９の肉
眼的観察に基づく各種培地上における培養の特徴は、次
に記載する通りである。

【０１４６】ａ） ポテトグルコース寒天培地 生育は良好で、２７℃、２１日間の培養でコロニーの直
径は２５〜３０ｍｍになる。菌糸の生育は良好である。
コロニーの周辺部はほぼ円形で均一に広がる。胞子も中
央から周辺部へ向けて豊富に認められ、特に２５℃培養
では着生が著しい。コロニーの表面は培養の経過ととも
に、白色（Ｎｏ．２９３：Ｎ９．５）からうすオリーブ
色（Ｎｏ．１１９：６．５Ｙ７．０／２．０）に変化す
る。コロニーの周辺部は白く帯状になっていて、胞子の
着生が見られない。コロニーの裏面は中央から周辺部に
向けて、たばこ色（Ｎｏ．７４：５．０ＹＲ４．５／
５．５）で、周辺部は帯状ににぶ黄橙色（Ｎｏ．８２：
８．０ＹＲ６．０／２．５）となっている。明るい黄味
橙色（Ｎｏ．４８：２．０ＹＲ６．５／１１．５）から
赤味橙色（Ｎｏ．４０：１０．０Ｒ４．０／１２．０）
の拡散性色素が明瞭に認められる。

【０１４７】ｂ） ツアッペックドックス寒天培地 生育不良 ｃ） コーンミール寒天培地 極めて生育良好で、２７℃、２１日間の培養でコロニー
の直径が５５〜６０ｍｍに達する。コロニーは薄く平坦
であり表面の一部に分生子（梗子）柄が見られ、粉がふ
いた状態を呈する。培養初期から菌糸の形成が豊富で、
中央の一部に黒く胞子形成も認められる。

【０１４８】コロニーの表面は白色（Ｎｏ．２９３：Ｎ
９．５）から黄味白色（Ｎｏ．１０６：４．５Ｙ９．０
／３．０）で、コロニーの裏面もほぼ同様の色彩である
が、培養の経過につれて中央の一部がたばこ色（Ｎｏ．
７４：５．０ＹＲ４．５／５．５）に変化する。ごく僅
かなにぶ黄色（Ｎｏ．１０４：３．５Ｙ７．５／７．
５））の拡散性色素が認められる。ｄ） サブロー寒天
培地 生育は良好で、コロニーの表面は放射状に褶曲してお
り、肌色（Ｎｏ．６９：５．０ＹＲ７．５／６．５）
で、中心部は薄茶色（Ｎｏ．７０：５．０ＹＲ７．５／
２．５）である。２７℃、２１日間の培養でコロニーの
直径が３０〜３４ｍｍとなる。コロニーの裏面も放射状
に褶曲しており、にぶ橙色（Ｎｏ．６６：４．０ＹＲ
７．５／７．５）で、中央部は焦げ茶色（Ｎｏ．５６：
２．５ＹＲ３．５／２．５）である。拡散性のにぶ橙色
（Ｎｏ．７５：６．５ＹＲ７．５／６．０）の色素は３
０℃培養では認められないが、２５℃培養では僅かに認
められる。

【０１４９】尚、色の表示記載はＪＩＳカラーコードに
則った「ツデイズ カラー／３００（日本色彩社）」の
表示法に従った。

【０１５０】（２）顕微鏡的観察による形態学的性質 不完全菌スタキボトリス エスピー Ｆ−１８３９の顕
微鏡的観察に基づく形態学的性質の特徴は、次に記載す
る通りである。

【０１５１】各種培地上で菌核、子嚢果その他の有性生
殖器官は確認されず、フィアロ型分生子を産生する無性
胞子形成が観察される。菌糸は多くの培地上で形成さ
れ、複雑に分岐し、３〜６μｍの菌糸幅で縦横に伸長し
ている。基部から２〜４個の隔壁を有する、無色で幅が
２〜４．５μｍの梗子柄は、菌糸から単純分岐して、直
立し或いは緩く湾曲して、５０〜７０μｍの長さに伸び
ている。梗子柄の先端に輪生状に３〜６個並んで形成さ
れている梗子（フィアライド）は、表面がスムーズで淡
い茶色の楕円形もしくは棍棒状の形をしており、その大
きさは３〜４ｘ６〜１０μｍである。梗子の先端にかた
まって形成されるフィアロ型分生子は、濃い黒褐色の楕
円形もしくは紡錘形で、表面が粗くイボ状になってお
り、大きさは３〜５ｘ６〜９μｍである。

