JPH04316573A - 新規化合物ｃｆ‐２４、その使用および製造 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 【０００１】〔発明の背景〕 【産業上の利用分野】本発明は、新規物質に関し、更に
詳しくは抗腫瘍性を有する新規化合物ＣＦ−２４に関す
る。 【０００２】 【従来の技術】抗腫瘍物質に関しては、既に多数のもの
が医薬として実用化されている。一般に、化学物質の生
理活性はその化学構造に依存するところが大きいため、
抗腫瘍性を有する新規な化合物に対しては不断の希求が
あると言えよう。 【０００３】〔発明の概要〕 【発明が解決しようとする課題】本発明は、上記の希求
に応えるものである。すなわち、本発明は、抗腫瘍性を
有する新規化合物を提供することを目的とするものであ
る。 【０００４】 【課題を解決するための手段】本発明は、次式（Ｉ）で
示される化合物が抗腫瘍性を有することを見出すことに
より上記目的を達成した。すなわち、本発明による新規
化合物ＣＦ−２４は次式（Ｉ）で示されるものである。 【化２】 本発明は、また、この物質の使用に関する。すなわち、
本発明による抗腫瘍剤は、上記式（Ｉ）で示される化合
物ＣＦ−２４を有効成分として含むものである。本発明
は、更にまた、この物質の製造法に関する。すなわち、
本発明による上記式（Ｉ）で示されるＣＦ−２４の製造
法は、サッカロスリックス属に属しＣＦ−２４の生産能
を有する菌株を適当な培地で培養し、その培養物より化
合物ＣＦ−２４を得ること、を特徴とするものである。 【０００５】〔発明の具体的説明〕新規化合物ＣＦ−２
４ １）化学構造 本発明による新規化合物ＣＦ−２４は、前記の式（Ｉ）
で示される化学構造を有する。この化学構造は、次のよ
うにして決定されたものである。ＣＦ−２４のプロトン
核磁気共鳴スペクトル（図１）および炭素１３核磁気共
鳴スペクトル（図２）の解析により、ＣＦ−２４は、１
個の二重結合を有する１４員環β−ケトマクロライド骨
格および３個のメチル基と３個の水酸基を有するアルキ
ル側鎖からなることが明らかとなった。スペクトルの更
に詳細な検討により、部分構造のつながりが、明らかと
なり、更に、マススペクトルより判明した分子量より、
ＣＦ−２４の構造を式（Ｉ）のように決定した。 ２）物理化学的性状 （１）外観：黄色油状 （２）溶解性：ベンゼン、クロロホルム、メタノール、
酢酸エチルに可溶。ヘキサン、水に不溶。 （３）Ｒｆ値（メルク社製「シリカゲル６０Ｆ２５４　
」使用）： クロロホルム−メタノール（１９：１）　　０．７５ヘ
キサン−酢酸エチル（１２：３）　　　　　　０．７１
（４）ＦＡＢ−マススペクトル（ｍ／ｚ）：（Ｍ＋Ｈ）
＋　４８３ （５）元素分析：Ｃ　　６９．６５％、Ｈ　　１０．４
５％、Ｏ　　１９．９０％（計算値：Ｃ　　６９．６７
％、Ｈ　　１０．４４％，Ｏ　　１９．８９％；Ｃ２８
Ｈ５０Ｏ６）（６）紫外吸収スペクトル　　λｍａｘ　
ｎｍ（ε）：図３に示す。 メタノール中：２０７（６３７０） ０．０１規定塩酸−メタノール中：２０７（６３７０）
０．０１規定水酸化ナトリウム−メタノール中：２０７
（２００００　），２７６（５４５０）（７）赤外吸収
スペクトル（クロロホルム中溶液法）：図４に示す。 （８）プロトン核磁気共鳴スペクトル（５００　メガヘ
ルツ、重クロロホルム中）：図１に示す。 （９）炭素１３核磁気共鳴スペクトル（１２５　メガヘ
ルツ、重クロロホルム中）：図２に示す。 【０００６】ＣＦ−２４の製造 １）概要 化合物ＣＦ−２４は現在のところ微生物の培養によって
のみ得られているが、類縁化合物の合成化学的修飾によ
って製造することも、あるいは全合成化学的に製造する
こともできよう。また、遺伝子工学的手法によることも
できよう。すなわち、化合物ＣＦ−２４の産生に関与す
る遺伝子を適当な微生物に導入し、この様な形質転換微
生物を培養し、この培養物から得ることも可能であろう
。微生物の培養による場合の菌株としては、例えば、サ
ッカロスリックス属に属するＣＦ−２４生産能を有する
ものが使用される。具体的には、本発明者らの分離した
サッカロスリックスｓｐ．２２７１−Ｓ３株がＣＦ−２
４を生産することが本発明者らによって明らかにされて
