JPH0649097A

JPH0649097A - 新規なペプチド誘導体、製造方法及びそれらの新規な誘導体の医薬品としての利用

Info

Publication number: JPH0649097A
Application number: JP5046032A
Authority: JP
Inventors: Gilles Hamon; ジル・アモン; Eve Mahe; エーブ・マエ; Dung Le-Nguyen; ダン・ルヌギアン
Original assignee: Roussel Uclaf SA
Current assignee: Sanofi Aventis France
Priority date: 1992-02-12
Filing date: 1993-02-12
Publication date: 1994-02-22
Also published as: DE69302921D1; DE69302921T2; FR2687156A1; ATE138936T1; FR2687156B1; CA2089342A1; EP0556124B1; DK0556124T3; GR3020507T3; US5439887A; EP0556124A1; ES2088239T3

Abstract

(57)【要約】（修正有）【構成】次式（例えば、）のペプチド誘導体、並びに、適当であるならば、１若し
くは２個のジスルフィド橋を有するそれらの誘導体およ
びその製法。【効果】上記のペプチド誘導体は強力な血管収縮物質
である。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】本発明は、新規なペプチド誘導体、その製
造方法及びそれらの新規な誘導体の医薬品としての利用
に関する。

【０００２】「ＶＩＣ」（vasoactive intestinal cont
ractor）は、強力な血管収縮物質であることが知られて
おり、マウスゲノムからクローン化及び配列決定がされ
ており、この種の腸内に存在している。このペプチド
は、最近単離され、２１アミノ酸を含み、２個のジスル
フィド橋を有し且つ下記式を有する：

【化９】（回腸及び冠状動脈における２つの別個のエンドセリン
ファミリーペプチドの異なる活性：ISHIDA N., TSUJIOK
A K., TOMOI M., SAIDA K.及び MITUI Y., FEBSLetter,
(1989) 247巻、 337-340 頁）。このペプチドを、以
後、名称ＶＩＣによって呼ぶこととする。

【０００３】用いる命名法は、ＩＵＰＡＣ−ＩＵＢ委員
会（１９８４）の命名法（EuropeanJ. Biochem 183, 9-
37 ）である。

【０００４】このペプチドは、２１アミノ酸残基及び２
ジスルフィド橋を含み、エンドセリンの構造と全く同様
の構造を有する。それは、エンドセリン受容体に結合し
た後に、種々の哺乳動物種（ヒト、イヌ、ネコ、ブタ、
モルモット、ラット、ウサギ等）の平滑筋（動脈及び静
脈）の細胞を、極めて低い投与量で、収縮させることが
出来る。ＶＩＣの鎖を短くし及びそのアミノ酸の幾つか
を他のアミノ酸で置換することを試みるうちに、出願人
は、ＶＩＣの血管収縮活性が実質的に消失し、しかも
尚、天然のエンドセリン受容体をブロックし及び結合す
る性質を有する新規なペプチド誘導体を合成した。この
生成物は、従って、エンドセリンの引き続く放出の如何
なる作用をも打ち消す作用を有する。

【０００５】これらの生成物は、更に、全合成によって
大量に製造することが出来るという利点を有する。

【０００６】従って、本願の主題は、下記の一般式
（Ｉ）

【化１０】（式中、Ｘ₁ は、水素原子又はシステイン残基を表し、
Ｘ₃ は、システイン又はアラニン残基を表し、Ｘ₄ は、
アスパラギン、フェニルアラニン、ロイシン、イソロイ
シン、アラニン、バリン、グリシン残基及びそれらのＤ
系列の同族体を表し、Ｘ₆ は、トリプトファン、フェニ
ルアラニン、ロイシン、イソロイシン、アラニン、バリ
ン、グリシン、セリン、リジン、アスパラギン酸、チロ
シン、スレオニン残基及びそれらのＤ系列の同族体を表
し、Ｘ₉ 及びＸ₁₇は、グルタミン酸、アスパラギン酸、
リジン、アルギニン、チロシン、ロイシン残基及びそれ
らのＤ系列の同族体を表し、Ｘ₁₁は、システイン又はア
ラニン残基を表し、Ｘ₁₄は、チロシン、フェニルアラニ
ン、ロイシン、イソロイシン、アラニン、バリン、グリ
シン、セリン、リジン、アスパラギン酸、スレオニン残
基及びそれらのＤ系列の同族体を表し、Ｘ₂₁は、水素原
子又はトリプトファン若しくはＤ−トリプトファン残基
を表す）に相当する新規なペプチド誘導体、並びに、適
当であるならば、１若しくは２個のジスルフィド橋を有
するそれらの誘導体（但し、Ｘ₂₁は、Ｘ₁ 、Ｘ₃ 及びＸ
₁₁がシステイン残基を表す場合にはトリプトファンを表
すことは出来ず、Ｘ₄ は、アスパラギン残基を表し、Ｘ
₆ は、トリプトファン残基を表し、Ｘ₉ はリジン残基、
Ｘ₁₄はフェニルアラニン残基及びＸ₁₇はロイシン残基を
表す）である。

