JPH0631314B2 - 新規なゴナドリベリン誘導体 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明は、下記一般式、 Clp-His-Trp-Ser-Tyr-X₁-X₂-X₃-Pro-X₄ （Ｉ） （但し、Ｘ_１は、２−アミノ安息香酸基又は３−アミノ
安息香酸基；Ｘ_２は、ロイシル基、トリプトフィル基又
はフェニルアラニル基；Ｘ_３は、アルギニル基、ロイシ
ル基、グルタミニル基；Ｘ_４は、グリシルアミド基又は
エチルアミド基） からなるゴナドリベリンノナペプチドエチルアミド又は
デカペプチドアミド誘導体、およびその酸付加塩に関す
る。

（従来の技術） 本明細書中で用いられる略号は、次のごとき意味を有す
るものであるが、これは、ペプチド化学（例えばジャー
ナル・オブ・バイオロジ−・アンド・ケミストリー
（Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．）241，５２７（１９６
６）参照）における命名法に準じている。

Ｘとして （−Ｘ−として） Ｇｌｐ：ピログルタミン酸 （ピログルタミル） Ｈｉｓ：ヒスチジン （ヒスチジル） Ｔｒｐ：トリプトファン （トリプトフィル） Ｓｅｒ：セリン （セリル） Ｔｙｒ：チロシン （チロシル） Ｇｌｙ：グリシン （グリシル） Ｐｈｅ：フェニルアラニン （フェニルアラニル） Ｌｅｕ：ロイシン （ロイシル） Ｐｒｏ：プロリン （プロリル） Ｇｌｕ：グルタミン酸 （グルタミル） Ｇｌｎ：グルタミン （グルタミニル） Ａｒｇ：アルギニン （アルギニル） Ｍａｂ：３−アミノ安息香酸 Ａａ：アントラニル酸 Ｂｏｃ：第３ブチルオキシカルボニル Ｂｚｌ：ベンジル ＤＣＣ：ジシクロヘキシルカルボジイミド ＤＣＵ：ジシクロヘキシル尿素 ＤＩＣ：ジイソプロピルカルボジイミド ＤＭＦ：ジメチルホルムアミド ＤＮＰ：ジニトロフェニル ＥＡ：エチルアミド Ｅｔ：エチル ＨＰＬＣ：高性能液体クロマトグラフィ Ｍｅ：メチル ＯＮＰ：４−ニトロフェニル ＯＰＣＰ：ペンタクロロフェニル ＯＰＦＰ：ペンタフルオロフェニル ＴＥＡ：トリエチルアミン ＴＦＡ：トリフルオロ酢酸 ＴＨＦ：テトラヒドロフラン ＴＬＣ：薄層クロマトグラフィ Ｔｏｓ：トシル ＵＶ；紫外線 Ｚ：ベンジルオキシカルボニル ゴナドリベリン（文献上、ゴナドトロピン解放ホルモ
ン、ＧｎＲＨ、黄体化および卵胞刺激ホルモン放出ホル
モン（ＬＨ／ＦＳＨ−ＲＨ）とも呼ばれ、化学一般式、
Ｇｌｐ−Ｈｉｓ−Ｔｒｐ−Ｓｅｎ−Ｔｙｒ−Ｇｌｙ−Ｌ
ｅｕ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−ＮＨ_２からなるも
の）、およびその公知の誘導体は、黄体化および卵胞刺
激ホルモン（ＬＨおよびＦＳＨ）を解放又は放出する能
力を有することが一般的特徴となっている。

１９８０年代の初めにおいて、魚類および鳥類中のゴナ
ドリベリンの構造は、哺乳動物中のゴナドリベリンのも
のと異なっていることが知られた〔ジェイ・エイ・キン
ク（Ｊ．Ａ．Ｋｉｎｇ）およびアール・ピ−・ミラー
（Ｒ．Ｐ．Ｍｉｌｌａｒ）：ジャーナル・オブ・バイオ
ロジー・アンド・ケミストリー（Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅ
ｍ．）２５７，１０７２２（１９８２）；サウスアフリ
カン・ジャーナル・オブ・サイエンス（Ｓｏｕｔｈ−Ａ
ｆｒｉｃａｎ Ｊ．ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅ）７８．１２
４（１９８２）；エヌ・シャーウッド（Ｎ．Ｓｈｅｒｗ
ｏｏｄ）等：プロシーデングス・イン・ナショナルアカ
デミー・オブ・サイエンス（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃ
ａｄ．Ｓｃｉ．８０，２７９４（１９８３）参照〕。

これらの差異は、鳥類の場合は８位のアミノ酸に、また
魚類の場合は、７又は８位のアミノ酸に影響がある。

さらに、６位にグリシンが存在する代りに、疎水性脂肪
族又は芳香族側鎖を有するＤ−アミノ酸を含むゴナドリ
ベリン誘導体は、ゴナドリベリンよりも優れた効果を有
することも文献上知られている〔ジェイ・サンドウ
（Ｊ．Ｓａｎｄｏｗ）等：「排卵の制御」、エド・パタ
ーワース（Ｅｄ．Ｂｕｔｔｅｒｗｏｒｔｈ）、ロンド
ン、１９７８，４９−７０頁；エイ・ヴイ・シャリー
（Ａ．Ｖ．Ｓｈａｌｌｙ）等：アニュアル・オブ・リビ
ュー・オブ・バイオケミストリー（Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂ
ｉｏｃｈｅｍ．），４７．８９（１９７８）〕。

さらに、ゴナドリベリンの生物学的活性が、、１０位の
グリシンアミド基を脂肪族鎖を含むアミド基で置換する
ことにより高められることを知られている〔エム・ジュ
ジノ（Ｍ．Ｊｕｊｉｎｏ）等：ジャーナル・オブ・メデ
シナルケミストリー（Ｊ．Ｍｅｄ． Ｃｈｅｍ．１６，
１１４４（１９７３）〕。

エフ・エイ・モナニー（Ｆ．Ａ．Ｍｏｍａｎｙ）は、そ
のデカペプチドの可能なあらゆるコンホメーションのエ
ネルギー量を調査し、６位のグリシン又はＤ−アラニン
でＵ字形（β−回転）に折曲した分子の空間配列の場合
に、エネルギー量が最小となることを見出した〔ジャー
ナル・オブ・アメリカンケミストリー・オブ・ソサイア
ティ（Ｊ．Ａｍｅｒ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．）９８．２９
９０（１９７６）；およびｉｂｉｄｅｍ ９８，２９９
６（１９７６）〕。

アール・エム・フレイジンジャー （Ｒ．Ｍ．Ｆｒｅｉｄｉｇｅｒ）等は、下記一般式（Ｉ
Ｖ）のＧｎＲＨ誘導体を製造した。

ここで、その空間構造は６位のグリシンを、γ−ラクタ
ムで置換することにより固定される。この化合物の生物
学的活性は、天然のゴナドリベリンのものより増大して
いる。

（発明が解決しようとする問題点） この発明は、公知のものより生物学的活性がより大き
く、哺乳類のみならず、魚類、両生類の繁殖に有効な新
規なゴナドリベリン誘導体を提供することである。

この発明の他の目的は、６位のグリシンの代りに、生物
学的活性を促進する芳香環を含む新規な形のアミノ酸を
組み込む方法、さらに最も好ましい空間配列に固定する
と同時に、ラセミ化のおそれを回避する方法を提供する
ことである。

（問題点を解決するための手段） 本発明は、ゴナドリベリンの６位のグリシン基の代り
に、下記一般式（Ｖ）の２−アミノ安息香酸基（アント
ラニル酸）、 又は下記一般式（VI）の３−アミノ安息香酸基、 を組み込むことにより、上記目的を達成し得ることを見
出し、完成するに至った。

