JPH0645637B2 - 免疫促進活性を有するトリペプチド - Google Patents
免疫促進活性を有するトリペプチドInfo
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- JPH0645637B2 JPH0645637B2 JP62087896A JP8789687A JPH0645637B2 JP H0645637 B2 JPH0645637 B2 JP H0645637B2 JP 62087896 A JP62087896 A JP 62087896A JP 8789687 A JP8789687 A JP 8789687A JP H0645637 B2 JPH0645637 B2 JP H0645637B2
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- C07K5/08—Tripeptides
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- C07K5/0815—Tripeptides with the first amino acid being basic
- C07K5/0817—Tripeptides with the first amino acid being basic the first amino acid being Arg
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Description
【発明の詳細な説明】 ［産業上の利用分野］ この発明は、未成熟Ｔ細胞の成熟およびＴ細胞の機能の
両者に対して免疫促進（免疫刺激）活性を示す、常用の
溶液法で合成可能なトリペプチドＡｒｇ−Ａｌａ−Ａｒ
ｇおよびその塩類に関するものである。
両者に対して免疫促進（免疫刺激）活性を示す、常用の
溶液法で合成可能なトリペプチドＡｒｇ−Ａｌａ−Ａｒ
ｇおよびその塩類に関するものである。
［発明の背景］ Ｔリンパ球がインビトロで分裂誘発刺激に応答し得るた
めに必須とするという理由で、Ｌ−アラニンがＴリンパ
球の機能上重要であることが文献のデータにより知られ
ている［ロッター等、ジャーナル・オブ・イムノロジー
（J.Immunol.）１２３巻１７２６頁、１９７９年］。さ
らに、Ｌ−アラニンはリンパ球のインビトロ生育にも必
須である［ノルドリンド等、インターナショナル・アー
カイブス・オブ・アレルギー・アンド・アプライド・イ
ムノロジー（Int.Archs.Allergy appl.Immunol.）５９
巻２１５頁、１９７９年］。
めに必須とするという理由で、Ｌ−アラニンがＴリンパ
球の機能上重要であることが文献のデータにより知られ
ている［ロッター等、ジャーナル・オブ・イムノロジー
（J.Immunol.）１２３巻１７２６頁、１９７９年］。さ
らに、Ｌ−アラニンはリンパ球のインビトロ生育にも必
須である［ノルドリンド等、インターナショナル・アー
カイブス・オブ・アレルギー・アンド・アプライド・イ
ムノロジー（Int.Archs.Allergy appl.Immunol.）５９
巻２１５頁、１９７９年］。
しかし、本発明者の実験室データでは、正常マウスから
得た未成熟Ｔ細胞に対するThy1.2誘発のインビトロ実験
が示すところによると、このアミノ酸は極めて僅かな免
疫促進活性しか示さない。
得た未成熟Ｔ細胞に対するThy1.2誘発のインビトロ実験
が示すところによると、このアミノ酸は極めて僅かな免
疫促進活性しか示さない。
Ｌ−アルギニンもまた、インビトロおよびインビボのい
ずれでも、特に傷害およびストレス動物において［バー
ブル等、ジャーナル・オブ・サージカル・リサーチ（J.
Surg.Res.）２９巻２２８頁、１９８０年、ジャーナル
・オブ・パレンテラル・アンド・エンテラル・ニュート
リション（J.Parenteral Enteral Nutr.）４巻４４６
頁、１９８０年、同誌５巻４９２頁、１９８１年］およ
び実験的誘発腫瘍において［レツラ、ジャーナル・オブ
・パレンテラル・アンド・エンテラル・ニュートリショ
ン（J.Parenteral Enteral Nutr.）３巻４０９頁、１９
７９年］、免疫促進活性をもつと報告されている。
ずれでも、特に傷害およびストレス動物において［バー
ブル等、ジャーナル・オブ・サージカル・リサーチ（J.