【０１５２】（３） 生理学的性質 好気性の菌で表１に示す生理学的性質を有する。

【０１５３】

【表１】

【０１５４】上記の菌学的性質を有する本菌株の分類学
上の位置は、マイコタキソン（Ｍｙｃｏｔａｘｏｎ）、
第３巻、４０９から４８５頁（１９７６年）に示された
エス・シー・ジョン（Ｓ．Ｃ．Ｊｏｎｇ）とイー・イー
・デイビス（Ｅ．Ｅ．Ｄａｖｉｓ）の検索式 に従い検
索すると、本菌は、不完全菌類（ファンジ インペルフ
ェクチ：Ｆｕｎｇｉ Ｉｍｐｅｒｆｅｃｔｉ）、ハイフ
ォミセテス目（ハイフォミセターレス：Ｈｙｐｈｏｍｙ
ｃｅｔａｌｅｓ）、デマチア科（デマチアセー：Ｄｅｍ
ａｔｉａｃｅａｅ）、スタキボトリス属（Ｓｔａｃｈｙ
ｂｏｔｒｙｓ）に属し、梗子胞子表面が粗面或はイボ状
で、ラグビーボールのような形状をしている点から、ス
タキボトリス チャータルム（Ｓｔａｃｈｙｂｏｔｒｙ
ｓ ｃｈａｒｔａｒｕｍ）に最も近い菌と思われる。醗
酵研究所（ＩＦＯ）の保存株である、スタキボトリス
チャータルム（Ｓｔａｃｈｙｂｏｔｒｙｓ ｃｈａｒｔ
ａｒｕｍ ＩＦＯ ５３６９）と比較したところ、本菌
株の梗子柄は単純分岐が多いが、ＩＦＯ ５３６９株で
は１つの梗子柄から更に梗子柄が分岐伸長する点で異な
り、また、各種培地での生育状態では、本菌株が多量の
拡散性色素を産生するが、ＩＦＯ ５３６９株では殆ど
産生しない点で違いが見られる。このように両菌株の間
には細部においてやや相違する性質も認められるので、
本発明に関わる微生物は新菌種であり、本発明者らはこ
の菌をスタキボトリス エスピー Ｆ−１８３９と命名
した。

【０１５５】上記した菌株スタキボトリス エスピー
Ｆ−１８３９は、微工研に受託番号微工研菌寄第１２８
１８号（ＦＥＲＭ−Ｐ Ｎｏ. １２８１８）として受託
された。

【０１５６】本発明によるコレステロールエステラーゼ
阻害物質の取得方法は、具体的には次の如くして実施さ
れる。即ち、先ず上記微生物を通常の栄養物及び無機塩
等の添加物を含有する培地で培養する。

【０１５７】培地として一般に用いられる窒素源として
は、例えば、大豆粉、大豆油、オートミール、コーンス
チープリカー、肉エキス、ペプトン、酵母エキス、乾燥
酵母粉末、カゼイン加水分解物、アンモニウム塩、硝酸
塩等が挙げられる。

【０１５８】炭素源としては、例えば、グルコース、マ
ルトース、ラクトース、スクロース、ポテトスターチ、
コーンスターチ、グリセリン、糖蜜等が挙げられる。

【０１５９】また、培地に添加される添加物としては、
例えば炭酸カルシウム、塩化ナトリウム、硫酸マグネシ
ウム、各種燐酸塩等の無機塩が挙げられる。更に必要に
応じて鉄、銅、マンガン、コバルト、亜鉛等の金属塩を
微量添加しても良い。

【０１６０】培養は、上記培地を含有する通常の水性培
地で、表面培養でも、深部通気撹拌培養でも実施できる
が、深部通気撹拌培養を行う方がより好ましい。培養条
件は、通常の通気条件下に液性がｐＨ４〜１０、より好
ましくはｐＨ６〜９、及び培養温度１０〜３５℃、好ま
しくは２５〜３０℃で通常３〜７日間で好適に培養でき
る。

【０１６１】次いで上記培養後に培養液中に生産された
コレステロールエステラーゼ阻害物質を採取する。採取
法は特に制限されず、生産された化合物の理化学的性質
を利用した、公知の各種方法がいずれも採用できる。例
えば、各種溶媒に対する不純物との溶解度の差、通常の
吸着剤例えば、活性炭、順相系シリカゲル、逆相系シリ
カゲル、アルミナ、イオン交換樹脂、デキストランゲル
に対する吸着親和力の差、二液層間の分配率の差等を利
用する方法、及びこれらの組合せにより実施できる。

【０１６２】より具体的には、培養液を常法に従い濾過
もしくは遠心分離して、予め菌体を除去する。次いで上
清液のｐＨを７．０に調整した後、多孔性非イオン性吸
着樹脂を詰めたカラムに通して、コレステロールエステ
ラーゼ阻害活性を有する化合物（以下「活性化合物」と
いう）を吸着させ、洗浄後にメタノールで溶出する。メ
タノール溶出物を水に溶解させ塩酸でｐＨ３．０に調整
した後、ｎ−ブタノールを加え活性化合物を抽出する。
ｎ−ブタノール抽出物を１０ｍＭの酢酸−ピリジン緩衝
液（ｐＨ６．０）に溶解させ、予め、１０ｍＭの酢酸−
ピリジン緩衝液（ｐＨ６．０）で平衡化しておいた弱塩
基性陰イオン交換樹脂を詰めたカラムに通じ、活性化合
物を吸着させる。同一緩衝液で洗浄後、酢酸−ピリジン
緩衝液の１０ｍＭから１Ｍまでリニアーグラジエントに
よる溶出を行う。活性化合物を含む画分から得た乾固物
をｎ−ブタノールに溶解し、酸性下でｎ−ブタノール抽
出を２回行う。抽出物をメタノールに溶解して、逆相系
シリカゲルの高速液体クロマトグラフィーにより活性化
合物を分取することができる。

