JPH06197783A - 新規な環状イソマルトオリゴ糖及びその製造法 - Google Patents
新規な環状イソマルトオリゴ糖及びその製造法Info
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- JPH06197783A JPH06197783A JP34944492A JP34944492A JPH06197783A JP H06197783 A JPH06197783 A JP H06197783A JP 34944492 A JP34944492 A JP 34944492A JP 34944492 A JP34944492 A JP 34944492A JP H06197783 A JPH06197783 A JP H06197783A
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- JP
- Japan
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- cyclic
- isomaltooligosaccharide
- novel
- oligosaccharide
- glucose
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- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
- Compositions Of Macromolecular Compounds (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【構成】 グルコース７〜９分子がαー１、６結合によ
り環状構造を形成してなる新規な環状イソマルトオリゴ
糖及びこの環状イソマルトオリゴ糖をバチルス属に属す
る微生物を培養して製造する方法。 【効果】 医薬品、食品等の包接剤として有用な新規な
環状イソマルトオリゴ糖を極めて簡単な操作により効率
良く得ることができる。
り環状構造を形成してなる新規な環状イソマルトオリゴ
糖及びこの環状イソマルトオリゴ糖をバチルス属に属す
る微生物を培養して製造する方法。 【効果】 医薬品、食品等の包接剤として有用な新規な
環状イソマルトオリゴ糖を極めて簡単な操作により効率
良く得ることができる。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、新規な環状イソマルト
オリゴ糖及びその製造法に関する。
オリゴ糖及びその製造法に関する。
【０００２】
【従来の技術】従来、環状オリゴ糖としては、例えば、
グルコース６〜８分子がα−１、４結合したサイクロデ
キストリンが良く知られている。サイクロデキストリン
は、構造的に環の中心部が疎水性を示すため、種々の疎
水性物質と結合する能力（包接能）を有している。その
ため、医薬品、化粧品、食品等の幅広い分野で、種々の
物質の安定化や溶解度等の改善のために、この性質を利
用した応用開発がなされている〔ハンドブック オブ
アミラーゼズ アンド リレイテッド エンザイム（Ha
ndbook of Amylases and Related Enzymes）日本アミラ
ーゼ研究会編、第233 〜243 頁、1988年〕。
グルコース６〜８分子がα−１、４結合したサイクロデ
キストリンが良く知られている。サイクロデキストリン
は、構造的に環の中心部が疎水性を示すため、種々の疎
水性物質と結合する能力（包接能）を有している。その
ため、医薬品、化粧品、食品等の幅広い分野で、種々の
物質の安定化や溶解度等の改善のために、この性質を利
用した応用開発がなされている〔ハンドブック オブ
アミラーゼズ アンド リレイテッド エンザイム（Ha
ndbook of Amylases and Related Enzymes）日本アミラ
ーゼ研究会編、第233 〜243 頁、1988年〕。
【０００３】また、最近、フラクトース６〜８分子がβ
−２、１結合した環状オリゴ糖が見出され、サイクロデ
キストリンと同様に幅広い分野での利用が期待されてい
る〔カルボハイドレート・リサーチ（Carbohyd. Res.)
第192 巻、第83〜90頁、1989年〕。これらの糖以外に
も、グルコース１７〜２４分子がβ−１、２結合したシ
クロソフォラオース、グルコース３〜４分子がβ−１、
６結合したサイクロゲンチオオリゴ糖、ラムノースが６
分子で環状化したサイクロアワオドリン、マンノースが
６分子で環状化したサイクロマンノヘキサオース等の種
々の環状オリゴ糖が酵素的あるいは化学合成により合成
されている。
−２、１結合した環状オリゴ糖が見出され、サイクロデ
キストリンと同様に幅広い分野での利用が期待されてい
る〔カルボハイドレート・リサーチ（Carbohyd. Res.)
