JPH06504258A - ニューモシスティス カリニ ジヒドロ葉酸レダクターゼのインヒビター - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ニューモジステイス　カリニ　ジヒドロ葉レダクターゼのインヒビター 慶−輪 肢血５■ 本発明は、ジヒドロ葉酸レダクターゼ（ＤＨＦＲ）のインヒビターを用いてＰ、 カリニ肺炎の処理方法に関する。

肺炎は、後天性免疫欠損症候群（ＡＩＤＳ）における病的状態及び死亡率の主な 原因である。ＡＩＤＳ流行の開始以来、Ｐ、カリニ肺炎の発生率は、アメリカ合 衆国において１年当たり２００事例から１年当たり２５．０００以上の事例に上 昇して来た。

連続したインビトロ培養システムの欠乏及びＰ、カリニ肺炎のラットモデルの厄 介な性質のために、抗−Ｐ、カリニ治療は、抗原虫剤がたぶん効果的である仮定 に基づいて広く開発されて来た。事実、Ｐ、カリニは最近、多くの菌類であるこ とが示されている。２種の主な治療様式、すなわちトリメトプリム／スルファメ トキサゾール及びペンタミジンが抗−原虫理論を用いて開発されて来た。

トリメトプリム及びピリメタミン、及び他のジヒドロ葉酸レダクターゼ（ＤＨＦ Ｒ）インヒビター（たとえばメトトレキセート）は、核酸前駆体の新規合成にお いてＤＨＦＲにより示される中心的な役割のために、効果的な抗腫瘍剤、抗細菌 剤及び抗原虫剤であることが知られている。それらの明白な効力にもかかわらす 、スルホンアミドと一緒に使用される場合、トリメトプリム及びピリメタミンは 、Ｐ、カリニＤＨＦＲの良好でないインヒビターである〔類似する基質濃度でＥ 、コリＤＨＦＲに関して８及び２，５００ｎＭであるのに比べて、それぞれ３９ ，６００及び２，４００ｎＭの５０％阻害濃度値（ＩＣ５゜）〕。他の抗葉酸は 、Ｐ、カリニＤＨＦＲのより効果的なインヒビターであることが示されているが 、しかし宿主の毒性を妨ぐためにロイコボリンの同時投与を要する。

ＡＩＤＳ流行の前、これらのタイプの物質は、Ｐ　カリニ肺炎のまれな事例の処 置のために十分であった。しかしながら、ＨＩＶ−陽性愚者においては、標準の 抗−Ｐ、カリニ剤による治療及び予防は、毒性及びアレルギー性副作用により複 雑化される。ニューモジステイス肺炎の処置における既知の抗葉酸の効能を越え る新規化合物は、既知のインヒビター、たとえばトリメトプリムのために存在す る選択性よりも宿主（特にヒ１−）ＤＨＦＲに関するＰ、カリニＤＨＦＲのため の高い選択性を有する所望するインヒビターである。

笑１文献 多（の１−アリール−Ｓ−トリアジン化合物及びマラリアの処理へのそれらの使 用が、アメリカ特許第３．０７４．９４７号に記載されている。抗マラリア化合 物、すなわち、インビボでシクログアニルに転換されるプログアニルとしても知 られるＮ１−ｐ−クロロフェニル−Ｎ５−イソプロビルビグアニトが、アメリカ 特許第２．５２９．９９２号にその生成方法と共に記載されている。レイスヒマ ニア（Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ）ジヒドロ葉酸レダクターゼのトリアジン−抗葉酸 阻害の定量構造−活性関係及び細胞増殖、並びに使用されるいくつかの化合物の ための合成技法がＢｏｏｔＴ′４など、、　Ｊ、Ｍｅｄ、Ｃｈｅｍ、　（１９８ ７）３０　：　１２１８〜１２２４に記載されている。

λ匪叫！對 現在知られているＤＨＦＲＨＦ上ビター、たとえばトリメトプリムよりも、宿主 ＤＨＦＲ１特にヒトＤＨＦＲに関するＰ、カリニＤＨＦＲのためにより選択的で あり、又はＰ、カニ三ＤＨＦＲのためにより高い親和性を有するジヒドロ葉酸レ ダクターゼ　インヒビターを用いてＰ、カリニを処理し又は妨くための方法を提 供することが本発明の目的である。

