JPH06321978A - 新規制癌性抗生物質ｍｊ６５４−ｎｆ４物質及びその製造法 - Google Patents
新規制癌性抗生物質ｍｊ６５４−ｎｆ４物質及びその製造法Info
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- JPH06321978A JPH06321978A JP5139231A JP13923193A JPH06321978A JP H06321978 A JPH06321978 A JP H06321978A JP 5139231 A JP5139231 A JP 5139231A JP 13923193 A JP13923193 A JP 13923193A JP H06321978 A JPH06321978 A JP H06321978A
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Abstract
(57)【要約】
【目的】 抗腫瘍活性を有する新規な抗生物質を収得す
る。 【構成】 分子式Ｃ21Ｈ33Ｏ7 Ｐを示し且つ黄褐色飴状
であって制癌活性を有する新規抗生物質としてＭＪ６５
４−ＮＦ４物質がストレプトミセス属に属する上記物質
の生産菌の培養により製造された。抗生物質ＭＪ６５４
−ＮＦ４物質は抗癌剤として有用である。
る。 【構成】 分子式Ｃ21Ｈ33Ｏ7 Ｐを示し且つ黄褐色飴状
であって制癌活性を有する新規抗生物質としてＭＪ６５
４−ＮＦ４物質がストレプトミセス属に属する上記物質
の生産菌の培養により製造された。抗生物質ＭＪ６５４
−ＮＦ４物質は抗癌剤として有用である。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は抗腫瘍活性を有する新規
な制癌性抗生物質、ＭＪ６５４−ＮＦ４物質及びその製
造法に関する。
な制癌性抗生物質、ＭＪ６５４−ＮＦ４物質及びその製
造法に関する。
【０００２】
【従来の技術】微生物の生産する物質はこれまで多く報
告されており、癌及び感染症の治療に広く用いられてい
る。このうちストレプトミセス属に属する微生物の生産
する抗腫瘍性抗生物質としてはアクチノマイシンＤ、マ
イトマイシンＣ、ブレオマイシン、アドリアマイシン等
が知られている。
告されており、癌及び感染症の治療に広く用いられてい
る。このうちストレプトミセス属に属する微生物の生産
する抗腫瘍性抗生物質としてはアクチノマイシンＤ、マ
イトマイシンＣ、ブレオマイシン、アドリアマイシン等
が知られている。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】本発明は抗腫瘍活性を
有する有用な新規抗生物質を得ることを目的とする。
有する有用な新規抗生物質を得ることを目的とする。
【０００４】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、微生物の
生産物中に有用な新規な生理活性物質を見いだす目的
で、天然の土壌より数多くの微生物を単離し、その生産
物について種々の研究を行った。
生産物中に有用な新規な生理活性物質を見いだす目的
で、天然の土壌より数多くの微生物を単離し、その生産
物について種々の研究を行った。
【０００５】その研究の結果、本発明者らは、土壌より
分離したストレプトミセス属に属する微生物であるＭＪ
６５４−ＮＦ４株の培養液中に抗腫瘍活性を有する抗生
物質、ＭＪ６５４−ＮＦ４物質が生産され蓄積されてい
ることを認め、その物質を単離して物理化学的性状と生
物学的活性を調べ、この物質が抗腫瘍活性を有する新規
化合物であることを見いだして本発明を完成した。
分離したストレプトミセス属に属する微生物であるＭＪ
６５４−ＮＦ４株の培養液中に抗腫瘍活性を有する抗生
物質、ＭＪ６５４−ＮＦ４物質が生産され蓄積されてい
ることを認め、その物質を単離して物理化学的性状と生
物学的活性を調べ、この物質が抗腫瘍活性を有する新規
化合物であることを見いだして本発明を完成した。
【０００６】本発明を概説すれば、本発明は抗腫瘍活性
を有する新規な制癌性抗生物質、ＭＪ６５４−ＮＦ４物
質及びその製造法を提供するものである。
を有する新規な制癌性抗生物質、ＭＪ６５４−ＮＦ４物
質及びその製造法を提供するものである。
【０００７】詳しく言えば、第１の本発明によると、下
記の物理化学的性状を有する新規な制癌性抗生物質、Ｍ
Ｊ６５４−ＮＦ４物質及びその塩が提供される。
記の物理化学的性状を有する新規な制癌性抗生物質、Ｍ
Ｊ６５４−ＮＦ４物質及びその塩が提供される。
【０００８】〔１〕ＭＪ６５４−ＮＦ４物質の物理化学
的性質 （１）物質の色および性状：黄褐色飴状である。 （２）分子式：Ｃ21Ｈ33Ｏ7 Ｐ 高分解ＦＡＢ−ＭＳ〔Neg.〕により決定した。 Ｃ21Ｈ33Ｏ7 Ｐ〔Ｍ−Ｈ〕- として 実測値 ４２７．１８９８ 計算値 ４２７．１８８６ なお、基準物質はＰＥＧ４００を用いた。 （３）分子量：４２８ ＦＡＢ−ＭＳ：ｍ／ｚ ４２７〔Ｍ−Ｈ〕- ４５１〔Ｍ＋Ｎａ〕+ が観測された。
的性質 （１）物質の色および性状：黄褐色飴状である。 （２）分子式：Ｃ21Ｈ33Ｏ7 Ｐ 高分解ＦＡＢ−ＭＳ〔Neg.〕により決定した。 Ｃ21Ｈ33Ｏ7 Ｐ〔Ｍ−Ｈ〕- として 実測値 ４２７．１８９８ 計算値 ４２７．１８８６ なお、基準物質はＰＥＧ４００を用いた。 （３）分子量：４２８ ＦＡＢ−ＭＳ：ｍ／ｚ ４２７〔Ｍ−Ｈ〕- ４５１〔Ｍ＋Ｎａ〕+ が観測された。