第192 巻、第83〜90頁、1989年〕。これらの糖以外に
も、グルコース１７〜２４分子がβ−１、２結合したシ
クロソフォラオース、グルコース３〜４分子がβ−１、
６結合したサイクロゲンチオオリゴ糖、ラムノースが６
分子で環状化したサイクロアワオドリン、マンノースが
６分子で環状化したサイクロマンノヘキサオース等の種
々の環状オリゴ糖が酵素的あるいは化学合成により合成
されている。
【０００４】しかしながら、グルコースがα−１、６結
合した環状オリゴ糖は、従来全く知られていない。
合した環状オリゴ糖は、従来全く知られていない。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、その
有用性が大いに期待されるグルコースがα−１、６結合
した新規な環状イソマルトオリゴ糖及びその製法を提供
することにある。
有用性が大いに期待されるグルコースがα−１、６結合
した新規な環状イソマルトオリゴ糖及びその製法を提供
することにある。
【０００６】
【課題を解決するための手段】そこで、本発明者等は、
デキストランから、環状オリゴ糖を生成する微生物を土
壌より検索した結果、バチルス属に属する１菌株が新規
な環状オリゴ糖を培地中に産生すること等を知見し、本
発明を完成した。
デキストランから、環状オリゴ糖を生成する微生物を土
壌より検索した結果、バチルス属に属する１菌株が新規
な環状オリゴ糖を培地中に産生すること等を知見し、本
発明を完成した。
【０００７】即ち、本発明は、グルコース７分子がα−
１、６結合により環状構造を形成してなる新規なサイク
ロイソマルトヘプタオース、グルコース８分子がα−
１、６結合により環状構造を形成してなる新規なサイク
ロイソマルトオクタオース及びグルコース９分子がα−
１、６結合により環状構造を形成してなる新規なサイク
ロイソマルトノナオースからなる群から選択された新規
な環状イソマルトオリゴ糖である。
１、６結合により環状構造を形成してなる新規なサイク
ロイソマルトヘプタオース、グルコース８分子がα−
１、６結合により環状構造を形成してなる新規なサイク
ロイソマルトオクタオース及びグルコース９分子がα−
１、６結合により環状構造を形成してなる新規なサイク
ロイソマルトノナオースからなる群から選択された新規
な環状イソマルトオリゴ糖である。
【０００８】さらに、本発明は、バチルス属に属し、前
記環状イソマルトオリゴ糖生産能を有する微生物を、α
−１，６グルカンを含有する培地中で培養し、培養物よ
り前記環状イソマルトオリゴ糖を採取することを特徴と
する新規な環状イソマルトオリゴ糖の製造法である。
記環状イソマルトオリゴ糖生産能を有する微生物を、α
−１，６グルカンを含有する培地中で培養し、培養物よ
り前記環状イソマルトオリゴ糖を採取することを特徴と
する新規な環状イソマルトオリゴ糖の製造法である。
【０００９】以下、本発明を詳細に説明する。先ず、こ
れらの物質の理化学的性質及びその性質に基づきこれら
の物質が環状オリゴ糖であることについて説明する。 １．元素分析の結果、以下のようになり各々グルコース
の環状７量体、８量体、９量体であることが判った。 サイクロイソマルトヘプタオース；Ｃ42Ｈ70Ｏ35・3Ｈ2
Ｏとして 計算値 Ｃ:42.43％ Ｈ:6.44 ％ 測定値 Ｃ:42.78％ Ｈ:6.33 ％ サイクロイソマルトオクタオース；Ｃ48Ｈ80Ｏ40・4Ｈ2
Ｏとして 計算値 Ｃ:42.11％ Ｈ:6.48 ％ 測定値 Ｃ:42.37％ Ｈ:6.24 ％ サイクロイソマルトノナオース ；Ｃ54Ｈ90Ｏ45・5Ｈ2
Ｏとして 計算値 Ｃ:41.86％ Ｈ:6.51 ％ 測定値 Ｃ:41.53％ Ｈ:6.18 ％
れらの物質の理化学的性質及びその性質に基づきこれら
の物質が環状オリゴ糖であることについて説明する。 １．元素分析の結果、以下のようになり各々グルコース
