JPH0873452A

JPH0873452A - 新規抗生物質

Info

Publication number: JPH0873452A
Application number: JP17193995A
Authority: JP
Inventors: Seiichi Sato; 誠一佐藤; Toshiyuki Kameyama; 俊之亀山; Riyuusuke Nakagawa; 隆祐中川; Toshihiko Yoshimura; 敏彦吉村; Ryosuke Fudo; 亮介不藤; Yumiko Sairenji; 弓子西連寺
Original assignee: Ajinomoto Co Inc
Current assignee: Ajinomoto Co Inc
Priority date: 1994-07-07
Filing date: 1995-07-07
Publication date: 1996-03-19

Abstract

(57)【要約】（修正有）【構成】ペニシリウム（Penicillium）属に属する抗
生物質Ｆ３９０生産菌を培地に培養し、その培養物から
下記式に示す抗生物質Ｆ３９０およびＦ３９０Ｂを採取
することを特徴とする抗生物質Ｆ３９０の製造方法、お
よび抗生物質Ｆ３９０またはＦ３９０Ｂを有効成分とし
て含む抗腫瘍剤。（式中Ｒは水素またはＡｃのいずれかを表す。）【効果】上記の抗生物質Ｆ３９０またはＦ３９０Ｂは
抗腫瘍剤として有用である。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、新規抗生物質、その製
造方法およびそれを有効成分として含む抗腫瘍剤に関す
る。

【０００２】

【従来の技術】従来、抗腫瘍抗生物質としてアントラサ
イクリン類、マイトマイシン類などの化合物などが報告
されている。キサントン骨格を有する抗腫瘍化合物は、
天然界、特に植物界より単離され、数多く報告されてい
るが（J. Pharm. Sci. 62，483〜485（1973）、Phyt
ochemistry 27，2795〜2800（1988）、Phytochemistry
34，1413〜1420（1993））いずれも高い抗腫瘍効果が
あるとは言いがたい。

【０００３】

【発明の解決しようとする課題】本発明は、新規抗生物
質並びにその製造方法を提供することを目的とする。ま
た、本発明は、上記抗生物質を有効成分として含む抗腫
瘍剤を提供することを目的とする。

【０００４】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、鋭意努力
した結果、ペニシリウム・エスピー（Penicillium s
p．）が生産する２種類のキサントン骨格を有する抗生
物質が新規化合物であり、これらが高い抗腫瘍活性を有
することを見いだし、本発明を完成するに至った。すな
わち、本発明は、下記式（１）で表される化合物を提供
するものである。

【０００５】

【化２】

【０００６】（式中Ｒは水素またはＡｃのいずれかを表
す。）上記化合物の内、Ｒが水素である化合物をＦ３９０、Ｒ
がＡｃである化合物をＦ３９０Ｂと命名した。なお、Ｆ
３９０ＢはＦ３９０の副産物として単離された。

【０００７】また、本発明は、ペニシリウム（Penicill
ium）属に属する抗生物質Ｆ３９０生産菌を培養し、そ
の培養物から抗生物質Ｆ３９０を採取することを特徴と
する、抗生物質Ｆ３９０の製造方法を提供するものであ
る。さらに、本発明は、抗生物質Ｆ３９０またはＦ３９
０Ｂを有効成分として含む抗腫瘍剤を提供するものであ
る。

【０００８】

【発明の実施の形態】本発明の抗生物質Ｆ３９０および
Ｆ３９０Ｂを生産する微生物は、ペニシリウム（Penici
llium）属に属する抗生物質Ｆ３９０の生産能を有する
菌種である。その一例として、下記に詳述するペニシリ
ウム・エスピー・ＡＪ１１７２９２（Penicillium s
p．AJ117292）（以下、「ＡＪ１１７２９２株」と称す
る）を挙げることができる。また、ＡＪ１１７２９２株
の自然的および人工的変異株を使用しても良い。

【０００９】上記ＡＪ１１７２９２株は、神奈川県にて
採取された土壌より分離された土壌糸状菌であり、工業
技術院生命工学工業技術研究所に平成６年７月６日付け
で寄託され、その微生物受託番号は、ＦＥＲＭＰ−１
４４１９である。