本発明のこの及び他の目的は、Ｐ、カリニにより感染された宿主に１−フェニル −ｓ−トリアジンを投与することによって、哺乳類ジヒドロ葉酸レダクターゼの 存在下で、Ｐ、カニ三　ジヒドロ葉酸レダクターセを選択的に阻害する方法を提 供することによって達成される。１−フェニル−３−トリアジンは、マラリアに 対して効果的であるが、しかしＰ、カニ三肺炎の処理においてはこれまで使用さ れていない既知の化合物である。下記式： 〔式中、Ｘ、Ｙ及びＺは、水素、ヒドロキシ、ハロゲン、アリール低級アルキル 、低級アルキル、低級アルキルチオ、低級アルキルオキシ、及びトリフルオロメ チルから成る基から独立して選択され、又はＸ及びＹの１つは、ＣＯ□Ｒ（ここ でＲは低級アルキルである）　、０ＣＨｚＣ１，０ＣＨｉ及び少なくとも３個の 炭素原子を含み、そして次の式−Ａ−（ＣＩ！□）、、Ａ２　Ｒ３（ここでＡ、 は結合、０又はＳであり；ｎは１〜１２の整数であり；Ａ２は結合、Ｏ，Ｓ、Ｓ ｅ又はＮＨであり；そしてＲ１はメチル、アダマンチル、ナフチル、フェニル、 及びハロ、１〜６個の炭素原子の低級アルキル、トリフルオロメチル、低級アル コキシ、シアノ、アセトアミド、ウレイド、フェニル及びアミドから成る基から 選択された１〜３個の基により置換されたフェニルから成る基から選択される） で表わされる基から成る基から選択され； Ｒ１は低級アルキルであり；そして Ｒ２は水素又はメチルである］で表わされるトリアジン及び前記式のトリアジン と有機又は無機酸との反応により形成されるアミド又は酸付加塩が特に好ましい 。１−フェニル−５−１−リアジンの前駆体、たとえば、既知の抗マラリア１− フェニル−５−）リアジンであるシクログアニルにインビボで転換さ羽、ること か知られているプログアニルによる処理は、■−フェニル＝ｓ−トリアジン自体 による処理に同等である。

図面の簡単な説明 図は、Ｐ、カリニＤＨＦＲ活性に対する一連の異なって置換されたトリアジンの 効果を示すグラフである。

特定辺１４Ωに蔵 本発明は、ニューモジステイス　カリニの増殖を阻害するために有効な１−フェ ニル−３−トリアジンを宿主に投与することによって哺乳類宿主におけるニュー モジステイス　左Ｉ７　三の増殖を阻害するための方法を提供する。１−フェニ ル−ｓ−トリアジンは、抗マラリア剤として効果的であることが知られている化 合物である。しかしながら、それらは、本発明の前、Ｐ、カリニ肺炎の処理に使 用されたことはなかった。

本発明者の実験室での実験は、多くの異なった１−フェニル−３−トリアジン化 合物が哺乳類ＤＨＦＲに関するＰ、力ＩＪ　＝のジヒドロ葉酸レダクターゼを阻 害するそれらの能力において選択的であることを示した。たとえは本発明の多く の化合物は、ヒトに関するＰｃＤＨＦＲのための低いに８により示されるように ヒトＤＨＦＲよりもＰ、、７ｘｌ、Ｊ−ＤＨＦＲ（ＰｃＤＨＦＲ）のために選択 的である。特定化合物に基づくデータについての下記例に見られる表を参照のこ と。しかしながら、ＰｃＤＨＦＲに関するヒトＤＨＦＲにより強く結合する本発 明の化合物でさえ、Ｐ、カリぞ感染を処理するために現在使用されている物質よ りも改良点を示す。たとえば４．６−ジアミツー１−（ｐ−クロロフェニル）■ 、２−ジヒドロー２．２−ジメチル−５−１−リアジンである抗マラリア化合物 シクログアニルは、Ｐ、カリニＤＨＦＲのために１１０９ｎのに、を示すが、し かしヒ１−ＤＨＦＲのだめのそのに、は４３００ｎＭである。従って、シクログ アニルは、Ｐ。