【０００７】式（Ｉ）の誘導体がジスルフィド橋を有す
る場合に、これらの橋は、例えば、１−１５及び３−１
１又は１−１１及び３−１５に存在し得る。

【０００８】上記の新規なペプチド誘導体の内で、特
に、式（Ｉ）（式中、Ｘ₄ は、アスパラギン、フェニル
アラニン、グリシン残基及び、それらのＤ系列の同族体
を表し、Ｘ₆ は、トリプトファン、セリン、リジン、ア
スパラギン酸、チロシン、スレオニン残基及び、それら
のＤ系列の同族体を表し、Ｘ₉ 及びＸ₁₇は、グルタミン
酸、アスパラギン酸、リジン、ロイシン残基及び、それ
らのＤ系列の同族体を表し、Ｘ₁₄は、チロシン、フェニ
ルアラニン残基及び、それらのＤ系列の同族体を表し、
Ｘ₁ 、Ｘ₃ 、Ｘ₁₁及びＸ₂₁は、前述した意味を有する）
の誘導体並びに、適当であるならば、１又は２個のジス
ルフィド橋を有するそれらの誘導体を選択する。

【０００９】上記の内で、好ましくは、式（Ｉ）（式
中、Ｘ₁ は、システイン残基を表し、Ｘ₃ は、システイ
ン又はアラニン残基を表し、Ｘ₄ は、アスパラギン、フ
ェニルアラニン、グリシン残基及び、それらのＤ系列の
同族体を表し、Ｘ₆ は、トリプトファン、セリン、リジ
ン、アスパラギン酸、チロシン、スレオニン残基及び、
それらのＤ系列の同族体を表し、Ｘ₉ 及びＸ₁₇は、グル
タミン酸、アスパラギン酸、リジン、ロイシン残基及
び、それらのＤ系列の同族体を表し、Ｘ₁₁は、システイ
ン残基を表し、Ｘ₁₄は、チロシン、フェニルアラニン残
基及び、それらのＤ系列の同族体を表し、Ｘ₂₁は、トリ
プトファン残基及び、そのＤ系列の同族体を表す）のペ
プチド誘導体、並びに、適当であるならば、１又は２個
のジスルフィド橋を有するそれらの誘導体を選択する。

【００１０】この発明の好ましい新規なペプチド誘導体
の内で、特に、下記のペプチド誘導体の１つ及び、適当
であるならば、１又は２個のジスルフィド橋を有するそ
れらの誘導体を選択する：

【化１１】

【化１２】

【化１３】

【化１４】

【化１５】

【化１６】。

【００１１】上記の新規なペプチド誘導体の内で、特
に、下記のペプチド誘導体及び１又は２個のジスルフィ
ド橋を有するその誘導体を選択する：

【化１７】。

【００１２】この発明の主題は又、固相合成を、適当に
保護したアミノ酸を順次に架橋ポリスチレン型担体上に
カップリング剤を用いて導入することによって行ない、
それらのアミノ酸を脱保護し及びそれにより形成された
ペプチド鎖を樹脂から遊離させ、次いで、適当であるな
らば、ジスルフィド橋を環化させ、そうして、求めるペ
プチド誘導体を得ることを特徴とする上記の新規なペプ
チド誘導体を製造する方法でもある。

【００１３】好ましい実施条件下において、上記の方法
は、下記を特徴とする：− 架橋ポリスチレン型担体
は、「Boc-X₂₁-CM」型の樹脂（ここに、Ｂｏｃはｔ−ブ
チルオキシ−カルボニル基であり、Ｘ₂₁は上述の意味を
有し、ＣＭは架橋ポリスチレン担体を示す）であり、−
カップリング剤は、ベンゾトリアゾール−１−イルオ
キシトリス−（ジメチルアミノ）ホスホニウムヘキサフ
ルオロホスフェート即ちＢｏｐであり、− ペプチド鎖
の担体からの遊離並びにアミノ酸の脱保護は、フッ化水
素酸を用いて、低温で、好ましくは、０℃で行なう。

【００１４】本発明の主題である新規なペプチド誘導体
は、非常に有利な薬理学的特性を有する。特に顕著なの
は、エンドセリン誘発性高血圧症に対する格別の阻止効
果及び抗虚血性効果であり、ＶＩＣの血管収縮効果を完
全に破壊する。

【００１５】これらの特性の幾つかは、後で実験部分に
おいて説明する。

【００１６】これらの特性は、上記の式（Ｉ）に対応す
る新規なペプチド誘導体の医薬品としての利用に根拠を
示す。

【００１７】従って、本発明の主題は又、上記のように
一般式（Ｉ）で規定される新規なペプチド誘導体の医薬
品としての応用でもある。

【００１８】本発明の主題である医薬品の内で、特に、
式（Ｉ）（式中、Ｘ₄ は、アスパラギン、フェニルアラ
ニン、グリシン残基及び、それらのＤ系列の同族体を表
し、Ｘ₆ は、トリプトファン、セリン、リジン、アスパ
ラギン酸、チロシン、スレオニン残基及び、それらのＤ
系列の同族体を表し、Ｘ₉ 及びＸ₁₇は、グルタミン酸、
アスパラギン酸、リジン、ロイシン残基及び、それらの
Ｄ系列の同族体を表し、Ｘ₁₄は、チロシン、フェニルア
ラニン残基及び、それらのＤ系列の同族体を表し、Ｘ
₁ 、Ｘ₃ 、Ｘ₁₁及びＸ₂₁は、上述の意味を有する）の生
成物及び、適当であるならば、１又は２個のジスルフィ
ド橋を有するその誘導体からなることを特徴とする医薬
品が選択される。