さらに、本発明は、１０位のグリシンアミド基を炭素原
子数１〜４のアルキルアミド基で置換することにより、
ゴナドリベリン誘導体の生物学的効果が増大することを
見出したことに基づくものである。

さらに、本発明は、ゴナドリベリンの８位または７およ
び８位のアミノ酸を、ある種のアミノ酸で置換すること
により、哺乳動物のみならず、他の種の動物の繁殖に有
効なゴナドリベリンを生成し得ることを見出したことに
基づくものである。

本発明は、上記事実に基づいて、上記一般式（Ｉ）のノ
ナペプチドエチルアミド又はデカペプチドアミド化合
物、およびその塩を製造する方法を提供するものであっ
て、その方法は、以下の工程からなることを特徴とす
る。すなわち、 （ａ）適宜保護されたアミノ酸を、段階的又は断片的縮
合により縮合し、適宜保護基を除去する工程、又は （ｂ）固相ペプチド合成法により、上記の適宜保護され
たアミノ酸を固相担体に対し、適当な順序で段階的に縮
合し、さらに最終生成物を酸性、又はアルカリ性分裂に
より上記固相担体から分離し、上記分裂の前後におい
て、同時に上記保護基を適宜除去する工程 からなる。

上記方法において、好ましい上記工程（ａ）は、下記一
般式（ＩＩ）、 Glp-His-Trp-Ser-Tyr-N₃ （II） のペンタペプチドアジドを、下記一般式（ＩＩＩ）、 X₁-X₂-X₃-Pro-X₄ （III） （但し、Ｘ_１、Ｘ_２、Ｘ_３、Ｘ_４は前記同様） のテトラペプチド又はペンタペプチドと縮合させること
からなるものである。

上記工程（ｂ）において、固相担体として、ベンズヒド
リルアミン樹脂又はクロロメチル化ポリスチレン樹脂を
用いることが好ましい。

また、保護基を有する最終生成物の分離は、フッ化水素
により、又はエチルアンモニア添加分解（ｅｔｈｙｌａ
ｍｍｏｎｏｌｙｓｉｓ）によって行なうことが好まし
い。

このようにして得られたノナ−又はデカペプチドアミド
は、所望により、、薬剤として使用可能な酸と反応させ
て酸付加塩に変形させること、あるいは所望により、酸
付加塩を塩基と反応させて遊離塩基を解放させることも
できる。

また、本発明は、上記一般式（Ｉ）の化合物又はその酸
付加塩を有効成分として含む治療用又は生物学的生殖用
の薬剤組成物を提供するものである。

さらに、本発明は、上記薬剤組成物の製法として、上記
一般式（Ｉ）の化合物又はその酸付加塩を一般に用いら
れている賦形剤、又は担体と混合する方法を提供するも
のである。

牛の場合、一般式（Ｉ）のゴナドリベリン誘導体は筋肉
内、皮下、静脈投与として５ないし２００μｇの投与量
を用い、魚類の場合は、筋肉内又は皮下投与により、、
０．１〜１００μｇの投与量を用いることが好ましい。

本発明における一般式（Ｉ）の新規なゴナドリベリン誘
導体、およびその製法の重要な利点は、以下の通りであ
る。

（ａ）牛および魚類に対する生殖実験によれば、、公知
のゴナドリベリン誘導体よりも、作用効果がよりすぐれ
ている。

（ｂ）６位に組み込まれた新しい置換基は、不整中心を
含まないからラセミ化が生ずるおそれがなく、最終製品
の製造が容易かつ安価となる。

（ｃ）２−および３−アミノ安息香酸基の製造コスト
は、公知のＧｎＲＨ誘導体で同様の役割をするＤ−アミ
ノ酸のものより安価となる。

（ｄ）上記工程（ａ）で出発物質として用いられる一般
式（ＩＩ）のペンタペプチド成分は、各最終生成物の共
通する中間体である。

以下、本発明の実施例について説明するが、、薄層クロ
マトグラフィ（ＴＬＣ）のＲ_ｆ値は、記号“Ｒ_ｆ”の上
方の数字で表わした下記溶媒系を用い、キーゼルゲルシ
ート（ＤＣアルフォリエン（Ａｌｕｆｏｌｉｅｎ）、メ
ルク（Ｍｅｒｃｋ）により判定したものである。

１．酢酸エチル／ピリジン／酢酸／水＝３０：２０：
６：１１ ２．酢酸エチル／ピリジン／酢酸／水＝６０：２０：
６：１１ ３．酢酸エチル／ピリジン／酢酸／水＝１２０：２０：
６：１１ ４．酢酸エチル／ピリジン／酢酸／水＝２４０：２０：
６：１１ ５．ｎ−ブタノール／酢酸／水／酢酸エチル＝１：１：
１：１ ６．ｎ−ブタノール／酢酸／水＝４：１：１ ７．イソプロパノール／１Ｍ酢酸＝２：１ ８．酢酸エチル／ピリジン／酢酸／水＝５：５：１：３ ９．アセトン／トルエン＝１：１ １０．クロロホルム／酢酸＝２４：２ １１．ブタノン／ピリジン／水＝６５：１５：２０ １２．クロロホルム／メタノール／酢酸＝８５：１０：
５ １３．ｎ−ブタノール／酢酸／アンモニア（濃水酸化ア
ンモニウム１容量部と水４容量部とからなるもの）＝
６：１：１：２ 実施例１ （Ａａ^６、Ｇｌｎ^８、ｄｅｓＧｌｙ^１０）−ゴナドリベ
リンエチルアミドの製造例 工程（ａ）：Ｂｏｃ−Ｈｉｓ（ＤＮＰ）−Ｔｒｐ−ＯＭ
ｅ（分子量：６２２．６２）の製造。

Ｂｏｃ−Ｈｉｓ（ＤＮＰ）−ＯＨ ２１．１２ｇ（５０
ミリモル）をＤＭＦ１００ｍｌ中に溶かし、これを０℃
に冷却し、次にＤＣＣ１０．３２ｇ（５０ミリモル）お
よびＮ−ヒドロキシベンゾトリアゾール７．６６ｇ（５
０ミリモル）をこれに撹拌下で添加した。これを、０℃
で１０分間、撹拌したのち、析出したＤＣＵを濾別し
た。

ＤＭＦ ７０ｍｌ中に溶かしたＨ−Ｔｒｐ−ＯＭｅ．Ｈ
Ｃｌ １２．７４ｇ（５０ミリモル）の溶液荷を、０℃
に冷却したのち、これにＴＥＡ ６．９４ｍｌ（５０ミ
リモル）を加え、５分間撹拌してから、析出したトルエ
チルアミン塩酸塩を濾別した。

上記の得られた２つの溶液を一緒にし、０℃で一晩撹拌
し、析出慎したＤＣＵを濾別し、溶液を蒸発乾燥させ
た。

得られた油状残渣を酢酸エチル５００ｍｌ中に溶解し、
次に氷冷した１Ｍ硫酸水素ナトリウム溶液１００ｍｌを
用いて、これを３回、次に飽和炭酸水素ナトリウム溶液
１００ｍｌを用いて、これを５回、最後に塩化ナトリウ
ムの１０％溶液１００ｍｌを用いて、これを２回、の抽
出をおこなった。

得られた有機質相を、無水硫酸マグネシウムを用いて乾
燥し、濾過したのち蒸発乾燥させた。この油状残渣を、
石油エーテルを用いて完全に粉砕し、得られた粉体を濾
過、乾燥させた。