の環状７量体、８量体、９量体であることが判った。 サイクロイソマルトヘプタオース；Ｃ42Ｈ70Ｏ35・3Ｈ2
Ｏとして 計算値 Ｃ:42.43％ Ｈ:6.44 ％ 測定値 Ｃ:42.78％ Ｈ:6.33 ％ サイクロイソマルトオクタオース；Ｃ48Ｈ80Ｏ40・4Ｈ2
Ｏとして 計算値 Ｃ:42.11％ Ｈ:6.48 ％ 測定値 Ｃ:42.37％ Ｈ:6.24 ％ サイクロイソマルトノナオース ；Ｃ54Ｈ90Ｏ45・5Ｈ2
Ｏとして 計算値 Ｃ:41.86％ Ｈ:6.51 ％ 測定値 Ｃ:41.53％ Ｈ:6.18 ％
【００１０】２．分子量は、日立製作社製の質量分析計
80Bにより分析したマススペクトル分析のデータから サイクロイソマルトヘプタオース；１１３４ サイクロイソマルトオクタオース；１２９６ サイクロイソマルトノナオース ；１４５８ であり、いずれも分子式から推定される値と一致した。
80Bにより分析したマススペクトル分析のデータから サイクロイソマルトヘプタオース；１１３４ サイクロイソマルトオクタオース；１２９６ サイクロイソマルトノナオース ；１４５８ であり、いずれも分子式から推定される値と一致した。
【００１１】３．融点は、やなぎもと社製の融点測定機
により測定した結果、明確に融解せず、下記の温度域で
変色したので、分解温度を示したが、夫々、 サイクロイソマルトヘプタオース；234〜238℃ サイクロイソマルトオクタオース；238〜241℃ サイクロイソマルトノナオース ；239〜242℃ であった。
により測定した結果、明確に融解せず、下記の温度域で
変色したので、分解温度を示したが、夫々、 サイクロイソマルトヘプタオース；234〜238℃ サイクロイソマルトオクタオース；238〜241℃ サイクロイソマルトノナオース ；239〜242℃ であった。
【００１２】４．紫外線吸収スペクトルは、日立製作社
製の分光光度計 775で測定した結果、いずれも特徴的な
吸収は認められなかった。従って、アミノ基、カルボキ
シル基等の官能基は持っていないことが示唆された。 ５．該物質の外赤外線吸収スペクトルを日本分光社製IR
スペクトルメーターモデルFT／IR-7300 で測定した結果
を図１に示した。図１において、Ａ、Ｂ、Ｃはそれぞれ
グルコースの環状７量体、８量体、および９量体を示
す。その結果、いずれもα−１、６結合に特有の917±
２cm-１と768±１cm-１に吸収ピークを示した。従っ
て、該オリゴ糖がα−１、６結合を有していることが示
唆された。
製の分光光度計 775で測定した結果、いずれも特徴的な
吸収は認められなかった。従って、アミノ基、カルボキ
シル基等の官能基は持っていないことが示唆された。 ５．該物質の外赤外線吸収スペクトルを日本分光社製IR
スペクトルメーターモデルFT／IR-7300 で測定した結果
を図１に示した。図１において、Ａ、Ｂ、Ｃはそれぞれ
グルコースの環状７量体、８量体、および９量体を示
す。その結果、いずれもα−１、６結合に特有の917±
２cm-１と768±１cm-１に吸収ピークを示した。従っ
て、該オリゴ糖がα−１、６結合を有していることが示
唆された。
【００１３】６．溶剤に対する溶解性は、いずれのオリ
ゴ糖も室温で最低２０ｍｇ／ｍｌ以上の濃度で水に溶け
た。 ７．呈色反応は、いずれのオリゴ糖もソモギーネルソン
法で発色しなかったことから、還元末端が存在していな
いことを強く示唆している。 ８．該物質は、いずれも中性の白色物質である。 ９．該物質の日本電子社製のNMR スペクトルメーターモ
デルNM-FX200による13Ｃ−ＮＭＲ分析の結果からいずれ
も、６本のシグナルが認められただけであって、環状構
造を支持していた。また、イソマルトヘプタオースの解
析から、該物質の結合様式がα−１、６結合であること