【００１９】上記の内で、好ましくは、上述の新規なペ
プチド誘導体（式中、Ｘ₁ は、システイン残基を表し、
Ｘ₃ は、システイン又はアラニン残基を表し、Ｘ₄ は、
アスパラギン、フェニルアラニン、グリシン残基及び、
それらのＤ系列の同族体を表し、Ｘ₆ は、トリプトファ
ン、セリン、リジン、アスパラギン酸、チロシン、スレ
オニン残基及び、それらのＤ系列の同族体を表し、Ｘ₉
及びＸ₁₇は、グルタミン酸、アスパラギン酸、リジン、
ロイシン残基及び、それらのＤ系列の同族体を表し、Ｘ
₁₁は、システイン残基を表し、Ｘ₁₄は、チロシン、フェ
ニルアラニン残基及び、それらのＤ系列の同族体を表
し、Ｘ₂₁は、トリプトファン残基及びそのＤ系列の同族
体を表す）並びに、適当であるならば、１又は２個のジ
スルフィド橋を有するそれらの誘導体を含む医薬品を選
択する。

【００２０】この発明の好ましい医薬品の内で、特に、
下記のペプチド誘導体の１つ及び、適当であるならば、
１又は２個のジスルフィド橋を有するそれらの誘導体か
らなるものを選択する：

【化１８】

【化１９】

【化２０】

【化２１】

【化２２】

【化２３】。

【００２１】この発明の好ましい医薬品の内で、特に、
下記のペプチド誘導体及び、１又は２個のジスルフィド
橋を有するその誘導体を選択する：

【化２４】。

【００２２】これらの医薬品は、例えば、すべての血管
痙攣の治療、脳出血に続く治療、冠状動脈痙攣及び末梢
血管痙攣の治療において並びに腎不全の治療においても
用途が見出される。これらの医薬品は、心筋梗塞の治
療、血管形成術後の再狭窄の防止、アテローム性動脈硬
化症及び幾つかの形態の高血圧症の治療並びに喘息の治
療においても用いられ得る。

【００２３】標準的投与量は、用いる生成物、治療され
る患者及び問題の病状によって変わり得るが、例えば、
ヒトにおける静脈投与で、１日当り１〜３００ｍｇであ
って良い。

【００２４】この発明の主題は又、少なくとも上述の誘
導体の１つを活性成分として含む医薬組成物でもある。

【００２５】一般式（Ｉ）に対応するペプチド誘導体
は、活性成分として、消化管経路又は非経口用の医薬組
成物中に含まれ得る。

【００２６】これらの医薬組成物は、例えば、固体又は
液体であって良く及び、例えば、単独、糖衣錠、カプセ
ル（硬質ゼラチンカプセルを含む）、顆粒、坐薬、注
射、エアゾール等のヒトの医薬において一般に用いられ
る投薬形態（それらは、標準的方法によって調製され
る）で与え得る。活性成分は、これらの医薬組成物にお
いて通例的に用いられる賦形剤（タルク、アラビアゴ
ム、ラクトース、澱粉、ステアリン酸マグネシウム、コ
コアバター、水性若しくは非水性ビヒクル、動物又は植
物起源の脂肪、パラフィン誘導体、グリコール、種々の
湿潤剤、分散助剤若しくは乳化剤、防腐剤等）中に含ま
れ得る。

【００２７】この発明の実施例を、以下に示すが、制限
することを意味するものではない。

【００２８】

【実施例】実施例１：Cys-Ser-Cys-Asn-Ser-Ser-Leu-Asp-Lys-Glu-
Cys-Val-Tyr-Phe-Cys-His-Leu-Asp-Ile-Ile-H （式（Ｉ）の誘導体（Ｘ₁ ＝ＣｙｓＸ₃ ＝ＣｙｓＸ
₄ ＝ＡｓｎＸ₆ ＝ＳｅｒＸ₉ ＝ＬｙｓＸ₁₁＝Ｃｙ
ｓＸ₁₄＝ＰｈｅＸ₁₇＝ＬｅｕＸ₂₁＝Ｈシステインの間に２つのジスルフィド橋を伴う

【００２９】段階Ａ：ペプチド鎖の組み立て「Ｂｏｃ−Ｔｒｐ−ＣＭ−担体」型の担体を用いる（こ
こに、Ｂｏｃはｔ−ブチルオキシカルボニル基であり、
Ｔｒｐはトリプトフィル基を表し、ＣＭ−担体は架橋ポ
リスチレン担体を示す）。

【００３０】０．６ミリモルＴｒｐ／ｇを含む担体を、
Horiki K., Igano K. 及びInouye K. (1978) Chemistry
Lett., 165-168 に記載の技術により、フッ化カリウム
法によって製造した。