対照的に、トリメトプリム、すなわちＰ、カリニ感染を処理するために最っとも 広く使用される抗薬酸塩は、Ｐ、カリニ酵素の良好でないインヒビターであり、 そしてヒＩ−ＤＨＦＲに対して高い特異性を示す。トリメトプリムは、Ｐ、カリ ニＤＨＦＲのために２８０μＭのに、及びヒトＤＨＦＲのために４８μＭのに、 を有する。従って、それは、シクログアニルの約２倍はど、感染性生物のＤＨＦ Ｒのために逆選択性を示し、そしてそれは好ましい態様のＰｃ−選択性化合物よ りも明らかに選択的でない。

従って、シクログアニル及び関連する１−フェニル−８−トリアジン及びそれら の前駆体は、単独で又は他の物質と組合して、哺乳類、特にヒ１−ＤＨＦＲの存 在下でＰ、カリニＤＨＦＲを選択的に阻害するそれらの能力のためにニューモジ ステイス　−カリニによる哺乳類感染の処理においてトリメトプリムよりもより 効果的であろう。

本発明の方法に使用される化合物は、１−フェニル−Ｓ　−トリアジンであり、 そして特に、４．６−ジアミツー１．２−ジヒドロ−１−フェニル−８−トリア ジン並びにトリアジンのアミノ基と無機又は有機酸との反応により形成されるア ミド及び塩が好ましい。そのような化合物は、典型的には、下記式： ：式中、Ｘ、Ｙ及びＺは、水素、ヒドロキシ、ハロゲン、アルキル、アリールア ルキル、アルキルチオ、アルキルオキシ及びトリフルオロメチル（並びに本出願 において命名された１又は複数の有機置換基により官能価され１こそれらのアル キル基のいづれか）から成る基から独立し、て選択され；Ｒ３は低級アルキルで あり；そして Ｒ２１よ水素又はメチルである：・により表わされる。

前記定義に使用される場合、ハロゲンは、弗素、塩素、臭素又はヨウ素原子を示 す。アルキルは、好まじい態様においては、１〜１５個の炭素原子を含む線状又 は枝分れのアルキルを意味する。低級アルキルは好ましくは、１〜５個の炭素原 子を含む線状又は枝分れのアルキル基を意味する。アリール基は、好ましくは、 １又は２個の芳香族環（２個の環の場合、好ましくは融合される）を含む炭素環 式又は複素環式系である。適切なアリール環の例は、ヘンゼン、フラン、チオフ ェン、ピロール、ビラゾール、トリアゾール、イソキサゾール、オキサゾール、 チアゾール、イソチアゾール、ピラン、ピロン、ジオキシン、ピリジン、ビリジ ジン、プリミジン、ピラジン、トリアジン、インデン、ヘンシフラン、イソヘン シフラン、ヘンジチオフラン、インドール、ナフタレン、クマリン、キノリン及 びイソキノリンを包含する。単純なアリール基、たとえばフェニル、ナフチル及 び単一環の複素環が好ましい。フェニルが特に好ましい。好ましいアリール低級 アルキル基は、アリール及び低級アルキル置換基が前で定義された意味を有する ものである。ヘンシルが、特に好ましいアリール低級アルキル基である。すべて の場合、芳香族環上に見出される通常の置換基、たとえばハロゲン、アミノ、ヒ ドロキシ及びアミド基が存在することができ、そして了り−ルの意味内に包含さ れる。しかしなから、水素によってのみ置換されたアリール基が好ましい。１− フェニル−８−トリアジンのフェニル基へのＸ、Ｙ又はＺの結合は好ましくは、 −ＣＨ２−、−Ｃ）−２又は−Ｓ−結合を通して生じる。結合の点での枝分れ（ たとえばし−ブチルにおけるように）又はフェニル環に結合される原子のために ｓ　ｐ　３以外のハイブリダイゼーションはほとんど好ましくない。

Ｙが水素、ハロゲン、メチル又はトリフルオロメチルである化合物が特に好まし い。Ｘ、Ｙ及びＺの少なくとも１つが水素である化合物もまた好ましく；特にＹ がクロロ、トリフルオロメチル、メチル、メトキシ又はヒドロキシである場合、 Ｘ及びＺの両者が水素である化合物が特に好ましい。Ｒ１のための好ましい基は メチル及びエチルであり、そしてＲｏ及びＲ２の両者がメチルであるものが特に 好ましい。特定の好ましい化合物はシクログアニル及び関連する化合物を包含し 、ここでシクログアニルのフェニル環上の塩素がトリフルオロメチル、メチル、 メトキシ又はヒドロキシ基により置換される。