Surg.Res.）２９巻２２８頁、１９８０年、ジャーナル
・オブ・パレンテラル・アンド・エンテラル・ニュート
リション（J.Parenteral Enteral Nutr.）４巻４４６
頁、１９８０年、同誌５巻４９２頁、１９８１年］およ
び実験的誘発腫瘍において［レツラ、ジャーナル・オブ
・パレンテラル・アンド・エンテラル・ニュートリショ
ン（J.Parenteral Enteral Nutr.）３巻４０９頁、１９
７９年］、免疫促進活性をもつと報告されている。
Ｔｈｙ１．２誘発に対する本発明者の実験でも、Ｌ−ア
ルギニンは、統計的有意ではあるが低い活性を示す。
ルギニンは、統計的有意ではあるが低い活性を示す。
［発明の記載］ 本発明者は、Ａｒｇ−Ａｌａ−Ａｒｇの配列を有するト
リペプチドを合成し、その活性をモル比Ａｒｇ：Ａｌａ
＝１：２の２種の独立アミノ酸混合物と比較した。その
結果、トリペプチドは２種のアミノ酸の混合物よりはる
かに大きな活性を示し、具体的には、混合物の場合僅か
５％（統計的非有意）であるのに対しトリペプチドは１
３％（Ｐ＜０．０１）の細胞に誘発効果を示した。
リペプチドを合成し、その活性をモル比Ａｒｇ：Ａｌａ
＝１：２の２種の独立アミノ酸混合物と比較した。その
結果、トリペプチドは２種のアミノ酸の混合物よりはる
かに大きな活性を示し、具体的には、混合物の場合僅か
５％（統計的非有意）であるのに対しトリペプチドは１
３％（Ｐ＜０．０１）の細胞に誘発効果を示した。
Ｌ−アルギニンをトリペプチドの両端位置に置くものと
して選んだが、それは、多数の公知の免疫促進ペプチド
においてこのアミノ酸が（チモペンチンの場合のよう
に）Ｎ末端を占めるかまたは（例えばタフトシン、ユビ
キチン、チモポイエチンのように）Ｃ末端を占めるから
である。
して選んだが、それは、多数の公知の免疫促進ペプチド
においてこのアミノ酸が（チモペンチンの場合のよう
に）Ｎ末端を占めるかまたは（例えばタフトシン、ユビ
キチン、チモポイエチンのように）Ｃ末端を占めるから
である。
（化学的特性） 分子量：４０１．４９ 施光度▲［α］２０ Ｄ▼＝３．６９（ｃ＝１、酢酸） ＨＰＬＣ分析：以下に記載の分離条件に従い、イオン・
ペアリングＨＰＬＣによりトリペプチドを分析した。
ペアリングＨＰＬＣによりトリペプチドを分析した。
溶離剤：ＮａＨ２ＰＯ４、０．０５ＭpH４．３＋ＳＤＳ
５×１０−４Ｍ：ＭｅＯＨ；５０：５０ 流速：１ｍ／分 検出：２２５nm 注入容量：２０マイクロリットル 試料：２０マイクログラム カラム：ｕボンダパック(Bondapack)Ｃ１８（ウオター
ズ）、３００×３．９mm 以下の測定法を用いた。
５×１０−４Ｍ：ＭｅＯＨ；５０：５０ 流速：１ｍ／分 検出：２２５nm 注入容量：２０マイクロリットル 試料：２０マイクログラム カラム：ｕボンダパック(Bondapack)Ｃ１８（ウオター
ズ）、３００×３．９mm 以下の測定法を用いた。
液体クロマトグラフィー：シリーズ（ＳＥＲＩＥＳ）４
（パーキン・エルマーPerkin Elmer)） 注入バルブ：レオダイン(Reodyne)・モデル７１２５−
０７５、２０μループ 検出器：分光光度計ＬＣ９５（パーキン・エルマー(Per
kin Elmer)） 計算積分機：データ・ステーション３６００（パーキン
・エルマー） 添付の第１図はトリペプチドのＨＰＬＣを示す。
（パーキン・エルマーPerkin Elmer)） 注入バルブ：レオダイン(Reodyne)・モデル７１２５−
０７５、２０μループ 検出器：分光光度計ＬＣ９５（パーキン・エルマー(Per
kin Elmer)） 計算積分機：データ・ステーション３６００（パーキン
・エルマー） 添付の第１図はトリペプチドのＨＰＬＣを示す。
インビトロ模擬胃環境に対する耐性 該トリペプチドはインビトロ模擬胃環境に耐性を示す。