【００３１】すべてのアミノ酸を、ｔ−ブチルオキシカ
ルボニル基でＮ端保護する。側鎖の保護基は下記の通り
であった： − ｐ−メチルベンジル基システイン用 − シクロヘキシルエステルアスパラギン酸及びグル
タミン酸用 − ベンジル基セリン用 − ｏ−クロロベンジルオキシカルボニル基リジン用 − ２，６−ジクロロベンジル基チロシン用 − Ｎ^im−ｔ−ブチルオキシカルボニル基ヒスチジン
用 − トリプトファンは保護しない。

【００３２】カップリング反応を、Ｂｏｐ即ちベンゾト
リアゾール−１−イルオキシトリス（ジメチルアミノ）
ホスホニウムヘキサフルオロホスフェートを用いて行な
った。

【００３３】カップリングサイクルは、下記のように要
約することが出来る：脱保護：１− ３％のエタンジチオールを含むジクロロメタン中
のトリフルオロ酢酸溶液（５０％）での１分間の処理。２− 排液し、次いで、３％エタンジチオールを含むジ
クロロメタン中のトリフルオロ酢酸５０％溶液で３０分
間処理する。３− 排液し、次いで、５％エタンジチオールを含むイ
ソプロパノールで洗う。４− ジクロロメタンで２回洗う。

【００３４】カップリング：１− Ｂｏｐ及びＢｏｐ−アミノ酸の添加。２− ジイソプロピルエチルアミン（６当量）の添加及
び、その次の、溶媒（ジクロロメタン又はジメチルホル
ムアミド）の添加（攪拌しながら）。３− ニンヒドリンに反応しなくなった後に、ジクロロ
メタンで２回洗う。

【００３５】ニンヒドリンを用いる検査を、Kaiser,
E., Colescott, R.L., Bossinger, C.D.及びCook, P.I.
(1970) Anal. Biochem. 24, 595-598 により記載された
方法に従って行なった。フッ化水素酸での処理の前に、
最後のＢｏｃ基をトリフルオロ酢酸を用いて除去する。

【００３６】２ｇの「Ｂｏｃ−Ｔｒｐ−ＣＭ−樹脂」樹
脂を用いて、手作業で始めて、それにより、５．２５ｇ
の保護されたペプチド鎖−樹脂複合体を得た（この複合
体を直接に次の段階で用いる）。

【００３７】段階Ｂ：保護されたペプチド鎖−樹脂複合
体の分離１．５ｇの保護されたペプチド鎖−樹脂複合体を、アニ
ソール（１ｍｌ）及び硫化ジメチル（０．５ｍｌ）の存
在下で、１５ｍｌのフッ化水素酸と、０℃で６０分間反
応させる。樹脂をエーテルで洗い、粗ペプチドを２０％
酢酸水溶液で抽出する。凍結乾燥後に、６６０ｍｇの未
環化粗生成物が得られる（この生成物を直接に次の段階
で用いる）。

【００３８】段階Ｃ：環化及び精製上記で得た５００ｍｇの粗ペプチドを５００ｍｌの水に
溶解させ、その混合物を激しく攪拌し且つジイソプロピ
ルエチルアミンをｐＨが８となるまで加える（酸化反応
を監視するために、混合物を１時間ごとに１滴ずつ採取
し、１モルＫ₂ＨＰＯ₄ 緩衝液（ｐＨ８）中のジチオビ
ス（２−ニトロ安息香酸）を含む溶液の１滴に加え
る）。反応を通して、ｐＨは、ジイソプロピルエチルア
ミンの添加により、８に維持する。反応を、高性能液体
クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）によって監視する。

【００３９】２８時間後、ジチオビス（２−ニトロ安息
香酸）試験において、黄色のないことが認められる。

【００４０】得られた生成物を、Whatman M20 ODS₃カラ
ム上での高性能液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）に
よって精製し、０．１％トリフルオロ酢酸を含む水／ア
セトニトリル混合物で溶出する。

【００４１】得られた画分を凍結乾燥し、最終的に３０
ｍｇの所望生成物が採集される。

【００４２】実施例２〜１６：異なるアミノ酸を用いて
実施例１と同様に操作して、下記に列挙する他の１５の
ミクロ蛋白質を製造した。

【００４３】実施例２：Cys-Ser-Cys-Asn-Ser-Trp-Leu-
Asp-Lys-Glu-Cys-Val-Tyr-Phe-Cys-His-Leu-Asp-Ile-Il
e-H （式（Ｉ）の誘導体（Ｘ₁ ＝ＣｙｓＸ₃ ＝ＣｙｓＸ
₄ ＝ＡｓｎＸ₆ ＝ＴｒｐＸ₉ ＝ＬｙｓＸ₁₁＝Ｃｙ
ｓＸ₁₄＝ＰｈｅＸ₁₇＝ＬｅｕＸ₂₁＝Ｈシステイ
ン１−１５及び３−１１に２つのジスルフィド橋を伴
う。

【００４４】実施例３：Cys-Ser-Cys-Phe-Ser-Trp-Leu-
Asp-Lys-Glu-Cys-Val-Tyr-Phe-Cys-His-Leu-Asp-Ile-Il
e-Trp （式（Ｉ）の誘導体（Ｘ₁ ＝ＣｙｓＸ₃ ＝ＣｙｓＸ
₄ ＝ＰｈｅＸ₆ ＝ＴｒｐＸ₉ ＝ＬｙｓＸ₁₁＝Ｃｙ
ｓＸ₁₄＝ＰｈｅＸ₁₇＝ＬｅｕＸ₂₁＝Ｔｒｐシステイン１−１５及び３−１１に２つのジスルフィド
橋を有する。