他の好ましい化合物は、Ｒ１及びＲ２のそれぞれがメチルであり、そしてＸ及び Ｙのいづれかがクロロであり、又はＸ及びＹの１つがＣＯ□Ｒ（ここでＲは低級 アルキルである）、−０ＣＲ２Ｃ１，−ＯＣＨ，及び少なくとも３個の炭素原子 を含み、そして式−へ＋　（Ｃ）！２）、、Ａ２　Ｒ：Ｉ（ここでＡ、は結合、 ０、又はＳであり；ｎは１〜１２の整数であり；Ａ２は結合、０゜Ｓ、Ｓｅ又は ＮＨであり；そしてＲ３はメチル、アダマンチル、ナフチル、フェニル、及びハ ロ、１〜６個の炭素原子の低級アルキル、トリフルオロメチル、低級アルコキシ 、シアノ、アセトアミド、ウレイド、フェニル及びアミドから成る基から選択さ れた１〜３個の基により置換さ孔たフェニルから成る基から選択される）で表わ される基から成る基から選択されるものを包含する。

特定の好ましい化合物の群は、少なくとも０．５の選択性（ヒトＫｉ／ＰｃＫ１ 　として定義される）を有する次の例の第２表におけるすべての化合物から成り ；より好ましい特定の群は、少な（とも０．９の選択性を有する化合物から成り ；さらに一層好ましい群は、少な（とも０．２の選択性を有する。

本発明の実施に使用される４、６−ジアミツー１．２−ジヒドロ−低級アルキル −１−アリール−８−トリアジン及びそれらの可溶性塩は、種々の方法で調製さ れ得る。それらは、下記式： ［式中、Ｘ、Ｙ及びＺは上記の通りである〕で表わされる１−アリールビグアニ ドと下記式： ％式％ Ｃ式中、Ｒ，及びＲ２は上記の通りである〕で表わされる低級脂肪族アルデヒド 又はケトンとを、強酸の存在下で反応せしめることによって調製され得る。１− アリールビグアニドは、下記式： ［式中、Ｘ、　Ｙ及びＺは上記の通りである〕で表わされるアニリン誘導体とジ シアンジアミドとを強酸の存在下で反応せしめることによって得られる。他方、 アニリン誘導体、アルデヒド又はケトン及びジシアンジアミドは強酸の存在下で 反応せしめられ、そして所望するトリアジン誘導体が直接的に得られる。この方 法は、Ｒ，及びＲ２の両者が低級アルキル基である場合に好ましい。所望するト リアジン誘導体は、酸付加塩として又は塩基化に続く遊離塩基として反応混合物 から直接的に得られる。

上記遊離トリアジンの他に、無機又は有機酸と遊離アミノ基の１つとの反応によ り形成される塩及びアミドも、本発明の実施に使用され得る。無機塩の例は、塩 酸、臭酸及び硫酸を包含する。有機酸の例は、多くのカルホン酸、たとえば酢酸 及び種々の脂肪酸のいづれかを包含する。パモン酸塩、たとえば他の疾病の処理 においてトリアジンの長期作用形を供給することにおいて効果的であることが示 されている塩が特に好ましい。たとえばアメリカ特許第３．０７４．９４７号を 参照のこと。

前記トリアジンの１つの前駆体として作用する化合物の投与（よ、トリアジン自 体の投与に等しいと思７）２１．る。たとえば、１−ｐ−クロロフェニル−５− イソプロピルビグアニドである化合物プログアニルは、哺乳類宿王への投与に基 づいてシクログアニル（上記）にゆっくりと転換されることが示されている。は とんどの前駆体は、下記式：％式％ ［式中、Ｘ、Ｙ、Ｚ、Ｒ，及びＲ２は上記の通りである］で表わされるビグアニ ドである。ビグアニドは、上記一般的な反応により調製され得る。たとえば、Ｋ ｕｒｄなと、＋　Ｊ−Ｃｈｅｍ。