この実験では、模擬胃液（米国第２１改正局方）（ＨＣ
＋ペプシンａ）を３７℃で５時間作用させた。
この実験では、模擬胃液（米国第２１改正局方）（ＨＣ
＋ペプシンａ）を３７℃で５時間作用させた。
（合成法） Ｂｏｃ−Ａｌａ（０．１モル）を塩化メチレンに溶解
し、０±１℃に冷却し、温度を−１５℃に下げながらイ
ソブチルクロロホルメート（０．１モル）を攪拌下に加
えた。反応混合物をこの温度で１５分間攪拌した後、ジ
メチルホルムアミド中ＮＧ−ニトロ−アルギニン−ベン
ジルエステル−ジ−ｐ−トシレート（０．１モル）およ
びＮ−メチルモルホリン（ＮＭＭ）（０．２モル）の予
め冷却した溶液をゆっくり加え、反応混合物を一夜攪拌
した。溶媒を減圧下に除去し、残渣を酢酸エチルにとか
した。酢酸エチル層を水、１Ｎ塩酸、５％重炭酸ナトリ
ウム水溶液および水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥
し、溶媒を減圧除去した。生成物はシロップ状物であっ
た。ＴＬＣ系ＣＨＣ３：ＭｅＯＨ：ＨＯＡｃ（９０：
８：２）で純度９５％、収率８０％。
し、０±１℃に冷却し、温度を−１５℃に下げながらイ
ソブチルクロロホルメート（０．１モル）を攪拌下に加
えた。反応混合物をこの温度で１５分間攪拌した後、ジ
メチルホルムアミド中ＮＧ−ニトロ−アルギニン−ベン
ジルエステル−ジ−ｐ−トシレート（０．１モル）およ
びＮ−メチルモルホリン（ＮＭＭ）（０．２モル）の予
め冷却した溶液をゆっくり加え、反応混合物を一夜攪拌
した。溶媒を減圧下に除去し、残渣を酢酸エチルにとか
した。酢酸エチル層を水、１Ｎ塩酸、５％重炭酸ナトリ
ウム水溶液および水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥
し、溶媒を減圧除去した。生成物はシロップ状物であっ
た。ＴＬＣ系ＣＨＣ３：ＭｅＯＨ：ＨＯＡｃ（９０：
８：２）で純度９５％、収率８０％。
前記(1)を１ｇ当り１０ｍの５０％トリフルオロ酢酸
−塩化メチレン混合物（１：１）で３０分間脱保護反応
に付した。これを減圧下に蒸発させ、エーテルがトリチ
ュレートし、ろ過し、エーテルで洗浄し、真空下に乾固
させた。収率９８％。
−塩化メチレン混合物（１：１）で３０分間脱保護反応
に付した。これを減圧下に蒸発させ、エーテルがトリチ
ュレートし、ろ過し、エーテルで洗浄し、真空下に乾固
させた。収率９８％。
ＴＦＡ−Ａｌａ−Ａｒｇ−ＯＢＺをＮＭＭで中和し、
ジメチルホルムアミド−テトラヒドロフラン混合物で、
ＮＭＭおよびイソブチルクロロホルメートを用いてＺ３
−Ａｒｇと結合させ、(1)と同様に処理した。収率６０
％。ＴＬＣ系ＣＨＣ３：ＭｅＯＨ（９２：８）で１つ
の大きなスポットを示す。
ジメチルホルムアミド−テトラヒドロフラン混合物で、
ＮＭＭおよびイソブチルクロロホルメートを用いてＺ３
−Ａｒｇと結合させ、(1)と同様に処理した。収率６０
％。ＴＬＣ系ＣＨＣ３：ＭｅＯＨ（９２：８）で１つ
の大きなスポットを示す。
上記トリペプチドを酢酸−水−メタノール混合物中、パ
ラジウム炭素の存在下に完結するまで水素添加した。触
媒をろ過し、ろ液を真空下に蒸発させた。
ラジウム炭素の存在下に完結するまで水素添加した。触
媒をろ過し、ろ液を真空下に蒸発させた。
生成物、トリペプチドをＮ−ブタノール：酢酸：水
（４：１：５）システムを用い向流分配で精製した。収
率５０％。ＴＬＣ系−ブタノール：酢酸：水：ピリジン
（３２：６：２２：２０）で１つの大きなスポットを示
す。ＨＰＬＣ９７％。
（４：１：５）システムを用い向流分配で精製した。収
率５０％。ＴＬＣ系−ブタノール：酢酸：水：ピリジン
（３２：６：２２：２０）で１つの大きなスポットを示
す。ＨＰＬＣ９７％。