得られた結晶性生成物を、石油エーテルを用いて酢酸エ
チルから再結晶させ、目的製品を得た。収量は２７．７
０ｇ（８９％）、融点（以下、ｍ．ｐ．と略称する）は
１１９〜１２２℃であった。

〔α▲〕^２２ _Ｄ▼＝＋１４．１゜（Ｃ＝１、ＤＭＦ） Ｒ_ｆ ^４＝０．６２；Ｒ_ｆ ^５＝０．４１． 工程（ｂ）：Ｈ−Ｈｉｓ（ＤＮＰ）−Ｔｒｐ−ＯＭｅ．
２ＨＣｌ〔分子量：５２２．４９（遊離塩基；５９５．
４１（ジヒドロクロリド）〕の製造。

４Ｎ塩化水素メタノール溶液１００ｍｌを、メタノール
１００ｍｌに２４．９ｇ（４０ミリモル９のＢｏｃ−Ｈ
ｉｓ−（ＤＮＰ）−Ｔｒｐ−ＯＭｅジペプチドを溶かし
た溶液中に添加した。この混合物を室温下で３０分間放
置した。

その結果、ジペプチドエステル塩酸塩が析出した。この
析出物を濾別し、エーテルで洗い乾燥させた結果、目的
化合物が２１．９１ｇ（９２％収率）が得られた。ｍ．
ｐ．＝１９８〜２０２℃。

〔α▲〕^２２ _Ｄ▼＝０．４９^０（Ｃ＝１、ＤＭＦ） Ｒ_ｆ ^３＝０．４６；Ｒ_ｆ ^４＝０．１８． 工程（ｃ）：Ｇｌｐ−Ｈｉｓ−（ＤＮＰ）−Ｔｒｐ−Ｏ
Ｍｅ（分子量：６３３．６０）の製造。

Ｌ−ピログルタミン酸４．８５ｇ（３６．８ミリモ
ル）、ＤＣＣ７．５８ｇおよびＮ−ヒドロキシベンゾト
リアゾール５．６３ｇを、ＤＭＦ１００ｍｌに溶かした
混合物を、温度５〜１０℃で１０分間撹拌し、ついでＤ
ＣＵ析出物を濾別した。

他方、ＴＥＡ ９．７２ｍｌ（７０ミリモル）を、Ｈ−
Ｈｉｓ（ＤＮＰ）−Ｔｒｐ−ＯＭｅ．２ＨＣｌ ２０．
８４ｇ（３５ミリモル）（ＤＭＦ １００ｍｌに溶かし
たもの）の溶液中に添加した。次に５分間撹拌したの
ち、析出したトリエチルアミン塩酸塩を濾別した。

上記の２つの溶液を一緒にし、室温で一晩撹拌した。翌
日、アセトン９０ｍｌを加え、不溶性の析出物を濾別し
た。蒸発ののち得られた油状残渣を酢酸エチルを用い
て、完全に粉砕し、ついで乾燥させた。

この乾燥した結晶を２５ｍｌの水で３回洗ったのち、再
び乾燥させた。この得られた生成物を、加熱酢酸エチル
を用いて再結晶させて目的化合物を得た。収量は１８．
４２ｇ（８３．１％）％あり、ｍ．ｐ．＝１４８〜１５
１℃であった。

〔α▲〕^２２ _Ｄ▼＝＋５．２゜（Ｃ＝１、ＤＭＦ） Ｒ_ｆ ^３＝０．５３；Ｒ_ｆ ^７＝０．３８． 工程（ｄ）：Ｇｌｐ−Ｈｉｓ−Ｔｒｐ−ＯＭｅ（分子
量：４６６．５０）の製造。

ＤＭＦ １００ｍｌおよび水１００ｍｌ中に溶かしたＧ
ｌｐ−Ｈｉｓ（ＤＮＰ）−Ｔｒｐ−ＯＭｅ保護トリペプ
チド１５．８４ｇ（２５ミリモル）の溶液に、メルカプ
トエタノール４ｍｌを加え、ついで、ＴＥＡを添加して
ｐＨ＝８に調整した。この溶液を室温にて３０分間放置
したのち、減圧下に蒸発乾燥した。

得られた油状残渣を、エーテルで完全に粉砕し、ついで
濾過、乾燥させた。得られた生成物をメタノールの少量
に溶かし、エーテルを加えて結晶化した。

析出した結晶を濾過、乾燥させ、目的化合物１０．９２
ｇ（９３．６％の収率）を得た。

ｍ．ｐ．＝２２８〜２３２℃。

〔α▲〕_{２２ Ｄ}▼＝＋４．０４゜（Ｃ＝０．４２、ＤＭ
Ｆ） Ｒ_ｆ ^２＝０．３０． 工程（ｅ）：Ｇｌｐ−Ｈｉｓ−Ｔｒｐ−Ｎ_２Ｈ_３（分子
量：４６６．５１）の製造。

９８％ヒドラジン水和物２０ｍｌを、Ｇｌｐ−Ｈｉｓ−
Ｔｒｐ−ＯＭｅトリペプチド９．３３ｇ（２０ミリモ
ル）をメタノール２５０ｍｌに溶かした溶液中に添加し
た。この混合物を４０℃で３時間、撹拌したのち、室温
で一晩撹拌した。翌日、析出物を濾別し、冷エタノール
で洗い、ついで乾燥して目的化合物を７．５８ｇ（８
１．２％の収率；ｍ．ｐ．＝１６６〜１６９℃）を得
た。

〔α▲〕^２２ _Ｄ▼＝−２２．３゜（Ｃ＝０．５、ＭＦ） Ｒ_ｆ ^１＝０．５０；Ｒ_ｆ ^２＝０．１４． 工程（ｆ）：Ｇｌｐ−Ｈｉｓ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−Ｔｒ−
ＯＭｅ（分子量：７１６．８１）の製造。

ＤＭＦ ６０ｍｌに溶かしたＧｌｐ−Ｈｉｓ−Ｔｒｐ−
Ｎ_２Ｈ_３（上記工程（ｅ）で製造したもの）７．０ｇ
（１５ミリモル）を含む溶液を０℃に冷却し、これに、
６Ｎ塩酸溶液７．５ｍｌ（４５ミリモル）を撹拌下で加
えた。次に亜硝酸ナトリウム１．０３５ｇ（１５ミリモ
ル）の濃水溶液を上記混合物中に徐々に滴下し、ついで
０℃で１５分間撹拌した。さらにＤＭＦ １５ｍｌ中に
４．７８ｇ（１５ミリモル）のＨ−Ｓｅｒ−Ｔｙｒ−Ｏ
Ｍｅ．ＨＣｌを溶かした溶液を加え、ついでＴＥＡ６．
２５ｍｌ（４５ミリモル）を加えてｐＨを中性に調整し
た。この混合物を０〜４℃で一晩撹拌し、ついで減圧下
で蒸発乾燥した。得られた油状残渣をエーテルを用いて
完全に粉砕し、乾燥させて、目的化合物１２．１ｇ（１
００％の収率）を得た。このものはＴＬＣにおいて２つ
の小さい汚染スポットが見られたが、これは精製するこ
となしにヒドラジドに変換され、これをメタノールから
再結晶化した。この目的化合物はｍ．ｐ．＝１８８〜１
９０℃を示した。

〔α▲〕^２２ _Ｄ▼＝−３４８゜^０（Ｃ＝１、ＤＭＦ） Ｒ_ｆ ^１＝０．５８；Ｒ_ｆ ^２＝０．２６ 工程（ｇ）：Ｇｌｐ−Ｈｉｓ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−Ｔｙｒ
−Ｎ_２Ｈ_３（分子量：７１６．８）の製造。