Ｓｏｃ、　１９４６　：　７２９及びＫｕｒｄなど、、前記、９４８　：　１６ ３０を参照のこと。

本発明の方法は、Ｐ、カリニに対する増強された有効性を付与するために、上記 のような化合物を単独で又は第２の（又は追加の）化合物と組合して用いること を包含する。使用される第２の化合物は典型的には、（１）ニューモジステイス 　カリニにおけるジヒドロ葉酸レダクターゼインヒビターの活性を強化し又は（ ２）哺乳類宿主におけるジヒドロ葉酸レダクターゼインヒビターの作用に対抗し 又は回避することが知られている化合物である。たとえばスルホンアミド又はダ プソーンは、ＤＨＦＲＨＦ上ビターの効果を強めるために使用され得る。そのよ うな組合せは、他の寄生生物、たとえばマラリアの処理に知られている。たとえ ばトリメトプリム及びスルホンアミド、たとえばスルファメトキサゾールの組合 せは、商標５ｅｐｔｒａ及びＢａｃｔｒｉｍ下で、グラム陰性細菌、たとエバ↓ −−−−フヲとの処理に使用されており、そしてトリアジン及びスルホンアミド の組合せは、同様に、本事例において有用であるはずである。他方、抗薬酸物質 因子（ＣＦ；またロイコボリンとしても知られている；５−ホルミル−５，６， ７゜８−テトラヒドロ葉酸）は、還元された葉酸塩の直接的な源を提供すること によってＤＨＦＲＨＦ上ビターの効果を逆転することか知られている。ＣＦは通 常、一定タイブの癌の処理においてメトトレキセートの効果を逆転するために使 用されて来た。しかしながら、ＣＦはニューモジステイス　、５１Ｊ−と細胞に 侵入せず、その結果、それはＰ、カリニ細胞自体を助けないでＰ、カリニＤＨＦ Ｒインヒヒターの効果から宿主細胞を助けることができる。この原理は、ヒ１− ＤＨＦＲを潜在的に阻害する、非特異的抗薬酸塩、たとえばトリメトレキセート およびピリドレキシムによるＰ、カリニ肺炎の処理にこれまで適用されて来た。

トリアジン、たとえばシクログアニルと共に抗薬酸物質因子の同時投与は、還元 された葉酸塩源の不在Ｆにおいて可能であるよりも、ヒＩ−ＤＨＦＲの阻害によ り引き起こされる毒性を伴ないでより高い用量又は長期の持続肋間の使用を可能 にするであろう。テトラヒドロ葉酸塩の他の源が、ＣＦの代わりに使用され得る 。５−メチルＴＨＦは、還元された葉酸塩の種々の源の例である。

本発明の組成物は、生物の増殖を阻害するのに十分な量て経口又は非経口に投与 され得る。生物の死は必要とされないが、しかし好ましい。その用量は、宿主に 対する不必要な毒性を回避するために必要に応して調整される。初期処理は通常 、０．１〜３０ｍｇ／ｋｇ体重、特に１〜３ｍｇ／ｋｇの範囲の用量で開始する であろう。抗−肺炎薬物として、投与準位形、たとえば経口投与のためには糖剤 又はカプセル又は注射のためにはアンプルが好ましく、それぞれは１種の活性物 質又はその混合物５０〜２００■を含む。そのような投与単位は一般的に、患者 の状態に依存して１日１〜３回、好ましくは５回投与される。

経口投与に関しては、錠剤、糖剤、粉末又は顆粒が特に使用され得、ここでそれ らは、活性物質及び通常の賦形剤及びアジュバント、たとえばスターチ、セルロ ース粉末、タルク、ステアリン酸マグネシウム、糖、ゼラチン、炭酸カルシウム 、細かく分割された珪酸、カルボキシメチルセルロース又は類似する物質の混合 物を含む。

非経口投与に関しては、特に筋肉的注射に関しては、殺菌懸濁液、たとえば脂肪 油、たとえばオリーブ油、セラミ油、ビーナツツ油、ヒマシ油又は合成トリグリ セリドの使用、場合によっては、界面活性剤、たとえばソルビタン脂肪酸エステ ルの同時使用により調製される油状懸濁液が使用され得る。