【０１６３】また、以下の別法にても容易に取得するこ
とが可能である。前述した方法で得られたメタノール溶
出物を酢酸エチル：メタノール（１００：１５，Ｖ／
Ｖ）の混合溶媒で抽出する。この抽出物をシリカゲルカ
ラムの上端に重層し、ｎ−ヘキサン、次いで酢酸エチル
で洗浄する。続いて酢酸エチルとメタノールの比率を順
次変化させた混合溶媒でステップワイズによる溶出を行
う。各画分に含まれる活性化合物を薄層クロマトグラフ
ィーで確かめ、Ｒｆ値ごとに画分を集め、溶媒を溜去す
る。乾固物をメタノールに溶解させ、逆相系シリカゲル
の高速液体クロマトグラフィーにより活性化合物を分離
することができる。

【０１６４】ところで、本発明化合物の化学構造の炭素
骨格は、宮崎ら（Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏ
ｌ．ｖｏｌ．２４（１１），１０９１−１１０８，１９
８０）によるＫ−７６の発見として報告されている。ま
た、Ｋ−７６の全合成が、コーリーら（Ｅ．Ｊ．Ｃｏｒ
ｅｙ ａｎｄ Ｊａｇａｂａｎｄｈｕ Ｄａｓ，Ｊ．Ａ
ｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，ｖｏｌ．１０４，５５５１−
５５５３，１９８２）により報告されている。本発明化
合物は、上記全合成を適宜修飾した方法により化学的に
合成することができる。

【０１６５】

【発明の効果】本発明化合物のコレステロールエステラ
ーゼ阻害活性は、メソッズ イン エンザイモロジー
（Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ）、第
１５巻、５３７から５４３頁（１９６９年）に記載され
たジョージ・ブイ・バホウニー（Ｇｅｏｒｇｅ Ｖ．Ｖ
ａｈｏｕｎｙ）等の方法、及びメソッズ イン エンザ
イモロジー（Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏ
ｇｙ）、第７１巻、６６４から６７４頁（１９８１年）
に記載されたリンダ・エル・ガロ（Ｌｉｎｄａ Ｌ．Ｇ
ａｌｌｏ）の方法を参考にした、以下に示す方法により
測定した。

【０１６６】即ち、０．１５４Ｍ燐酸カリウム緩衝液
（ｐＨ５．２）に、２単位／ｍｌになるように溶解した
豚膵臓由来コレステロールエステラーゼ液０．４０ｍｌ
と、０．１５４Ｍ燐酸カリウム緩衝液に溶解または懸濁
させた被験化合物液０．１０ｍｌをガラス製小試験管中
で加え、３７℃で１０分間プレインキュベーションす
る。基質懸濁液（コレステロール３００ｍｇ、オレイン
酸１，３１４ｍｇ、タウロコール酸ナトリウム１，０７
５ｍｇ、塩化アンモニウム３５３ｍｇ、牛血清アルブミ
ン４００ｍｇを０．１５４Ｍ燐酸カリウム緩衝液（ｐＨ
５．２）１００ｍｌに、バホウニー等の方法に準じて調
製した懸濁液）０．５０ｍｌを加え、３７℃で８の字振
盪させながら反応を進行させる。３０分後に反応液を沸
騰浴中に２分間浸して反応を停止させる。冷却後、内部
標準物質として、コレステリルベンゾエイトを０．２５
ｍｇを加えて凍結乾燥する。凍結乾燥物にｎ−ヘキサン
３ｍｌを添加し、残留基質及び反応生成物の抽出を３回
繰り返して行う。抽出液を合わせて、５分間超音波処理
を施してよく分散させた後、１，０００ｘｇで５分間遠
心分離する。上清を採取し、減圧乾固する。０．５ｍｌ
のアセトンを加え溶解させてから、ガスクロマトグラフ
ィーにより反応生成物のコレステリルオレエイトを定量
する。ガスクロマトグラフィーの条件を表２に示す。