（生物学的活性） １Ａ．ＴＨＹ１．２抗原のインビトロ誘発 マウスＴ細胞前駆体からリンパ球発現Ｔ細胞マーカーへ
の分化をインビトロで誘発するＡｒｇ−Ａｌａ−Ａｒｇ
（以下、ＥＬＳ２と略記）の能力をＴｈｙ膜抗原の誘導
を立証することによりテストした。
の分化をインビトロで誘発するＡｒｇ−Ａｌａ−Ａｒｇ
（以下、ＥＬＳ２と略記）の能力をＴｈｙ膜抗原の誘導
を立証することによりテストした。
材料および方法 マウス：特定の病原菌非存在条件下に維持されたＣ３Ｈ
／Ｈｅ環境で交配した８週令の無胸腺(nu/nu)マウスを
用いた。
／Ｈｅ環境で交配した８週令の無胸腺(nu/nu)マウスを
用いた。
細胞の調製：脾臓を無菌状態で取り出し、細分し、微細
なステンレスのふるいに通してＨＢＳＳに入れた。脾臓
細胞を洗浄し、１％ＢＳＡ（ベーリンガー・マンハイ
ム）およびゲンタマイシン１００μｇ／ｍを補足した
１９９培地（ギブコ社）中に再懸濁させ、ジュリウスら
の方法［ヨーロピアン・ジャーナル・オブ・イムノロジ
ー(Eur.J.Immunol.)３、６４５、１９７３］に従い平衡
ウールカラム中で４５分間インキュベートした。前駆体
Ｔ細胞が富化した流出(effluent)細胞群をバイオアッセ
イに用いた。
なステンレスのふるいに通してＨＢＳＳに入れた。脾臓
細胞を洗浄し、１％ＢＳＡ（ベーリンガー・マンハイ
ム）およびゲンタマイシン１００μｇ／ｍを補足した
１９９培地（ギブコ社）中に再懸濁させ、ジュリウスら
の方法［ヨーロピアン・ジャーナル・オブ・イムノロジ
ー(Eur.J.Immunol.)３、６４５、１９７３］に従い平衡
ウールカラム中で４５分間インキュベートした。前駆体
Ｔ細胞が富化した流出(effluent)細胞群をバイオアッセ
イに用いた。
誘導バイオアッセイ：０．１ｍの培地中０．５×１０
６流出細胞を０．１ｍのトリペプチドと共にまたは培
地単独で、３７℃１８時間インキュベートした。培養を
２連で行なった。インキュベーションの終了時におい
て、細胞を０．８７％塩化アンモニウムで洗浄して赤血
球を溶解し、ついでＨＢＳＳで洗浄した。
６流出細胞を０．１ｍのトリペプチドと共にまたは培
地単独で、３７℃１８時間インキュベートした。培養を
２連で行なった。インキュベーションの終了時におい
て、細胞を０．８７％塩化アンモニウムで洗浄して赤血
球を溶解し、ついでＨＢＳＳで洗浄した。
膜Ｔｈｙ１．２抗原の誘導は直接免疫けい光法で測定し
た。
た。
直接免疫けい光法：細胞をフルオロレスセイン結合モノ
クローナル抗体（バイオ−イエダ(Bio-Yeda)）と共に
１：２００の希釈比で、４℃２０分間インキュベートし
た。混合物を３００ｇて５分間遠心分離し、ＨＢＳＳで
２回洗浄し、ついで懸濁させて、けい光顕微鏡（ライツ
・オルソプランLeitz Orthoplan)）で計数した。トリペ
プチドを含む培養物と含まない培養物の間のけい光化細
胞の割合の差によって、生成物の誘導活性が得られる。
クローナル抗体（バイオ−イエダ(Bio-Yeda)）と共に
１：２００の希釈比で、４℃２０分間インキュベートし
た。混合物を３００ｇて５分間遠心分離し、ＨＢＳＳで
２回洗浄し、ついで懸濁させて、けい光顕微鏡（ライツ
・オルソプランLeitz Orthoplan)）で計数した。トリペ
プチドを含む培養物と含まない培養物の間のけい光化細
胞の割合の差によって、生成物の誘導活性が得られる。
結果：第１表に示すように、トリペプチドは１μｇ／ｍ
における最適応答で未成熟Ｔ細胞に対するマーカーＴ
ｈｙ１．２の出現を誘導する。用量−応答の相関曲線
は、該ペプチドの低濃度および高濃度の両方において誘
導が小さいような、ベル形である。
における最適応答で未成熟Ｔ細胞に対するマーカーＴ
ｈｙ１．２の出現を誘導する。用量−応答の相関曲線
は、該ペプチドの低濃度および高濃度の両方において誘