が強く示唆された。
ゴ糖も室温で最低２０ｍｇ／ｍｌ以上の濃度で水に溶け
た。 ７．呈色反応は、いずれのオリゴ糖もソモギーネルソン
法で発色しなかったことから、還元末端が存在していな
いことを強く示唆している。 ８．該物質は、いずれも中性の白色物質である。 ９．該物質の日本電子社製のNMR スペクトルメーターモ
デルNM-FX200による13Ｃ−ＮＭＲ分析の結果からいずれ
も、６本のシグナルが認められただけであって、環状構
造を支持していた。また、イソマルトヘプタオースの解
析から、該物質の結合様式がα−１、６結合であること
が強く示唆された。
【００１４】次に該物質の酵素的解析結果を示す。 10．図２に示したように、１％濃度の該物質に対してエ
キソ型デキストラナーゼであるグルコデキストラナーゼ
を40℃で24時間作用させたが、全く水解されなかった。
尚、同条件下でイソマルトヘキサオース及びイソマルト
ヘプタオースは、完全に水解された。従って、直鎖イソ
マルトオリゴ糖ではないことを示唆している。 11．１％濃度の該物質に対してエンド型デキストラナー
ゼを作用させたところグルコース及びイソマルトースに
まで分解された。従って、これらのオリゴ糖は、グルコ
ースを唯一の構成糖としており、かつα−１、６結合の
みからなることを示唆している。
キソ型デキストラナーゼであるグルコデキストラナーゼ
を40℃で24時間作用させたが、全く水解されなかった。
尚、同条件下でイソマルトヘキサオース及びイソマルト
ヘプタオースは、完全に水解された。従って、直鎖イソ
マルトオリゴ糖ではないことを示唆している。 11．１％濃度の該物質に対してエンド型デキストラナー
ゼを作用させたところグルコース及びイソマルトースに
まで分解された。従って、これらのオリゴ糖は、グルコ
ースを唯一の構成糖としており、かつα−１、６結合の
みからなることを示唆している。
【００１５】以上1.〜11.までの結果より、該物質は、
いずれもグルコース７〜９分子がα−１、６結合した、
環状オリゴ糖であると判断された。なお、これら環状イ
ソマルトオリゴ糖の構造式は、次の通りである。
いずれもグルコース７〜９分子がα−１、６結合した、
環状オリゴ糖であると判断された。なお、これら環状イ
ソマルトオリゴ糖の構造式は、次の通りである。
【化１】
【００１６】以上詳述した如く、該環状オリゴ糖は、従
来公知の環状オリゴ糖とはその性質を異にし、グルコー
スのα−１、６結合からなる、環状オリゴ糖である点で
全く新しい環状オリゴ糖である。本物質は環状構造であ
るため、包接作用を有しており、サイクロデキストリン
とは、異なったサイズの物質の安定化、可溶化等に有用
である。そして、具体的には医薬品、食品等の包接剤に
用いられる。
来公知の環状オリゴ糖とはその性質を異にし、グルコー
スのα−１、６結合からなる、環状オリゴ糖である点で
全く新しい環状オリゴ糖である。本物質は環状構造であ
るため、包接作用を有しており、サイクロデキストリン
とは、異なったサイズの物質の安定化、可溶化等に有用
である。そして、具体的には医薬品、食品等の包接剤に
用いられる。
【００１７】次に、本物質の製造法について説明する。
本発明において使用される微生物としては、バチルス属
に属し、デキストランから環状オリゴ糖を生成するもの
であれば、如何なる菌株でもよく、例えば、Ｔ−３０４
０菌株がある。このＴ−３０４０株は、土壌中から、取
得した野性株である。以下に本菌株の菌学的性質を示