【０００９】（４）紫外線吸収スペクトル：
【００１０】５）赤外線吸収スペクトル（ＫＢｒ法）：
添付図面の図１に示す通りである。 （６） 1Ｈ−核磁気共鳴スペクトル (４００MHz)：添付
図面の図２に示す通りである。重メタノール中、内部基
準にテトラメチルシランを使用して測定した。 （７）13Ｃ−核磁気共鳴スペクトル (１００MHz)：添付
図面の図３に示す通りである。重メタノール中、内部基
準にテトラメチルシランを使用して測定した。 （８）溶解性：メタノール、クロロホルム、ジメチルス
ルホキシドに可溶。ヘキサン及び水に難溶である。
添付図面の図１に示す通りである。 （６） 1Ｈ−核磁気共鳴スペクトル (４００MHz)：添付
図面の図２に示す通りである。重メタノール中、内部基
準にテトラメチルシランを使用して測定した。 （７）13Ｃ−核磁気共鳴スペクトル (１００MHz)：添付
図面の図３に示す通りである。重メタノール中、内部基
準にテトラメチルシランを使用して測定した。 （８）溶解性：メタノール、クロロホルム、ジメチルス
ルホキシドに可溶。ヘキサン及び水に難溶である。
【００１１】（９）薄層クロマトグラフィー： Ｒｆ値は０．２９である。 吸着剤：シリカゲル（メルク社製、Ａｒｔ ５５５４） 展開溶媒：ｎ−ブタノール：酢酸：水（４：１：１） (10) 呈色反応：アニスアルデヒド−硫酸、リンモリブ
デン酸、塩化第二鉄の反応に対して陽性、ニンヒドリン
反応に対して陰性である。
デン酸、塩化第二鉄の反応に対して陽性、ニンヒドリン
反応に対して陰性である。
【００１２】〔２〕ＭＪ６５４−ＮＦ４物質の生物学的
活性 第１の本発明によるＭＪ６５４−ＮＦ４物質は、種々の
癌細胞の増殖に対し阻害活性を示した。更に、in vivo
においてマウス白血病Ｌ−１２１０癌細胞を腹腔内に移
植したマウスの実験系において延命効果を示した。ま
た、in vivo においてマウス黒色腫Ｂ１６癌細胞を静脈
内に移植したマウスの実験肺転移系においてＢ１６癌細
胞の肺転移に対し抑制効果を示した。
活性 第１の本発明によるＭＪ６５４−ＮＦ４物質は、種々の
癌細胞の増殖に対し阻害活性を示した。更に、in vivo
においてマウス白血病Ｌ−１２１０癌細胞を腹腔内に移
植したマウスの実験系において延命効果を示した。ま
た、in vivo においてマウス黒色腫Ｂ１６癌細胞を静脈
内に移植したマウスの実験肺転移系においてＢ１６癌細
胞の肺転移に対し抑制効果を示した。
【００１３】以上要約すると、本発明によるＭＪ６５４
−ＮＦ４物質はある種の癌細胞に対して抗癌活性を有し
て有用な抗癌剤としての用途がある。
−ＮＦ４物質はある種の癌細胞に対して抗癌活性を有し
て有用な抗癌剤としての用途がある。
【００１４】第１の本発明によるＭＪ６５４−ＮＦ４物
質の生理活性を後記の試験例で評価した。
質の生理活性を後記の試験例で評価した。
【００１５】試験例１ 各種の癌細胞に対する増殖阻害活性 各種の動物癌細胞を培養し、これら培養癌細胞に対する
本発明の制癌性抗生物質の増殖阻害活性 (IC50) 値を測
定し、その結果を表１に示す。
本発明の制癌性抗生物質の増殖阻害活性 (IC50) 値を測
定し、その結果を表１に示す。
【００１６】
【表１】
【００１７】試験例２ マウスの白血病Ｌ−１２１０癌細胞に対する制癌効果 ＣＤＦ1 マウスにＬ−１２１０癌細胞（１×１０5 個／
マウス）を腹腔内に移植し、供試化合物としてＭＪ６５
４−ＮＦ４物質は移植後１〜９日目まで腹腔内に注射し
た。生理食塩水を投与した対照群のマウスの生存日を１
００とした場合の次式で算出される延命率（％）で評価
した。 延命率（％）＝Ｔ／Ｃ×１００ ただし、Ｔは供試化合物を投与した時の生存日を表し、
Ｃは供試化合物無投与の時の生存日を表す。結果を表２
に示す。
マウス）を腹腔内に移植し、供試化合物としてＭＪ６５
４−ＮＦ４物質は移植後１〜９日目まで腹腔内に注射し
た。生理食塩水を投与した対照群のマウスの生存日を１
００とした場合の次式で算出される延命率（％）で評価
した。 延命率（％）＝Ｔ／Ｃ×１００ ただし、Ｔは供試化合物を投与した時の生存日を表し、
Ｃは供試化合物無投与の時の生存日を表す。結果を表２
に示す。
【００１８】
【表２】
【００１９】試験例３ マウスのメラノーマＢ１６細胞の高転移株癌細胞に対す
る肺転移阻害効果 ＢＤＦ1 マウスにメラノーマＢ１６細胞（５×１０5 個
／マウス）を静脈内に移植し、供試化合物としてＭＪ６
５４−ＮＦ４物質は移植後１〜９日目まで腹腔内に注射
した。移植後２０日目に肺を摘出し、メタノール固定を
行い顕微鏡下にて細胞集団を数えた。この抑制効果は次
式で算出される阻害率（％）で評価した。
る肺転移阻害効果 ＢＤＦ1 マウスにメラノーマＢ１６細胞（５×１０5 個
／マウス）を静脈内に移植し、供試化合物としてＭＪ６
５４−ＮＦ４物質は移植後１〜９日目まで腹腔内に注射
した。移植後２０日目に肺を摘出し、メタノール固定を
行い顕微鏡下にて細胞集団を数えた。この抑制効果は次
式で算出される阻害率（％）で評価した。
【００２０】阻害率（％）＝１００−（Ｔ／Ｃ×１０
０） ただし、Ｔは供試化合物を投与した時の肺転移したメラ
ノーマＢ１６細胞数を表し、Ｃは供試化合物無投与の時