２００ｍｌのメタノールに粉状粗Ｇｌｐ−Ｈｉｓ−Ｔｒ
ｐ−Ｓｅｒ−Ｔｙｒ−ＯＭｅペンタペプチドエステル１
２ｇを溶かした溶液に、９８％ヒドラジン水和物１０ｍ
ｌを添加し、この混合物を３時間、４０℃にて撹拌し
た。ついで、室温で１晩撹拌したのち、析出物を濾過
し、さらに濃硫酸を用い乾燥器中で乾燥した。乾燥した
結晶を０．５Ｎ塩酸２５０ｍｌ中に溶かし、飽和炭酸ナ
トリウム溶液を加えてｐＨ＝８に調整し、これを２時
間、０℃にて放置した。生成した結晶質析出物を濾過
し、氷冷水で洗い、乾燥させて目的化合物６．１２ｇ
（２工程のものを一緒に計算して５６．９％の収率）を
得た。ｍ．ｐ．＝２０５〜２０６℃。

〔α▲〕^２２ _Ｄ▼＝２１．５１^０（Ｃ＝１、ＤＭＦ） Ｒ_ｆ ^１＝０．３９；Ｒ_ｆ ^２＝０．１４． このヒドラジン窒素の分析の結果、３．７９％および
３．７６％（計算値は３．９１％）を示した。

工程（ｈ）：Ｈ−Ｇｌｎ−Ｐｒｏ−ＮＨＥｔ．ＴＦＡ
（分子量：３６７．３（Ｂｏｃ：３７０．４９））の製
造。

プロリンエチルアミド１０ｇ（７０ミリモル）（Ｚ−Ｐ
ｒｏ−ＮＨＥｔ ７２ミリモルを水素化して得られたも
の）をＤＭＦ １００ｍｌに溶かし、ＴＥＡを添加して
ｐＨ＝８に調整した。次に、ＤＭＦ １００ｍｌにＢｏ
ｃ−Ｇｌｎ−ＯＮＰ ３２ｇ（８７ミリモル）を溶かし
た溶液を撹拌下でさらに添加した。

得られた油状残渣を３０％ ＴＦＡを５０ｍｌ含むジク
ロロメタン溶液中に溶かし、これを室温にて２０分間放
置した。のちに減圧下で上記溶液を蒸発させ、得られた
油状残渣をエーテルを用いて完全に粉砕した。その固体
生成物をエーテルで洗い、減圧下に乾燥して目的化合物
１５．９ｇ（６２％の収率）を得た。このものの融点は
その著しい吸湿性から測定することができなかった。

〔α▲〕^２０ _Ｄ▼＝−４４．４^０（Ｃ＝１、メタノー
ル） Ｒ_ｆ ^１＝０．３２；Ｒ_ｆ ^７＝０．３７；Ｒ_ｆ ^１３＝０．
２１． 工程（ｉ）：Ｚ−Ｌｅｕ−Ｇｌｎ−Ｐｒｏ−ＮＨＥｔ
（分子量：５１８．５７）の製造 Ｈ−Ｇｌｎ−Ｐｒｏ−ＮＨＥｔ７ｇ（２６ミリモル）を
ＤＭＦ ５０ｍｌ中に溶かし、これを０℃に冷却したの
ち、ＴＥＡを加えてｐＨ＝８に調整した。次にＤＭＦ
４０ｍｌにＺ−Ｌｅｕ−ペンタクロロフェニルエステル
１４ｇ（２７．３ミリモル）を溶かした溶液をさらに加
え４℃にて一晩撹拌した。翌日、この混合物を減圧下で
蒸発し、残渣を酢酸エチル７０ｍｌに溶かした。この有
機質溶液を１５ｍｌの０．０１Ｎ水酸化ナトリウムの冷
水溶液で３回抽出し、１５ｍｌの水で３回洗った。この
水酸化ナトリウムおよび水での抽出液を一緒にし、酢酸
エチル１０ｍｌで２回洗った。この酢酸エチル抽出溶液
を一緒し、無水硫酸ナトリウムを用いて乾燥し、減圧下
で蒸発させた。残渣をエーテルで完全に粉砕し、得られ
た固相物を濾過し、エーテルを洗い、減圧下で乾燥させ
て目的化合物を１０．４ｇ（収率７７％、ｍ．ｐ．＝８
４〜８８℃）を得た。

〔α▲〕^２０ _Ｄ▼＝−３２．８_ＤＯ（Ｃ＝１、メタノー
ル） Ｒ_ｆ ^２＝０．９０ 工程（ｊ）：Ｈ−Ｌｅｕ−Ｇｌｎ−Ｐｒｏ−ＮＨＥｔ．
ＨＢｒ（分子量：４６５．５）の製造。

氷酢酸に溶かした臭化水素の４Ｎ溶液７０ｍｌを、氷酢
酸５０ｍｌにＺ−Ｌｅｕ−Ｇｌｎ−Ｐｒｏ−ＮＨＥｔ
７．６ｇ（１４．６ミリモル）を含む溶液中に加え、こ
の混合物を室温にて９０分間放置した。次にこの混合物
を撹拌下で氷冷エーテル８００ｍｌ中に徐々に注入し
た。３０分後、撹拌を止め、沈積した析出物を濾過し、
五酸化りんを用いて乾燥させ、目的化合物７．９ｇ
（ｍ．ｐ．＝１４７℃）を得た。

〔α▲〕^２０ _Ｄ▼＝−７２．８^０（Ｃ＝１、２Ｎ酢酸） Ｒ_ｆ ^２＝０．３０；Ｒ_ｆ ^１１＝０．８２． 工程（ｋ）：Ｂｏｃ−アントラニル酸（分子量２３７．
２７）の製造。

ＤＭＦ ２０ｍｌにアントラニル酸４ｇ（３０ミリモ
ル）を溶かした溶液にＴＥＡを加えてｐＨ＝８に調整し
た。これに第３ブチルオキシ炭酸塩９ｇを加えたのち、
この反応混合物を室温にて一晩撹拌した。これを蒸発乾
燥させ、得られた濃い油状残渣を酢酸エチル５０ｍｌ中
に溶解した。その有機質相を氷冷した０．０１Ｎ硫酸２
０ｍｌで３回洗い、ついで水２０ｍｌで３回洗った。次
に上記酢酸エチル溶液を無水硫酸ナトリウムを用いて乾
燥し、減圧下で蒸発させた。この油状残渣は冷凍室内に
て保持させたところ結晶化した。得られた目的化合物は
５．７ｇ（収率８０％）でｍ．ｐ．は９１〜９３℃であ
った。

Ｒ_ｆ ^３＝０．８７；Ｒ_ｆ ^１０＝０．７９． 工程（１）：Ｂｏｃ−Ａａ−Ｌｅｕ−Ｇｌｎ−Ｐｒｏ−
ＮＨＥｔ（分子量：６０３．８５）の製造。

ＤＭＦ １０ｍｌにＨ−Ｌｅｕ−Ｇｌｎ−Ｐｒｏ−ＮＨ
Ｅｔ臭酸塩２．３ｇ（５ミリモル）を溶かした溶液を０
℃に冷却し、ついでＴＥＡを添加したｐＨ＝８に調整し
た。次にＮ−ヒドロキシベンゾトリアゾール７５０ｍｇ
（５．５ミリモル）およびＤＣＣ １．１ｇ（５．５ミ
リモル）を加えたのち、ＤＭＦ ５ｍｌにＢｏｃ−アン
トラニル酸１．３ｇ（５．５ミリモル）を溶かした溶液
を、これに徐々に滴下し、次に、この反応混合物を室温
にて４８時間撹拌した。その結果析出したＤＣＵを濾過
し、溶液を減圧下に蒸発した。得られた残渣を酢酸エチ
ル５０ｍｌに溶かし、１０％クエン酸２０ｍｌで３回洗
い、ついで水２０ｍｌで３回、飽和炭酸水素ナトリウム
２０ｍｌで３回、最後に飽和塩化ナトリウム溶液２０ｍ
ｌで１回、それぞれ洗った。上記酢酸エチル相を無水硫
酸ナトリウムを用いて乾燥し、ついで減圧下に蒸発し
た。得られた油状残渣をエーテルで粉砕した結果、青黄
色の粉状析出物が得られ、これを濾過し、エーテルで洗
い目的化合物２．４ｇ（収率８０％）を得た。