いるが、その他の菌株については、抗生物質生産菌単離
の常法によって適当なものを自然界より分離することが
可能である。また、サッカロスリックスｓｐ．２２７１
−Ｓ３株を含めてＣＦ−２４の生産菌を放射線照射その
他の変異処理に付して、ＣＦ−２４の生産能を高める余
地も残されている。遺伝子工学的手法もまた可能である
ことは前記したところである 。２）２２７１−Ｓ３株 ＣＦ−２４生産能を有するサッカロスリックス属の菌株
として本発明者らの見出している２２７１−Ｓ３株は、
下記の内容のものである。 （１）由来および寄託番号 ２２７１−Ｓ３株は、埼玉県秩父郡横川町で採取した土
壌から分離されたものであり、平成３年４月１０日に工
業技術院微生物工業技術研究所に寄託されて、「微工研
条寄第３３５０号」（ＦＥＲＭ　　ＢＰ−３３５０）の
番号を得ている。 （２）菌学的性状 ２２７１−Ｓ３株の菌学的性状は以下の通りである。な
お、本菌株の“特徴づけ”は特許庁の「産業別審査基準
」記載の方法によった。 ■形態性状：　　本菌株の基生菌糸は巾０．３〜０．８
μｍで、分枝しながら長く伸長し、時には特徴的なジグ
ザグ状を呈し、短い桿状に分断する。気菌糸は主軸を長
く伸ばし、少くない分枝がレイス状に絡まり、全菌糸が
分節・分断して胞子鎖を形成する。胞子鎖は直状または
曲状で１０から５０以上の胞子から成り、成熟するとや
やジグザグ状を呈する。分節胞子は円筒形、巾０．３〜
０．５μｍ、長さ１．２〜１．７μｍ、平滑表面、非運
動性である。胞子のう、菌核、その他の特殊形態は観察
されなかった。 ■化学的性状：　　本菌株は全菌体アミノ酸としてメゾ
・ジアミノピメリン酸、全菌体糖パターンとしてガラク
トース、マンノース、ラムノースを含み、細胞壁化学型
はＩＩＩ　Ｃ＋ラムノース型である。主要メナキノンは
ＭＫ−９（Ｈ４　）、リン脂質パターンはホスホチジル
エタノールアミンを含むＰＩＩ型である。 ■培養性状：　　本菌株の培養性状は表１に示す。集落
の菌叢色は白色系列または灰色系列、裏面色は特徴のな
い不鮮明色または暗褐色、メラニン様色素・その他の拡
散性色素の産生は認められなかった。 ■生理的性状：　　本菌株の生理的性状は表２に示す。 本菌株は中温性で、利用診断糖はＤ−フラクトースを除
く全部を利用する。 ３）分類的位置 以上の“特徴づけ”の結果に基づき、Ｂｅｒｇｅｙ’ｓ
　Ｍａｎｕａｌ　ｏｆＳｙｓｔｅｍａｔｉｃ　Ｂａｃｔ
ｅｒｉｏｌｏｇｙ，　Ｖｏｌ．　４．　により本菌株の
分類的位置を検索した。本菌株の属レベルの特徴を要約
すると、ノカルディオフォームの形態を示し、細胞壁化
学型はＩＩＩ　Ｃ＋ラムノース型、主要メナキノンはＭ
Ｋ−９（Ｈ４　）、リン脂質パターンはＰＩＩ型である
。これらの特徴をもつ属はＳａｃｃｈａｒｏｔｈｒｉｘ
　のみである。よって、本菌株２２７１−Ｓ３はＳａｃ
ｃｈａｒｏｔｈｒｉｘ　属に位置される。従って、本菌
株をＳａｃｃｈａｒｏｔｈｒｉｘ　ｓｐ．　２２７１−
Ｓ３株と呼称する。 【０００７】 　　表　　１　　培養性状 　　　　　　培　　地　　　　　　　　　　集落表面の
菌叢色　　　　　　　　　　集落の裏面色　　　　　　
　　 　　シュクロース・　　　　　　　　白色系列（ａ）　
　　　　　　　　　　淡黄色（２ｃａ〜２ｅａ　）　　
硝酸塩寒天　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　グルコース・アス　　　　
　　灰色系列（ｂ〜ｃ）　　　　　　　　茶味灰色（２
ｅｃ〜２ｉｇ）　　パラギン寒天　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　グリセリ
ン・アス　　　　　　灰色系列（ｂ〜ｃ）　　　　　　
　　茶味灰色（２ｅｃ〜２ｉｇ）　　パラギン寒天　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　後に暗褐灰色（２ｎｌ）　　　　　　　無機
塩・スターチ寒天　　白色系列（ａ）　　　　　　　　
　　　淡黄色（２ｃａ）　から　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　茶味白色（３ｃａ）　　　　　　
　　　　　チロシン寒天　　　　　　　　　　白色系列