【０１６７】

【表２】

【０１６８】酵素活性の定義は、３７℃１時間に１μｍ
ｏｌｅのコレステロールから１μｍｏｌｅのコレステリ
ルオレエイトを産生する酵素量を１単位とした。

【０１６９】本発明化合物のコレステロールエステラー
ゼ阻害活性を５０％阻害濃度（ＩＣ₅₀）として表３に示
す。

【０１７０】

【表３】

【０１７１】いずれの化合物もコレステロールエステラ
ーゼの阻害活性を有している。

【０１７２】〔毒性〕アンバーライトＩＲＡ−３５（商
標：ローム・アンド・ハース社製）カラムクロマトグラ
フィーにより得られた活性化合物を、１００ｍｇ／ｋｇ
の濃度になるよう４週令の雄性ＩＣＲ系マウス（体重２
２〜２４ｇ）５匹に２日間連続腹腔内投与したところ、
１週間経過しても死亡例はなく、体重も順調に増加した
ので、顕著な毒性は認められなかった。

【０１７３】〔製剤〕本発明コレステロールエステラー
ゼ阻害剤は、有効成分である前記化合物に生理的に無害
な固体又は液体の製剤担体を配合した種々の薬剤組成物
として使用される。

【０１７４】この薬剤組成物は、投与方法に応じた各種
の製剤形態に調製され使用される。製剤形態としては、
錠剤、顆粒剤、丸剤、カプセル剤、水剤、シロップ剤、
懸濁剤、乳濁剤又は注射剤が挙げられる。製剤担体とし
て、通常用いられる賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、
被覆剤、溶解補助剤、乳化剤、懸濁化剤、安定化剤又は
溶剤を使用することができる。

【０１７５】

【実施例】以下に本発明化合物の製造法を実施例により
詳述する。

【０１７６】〔実施例１〕スタキボトリス エスピー
Ｆ−１８３９の胞子及び菌糸体を１白金耳分、表４に記
載した組成の培地８０ｍｌを入れた５００ｍｌ容の坂口
フラスコ３０本に接種し、２８℃で７日間往復振盪培養
を行った。得られた培養液を１２，０００ｘｇで遠心分
離して菌体を除去し、上清液２，０００ｍｌを得た。上
清液のｐＨを７．０に合わせた後、４００ｍｌのダイヤ
イオンＨＰ−２０（商標；三菱化成製）を詰めたカラム
（φ５ｘ２０ｃｍ）に通じ、活性化合物を吸着させた。
４００ｍｌの水、次いで４００ｍｌの５０％（Ｖ／Ｖ）
メタノールで洗浄した後、メタノール１，０００ｍｌで
活性化合物を溶出した。溶出液中の溶媒を減圧下で溜去
し得られた乾固物を水に溶解した後、希塩酸でｐＨを
３．０に調整し、ｎ−ブタノール３００ｍｌを加え２時
間撹拌した後、沈澱物を除去した。得られた上清を減圧
濃縮し、乾固物４．５８ｇを得た。

【０１７７】これを１０ｍＭの酢酸−ピリジン緩衝液
（ｐＨ６．０）２００ｍｌに溶解し、予め同一緩衝液で
平衡化させたアンバーライトＩＲＡ−３５（商標；ロー
ム・アンド・ハース製）を担体とするカラム（φ３．５
ｘ３３ｃｍ）に吸着させた。同一緩衝液で洗浄後、酢酸
−ピリジン緩衝液（ｐＨ６．０）による１０ｍＭから１
Ｍへのリニアーグラジエントによる溶出（２，０００ｍ
ｌ）を行った。３００ｎｍの紫外線で活性化合物をモニ
ターし、活性化合物を含む画分として２４０ｍｌを得
た。これに２００ｍｌのｎ−ブタノールを加え撹拌し、
静置後分別されたｎ−ブタノール層を分取した。これを
２００ｍｌの希塩酸水（ｐＨ３．０）で二度洗浄した
後、減圧乾固した。

【０１７８】得られた乾固物１．６９ｇを７．５ｍｌの
８０％メタノール（Ｖ／Ｖ）に溶解し、一回目の高速液
体クロマトグラフィー（機種；バイオエルシーシステム
ＣＣＰ＆１０１０（商標；東ソー製），カラム：φ３０
ｘ２５０ｍｍ，担体：イナートシルプレップ−ＯＤＳ
（商標；ジーエルサイエンス製），移動層：メタノー
ル：水／８０：２０，Ｖ／Ｖ，流速：２５ｍｌ／分，検
出：ＵＶ３００ｎｍ，温度：４０℃）を行った。ピーク
をモニターしながら集めた活性化合物を含む画分を減圧
乾固して得られた乾固物３８ｍｇを、再び８０％（Ｖ／
Ｖ）メタノールに溶解し二回目の高速液体クロマトグラ
フィーにかけ、活性化合物を含む画分を集め、減圧乾固
して乾固物２２．９ｍｇを分取した。