の肺転移したメラノーマＢ１６細胞数を表す。その結果
を表３に示す。
０） ただし、Ｔは供試化合物を投与した時の肺転移したメラ
ノーマＢ１６細胞数を表し、Ｃは供試化合物無投与の時
の肺転移したメラノーマＢ１６細胞数を表す。その結果
を表３に示す。
【００２１】
【表３】
【００２２】更に、第２の発明によると、ストレプトミ
セス属に属する抗生物質ＭＪ６５４−ＮＦ４物質生産菌
を培養し、その培養物からＭＪ６５４−ＮＦ４物質を採
取することを特徴とする、抗腫瘍活性を有する新規制癌
性抗生物質、ＭＪ６５４−ＮＦ４物質の製造法が提供さ
れる。
セス属に属する抗生物質ＭＪ６５４−ＮＦ４物質生産菌
を培養し、その培養物からＭＪ６５４−ＮＦ４物質を採
取することを特徴とする、抗腫瘍活性を有する新規制癌
性抗生物質、ＭＪ６５４−ＮＦ４物質の製造法が提供さ
れる。
【００２３】本発明の方法に用いるＭＪ６５４−ＮＦ４
物質生産菌はストレプトミセス属の菌株でＭＪ６５４−
ＮＦ４物質生産能を有するものであれば良く特に限定さ
れない。使用できるＭＪ６５４−ＮＦ４物質生産菌の一
例には、茨城県つくば学園都市で採取された土壌より分
離された放線菌でＭＪ６５４−ＮＦ４物質の菌株番号が
付された菌株がある。
物質生産菌はストレプトミセス属の菌株でＭＪ６５４−
ＮＦ４物質生産能を有するものであれば良く特に限定さ
れない。使用できるＭＪ６５４−ＮＦ４物質生産菌の一
例には、茨城県つくば学園都市で採取された土壌より分
離された放線菌でＭＪ６５４−ＮＦ４物質の菌株番号が
付された菌株がある。
【００２４】以下、ＭＪ６５４−ＮＦ４株の菌学的性状
について述べる。 １．形態 ＭＪ６５４−ＮＦ４株は、分枝した基生菌糸より気菌糸
を伸長し、その先端は２〜５回転のらせんを形成する。
輪生枝及び胞子のうは認められない。成熟した胞子鎖に
は３０個以上の円筒形の胞子の連鎖を認め、胞子の大き
さは約0.7 〜0.8 ×1.1 〜1.3 ミクロンであった。な
お、胞子の表面は平滑である。
について述べる。 １．形態 ＭＪ６５４−ＮＦ４株は、分枝した基生菌糸より気菌糸
を伸長し、その先端は２〜５回転のらせんを形成する。
輪生枝及び胞子のうは認められない。成熟した胞子鎖に
は３０個以上の円筒形の胞子の連鎖を認め、胞子の大き
さは約0.7 〜0.8 ×1.1 〜1.3 ミクロンであった。な
お、胞子の表面は平滑である。
【００２５】２．各種培地における生育状態 色の記載について〔 〕内に示す標準は、コンティナー
・コーポレーション・オブ・アメリカのカラー・ハーモ
ニー・マニュアル(Container Corporation ofAmerica
の color harmony manual)を用いた。
・コーポレーション・オブ・アメリカのカラー・ハーモ
ニー・マニュアル(Container Corporation ofAmerica
の color harmony manual)を用いた。
【００２６】（１）シュクロース・硝酸塩寒天培地（２
７℃培養） 無色の発育上に明るい茶灰〔3dc, Natural〕の気菌糸を
うっすらと着生し、溶解性色素は認められない。 （２）グルコース・アスパラギン寒天培地（２７℃培
養） うす黄〔1ga, Lt Lemon Yellow〕〜うす黄茶〔3gc, Lt
Tan 〕の発育上に、明るい灰〔3fe, Silver Gray〕の気
菌糸を部分的に着生し、溶解性色素は認められない。 （３）グリセリン・アスパラギン寒天培地（ＩＳＰ−培
地５、２７℃培養） うす黄〔3gc, Lt Tan 〜3le, Cinnamon 〕の発育上に、
明るい茶灰〔3dc, Natural〕〜明るい灰〔3fe, Silver
Gray〕の気菌糸を着生する。培養後２１日目頃より、気
菌糸の湿潤化が観察される。溶解性色素は認められな
い。 （４）スターチ・無機塩寒天培地（ＩＳＰ−培地４、２
７℃培養） うす黄〔2gc, Bamboo 〕の発育上に、白〜明るい灰〔3f
e, Silver Gray〕の気菌糸を部分的に着生するが、培養
後１０日目頃より湿潤化し、黒色を呈する。溶解性色素
は認められない。
７℃培養） 無色の発育上に明るい茶灰〔3dc, Natural〕の気菌糸を
うっすらと着生し、溶解性色素は認められない。 （２）グルコース・アスパラギン寒天培地（２７℃培
養） うす黄〔1ga, Lt Lemon Yellow〕〜うす黄茶〔3gc, Lt
Tan 〕の発育上に、明るい灰〔3fe, Silver Gray〕の気
菌糸を部分的に着生し、溶解性色素は認められない。 （３）グリセリン・アスパラギン寒天培地（ＩＳＰ−培
地５、２７℃培養） うす黄〔3gc, Lt Tan 〜3le, Cinnamon 〕の発育上に、
明るい茶灰〔3dc, Natural〕〜明るい灰〔3fe, Silver
Gray〕の気菌糸を着生する。培養後２１日目頃より、気
菌糸の湿潤化が観察される。溶解性色素は認められな
い。 （４）スターチ・無機塩寒天培地（ＩＳＰ−培地４、２
７℃培養） うす黄〔2gc, Bamboo 〕の発育上に、白〜明るい灰〔3f
e, Silver Gray〕の気菌糸を部分的に着生するが、培養
後１０日目頃より湿潤化し、黒色を呈する。溶解性色素
は認められない。
【００２７】（５）チロシン寒天培地（ＩＳＰ−培地
７、２７℃培養） うす茶〔4gc, Nude Tan 〜4ie, Cork Tan 〕の発育上