【００４５】実施例４：Cys-Ser-Cys-Phe-Ser-Ser-Leu-
Asp-Lys-Glu-Cys-Val-Tyr-Phe-Cys-His-Leu-Asp-Ile-Il
e-Trp （式（Ｉ）の誘導体（Ｘ₁ ＝ＣｙｓＸ₃ ＝ＣｙｓＸ
₄ ＝ＰｈｅＸ₆ ＝ＳｅｒＸ₉ ＝ＬｙｓＸ₁₁＝Ｃｙ
ｓＸ₁₄＝ＰｈｅＸ₁₇＝ＬｅｕＸ₂₁＝Ｔｒｐシステイン１−１５及び３−１１に２つのジスルフィド
橋を有する。

【００４６】実施例５：Cys-Ser-Cys-Asn-Ser-Tyr-Leu-
Asp-Lys-Glu-Cys-Val-Tyr-Phe-Cys-His-Leu-Asp-Ile-Il
e-Trp （式（Ｉ）の誘導体（Ｘ₁ ＝ＣｙｓＸ₃ ＝ＣｙｓＸ
₄ ＝ＡｓｎＸ₆ ＝ＴｙｒＸ₉ ＝ＬｙｓＸ₁₁＝Ｃｙ
ｓＸ₁₄＝ＰｈｅＸ₁₇＝ＬｅｕＸ₂₁＝Ｔｒｐシステイン１−１５及び３−１１に２つのジスルフィド
橋を有する。

【００４７】実施例６：Cys-Ser-Cys-Phe-Ser-Ser-Leu-
Asp-Glu-Glu-Cys-Val-Tyr-Phe-Cys-His-Leu-Asp-Ile-Il
e-Trp （式（Ｉ）の誘導体（Ｘ₁ ＝ＣｙｓＸ₃ ＝ＣｙｓＸ
₄ ＝ＰｈｅＸ₆ ＝ＳｅｒＸ₉ ＝ＧｌｕＸ₁₁＝Ｃｙ
ｓＸ₁₄＝ＰｈｅＸ₁₇＝ＬｅｕＸ₂₁＝Ｔｒｐシステイン１−１５及び３−１１に２つのジスルフィド
橋を有する。

【００４８】実施例７：Cys-Ser-Cys-Gly-Ser-Trp-Leu-
Asp-Lys-Glu-Cys-Val-Tyr-Phe-Cys-His-Leu-Asp-Ile-Il
e-Trp （式（Ｉ）の誘導体（Ｘ₁ ＝ＣｙｓＸ₃ ＝ＣｙｓＸ
₄ ＝ＧｌｙＸ₆ ＝ＴｒｐＸ₉ ＝ＬｙｓＸ₁₁＝Ｃｙ
ｓＸ₁₄＝ＰｈｅＸ₁₇＝ＬｅｕＸ₂₁＝Ｔｒｐシステイン１−１５及び３−１１に２つのジスルフィド
橋を有する。

【００４９】実施例８：Cys-Ser-Cys-Asn-Ser-Ser-Leu-
Asp-Lys-Glu-Cys-Val-Tyr-Phe-Cys-His-Leu-Asp-Ile-Il
e-Trp （式（Ｉ）の誘導体（Ｘ₁ ＝ＣｙｓＸ₃ ＝ＣｙｓＸ
₄ ＝ＡｓｎＸ₆ ＝ＳｅｒＸ₉ ＝ＬｙｓＸ₁₁＝Ｃｙ
ｓＸ₁₄＝ＰｈｅＸ₁₇＝ＬｅｕＸ₂₁＝Ｔｒｐシステイン１−１５及び３−１１に２つのジスルフィド
橋を有する。

【００５０】実施例９：Cys-Ser-Cys-Phe-Ser-Asp-Leu-
Asp-Lys-Glu-Cys-Val-Tyr-Phe-Cys-His-Leu-Asp-Ile-Il
e-Trp （式（Ｉ）の誘導体（Ｘ₁ ＝ＣｙｓＸ₃ ＝ＣｙｓＸ
₄ ＝ＳｅｒＸ₆ ＝ＬｅｕＸ₉ ＝ＬｙｓＸ₁₁＝Ｃｙ
ｓＸ₁₄＝ＰｈｅＸ₁₇＝ＬｅｕＸ₂₁＝Ｔｒｐシステイン１−１５及び３−１１に２つのジスルフィド
橋を有する。

【００５１】実施例１０：Cys-Ser-Cys-Phe-Ser-Lys-Le
u-Asp-Lys-Glu-Cys-Val-Tyr-Phe-Cys-His-Leu-Asp-Ile-
Ile-Trp （式（Ｉ）の誘導体（Ｘ₁ ＝ＣｙｓＸ₃ ＝ＣｙｓＸ
₄ ＝ＰｈｅＸ₆ ＝ＬｙｓＸ₉ ＝ＬｙｓＸ₁₁＝Ｃｙ
ｓＸ₁₄＝ＰｈｅＸ₁₇＝ＬｅｕＸ₂₁＝Ｔｒｐシステイン１−１５及び３−１１に２つのジスルフィド
橋を有する。

