JPH06319528A

JPH06319528A - Ｖａ菌根菌の増殖方法

Info

Publication number: JPH06319528A
Application number: JP5132335A
Authority: JP
Inventors: Masami Sekino; 正巳関野; Katsuhiko Matsuzaki; 克彦松崎; Genshi Suzuki; 源士鈴木
Original assignee: Idemitsu Kosan Co Ltd
Current assignee: Idemitsu Kosan Co Ltd
Priority date: 1993-05-12
Filing date: 1993-05-12
Publication date: 1994-11-22

Abstract

(57)【要約】【構成】植物根にＶＡ菌根菌を共生させて、該ＶＡ菌
根菌感染植物を栽培することにより、ＶＡ菌根菌を増殖
させるにあたり、培地中に難溶性カルシウム塩を添加す
ることを特徴とするＶＡ菌根菌の増殖方法。【効果】本発明の方法によれば、ＶＡ菌根菌を著しく
増殖させ、多量の胞子を得ることができる。その結果、
胞子密度が高く、かつ、活性に優れたＶＡ菌根菌製剤を
安価に製造することを可能にする。また、高密度に増え
たＶＡ菌根菌の胞子を回収し、物の担体と混合して、Ｖ
Ａ菌根菌接種物を効率良く、安価に作ることが可能とな
る。それ故、本発明は農業，園芸，土木等の分野におい
て極めて有用である。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、農業，園芸，土木等の
分野で有用なＶＡ菌根菌の増殖方法に関し、詳しくはＶ
Ａ菌根菌を著しく増殖させ、ＶＡ菌根菌の胞子を多量に
製造しうる方法に関する。

【０００２】

【従来の技術及び発明が解決しようとする課題】ＶＡ菌
根菌（Vesicular Arbuscular Mycorrhizae )は種々の作
物に感染して、生長を促進させたり、植物の耐病性を向
上させることが知られている（「農業及び園芸」，第６
２巻，第８号，９３０〜９３７頁，１９８７年；「植物
防疫」，第４２巻，第５号，２５９〜２６６頁，１９８
８年）。

【０００３】このようなＶＡ菌根菌の接種物を作るため
には、多量の胞子を得る必要があるため、ＶＡ菌根菌の
胞子を効率良く製造する方法が求められている。従来、
ＶＡ菌根菌を増殖させる方法としては、培地にゼオライ
ト（特開平３−２４７２７０号公報）や多孔性両イオン
交換体（特開昭６３−８７９７３号公報）、或いは炭を
添加する（特開昭６０−４９７１７号公報）など、多孔
質体を用いて培養する方法が知られている。これらの多
孔質体を用いて培養する方法によれば、ある程度の量の
胞子を得ることができるものの、充分なものとは言え
ず、さらに一層胞子形成を促進する方法が求められてい
る。

【０００４】また、ＶＡ菌根菌を増殖させる方法とし
て、宿主植物を旺盛に成長させ、その結果としてＶＡ菌
根菌を増殖させる方法が知られている。具体的には、宿
主植物を旺盛に成長させるために肥料を与える方法であ
り、例えば培土に化成肥料を入れて植物を育て、その植
物根にＶＡ菌根菌を感染させる方法（特開平２−２２７
０６８号公報，特開平３−７６５７２号公報）や、産業
廃棄物の焼却灰に肥料を加える方法（特開平３−５８７
１５号公報）などが知られている。しかしながら、これ
らの方法のように宿主植物を成長させるために必要な肥
料、特にリン酸を与え過ぎると、却ってＶＡ菌根菌の生
育が阻害されるというおそれがあった。

【０００５】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、これら従
来の問題を解決すべく鋭意研究を進めた結果、培地中に
難溶性カルシウム塩を添加することにより、ＶＡ菌根菌
を著しく増殖させ、多量の胞子を得ることができるとい
う知見を得、この知見に基づいて本発明を完成するに到
った。