ｍ．ｐ．＝１１９〜１２１℃．Ｒ_ｆ ^９＝０．９１． アミノ酸の分析の結果、以下の値を得た。

Ｇｌｎ ０．９７；Ｐｒｏ １．０３；Ｌｅｕ １．０
０；Ａａ ０．９２． 工程（ｍ）：Ｈ−Ａａ−Ｌｅｕ−Ｇｌｎ−Ｐｒｏ−ＮＨ
Ｅｔ．ＴＦＡ（分子量：５９９．６３）製造。

ジクロロメタンに溶かしたトリフルオロ酢酸の３０％溶
液１０ｍｌにＢｏｃ−Ａａ−Ｌｅｕ−Ｇｌｎ−Ｐｒｏ−
ＮＨＥｔ ６０３ｍｇ（１ミリモル）を溶かし、この溶
液を室温にて２０分間撹拌した。ついで、減圧下で、Ｔ
ＦＡを急速に除去し、残渣をエーテルの添加により粉砕
し、乾燥させて、目的化合物を５．１５ｍｇ（収率８６
％）を得た。

Ｒ_ｆ ^５＝０．５２ 工程（ｎ）：Ｇｌｐ−Ｈｉｓ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−Ｔｙｒ
−Ａａ−Ｌｅｕ−Ｇｌｎ−Ｐｒｏ−ＮＨＥｔ（分子量：
１１８８．４８）の製造。

ＤＭＦ １０ｍｌにＧｌｐ−Ｈｉｓ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−
Ｔｙｒ−Ｎ_２Ｈ_３ペンタペプチド（工程（ｇ）で得られ
たもの）３５８ｍｇ（０．５ミリモル）を加え、これを
０℃に冷却したのち、６Ｎ塩酸０．３４ｍｌ、さらに亜
硝酸ナトリウム３７．７ｍｇを含む濃水溶液を撹拌下で
滴下した。５分後、Ｈ−Ａａ−Ｌｅｕ−Ｇｌｎ−Ｐｒｏ
−ＮＨＥｔ．ＴＦＡテトラペプチド２３０ｍｇ（０．５
ミリモル）（ＤＭＦ １ｍｌに溶かしたもの）およびＴ
ＥＡ ０．３４ｍｌを０℃で添加した。必要に応じ、反
応混合物にＴＥＡを加えて中和し、０℃で２時間撹拌し
たのち、室温まで暖めた。次に減圧下で上記ＤＭＦを除
去し、残渣を０．２Ｎ酢酸溶液とし、セファデックスＧ
−２５カラム（２×９５ｃｍ）を用いクロマトグラフィ
により分離した。この分離ののち、ＵＶ吸収（２８０ｎ
ｍ）およびＴＬＣを用いて測定した。適当な分画を集
め、凍結乾燥して目的化合物を得た（３１５ｍｇ．収率
５２％）。

Ｒ_ｆ ^５＝０．５８；Ｒ_ｆ ^７＝０．８３；Ｒ_ｆ ^８＝０．７
２ アミノ酸分析の結果は以下の通りである。

Ｓｅｒ ０．９１；Ｇｌｎ ２．０３；Ｐｒｏ ０．９
５；Ｌｅｎ １．００；Ｔｙｒ １．１０；Ｈｉｓ
１．０２；Ｔｒｐ ０．８１；Ａａ ０．９５． 実施例２ （Ａａ^６，ｄｅｓ Ｇｌｙ^１０）−ゴナドリベリンエチ
ルアミドの製造。

工程（ａ）；Ｚ−Ａｒｇ（ＮＯ_２）−Ｐｒｏ−ＮＨＥｔ
（分子量：４６５．４７）の製造。

Ｚ−Ａｒｇ（ＮＯ_２）−ＯＨ ７．３３ｇ（２９．７ミ
リモル）およよびＮ−ヒドロキシ−ベンゾトリアゾール
１．０３４ｇを、ＴＨＦ７０ｍｌにプロリンエチルアミ
ド３．２４ｇ（２２．８ミリモル）を溶かした溶液に加
えた。この反応混合物を氷水バス中にて冷却し、次に、
ＴＨＦ ５０ｍｌにＤＣＣ ５．３４ｇ（２５．８ミリ
モル）を溶かした溶液をこれに撹拌下で滴下した。この
混合物を氷冷下で５時間撹拌し、室温で２０時間撹拌
し、ついで濾過したのちＴＨＦで洗った。濾液を減圧下
で蒸発し、残渣をクロロホルムに溶かし、水酸化アンモ
ニウム／水（１：５）混合液３５ｍｌで３回、水２０ｍ
ｌで２回、１Ｎ塩酸３５ｍｌで３回、最後に水２０ｍｌ
で３回、連続的に洗った。上記クロロホルムによる溶液
を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過したのちクロロホ
ルムで洗い、ついで濾液を蒸発した。残渣をＴＨＦ ３
５ｍｌと酢酸エチル５０ｍｌとからなる混合液中に溶か
し、濾過し、ＴＨＦと酢酸エチルとからなる混合物
（１：２）３０ｍｌで洗った。この溶液を蒸発させたの
ち、エチルエーテル１００ｍｌを、この固相の気泡質残
渣に加えた。得られた生成物を濾過し、エーテルで洗
い、減圧下で乾燥して目的化合物９．６９ｇ（９８％の
収率）を得た。ｍ．ｐ．＝１２５℃。

〔α▲〕^２０ _Ｄ▼＝−４２．５^０（Ｃ＝１、メタノー
ル） Ｒ_ｆ ^３＝０．５；Ｒ_ｆ ^１２＝０．７２． 工程（ｂ）：Ｚ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ（ＮＯ_２）−Ｐｒｏ−
ＮＨＥｔ（分子量：５７８．６５）の製造。

氷酢酸３０ｍｌ中にＺ−Ａｒｇ（ＮＯ_２）−Ｐｒｏ−Ｎ
ＨＥｔ５．６ｇ（１１．７３ミリモル）を溶かした溶液
に、氷酢酸に臭化水素を溶かした４Ｎ溶液５５ｍｌを加
えた。この反応混合物を室温にて９０分間放置したの
ち、ａｂｓエーテル２５０ｍｌを加え、これを１時間放
置した。次に上澄液を分離したのち、エーテル１００ｍ
ｌを残渣に加えた。これを１５分間放置したのち、この
混合物を濾過し、さらにエーテルを完全に洗った。得ら
れた固相の吸湿性物質を五酸化リンおよび水酸化ナトリ
ウムを用い減圧下で乾燥させた。その結果、やや吸湿性
の生成物６．４４ｇを得た。