さらに、水性懸濁液は、たとえばエトキシル化されたソルビタン脂肪酸エステル の使用により、場合によっては、増粘剤、たとえばポリエチレングリコール又は カルボキシメチルセルロースの添加により調製され得る。

本発明の抗−肺炎組成物の効能を試験するために、その水性懸濁液を、食道用ソ ンデを用いることによって、Ｐ、カリー丑−により怒染されたラットに投与する 。ラットは、ヒトＤＨＦＲと同しＤＨＦＲアミノ酸配列を有し、その結果、その ような投与はヒトへの投与と容易に相互関係する。このためには、活性成分を水 又は他の適切な溶媒に溶解し、又はチロース（Ｔｙｌｏｓｅ）懸濁液１　ｒａｆ ｔに試験されるべき組成物１００■を添加することによって２％水水性チロスス 懸濁液懸濁する。

試験されるべき活性物質の濃度は、水の添加により調整される。０．５ｄ／２０ ｇの体重のラットの用量が有用な初期用量を提供し、これはそれか達成する効果 に従って変更され得る。

投与の前、懸濁液は、活性物質の均質な分散液を得るために超音波により処理さ れる。

本発明の組成物は、慢性又は象、性処理のために又は予防のために使用され得る 。トリアジン、たとえば」二記ヒゲアニド前駆体又はパモエート塩の長期作用形 は、特に慢性感染の処理のために好ましい。

次の例は例示的であって、限定的ではない。

±↓ １００　ＬＭｃ７）ＤＨＦテノＰ、　カリ、ＺＤＨＦＲのためのバ」換フェ七四 ト＋ＪアジンのＩ（□ｑ迭淀種々の４，６−ジアミツー１−（ｐ−置換−フェニ ル）１゜２−ジヒドロ−２，２−ジメチル−３−トリアジン（一般的にバラ置換 フェニルトリアジンとして言及される）を、Ｐ。

立二三ＤＨＦＲ活性の阻害についてアッセイした。化合物を、水に種々の濃度（ １２，２５ｍＭ　〜５０ｍＭ）で溶解した。Ｇ１１ｓｏｎ自動サンフ゛ラー（Ｍ ｏｄｅｌ　４０１／２３２）を、マイクロタイタープレートのウェル中に個々の 化合物の８連続５−倍希釈を行なうようにプログラムした（個々の希釈の合計体 積は１２５μ！に等しい）。合計のＰ、カリニＤＨＦＲ活性の対照のためには、 １２５μ２の水をウェル中に分散した。次の成分を、得られる１２５ｍｆの溶液 に手動的に添加した：１０■／ｄのＢＳＡ（水中）２５μ！、２１のＮＡＤＰＨ （水中）１２．５μ！及びチメ緩衝液（２００ｍＭのＬｅｓ、３００ｍＭのＢＭ Ｅ、４ｍＭのＥ　Ｄ　ＴＡ、　ｐＨ７，０）中、４００μＭのＤ　ＨＦ　６２． ５５μ！。マイクロタイタープレートを、１分間、Ｔｉｔｅｒｔｅｋ振盪機上で 十分に振盪した。最後に、２５ｎＭのＰ、カリニＤＨＦＲ（５０ｍｈのｔｅｓ、 ５ｍＭのＤＴＴ、１ｍＦＩのＥＤＴＡ、１ｍｇ／−のＢＳＡ中）１０μｒを添加 し、そしてマイクロタイタープレートを再び、十分に振盪した。最終アッセイ条 件は、１００μＭのＮＡＤＰＨ１１００μＭのＤＨＦ、１ｏＭの旦ニーカリニＤ 　ＨＦ　Ｒ及び０．０７８μＭ〜２０ｎＭのパラ置換フェニルトリアジンであっ た。３４０ｎｒｎでの吸光度の低下の速度を、２５°ＣでＴｈｅｒｍｏ−ｍａｘ マイクロタイタープレート読取機（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｄｅｖｉｃｅｓ）で測 定した。

個々の化合物の活性を、合計のＰ、カリニＤＨＦＲ活性の百分率として表わした 。％合計活性対パラ置換フェニルトリアジンの濃度の対数のグラフをプロントし く図を参照のこと）、そして個々の化合物についての５０ＩＣを決定するために 使用し、そしてＤＨＦ（０，４μＭ）のに、と−緒に、ＩＣ５ｏを用いて、Ｋ、 値を計算した。