（ａ）　　　　　　　　　　　淡黄色（２ｃａ〜３ｅａ
）後に　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　淡
黄味褐色（２ｉｃ）　　　　　　　　　栄養寒天　　　
　　　　　　　　　　　気菌糸なし　　　　　　　　　
　　　淡黄色（２ｃａ〜２ｄｂ）　　　　　　　　イー
スト・麦芽寒天　　　　灰色系列（ｃ〜ｆ　〜１０ｆｅ
）　淡黄色（２ｃａ）から淡黄味　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　橙色（３ｅａ）　，後に暗褐色
　　オートミール寒天　　　　　　灰色系列（ｃ〜ｂ）
　　　　　　　　淡黄色（２ｃａ〜２ｅａ）　　　　　
　　　・培地中への拡散性色素の産生は認められなかっ
た。 　　・（　　）内はカラー・ハーモニー・マニュアル（
コンテナー・コーポレーショ　　　　ン・オブ・アメリ
カ、１９５０）の色標コード。 【０００８】 　　　　　　表　　２　　生理的性状 　　　　　　生育温度範囲　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　２５〜３７℃　　　　　　
　　　　最適温度　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　２７〜３０℃　　　　　　メラニン
様色素 　　　　　　　　チロシン寒天　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　−　　　　　　　
　ペプトン・イースト鉄寒天　　　　　　　　　　　　
　　　　−　　　　　　　　トリプトン・イースト・ブ
ロス　　　　　　　　　　　　−　　　　　　スターチ
の加水分解　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　＋　　　　　　ゼラチンの液化　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　＋　　　
　　　脱脂粉乳のペプトン化　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　＋　　　　　　脱脂粉乳の凝固　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　−　　　　　　硝酸塩の還元　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　＋　　　　
　　炭素源の同化 　　　　　　　　Ｄ−グルコース　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　＋　　　　　　　　
Ｌ−アラビノース　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　＋　　　　　　　　Ｄ−キシロース　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　＋
　　　　　　　　Ｄ−フラクトース　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　−　　　　　　　　シ
ュクロース　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　＋　　　　　　　　Ｌ−ラムノース　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
＋　　　　　　　　ラフィノース　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　＋　　　　　　
　　ｉ−イノシトール　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　＋　　　　　　　　Ｄ−マンニット
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　＋　　　　　　　　 【０００９】培養／ＣＦ−２４の生産 化合物ＣＦ−２４は、サッカロスリックス属に属するＣ
Ｆ−２４生産菌を適当な培地で好気的に培養し、その培
養物から目的物を採取することにより製造することがで