導が小さいような、ベル形である。
１Ｂ．ＴＨＹ１．２抗原のインビボ誘導 ＥＬＳ２を４日間連続して投与し、この後マウスに２４
時間休息を与え、ついで脾臓を採取し、細胞をけい光法
によりＴｈｙ１．２抗原の発現について調べた。対照マ
ウスには薬剤を溶解した倍地１９９（Ｍ１９９）を与え
た。マウスの平均体重は約２４ｇであった。
時間休息を与え、ついで脾臓を採取し、細胞をけい光法
によりＴｈｙ１．２抗原の発現について調べた。対照マ
ウスには薬剤を溶解した倍地１９９（Ｍ１９９）を与え
た。マウスの平均体重は約２４ｇであった。
結果：第２表に示す通りである。
データによれば、ＥＬＳ２は経口および腹腔内投与の両
方の後脾細胞の成熟を誘発できることが判明した。
方の後脾細胞の成熟を誘発できることが判明した。
最適投与量は１０５５μｇ／kgであるが、投与量を多く
すればプラトー応答が観察される。
すればプラトー応答が観察される。
２．リンホカイン生産のインビトロ刺激材料および方法 ヒト末梢血液単核細胞（ＰＢＭＣ）の調製 末梢血液を静脈穿刺により健康な献血者から得る。赤血
球を白血球からフィーコール・ハイパキュー(Ficoll-Hi
paque)勾配で分離する。軟層（ＰＢＭＣ）を除去し、洗
浄し、細胞をＲＰＭＩ１６４０中に、１×１０６細胞／
ｍで再懸濁液し、１％ペニシリン／ストレプトマイシ
ン、１％グルタミンおよび１％熱不活化胎児ウシ血清
（ＦＣＳ、５６℃、３０分）を補足する。
球を白血球からフィーコール・ハイパキュー(Ficoll-Hi
paque)勾配で分離する。軟層（ＰＢＭＣ）を除去し、洗
浄し、細胞をＲＰＭＩ１６４０中に、１×１０６細胞／
ｍで再懸濁液し、１％ペニシリン／ストレプトマイシ
ン、１％グルタミンおよび１％熱不活化胎児ウシ血清
（ＦＣＳ、５６℃、３０分）を補足する。
成長因子の調製 １％熱不活性ＦＣＳ中ＰＢＭＣ１×１０６細胞／ｍを
０．７５％濃度（Ｖ／Ｖ）のフィトヘムアグルチニン
（ＰＨＡ）を用いるかまたは用いないでインキュベート
する。テストされるペプチドを濃度１μｇ／ｍで適当
な培地に加える。インキュベーション期間は湿潤雰囲気
中、３７℃で１８〜２４時間である。培養細胞を０．２
２ｍＭのフィルターに通してろ過し、上澄液を成長因子
の存在について調べる。
０．７５％濃度（Ｖ／Ｖ）のフィトヘムアグルチニン
（ＰＨＡ）を用いるかまたは用いないでインキュベート
する。テストされるペプチドを濃度１μｇ／ｍで適当
な培地に加える。インキュベーション期間は湿潤雰囲気
中、３７℃で１８〜２４時間である。培養細胞を０．２
２ｍＭのフィルターに通してろ過し、上澄液を成長因子
の存在について調べる。
上澄液中の成長因子の測定 Ａ．テスト細胞 Ｂ細胞成長因子（ＢＣＧＦ）の存在のテストに使用され
るＢ細胞はＢＣＧＦ上に維持された長期間培養セルライ
ンであり、およびＥＢＶネガティブ(negative)である。
これらの細胞を血清非含有培地の中で、ニュートリドマ
(Nutridoma)（ベーリンガー・マンハイム・バイオケミ
カルズ）を用いて増殖させたが、ＩＬ−２に対し応答し
ない。
るＢ細胞はＢＣＧＦ上に維持された長期間培養セルライ
ンであり、およびＥＢＶネガティブ(negative)である。
これらの細胞を血清非含有培地の中で、ニュートリドマ
(Nutridoma)（ベーリンガー・マンハイム・バイオケミ
カルズ）を用いて増殖させたが、ＩＬ−２に対し応答し
ない。
ＩＬ−２の存在のテストに使用されるＴ細胞を新鮮な状
態で単離する。これらを、まず０．７５％ＰＨＡで刺激
し、（基底値を減少させ、かつＩＬ−２の依存性を確立
するために、）使用前に少なくとも１０日間培地中に維
持する。
態で単離する。これらを、まず０．７５％ＰＨＡで刺激
し、（基底値を減少させ、かつＩＬ−２の依存性を確立