【００１０】ＡＪ１７２９２株は、次の菌学的性質を有
する。（１）各種培地に於ける生育形態麦芽エキス寒天培地上（２５℃）での生育は、１４日間
で４２ｍｍである。コロニー表面はビロード状で、灰緑
色を呈し、裏面は黄色がかった灰緑色である。培地中へ
の色素の浸出や液的の生成は認められない。ツアペック
寒天培地上（２５℃）での生育は良好で、１４日間で６
３ｍｍである。コロニー表面はビロード状で、中心部が
やや黄色味を帯びた白色である。裏面は淡黄色でやがて
黄褐色となる。培地中への色素の浸出は見られないが、
淡黄色の液的の生成が認められる。バレイショ・ブドウ
糖寒天培地（２５℃）での生育は、１４日間で６１ｍｍ
であり、コロニー表面はビロード状で中央部が白くなっ
た灰緑色を呈し、裏面は黄褐色である。色素や液滴の形
成は認められない。（２）形態的性状麦芽エキス寒天培地上で、分生子柄
は気中菌糸から発達し比較的短く（３０〜５０μｍｘ
２．０μｍ）、無色。通常、分生子柄の先端に２〜４本
の一次分枝（メトレ）がみられ、その上に３〜５本のフ
ィアライドを輪生し、その先端に多数の分生子を連鎖状
に形成する。メトレは２．０ｘ８．０〜１０μｍ。フィ
アライドは１．５〜２．０ｘ６．０〜８．０μｍでペン
先状で先が細い。分生子は淡緑色で、亜球形、単胞で粗
面（１．８〜２．２μｍ）。また上記培地のいずれでも
完全世代は認められない。生育温度は１０〜３７℃で、
至適温度は２５〜２８℃である。また生育ｐＨは３〜１
０で４〜８が至適である。以上の菌学的性質から本菌
は、ザジーナスペニシリウム（The genus Penici
llium；1979、Academic press，J I．Pitt 著）に従
い、不完全菌亜門、不完全糸状菌綱、ペニシリウム（Pe
nicillium）属に属することが明らかとなり、本菌株を
ペニシリウムエスピーＡＪ１１７２９２（Penicilliu
m sp．AJ117292）株と命名した。

【００１１】上記のペニシリウム（Penicillium）属に
属する抗生物質Ｆ３９０生産菌を培養し、その培養物か
ら抗生物質Ｆ３９０およびＦ３９０Ｂを採取することに
より、本発明の抗生物質Ｆ３９０およびＦ３９０Ｂを製
造することができる。

【００１２】Ｆ３９０生産菌は常法に従って培養するこ
とができ、培養の形態は、液体培養でも固体培養でもよ
い。工業的に有利に培養するためには、前記抗生物質生
産菌の菌懸濁液または培養液を培地に接種し、通気攪拌
培養をおこなえばよい。培地の栄養源としては特に限定
されることはないが、微生物の培養に通常用いられる炭
素源、窒素源、その他を培地に含有させることができ
る。炭素源としては、デンプン、デキストリン、グリセ
リン、グルコース、スクロース、ガラクトース、イノシ
トール、マンニトールなどが、また、窒素源としては、
ペプトン、大豆紛、肉エキス、米糠、麸、尿素、コーン
スティープリカー、アンモニウム塩、硝酸塩、その他の
有機または無機の窒素化合物が用いられる。その他、無
機塩、微量栄養源等を適宜添加してもよい。

【００１３】なお、醗酵中の発泡を抑制するため、消泡
剤等を適宜添加することができる。培養温度、培養時間
等の培養条件は使用する菌の発育に適し、しかもＦ３９
０またはＦ３９０Ｂの生産が最高となるような条件が選
ばれる。例えば、培地のｐＨは４〜９が適当であり、５
〜８が好ましく、培養温度は１５〜３５℃が適当であ
り、２０〜２８℃が好ましい。攪拌速度は、２００〜４
００ｒｐｍが適当であり、３００〜３５０ｒｐｍが好ま
しく、通気量は１／２０〜１／１ｖ／ｖ・ｍｉｎが適当
であり、１／４〜１／２ｖ／ｖ・ｍｉｎが好ましく、ま
た、培養時間は、２４〜１６８時間が適当であり、７２
〜１２０時間が好ましい。しかし、これらの培養組成
物、培地のｐＨ、培養温度、攪拌速度、通気量、培養時
間等の培養条件は使用する菌株の種類や、外部の条件な
どに応じて、所望の結果が得られるように適宜調節され
るべきであることはいうまでもない。