きる。培地は、ＣＦ−２４生産菌が利用し得る任意の栄
養源を含有するもので有り得る。具体的には、例えば炭
素源としてグルコース、シュークロース、マルトース、
スターチおよび油脂類などが使用でき、窒素源として大
豆粉、綿実粕、乾燥酵母、酵母エキスおよびコーンステ
ィープリカーなどの有機物並びにアンモニウム塩または
硝酸塩、例えば、硫酸アンモニウム、硝酸ナトリウムお
よび塩化アンモニウムなどの無機物が利用できる。また
、必要に応じて、塩化ナトリウム、塩化カリウム、燐酸
塩、重金属塩など無機塩類を添加することができる。 発酵中の発泡を抑制するために、常法に従って適当な消
泡剤、例えばシリコーン油を添加することもできる。培
養方法としては、一般に行なわれている抗生物質の生産
方法と同じく、好気的液体培地培養法が最も適している
。培養温度は、２０〜３７℃が適当であるが、２５〜３
０℃が好ましい。この方法でＣＦ−２４の生産量は、振
盪培養、通気攪拌培養ともに通常、培養３〜４日間で最
高に達する。このようにして、ＣＦ−２４の蓄積された
培養物が得られる。培養物中では、ＣＦ−２４はその一
部は培養槇液中に存在するが、その大部分は菌体中に存
在する。このような培養物からＣＦ−２４を採取するに
は、合目的的な任意の方法が利用可能である。その一つ
の方法は、抽出の原理に基づくものであって、具体的に
は、培養槇液中のＣＦ−２４についてはこれを水不混和
性のＣＦ−２４用溶媒（前記ＣＦ−２４の物理化学的性
状の項参照）、例えば酢酸エチルなどで抽出する方法、
あるいは菌体内のＣＦ−２４については槇過、遠心分離
などで得た菌体集体をメタノール、エタノール、アセト
ンなどで処理して回収する方法などがある。菌体を分離
せずに培養物そのままを上記の抽出操作に付すこともで
きる。適当な溶媒を用いた向流分配法も抽出の範疇に入
れることができる。培養物からＣＦ−２４を採取する他
の一つの方法は、吸着の原理に基づくものであって、既
に液状となっているＣＦ−２４含有物、例えば培養槇液
あるいは上記のようにして抽出操作を行なうことにより
得られる抽出液を対象として、適当な吸着剤、例えばシ
リカゲル、活性炭、「ダイヤイオンＨＰ−２０」（三菱
化成社製）などを用いて目的のＣＦ−２４を吸着させ、
その後、適当な溶媒にて溶離させることによってＣＦ−
２４を得ることができる。このようにして得られたＣＦ
−２４溶液を減圧濃縮乾固すれば、ＣＦ−２４粗標品が
得られる。このようにして得られたＣＦ−２４の粗標品
を更に精製するためには、上記の抽出法および吸着法に
ゲル槇過法、高速液体クロマトグラフィーなどを必要に
応じて組合せて必要回数行なえばよい。例えば、シリカ
ゲルなどの吸着剤、「セファデックスＬＨ−２０」（フ
ァルマシア社製）などのゲル槇過剤を用いたカラムクロ
マトグラフィー、「ＹＭＣパック」（山村科学社製）な
どを用いた高速液体クロマトグラフィーおよび向流分配
法を適宜組合せて実施することができる。具体的には、
例えば、ＣＦ−２４粗標品を「セファデックスＬＨ−２
０」カラムに付し、クロロホルム−メタノール（１：１
）混合液で活性画分を溶出させ、濃縮乾固するとＣＦ−
２４の純品が得られる。 【００１０】ＣＦ−２４の用途 本発明による化合物ＣＦ−２４は、抗腫瘍活性を有する
という点で有用である。 （１）生物活性 ＣＦ−２４は腫瘍細胞に対して細胞増殖抑制活性を示し
た。例えば、ヒトの腫瘍細胞であるＫＢ細胞またはコル
ヒチン耐性ＫＢ細胞を１×１０５　／ｍｌとなるように
１０％熱非働化牛胎児血清を含むＭＥＭ培地に調製し、
種々の濃度のＣＦ−２４とともに３７℃で、２４時間培
養した後のＩＣ５０値は、それぞれ６．０μｇ／ｍｌで
あった。 また、コルヒチン耐性ＫＢ細胞に対するコルヒチン存在
下でのＣＦ−２４の細胞増殖抑制活性を上記と同様に測
定した時のＩＣ５０値は１．０μｇ／ｍｌ以下であった
。このことからＣＦ−２４は、単独においても、また、
コルヒチンと相乗的に作用してより強い腫瘍細胞増殖抑
制を示すことが明らかとなった。上記のように、本発明
のＣＦ−２４は抗腫瘍活性を示すことが明らかにされた
。従って、本発明のＣＦ−２４は抗腫瘍剤として使用す
ることができる。 （２）抗腫瘍剤 このように、本発明によるＣＦ−２４はヒトの腫瘍、特