【００５２】実施例１１：Cys-Ser-Cys-Phe-Ser-Thr-Le
u-Asp-Lys-Glu-Cys-Val-Tyr-Tyr-Cys-His-Leu-Asp-Ile-
Ile-Trp （式（Ｉ）の誘導体（Ｘ₁ ＝ＣｙｓＸ₃ ＝ＣｙｓＸ
₄ ＝ＰｈｅＸ₆ ＝ＴｈｒＸ₉ ＝ＬｙｓＸ₁₁＝Ｃｙ
ｓＸ₁₄＝ＴｙｒＸ₁₇＝ＬｅｕＸ₂₁＝Ｔｒｐシステイン１−１５及び３−１１に２つのジスルフィド
橋を有する。

【００５３】実施例１２：Cys-Ser-Cys-Asn-Ser-Trp-Le
u-Asp-Lys-Glu-Cys-Val-Tyr-Phe-Cys-His-Asp-Asp-Ile-
Ile-Trp （式（Ｉ）の誘導体（Ｘ₁ ＝ＣｙｓＸ₃ ＝ＣｙｓＸ
₄ ＝ＡｓｎＸ₆ ＝ＴｒｐＸ₉ ＝ＬｙｓＸ₁₁＝Ｃｙ
ｓＸ₁₄＝ＰｈｅＸ₁₇＝ＬｅｕＸ₂₁＝Ｔｒｐシステイン１−１５及び３−１１に２つのジスルフィド
橋を有する。

【００５４】実施例１３：Cys-Ser-Ala-Phe-Ser-Ser-Le
u-Asp-Lys-Glu-Ala-Val-Tyr-Phe-Cys-His-Leu-Asp-Ile-
Ile-Trp （式（Ｉ）の誘導体（Ｘ₁ ＝ＣｙｓＸ₃ ＝ＡｌａＸ
₄ ＝ＰｈｅＸ₆ ＝ＳｅｒＸ₉ ＝ＬｙｓＸ₁₁＝Ａｌ
ａＸ₁₄＝ＰｈｅＸ₁₇＝ＬｅｕＸ₂₁＝Ｔｒｐシステイン１−１５に１つのジスルフィド橋を有する。

【００５５】実施例１４：Cys-Ser-Cys-Asn-Ser-Thr-Le
u-Asp-Lys-Glu-Cys-Val-Tyr-Phe-Cys-His-Leu-Asp-Ile-
Ile-Trp （式（Ｉ）の誘導体（Ｘ₁ ＝ＣｙｓＸ₃ ＝ＣｙｓＸ
₄ ＝ＡｓｎＸ₆ ＝ＴｈｒＸ₉ ＝ＬｙｓＸ₁₁＝Ｃｙ
ｓＸ₁₄＝ＰｈｅＸ₁₇＝ＬｅｕＸ₂₁＝Ｔｒｐシステイン１−１５及び３−１１に２つのジスルフィド
橋を有する。

【００５６】実施例１５： H-Ser-Cys-Phe-Ser-Ser-Le
u-Asp-Lys-Glu-Ala-Val-Tyr-Phe-Cys-His-Leu-Asp-Ile-
Ile-Trp （式（Ｉ）の誘導体（Ｘ₁ ＝ＨＸ₃ ＝ＣｙｓＸ₄ ＝
ＰｈｅＸ₆ ＝ＳｅｒＸ₉ ＝ＬｙｓＸ₁₁＝ＡｌａＸ
₁₄＝ＰｈｅＸ₁₇＝ＬｅｕＸ₂₁＝Ｔｒｐシステイン
２及び１４の間に１つのジスルフィド橋を有する。

【００５７】実施例１６： H-Ser-Cys-Asn-Ser-Trp-Le
u-Asp-Lys-Glu-Ala-Val-Tyr-Phe-Cys-His-Leu-Asp-Ile-
Ile-Trp （式（Ｉ）の誘導体（Ｘ₁ ＝ＨＸ₃ ＝ＣｙｓＸ₄ ＝
ＡｓｎＸ₆ ＝ＴｒｐＸ₉ ＝ＬｙｓＸ₁₁＝ＡｌａＸ
₁₄＝ＰｈｅＸ₁₇＝ＬｅｕＸ₂₁＝Ｔｒｐシステイン
２及び１４の間に１つのジスルフィド橋を有する。

【００５８】実施例１７：Cys-Ser-Ala-Asn-Ser-Trp-Le
u-Asp-Lys-Glu-Ala-Val-Tyr-Phe-Cys-His-Leu-Asp-Ile-
Ile-Trp （式（Ｉ）の誘導体（Ｘ₁ ＝ＣｙｓＸ₃ ＝ＡｌａＸ
₄ ＝ＡｓｎＸ₆ ＝ＴｒｐＸ₉ ＝ＬｙｓＸ₁₁＝Ａｌ
ａＸ₁₄＝ＰｈｅＸ₁₇＝ＬｅｕＸ₂₁＝Ｔｒｐシステイン１−１５間に１つのジスルフィド橋を有す
る。各生成物を配列決定し、その質量を質量分析により
確認した。