【００１４】上記のような培養物から、代謝産物を採取
するのに通常使用される手段を適宜利用してＦ３９０お
よびＦ３９０Ｂを採取することができる。たとえば、Ｆ
３９０またはＦ３９０Ｂと培養物中に含まれる他の物質
との溶解度の差を利用する手段、イオン結合力の差を利
用する手段、吸着親和力の差を利用する手段、分子量の
差を利用する手段のいずれもを、それぞれ単独で、また
は適宜組み合わせて、あるいは反復して使用することが
できる。具体的には、Ｆ３９０およびＦ３９０Ｂの培養
液体および菌体の抽出液をゲル濾過クロマトグラフィ
ー、吸着クロマトグラフィー、液体クロマトグラフィー
等を組み合わせて、精製するとＦ３９０、Ｆ３９０Ｂお
よびその他の活性成分を含む画分が得られる。この画分
を減圧濃縮して得られる固形物をさらに高速液体クロマ
トグラフィーに付して、展開して精製し、活性のある主
な分画を溶媒より晶析することによりＦ３９０の結晶が
得られる。

【００１５】上記のようにして得られたＦ３９０の理化
学的性質は以下の通りである。分子量：３０２（Ｃ_１６Ｈ_１４Ｏ_６）融点：１２４−１２６℃ 旋光度： [α]D-463゜(c 0.28,CHCl₃) 赤外吸収スペクトル(CHCl₃)： ν(cm^-1)3600，1740，16
40，1600，1580 紫外線吸収スペクトル（日立 U-3210 detector、MeO
H）： λmax （ε）339.6(11500) (MeOH) １Ｈ−ＮＭＲ(400MHz、CHCl₃-d1) δ： 2.26(3H,s),3.
63(3H,s),4.67(1H,d,J=5.4Hz),6.32(1H,brs),6.37-6.39
(3H,m),7.33(1H,d,J=6.8Hz),12.11(1H,brs) １３Ｃ−ＮＭＲ(100MHz、CHCl₃-d1) δ： 22.6(q),53.
4(q),65.2(d),82.9(s),105.6(s),108.3(d),111.4(d),12
6.4(d),127.1(s),131.7(d)x2,151.0(s),158.0(s),162.8
(s),168.8(s),182.8(s) ＨＲ−ＦＡＢＭＳ：実測値 303.0894 計算値 303.0869 溶解性：ジメチルスルホキシド、メタノール、クロ
ロホルム、酢酸エチルに易溶、ヘキサン、水に難溶。呈色反応：塩化第二鉄反応陽性物質の色：黄褐色上記の理化学的性質から、抗生物質Ｆ３９０は以下の式
（２）で表される新規化合物であることが明らかとなっ
た。

【００１６】

【化３】

【００１７】一方、Ｆ３９０を単離した際のシリカゲル
カラムクロマトグラフィーのクロロフォルム溶出画分を
逆相カラムクロマトグラフィーに付し、アセトニトリル
水溶液画分を分取後、ODS HPLC分取し、濃縮することに
より下記式（３）で示されるＦ３９０の誘導体Ｆ３９０
Ｂが得られる。

【００１８】Ｆ３９０Ｂの理化学的性質は以下の通りで
ある。分子量： 344(C₁₈H₁₆O₇）紫外線吸収スペクトル（日立 U-3210 detector、MeO
H）： λmax 338nm (MeOH) 溶解性：ジメチルスルホキシド、メタノール、クロ
ロホルム、酢酸エチルに易溶、ヘキサン、水に難溶。呈色反応：塩化第二鉄反応陽性物質の色：黄色 1H-NMR(600MHz，CDCl₃) δ： 2.05(3H,s),2.29(3H,
s),3.68(3H,s),5.94(1H,d,J=5.4Hz),6.30(1H,brs),6.32
-6.38(1H,m),6.40(1H,brs),6.43-6.47(1H,m),7.35(1H,
d,J=6.8Hz),12.15(1H,brs); FABMS ： m/z345(M+H)+ 上記の理化学的性質から、抗生物質Ｆ３９０Ｂは以下の
式（３）で表される新規化合物であることが明らかとな
った。

【００１９】

【化４】

【００２０】本発明の抗生物質Ｆ３９０およびＦ３９０
Ｂは抗腫瘍剤として有用であるが、これまで知られてい
る抗腫瘍効果のあるキサントン骨格を持つ化合物に比
べ、腫瘍細胞に対する細胞毒性が高いことが判明した。