するために、）使用前に少なくとも１０日間培地中に維
持する。
Ｂ．アッセイに用いるテスト細胞の調製 ＢＣＧＦの最後の供給後４日のＢ細胞を通常使用す
る。これらをＲＰＭＩ１６４０で４回洗浄して残存し得
るＢＣＧＦを除去し、ＲＰＭＩ１６４０およびニュート
リドマ中、１５×１０４細胞／ｍに調整する（最終濃
度１％）。
る。これらをＲＰＭＩ１６４０で４回洗浄して残存し得
るＢＣＧＦを除去し、ＲＰＭＩ１６４０およびニュート
リドマ中、１５×１０４細胞／ｍに調整する（最終濃
度１％）。
ＩＬ−２の最後の供給後４日のＴ細胞を用いる。これ
らを４回洗浄し、５％ＦＣＳ含有ＲＰＭＩ１６４０中、
５０×１０４細胞／ｍに調製する。
らを４回洗浄し、５％ＦＣＳ含有ＲＰＭＩ１６４０中、
５０×１０４細胞／ｍに調製する。
Ｃ．アッセイ手順 長期間培養Ｂ細胞を９６平底マイクロタイター・プレ
ートを用い種々の濃度の、ＰＢＭＣ培養の上澄液とイン
キュベートする。各ウエルは１００μのＢ細胞（１５
×１０３細胞）および１００μの上澄液を含み、総容
量２００μである。本発明者らは、本発明者らのＢ細
胞の効力について、それらを種々の濃度の精製ＢＣＧＦ
（セルラー・プロダクト(Cellular Products)社、バッ
ファロー、Ｎ．Ｙ．）とインキュベートすることにより
調べた。
ートを用い種々の濃度の、ＰＢＭＣ培養の上澄液とイン
キュベートする。各ウエルは１００μのＢ細胞（１５
×１０３細胞）および１００μの上澄液を含み、総容
量２００μである。本発明者らは、本発明者らのＢ細
胞の効力について、それらを種々の濃度の精製ＢＣＧＦ
（セルラー・プロダクト(Cellular Products)社、バッ
ファロー、Ｎ．Ｙ．）とインキュベートすることにより
調べた。
培養物を２４時間インキュベートし、この後１μＣｉの
［３Ｈ−Ｔｄｒ］を添加し、ついでさらに１２時間イン
キュベートする。ついで、培養物を収穫し、シンチレー
ション・カウンターで計数する。
［３Ｈ−Ｔｄｒ］を添加し、ついでさらに１２時間イン
キュベートする。ついで、培養物を収穫し、シンチレー
ション・カウンターで計数する。
Ｔ細胞を平底ウエル中でインキュベートする。各ウエ
ルの総容量は２００μで、５×１０３のＴ細胞／ウエ
ルを含む。インキュベーション期間は１２時間の［３Ｈ
−Ｔｄｒ］のラベル化を含み、７２時間である。
ルの総容量は２００μで、５×１０３のＴ細胞／ウエ
ルを含む。インキュベーション期間は１２時間の［３Ｈ
−Ｔｄｒ］のラベル化を含み、７２時間である。
結果 成長因子生産 ＲＮＡ合成に対する効果３ Ｈ−ウリジン取り込みによって観察されるような、ヒ
トＴ細胞におけるＲＮＡ合成に対するＥＬＳ２の効果、
１分当りのカウント数（ＣＰＭ） 結果は２４時間のインキュベーション後に得た。
トＴ細胞におけるＲＮＡ合成に対するＥＬＳ２の効果、
１分当りのカウント数（ＣＰＭ） 結果は２４時間のインキュベーション後に得た。
Ｔ ３７３２ Ｔ＋ＰＨＡ ２０７５２ ＤＮＡ合成に対する効果３ Ｈ−チミジンの取り込みによって観察されるような、
ヒトＴ細胞におけるＤＮＡ合成に対するＥＬＳ２の効
果、１分当りのカウント数（ＣＰＭ） 結果は３日間のインキュベーション後に得た。
ヒトＴ細胞におけるＤＮＡ合成に対するＥＬＳ２の効
果、１分当りのカウント数（ＣＰＭ） 結果は３日間のインキュベーション後に得た。
Ｔ １５４ Ｔ＋ＰＨＡ ６０７６ 細胞数のインビトロの増加 ３０日間、５μｇ／ｍの濃度で４日ごとにＴリンパ球
またはＴおよびＢリンパ球の混合物のいずれかの培地に
トリペプチドを加えると、実験の第１０日と１５日の間
に観察されるように対照培地に対し、最大＋５０％で細
胞数を増加させることができる。
またはＴおよびＢリンパ球の混合物のいずれかの培地に
トリペプチドを加えると、実験の第１０日と１５日の間