【００５９】実施例１８：下記の配合に対応する注射可
能溶液を調製した： − 実施例１の生成物１ｍｇ − 無菌水性賦形剤２ｍｌ

【００６０】実施例１９：下記の配合に対応する錠剤を
調製した： − 実施例１の生成物２ｍｇ − 賦形剤（完成した錠剤１錠が右記重量となるように処方する）１５０ｍｇ（賦形剤の組成：ラクトース、澱粉、タルク、ステアリ
ン酸マグネシウム）。

【００６１】エンドセリン受容体についての活性の研究膜標品を、ラットの小脳を加えた後部皮質から調製す
る。組織を、POLYTRONを用いて、５０ｍＭトリス緩衝
液（ｐＨ７．４）中で粉砕する。２５℃（水浴）で３０
分経過後、ホモジェネートを３０，０００ｇで１５分間
遠心分離する（間でトリス緩衝液（ｐＨ７．４）中に採
集する２回の遠心分離）。ペレットをインキュベーショ
ン緩衝液（２５ｍＭトリス、５μｇ／ｍｌペプスタ
チンＡ、３μｇ／ｍｌアプロチニン、０．１ｍＭＰ
ＭＳＦ、３ｍＭＥＤＴＡ、１ｍＭＥＧＴＡｐＨ７．
４）中に再懸濁する。２ｍｌのアリコートを溶血管中に
分配し、［ ¹²⁵Ｉ］エンドセリン（約５０，０００ｄｐ
ｍ／管）及び試験生成物を加える。（この生成物を最初
に３×１０^-5Ｍで三重に試験する。）この試験生成物が
受容体に特異的に結合する放射能の５０％より多くを置
換した場合には、それを、受容体に特異的に結合する放
射能の５０％を阻害する濃度を決定するために一連の７
種の濃度によって再試験する。非特異的結合は、１０^-6
Ｍエンドセリンを加えることによって測定する（三重
に行なう）。この標品を２５℃で６０分間インキュベー
トし、０℃の水浴上に５分間置き、減圧下で濾過し及び
トリス緩衝液（ｐＨ７．４）ですすぎ、そしてトリトン
シンチラントの存在下で放射能を計数する。その結果
を、５０％阻害濃度（ＩＣ₅₀）として、即ち、研究した
受容体に特異的に結合する放射能の５０％を置換するの
に必要な試験生成物の濃度（ｎＭで表示）として表示す
る。

【００６２】結果：実施例１〜１７の生成物について見
出されたＩＣ₅₀値を、下記の表Ｉに、ナノモルで与え
る。

【表１】

【００６３】ピスしたラットにおける血管収縮活性及び
エンドセリンの効果についてのアンタゴニスト活性の研
究雄のSprague-Dawleyラットを、腹腔内注射によりネンブ
タール（６０ｍｇ／ｋｇ）で麻酔する。次いで、それら
の動物をピスして補助換気（１ｍｌ／１００ｇ−毎分５
０吸入）下に置き、その後に、迷走神経を切断する。動
脈血圧を記録するために頸動脈にカテーテルを入れ、試
験生成物を陰部静脈に注入する。

【００６４】・血管収縮活性の研究これらの動物に、エンドセリン１又は試験化合物を静脈
から累積的注射により与える（２分間隔で投与する）。

【００６５】各化合物によって減じた動脈血圧（ｍＡＢ
Ｐ）の増加を測定し、初期圧に対する変化パーセンテー
ジとして表示する。

【００６６】・エンドセリン−アンタゴニスト活性の研
究溶媒又は試験化合物の静脈注射の１０分後に、動物に、
エンドセリン１を、累積的（１、３、１０及び３０μｇ
／ｋｇ静脈注射）に、２分ごとに投与する。

【００６７】アンタゴニスト活性を、３〜１０μｇ／ｋ
ｇの投与量で単独投与したエンドセリンに対する昇圧応
答の阻止パーセンテージとして表示する。

【００６８】結果実施例４の化合物の血管収縮活性を下記の表ＩＩに与え
る：

【表２】

【００６９】実施例４の化合物のアンタゴニスト活性を
下記の表ＩＩＩに与える：

【表３】

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者ダン・ルヌギアンフランス国モンペリエ、ル・グラン・マイユ、391