【００２１】本発明の抗生物質Ｆ３９０およびＦ３９０
Ｂを有効成分として含む抗腫瘍剤は、経口および非経口
投与のいずれの投与経路でも使用可能であり、経口投与
する場合は、軟・硬カプセル剤または錠剤、顆粒剤、細
粒剤、散剤等の剤型で投与することができ、また、非経
口投与する場合は、水溶性懸濁液、油性製剤などの皮下
あるいは静脈注射剤、点滴剤、座薬、塗布薬、軟膏のよ
うな剤型で投与することができる。

【００２２】本発明の有効成分である抗生物質Ｆ３９０
およびＦ３９０Ｂを製剤化するために、界面活性剤、賦
形剤、滑沢剤、佐剤および医薬的に許容できる皮膜形成
物質、コーティング助剤等を適宜使用することができ
る。例えば、界面活性剤としては、アルコール、エステ
ル類、硫酸化脂肪アルコール類等を挙げることができ
る。また、賦形剤としては、ショ糖、乳糖、デンプン、
結晶セルロース、マンニット、軽質無水珪酸、アルミン
酸マグネシウム、メタ珪酸アルミン酸マグネシウム、合
成珪酸アルミニウム、炭酸カルシウム、炭酸水素ナトリ
ウム、リン酸水素カルシウム、カルボキシメチルセルロ
ースカルシウム等を挙げることができる。滑沢剤として
は、ステアリン酸マグネシウム、タルク、硬化油等を挙
げることができ、懸濁剤や湿潤剤のごとき佐剤として
は、ココナッツ油、オリーブ油、ゴマ油、落花生油、乳
酸カルシウム、ベニバナ油、大豆リン脂質等を挙げるこ
とができる。皮膜形成物質としては、セルロースや糖類
等の炭水化物誘導体として、酢酸フタル酸セルロース、
また、アクリル酸系共重合体、二塩基酸モルエステル類
等のポリビニル誘導体としてアクリル酸メチル・メタク
リル酸共重合体、メタアクリル酸メチル・メタクリル酸
共重合体が挙げられる。コーティング助剤としては、フ
タル酸エステル類等の可塑剤を挙げることができる。上
記の成分の他に、甘味料、香料、着色料、保存料等を添
加してもよい。

【００２３】また、投与量は対象となる腫瘍の種類によ
るが、腫瘍を有効に治療するのに十分な量であればよ
く、一般に静脈内投与の場合一日当り０．００１mg／Ｋ
ｇ体重〜１００mg／Ｋｇ体重、経口投与の場合０．０１
mg／Ｋｇ体重〜１ｇ／Ｋｇ体重である。

【００２４】以下に本発明を実施例により具体的に説明
するが、本発明の範囲はこれらに限定されるものではな
い。

【００２５】

【実施例】

［製造例１］ＡＪ１１７２９２株からのＦ３９０の製造種菌としてペニシリウム・エスピー・ＡＪ１１７２９２
（Penicillium sp．AJ117292）を用いた。該菌株の一
白金耳を５００ｍｌ容三角フラスコ中の生産培地（生産
培地組成；麦芽エキス（ディフコ）２０ｇ／ｌ、オート
ミール粉末１０ｇ／ｍｌ、ペプトン１０ｇ／ｍｌ、グル
コース１０ｇ／ｍｌ、可溶性デンプン１０ｇ／ｌ（ｐＨ
６．０））１００ｍｌへ接種し、２５℃、旋回振とう
（１８０ｒｐｍ）で４日間培養した。

【００２６】該培養液１０本にそれぞれ２００ｍｌのア
セトンを加えて、５℃で２日間抽出した。ついで、遠心
および濾過によって、菌体を除去した濾液（２Ｌ）を減
圧濃縮し、アセトンを留去した。残渣に酢酸エチル８０
０ｍｌを添加し抽出した。酢酸エチル層を脱水後、減圧
下濃縮し、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＣＨ
Ｃｌ₃−ＥｔＯＡｃ）に付し、ＣＨＣｌ₃−ＥｔＯＡｃ
（９５：５）溶出画分を分取した。本画分を減圧下濃縮
後、再び、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＣＨ
Ｃｌ₃−ＥｔＯＡｃ）に付し、９８：２の画分を分取し
た。本画分を減圧下濃縮後、セファデックスＬＨ−２０
カラムクロマトグラフィ−（ＣＨＣｌ₃−ＭｅＯＨ＝
１：１）に付し活性画分を分取後減圧下濃縮し、エーテ
ル／ヘキサンより結晶化を行って６００ｍｇのＦ３９０
を得た。