【０００６】すなわち本発明は、植物根にＶＡ菌根菌を
共生させて、該ＶＡ菌根菌感染植物を栽培することによ
り、ＶＡ菌根菌を増殖させるにあたり、培地中に難溶性
カルシウム塩を添加することを特徴とするＶＡ菌根菌の
増殖方法を提供するものである。

【０００７】ＶＡ菌根菌は土壌中に存在する接合菌の一
種であり、その菌糸が様々な植物の根について菌根を形
成し、両者が共生することが知られている。本発明にお
いて用いるＶＡ菌根菌としては、種々のものがあり、例
えばギガスポラ( Gigaspora ) 属, グロムス（ Glomus
) 属, スカテロスポラ ( Scutellospora )属, アカウ
ロスポラ( Acaulospora ) 属, スクレロシスティス( Sc
lerocystis )属, エントロフォスポラ( Entrophospora
) 属などに属する微生物が挙げられるが、本発明にお
いては、これらの中でも特にギガスポラ( Gigaspora )
属, グロムス（ Glomus ) 属，スカテロスポラ ( Scute
llospora )属に属する微生物、特にギガスポラ( Gigasp
ora ) 属とグロムス（ Glomus ) 属に属する微生物に有
効である。

【０００８】これらＶＡ菌根菌の具体例を示すと、例え
ばギガスポラ・マルガリタ（ Gigaspora margarita
），ギガスポラ・アルビダ（ Gigaspora albida ），
ギガスポラ・ギガンティア（ Gigaspora gigantea ），
グロムス・ファシキュレータム（Glomus fasciculatum
），グロムス・カレドニウム（ Glomus caledonium
），グロムス・モセアエ（ Glomus mosseae ），グ
ロムス・イントララディセス（ Glomus intraradicies
），グロムス・エツニケータム（ Glomus etunicatum
)，スカテロスポラ・グレガリア（ Scutellospora gr
egaria ）などの他、アカウロスポラ・ラエビス（ Aca
ulospora laevis ），エントロフォスポラ・インフレ
ケンス（ Entrophospora infrequens ），スクレロシ
スティス・ダッシ（ Sclerocystis dussii ）などを挙
げることができる。

【０００９】上記した如く、本発明はこれらの中でも特
にギガスポラ・マルガリタ（ Gigaspora margarita
），ギガスポラ・アルビダ（ Gigaspora albida ），
ギガスポラ・ギガンティア（ Gigaspora gigantea ），
グロムス・ファシキュレータム（Glomus fasciculatum
），グロムス・カレドニウム（ Glomus caledonium
），グロムス・モセアエ（ Glomus mosseae ），グ
ロムス・イントララディセス（ Glomus intraradicies
）などの増殖に好適である。

【００１０】これらＶＡ菌種菌を集める方法としては、
自然界から篩を用いて集める方法（鈴木達彦，ＶＡ菌根
に関する諸問題５、農業および園芸，第６２巻，第３
号，ｐ２８〜３３，１９８７）や遠心分離による方法
（特開昭６３−３０９１７８号公報）が知られている。
また、栄養薄膜培養法（特開昭５５−１１８３９０号公
報）や器官培養した根を使用する方法（特公昭６２−４
９０３７号公報）等により無菌的にＶＡ菌種菌を増殖さ
せ、胞子を形成させる方法もあるが、収集方法に特に制
限はない。なお、グロムス・イントララディセスは、米
国ＮＰＩ社よりＮｕｔｒｉ−Ｌｉｎｋ（商標名）として
販売されている。また、無機質や有機質の担体に付着さ
せたＶＡ菌種菌も使用することができる。