Ｃｌ　２０　ｕＭ　７０　ｎＭ −ＣＦ、　２５　ｕＭ　８７．５　ｎＭ−ＣＨＩ　３０　ｕＭ　１０５　ｎＭ ＯＣＨ３９０ｕＭ　３１５　ｎＭ −ＯＨ２５０ｕＭ　８７５　ｎＭ Ｃ０ＮＨｚ　＞　８３３３　ｕＭ　＞　２９００　ｎＭＮ　Ｏｘ　＞　８３３３ 　ｕ　Ｍ　＞　２９００　ｎ　Ｍｍ１ Ｐ、カリニＤＨＦＲびヒ１−ＤＨＦＲのためのｉ　フ屯王土トリアジンのＩＣ３ ゜の・ 種々の４．６−ジアミツー１−（置換−フェニル）１．２−ジヒドロ−２，２− ジメチル−３−トリアジン（一般的に置換フェニルトリアジンとして言及される ）を、Ｐ、カリそ−及びヒトＤＨＦＲ活性の阻害についてアッセイした。化合物 を、水に種々の濃度（１２，２５ｍＭ〜５０ｍＭ）で溶解した。

Ｇ１１ｓｏｎ自動サンプラー（Ｍｏｄｅｌ　４０１／２３２）を、マイクロタイ タープレートのウェル中に個々の化合物の８連続５−倍希釈を行なうようにプロ グラムした（個々の希釈の合計体積は１２５μ！に等しい）。合計のＰ、カリニ ＤＨＦＲ活性の対照のためには、１２５μ！の水をウェル中に分散した。次の成 分を、得られる１２５−の溶液に手動的に添加した：１０■／戚のＢＳＡ（水中 ）２５μ！、２鱈のＮＡＤＰＨ（水中）１２、５　ｕ　１及びチメ緩衝液（２０ ０ｍＭのｔｅｓ、３００ｍＭのＢＭＥ、４ｍＭのＥ　Ｄ　ＴＡ、　ｐＨ７，０） 中、１００８ＭのＤＨＦ６２、５５μ！。マイクロタイタープレートを、１分間 、Ｔｉｔｅｒｔｅｋ振盪機上で十分に振盪した。最後に、２５ｎＭのＰ、力匹三 ＤＨＦＲ（５０ｍＭのｔｅｓ、５ｍＭのＤＴＴ、１ｍＭのＥＤＴＡ、１■／戚の ＢＳＡ中）１０μ２を添加し、そしてマイクロタイタープレートを再び、十分に 振盪した。最終アッセイ条件は、１００μＭのＮＡＤＰＨ１２５μＭのＤＨＦ、 ０．４２ｎＭのＰ、カリニＤＨＦＲ及び０．０７８　ｕＭ〜２５ｎＭの置換フェ ニルトリアジンであった。３４０ｎｍでの吸光度の低下の速度を、２５゛ＣでＴ ｈｅｒｍｏ−１Ｉａｘマイクロタイタ一プレート読取機（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　 Ｄｅｖｉｃｅｓ）で測定した。

類似する態様で、アッセイを、組換えヒトＤＨＦＲにより行なった（但し、２ｎ Ｍの最終ヒ）ＤＨＦＲ濃度による）。

個々の化合物の活性を、合計のＤＨＦＲ活性の百分率として表わした。％合計活 性対置換フェニルトリアジンの濃度の対数のグラフをプロットし、そして個々の 化合物についての５０ＩＣを決定するために使用し、そしてＤＨＦ（０，３５μ Ｍ）のに１と一緒に、ＩＣ３゜（２５μＭで）を用いて、Ｋ。

値を計算した。

胸 轄 側 誇 本明細書に引用されるすべての出版物及び特許出願は、それぞれ個々の出版物又 は特許出願が引用によりあたかも組込まれているように、本明細書に引用により 組込まれる。

前述の発明は理解の明確さのために例示的且つ測的にいくらか詳細に記載してき たけれども、い（らかの変更及び修飾が本発明の範囲内で行なわれ得ることが当 業者に明らかであろう。

活性％ 国際調査報告

Claims (20)