に観察されるように対照培地に対し、最大＋５０％で細
胞数を増加させることができる。
毒性実験 急性毒性 マウスおよびラットに対して行なった急性毒性の実験に
よれば、１０００mg／kgの用量（筋肉内）まで上記トリ
ペプチドが毒性作用を全く示さないことが証明された。
よれば、１０００mg／kgの用量（筋肉内）まで上記トリ
ペプチドが毒性作用を全く示さないことが証明された。
耐性 ウサギおよびマウスに対する実験によれば、上記生成物
は静脈内または腹腔内各々１００mg／kgの投与量で、何
らの血行力学的変化および行動的効果をも引き起こさな
かった。特に、睡眠時間は、わずかな増加だけが見られ
た。
は静脈内または腹腔内各々１００mg／kgの投与量で、何
らの血行力学的変化および行動的効果をも引き起こさな
かった。特に、睡眠時間は、わずかな増加だけが見られ
た。
アレルギー誘発活性 上記生成物は、１００mg／kgの用量（筋肉内）でモルモ
ットにおいて何らの感作症状をも誘発しなかった。
ットにおいて何らの感作症状をも誘発しなかった。
トリペプチドの塩 前記実験はトリペプチドの酢酸塩で行つたが、当該分野
では、同様な結果が、トリフルオロ酢酸塩、塩酸塩およ
び硫酸塩のような他の塩を用いることにより得られるこ
とが理解できる。
では、同様な結果が、トリフルオロ酢酸塩、塩酸塩およ
び硫酸塩のような他の塩を用いることにより得られるこ
とが理解できる。
第１図は、この発明のトリペプチドの高速液体クロマト
グラフィー測定結果を示す図である。
グラフィー測定結果を示す図である。
Claims (3)
- 【請求項１】Ｌ−Ａｌａ（アラニン）と２個のＬ−Ａｒ
ｇ（アルギニン）から構成され、下記構造 Ａｒｇ−Ａｌａ−Ａｒｇ を有するトリペプチドまたはその医薬上許容される塩
類。 - 【請求項２】酢酸塩、トリフルオロ酢酸塩、塩酸塩また
は硫酸塩である、特許請求の範囲第１項記載のトリペプ
チドの医薬上許容される塩類。 - 【請求項３】Ｌ−Ａｌａ（アラニン）と２個のＬ−Ａｒ
ｇ（アルギニン）から構成され、下記構造 Ａｒｇ−Ａｌａ−Ａｒｇ を有するトリペプチドまたはその医薬上許容される塩類
を有効成分として含む免疫促進剤。
Applications Claiming Priority (2)
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|---|---|---|---|
| IT20027A/86 | 1986-04-09 | ||
| IT20027/86A IT1188646B (it) | 1986-04-09 | 1986-04-09 | Tripeptide ad attivita' immunostimolante |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS62267296A JPS62267296A (ja) | 1987-11-19 |
| JPH0645637B2 true JPH0645637B2 (ja) | 1994-06-15 |
Family
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Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
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| Country | Link |
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| JP (1) | JPH0645637B2 (ja) |
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