【００１１】また、本発明でＶＡ菌根菌と共生させる植
物としては、すなわちＶＡ菌根菌を感染させる植物（Ｖ
Ａ菌根菌の宿主植物）としては、生長が速く、根がよく
張る植物であって、かつ、ＶＡ菌根菌が感染しやすい植
物であれば特に限定はない。具体的には例えば、トウモ
ロコシ，メヒシバ，ソルゴー（別名ソルガム又はモロコ
シ），ムギ，芝草，スダングラス，バヒアグラス，ギニ
アグラス等のイネ科植物、ナス，トマト，ピーマン，シ
シトウ等のナス科植物、大豆，カラスノエンドウ，マン
グビーン，ピーナツ，アルファルファ，クローバー，ア
カクローバー等の豆科植物、マリーゴールド，ヒマワ
リ，サイネリア，キク等のキク科植物、イチゴ等のバラ
科植物、ネギ，玉ネギ等のユリ科植物、ベゴニア等のシ
ュウカイドウ科植物などが好ましい。これらの植物は、
播種や実生苗として用いる他、播種して育苗後、移植し
て栽培したり、栄養繁殖したり、挿し芽，挿し木，接
木，球根等により増殖，栽培したりして用いられる。

【００１２】本発明の方法は、このような植物の根にＶ
Ａ菌根菌を共生させて、該ＶＡ菌根菌感染植物を栽培す
ることにより、ＶＡ菌根菌を増殖させるにあたり、培地
中に難溶性カルシウム塩を添加することを特徴とするも
のである。

【００１３】本発明において、植物にＶＡ菌根菌を感染
させる場合に用いる培地（用土又は基材ともいう）とし
ては特に制限はなく、様々なものを挙げることができ、
無機物であると、有機物であるとを問わない。無機物と
しては例えば、モンモリロナイト，珪藻土，アタパルジ
ャイト，ゼオライト，赤玉土，鹿沼土，炭，砂，軽石，
発泡粘土，タルク，パーライト，バーミキュライト，石
灰岩，コークス等を挙げることができる。また、有機物
としては例えば、ピートモスなどを挙げることができ、
これらを複数併用した混合培地を用いてもよい。

【００１４】これらの中でも無機質であり、かつ、水を
含むことにより崩壊しにくく、また土壌中の雑菌等の混
入防止と言う観点から、滅菌処理（焼成処理も含む）し
たものが好ましい。具体的には焼成アタパルジャイト，
焼成モンモリロナイト，焼成珪藻土，ゼオライト，焼成
赤玉土等が好ましい。特に、これらの１種を主成分と
し、これにさらに軽石を混合したものが好ましい。

【００１５】ここで焼成アタパルジャイト，焼成モンモ
リロナイト及び焼成珪藻土は、それぞれ粒径が0.5 〜５
mm、好ましくは１〜３mmのものを、それぞれ焼成温度20
0 〜1300℃、好ましくは300 〜1000℃で処理したものが
用いられる。また、アルミナ等もバインダーとして使用
することができるが、その場合、pHを5.5 〜7.5 に調整
することが好ましい。さらに、ゼオライトとしては、粒
径が0.5 〜5mm 、好ましくは１〜３mmであり、表面が球
状で滑らかでなく、粒平面構造を有するものが好まし
い。また、焼成赤玉土としては、粒径が0.5 〜５mm、好
ましくは１〜３mmのものを焼成温度200 〜1300℃、好ま
しくは200 〜1000℃で処理したものが用いられる。

【００１６】本発明においては、上記した如き培地中
に、難溶性カルシウム塩を添加する。ここで難溶性カル
シウム塩とは、具体的には例えば、ケイ酸カルシウム，
炭酸カルシウム，硫酸カルシウム，亜硫酸カルシウム，
リン酸カルシウム，石灰岩，貝殻などが挙げられ、塩化
カルシウムや苦土石灰を除くものである。塩化カルシウ
ムや苦土石灰を添加した場合には、無添加の場合に比
べ、却って少ない量のＶＡ菌根菌の胞子しか得られな
い。本発明において用いる難溶性カルシウム塩として
は、これらの中でも特にケイ酸カルシウム，炭酸カルシ
ウム，硫酸カルシウム，亜硫酸カルシウム，リン酸カル
シウム及び石灰岩から選ばれた少なくとも１種のものが
好ましい。