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】下記の一般式（Ｉ）【化１】（式中、Ｘ₁ は、水素原子又はシステイン残基を表し、
Ｘ₃ は、システイン又はアラニン残基を表し、Ｘ₄ は、
アスパラギン、フェニルアラニン、ロイシン、イソロイ
シン、アラニン、バリン、グリシン残基及びそれらのＤ
系列の同族体を表し、Ｘ₆ は、トリプトファン、フェニ
ルアラニン、ロイシン、イソロイシン、アラニン、バリ
ン、グリシン、セリン、リジン、アスパラギン酸、チロ
シン、スレオニン残基及びそれらのＤ系列の同族体を表
し、Ｘ₉ 及びＸ₁₇は、グルタミン酸、アスパラギン酸、
リジン、アルギニン、チロシン、ロイシン残基及びそれ
らのＤ系列の同族体を表し、Ｘ₁₁は、システイン又はア
ラニン残基を表し、Ｘ₁₄は、チロシン、フェニルアラニ
ン、ロイシン、イソロイシン、アラニン、バリン、グリ
シン、セリン、リジン、アスパラギン酸、スレオニン残
基及びそれらのＤ系列の同族体を表し、Ｘ₂₁は、水素原
子又はトリプトファン若しくはＤ−トリプトファン残基
を表す）に相当する新規なペプチド誘導体、並びに、適
当であるならば、１若しくは２個のジスルフィド橋を有
するそれらの誘導体（但し、Ｘ₂₁は、Ｘ₁ 、Ｘ₃ 及びＸ
₁₁がシステイン残基を表す場合にはトリプトファンを表
すことは出来ず、Ｘ₄ は、アスパラギン残基を表し、Ｘ
₆ は、トリプトファン残基を表し、Ｘ₉ はリジン残基、
Ｘ₁₄はフェニルアラニン残基及びＸ₁₇はロイシン残基を
表す）。
【請求項２】Ｘ₄ は、アスパラギン、フェニルアラニ
ン、グリシン残基及び、それらのＤ系列の同族体を表
し、Ｘ₆ は、トリプトファン、セリン、リジン、アスパ
ラギン酸、チロシン、スレオニン残基及び、それらのＤ
系列の同族体を表し、Ｘ₉ 及びＸ₁₇は、グルタミン酸、
アスパラギン酸、リジン、ロイシン残基及び、それらの
Ｄ系列の同族体を表し、Ｘ₁₄は、チロシン、フェニルア
ラニン残基及び、それらのＤ系列の同族体を表し、Ｘ
₁ 、Ｘ₃ 、Ｘ₁₁及びＸ₂₁は、前述した意味を有すること
を特徴とする、請求項１に記載のペプチド誘導体、並び
に、適当であるならば、１又は２個のジスルフィド橋を
有するそれらの誘導体。
【請求項３】Ｘ₁ は、システイン残基を表し、Ｘ₃
は、システイン又はアラニン残基を表し、Ｘ₄ は、アス
パラギン、フェニルアラニン、グリシン残基及び、それ
らのＤ系列の同族体を表し、Ｘ₆ は、トリプトファン、
セリン、リジン、アスパラギン酸、チロシン、スレオニ
ン残基及び、それらのＤ系列の同族体を表し、Ｘ₉ 及び
Ｘ₁₇は、グルタミン酸、アスパラギン酸、リジン、ロイ
シン残基及び、それらのＤ系列の同族体を表し、Ｘ
₁₁は、システイン残基を表し、Ｘ₁₄は、チロシン、フェ
ニルアラニン残基及び、それらのＤ系列の同族体を表
し、Ｘ₂₁は、トリプトファン残基及び、そのＤ系列の同
族体を表すことを特徴とする、請求項１又は２に記載の
ペプチド誘導体、並びに、適当であるならば、１又は２
個のジスルフィド橋を有するそれらの誘導体。
【請求項４】名称が下記するものである請求項３に記
載のペプチド誘導体及び、適当であるならば、１又は２
個のジスルフィド橋を有するそれらの誘導体：【化２】【化３】【化４】【化５】【化６】【化７】。
【請求項５】名称が下記するものである請求項１、２
又は３に記載のペプチド誘導体及び１又は２個のジスル
フィド橋を有するその誘導体：【化８】。
【請求項６】固相合成を、適当に保護したアミノ酸を
順次に架橋ポリスチレン型担体上にカップリング剤を用
いて導入することによって行ない、それらのアミノ酸を
脱保護し及びそれにより形成されたペプチド鎖を樹脂か
ら遊離させ、次いで、適当であるならば、ジスルフィド
橋を環化させ、そうして、求める式（Ｉ）のペプチド誘
導体を得ることを特徴とする、請求項１に記載の新規な
ペプチド誘導体を製造する方法。
【請求項７】下記を特徴とする、請求項６に記載の方
法： − 架橋ポリスチレン型担体は、「Boc-X₂₁-CM」型の樹
脂（ここに、Ｂｏｃはｔ−ブチルオキシ−カルボニル基
であり、Ｘ₂₁は上述の意味を有し、ＣＭは架橋ポリスチ
レン担体を示す）であり、 − カップリング剤は、ベンゾトリアゾール−１−イル
オキシトリス−（ジメチルアミノ）ホスホニウムヘキサ
フルオロホスフェート即ちＢｏｐであり、 − ペプチド鎖の担体からの遊離並びにアミノ酸の脱保
護は、フッ化水素酸を用いて、低温で、好ましくは、０
℃で行なう。
【請求項８】請求項１に記載の一般式（Ｉ）により規
定される新規なペプチド誘導体からなることを特徴とす
る、医薬品。
【請求項９】請求項２、３、４及び５の何れか１つに
おいて規定される新規なペプチド誘導体からなることを
特徴とする、医薬品。
【請求項１０】請求項８及び９の何れかにおいて規定
される医薬品の少なくとも１つを活性成分として含むこ
とを特徴とする医薬組成物。