す。菌学的性質 (1)形態 a.形態 桿菌 b.運動性 認められる c.胞子 有 胞子嚢 膨出 形 楕円形 位置 中立〜亜端立 d.グラム染色性 ＋ (2) 生育状態 a.肉汁寒天平板培養 平滑、色素生産せず b.肉汁寒天斜面培養 平滑、周辺なめらか、色素生産せず (3)生理学的性質 a.硝酸塩の還元 − b.脱窒反応 − c.ＭＲテスト − d.ＶＰテスト − e.インドールの生成 − f.硫化水素の生成 − g.デンプンの加水分解 ＋ h.クエン酸の利用 − i.無機窒素源の利用 硝酸塩 − アンモニア塩 ＋ j.ウレアーゼ − k.オキシダーゼ − l.カタラーゼ ＋ m.生育の範囲 温度 10-37℃ n.酸素に対する態度 好気的 o.Ｏ−Ｆテスト −（酸の産生を認め
ず） p.糖類に対する態度 酸の生成 ガスの生成 (1)L-アラビノース − − (2)D-キシロース − − (3)D-グルコース ＋ − (4)D-マンノース − − (5)D-フラクトース − − (6)D-ガラクトース ＋ − (7)麦芽糖 ＋ − (8)ショ糖 ＋ − (9)乳糖 ＋ − (10)トレハロース ＋ − (11)D-ソルビット − − (12)D-マンニット − − (13)イノシット − − (14)グリセリン − − (15)デンプン ＋ −
本発明において使用される微生物としては、バチルス属
に属し、デキストランから環状オリゴ糖を生成するもの
であれば、如何なる菌株でもよく、例えば、Ｔ−３０４
０菌株がある。このＴ−３０４０株は、土壌中から、取
得した野性株である。以下に本菌株の菌学的性質を示
す。菌学的性質 (1)形態 a.形態 桿菌 b.運動性 認められる c.胞子 有 胞子嚢 膨出 形 楕円形 位置 中立〜亜端立 d.グラム染色性 ＋ (2) 生育状態 a.肉汁寒天平板培養 平滑、色素生産せず b.肉汁寒天斜面培養 平滑、周辺なめらか、色素生産せず (3)生理学的性質 a.硝酸塩の還元 − b.脱窒反応 − c.ＭＲテスト − d.ＶＰテスト − e.インドールの生成 − f.硫化水素の生成 − g.デンプンの加水分解 ＋ h.クエン酸の利用 − i.無機窒素源の利用 硝酸塩 − アンモニア塩 ＋ j.ウレアーゼ − k.オキシダーゼ − l.カタラーゼ ＋ m.生育の範囲 温度 10-37℃ n.酸素に対する態度 好気的 o.Ｏ−Ｆテスト −（酸の産生を認め
ず） p.糖類に対する態度 酸の生成 ガスの生成 (1)L-アラビノース − − (2)D-キシロース − − (3)D-グルコース ＋ − (4)D-マンノース − − (5)D-フラクトース − − (6)D-ガラクトース ＋ − (7)麦芽糖 ＋ − (8)ショ糖 ＋ − (9)乳糖 ＋ − (10)トレハロース ＋ − (11)D-ソルビット − − (12)D-マンニット − − (13)イノシット − − (14)グリセリン − − (15)デンプン ＋ −
【００１８】このＴ−３０４０菌株は、胞子を形成する
グラム陽性桿菌であることからバチルス属に属する細菌
であると同定し、バチルス属・エスピー. Ｔ−３０４０
株とした。なお、バチルス・エスピー.（Bacillus sp.)
Ｔ−３０４０株は、工業技術院微生物工業技術研究所
に微工研条寄第4132号（ＦＥＲＭ ＢＰ−4132）として
寄託されている。
グラム陽性桿菌であることからバチルス属に属する細菌
であると同定し、バチルス属・エスピー. Ｔ−３０４０
株とした。なお、バチルス・エスピー.（Bacillus sp.)
Ｔ−３０４０株は、工業技術院微生物工業技術研究所
に微工研条寄第4132号（ＦＥＲＭ ＢＰ−4132）として
寄託されている。
【００１９】本発明方法における菌株の培養は、原則的
には一般微生物の好気的培養で採用される方法と同じで
あるが、通常は、液体培地による振盪培養法または、通
気攪拌培養法等が用いられる。培地としては、通常の微
生物の培養に用いられる窒素源、炭素源、ビタミン、ミ
ネラル等を含みさらに本物質の原料となるデキストラン
等を含んだものが用いられる。
には一般微生物の好気的培養で採用される方法と同じで
あるが、通常は、液体培地による振盪培養法または、通