上記のジペプチドエチルアミド臭酸塩６．０４ｇ（１
１．０ミリモル）をクロロホルム１５０ｍｌ中に懸濁さ
せ、ついでＴＥＡを５．５ｍｌ加えた。この懸濁物は徐
々に溶解したが、これにＴＥＡをさらに２．５ｍｌ加え
て完全な溶液とした。次に、クロロホルム６５ｍｌにＺ
−Ｌｅｕ−ＯＰＣＰ６．４ｇを加えた溶液を上記反応溶
液に滴下し、それを一晩撹拌し、翌日、この混合液を１
Ｎ塩酸で、次に飽和塩化ナトリウム溶液および２Ｎ水酸
化アンモニウム溶液で、最後に再び飽和塩化ナトリウム
溶液で抽出をおこなった。その有機質相を無水硫酸ナト
リウムで乾燥し、減圧下で蒸発させた。得られた残渣を
エーテルで完全に粉砕し、その固形分を濾別し、エーテ
ルで洗い、減圧下で乾燥した結果、粗生成物５．５ｇ
（８４．６％の収率９を得た。

この得られた保護されたトリペプチドエチルアミドを若
干温めつつ酢酸エチル３０ｍｌ中に溶かし、活性炭を用
いて透明化し、酢酸エチル１０ｍｌで２回洗った。この
濾液にエチルエーテル７５ｍｌを滴下した。生成した油
状の沈積物は急速に固化した。約２時間放置したのち、
この混合物を濾過し、酢酸エチル／エーテル（２：３）
混合液で洗い、さらにエーテルで洗ったのち、減圧下で
乾燥して目的化合物４．７ｇ（収率７４．３％）を得
た。

ｍ．ｐ．＝１１６〜１１８℃。

〔α▲〕^２０ _Ｄ▼＝５７．０^０（Ｃ＝１、メタノール） Ｒ_ｆ ^３＝０．７４；Ｒ_ｆ ^４＝０．４９． 工程（ｃ）：Ｈ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ（ＮＯ_２）−Ｐｒｏ−
ＮＨＥｔ．ＨＢｒ（分子量：５３７．４）の製造。

氷酢酸に臭化水素を溶かした溶液１０ｍｌにＺ−Ｌｅｕ
−Ａｒｇ（ＮＯ_２）−Ｐｒｏ−ＮＨＥｔトリペプチド
１．１８ｇ（２ミリモル）を含む溶液を室温にて１時間
撹拌した。これに無水エーテル１００ｍｌを加えたの
ち、得られた粉状析出物を濾別し、得られた青黄色粉体
を乾燥して吸湿性の目的化合物１．３０ｇを得た。Ｒ
_ｆ２＝０．１４． 工程（ｄ）：Ｂｏｃ−Ａａ−ＯＰＥＰ（分子量：４０
３．３２）の製造。

ＴＨＦ２０ｍｌにＢｏｃ−アントラニル酸２．４ｇ（１
０ミリモル）を溶かした溶液を０℃に冷却し、ついでＤ
ＣＣ２．２ｇ（１１ミリモル）およよびペンタフルオロ
フェノール２．０ｇ（ＴＨＦ１０ｍｌに溶かしたもの）
を撹拌下で添加した。この混合物を０℃にて３時間、さ
らに室温にて一晩撹拌した。この溶液を濾過し、析出物
を酢酸エチル３０ｍｌに溶かし、ついで氷冷の１０％ク
エン酸１０ｍｌで３回、冷水１０ｍｌで３回、飽和炭酸
水素ナトリウム１０ｍｌで３回、最後に水１０ｍｌで３
回、連続的に洗った。上記酢酸エチル相を無水硫酸ナト
リウムを用いて乾燥したのち、濾過し、ついで減圧下で
蒸発した。これを４℃に保ったところ、油質残渣は結晶
化した。この得られた目的化合物は収量が３．０６ｇ
（収率７６％）であった。

Ｒ_ｆ ^９＝０．９０；Ｒ_ｆ ^１０＝０．８５． 工程（ｅ）：Ｂｏｃ−Ａａ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ（ＮＯ_２）
−Ｐｒｏ−ＮＨＥｔ（分子量：６７５．７５）の製造 ＤＭＦ ５ｍｌにＨ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ（ＮＯ_２）−Ｐｒ
ｏ−ＮＨＥｔ．ＨＢｒトリペプチド塩１．０７ｇ（２ミ
リモル）を溶かした溶液を０℃に冷却し、ついでＤＭＦ
５ｍｌにＴＥＡ０．２８ｍｌ（２ミリモル）およびＢ
ｏｃ−Ａａ−ＯＰＥＰ ８０６ｍｇ（２ミリモル）を溶
かした溶液を加えた。この溶液をＴＥＡの添加によりｐ
Ｈ＝８に調整し、昇温させ、ＴＥＡ添加によりｐＨ＝８
に保ちながら２０℃にて４８時間撹拌し続けた。ついで
減圧下でＤＭＦを除去し、残渣を酢酸エチル５０ｍｌ中
に溶かし、ついで１０％クエン酸で３回、水２０ｍｌで
３回、飽和炭酸水素ナトリウム２０ｍｌで３回、最後に
飽和塩化ナトリウム２０ｍｌで１回、連続的に洗った。
上記酢酸エチル溶液を無水硫酸ナトリウムで乾燥させた
のち、濾過し、さらに減圧下で蒸発させた。得られた油
状残渣をエーテルで粉砕化し、その固相分を濾過して目
的化合物１．０５ｇ（４２率７７．８％）を得た。

Ｒ_ｆ ^３＝０．９０；Ｒ_ｆ ^９＝０．９１Ｒ；_ｆ ^１０＝０．
９６． 工程（ｆ）：Ｂｏｃ−Ａａ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−
ＮＨＥｔ（分子量：６３０．７４）の製造。

５０％酢酸５０ｍｌにＢｏｃ−Ａａ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ
（ＮＯ_２）−Ｐｒｏ−ＮＨＥｔテトラペプチド１．０ｇ
（１．５ミリモル）を溶かした溶液を４時間にわたり１
０％パラジウム担持チャーコール触媒４００ｍｇの大在
下で水素添加処理した。ついで、この触媒を濾別したの
ち溶液を蒸発させて、残渣をエーテルで完全に粉砕し、
目的化合物を７７７ｍｇ（収率８２．５％）得た。

Ｒ_ｆ ^２＝０．４５． 工程（ｇ）：Ｈ−Ａａ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−ＮＨ
Ｅｔ．（ＴＦＡ）_２（分子量：７２４．６７）の製造。

ＴＦＡ ５ｍｌにＢｏｃ−Ａａ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｐｒ
ｏ−ＮＨＥｔテトラペプチド６３０ｍｇ（１ミリモル）
を溶かした溶液を室温にて２０分間撹拌した。このＴＦ
Ａをついで急速に減圧下にて急速に除去したのち、残渣
をエーテルで粉砕し、ついで濾過、乾燥して目的化合物
を６４８．５ｍｇ（収率８９．５％）を得た。

Ｒ_ｆ ^２＝０．３４：Ｒ_ｆ ^８＝０．７６ 工程（ｈ）：Ｇｌｐ−Ｈｉｓ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−Ｔｙｒ
−Ａａ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−ＮＨＥｔ．ＣＨ_３Ｃ
Ｏ_２Ｈ（分子量：１２７６．５４）の製造： ＤＭＦ １０ｍｌにＧｌｐ−Ｈｉｓ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−
Ｔｙｒ−Ｎ_２Ｈ_３ペンタペプチド（上記実施例１の工程
（ｇ）で得たもの）３５８ｍｇ（０．５ミリモル）を溶
かした溶液を−１０℃に冷却し、最初に６Ｎ塩酸０．３
４ｍｌ、次に亜硝酸ナトリウムを３７．７ｍｇ含む濃縮
した水溶液をそれぞれ撹拌下にて滴下した。５分後、Ｄ
ＭＦ １ｍｌにＨ−Ａａ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｎ
ＨＥｔ．（ＴＦＡ）_２テトラペプチド３６２．３ｍｇ
（０．５ミリモル）を溶かした溶液およびＴＥＡ ０．
３ｍｌを−１０℃で添加した。この混合物を−５℃にて
１時間撹拌し、さらに０℃で１時間撹拌し、ついで放置
して室温迄加熱した。次に、ＤＭＦを減圧下で急速に除
去し、残渣を０．２Ｎ酢酸に溶かし、セファデックスＧ
−２５カラム（２×９５ｃｍ）にてクロマトグラフィー
により精製した。適当な分画を集め、凍結乾燥して目的
化合物を３６５．７ｍｇ（収率５７．３％）を得た。