に悪性腫瘍に対して抗腫瘍性を示すことが明らかにされ
た。従って、本発明化合物は、抗腫瘍剤もしくは腫瘍治
療剤として使用することができる。抗腫瘍剤としての本
発明化合物は、合目的的な任意の投与経路で、また、採
用投与経路によって決る剤型で投与することができる。 薬剤としては、製薬上許容される担体あるいは希釈剤で
希釈された形態が普通である。抗腫瘍剤としての本発明
化合物を実際に投与する場合には、これらを製薬上許容
される溶剤に溶解して注射する方法が代表的なものの一
つとして挙げられる。具体的には、腹腔内注射、皮下注
射、静脈または動脈への血管内注射および注射による局
所投与などの方法がある。本発明化合物の投与量は、動
物試験の結果および種々の状況を勘案して、連続的また
は間欠的に投与した時に総投与量が一定量を越えないよ
うに定められる。具体的な投与量は、投与方法、患者ま
たは被処理動物の状況、例えば年齢、体重、性別、感受
性、食餌、投与時間、併用する薬剤、患者またはその病
気の程度に応じて変化することは言うまでも無く、また
、一定の条件のもとにおける適量と投与回数は、上記指
針を基にして専門医の適量決定試験によって決定されな
ければならない。具体的には、成人１日当り０．０１〜
１ｇ程度である。 【００１１】 【発明の効果】本発明による新規化合物ＣＦ−２４は、
優れた抗腫瘍作用を有している。本発明化合物がこのよ
うな生理的作用を有しているという特性は当業者にとっ
て思いがけなかったことと解される。 【００１２】〔実験例〕 【実施例】以下の実験例は、本発明を更に詳しく説明す
るためのものであり、これによって本発明は限定される
ものではない。 （１）培養 使用した培地は、下記の組成の成分を１リットルの水に
溶解して、ｐＨ６．２に調整したものである。 スターチ　　　　　　　　　　２５ｇ 大豆粉　　　　　　　　　　　　１５ｇ乾燥酵母　　　
　　　　　　　　　２ｇ炭酸カルシウム　　　　　　４
ｇ ５０リットル容ジャーファーメンターに上記培地３０リ
ットルを調製、殺菌したものへ、サッカロスリックスｓ
ｐ．２２７１−Ｓ３株を接種し、２７℃にて３日間、通
気攪拌培養を行なった。 （２）ＣＦ−２４の採取 上記の条件で培養後、培養液（３０リットル）を遠心分
離し、菌体を５リットルのアセトンで抽出した。抽出液
を濃縮後、５００ｍｌの酢酸エチルで３回抽出し、濃縮
乾固した。これをシリカゲル（和光純薬社製「ワコーゲ
ルＣ２００」）のカラムに吸着させ、クロロホルム−メ
タノール（１５０：１）混合液で溶出した。活性フラク
ションを濃縮乾固した後、これを調製用薄層クロマトグ
ラフィー（メルク社製「シリカゲル６０Ｆ２５４　ＴＬ
Ｃプレート」使用）に付した。クロロホルム−メタノー
ル（１９：１）混合液で展開した後、活性画分をかき取
り、これより、メタノールでＣＦ−２４を抽出した。抽
出液を逆相ＳＥＰ−ＰＡＫ（ウォーターズ・アソシエー
ツ社製「Ｃ１８カートリッジ」）に付し、メタノール−
水（８７：１３）混合液で溶出した後、濃縮乾固してＣ
Ｆ−２４の純品５ｍｇを得た。

【図面の簡単な説明】

【図１】ＣＦ−２４の重クロロホルム中における５００
メガヘルツプロトン核磁気共鳴スペクトルを模写したも
のである。

【図２】ＣＦ−２４の重クロロホルム中における１２５
メガヘルツ炭素１３核磁気共鳴スペクトルを模写したも
のである。

【図３】ＣＦ−２４のメタノール中（実線）、０．０１
規定塩酸−メタノール中（実線）及び０．０１規定水酸
化ナトリウム−メタノール中（点線）での紫外吸収スペ
クトルを模写したものである。

【図４】ＣＦ−２４のクロロホルム中溶液法による赤外
吸収スペクトルを模写したものである。

Claims (3)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】次式（Ｉ）で示される化合物ＣＦ−２４。 【化１】
2. 【請求項２】請求項１に記載の化合物ＣＦ−２４を有効
   成分として含む抗腫瘍剤。
3. 【請求項３】サッカロスリックス属に属しＣＦ−２４の
   生産能を有する菌株を適当な培地で培養し、その培養物
   より化合物ＣＦ−２４を得ることを特徴とする、請求項
   １に記載の化合物ＣＦ−２４の製造法。