気攪拌培養法等が用いられる。培地としては、通常の微
生物の培養に用いられる窒素源、炭素源、ビタミン、ミ
ネラル等を含みさらに本物質の原料となるデキストラン
等を含んだものが用いられる。
【００２０】ｐＨは、本菌が成育するｐＨ域ならばいず
れでもよいが、通常は、６〜８の範囲が好ましい。培養
条件は、例えば、通常20〜40℃、好ましくは30℃で、16
時間〜６日間、好ましくは３日間振盪培養または通気攪
拌培養を行なう。
れでもよいが、通常は、６〜８の範囲が好ましい。培養
条件は、例えば、通常20〜40℃、好ましくは30℃で、16
時間〜６日間、好ましくは３日間振盪培養または通気攪
拌培養を行なう。
【００２１】以上の如くして得た培養物を用いて例え
ば、以下に示すオリゴ糖採取工程により本環状オリゴ糖
の精製品を得る。上記培養物からオリゴ糖を得るには遠
心分離、膜濃縮等により除菌したのち、通常のオリゴ糖
分離方法であれば如何なる方法でもよいが、本製造法の
場合、除菌液を公知のサイクロデキストリンの精製法に
従って処理することにより、高純度の環状オリゴ糖画分
を得ることが出来る。
ば、以下に示すオリゴ糖採取工程により本環状オリゴ糖
の精製品を得る。上記培養物からオリゴ糖を得るには遠
心分離、膜濃縮等により除菌したのち、通常のオリゴ糖
分離方法であれば如何なる方法でもよいが、本製造法の
場合、除菌液を公知のサイクロデキストリンの精製法に
従って処理することにより、高純度の環状オリゴ糖画分
を得ることが出来る。
【００２２】更に必要に応じて分配吸着モードのカラム
を用いたＨＰＬＣ等の精製手段を用いて各々の高純度品
を得ることが出来る。除菌液からの、環状イソマルトオ
リゴ糖の精製法としては例えば、冷却処理、有機溶媒添
加処理、活性炭処理、あるいは特異的に環状オリゴ糖を
吸着するカラムクロマトグラフィー、活性炭カラムクロ
マトグラフィー等の公知方法で分離除去することができ
る。
を用いたＨＰＬＣ等の精製手段を用いて各々の高純度品
を得ることが出来る。除菌液からの、環状イソマルトオ
リゴ糖の精製法としては例えば、冷却処理、有機溶媒添
加処理、活性炭処理、あるいは特異的に環状オリゴ糖を
吸着するカラムクロマトグラフィー、活性炭カラムクロ
マトグラフィー等の公知方法で分離除去することができ
る。
【００２３】以下に、本発明を実施例により具体的に説
明する。但し、本発明はこれら実施例によりその技術的
範囲が限定されるものではない。
明する。但し、本発明はこれら実施例によりその技術的
範囲が限定されるものではない。
【００２４】
【実施例】１％デキストランＴ２０００、１％ペプト
ン、0.5％ ＮａＣｌ及び0.1％イーストエキスからなる
液体培地（水道水使用、ｐＨ 7.0）３mlを15ml容試験管
に入れ、120℃で20分間、殺菌処理を行なった。これ
に、バチルス・エスピー. Ｔ−３０４０菌株（ＦＥＲＭ
ＢＰ−4132) 保存スラントより１白金耳接種し、30℃
で１日間振盪培養した。本培養液３mlを上記と同様の培
地組成と殺滅菌条件により調製した２L の培地を含有す
る３L 容ミニジャ−に接種し、30℃、0.25vvm 、350r.
p. m. の条件で２日間通気攪拌培養を行ない、培養終了
後、培養液から8000r. p. m. で20分間の遠心分離処理
により菌体を分離し、除菌液を得た。
ン、0.5％ ＮａＣｌ及び0.1％イーストエキスからなる
液体培地（水道水使用、ｐＨ 7.0）３mlを15ml容試験管
に入れ、120℃で20分間、殺菌処理を行なった。これ
に、バチルス・エスピー. Ｔ−３０４０菌株（ＦＥＲＭ
ＢＰ−4132) 保存スラントより１白金耳接種し、30℃
で１日間振盪培養した。本培養液３mlを上記と同様の培
地組成と殺滅菌条件により調製した２L の培地を含有す
る３L 容ミニジャ−に接種し、30℃、0.25vvm 、350r.