【００１７】このような難溶性カルシウム塩としては、
通常、直径が１０ｍｍ以下、好ましくは５ｍｍ以下、よ
り好ましくは０．５〜３ｍｍの粒子状のものが用いられ
る。なお、大きい粒子を用いる場合には、ＶＡ菌根菌接
種物を製造した後、これを除去して、最終製品中に混入
しないようにした方が高品質の製品を得ることができ
る。

【００１８】このような難溶性カルシウム塩を培地中に
添加する方法としては、培地と難溶性カルシウム塩とを
混合してもよいし、或いは培地の上部に難溶性カルシウ
ム塩を置いてもよい。また、難溶性カルシウム塩を添加
する時期については、通常はＶＡ菌根菌を接種する前で
あるが、接種後に添加してもよい。接種後に添加する場
合には、培地の上部に難溶性カルシウム塩を置けばよ
い。

【００１９】さらに、難溶性カルシウム塩の添加量は、
その種類によっても異なるが、一般的に言えば、難溶性
カルシウム塩が徐々に溶解しても少なくとも１ケ月以上
にわたり培地に残存するだけの量を添加する。具体的に
は例えば、培地の重量に対し、０．１〜７０％、好まし
くは２〜２５％の割合で添加する。難溶性カルシウム塩
の添加量が少なすぎるとＶＡ菌根菌の胞子形成が不充分
となり、一方、難溶性カルシウム塩の添加量が多すぎる
と植物の生長とＶＡ菌根菌の増殖が不良となり、いずれ
も好ましくない。

【００２０】本発明の方法では、このように難溶性カル
シウム塩を添加された培地を用いて植物を栽培し、ＶＡ
菌根菌を増殖させる。ここで、まずＶＡ菌根菌の宿主植
物への感染方法について述べると、ＶＡ菌根菌の施用時
期としては、上記のように培地に難溶性カルシウム塩を
添加する前後のいずれであってもよい。また、ＶＡ菌根
菌の施用時期は宿主植物の発根前後のいずれであっても
よいが、特に種播きや挿し芽の前処理時、種播きや挿し
芽と同時、或いは苗の移植時などが好ましい。施用方法
としては、基材と混合したり、種子や芽の下層に層状に
施用したり、或いは定植時の植え穴の中に施用したりす
ることが好ましい。さらに、ＶＡ菌根菌の施用量は特に
制限はないが、通常、１植物体当たり、１〜１０，００
０個程度である。

【００２１】ＶＡ菌根菌の宿主植物への感染や宿主植物
の栽培は、既知の方法により行なえばよく、例えば温度
は１０〜５０℃、好ましくは１５〜３５℃、土壌のｐＨ
は３〜９．５、好ましくは４〜７．５の条件で行なわれ
る。

【００２２】このようにして宿主植物を栽培すると、宿
主植物の生育に伴い、ＶＡ菌根菌の感染が成立する。こ
のようにしてＶＡ菌根菌の感染した植物を栽培し、該植
物の根を用いてＶＡ菌根菌を増殖させる。すなわち、植
物根にＶＡ菌根菌を共生させて、該植物を栽培すること
により、ＶＡ菌根菌を増殖させる。植物の栽培にあたっ
ては、必要に応じて緩効性肥料などを施用することがで
きる。

【００２３】宿主植物の生育に伴い、ＶＡ菌根菌も旺盛
に繁殖する。通常、２〜５ケ月程度経過して、宿主植物
が充分に生育したところで、水，栄養分等の供給を絶
ち、暫く放置すると、ＶＡ菌根菌は胞子を形成する。そ
こで、形成したＶＡ菌根菌胞子の付着した基材を回収
し、ＶＡ菌根菌製剤とすることができる。また、高密度
に増えたＶＡ菌根菌の胞子を回収し、別の担体と混合し
てＶＡ菌根菌接種物を効率良く作ることが可能となる。
このようにして得られたＶＡ菌根菌製剤或いは分離胞子
を含む接種物は、ＶＡ菌根菌が感染しうる植物に施用さ
れ、種々の植物の栽培に利用される。