【０１７９】これをクロロフォルムに溶解し、予め同一
溶媒で平衡化しておいたシリカゲルカラム（担体：ワコ
ーゲルＣ−２００（商標；和光純薬製），φ５．４ｘ２
０ｍｍ）に吸着させ、酢酸エチル−酢酸の混合溶媒（９
８：２，Ｖ／Ｖ）で溶出した。ＵＶ３００ｎｍでモニタ
ーして活性化合物を含む画分を集め、減圧乾固して活性
化合物９．４ｍｇを得た。これを順相系シリカゲルの高
速液体クロマトグラフィー（担体：イナートシル−ＳＩ
Ｌ（商標；ジーエルサイエンス製），カラム：φ４ｘ２
５０ｍｍ，移動層：クロロフォルム：メタノール：酢酸
／９６．５：３．０：０．５，Ｖ／Ｖ）により、本発明
物質の一つである白色粉末のＦ１８３９−Ｆを５．１ｍ
ｇ得た。

【０１８０】

【表４】

【０１８１】〔実施例２〕スタキボトリス エスピー
Ｆ−１８３９を、表５に記載した組成の培地を８０ｍｌ
入れた５００ｍｌ容のエーレンマイヤーフラスコに接種
し、２８℃で４日間回転振盪培養を行った。このように
して得られた種培養液１ｍｌを、８０ｍｌの上記培地を
入れた５００ｍｌ容エーレンマイヤーフラスコ５０本に
接種し、２８℃で７日間回転振盪培養を行った。得られ
た培養液を１２，０００ｘｇで遠心分離して菌体を除去
し、上清液３，１８０ｍｌを得た。

【０１８２】上清液のｐＨを７．０に合わせた後、５０
０ｍｌのダイヤイオンＨＰ−２０（商標；三菱化成製）
を詰めたカラム（φ５ｘ２５ｃｍ）に通じ、活性成分を
吸着させた。４００ｍｌの水、次いで１，０００ｍｌの
５０％（Ｖ／Ｖ）メタノールで洗浄した後、メタノール
２，０００ｍｌで活性成分を溶出した。溶媒を減圧下で
溜去し、８．０３ｇの乾固物を得た。この乾固物を水に
溶解し、ｐＨを希塩酸で３．０に調整した後ｎ−ブタノ
ール３００ｍｌを加え、２時間撹拌した後、沈澱物を除
去した。得られた上清を減圧濃縮し、７．１８ｇの乾固
物を得た。

【０１８３】これを１０ｍＭの酢酸−ピリジン緩衝液
（ｐＨ６．０）２００ｍｌに溶解し、予め同一緩衝液で
平衡化させたアンバーライトＩＲＡ−３５（商標；ロー
ム・アンド・ハース製）を担体とするカラム（φ３．５
ｘ３３ｃｍ）に吸着させた。同一緩衝液で洗浄後、酢酸
−ピリジン緩衝液（ｐＨ６．０）による１０ｍＭから１
Ｍへのリニアーグラジエントによる溶出（２，０００ｍ
ｌ）を行った。３００ｎｍの紫外線吸収を持つ画分を集
め減圧濃縮して、１．０７ｇの活性化合物を得た。

【０１８４】これを酢酸エチルとメタノール（１００：
１５，Ｖ／Ｖ）の混合溶媒で抽出し、その可溶部として
０．６１ｇが得られた。この全量をシリカゲルを用いた
分取薄層クロマトグラフィー（担体：キーゼルゲル６０
Ｆ２５４（商標；メルク製），展開溶媒：酢酸エチル：
メタノール／５：１，Ｖ／Ｖ）で展開し、Ｒｆ値から５
つの画分に分けた。これらの中からＲｆが約０．５の単
一スポットを示した画分のシリカゲルを掻き取り、、酢
酸エチル：メタノール／６：４（Ｖ／Ｖ），の混合溶媒
で抽出した。抽出液を減圧乾固して、Ｆ１８３９−Ａの
白色粉末５０．３ｍｇを取得した。

【０１８５】

【表５】

【０１８６】〔実施例３〕スタキボトリス エスピー
Ｆ−１８３９を、５００ｍｌ容のエーレンマイヤーフラ
スコに入れた実施例２で示した組成の培地１００ｍｌに
１白金耳接種し、２８℃で４日間回転振盪培養を行っ
た。得られた種培養液１ｍｌを、１６０ｍｌの上記培地
を入れた５００ｍｌ容エーレンマイヤーフラスコ２５本
に接種し、３０℃で７日間回転振盪培養を行った。

【０１８７】得られた培養液を１２，０００ｘｇで遠心
分離して菌体を除去し、上清液３，４４０ｍｌを得た。
上清液のｐＨを７．０に合わせた後、５００ｍｌのダイ
ヤイオンＨＰ−２０（商標；三菱化成製）を詰めたカラ
ム（φ５ｘ２０ｃｍ）に通じ、活性化合物を吸着させ
た。４００ｍｌの水、次いで１，０００ｍｌの５０％
（Ｖ／Ｖ）メタノールで洗浄した後、メタノール２，０
００ｍｌで活性化合物を溶出した。溶出液を減圧下で溜
去し、８．７０ｇの乾固物を得た。