p. m. の条件で２日間通気攪拌培養を行ない、培養終了
後、培養液から8000r. p. m. で20分間の遠心分離処理
により菌体を分離し、除菌液を得た。
【００２５】除菌液を活性炭カラムに通液して環状イソ
マルトオリゴ糖を吸着させ、エタノールにより５％ず
つ、段階的に溶出した。20％エタノール溶出画分に目的
の環状オリゴ糖が最も多く含まれていた。本溶出液をロ
ータリーエバポレーターで濃縮後、ＴＳＫｇｅｌ Ａｍ
ｉｄｅ80カラム（東ソ−社製、分配・吸着クロマトグラ
フィー用充填カラム）を用いたＨＰＬＣにより分析した
結果を図３−Ａに示した。次に該粗環状イソマルトオリ
ゴ糖溶液をロータリーエバポレーターで濃縮後、ＹＭＣ
ＰＡ４３カラム（山村化学社製、分配・吸着クロマト
グラフィー用充填カラム、分取用）を用いたＨＰＬＣに
供し各々の環状イソマルトオリゴ糖を分離精製した。
マルトオリゴ糖を吸着させ、エタノールにより５％ず
つ、段階的に溶出した。20％エタノール溶出画分に目的
の環状オリゴ糖が最も多く含まれていた。本溶出液をロ
ータリーエバポレーターで濃縮後、ＴＳＫｇｅｌ Ａｍ
ｉｄｅ80カラム（東ソ−社製、分配・吸着クロマトグラ
フィー用充填カラム）を用いたＨＰＬＣにより分析した
結果を図３−Ａに示した。次に該粗環状イソマルトオリ
ゴ糖溶液をロータリーエバポレーターで濃縮後、ＹＭＣ
ＰＡ４３カラム（山村化学社製、分配・吸着クロマト
グラフィー用充填カラム、分取用）を用いたＨＰＬＣに
供し各々の環状イソマルトオリゴ糖を分離精製した。
【００２６】各々の画分をロータリーエバポレーターで
濃縮後、不純物として混入している直鎖イソマルトオリ
ゴ糖を除去するためにエキソ型デキストラナーゼである
グルコデキストラナーゼを添加して40℃で１晩反応させ
た。反応液を煮沸することにより反応を停止後、遠心分
離により変性蛋白質を除去した後、再度、ＹＭＣ ＰＡ
43カラムを用いたＨＰＬＣにより各々の環状イソマルト
オリゴ糖を分離精製した。各々の画分をロータリーエバ
ポレーターで濃縮後、濃縮液中のオリゴ糖の純度をＴＳ
Ｋｇｅｌ Ａｍｉｄｅ80カラム（東ソ−社製、分配・吸
着クロマトグラフィー用充填カラム）を用いたＨＰＬＣ
により分析した（図３−Ｂ〜Ｄ）。各々のオリゴ糖の純
度は、98％以上であった。更に、これらのオリゴ糖画分
を凍結乾燥し、サイクロイソマルトヘプタオースを約60
mg、サイクロイソマルトオクタオースを約200mg 及びサ
イクロイソマルトノナオースを約100mg 得た。
濃縮後、不純物として混入している直鎖イソマルトオリ
ゴ糖を除去するためにエキソ型デキストラナーゼである
グルコデキストラナーゼを添加して40℃で１晩反応させ
た。反応液を煮沸することにより反応を停止後、遠心分
離により変性蛋白質を除去した後、再度、ＹＭＣ ＰＡ
43カラムを用いたＨＰＬＣにより各々の環状イソマルト
オリゴ糖を分離精製した。各々の画分をロータリーエバ
ポレーターで濃縮後、濃縮液中のオリゴ糖の純度をＴＳ
Ｋｇｅｌ Ａｍｉｄｅ80カラム（東ソ−社製、分配・吸
着クロマトグラフィー用充填カラム）を用いたＨＰＬＣ
により分析した（図３−Ｂ〜Ｄ）。各々のオリゴ糖の純
度は、98％以上であった。更に、これらのオリゴ糖画分
を凍結乾燥し、サイクロイソマルトヘプタオースを約60
mg、サイクロイソマルトオクタオースを約200mg 及びサ
イクロイソマルトノナオースを約100mg 得た。
【００２７】
【発明の効果】本発明により医薬品、食品等の包接剤と
して有用な新規なグルコースのα−１、６結合からなる
環状イソマルトオリゴ糖、及び当該環状イソマルトオリ
ゴ糖をバチルス属の微生物により高純度かつ効率良く製
造する方法を提供するものであって、産業上極めて有用
である。
して有用な新規なグルコースのα−１、６結合からなる
環状イソマルトオリゴ糖、及び当該環状イソマルトオリ
ゴ糖をバチルス属の微生物により高純度かつ効率良く製
造する方法を提供するものであって、産業上極めて有用
である。
【図１】本発明化合物三種の赤外線吸収スペクトルを示
す図である。
す図である。
【図２】本発明化合物三種の酵素的解析結果を示す図で
ある。
ある。
【図３】本発明化合物三種の溶出液及び生成した該化合
物３種をＨＰＬＣにより分析した結果 を示す図であ
る。
物３種をＨＰＬＣにより分析した結果 を示す図であ
る。
Claims (2)
- 【請求項１】 グルコース７分子がα−１、６結合によ
り環状構造を形成してなる新規なサイクロイソマルトヘ
プタオース、グルコース８分子がα−１、６結合により
環状構造を形成してなる新規なサイクロイソマルトオク
タオース及びグルコース９分子がα−１、６結合により
環状構造を形成してなる新規なサイクロイソマルトノナ
オースからなる群から選択された新規な環状イソマルト
オリゴ糖。 - 【請求項２】 バチルス属に属し、請求項１記載の環状
イソマルトオリゴ糖生産能を有する微生物を、α−１、
６グルカンを含有する培地中で培養し、培養物より請求
項１記載の環状イソマルトオリゴ糖を採取することを特
徴とする新規な環状イソマルトオリゴ糖の製造法。