【００２４】

【実施例】次に、本発明を実施例により詳しく説明す
る。実施例１〜４及び比較例１〜３粒径０．５〜３ｍｍの粒状赤玉土２０ｋｇ、なら炭１ｋ
ｇ、ゼオライト４ｋｇに、第１表に示す種々のカルシウ
ム塩を３００ｇの割合で添加混合して培地を作成した。
この培地１ｋｇあたり、１ｇの緩効性肥料（花と野菜の
肥料、三井東圧社製）を添加した。この培地を５号プラ
スチック鉢（１．５リットル容）に１ｋｇ入れ、上面よ
り３ｃｍ下の層に、ギガスポラ・アルビダ（ Gigaspora
albida ）或いはグロムス・ファシキュレータム（ Glo
mus fasciculatum ）〔本菌は、工業技術院生命工学工
業技術研究所（旧名称：工業技術院微生物工業技術研究
所において受託を拒否された。〕の種菌をポットあたり
２００個接種した。さらに、上面より１ｃｍ下の層にア
カクローバーの種をポットあたり６粒接種し、このポッ
トを１区あたり１０連作成し、最低温度を２５℃に保っ
た温室にて、３ケ月間栽培した。栽培期間中は適宜灌水
を行なった。３ケ月後に灌水を停止し、１８℃の恒温室
にて２週間放置し、その後、培地よりウエットシービン
グ法によりＶＡ菌根菌の胞子を分離し、胞子数を測定し
た。各区１０ポットの平均値を第１表に示した。

【００２５】

【表１】

【００２６】実施例５〜７及び比較例４実施例１〜４及び比較例１〜３において、ＶＡ菌根菌と
して、ギガスポラ・マルガリタ（ Gigaspora margarit
a ）〔本菌は、工業技術院生命工学工業技術研究所（旧
名称：工業技術院微生物工業技術研究所において受託を
拒否された。〕を用いたこと、及びカルシウム塩として
リン酸カルシウム（実施例５〜７）或いは塩化カルシウ
ム（比較例４）を第２表に示す所定量（３００ｇ〜３ｋ
ｇの割合で）用いたこと以外は、実施例１〜４及び比較
例１〜３と同様の操作を行ない、胞子数を測定した。結
果を第２表に示す。

【００２７】

【表２】

【００２８】

【発明の効果】本発明の方法によれば、培地に難溶性の
カルシウム塩を添加することにより、ＶＡ菌根菌を著し
く増殖させ、多量の胞子を得ることができる。その結
果、胞子密度が高く、かつ、活性に優れたＶＡ菌根菌製
剤を安価に製造することを可能にする。また、高密度に
増えたＶＡ菌根菌の胞子を回収し、物の担体と混合し
て、ＶＡ菌根菌接種物を効率良く、安価に作ることが可
能となる。それ故、本発明は農業，園芸，土木等の分野
において極めて有用である。

フロントページの続き (51)Int.Cl.⁵ 識別記号庁内整理番号ＦＩ技術表示箇所 //(Ｃ１２Ｎ 1/14 Ｃ１２Ｒ 1:645）

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】植物根にＶＡ菌根菌を共生させて、該Ｖ
Ａ菌根菌感染植物を栽培することにより、ＶＡ菌根菌を
増殖させるにあたり、培地中に難溶性カルシウム塩を添
加することを特徴とするＶＡ菌根菌の増殖方法。
【請求項２】ＶＡ菌根菌が、その胞子である請求項１
記載の方法。
【請求項３】難溶性カルシウム塩が、ケイ酸カルシウ
ム，炭酸カルシウム，硫酸カルシウム，亜硫酸カルシウ
ム，リン酸カルシウム及び石灰岩から選ばれた少なくと
も１種のものである請求項１記載の方法。