に、明るい茶灰〔3dc,Natural〕〜明るい灰〔3fe, Silv
er Gray〕の気菌糸を着生する。培養後２１日目頃より
湿潤化し、黒色を呈する。溶解性色素はわずかに茶色味
を帯びる。 （６）栄養寒天培地（２７℃培養） 発育はうす黄〔2gc, Bamboo 〕、気菌糸は着生せず、溶
解性色素も認められない。 （７）イースト・麦芽寒天培地（ＩＳＰ−培地２、２７
℃培養） うす黄茶〔3ie, Camel〜3le, Cinnamon 〕の発育上に、
明るい灰〔3fe,SilverGray〕の気菌糸を着生するが、培
養後１４日目頃より湿潤化し、黒色を呈する。溶解性色
素は認められない。 （８）オートミール寒天培地（ＩＳＰ−培地３、２７℃
培養） うす黄〔2ca, Lt Ivory 〜2gc, Bamboo 〕の発育上に、
明るい灰〔3fe, Silver Gray 〕の気菌糸を着生する
が、培養後１０日目頃より湿潤化し、黒色を呈する。溶
解性色素は認められない。 （９）グリセリン・硝酸塩寒天培地（２７℃培養） 無色〜うす黄の発育上に白の気菌糸をわずかに着生し、
溶解性色素は認められい。 （10）スターチ寒天培地（２７℃培養） 発育はうす黄色〔1ca, Pale Yellow〜1ea, Canary Yell
ow〕、気菌糸は着生せず、溶解性色素は認められない。
７、２７℃培養） うす茶〔4gc, Nude Tan 〜4ie, Cork Tan 〕の発育上
に、明るい茶灰〔3dc,Natural〕〜明るい灰〔3fe, Silv
er Gray〕の気菌糸を着生する。培養後２１日目頃より
湿潤化し、黒色を呈する。溶解性色素はわずかに茶色味
を帯びる。 （６）栄養寒天培地（２７℃培養） 発育はうす黄〔2gc, Bamboo 〕、気菌糸は着生せず、溶
解性色素も認められない。 （７）イースト・麦芽寒天培地（ＩＳＰ−培地２、２７
℃培養） うす黄茶〔3ie, Camel〜3le, Cinnamon 〕の発育上に、
明るい灰〔3fe,SilverGray〕の気菌糸を着生するが、培
養後１４日目頃より湿潤化し、黒色を呈する。溶解性色
素は認められない。 （８）オートミール寒天培地（ＩＳＰ−培地３、２７℃
培養） うす黄〔2ca, Lt Ivory 〜2gc, Bamboo 〕の発育上に、
明るい灰〔3fe, Silver Gray 〕の気菌糸を着生する
が、培養後１０日目頃より湿潤化し、黒色を呈する。溶
解性色素は認められない。 （９）グリセリン・硝酸塩寒天培地（２７℃培養） 無色〜うす黄の発育上に白の気菌糸をわずかに着生し、
溶解性色素は認められい。 （10）スターチ寒天培地（２７℃培養） 発育はうす黄色〔1ca, Pale Yellow〜1ea, Canary Yell
ow〕、気菌糸は着生せず、溶解性色素は認められない。
【００２８】（11）リンゴ酸石灰寒天培地（２７℃培
養） 無色の発育上に、白の気菌糸をうっすらと着生し、溶解
性色素は認められない。 （12）セルロース（濾紙片添加合成液。２７℃培養） ３６日間の培養では生育しなかった。 （13）ゼラチン穿刺培養 １５％単純ゼラチン培地（２０℃培養）では、発育はう
す黄、気菌糸は着生せず、溶解性色素は認められない。
グルコース・ペプトン・ゼラチン培地（２７℃培養）の
場合、発育はうす黄〜うすだいだい、気菌糸は着生せ
ず、溶解性色素も認められない。 （14）脱脂牛乳（３７℃培養） 発育はうす黄、気菌糸は着生せず、溶解性色素も認めら
れない。
養） 無色の発育上に、白の気菌糸をうっすらと着生し、溶解
性色素は認められない。 （12）セルロース（濾紙片添加合成液。２７℃培養） ３６日間の培養では生育しなかった。 （13）ゼラチン穿刺培養 １５％単純ゼラチン培地（２０℃培養）では、発育はう
す黄、気菌糸は着生せず、溶解性色素は認められない。
グルコース・ペプトン・ゼラチン培地（２７℃培養）の
場合、発育はうす黄〜うすだいだい、気菌糸は着生せ
ず、溶解性色素も認められない。 （14）脱脂牛乳（３７℃培養） 発育はうす黄、気菌糸は着生せず、溶解性色素も認めら
れない。
【００２９】３．生理的性質 （１）生育温度範囲 グルコース・アスパラギン寒天培地（グルコース 1.0
％、Ｌ−アスパラギン0.05 ％、リン酸水素二カリウム
0.05％、ひも寒天 3.0 ％、ｐＨ6.8 〜7.0）を用
い、１０℃、２０℃、２４℃、２７℃、３０℃、３７
℃、５０℃の各温度で試験した結果、１０℃、５０℃を
除き、そのいずれの温度でも成育する。生育至適温度は
２７℃〜３０℃付近と思われる。
％、Ｌ−アスパラギン0.05 ％、リン酸水素二カリウム
0.05％、ひも寒天 3.0 ％、ｐＨ6.8 〜7.0）を用
い、１０℃、２０℃、２４℃、２７℃、３０℃、３７
℃、５０℃の各温度で試験した結果、１０℃、５０℃を
除き、そのいずれの温度でも成育する。生育至適温度は
２７℃〜３０℃付近と思われる。
【００３０】（２）ゼラチンの液化（１５％単純ゼラチ
ン培地、２０℃培養；グルコース・ペプトン・ゼラチン
培地、２７℃培養） １５％単純ゼラチン培地の場合、培養後１０日目頃より
液化を認めるが、その作用は極めて弱く、２５日目後も
液化の進行はほとんど認められない。グルコース・ペプ
トン・ゼラチン培地では培養後２１日目頃より液化が始
まり、極めてゆっくりと進行し、その作用は弱い。
ン培地、２０℃培養；グルコース・ペプトン・ゼラチン