【０１８８】これを酢酸エチルとメタノール（１００：
１５，Ｖ／Ｖ）の混合溶媒で溶媒抽出した。生じた沈澱
を濾別し、可溶部を減圧乾固して乾固物３．５７ｇを得
た。

【０１８９】このうち２．５０ｇをシリカゲル粉末と混
合し、シリカゲルカラム（φ４．５ｘ２７ｃｍ）の上端
に重層し、ｎ−ヘキサン次いで酢酸エチルで洗浄した。
続いて酢酸エチルとメタノールの比率を以下のように変
化させた混合溶媒で順次ステップワイズによる溶出を行
い（９：１→８：１→８：２→７：３→１：１，Ｖ／
Ｖ）、最後にメタノールだけで溶出した。各画分に含ま
れる活性化合物を薄層クロマトグラフィー（担体：キー
ゼルゲル６０Ｆ２５４（商標；メルク製），展開溶媒；
酢酸エチル：メタノール／５：１，Ｖ／Ｖ）で確かめ、
Ｒｆ値が０．３以上の化合物が入っている画分をＲｆ値
ごとに集めた。溶媒を溜去し、それぞれ乾固物として画
分４からは０．４１４ｇ、画分５からは０．３７２ｇ、
画分６からは０．３４５ｇ、画分７からは０．１９８ｇ
の乾固物を取得した。

【０１９０】それぞれの乾固物をメタノールに溶解さ
せ、逆相系シリカゲルによる高速液体クロマトグラフィ
ー（カラム：φ２０ｘ２５０ｍｍ，担体：ＹＭＣ−パッ
ク−ＳＨ３４３，１０μｍ（商標；山村化学製），検
出；ＵＶ３００ｎｍ）により順次活性化合物を得た。即
ち、画分４はメタノールに溶解後、メタノール：水／７
０：３０（Ｖ／Ｖ）の溶媒で高速液体クロマトグラフィ
ーを行い、前後２本のピークを分取して集めた。溶媒を
溜去し、Ｆ１８３９−Ｂを３０．３ｍｇ、Ｆ１８３９−
Ｃを２９．８ｍｇを得た。画分５は同じくメタノールに
溶解後、メタノール：水／８：２（Ｖ／Ｖ）の溶媒系で
高速液体クロマトグラフィーを行い、Ｆ１８３９−Ａを
１５０ｍｇ取得した。画分６は同じくメタノールに溶解
し、メタノール：水／７５：２５（Ｖ／Ｖ）の溶媒系で
高速液体クロマトグラフィーを行い、Ｆ１８３９−Ｄを
１９．３ｍｇ、Ｆ１８３９−Ｅを１０．０ｍｇ、Ｆ１８
３９−Ａを５０．２ｍｇ分別取得した。画分７はメタノ
ールに溶解後、メタノール：水／８０：２０（Ｖ／Ｖ）
の溶媒系で高速液体クロマトグラフィーを行い、Ｆ１８
３９−Ｆを４．５ｍｇ、Ｆ１８３９−Ａを１５．８ｍｇ
取得した。

【０１９１】クロマトグラム上に現れるピークは、保持
時間の短い順にＦ１８３９−Ｄ→Ｆ１８３９−Ｅ→Ｆ１
８３９−Ｂ→Ｆ１８３９−Ａ→Ｆ１８３９−Ｃ→Ｆ１８
３９−Ｆである。

【０１９２】〔実施例４〕スタキボトリス エスピー
Ｆ−１８３９を、５００ｍｌ容のエーレンマイヤーフラ
スコに入れた実施例２で示した組成の培地１６０ｍｌに
１白金耳接種し、３０℃で３日間回転振盪培養を行っ
た。得られた種培養液１ｍｌを、１６０ｍｌの上記培地
を入れた５００ｍｌ容エーレンマイヤーフラスコ５０本
に接種し、３０℃で３日間回転振盪培養を行った。

【０１９３】得られた培養液を１２，０００ｘｇで遠心
分離して菌体を除去し、上清液６，８００ｍｌを得た。
上清液のｐＨを７．０に合わせた後、９５０ｍｌのダイ
ヤイオンＨＰ−２０（商標；三菱化成製）を詰めたカラ
ム（φ７ｘ２５ｃｍ）に通じ、活性化合物を吸着させ
た。１，５００ｍｌの水、次いで２，０００ｍｌの５０
％（Ｖ／Ｖ）メタノールで洗浄した後、メタノール３，
０００ｍｌで活性化合物を溶出した。溶出液を減圧下で
溜去し、２０．９３ｇの乾固物を得た。