【特許請求の範囲】
1. １．哺乳類宿主におけるニューモシスティスカリニの増殖を阻害するための方法 であって、 前記増殖を阻害するのに有効な量の１−フェニル−ｓ−トリアジンを前記宿主に 投与することを含んで成る方法。
2. ２．前記トリアジンが、４，６−ジアミノ−１，２−ジヒドロ−１−フェニル− ｓ−トリアジンである請求の範囲第１項記載の方法。
3. ３．前記トリアジンが、下記式： ▲数式、化学式、表等があります▼ ［式中、Ｘ，Ｙ及びＺは、水素、ヒドロキシ、ハロゲン、アリール低級アルキル 、低級アルキル、低級アルキルチオ、低級アルキルオキシ、及びトリフルオロメ チルから成る基から独立して選択され、又はＸ及びＹの１つは、ＣＯ５Ｏ２Ｒ（ ここでＲは低級アルキルである）、−ＯＣＨ２Ｃｌ−，−ＯＣＨ３及び少なくと も３個の炭素原子を含み、そして次の式−Ａ−（ＣＨ２）ｎ−Ａ２−Ｒ３（ここ でＡ１は結合、Ｏ又はＳであり；ｎは１〜１２の整数であり；Ａ２は結合、Ｏ， Ｓ，Ｓｅ又はＮＨであり；そしてＲ３はメチル、アダマンチル、ナフチル、フェ ニル、及びハロ、１〜６個の炭素原子の低級アルキル、トリフルオロメチル、低 級アルコキシ、シアノ、アセトアミド、ウレイド、フェニル及びアミドから成る 基から選択された１〜３個の基により置換されたフェニルから成る基から選択さ れる）で表わされる基から成る基から選択され； Ｒ１は低級アルキルであり；そして Ｒ２は水素又はメチルである〕で表わされ、又は前記トリアジンが前記式のトリ アジンと有機又は無機酸との反応により形成されるアミド又は酸付加塩である請 求の範囲第１項記載の方法。
4. ４．前記Ｙが水素、ハロゲン、メチル、メトキシ又はトリフルオロメチルである 請求の範囲第３項記載の方法。
5. ５．Ｘ，Ｙ及びＺの少なくとも１つが水素である請求の範囲第３項記載の方法。
6. ６．前記Ｙがクロロ、ハロゲン、メチル、メトキシ又はトリフルオロメチルであ る請求の範囲第５項記載の方法。
7. ７．前記Ｘ及びＺが水素である請求の範囲第６項記載の方法。
8. ８．前記Ｒ１及びＲ２が両者ともメチルである請求の範囲第７項記載の方法。
9. ９．前記トリアジンが前記式の塩である請求の範囲第３項記載の方法。
10. １０．前記塩がパモン酸付加塩である請求の範囲第９項記載の方法。
11. １１．前記トリアジンがシクログアニルであり、そしてプログアニルとして投与 され、前記プログアニルが、前記宿主に投与された後、シクログアニルに転換さ れる請求の範囲第３項記載の方法。
12. １２．前記宿主がヒトである請求の範囲第１項記載の方法。
13. １３．前記量が前記宿主のｋｇ当たりトリアジン約０．１ｍｇ〜約３０ｍｇであ る請求の範囲第１項記載の方法。
14. １４．前記投与が経口摂取によってである請求の範囲第１項記載の方法。
15. １５．前記トリアジンが、（１）ニューモシスティスカリニにおけるジヒドロ葉 酸レダクターゼインヒビターの活性を強化し又は前記哺乳類宿主におけるジヒド ロ葉酸レダクターゼインヒビターの作用に対抗することか知られている少なくと も１種の他の化合物と同時に投与される請求の範囲第１項記載の方法。
16. １６．前記他の化合物がスルホンアミドである請求の範囲第１５項記載の方法。
17. １７．前記他の化合物か還元された葉酸塩の源である請求の範囲第１５項記載の 方法。
18. １８．前記還元された葉酸塩の源が抗葉酸物質因子である請求の範囲第１７項記 載の方法。
19. １９．前記化合物がヒトＤＨＦＲに関するＰ．カリニＤＨＦＲのために少なくと も０．９の選択性を有する請求の範囲第１項記載の方法。
20. ２０．前記選択性が少なくとも２．０である請求の範囲第１９項記載の方法。