培地、２７℃培養） １５％単純ゼラチン培地の場合、培養後１０日目頃より
液化を認めるが、その作用は極めて弱く、２５日目後も
液化の進行はほとんど認められない。グルコース・ペプ
トン・ゼラチン培地では培養後２１日目頃より液化が始
まり、極めてゆっくりと進行し、その作用は弱い。
【００３１】（３）スターチの加水分解（スターチ・無
機塩寒天培地、ＩＳＰ−培地４及びスターチ寒天培地、
いずれも２７℃培養） いずれの培地においても培養後３日目頃より水解性は認
められ、その作用は強い。 （４）脱脂牛乳の凝固・ペプトン化（脱脂牛乳、３７℃
培養） 培養後、１２日目頃より凝固状を呈し、２〜３日で完了
後、ペプトン化が始まるが、その作用は弱い。 （５）メラニン様色素の生成（トリプトン・イースト・
ブロス、ＩＳＰ−培地１；ペプトン・イースト・鉄寒天
培地、ＩＳＰ−培地６；チロシン寒天培地、ＩＳＰ−培
地７；いずれも２７℃培養） いずれの培地でも陰性である。
機塩寒天培地、ＩＳＰ−培地４及びスターチ寒天培地、
いずれも２７℃培養） いずれの培地においても培養後３日目頃より水解性は認
められ、その作用は強い。 （４）脱脂牛乳の凝固・ペプトン化（脱脂牛乳、３７℃
培養） 培養後、１２日目頃より凝固状を呈し、２〜３日で完了
後、ペプトン化が始まるが、その作用は弱い。 （５）メラニン様色素の生成（トリプトン・イースト・
ブロス、ＩＳＰ−培地１；ペプトン・イースト・鉄寒天
培地、ＩＳＰ−培地６；チロシン寒天培地、ＩＳＰ−培
地７；いずれも２７℃培養） いずれの培地でも陰性である。
【００３２】（６）炭素源の利用性（プリドハム・ゴド
リーブ寒天培地、ＩＳＰ−培地９、２７℃培養） Ｄ−グルコース、Ｌ−アラビノース、Ｄ−フラクトース
を利用して発育し、イノシトール、ラムノース、ラフィ
ノース、Ｄ−マンニトール、ラクトースは利用しない。
シュクロースはおそらく利用しないと思われ、Ｄ−キシ
ロースの利用は判然としない。
リーブ寒天培地、ＩＳＰ−培地９、２７℃培養） Ｄ−グルコース、Ｌ−アラビノース、Ｄ−フラクトース
を利用して発育し、イノシトール、ラムノース、ラフィ
ノース、Ｄ−マンニトール、ラクトースは利用しない。
シュクロースはおそらく利用しないと思われ、Ｄ−キシ
ロースの利用は判然としない。
【００３３】（７）リンゴ酸石灰の溶解（リンゴ酸石灰
寒天培地２７℃培養） 陰性である。 （８）硝酸塩の還元反応（0.1 ％硝酸カリウム含有ペプ
トン水、ＩＳＰ−培地８、２７℃培養） おそらく陽性である。 （９）セルロースの分解（濾紙片添加合成液、２７℃培
養） ３６日間培養の観察で分解は認められない。
寒天培地２７℃培養） 陰性である。 （８）硝酸塩の還元反応（0.1 ％硝酸カリウム含有ペプ
トン水、ＩＳＰ−培地８、２７℃培養） おそらく陽性である。 （９）セルロースの分解（濾紙片添加合成液、２７℃培
養） ３６日間培養の観察で分解は認められない。
【００３４】以上の性状を要約すると、ＭＪ６５４−Ｎ
Ｆ４株は、その形態上、気菌糸がらせんを形成し、輪生
枝及び胞子のうは認められない。成熟した胞子鎖には３
０個以上の円筒形の胞子を連鎖し、その表面は平滑であ
る。種々の培地で、発育はうす黄〜うす黄茶、気菌糸は
明るい灰を呈し、湿潤化が観察される。溶解性色素は認
められない。生育至適温度は２７℃〜３０℃付近であ
る。メラニン様色素の生成は陰性、スターチの水解性は
強いほう、蛋白の分解力は弱い。なお、細胞壁に含まれ
る２，６−ジアミノピメリン酸はＬＬ−型であった。
Ｆ４株は、その形態上、気菌糸がらせんを形成し、輪生
枝及び胞子のうは認められない。成熟した胞子鎖には３
０個以上の円筒形の胞子を連鎖し、その表面は平滑であ
る。種々の培地で、発育はうす黄〜うす黄茶、気菌糸は
明るい灰を呈し、湿潤化が観察される。溶解性色素は認
められない。生育至適温度は２７℃〜３０℃付近であ
る。メラニン様色素の生成は陰性、スターチの水解性は
強いほう、蛋白の分解力は弱い。なお、細胞壁に含まれ
る２，６−ジアミノピメリン酸はＬＬ−型であった。
【００３５】これらの性状より、ＭＪ６５４−ＮＦ４株
は、ストレプトミセス(Streptomyces)属に属すると考え
られる。近縁の既知菌種を検索するとストレプトミセス
・シラツス(Streptomyces cirratus, The Journal of A
ntibiotics A，16巻、59頁、1963年) 、ストレプトミセ
ス・フミズス(Streptomyces humidus, InternationalJo
urnal of Systematic Bacteriology, 18巻、 334頁、19
68年) 、ストレプトミセス・エンズス(Streptomyces en
dus, International Journal of SystematicBacteriolo
gy, 18巻、 316頁、1968年) 及びストレプトミセス・ハ
イグロスコピカス(Streptomyces hygroscospicus, Inte
rnational Journal of SystematicBacteriology, 22
巻、 307頁、1972年) があげられた。現在、上記４種の
当研究所保存菌株とＭＪ６５４−ＮＦ４株とを実地に比
較検討中である。そこで現時点では、ＭＪ６５４−ＮＦ
４株をストレプトミセス・エスピー(Streptomyces sp.)