Priority Applications (5)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP34944492A JP3075873B2 (ja) | 1992-12-28 | 1992-12-28 | 新規な環状イソマルトオリゴ糖及びその製造法 |
| DE69308531T DE69308531T2 (de) | 1992-12-28 | 1993-12-24 | Cycloisomaltooligosaccharide; Enzym und Verfahren zu ihrer Herstellung, und Verfahren zur Herstellung von dem Enzym |
| EP93310579A EP0608636B1 (en) | 1992-12-28 | 1993-12-24 | Cycloisomaltooligosaccharides, an enzyme and process for producing said oligosaccharides, and a process for producing said enzyme |
| US08/174,596 US5364936A (en) | 1992-12-28 | 1993-12-28 | Cycloisomaltooligosaccharides |
| US08/284,318 US5453369A (en) | 1992-12-28 | 1994-08-02 | Enzyme for producing novel cyclooisomaltooligosaccharides |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP34944492A JP3075873B2 (ja) | 1992-12-28 | 1992-12-28 | 新規な環状イソマルトオリゴ糖及びその製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH06197783A true JPH06197783A (ja) | 1994-07-19 |
| JP3075873B2 JP3075873B2 (ja) | 2000-08-14 |
Family
ID=18403796
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP34944492A Expired - Lifetime JP3075873B2 (ja) | 1992-12-28 | 1992-12-28 | 新規な環状イソマルトオリゴ糖及びその製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3075873B2 (ja) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2006280254A (ja) * | 2005-03-31 | 2006-10-19 | Showa Sangyo Co Ltd | 分岐構造を有する３〜４糖類の新規用途、これらの糖類を有効成分とする抑制剤、並びに飲食物 |
| JP2012140521A (ja) * | 2010-12-28 | 2012-07-26 | Osaka Prefecture Univ | α−１，３−分枝シクロデキストランの使用方法 |
| WO2020122050A1 (ja) | 2018-12-13 | 2020-06-18 | 株式会社林原 | シクロイソマルトテトラオース、シクロイソマルトテトラオース生成酵素とそれらの製造方法並びに用途 |
-
1992
- 1992-12-28 JP JP34944492A patent/JP3075873B2/ja not_active Expired - Lifetime
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2006280254A (ja) * | 2005-03-31 | 2006-10-19 | Showa Sangyo Co Ltd | 分岐構造を有する３〜４糖類の新規用途、これらの糖類を有効成分とする抑制剤、並びに飲食物 |
| JP2012140521A (ja) * | 2010-12-28 | 2012-07-26 | Osaka Prefecture Univ | α−１，３−分枝シクロデキストランの使用方法 |
| WO2020122050A1 (ja) | 2018-12-13 | 2020-06-18 | 株式会社林原 | シクロイソマルトテトラオース、シクロイソマルトテトラオース生成酵素とそれらの製造方法並びに用途 |
| KR20210104074A (ko) | 2018-12-13 | 2021-08-24 | 가부시기가이샤하야시바라 | 시클로이소말토테트라오스, 시클로이소말토테트라오스 생성효소, 및 그 제조방법과 용도 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP3075873B2 (ja) | 2000-08-14 |
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