【００２７】［製造例２］Ｆ３９０Ｂの製造製造例１においてＦ３９０を単離した際のシリカゲルカ
ラムクロマトグラフィーのクロロホルム溶出画分を逆相
カラムクロマトグラフィーに付し50%CH3CN水溶液画分を
分取後、ODS HPLC分取(50%CH3CN)してＦ３９０Ｂを0.3m
g得た。

【００２８】［試験例］Ｆ３９０誘導体の抗腫瘍活性を
ＭＴＴ法により測定した。（Ａ）ヒト大腸癌ＨＣＴ−１５細胞に対する抗腫瘍作用ＲＰＭＩ１６４０培地（ＳＩＧＭＡ社製）、１０％牛
胎児血清、１００ｕｎｉｔ／ｍｌペニシリンおよび１０
０μｇ／ｍｌストレプトマイシンの組成からなる培地
（培地Ａ）に５ｘ１０４細胞／ｍｌに調製したＨＣＴ−
１５細胞を５０μｌずつ９６穴マイクロタイタープレー
トの各穴に分注した。該プレートを炭酸ガス細胞培養器
内で、３７℃、２０時間培養後、これに培地Ａにより適
宜希釈したＦ３９０、Ｆ３９０Ｂ、誘導体１および誘導
体２を５０μｌずつを加え、炭酸ガス細胞培養器内で、
３７℃、７２時間培養した。これにＭＴＴ溶液（５ｍｇ
／ｍｌダルベッコＰＢＳ（−））を１０μｌずつ加え、
３７℃で４時間炭酸ガス細胞培養器内で培養した。つい
で０．０１Ｎ塩酸／２０％ＳＤＳを５０μｌずつ加えて
生じた結晶を溶解した後、マイクロプレートリーダーに
より５７０ｎｍの吸光度を測定した。無処理細胞と既知
濃度の検体で処理した細胞の吸光度を比較することによ
り、細胞の増殖を５０％阻害する検体濃度（ＩＣ₅₀）を
算出した。その結果を表１に示した。

【００２９】

【表１】

【００３０】（Ｂ）ヒト白血病Ｋ５６２細胞に対する抗
腫瘍作用前記の培地Ａで８ｘ１０４細胞／ｍｌに調製したＫ５６
２細胞を５０μｌずつ９６穴マイクロタイタープレート
の各穴に分注した。これに培地Ａにより適宜希釈したＦ
３９０、Ｆ３９０Ｂを５０μｌずつを加え、以下前記の
ＨＣＴ−１５細胞の場合と同様にしてＩＣ₅₀を算出し
た。その結果を表２に示した。

【００３１】

【表２】

【００３２】

【発明の効果】本発明により、新規抗生物質Ｆ３９０お
よびＦ３９０Ｂならびにその製造方法が提供された。前
記抗生物質Ｆ３９０およびＦ３９０Ｂは高い抗腫瘍活性
を有するので、抗腫瘍剤として有用である。

【００３３】

【図面の簡単な説明】

【図１】抗生物質Ｆ３９０のＭｅＯＨ溶液中での紫外線
吸収スペクトルを示す図である。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者吉村敏彦神奈川県川崎市川崎区鈴木町１−１味の素株式会社中央研究所内 (72)発明者不藤亮介神奈川県川崎市川崎区鈴木町１−１味の素株式会社中央研究所内 (72)発明者西連寺弓子神奈川県川崎市川崎区鈴木町１−１味の素株式会社中央研究所内

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】下記式（１）で表される化合物。【化１】（式中Ｒは水素またはＡｃのいずれかを表す。）
【請求項２】Ｒが水素である請求項１記載の化合物。
【請求項３】ペニシリウム（Penicillium）属に属す
る抗生物質Ｆ３９０生産菌を培地に培養し、その培養物
から請求項２記載の化合物を採取することを特徴とす
る、請求項２記載の化合物の製造方法。
【請求項４】請求項１記載の化合物いずれかを有効成
分として含む抗腫瘍剤。
【請求項５】請求項２記載の化合物を有効成分として
含む抗腫瘍剤。