ＭＪ６５４−ＮＦ４とする。なお、ＭＪ６５４−ＮＦ４
株をつくば市所在の工業技術院生命工学工業技術研究所
に寄託申請し、平成５年４月１２日、ＦＥＲＭＰ−１３
６００として受託された。
は、ストレプトミセス(Streptomyces)属に属すると考え
られる。近縁の既知菌種を検索するとストレプトミセス
・シラツス(Streptomyces cirratus, The Journal of A
ntibiotics A，16巻、59頁、1963年) 、ストレプトミセ
ス・フミズス(Streptomyces humidus, InternationalJo
urnal of Systematic Bacteriology, 18巻、 334頁、19
68年) 、ストレプトミセス・エンズス(Streptomyces en
dus, International Journal of SystematicBacteriolo
gy, 18巻、 316頁、1968年) 及びストレプトミセス・ハ
イグロスコピカス(Streptomyces hygroscospicus, Inte
rnational Journal of SystematicBacteriology, 22
巻、 307頁、1972年) があげられた。現在、上記４種の
当研究所保存菌株とＭＪ６５４−ＮＦ４株とを実地に比
較検討中である。そこで現時点では、ＭＪ６５４−ＮＦ
４株をストレプトミセス・エスピー(Streptomyces sp.)
ＭＪ６５４−ＮＦ４とする。なお、ＭＪ６５４−ＮＦ４
株をつくば市所在の工業技術院生命工学工業技術研究所
に寄託申請し、平成５年４月１２日、ＦＥＲＭＰ−１３
６００として受託された。
【００３６】次に、第２の本発明の方法による新規制癌
性抗生物質、ＭＪ６５４−ＮＦ４物質の製造法について
説明する。
性抗生物質、ＭＪ６５４−ＮＦ４物質の製造法について
説明する。
【００３７】本発明による抗生物質、ＭＪ６５４−ＮＦ
４物質はストレプトミセス属に属するＭＪ６５４−ＮＦ
４物質生産菌を適当な培地で培養することにより、好ま
しくは好気的条件下に培養することにより、培地中に目
的物質を産生、蓄積させ次いで培養物から目的物質を採
取することにより製造することができる。
４物質はストレプトミセス属に属するＭＪ６５４−ＮＦ
４物質生産菌を適当な培地で培養することにより、好ま
しくは好気的条件下に培養することにより、培地中に目
的物質を産生、蓄積させ次いで培養物から目的物質を採
取することにより製造することができる。
【００３８】培地はＭＪ６５４−ＮＦ４物質生産菌が利
用しうる任意の栄養源を含有するものでありうる。例え
ば、炭素源としてグルコース、マルトース、スターチ、
ダイズ油、グリセロールなどが使用でき、窒素源として
は、大豆粉、酵母エキス、小麦胚芽油、フィッシュミー
ル、グルテンミール、トーストソーヤ、プロリッチなど
が使用できる。又必要に応じて食塩、炭酸カルシウム、
リン酸塩、重金属塩などの無機塩類を添加することがで
きる。その他、必要に応じて適当な消泡剤、例えばシリ
コーン系消泡剤を添加することもできる。
用しうる任意の栄養源を含有するものでありうる。例え
ば、炭素源としてグルコース、マルトース、スターチ、
ダイズ油、グリセロールなどが使用でき、窒素源として
は、大豆粉、酵母エキス、小麦胚芽油、フィッシュミー
ル、グルテンミール、トーストソーヤ、プロリッチなど
が使用できる。又必要に応じて食塩、炭酸カルシウム、
リン酸塩、重金属塩などの無機塩類を添加することがで
きる。その他、必要に応じて適当な消泡剤、例えばシリ
コーン系消泡剤を添加することもできる。
【００３９】培養方法としては、一般に行われている生
理活性物質の生産のための醗酵的方法であればよく、Ｍ
Ｊ６５４−ＮＦ４物質の製造には好気的液体深部培養法
が適している。培養温度はＭＪ６５４−ＮＦ４物質生産
菌が発育しＭＪ６５４−ＮＦ４物質を生産する範囲で使
用でき通常２７〜３２℃である。培養は以上述べた条件
を使用しＭＪ６５４−ＮＦ４物質生産菌の性質に応じて
適宜選択して行うことができる。このようにしてＭＪ６
５４−ＮＦ４物質の蓄積された培養物が得られる。培養
物中ではＭＪ６５４−ＮＦ４物質は菌体中および培養液
中に存在するが、特に培養濾液中により多く存在する。
理活性物質の生産のための醗酵的方法であればよく、Ｍ
Ｊ６５４−ＮＦ４物質の製造には好気的液体深部培養法
が適している。培養温度はＭＪ６５４−ＮＦ４物質生産
菌が発育しＭＪ６５４−ＮＦ４物質を生産する範囲で使
用でき通常２７〜３２℃である。培養は以上述べた条件
を使用しＭＪ６５４−ＮＦ４物質生産菌の性質に応じて
適宜選択して行うことができる。このようにしてＭＪ６
５４−ＮＦ４物質の蓄積された培養物が得られる。培養
物中ではＭＪ６５４−ＮＦ４物質は菌体中および培養液
中に存在するが、特に培養濾液中により多く存在する。
【００４０】ＭＪ６５４−ＮＦ４物質の採取に当って
は、培養濾液より酢酸エチル、ｎ−ブタノール等の有機
溶媒でＭＪ６５４−ＮＦ４物質を抽出することができ
る。この抽出液を減圧下濃縮し、遠心液液分配クロマト
グラフィー、適当な吸着剤を用いたクロマトグラフィー
および高速液体クロマトグラフィーなどを適宜組み合わ
せることによってＭＪ６５４−ＮＦ４物質を単離、精製
して純粋に採取することができる。
は、培養濾液より酢酸エチル、ｎ−ブタノール等の有機
溶媒でＭＪ６５４−ＮＦ４物質を抽出することができ