【０１９４】これを酢酸エチルとメタノール（１００：
１５，Ｖ／Ｖ）の混合溶媒で溶媒抽出した。生じた沈澱
を濾別し、可溶部を減圧乾固して乾固物６．６９ｇを得
た。

【０１９５】このうち６．１９ｇをシリカゲル粉末と混
合し、シリカゲルカラム（φ４．５ｘ２７ｃｍ）の上端
に重層し、ｎ−ヘキサンと酢酸エチルの比率を以下のよ
うに変化させた混合溶媒で順次ステップワイズによる溶
出を行い（１０：１→９：１→８：２→７：３→６：４
→４：６，Ｖ／Ｖ）、続いて酢酸エチルとメタノールの
比率を以下のように変化させた混合溶媒で順次ステップ
ワイズによる溶出を行い（９：１→８：１→８：２→
７：３→１：１，Ｖ／Ｖ）、最後にメタノールだけで溶
出した。それぞれの画分の乾固物をメタノールに溶解さ
せ、逆相系シリカゲルによる高速液体クロマトグラフィ
ー（カラム：φ２０ｘ２５０ｍｍ，担体：ＹＭＣ−パッ
ク−ＳＨ３４３，１０μｍ（商標；山村化学製），検
出；ＵＶ３００ｎｍ）により活性化合物を得た。即ち、
シリカゲルカラムクロマトグラフィーに於いて、ｎ−ヘ
キサン：酢酸エチル＝９：１の混合溶媒により溶出され
た画分のメタノール溶解液を、メタノール：水／７５：
２５（Ｖ／Ｖ）の溶媒で高速液体クロマトグラフィーを
行い、１本のピークを分取して集めた。溶媒を溜去し、
Ｆ１８３９−Ｉを１０．１ｍｇ得た。次に、シリカゲル
カラムクロマトグラフィーに於いて、ｎ−ヘキサン：酢
酸エチル＝８：２の混合溶媒により溶出された画分のメ
タノール溶解液を、メタノール：水／７５：２５（Ｖ／
Ｖ）の溶媒で高速液体クロマトグラフィーを行い、１本
のピークを分取して集めた。溶媒を溜去し、Ｆ１８３９
−Ｋを２０．５ｍｇ得た。

【０１９６】〔実施例５〕スタキボトリス エスピー
Ｆ−１８３９を、５００ｍｌ容のエーレンマイヤーフラ
スコに入れた実施例２で示した組成の培地１６０ｍｌに
１白金耳接種し、３０℃で３日間回転振盪培養を行っ
た。得られた種培養液１ｍｌを、１６０ｍｌの上記培地
を入れた５００ｍｌ容エーレンマイヤーフラスコ５０本
に接種し、３０℃で７日間回転振盪培養を行った。

【０１９７】得られた培養液を１２，０００ｘｇで遠心
分離して菌体を除去し、上清液６，６５０ｍｌを得た。
上清液のｐＨを７．０に合わせた後、９００ｍｌのダイ
ヤイオンＨＰ−２０（商標；三菱化成製）を詰めたカラ
ム（φ７ｘ２４ｃｍ）に通じ、活性化合物を吸着させ
た。１，０００ｍｌの水、次いで１，５００ｍｌの５０
％（Ｖ／Ｖ）メタノールで洗浄した後、メタノール３，
０００ｍｌで活性化合物を溶出した。溶出液を減圧下で
溜去し、１０．５２ｇの乾固物を得た。

【０１９８】これを酢酸エチルとメタノール（１００：
１５，Ｖ／Ｖ）の混合溶媒で溶媒抽出した。生じた沈澱
を濾別し、可溶部を減圧乾固して乾固物６．６５ｇを得
た。

【０１９９】このうち６．００ｇをシリカゲル粉末と混
合し、シリカゲルカラム（φ４．５ｘ２７ｃｍ）の上端
に重層し、ｎ−ヘキサンで洗浄後、酢酸エチルによる溶
出を行った。これらの乾固物をメタノールに溶解させ、
逆相系シリカゲルによる高速液体クロマトグラフィー
（カラム：φ２０ｘ２５０ｍｍ，担体：ＹＭＣ−パック
−ＳＨ３４３，１０μｍ（商標；山村化学製），検出；
ＵＶ３００ｎｍ）により活性化合物を得た。即ち、シリ
カゲルカラムクロマトグラフィーに於いて、酢酸エチル
により溶出された画分のメタノール溶解液を、メタノー
ル：水／７５：２５（Ｖ／Ｖ）の溶媒で高速液体クロマ
トグラフィーを行い、１本のピークを分取して集めた。
溶媒を溜去し、Ｆ１８３９−Ｊを４２．７ｍｇ得た。