Ｒ_ｆ ^５＝０．６５；Ｒ_ｆ ^６＝０．４９；Ｒ_ｆ ^８＝０．６
９． 又、アミノ酸分析結果は以下の通りであった。

Ｓｅｒ ０．８７；Ｇｌｕ ０．９９；Ｒｒｏ １．０
２；Ｌｅｕ １．００；Ｔｙｒ ０．９７；Ｈｉｓ
１．０３；Ｔｒｐ ０．８２；Ａａ ０．９１；Ａｒｇ
１．０１． 実施例３ （Ｍａｂ^６）−ゴナドリベリンの製造 工程（ａ）：Ｂｏｃ−３−アミノ−安息香酸（Ｂｏｃ−
Ｍａｂ）（分子量：２３７．２５）の製造。

ＤＭＦ １０ｍｌに３−アミノ−安息香酸１．０ｇ
（７．５ミリモル）を溶かし、これにＴＥＡを添加して
ｐＨ＝８に調整した。ついで第３ブチルオキシ炭酸塩
２．５ｇを加え、この混合物を１日撹拌した。ついでこ
の反応混合物を実施例１の工程（ｋ）と同様に処理し、
目的化合物１．４ｇ（収率８０．９％）を得た。

ｍ．ｐ．＝９２℃． Ｒ_ｆ ^１０＝０．８８；Ｒ_ｆ ^１０＝０．８４． 工程（ｂ）：Ｂｏｃ−Ｍａｂ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ（Ｎ
Ｃ_２）−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−ＮＨ_２（分子量：７０４．７
８）の製造。

ＤＭＦ １０ｍｌにＨ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ（ＮＯ_２）−Ｐ
ｒｏ−Ｇｌｙ−ＮＨ_２．ＴＦＡ塩〔エム・ヤナイハラ
（Ｍ．Ｙａｎａｉｈａｒａ）等：ジャャナル・オブ・メ
ディシナル・ケミストリー（Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．）
１６，３７３（１９７３）〕１．５ｇ（２．５ミリモ
ル）を含有する溶液を０℃に冷却し、これにＴＥＡを加
えてｐＨ＝８に調整した。ついでＮ−ヒドロキシ−ベン
ゾトリアゾール３８３ｍｇ（２．５ミリモル）およびＤ
ＣＣ ５１５ｍｇ（２．５ミリモル）をこの溶液に加
え、さらにこれに、ＤＭＦ ３ｍｌにＢｏｃ−Ｍａｂ
５９３ｍｇ（２．５ミリモル）を溶かした溶液を滴下し
た。この反応溶液を室温にて撹拌しながら４８時間保っ
た。ついで、析出したＤＣＵを濾過し、溶液を減圧下で
蒸発させた。油状残渣は酢酸エチル３０ｍｌに溶かし、
１０％クエン酸１０ｍｌで３回、水１０ｍｌで３回、飽
和炭酸水素ナトリウム溶液１０ｍｌで３回、最後に飽和
塩化ナトリウム１０ｍｌで１回、連続的に洗った。この
酢酸エチル相を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下
で蒸発させた。エーテルを用いて油状残渣を完全に粉砕
したのち、白色の結晶質析出物を濾別し、エーテルで洗
って目的化合物１．２ｇ（収率６８％）を得た。

ｍ．ｐ．＝１３２〜１３３℃；Ｒ_ｆ ^６＝０．４３ 工程（ｃ）：Ｂｏｃ−Ｍａｂ−Ｌｅｕ−Ａｒｓ−Ｐｒｏ
−Ｇｌｙ−ＮＨ_２（分子量：１５９．７８）の製造。

実施例２の工程（ｆ）と同様に処理して、Ｂｏｃ−Ｍａ
ｂ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ（ＮＯ_２）−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−ＮＨ
_２ペンタペプチド１．０ｇ（１．５ミリモル）から保護
基を除去し、目的化合物を７７５ｍｇ（収率：７８．３
％）得た。

Ｒ_ｆ ^２＝０．５２ 工程（ｄ）：Ｈ−Ｍａｂ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｇ
ｌｙ−ＮＨ_２．（ＴＦＡ）_２（分子量：７５３．７２）
の製造。

ＴＦＡ ５ｍｌにＢｏｃ−Ｍａｂ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｐ
ｒｏ−Ｇｌｙ−ＮＨ_２ペンタペプチドアミド６７０ｍｇ
（１ミリモル）を加え、この溶液を室温にて２０分間撹
拌した。ついでＴＦＡを減圧下で急速に除去し、油状残
渣をエーテルを用いて粉砕し、粉状物を濾過、乾燥して
目的化合物を６８９ｍｇ（収率９１．５％）得た。

Ｒ_ｆ ^１＝０．５０；Ｒ_ｆ ^５＝０．５３；Ｒ_ｆ ^７＝０．４
２． 工程（ｅ）：Ｇｌｐ−Ｈｉｓ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−Ｔｙｒ
−Ｍａｂ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−ＮＨ
_２（分子量：１２４４．３９）の製造。

ＤＭＦ １０ｍｌにＧｌｐ−Ｈｉｓ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−
Ｔｙｒ−Ｎ_２Ｈ_３ペンタペプチド（実施例１の工程
（ｇ）で得たもの）３５８ｍｇ（０．５ミリモル）を加
え、この溶液を−１０℃に冷却した。次にこれに、６Ｎ
塩酸０．３４ｍｌ、さらに亜硝酸ナトリウム３７．７ｍ
ｇを含む濃水溶液を加えた。５分後、ＤＭＦ １ｍｌに
Ｈ−Ｍａｂ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−ＮＨ_２
（ＴＦＡ）_２ペンタペプチド３７７ｍｇ（０．５ミリモ
ル）を溶かした溶液を−１０℃で添加した。この反応混
合液を０℃で２時間撹拌したのち、放置して室温まで加
熱した。翌日、この混合液を減圧下で蒸発させた。さら
に、この粗デカペプチド残渣を、ブタノール／プロパノ
ール／酢酸／水（１５：１：４：２０）混合液を用いて
セファデックスＧ−２５カラム（２×９５ｃｍ）により
クロマトグラフィによる精製を行なった。さらにその分
画を用い、ＴＬＣおよびＵＶ吸収による測定をおこなっ
た。デカペプチドを含む分画を凍結乾燥し、ついで希酢
酸を用いて、この操作を繰り返した。その結果、目的化
合物３２３ｍｇ（収率５２％）を得た。