る。この抽出液を減圧下濃縮し、遠心液液分配クロマト
グラフィー、適当な吸着剤を用いたクロマトグラフィー
および高速液体クロマトグラフィーなどを適宜組み合わ
せることによってＭＪ６５４−ＮＦ４物質を単離、精製
して純粋に採取することができる。
【００４１】
【実施例】以下、本発明を実施例により更に具体的に説
明するが、本発明はこれら実施例に限定されるものでは
ない。
明するが、本発明はこれら実施例に限定されるものでは
ない。
【００４２】実施例１ （１）種母の調製 種母の調製に使用した培地は下記の成分を１ｌの水に溶
解した組成をもつものである。 可溶性スターチ ４％ エビオス ４％ ポリペプトン ０．５％ Ｋ2 ＨＰＯ4 ０．３％ ＫＨ2 ＰＯ4 ０．１％ ＭｇＳＯ4 ・７Ｈ2 Ｏ ０．２％ ＮａＣｌ ０．２％ ＣａＣＯ3 ０．１％シリコーン
解した組成をもつものである。 可溶性スターチ ４％ エビオス ４％ ポリペプトン ０．５％ Ｋ2 ＨＰＯ4 ０．３％ ＫＨ2 ＰＯ4 ０．１％ ＭｇＳＯ4 ・７Ｈ2 Ｏ ０．２％ ＮａＣｌ ０．２％ ＣａＣＯ3 ０．１％シリコーン
【００４３】上記培地１１０ｍｌを５００ｍｌのワッフ
ル付三角フラスコに分注し、ＭＪ６５４−ＮＦ４株（Ｆ
ＥＲＭ Ｐ−１３６００）をスラントより１白金耳摂取
し、上記培地に接種して３０℃で３日間培養した。
ル付三角フラスコに分注し、ＭＪ６５４−ＮＦ４株（Ｆ
ＥＲＭ Ｐ−１３６００）をスラントより１白金耳摂取
し、上記培地に接種して３０℃で３日間培養した。
【００４４】（２）培養 ＭＪ６５４−ＮＦ４物質の醗酵的製造に使用した培地
は、下記の成分を１ｌの水に溶解した組成をもつもので
ある。 エスサンミート ２．５％ Ｋ2 ＨＰＯ4 ０．０５％ ＭｇＳＯ4 ・７Ｈ2 Ｏ ０．０５％ 大豆油 ２％ マルトース １％酵母エキス ０．２％
は、下記の成分を１ｌの水に溶解した組成をもつもので
ある。 エスサンミート ２．５％ Ｋ2 ＨＰＯ4 ０．０５％ ＭｇＳＯ4 ・７Ｈ2 Ｏ ０．０５％ 大豆油 ２％ マルトース １％酵母エキス ０．２％
【００４５】上記培地を１１０ｍｌずつ５００ｍｌの三
角フラスコへ分注したものへ、上記種母２．２ｍｌを添
加し、ロータリーシェーカーを用いて２７℃、１８０ｒ
ｐｍにて３日間振盪培養した。
角フラスコへ分注したものへ、上記種母２．２ｍｌを添
加し、ロータリーシェーカーを用いて２７℃、１８０ｒ
ｐｍにて３日間振盪培養した。
【００４６】（３）ＭＪ６５４−ＮＦ４物質の採取 上記（２）の条件で３日間培養の後、得られた培養液約
１０ｌをとり、遠心分離により菌体を除去し、培養濾液
を酢酸エチルで２回抽出し抽出液を減圧下濃縮し0.8 ｇ
の粗物質を得た。この粗物質を遠心液液分配クロマトグ
ラフィー（三鬼エンヂニアリング社製、分配液、クロロ
ホルム：メタノール：水＝２：２：１）移動相として上
層、回転数４００ｒｐｍ、流量１ｍｌ／分の条件で溶出
分画し活性分画を集め、減圧下濃縮した。
１０ｌをとり、遠心分離により菌体を除去し、培養濾液
を酢酸エチルで２回抽出し抽出液を減圧下濃縮し0.8 ｇ
の粗物質を得た。この粗物質を遠心液液分配クロマトグ
ラフィー（三鬼エンヂニアリング社製、分配液、クロロ
ホルム：メタノール：水＝２：２：１）移動相として上
層、回転数４００ｒｐｍ、流量１ｍｌ／分の条件で溶出
分画し活性分画を集め、減圧下濃縮した。
【００４７】このようにして得られた粗精製物質１２７
ｍｇをメタノールに溶解し、その一定量をカプセルパッ
ク５Ｃ18（資生堂社製）のカラム（２０ｍｍφ×２５０
ｍｍ）を用いた高速液体クロマトグラフィーにかけ、展
開溶媒としてメタノール−水（６０：４０）にて溶出し
ＭＪ６５４−ＮＦ４物質含有フラクションを得た。これ
らを減圧下濃縮後、少量のメタノールに溶解しセファデ
ックスＬＨ−２０を担体としたゲル濾過クロマトグラフ
ィーに付し、ＭＪ６５４−ＮＦ４物質を含むフラクショ
ンを集め、減圧下濃縮乾燥するとＭＪ６５４−ＮＦ４物
質が黄褐色飴状物質18.9ｍｇとして得られた。
ｍｇをメタノールに溶解し、その一定量をカプセルパッ
ク５Ｃ18（資生堂社製）のカラム（２０ｍｍφ×２５０
ｍｍ）を用いた高速液体クロマトグラフィーにかけ、展
開溶媒としてメタノール−水（６０：４０）にて溶出し
ＭＪ６５４−ＮＦ４物質含有フラクションを得た。これ
らを減圧下濃縮後、少量のメタノールに溶解しセファデ
ックスＬＨ−２０を担体としたゲル濾過クロマトグラフ
ィーに付し、ＭＪ６５４−ＮＦ４物質を含むフラクショ
ンを集め、減圧下濃縮乾燥するとＭＪ６５４−ＮＦ４物
質が黄褐色飴状物質18.9ｍｇとして得られた。
【００４８】
【発明の効果】以上、詳細に説明した通り、本発明によ
り抗腫瘍活性を有する新規抗生物質としてＭＪ６５４−
ＮＦ４物質が得られ、またその製造方法が提供された。
り抗腫瘍活性を有する新規抗生物質としてＭＪ６５４−
ＮＦ４物質が得られ、またその製造方法が提供された。
【図１】本発明のＭＪ６５４−ＮＦ４物質のKBr ディス
ク法による赤外部吸収スペクトル図である。
ク法による赤外部吸収スペクトル図である。
【図２】ＭＪ６５４−ＮＦ４物質の重メタノール中にお
ける４００MHz での 1Ｈ−ＮＭＲスペクトル図である。
ける４００MHz での 1Ｈ−ＮＭＲスペクトル図である。
【図３】ＭＪ６５４−ＮＦ４物質の重メタノール中にお
ける１００MHz での13Ｃ−ＮＭＲスペクトル図である。