【図面の簡単な説明】

【第１図】本発明化合物Ｆ１８３９−Ａの核磁気共鳴ス
ペクトル。

【第２図】本発明化合物Ｆ１８３９−Ｂの核磁気共鳴ス
ペクトル。

【第３図】本発明化合物Ｆ１８３９−Ｃの核磁気共鳴ス
ペクトル。

【第４図】本発明化合物Ｆ１８３９−Ｄの核磁気共鳴ス
ペクトル。

【第５図】本発明化合物Ｆ１８３９−Ｅの核磁気共鳴ス
ペクトル。

【第６図】本発明化合物Ｆ１８３９−Ｆの核磁気共鳴ス
ペクトル。

【第７図】本発明化合物Ｆ１８３９−Ｉの核磁気共鳴ス
ペクトル。

【第８図】本発明化合物Ｆ１８３９−Ｊの核磁気共鳴ス
ペクトル。

【第９図】本発明化合物Ｆ１８３９−Ｋの核磁気共鳴ス
ペクトル。

─────────────────────────────────────────────────────

【手続補正書】

【提出日】平成５年６月２４日

【手続補正１】

【補正対象書類名】図面

【補正対象項目名】全図

【補正方法】変更

【補正内容】

【図１】

【図２】

【図３】

【図４】

【図５】

【図６】

【図７】

【図８】

【図９】

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁵ 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ１２Ｐ 17/04 7432−4Ｂ 17/16 7432−4Ｂ 17/18 Ｃ 7432−4Ｂ // Ａ６１Ｋ 31/34 ＡＤＮ 9360−4Ｃ 31/40 9360−4Ｃ (Ｃ１２Ｎ 1/14 Ｃ１２Ｒ 1:645） (Ｃ１２Ｐ 17/04 Ｃ１２Ｒ 1:645） (Ｃ１２Ｐ 17/16 Ｃ１２Ｒ 1:645） (Ｃ１２Ｐ 17/18 Ｃ１２Ｒ 1:645） (72)発明者 坂井 薫 東京都三鷹市下連雀四丁目17番25号 第１ 三鷹コーポ105 (72)発明者 蓮見 恵司 神奈川県川崎市高津区溝口541番地10 セ ザール溝ノ口102号 (72)発明者 村川 茂雄 東京都杉並区善福寺３丁目19番８号 (72)発明者 麻▲原▼ ▲教▼憲 埼玉県浦和市原山２丁目33番８号 浦和パ ークハイツ６−406

Claims (6)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 下記一般式で表わされる化合物。 【化１】 （式中、Ａ及びＢはそれぞれ異なって、「−Ｃ（Ｒ₃ ）
   （Ｒ₄ ）−ＮＸＹ」基又は「−ＣＯＺ」基を表し、Ｒ₁
   及びＲ₂ は、同一又は異なってそれぞれ水素原子、水酸
   基、炭素数１〜３のアルコキシ基を表し、Ｒ₃ 及びＲ₄
   は、同時に水素原子若しくは一緒になってオキソ基、又
   は一方が炭素数１〜３のアルコキシ基を、他方が水素原
   子を表し、Ｘが水素の場合にＹとＺは一緒になって単結
   合を表し、Ｘが水素でない場合にはＺは水酸基を、Ｘと
   Ｙは一緒になって「−（ＣＨ₂ ）_n ＣＯ−」基を表し、
   ｎは２〜４の整数を表す。）
2. 【請求項２】 下記化学式で示される化合物のうちのい
   ずれかである請求項１記載の化合物。 【化２】 【化３】 【化４】 【化５】 【化６】 【化７】 【化８】 【化９】 【化１０】
3. 【請求項３】 スタキボトリス属に属し、コレステロー
   ルエステラーゼ阻害物質生産能を有するスタキボトリス
   エスピー Ｆ−１８３９。
4. 【請求項４】 スタキボトリス属に属するコレステロー
   ルエステラーゼ阻害物質生産能を有する微生物を培養
   し、培養液からコレステロールエステラーゼ阻害物質を
   採取することを特徴とする、コレステロールエステラー
   ゼ阻害物質の製造法。
5. 【請求項５】 コレステロールエステラーゼ阻害物質生
   産能を有する微生物が、スタキボトリス エスピー Ｆ
   −１８３９である請求項４記載の製造法。
6. 【請求項６】 下記一般式で示される化合物を有効成分
   とするコレステロールエステラーゼ阻害剤 【化１１】 （式中、Ａ及びＢはそれぞれ異なって、「−Ｃ（Ｒ₃ ）
   （Ｒ₄ ）−ＮＸＹ」基又は「−ＣＯＺ」基を表し、Ｒ₁
   及びＲ₂ は、同一又は異なってそれぞれ水素原子、水酸
   基、炭素数１〜３のアルコキシ基を表し、Ｒ₃ 及びＲ₄
   は、同時に水素原子若しくは一緒になってオキソ基、又
   は一方が炭素数１〜３のアルコキシ基を、他方が水素原
   子を表し、Ｘが水素の場合にＹとＺは一緒になって単結
   合を表し、Ｘが水素でない場合にはＺは水酸基を、Ｘと
   Ｙは一緒になって「−（ＣＨ₂ ）_n ＣＯ−」基を表し、
   ｎは２〜４の整数を表す。）