Ｒ_ｆ ^２＝０．３１；Ｒ_ｆ ^７＝０．４９；Ｒ_ｆ ^８＝０．６
２． アミノ酸の分析結果は以下の通りであった。

Ｓｅｒ ０．９１；Ｇｌｕ １．０３；Ｐｒｏ ０．９
７；Ｇｌｙ １．１０；Ｌｅｕ １．００；Ｔｙｒ
０．９７；Ｈｉｓ １．０５；Ｔｒｐ ０．８７；Ｍａ
ｂ ０．９０；Ａｒｇ １．１１． 実施例４ （Ａａ^６）−ゴナドリベリン（分子量：１２４４．３
９）の製造 （ａ） 合成 この化合物は公知の固相ペプチド合成法により合成した
〔メリフィールド、アール・ビ−（Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌ
ｄ，Ｒ．Ｂ．）：ジャーナル・オブ・アメリカンケミス
トリ・オブ・ソサイアティ（Ｊ．Ａｍ． Ｃｈｅｍ．Ｓ
ｏｃ．）８５，２１４９（１９６３）参照〕。

ベンズヒドリルアミン、ＨＣｌ樹脂（０．４ミリモル／
ｇ，Ｐｉｅｒｃｅ）を０．７５ｇ（０．３ミリモル）を
ジクロロメタン中にて２時間、膨潤させた。ついで、ア
ミノ酸を用いたアシル化の工程において、以下のサイク
ルを繰り返した。

各段階ののちにニンヒドリンテストをおこなった〔イー
・カイザー（Ｅ．Ｋａｉｓｅｒ）等：アナリテカルバイ
オケミストリー（Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．３４，５
９５（１９７０）〕。上記サイクルは遊離アミノ基が検
出されたときは段階５から始めて繰り返した。最後の段
階を終えたのちのＧｌｐ−Ｈｉｓ（Ｔｏｓ）−Ｔｒｐ−
Ｓｅｒ（ｏＢｚｌ）−Ｔｙｒ（ｏＢｚｌ）−Ａａ−Ｌｅ
ｕ−Ａｒｇ（Ｔｏｓ）−Ｐｒｏ−Ｇｌｙペプチド樹脂の
重量から、目的化合物の収量は３４４ｍｇ（△ｗとして
６５％）であることを示した（保護されたペプチドの分
子量は１７６４．９２である。

効（ｐ） フッ化水素を用いた分裂 保護基を除去すると同時にペプチドを液体無水フッ化水
素を用いる単一工程により樹脂から分裂させた〔エス・
サカイバラ（Ｓ・Ｓａｋａｉｂａｒａ）他：Ｂｕｌｌ．
Ｓｏｃ．Ｊａｐａｎ ４０，２１６４（１９６７）〕。
前の工程（ａ）でで得たペプチド樹脂に対し、アニソー
ル５ｍｌおよびジチオトレイトール１００ｍｇを加え
た。ついでフッ化水素２０ｍｌをこの混合物に加え、１
時間撹拌を続けた。その後、窒素流を用いて上記のフッ
化水素を除去し、残渣をａｂｓ．エーテル中に懸濁さ
せ、ついで濾過した。この固相残渣を５０％酢酸で洗っ
たのち、この濾液を温度３７℃で蒸発した。このように
して得られたデカペプチドＨＦ塩（３７１ｍｇ）を直
接、ゲルクロマトグラフィーにかけた。

工程（ｃ） ゲルクロマトグラフィー 前の工程（ｂ）で得られた生成物を２０％酢酸を溶出液
としてセファデックスＧ−２５カラム（２．５×１００
ｃｍ）を用い精製した。この精製ののち、さらにＵＶ吸
収（２８０ｎｍ）およびＴＬＣに上る測定をおこなっ
た。デカペプチドを含む分画を集め、凍結乾燥させて目
的生成物を２０２ｍｇ（５４％収率）を得た。

工程（ｄ） 製剤用ＨＰＬＣ Ｃ_１８−シリカゲルＬＲＰ−１（１３−２４μｍ、Ｗｈ
ａｔｍａｎ）型製剤用ＨＰＬＣカラム（２．５×４５ｃ
ｍ）を用いた。平衡は１５％のメタノールおよび８５％
の２０％酢酸溶液からなる混合溶液を用いておこなっ
た。平衡に達したのち、ゲルクロマトグラフィーにより
精製した生成物２０２ｍｇを上記混合物に溶かして適用
した。溶出はメタノール１５％と２０％酢酸８０％とか
らなる混合物から始まって、メタノール２５％と２０％
酢酸７５％からなる混合物、メタノール４０％と２０％
酢酸６０％とからなる混合物、最後にメタノール８０％
と２０％酢酸２０％とからなる混合物を用いた直線的勾
配系によりおこなった。これらの操作は３．５×１０^５
ｐａの圧力下で、流速２ｍｌ／分で行なった。また分画
を２８０ｎｍの吸収により検査し、その含量はＴＬＣを
用いてコントロールした。このようにして得られた純粋
な（Ａａ^６）−ゴナドリベリン最終製品は凍結乾燥後１
２３ｍｇ（収率６１．０％）であった。

ｍ．ｐ．＝１８５〜１９２℃。

〔α〕▲^２０ _Ｄ▼＝−６３．２^０゜（Ｃ＝１、０．１Ｎ
酢酸） Ｒ_ｆ ^１＝０．１７． アミノ酸分析の結果は以下の通りであった。

Ｓｅｒ ０．９２；Ｇｌｕ １．０３；Ｐｒｏ １．
１；Ｇｌｙ ０．９７；Ｌｅｕ １．００；Ｔｙｒ
０．９５；Ｈｉｓ １．０８；Ｗｒｐ ０．８３；Ａａ
０．９０；Ａｒｇ １．０５． 実施例５，６ 下記のような化合物を実施例４の方法を用いて製造し
た。

実施例５および６の化合物のアミノ酸分析の結果は以下
の通りである。

実施例７ 筋肉内、皮下又は静脈内投与用の注射液の製剤。

（ａ）一般式（Ｉ）のゴナドリベリン誘導体を蒸留水、
生理食塩水又は緩衝液に濃度、１〜１０ｍｇ／ｍｌとな
るように溶解した。この濾過により除菌し、ついでゴナ
ドリベリン誘導体が５０〜５００μｇ含まれるようにし
てアンプル内に充填し、凍結乾燥したのち最後にアンプ
ルを封止した。

投与する前にアンプル内に１〜１０ｍｌの蒸留水を加え
溶液とした。これにより所望投与量を注射することがで
きた。

（ｂ）一般式（１）のゴナドリベリン誘導体を生理食塩
水又はベンジルアルコールにそれぞれ２０〜５００μｇ
／ｍｌの濃度に溶かし、アンプルに充填し、密封した。
この溶液は直接投与するのに適したものであった。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 タマーシュ グリアーシュ ハンガリー国 セクサールド 7100 ベー リ ベー アー ウッツァ 71 (72)発明者 イシュトバーン テプラーン ハンガリー国 ブダペスト 1028 ヘルマ ンオ ウッツァ 43 (72)発明者 シャーンドル ヴィグ ハンガリー国 ペーチュ 7624 ユリシチ ュエム ウッツァ 30 (72)発明者 ヂョルヂィ ボオェコオェニィ ネーエマ ヨル ハンガリー国 ブダペスト 1031 カザル ウッツァ 23

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】下記の一般式（Ｉ） Clp-His-Trp-Ser-Tyr-X₁-X₂-X₃-Pro-X₄ （Ｉ） （但し、Ｘ_１は、２アミノ安息香酸基又は３−アミノ安
   息香酸基；Ｘ_２は、ロイシル基、トリプトフィル基又は
   フェニルアラニル基；Ｘ_３は、アルギニル基、ロイシル
   基、グルタミニル基；Ｘ_４は、グリシルアミド基又はエ
   チルアミド基である）のゴナドリベリンナペプチドエチ
   ルアミド又はデカペプチドアミド誘導体及びその酸付加
   塩。