ける１００MHz での13Ｃ−ＮＭＲスペクトル図である。
─────────────────────────────────────────────────────
【手続補正書】
【提出日】平成６年８月３日
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１８
【補正方法】変更
【補正内容】
【００１８】
【表２】
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１９
【補正方法】変更
【補正内容】
【００１９】マウスのメラノーマＢ１６細胞の高転移株
癌細胞に対する肺転移阻害効果 ＢＤＦ1 マウスにメラノーマＢ１６細胞（５×１０5 個
／マウス）を静脈内に移植し、供試化合物としてＭＪ６
５４−ＮＦ４物質は移植後１〜９日目又は１〜１９日目
まで腹腔内に注射した。移植後２０日目に肺を摘出し、
メタノール固定を行い顕微鏡下にて細胞集団を数えた。
この抑制効果は次式で算出される阻害率（％）で評価し
た。
癌細胞に対する肺転移阻害効果 ＢＤＦ1 マウスにメラノーマＢ１６細胞（５×１０5 個
／マウス）を静脈内に移植し、供試化合物としてＭＪ６
５４−ＮＦ４物質は移植後１〜９日目又は１〜１９日目
まで腹腔内に注射した。移植後２０日目に肺を摘出し、
メタノール固定を行い顕微鏡下にて細胞集団を数えた。
この抑制効果は次式で算出される阻害率（％）で評価し
た。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２１
【補正方法】変更
【補正内容】
【００２１】
【表３】
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 染野 哲也 埼玉県大宮市大字東新井710番地の50 (72)発明者 長縄 博 東京都大田区田園調布本町３番17号 (72)発明者 濱田 雅 東京都新宿区内藤町１番地26 秀和レジデ ンス405号 (72)発明者 前田 謙二 東京都目黒区五本木２丁目46番11号 (72)発明者 竹内 富雄 東京都品川区東五反田５丁目１番11号 ニ ューフジマンション701
Claims (3)
- 【請求項１】 下記の理化学的性状を有する新規な制癌
性抗生物質、ＭＪ６５４−ＮＦ４物質およびその塩。 （１）物質の性状：黄褐色飴状である。 （２）分子式：Ｃ21Ｈ33Ｏ7 Ｐ （３）分子量：４２８（ＦＡＢ−ＭＳ法により測定） （４）紫外線吸収スペクトル： （５）赤外線吸収スペクトル：添付図面の図１に示す通
りである。 （６） 1Ｈ−核磁気共鳴スペクトル (４００MHz)：添付
図面の図２に示す通りである。重メタノール中、内部基
準にテトラメチルシランを使用して測定した。 （７）13Ｃ−核磁気共鳴スペクトル (１００MHz)：添付
図面の図３に示す通りである。重メタノール中、内部基
準にテトラメチルシランを使用して測定した。 （８）溶解性：メタノール、クロロホルム、ジメチルス
ルホキシドに可溶であるがヘキサン及び水に難溶であ
る。 - 【請求項２】 ストレプトミセス属に属するＭＪ６５４
−ＮＦ４物質生産菌を培養し、その培養物から請求項１
に記載の制癌性抗生物質、ＭＪ６５４−ＮＦ４物質を採
取することを特徴とする新規制癌性抗生物質、ＭＪ６５
４−ＮＦ４物質の製造法。 - 【請求項３】 ＭＪ６５４−ＮＦ４物質生産菌がストレ
プトミセス・エスピー(Streptomyces sp.)ＭＪ６５４−
ＮＦ４株である請求項１記載の方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP13923193A JP3674955B2 (ja) | 1993-05-19 | 1993-05-19 | 新規制癌性抗生物質ｍｊ６５４−ｎｆ４物質及びその製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP13923193A JP3674955B2 (ja) | 1993-05-19 | 1993-05-19 | 新規制癌性抗生物質ｍｊ６５４−ｎｆ４物質及びその製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH06321978A true JPH06321978A (ja) | 1994-11-22 |
| JP3674955B2 JP3674955B2 (ja) | 2005-07-27 |
Family
ID=15240538
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP13923193A Expired - Lifetime JP3674955B2 (ja) | 1993-05-19 | 1993-05-19 | 新規制癌性抗生物質ｍｊ６５４−ｎｆ４物質及びその製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3674955B2 (ja) |
-
1993
- 1993-05-19 JP JP13923193A patent/JP3674955B2/ja not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP3674955B2 (ja) | 2005-07-27 |
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